MX2014011663A - Cultivo de lactobacillus y metodo para producir el mismo. - Google Patents
Cultivo de lactobacillus y metodo para producir el mismo.Info
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Abstract
Un objetivo de la presente invención es el de proporcionar una técnica para mejorar el sabor derivado de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) mientras se mantiene el efecto de extractos de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) para potenciar la capacidad proliferativa o viabilidad en el cultivo de bacterias de ácido láctico; se proporciona un producto de cultivo de bacterias de ácido láctico que se obtiene cultivando una bacteria de ácido láctico en un medio de cultivo, en donde el medio de cultivo contiene una esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae), en donde la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) es un concentrado obtenido a través de la electrodiálisis de una mezcla obtenida agregando una sal inorgánica a un extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae).
Description
CULTIVO DE LACTOBACILLUS Y MÉTODO PARA PRODUCIR EL MISMO
CAMPO TÉCNICO
La presente invención se relaciona con un producto de cultivo de bacterias de ácido láctico que se obtiene cultivando una bacteria de ácido láctico, así como con un método para producir el mismo.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
El cultivo de bacterias de ácido láctico se ha conducido de varias maneras, y se lleva a cabo con mayor frecuencia usando leche animal como medio de cultivo para la producción de formulaciones de bacterias de ácido láctico o producción de leche fermentada, bebidas de bacterias de ácido láctico, queso y similares. Sin embargo, debido a que, en general, los requerimientos nutricionales de las bacterias de ácido láctico varían entre especies, algunas bacterias de ácido láctico pueden no crecer suficientemente en un medio de cultivo que consiste sólo en leche animal. Además, incluso cuando las cepas bacterianas que exhiben una actividad de proliferación relativamente superior se usan en tal medio de cultivo que consiste sólo en leche animal, se requiere llevar a cabo el cultivo de las bacterias por varios días para obtener productos fermentados que tengan un nivel lo suficientemente ácido en la producción de leche fermentada, bebidas de
bacterias de ácido láctico y similares.
Sin embargo, debido a que el cultivo de bacterias de ácido láctico durante un largo periodo de tiempo causa una reducción en el conteo de células viables, tal técnica de cultivo no siempre se considera un método de cultivo favorable para la producción de bebidas de bacterias de ácido láctico, leche fermentada y similares, para lo cual se esperan varios efectos fisiológicos y para lo cual los conteos de células viables se consideran importantes.
Adicionalmente, para la producción de varias bebidas o alimentos en los que los sabores de productos fermentados obtenidos por medio de cultivo de bacterias de ácido láctico se consideran críticos, las cepas bacterianas usadas en ellos no se pueden seleccionar desde el punto de vista de sus capacidades proliferativas. En consecuencia, hay casos en donde las bacterias de ácido láctico que proporcionan productos fermentados que tienen buenos sabores se seleccionan y usan, incluso si sus capacidades proliferativas son inferiores.
Por lo tanto, al cultivar bacterias de ácido láctico, es técnica ordinaria que varias sustancias promotoras del crecimiento se agreguen preliminarmente al medio de cultivo para mejorar las eficiencias de cultivo, y tal técnica ha sido bien conocida. En general, como ejemplos de aquellas sustancias que se han considerado efectivas en la promoción del crecimiento, se pueden mencionar extractos de clórela, sales de hierro, vitaminas, digestos de proteína que contienen aminoácidos o péptidos, extractos de levadura y
similares.
El presente Solicitante también ha reportado en el Documento de Patente 1 que un extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) o similar se agrega a medios de cultivo para potenciar las capacidades proliferativas o la supervivencia en el cultivo de bacterias de ácido láctico.
Sin embargo, en productos como leche fermentada en la que se ha agregado un extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae), aunque se pudo potenciar la capacidad proliferativa o supervivencia de las bacterias de ácido láctico, los productos tenían amargor que se deriva de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae), y por lo tanto, tuvieron un problema en sus sabores.
Lista de Citas
Documento de Patente
Documento de Patente 1 : WO2006/126476
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
Problema Técnico
En consecuencia, un objetivo de la presente invención es el de proporcionar una técnica para mejorar los sabores de los productos mientras se mantiene el efecto de un extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) para potenciar la capacidad proliferativa o supervivencia de bacterias de ácido
láctico en el cultivo de las mismas.
