MX2015003745A - Metodos mejorados para la acilacion del maitansinol. - Google Patents

Abstract

Se proporciona un método para preparar un éster de aminoácidos de maitansinol representado por la siguiente fórmula al hacer reaccionar maitansinol con un N carboxianhídrido de un aminoácido (NCA) en presencia de un agente de secado. También se proporciona un método mejorado para preparar un éster de aminoácido de maitansinol en el cual se agrega un nucleófilo a la mezcla de reacción después de completar la reacción entre maitansinol y un N-carboxianhídrido de un aminoácido. (ver Fórmula).

Description

MÉTODOS MEJORADOS PARA LA ACILACIÓN DEL MAITANSINOL REFERENCIAS A SOLICITUDES RELACIONADAS La presente solicitud reivindica el beneficio de la fecha de presentación, según el título 35 del U.S.C. (Código de los Estados Unidos), artículo 119(e), de la solicitud provisional de patente estadounidense n.° 61/705,731, presentada el 26 de setiembre de 2012, cuyos contenidos completos se incorporan a la presente mediante referencia.

CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención es un proceso mejorado para preparar intermedios en la síntesis de los maitansinoides y conjugados de anticuerpos de estos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los maitansinoides son compuestos altamente citotóxicos, lo que incluye el maitansinol y ásteres C-3 de maitansinol (patente estadounidense n.° 4,151,042), tal como se muestra a continuación: Los ásteres C-3 de origen natural y sintéticos de maitansinol se pueden clasificar en dos grupos: (a) Maitansina (2) y sus análogos (por ejemplo, DM1 y DM4), que son ésteres C-3 con N-metil-L-alanina o derivados de N-metil-L-alanina (patentes estadounidenses n.° 4,137,230; 4,260,608; 5,208,020 y Chem. Pharm. Bull. 12:3441 (1984)); (b) Ansamitocinas, que son ésteres C-3 con ácidos carboxílicos simples (patentes estadounidenses n.° 4,248,870; 4,265,814; 4,308,268; 4,308,269; 4,309,428; 4,317,821; 4,322,348 y 4,331,598). Maitansina (2), sus análogos y cada especie de ansamitocina son ésteres C3 de maitansinol que pueden prepararse por esterificación de maitansinol (1). Las patentes estadounidenses n.° 7,301 ,019 y 7,598,375 describen métodos de acilación de maitansinol (1), con un N-carboxianhídrido de un aminoácido (NCA, 5), en presencia de una base para formar un éster de aminoácido de maitansinol (Mai-AA, 6), tal como se muestra a continuación: «s O N * H X WW5J ^ l& I „ ¡ HO N H^lO íTíatamfento final “c gU^ "0 i Haifansinei ^ »aA“ 6 Mal ?L Los ésteres de aminoácido de maitansinol son intermedios valiosos que pueden acoplarse a ácidos carboxílicos para proporcionar maitansinoides. Por ejemplo, la reacción de maitansinol con (4S)-3,4-dimetil-2, 5-oxazolidinediona (5a) forma N2’-deacetil-maitansina (6a), que a su vez puede acoplarse a ácido 3-(metilditio)propiónico (7), utilizando clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N’-et¡lcarbodi¡m¡da (EDAC) para formar DM1 -SMe (8), como se muestra a continuación: I Maitansinol fta N -tfeacell maitansina 8 MI-SM Una desventaja significativa de la reacción de acilación que forma ásteres de aminoácido de maitansinol es que también forma un subproducto que comprende un resto de N-metil-alanilo extra en la cadena lateral C3, al que se hace referencia como “extra NMA” (9). Cuando N2’-deacetil-maitansina se acila, también se acila extra NMA (9) para formar extra-NMA-DM1 -SMe (9a). Las estructuras de extra NMA (9) y extra-NMA-DM1-SMe (9a) se muestran a continuación: 9 Extra-NMA 9a Extra-NMA-DMl-SMe DM1 (3) puede prepararse a partir de DM1 -SMe (8) mediante reducción, que también convierte cualquier extra-NMA-DM1-SMe (9a) en extra-NMA-DM1 (10), tal como se muestra a continuación: l Extra-NMA-DM1 (10) es difícil de eliminar de DM1 (3) ya que ambos compuestos tienen polaridades similares y dan picos superpuestos en trazas HPLC de DM1 purificado (3). DM1 (3) y DM4 (4) se utilizan para preparar conjugados de anticuerpos, varios de los cuales se encuentran actualmente en ensayos clínicos.

Por lo tanto, existe la necesidad de mejorar el rendimiento y la potencia de los procesos para preparar tales maitansinoides y para minimizar los subproductos formados durante las reacciones utilizadas en su preparación.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Se ha descubierto que la adición de un agente de secado a la reacción entre maitansinol y un N-carboxianhídrido de un aminoácido básicamente aumenta la producción de un éster de aminoácido de maitansinol, tal como se muestra en los Ejemplos 1-4. También se ha descubierto que la adición de una etapa de preinactivación con un nucleófilo seguido de la reacción de maitansinol y un N-carboxianhídrido de un aminoácido básicamente reduce la formación subproductos no deseados, tal como extra-NMA, como se muestra en los Ejemplos 6-8. Según estos descubrimientos, los métodos mejorados de preparación de un éster de aminoácido de maitansinol se describen en la presente.

Una primera modalidad de la invención es un método de preparación de un éster de aminoácido de maitansinol representado por la Fórmula (I): donde es hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido C1-C10 o una cadena lateral de aminoácido, siempre que, si la cadena lateral de aminoácido tiene un grupo funcional, el grupo funcional se encuentra opcionalmente protegido; y R2 es hidrógeno o un grupo alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido.

El método comprende la reacción de maitansinol con un N-carboxianhídrido en una mezcla de reacción que comprende adicionalmente una base y un agente de secado. El N-carboxianhídrido es representado por la siguiente fórmula: Todas las variables en la Fórmula (II) son como se definen en la Fórmula (I).

Una segunda modalidad de la invención es un método de preparación de un éster de aminoácido de maitansinol representado por la Fórmula (I), que comprende: a) la reacción de maitansinol con un N-carboxianhídrido representado por la Fórmula (II) en una mezcla de reacción que comprende adicionalmente una base; y b) la reacción de N-carboxianhídrido sin reaccionar de la etapa a) con un reactivo nucleofílico. Todas las variables en las Fórmulas (I) y (II) son como se definen en la primera modalidad de la invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Las Figuras 1-2 son esquemas que presentan la acilación de N2’-deacetil-maitansina con un ácido carboxílico y un agente condensante.

Las Figuras 3-4 son esquemas que presentan la acilación de N2’-deacetil-maitansina con un ácido carboxílico activado.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se orienta a métodos de preparación de un éster de aminoácido representado por la Fórmula (I) de maitansinol y el N-carboxianhídrido representado por la Fórmula (II). El éster de aminoácido puede esterificarse adicionalmente para preparar maitansinoides tales como DM1 y DM4 y luego elaborar además conjugados de anticuerpos de maitansinoide. Preferentemente, el éster de aminoácido se representa con la Fórmula (la) y el N-carboxianhídrido se representa por la Fórmula (lia): ( Las variables en las Fórmulas (la) y (lia) son como se describen para las Fórmulas (I) y (II).

Preferentemente para las Fórmulas (I), (II), (la) y (lia), Ri es la cadena lateral de un aminoácido de origen natural, siempre que, si la cadena lateral tiene un grupo funcional reactivo, el grupo funcional se encuentra opclonalmente protegido; y R2 es metilo. De manera alternativa, Ri es alquilo y R2 es metilo. Más preferentemente, tanto Ri como R2 son metilo.

En la primera modalidad de la invención, el método comprende la reacción de maltansinol con un N-carboxianhídrido representado por la Fórmula (II) o (lia) en una mezcla de reacción que comprende adiclonalmente una base y un agente de secado.

En una modalidad preferida, la mezcla de reacción comprende adiclonalmente un ácido de Lewis. Los ácidos de Lewis preferidos comprenden un catión de metal.

En otra modalidad preferida, el maltansinol y el N-carboxianhídrido se hacen reaccionar primero y luego se pone en contacto la mezcla de reacción con una solución acuosa que contiene bicarbonato o carbonato o mediante el contacto de la mezcla de reacción con un depurador de metales. Pueden utilizarse los depuradores de metales conocidos en la téenica (véase, por ejemplo, capítulo 9 en The Power of Functional Resin in Organlc Synthesis” por Aubrcy Mendoca, Wlley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, 2008). Los ejemplos de depuradores de metales incluyen, de modo no taxativo, depuradores de metales a base de polímero y sílice (por ejemplo, QuadraPure™ y QuadraSil™ de Sigma-Aldrich, SlllaMetS® de SiliCycle, Smopex® de Johnson Matthey and Biotage metal scavengers), depuradores a base de carbono (por ejemplo, QuadraPure™ C de Sigma-Aldrlch).

En otra modalidad preferida, el maitansinol y el N-carboxianhídrido se hacen reaccionar primero y el catión de metal del ácido de Lewis se elimina luego de la mezcla de reacción. Por ejemplo, el catión de metal del ácido de Lewis se elimina de la mezcla de reacción con una solución acuosa que contiene bicarbonato o carbonato o mediante el contacto de la mezcla de reacción con un depurador de metales.

En la segunda modalidad, el método comprende: a) hacer reaccionar el maitansinol con un N-carboxianhídrido representado por la fórmula (II) o (lia) en una mezcla de reacción que comprende adicionalmente una base; b) hacer reaccionar un N-carboxianhídrido sin reaccionar de la etapa a) con un reactivo nucleofílico.

En una modalidad preferida, la mezcla de reacción de la etapa a) comprende adicionalmente un ácido de Lewis. Los ácidos de Lewis preferidos comprenden un catión de metal.

En otra modalidad preferida, la mezcla de reacción luego de la etapa b) se pone en contacto con una solución acuosa que contiene bicarbonato o carbonato, o con un depurador de metales.

En una modalidad preferida, el catión de metal del ácido de Lewis se elimina de la mezcla de reacción luego de realizar la etapa b), es decir, luego de la reacción del nucleófilo con el N-carboxianhídrido sin reaccionar. Por ejemplo, el catión de metal del ácido de Lewis se elimina de la mezcla de reacción con una solución acuosa que contiene bicarbonato o carbonato o mediante el contacto de la mezcla de reacción con un depurador de metales.

En aún otra modalidad preferida, la mezcla de reacción de la etapa a) comprende adicionalmente un agente de secado.

El término “base” hace referencia a una sustancia que puede aceptar iones de hidrógeno (protones) o donar un par de electrones de valencia. Las bases de ejemplo no son nucleofílicas y no son reactivas al N-carboxianhídrido representado por la Fórmula (II). Los ejemplos de bases adecuadas incluye una trialquilamina (por ejemplo, diisopropiletilamina, trietilamina y 1 ,8-Diazabicicloundec-7-eno), un alcóxido de metal (por ejemplo, terc-butóxido de sodio y terc-butóxido de potasio), un metal alquilo (por ejemplo, terc-butil litio, metil litio, n-butil litio, terc-butil litio, diisopropilamida de litio, pentilsodio y 2-fenil isopropil-potasio), un metal de arilo (por ejemplo, fenil litio ), un hidruro de metal (por ejémplo hidruro de sodio), una amida de metal (por ejemplo, amida de sodio, amida de potasio, diisopropilamida de litio y tetrametilpiperidida de litio) y una amida a base de silicio (por ejemplo, bis(trimetilsilil)amida de sodio y bis(trimetilsilil)amida de potasio). Preferentemente, la base es una trialquilamina. Más preferentemente, la base es diisopropiletilamina.

El término “agente de secado” hace referencia a un agente que puede eliminar el agua de una solución. Los ejemplos de un agente de secado adecuado pueden incluir, de modo no taxativo, tamices moleculares, sulfato de sodio, sulfato de calcio, cloruro de calcio y sulfato de magnesio. Las formas físicas de agentes de secado incluyen, de modo no taxativo, polvos o esferas granulares. Preferentemente, el agente de secado es un tamiz molecular. De manera alternativa, el agente de secado es un sulfato de sodio.

El término “ácido de Lewis” hace referencia a una sustancia ácida que puede emplear un par solitario de electrones de otra molécula en la finalización del grupo estable de uno de sus propios átomos. Los ácidos de Lewis de ejemplo para su uso en los métodos descritos incluyen triflato de zinc, cloruro de zinc, bromuro de magnesio, triflato de magnesio, triflato de cobre, bromuro de cobre (II), cloruro de cobre (II) y cloruro de magnesio. Preferentemente, el ácido de Lewis es un triflato de zinc.

El término “reactivo nucleofílico” hace referencia a un reactivo que reacciona con centros electropositivos en el N-carboxianhídrido representado por la Fórmula (II) para descomponer el N-carboxianhídrido. Los ejemplos de reactivo nucleofílico adecuados incluyen agua, un alcohol (metanol, etanol, n-propanol, isopropanol o terc-butanol) y una amina primaria o secundaria (por ejemplo, metilamina, etilamina, dimetilamina, dietilamina, etc.)· Preferentemente, el reactivo nucleofílico es un alcohol. De manera alternativa, el reactivo nucleofílico es agua.

Las condiciones de reacción de ejemplo para la preparación de esteres de aminoácido de maitansinol representado por la Fórmula (I) se proporcionan a continuación. Las condiciones específicas se encuentran en la Ejemplificación.

Si bien pueden utilizarse las cantidades equimolares de maitansinol respecto a un N-carboxianhídrido, más comúnmente se utiliza N-carboxianhídrido en exceso. Las relaciones molares de ejemplo de maitansinol respecto a N-carboxianhídrido varían de 1:1 a 1:10, más comúnmente de 1:2 a 1:7 o de 1:1 a 1:4. En una modalidad preferida, la relación molar de maitansinol respecto a N-carboxianhídrido es de aproximadamente 1 :5.

Se utiliza opcionalmente el ácido de Lewis en los métodos descritos. Cuando se encuentra presente, se utiliza normalmente en exceso respecto al maitansinol, por ejemplo, hasta 20 veces en exceso. Más comúnmente, la relación molar de maitansinol respecto a ácido de Lewis varía de 1 :5 a 1 :8, más preferentemente aproximadamente 1 :7. También pueden utilizarse cantidades menores de ácido de Lewis.

Se utilizan cantidades suficientes de agentes de secado para eliminar el agua disuelta del solvente de la reacción. La cantidad de agente de secado no es fundamental, dado que la solución de reacción se vuelve básicamente anhidro. El agente de secado puede utilizarse directamente en el recipiente de reacción o estar contenido en el recipiente por una barrera semipermeable, tal como un recipiente de vidrio sinterizado.

El experto en la téenica puede monitorear fácilmente el tiempo necesario para la reacción utilizando técnicas que incluyen, de modo no taxativo, la cromatografía líquida de alta presión y la cromatografía de capa fina. Una reacción normal se completa luego de agitación durante 24 horas pero puede realizarse a una velocidad más lenta o rápida según varios factores, tales como la temperatura de reacción y las concentraciones de los reactivos.

La reacción puede realizarse entre -20 °C y 80 °C, preferentemente entre -10 °C y 60 °C, más preferentemente entre -10 °C y 40 °C, y más preferentemente entre 0 °C y 35 °C.

Los solventes adecuados los determina fácilmente el experto en la técnica e incluyen, de modo no taxativo, solventes apróticos polares tales como dimetil formamida anhidro, dimetil sulfóxido (DMSO) o dimetilacetamida (DMA), hexanos, éteres (tales como tetrahidrofurano, dietiléter, dimetoxietano, dioxano), diclorometano o una mezcla de estos.

Si un ácido de Lewis se encuentra presente en la mezcla de reacción, la mezcla de reacción luego de la reacción de maitansinol y el N-carboxianhídrido se pone en contacto preferentemente con una solución acuosa que contiene bicarbonato o carbonato o con un depurador de metales. Preferentemente, la mezcla de reacción se hace reaccionar con el reactivo nucleofílico para descomponer el N-carboxianhídrido en exceso antes de que la mezcla de reacción entre en contacto con una solución acuosa que contiene bicarbonato o carbonato o con un depurador de metales.

Si se encuentra presente un ácido de Lewis que comprende un catión de metal en la mezcla de reacción, el catión de metal se elimina preferentemente de la mezcla de reacción como parte del tratamiento final de la reacción. La eliminación del catión de metal puede lograrse mediante el contacto de la mezcla de reacción con una solución acuosa que contiene bicarbonato o carbonato con un depurador de metales.

Preferentemente, el N-carboxianhídrido se hace reaccionar con el reactivo nucleofílico antes de la eliminación del catión de metal.

La cantidad de un nucleófilo en la etapa b) puede ser determinada fácilmente por un experto en la téenica. Preferentemente, una cantidad suficiente de nucleófilo se utiliza para descomponer el N-carboxianhídrido sin reaccionar. Esto es normalmente una cantidad equimolar de nucleófilo y, sin embargo, también pueden utilizarse cantidades en exceso de nucleófilo. Una reacción típica se completa luego de agitar 1 hora pero puede realizarse a una velocidad mayor o menor según varios factores, tales como la temperatura.

Además, dentro del alcance de la invención se encuentra un método de acilación del éster de aminoácido de maitansinol. El método comprende la reacción de un éster de aminoácido de maitansinol representado por la Fórmula (I) o la Fórmula (la), preparado tal como se describió anteriormente con un ácido carboxílico, que tiene la fórmula “R3COOH”, en presencia de un agente condensante o con un ácido carboxílico activado que tiene la fórmula “R3COX”, para formar un compuesto representado por una de las siguientes fórmulas, respectivamente: I I la .

En la Fórmula (III) o (Illa), Ri y R2 son como se definen en las Fórmulas (I), (II), (la) y (lia); R3 es un grupo alquilo o un grupo alquilo sustituido; y X en R3COX es un grupo saliente. Preferentemente, X es un haluro, un grupo alcoxi, un grupo ariloxi, un imidazol, -S-fenilo, en el que el fenilo se encuentra opcionalmente sustituido con nitro o cloruro, o -OCOR, en el que R es un grupo alquiloC1-C10 lineal, un grupo alqu¡loC1-C10 ramificado, un grupo alqu¡loC3-C10 cíclico o un grupo alqueniloC1-C10. En una modalidad, en la fórmula “R3COX” descrita anteriormente, -COX es un éster reactivo; por ejemplo un éster N-succinimida opcionalmente sustituido. Los ejemplos de éster reactivo incluyen, de modo no taxativo, ésteres de N-succinimidilo, N-sulfosuccinimidilo, N-ftalimidilo, N-sulfoftalimidilo, 2-nitrofenilo, 4-nitrofenilo, 2,4-dinitrofenilo, 3-sulfonil-4-nitrofenilo y 3-carboxi-4-nitrofenilo.

Preferentemente, R3 es -Y-S-SR4, Y es alquilenoCl-ClO y R4 es alquiloC1-C10, arilo o heteroarilo. En otra alternativa, Y es -CH2CH2- o -CH2CH2C(CH3)2- y R4 es metilo.

En otra modalidad, R3 es -L-E; L es O il H — (CH2)n-{-C— N-(CH2CH2O)mCH2CH2-)— , (i o - ( CH2CH20 ) mCH2CH2NHC ( =0 ) CH2CH2- O un haluro ; n es 1 , 2, 3, 4, 5 o 6; m es 0 o un entero de 1 a 20; y q es 0 o 1. De manera alternativa, L es— (CH2)n-; y n es tal como se definió anteriormente o n es 5. En otra alternativa, L es y n y m son tal como se definió anteriormente; o, de manera alternativa, n es 4 y m es 3.

En aún otra alternativa, R3 se selecciona de las siguientes fórmulas: El termino “agente condensante” es un reactivo que reacciona con el grupo hidroxilo de un ácido carboxílico y lo convierte en un grupo saliente, que puede desplazarse por un grupo hidroxilo o amina. Los ejemplos de agentes condensantes adecuados incluyen carbodiimida (clorhidrato de A/-(3-dimetilaminopropil)-/V-etilcarbodiimida), un uranio, un éster activo, un fosfonio, 2-alquil-l-alquilcarbonil-l,2-dihidroquinolina (2-isobutoxi-l-isobutoxicarbonil-l,2-dihidroquinolina), 2-alkoxi-l~alcoxicarbonil-l,2-dihidroquinolina (2-etoxi-l~etoxicarbonil-l,2-dihidroquinolina) o alquilcloroformato (isobutilcloroformato). Preferentemente, el agente condensante es carbodiimida. Más preferentemente, clorhidrato de A/-(3-dimetilaminopropil)-/S/-etilcarbodiimida.

El término “grupo saliente” hace referencia a un grupo de restos con o sin carga que puede fácilmente ser desplazado por un nucleófilo, tal como una amina. Tales grupos salientes son bien conocidos en la téenica e incluyen, de modo no taxativo, compuestos de haluros, ésteres, alcoxi, hidroxilo, alcoxi, tosilatos, triflatos, mesilatos, nitrilos, azida, un imidazol, carbamato, disulfuro, tioésteres, tioéteres (es decir, -S-fenilo opcionalmente sustituido) y diazonio. Preferentemente, el grupo saliente es un haluro, un grupo alcoxi, un grupo ariloxi, un imidazol, -S-fenilo opcionalmente sustituido con -NO2 o cloro, o -OCOR, en el que R es un grupo alquiloC1-C10 lineal, un grupo alquiloC1-C10 ramificado, un grupo alquiloC3-C10 cíclico o un grupo alqueniloC1-C10. En otra modalidad preferida, el grupo saliente es el resto en un éster reactivo (por ejemplo, -COX) que puede desplazarse. Un éster reactivo incluye, de modo no taxativo, éster de N-succinimidilo, N-sulfosuccinimidilo, N-ftalimidilo, N-sulfoftalimidilo, 2-nitrofenilo, 4-nitrofenilo, 2,4-dinitrofenilo, 3-sulfonil-4-nitrofenilo y 3-carboxi-4-nitrofenilo.

La invención incluye también un método de uso de un éster C3 de maitansinol para preparar un derivado de este. El método comprende hacer reaccionar un éster C3 de maitansinol representado por la Fórmula (III) o (Illa) preparada anteriormente con un agente reductor para formar un compuesto representado por una de las siguientes fórmulas: i En la Fórmula (IV) y (IVa), Ri y R2 son como se definen en las Fórmulas (I), (II), (la) y (lia); e Y es como se define en la Fórmula (III) o (Illa).

El término “agente reductor” es el elemento o compuesto en una reacción reducción/oxidación que convierte un enlace disulfuro en un grupo hidrosulfuro. Los ejemplos de agentes reductores adecuados incluyen ditiotreitol (DTT), (tris(2-carboxietil)fosfina) (TCEP) y NaBH4.

El compuesto de la fórmula (III) o (Illa), cuando R3 es -L-E, o el compuesto de la fórmula (IV) o (IVa) puede reaccionar con un anticuerpo o anticuerpo modificado para formar un conjugado de anticuerpo-maitansinoide. Ver por ejemplo, las patentes estadounidenses n.° 7,521,541, 5,208,020 y 7,811,872. De manera alternativa, el compuesto de la fórmula (IV) o (IVa) puede reaccionar con un agente reticulante bifuncional para formar un compuesto de reticulación que posee un grupo reactivo que puede reaccionar con un anticuerpo para formar un conjugado de anticuerpo-maitansinoide. Ver, por ejemplo, US 6,441 ,163, US 2011/0003969A1 y US 2008/0145374.

“Alquilo”, tal como se utiliza en la presente, hace referencia a un alquilo lineal, ramificado o cíclico.

“Alquilo lineal o ramificado”, tal como se utiliza en la presente, hace referencia a un radical hidrocarburo monovalente de cadena ramificada o lineal saturado de uno a veinte átomos de carbono. Los ejemplos de alquilo incluyen, de modo no taxativo, metilo, etilo, 1 -propilo, 2-propilo, 1 -butilo, 2-metil-1 -propilo, -CH2CH(CH3)2, 2-butilo, 2-metil-2-propilo, 1-pentilo, 2-pentilo, 3-pentilo, 2-metil-2-butilo, 3-metil-2-butilo, 3-metil-1 -butilo, 2-metil-1 -butilo, -CH2CH2CH(CH3)2, 1-hexilo, 2-hexilo, 3-hexilo, 2-metil-2-pentilo, 3-metil-2-pentilo, 4-metil-2-pentilo, 3-metil-3-pentilo, 2-metil-3-pentilo, 2,3-dimetil-2-butilo, 3,3-dimetil-2-butilo, 1-heptilo, 1-octilo y similares. Preferentemente, el alquilo tiene de uno a diez átomos de carbono. Más preferentemente, el alquilo tiene de uno a cuatro átomos de carbono.

“Alquileno”, tal como se utiliza en la presente, hace referencia a un alquileno lineal, ramificado o cíclico.

“Alquileno lineal o ramificado”, tal como se utiliza en la presente, hace referencia a un radical de hidrocarburo divalente de cadena ramificada o lineal saturado de uno a veinte átomos de carbono. Los ejemplos de alquilo incluyen, de modo no taxativo, metileno, etileno, 1-propileno, 2-propileno, 1-butileno, 2-metil-1-propileno, -CH2CH(CH3)2, 2-butileno, 2-metil-2-propileno, 1-pentileno, 2-pentileno, 3-pentileno, 2-metil-2-butileno, 3-metil-2-butileno, 3-metil-1-butileno, 2-metil-1-butileno, -CH2CH2CH(CH3)2, 1-hexilo, 2-hexileno, 3-hexileno, 2-metil-2-pentileno, 3-metil-2-pentileno, 4-metil-2-pentileno, 3-metil-3-pentileno, 2-metil-3-pentileno, 2,3-dimetil-2-butileno, 3,3-dimetil-2-butileno, 1-heptileno, 1-octileno y similares. Preferentemente, el alquileno tiene uno a diez átomos de carbono. Más preferentemente, el alquileno tiene uno a cuatro átomos de carbono.

“Alquenilo lineal o ramificado” hace referencia a un radical de hidrocarburo monovalente de cadena lineal o ramificada de dos a veinte átomos de carbono con al menos un sitio no saturado, es decir, un enlace doble carbono-carbono, donde el radical de alquenilo incluye radicales que tienen orientaciones “cis” y “trans” o, de manera alternativa, orientaciones “E” y “Z”. Los ejemplos incluyen, de modo no taxativo, etilenilo o vinilo (--CH=CH2), alilo (--CH2CH=CH2) y similares. Preferentemente, el alquenilo tiene de dos a diez átomos de carbono. Más preferentemente, el alquenilo tiene de dos a cuatro átomos de carbono.

“Alquilo cíclico” hace referencia a un radical de anillo carbocíclico saturado monovalente. Preferentemente, el alquilo cíclico es un radical de anillo monocíclico de tres a siete miembros. Más preferentemente, el alquilo cíclico es ciclohexilo.

“Arilo” significa un radical de hidrocarburo aromático monovalente de 6 a 18 átomos de carbono derivado por la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono simple de un sistema de anillo aromático principal. Arilo incluye radicales bicíclicos que comprenden un anillo aromático fusionado con un anillo saturado o parcialmente insaturado o un anillo heterocíclico o carbocíclico aromático. Los grupos arilo típicos incluyen, de modo no taxativo, radicales derivados de benceno (fenilo), bencenos sustituidos (por ejemplo, para-nitrofenilo, orto-nitrofenilo, y dinitrofenilo), naftaleno, antraceno, indenilo, indanilo, 1 ,2-dihidronaftaleno, 1,2,3,4-tetrahidronaftilo y similares. Preferentemente, el arilo es fenilo opcionalmente sustituido (por ejemplo, fenilo, fenol o fenol protegido).

Heteroarilo” hace referencia a un radical aromático monovalente de anillos de 5 o 6 miembros e incluye sistemas de anillos fusionados (al menos uno de los cuales es aromático) de 5-18 átomos, que contienen uno o más heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno y azufre. Los ejemplos de grupos heteroarilo son piridinilo (por ejemplo, 2-hidroxipiridinilo), imidazolilo, imidazopiridinilo, pirimidinilo (por ejemplo, 4-hidroxipirimidinilo), pirazolilo, triazolilo, pirazinilo, tetrazolilo, furilo, tienilo, isoxazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, indolilo, bencimidazolilo, benzofuranilo, cinolinilo, indazolilo, indolizinilo, ftalazinilo, piridazinilo, triazinilo, isoindolilo, pteridinilo, purinilo, oxadiazolilo, triazolilo, tiadiazoiilo, furazanilo, benzofurazanilo, benzotiofenilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo y furopiridinilo.

Los sustituyentes adecuados para un grupo alquilo son aquellos que no interfieren significativamente con las reacciones descritas. Los sustituyentes que interfieren con las reacciones descritas pueden protegerse de acuerdo con métodos bien conocidos para el experto en la téenica, por ejemplo, en T.W. Greene y P. G. M. Wuts “Protective Groups in Organic Synthesís” John Wilcy & Sons, Inc., Nueva York 1999. Los ejemplos de sustituyentes incluyen arilo (por ejemplo, fenilo, fenol y fenol protegido), heteroarilo (por ejemplo, indolilo e imidazolilo) halógeno, guanidinio [-NH(C=NH)NH2], -OR100, NR101R102, -NO2, -NR101COR102, -SR100, un sulfóxido representado por -SOR101, una sulfona representada por -S02R101, un sulfato -S03 R100, un sulfonato -0S03 R100, una sulfonamida representada por -SO2NR101R102, ciano, una azido, -COR101, - OCOR101, -OCONR101R102; R101 y R102 se seleccionan cada uno independientemente de H, alquilo cíclico, ramificado o lineal, alquenilo o alquinilo que tienen de 1 a 10 átomos de carbono.

El término “haluro” hace referencia a -F, -Cl, -Br o -I.

El término “aminoácido” hace referencia a aminoácidos de origen natural o aminoácidos de origen no natural representados por NH2-C(RaaRaa)-C(=0)0H, donde Raa y Raa son cada uno independientemente H, un alquilo opcionalmente sustituido lineal, ramificado o cíclico, alquenilo o alquinilo que tienen de 1 a 10 átomos de carbono, arito, heteroarilo o heterocielilo. El término “aminoácido” también hace referencia al correspondiente residuo cuando se elimina un átomo de hidrógeno del extremo amina y/o carboxi del aminoácido, tal como -NH-C(RaaRaa)-C(=0)0-. Los ejemplos específicos que siguen a continuación se deben considerar como ilustrativos únicamente y no como taxativos del aviso de la descripción de forma alguna. Sin entrar en más detalles, se cree que un experto en la téenica puede, teniendo en cuenta la descripción de la presente, utilizar la presente invención en su máxima extensión. Todas las publicaciones mencionadas en la presente se incorporan mediante esta referencia en su totalidad. Además, cualquier mecanismo propuesto a continuación no restringe en forma alguna el alcance de la invención reivindicada.

EJEMPLIFICACIÓN Materiales y métodos Los expertos en la técnica pueden adoptar y adaptar los parámetros del proceso que se proporcionan a continuación para satisfacer sus necesidades particulares.

Todas las reacciones se llevaron a cabo en una atmósfera de argón con agitación magnética. Tetrahidrof urano y dimetilformamida se compraron como solventes anhidro de Aldrich. Maitansinol se produjo tal como se describe en (Widdison et ál., J. Med. Chem., 49:4392-4408 (2006)). El N-carboxianhídrido de N-metil-alanina, (4S)-3,4-dimetil-2, 5-oxazolidinediona se preparó como se describe en (Akssira, M. et ál., J. Marocain de Chimie Heterocyclique, 1:44-47 (2002)). Los espectros de la resonancia magnética nuclear (NMR) (1H 400MHz, 13C 100 MHz) se obtuvieron en una serie NMR de Bruker ADVANCE™. Los datos HPLC/MS se obtuvieron usando un espectrómetro de masas con trampa iónica Bruker ESQUIRE™ 3000 en consonancia con una HPLC de serie Agilent 1100. Se utilizó el método HPLC 1 para analizar DM1. Se utilizó el método HPLC 2 para todos los análisis.

Método HPLC analítico 1: Sistema HPLC de agua con detector de UV o equivalente Columna: YMC-Pack ODS-AQ 250 x 4.6 mm; 5pm (Parte # = AQ12S05-2546WT) Flujo: 1 mL/min (Gradiente) Fase móvil: A = 1 mi de 85 % H3P04 en 1 litro de agua; B = acetonitrilo/tetrahidrof urano 30:70 (v/v) (Nota: se utilizo 0,1 % de TFA en vez de H3P04 en la fase móvil A en el análisis LC/MS Tabla de gradientes: Tiempo de ejecución: 60 minutos + tiempo posterior: 10 minutos Detección UV: 252 nm Volumen de inyección = 5 mI_ de aproximadamente 1 mg/ml de DM1 en acetonitrilo Temperatura de la columna = 15 °C (a menos que se establezca de otra manera) Temperatura de la muestra = 2-8 °C Método HPLC/MS analítico 2: Columna: 150 x 4,6 mm C8, tamaño de partícula 5 micrones, Zorbax P/N 993967-906 Solventes: Agua desionizada + 0,1 % DE TFA Solvente B: Acetonitrilo Velocidad de flujo 1 ,0 mL/min Temperatura: Ambiente Volumen de inyección: 15 mL Gradiente Tiempo % B 0 25 25 50 26 95 30 95 31 25 37 25 Los datos se visualizan en 0-25 min en trazos de HPLC.

Preparación de la muestra para el método HPLC analítico 2: Se agregaron alícuotas (20 mI_) de una mezcla dada al acetonitrilo (1 ,5 mL) en un frasco automuestreador. El frasco se tapó y se agitó, luego de colocó en un automuestreador a 15 °C. Se analizó un volumen de inyección (15 pl_) para cada ejecución de HPLC.

Ejemplo 1. Preparación de DM1 -SMe con tamices moleculares 4A agregados como agente de secado Se agregaron a un matraz de 10 mi maitansinol (50,1 mg, 0,0888 mmol), (4S)-3,4-dimetil-2, 5-oxazolidinediona (30,2 mg, 0,233 mmol, 2,6 eq), triflato de zinc (133 mg, 0,366 mol) y tamices moleculares 4A (0,50 g) presecados a 250 °C al vacío y luego se enfriaron a temperatura. El contenido se trató en dimetilformamida anhidro (0,75 mL), al que se le agregó diisopropiletilamina (62 mL, 0,357 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Se analizó una muestra de la mezcla bruta mediante HPLC, el producto N2-deacetil-maitansina representó el 80 % del área HPLC total. La mezcla de reacción de diluyó con 1:1 de NaHCO3 saturado:NaCI saturado (1,2 mL) y se mezcló acetato de etilo (3 mL), luego se filtró con celite, luego de lavó con solución amortiguadora de fosfato de potasio (1 mL, 400 mM, pH 7,5). La capa orgánica se secó con sulfato de sodio anhidro, se filtró y luego se evaporó para formar un sólido amarillo. Al sólido se le agregó ácido 3-metilditiopropanoico (25 mg, 0,16 mmol), clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N’-etilcarbodiimida (30 mg, 0,16 mmol) y diclorometano (3 mL). Después de la agitación durante 2 horas, la mezcla se diluyó con acetato de etilo (8 mL), se lavó con 1,0 M, pH 6,5 de solución amortiguadora de fosfato de potasio (2 mL) y la solución acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 8 mL). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron con sulfato de magnesio anhidro, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía de sílice 95:5 diclorometano:metanol para proporcionar 51 mg (70 %) de DM1 -SMe.

Ejemplo 2. 10X de aumento del ejemplo 1 La reacción en el Ejemplo 1 se ejecutó en una escala mayor a 10 veces proporcionando 490 mg (68 %) de DM1 -SMe.

Ejemplo 3. Preparación de DM1 -SMe sin agente de secado agregado Se disolvió maitansinol (1,0 g, 1,77 mmol) dimetilformamida anhidro (15 mL) en un matraz de 25 mL que se enfrió en un baño de hielo/agua. Después de 2 minutos se agregaron diisopropiletilamina (DIPEA, 0,92g 7,07 mmol) y triflato de zinc (3,8g, 10,6 mmol) con agitación magnética, luego se agregó rápidamente (4S)-3,4-dimetil-2, 5-oxazolidinediona (0,913 g, 7,07 mmol) y la mezcla de agitó durante 24 hrs. Se analizó una muestra de la mezcla bruta mediante HPLC, el producto N2’-deacetil-maitansina representó el 65 % del área HPLC total. La mezcla de reacción de diluyó con 1:1 de NaHCO3 saturado: NaCI saturado (25 mL) y acetato de etilo (40 mL), se mezcló y luego se filtró con celite, y se lavó con NaCI saturado. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y luego se evaporó. El residuo se trató en diclorometano (30 L) al que se le agregó rápidamente ácido 3-metilditiopropanico (1,1 g, 7,0 mmol) y clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N’-etilcarbodiimida (1,34 g, 7,0 mmol) y la reacción se agitó en argón a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (30 mL), se lavó con 1,0 M de solución amortiguadora de fosfato de potasio (30 mL), pH 6,5, y la solución acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 40 mL). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron con sulfato de magnesio anhidro, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía de sílice 95:5 diclorometano:metanol para proporcionar 698 mg (50 %) de DM1 -SMe.

Ejemplo 4. Repetición del ejemplo 3 La reacción en el Ejemplo 3 se repitió en la misma escala proporcionando 735 mg (53 %) de DM1 -SMe.

Ejemplo 5. Solución madre de N2’-deacetol-maitansina bruta Se disolvió maitansinol (0,5 g, 0,89 mmol) di etilformamida anhidro (7 mL) en un matraz de 25 mL que se enfrió en un baño de hielo/agua. Después de 2 minutos, se agregaron diisopropiletilamina (0,5 g, 3,5 mmol) y triflato de zinc (1 ,9 g, 5,3 mmol) con agitación magnética, luego se agregó rápidamente (4S)-3,4-dimetil-2, 5-oxazolidinediona (4,52 g, 3,5 mmol) y la mezcla de agitó durante 24 hrs. Las alícuotas (0,5 mL cada una) de esta solución madre se utilizaron en los siguientes experimentos, por lo tanto, cada alícuota se generó a partir de aproximadamente 0,13 mmol de maitansinol.

Ejemplo 6. Extracción de N2-deacetil-maitansina seguida del acoplamiento al ácido propiónico (Control) 16 May-NMA-Pr 6a N^-deacetil maitansina (- :¾ 5 H4SCIN3O | o Masa exacta: 705.30 Se agregó solución madre de N2’-deacetil-maitansina (0,50 mL) a un frasco de 6 mL de capacidad que contiene acetato de etilo (1,5 mL) y 1:1 de NaCI saturado:NaHCO3 (0,75 mL), se tapó rápidamente y se mezcló. La capa orgánica se conservó y se secó en Na2SO4 anhidro (120 mg). La capa orgánica (1,0 mL) se conservó y ácido propiónico (20, OpL, 0, 27 mmol). La solución se transfirió luego a un frasco que contenía clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N’-etilcarbodiimida (40 mg, 0,209 mmol). Se dejó a la reacción avanzar durante 2,5 horas luego de las cuales se analizó mediante HPLC.

El siguiente subproducto también se produjo a partir de Mai-NMA2, un subproducto en la reacción precedente, tal como se muestra a continuación: Masa exacta: 790.36 La relación de áreas porcentuales de HPLC para 17:16 fue de 3.0:71.7. MS de 16 (M+ H+) 706 (M + Na+) 728; MS de 17 (M+ Na+) 813.

Ejemplo 7. Se repitió el experimento del Ejemplo 6.

La relación de áreas porcentuales de HPLC para 17:16 fue de 3.0:70.9.

Ejemplo 8. Extracción de N2-deacetil-maitansina seguida de una preinactivación con metanol que se acopla luego al ácido propiónico (preinactivación para destruir el exceso 5a) Se agregó solución madre de N2’-deacetil-maitansina (0,50 mL) a un frasco de 6 ml_ de capacidad, al cual se le agregó metanol (75 mL, 1 ,8 mmol) y el frasco se tapó y se agitó magnéticamente el contenido durante 1 hora. Luego se agregó acetato de etilo (1 ,5 mL) y 1:1 de NaCI saturado: NaHCO3 (0,75 mL) y el frasco de tapó y se mezcló. La capa orgánica se conservó y se secó en Na2SO4 anhidro (120 mg). Se tomó la capa orgánica (1 ,0 mL) y se agregó el ácido propiónico (20,0 pL, 0,27 mmol). La solución se transfirió luego a un frasco que contenía clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N’-etilcarbodiimida (40 mg, 0,209 mmol). Se dejó a la reacción avanzar durante 2,5 horas luego de las cuales se analizó mediante HPLC. El pico de HPLC para 17 fue apenas detectable; la integración no fue posible. Esta reacción se repitió y nuevamente 17 fue apenas detectable; la integración no fue posible. Por lo tanto, el método de preinactivación produce menos compuestos no deseables 15 y 17.

Ejemplo 9. Síntesis de extra NMA-DM1-SMe (9a) .

Kslra-N M A-DM 1 -SMe (9a) Se pesó maitansinol (1,2 mg, 2,1 mmol) en un matraz de 50 mL y se disolvió en una mezcla de dimetilformamida (12 mL) y tetrahidrof urano (6 mL). El matraz se enfrió en un baño de hielo/agua. Se agregaron secuencialmente después de 5 minutos diisopropiletilamina (1,5 mL, 8,5 mmol), triflurometanosufonato de zinc (4,5 g, 12,6 mmol), y 2,5-oxazolidinediona, 3,4-dimetil (4S) (1,1 g, 8,5 mmol). Después de la agitación durante 17 horas la reacción se extrajo con 1:1 NaCI acuoso saturado: NaHCO3 acuoso saturado (14 mL) y acetato de etilo (100 mL). La capa orgánica se conservó y se secó en Na2SO4. Se quitó el agente de secado y se quitó aproximadamente 2/3 del solvente mediante evaporación giratoria al vacío. Luego se agregó N-metil-N-[(2-metilditio)-1-oxopropil]-L- alanina (1,0 g, 4,2 mmol) seguido de clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N-etilcarbodiimida (0,889 g, 4,6 mmol). Se agregó cloruro de metileno (10 mL) para disolver la mezcla anterior. Después de 4 horas la reacción se extrajo con cloruro de metileno (70 mL) y 1 :4 de NaCI acuoso saturado:NaHCO3 acuoso saturado(20 mL). La capa orgánica se conservó y se secó en Na2SO4. El solvente se eliminó mediante evaporación giratoria al vacío. El aceite espeso resultante se disolvió en acetonitrilo (3 mL) y aproximadamente ½ del material se purificó mediante HPLC en una columna Symmetry Shield C8 de Waters (19 x 150 mm micrones, tamaño de partícula de 5 micrones). La columna se eluyó con agua desionizada que contiene 0,2 % de ácido fórmico con un gradiente de acetonitrilo (30 % - 60 % de acetonitrilo en 18 minutos). La columna se enjuagó con 95 % de acetonitrilo durante 5 minutos y luego se requilibró con 30 % de acetonitrilo durante 6 minutos entre las ejecuciones. Los volúmenes de inyección oscilaron entre 100 - 800 ÚL. El maitansinol sin reaccionar eluyó a 8,5 minutos, un isómero no deseable de Extra-NMA-DM1 -SMe eluyó a 13,8 minutos y el isómero deseado de Extra-NMA-DM1-SMe eluyó a 15,1 minutos. Se combinaron fracciones del producto deseado de distintas ejecuciones y el solvente se eliminó mediante evaporación giratoria al vacío. El residuo se trató en un volumen mínimo de acetato de etilo y se eliminó una impureza menor mediante HPLC en una columna ciano Kromasil (250 mm x 21 mm, tamaño de partícula de 10 micrones). La columna se ejecutó con una fase móvil ¡socrática de 67:9:24 hexanos:2-propanol:acetato de etilo a 21 mL/min. El producto deseado se eluyó a 22,6 minutos mientras que la impureza se eluyó a 12,6 minutos. Las fracciones del producto de varias ejecuciones se combinaron y el solvente se eliminó mediante evaporación giratoria al vacío para proporcionar 95 mg del producto (10 % de rendimiento). 1H NMR (400MHz ,CDCI3-d) ó= 7,26 , 6,81 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 6,67 (d, J = 11,1 Hz, 1 H), 6,56 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 6,42 (dd, J = 11,4, 15,2 Hz, 1 H), 6,30 (s, 1 H), 5,67 (dd, J = 9,1, 15,2 Hz, 1 H), 5,52 - 5,40 (m, 1 H), 5,27 (d, J = 7,1 Hz, 1 H), 4,85 - 4,69 (m, 1 H), 4,26 (t, J = 10,9 Hz, 1 H), 3,96 (s, 3 H), 3,7 (bs, 1), 3,57 (d, J = 12,6 Hz, 1 H), 3,48 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 3,34 (s, 3 H), 3,23 (s, 3 H), 3,10 (d, J = 12,6 Hz, 1 H), 3,03 - 2,90 (m, 3 H), 2,87 (s, 3 H), 2,82 - 2,64 (m, 5 H), 2,63 - 2,50 (m, 1 H), 2,45 - 2,30 (m, 3 H), 2,15 (d, J = 14,1 Hz, 1 H), 1 ,62 (s, 3 H), 1 ,57 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 1,45 (d, J = 6,3 Hz, 1 H), 1,29 (d, J = 7,1 Hz, 3 H), 1,26 (d, J = 6,3 Hz, 4 H), 1,18 (d, J = 6,3 Hz, 3 H), 0,79 (s, 3 H) 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) d 170,86, 170,50, 170,35, 168,69, 156,19, 152,35, 142,2, 140,90, 139,29, 133,27, 128,05, 125,1, 122,07, 119,15, 113,31, 88,72, 80,96, 78,51, 74,23, 66,19, 60,66, 60,13, 56,81, 56,71, 54,97, 47,90, 46,72, 38,99, 36,41, 35,68, 33,19, 32,54, 30,90, 30,02, 23,01, 15,62, 14,75, 14,59, 13,54, 12,35. HRMS calculado para C40H57CIN4OHS2 (M + Na+) m/z = 891,3052; encontrado 891 ,3049.

Ejemplo 10. Síntesis de extra-NMA-DM1 (10) .

R * t ra-IM M A-DM 1 -SM e (9 a) Extr a- M A- D M 1 (10) l - Extra-ÍVMA-DMKSIVIe (9a) Se disolvió N2 -Deacetil-N2 -(3-metilditio-1 -oxopropil-N-metil-L-alanil)-maitansina (95 mg, 0,109 mmol) en 2:1 dimetoxietano:100 mM solución amortiguadora de fosfato de potasio pH 7,5 a la cual se le agregó ditiotreitol (110 mg, mmol). Después de 2 horas, se extrajo la solución con una mezcla de acetato de etilo: cloruro de metileno = 2: 1 (5 ml_) y NaCI acuoso saturado (1 mL). La capa orgánica se conservó y secó en anhidro Na2S04. Se quitó el agente de secado mediante filtración y se quitó el solvente mediante evaporación giratoria al vacío. El residuo se trató en un volumen mínimo de 1:1 de acetato de etilo:cloruro de metileno y se purificó mediante HPLC en una columna de ciano Kromasil (250 mm x 21 mm, tamaño de partícula de 10 micrones). La columna se ejecutó con una fase móvil ¡socrática de 64:07:17 p.m. hexanos:2-propanol:acetato de etilo a 21 mL/min. El producto deseado se eluyó a 16 minutos. Las fracciones del producto de varias ejecuciones se combinaron y el solvente se eliminó mediante evaporación giratoria para proporcionar 62 mg del producto (69 % de rendimiento). 1H NMR (400 MHz, CDCI3) d 6,81 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 6,58 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,43 (dd, J = 15,3 Hz, 11 ,1 Hz, 1 H), 6,26 (s, 1 H), 5,67 (dd, J = 15,3 Hz, 9,0 Hz, 1 H), 5,47 (q, J = 6,6 Hz, 1H), 5,28-5,22 (m, J = 6,7 Hz, 1H), 4,81 (dd, J = 12,0 Hz, 2,9 Hz, 1H), 4,26 (t, J = 10,5 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,59 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 3,49 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 3,41 (bs, 1H), 3,36 (s, 3H), 3,24 (s, 3H), 3,11 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 2,98 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 2,85 (s, 3H), 2,84 - 2,80 (m, 1H), 2,79 (s, 3H), 2,76 (s, 1H), 2,68 - 2,61 (m, 2H), 2,58 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 2,17 (dd, J = 14,3 Hz, J = 2,8 Hz, 1 H), 1 ,71 (t, J = 8,4 Hz, 1 H), 1 ,64 (s, 3H), 1 ,62-1 ,59 (m, 1 H), 1 ,49-1,40 (m, , 1H), 1,31 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,29 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,27-1,23 (m, 1H), 1 ,20 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,81 (s, 3H). 13C NMR (CDCI3, 100 MHz) d 170,37, 170,30, 170,25, 168,53, 156,07, 152,16, 142,31, 140,74, 139,16, 133,12, 127,09, 125,32, 121,92, 119,92, 113,15, 88,57, 80,83, 78,37, 74,08, 67,01, 59,97, 58,66, 56,56, 53,54, 49,17, 46,58, 38,86, 37,33, 36,25, 35,53, 32,39, 30,81, 29,80, 21,02, 19,87, 15,47, 14,80, 13,4, 12,22. HRMS calculado para C39H55CIN4O11 (M+H)+: m/z = 845,3174; encontrado: 845,3166.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES Un método para preparar un compuesto que se representa por medio de la siguiente donde Ri es un grupo opcionalmente sustituido o una cadena lateral de siempre si la cadena lateral de aminoácidos tiene un grupo funcional el grupo funcional reactivo se encuentra opcionalmente y R2 es hidrógeno o un grupo opcionalmente el método que hacer reaccionar maitansinol con un en una mezcla de reacción que comprende adicionalmente una base y un agente de donde el carboxianhídrido se representa por medio de la siguiente formando así el compuesto de la Fórmula El método de la reivindicación donde el compuesto de Fórmula se representa por medio de la siguiente y el se representa por medio de la siguiente El método de la reivindicación 1 o donde la mezcla de reacción comprende además un ácido de El método de la reivindicación donde el ácido de Lewis se selecciona del grupo que consiste en triflato de cloruro de bromuro de triflato de triflato de bromuro de cobre cloruro de cobre y cloruro de El método de la reivindicación donde el ácido de Lewis es triflato de El método de cualquiera de las reivindicaciones donde comprende además el contacto de la mezcla de reacción después de la reacción de maitansinol y carboxianhídrido con una solución acuosa que contiene bicarbonato o carbonato o poner en contacto la mezcla de reacción con un depurador de Un método para preparar un compuesto que se representa por medio de la siguiente donde Ri es un grupo opcionalmente sustituido o una cadena lateral de siempre si la cadena lateral de aminoácidos tiene un grupo funcional el grupo funcional reactivo se encuentra opcionalmente y R2 es hidrógeno o un grupo opcionalmente el método que hacer reaccionar el maitansinol con un en una mezcla de reacción que comprende adicionalmente una donde el carboxianhídrido se representa por medio de la siguiente formando así el compuesto de Fórmula hacer reaccionar el sin reaccionar de la mezcla de reacción en la etapa con un reactivo El método de la reivindicación donde el compuesto de Fórmula se representa por medio de la siguiente y el se representa por medio de la siguiente El método de la reivindicación 7 u donde la mezcla de reacción en la etapa comprende además un ácido de El método de la reivindicación donde el ácido de Lewis se selecciona del grupo que consiste en triflato de cloruro de bromuro de triflato de triflato de bromuro de cobre cloruro de cobre y cloruro de El método de la reivindicación donde el ácido de Lewis es triflato de El método de cualquiera de las reivindicaciones donde la mezcla de reacción en la etapa comprende además un agente de El método de cualquiera de las reivindicaciones donde el reactivo nucleofílico es agua o un El método de la reivindicación donde el reactivo nucleofílico es un El método de la reivindicación donde el alcohol es isopropanol o El método de cualquiera de las reivindicaciones donde el método comprende además poner en contacto la mezcla de reacción después de la etapa con una solución acuosa que contiene bicarbonato o carbonato o poner en contacto la mezcla de reacción con un depurador de El método de cualquiera de las reivindicaciones que comprende además la etapa de hacer reaccionar el compuesto de la fórmula con un ácido carboxílico que tiene la fórmula R3COOH en presencia de un agente condensante o con un ácido carboxílico activado que tiene la fórmula para formar un compuesto que se representa por medio de la siguiente III donde R3 es un grupo alquilo o un grupo alquilo sustituido y X es un grupo El método de la reivindicación donde X es un un grupo un grupo un opcionalmente sustituido con nitro o o en el que R es un grupo un grupo un grupo cíclico o un grupo El método de la reivindicación donde es un éster El método de la reivindicación donde R3 es en el que Y es y R4 es arilo o heteroarilo El método de la reivindicación donde Y es o y R4 es El método de la reivindicación 20 o que comprende adicionalmente hacer reaccionar el compuesto de la fórmula con un agente de reducción para formar un compuesto que se representa por medio de la El método de la reivindicación donde R3 es es un n es 5 o m es 0 o un número entero de 1 a y q es 0 o El método de la reivindicación donde L es El método de la reivindicación donde n es El método de la reivindicación donde L es O El método de la reivindicación donde n es 4 y m es El método de la reivindicación donde R3 se representa por medio de una de las siguientes El método de cualquiera de las reivindicaciones donde el agente condensante es una un un éster un o El método de la reivindicación donde el agente condensante es una El método de la reivindicación donde el agente condensante es clorhidrato de El método de cualquiera de las reivindicaciones donde es la cadena lateral de un aminoácido de origen siempre si la cadena lateral tiene un grupo el grupo funcional se encuentra opcionalmente y R2 es El método de la reivindicación donde Ri es El método de la reivindicaciones donde la base es un alcóxido un metal un metal un hidruro una amida metálica o una amida con base de El método de la reivindicación donde la base es una El método de la reivindicación donde la trialquilamina es El método de cualquiera de las reivindicaciones y donde el agente de secado es un tamiz sulfato de sulfato de cloruro de calcio o sulfato de El método de la reivindicación donde el agente de secado es un tamiz El método de la reivindicación 37 o donde el agente de secado se encuentra en forma de esferas granulares o RESUMEN Se proporciona un método para preparar un éster de aminoácidos de maitansinol representado por la siguiente fórmula al hacer reaccionar maitansinol con un carboxianhídrido de un aminoácido en presencia de un agente de También se proporciona un método mejorado para preparar un éster de aminoácido de maitansinol en el cual se agrega un nucleófilo a la mezcla de reacción después de completar la reacción entre maitansinol y un de un insufficientOCRQuality