Solución al Problema
La presente invención se relaciona con un producto de cultivo de bacterias de ácido láctico que se obtiene cultivando una bacteria de ácido láctico en un medio de cultivo, en donde el medio de cultivo contiene una esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) que es un concentrado obtenido a través de una electrodiálisis de una mezcla obtenida agregando una sal inorgánica a un extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae).
Además, la presente invención se relaciona con un método para producir un producto de cultivo de bacterias de ácido láctico, el método incluye: mezclar una esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) en un medio de cultivo en una etapa arbitraria en la producción del producto de cultivo de bacterias de ácido láctico que se obtiene cultivando una bacteria de ácido láctico en el medio de cultivo, en donde la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) es un concentrado obtenido a través de una electrodiálisis de una mezcla obtenida agregando una sal inorgánica a un extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae).
Además, la presente invención se relaciona con un método para promover el crecimiento de una bacteria de ácido láctico, el método incluye: mezclar una esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) en un medio de cultivo, en donde la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) es un concentrado obtenido a través de una electrodiálisis de una mezcla obtenida
agregando una sal inorgánica a un extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae); y cultivar la bacteria de ácido láctico en el medio de cultivo.
Efectos Ventajosos de la Invención
En el producto de cultivo de bacterias de ácido láctico de conformidad con la presente invención, la capacidad proliferativa y la supervivencia de bacterias de ácido láctico se potencian debido a que una esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae), la cual es un concentrado obtenido a través de electrodiálisis de una mezcla obtenida agregando una sal inorgánica a un extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae), se ha agregado al mismo durante el cultivo de bacterias de ácido láctico. En consecuencia, el conteo de células viables en el producto de cultivo es superior, mientras que tal conteo superior de células viables se mantendrá, y también, el producto de cultivo no tiene amargor derivado de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae), y por lo tanto tiene un mejor sabor.
En consecuencia, el producto de cultivo de bacterias de ácido láctico de conformidad con la presente invención no tiene problema con su sabor, y se puede utilizar para varios productos lácteos fermentados. Además, en tales productos lácteos fermentados, el deterioro de sabores o reducciones en los conteos de células viables rara vez ocurren durante el almacenamiento y, por lo tanto, los productos lácteos fermentados son altamente valiosos y son útiles en el mejoramiento de la salud.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
El producto de cultivo de bacterias de ácido láctico de la presente invención se obtiene cultivando una bacteria de ácido láctico en un medio de cultivo, en donde el medio de cultivo contiene una esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae), en donde la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) es un concentrado obtenido a través de una electrodiálisis de una mezcla obtenida agregando una sal inorgánica a un extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae).
La esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) que se usa para obtener el producto de cultivo de bacterias de ácido láctico anteriormente mencionado y que es un concentrado obtenido a través de la electrodiálisis de una mezcla obtenida agregando una sal inorgánica a un extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) se puede obtener de la siguiente manera. Primero, las hojas o tallos (preferiblemente hojas) de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) que pertenece al género Rubus en la familia Rosaceae se someten a una extracción de solvente sin algún tratamiento, o se someten a tratamientos como lavado, descamación, secado y aplastamiento, si se desea, y entonces se someten a una extracción de solvente, obteniendo así el extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae).
El solvente usado para la producción del extracto anterior de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) no está particularmente limitado, y, por ejemplo, se pueden mencionar agua o solventes orgánicos como alcoholes
inferiores de C1-C5 (por ejemplo, etanol), acetato de etilo, glicerina y propilenglicol. Estos solventes se pueden usar de forma singular, o se pueden mezclar dos o más de los solventes. De entre estos solventes, el agua o los solventes acuosos como agua/alcoholes inferiores son particularmente preferibles.
Además, un método de extracción para el extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) que usa el solvente descrito anteriormente no está particularmente limitado, y, por ejemplo, el método de extracción de ácido es preferible. Adicionalmente, el procedimiento de extracción de ácido preferiblemente se lleva a cabo bajo una condición ácida de un pH de 4.0 o inferior, más preferiblemente de un pH de 3.0 a 4.0. Para el componente de ácido usado para ajustar el pH del solvente al llevar a cabo la extracción de ácido, se puede usar cualquier sustancia sin limitaciones particulares siempre y cuando la sustancia sea ácida. Como ejemplos preferibles de la misma se pueden mencionar ácidos orgánicos como ácido cítrico, ácido málico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido láctico y ácido acético.
Adicionalmente, las condiciones para la extracción del extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) usando el solvente descrito anteriormente no están particularmente limitadas y, por ejemplo, es preferible que el tratamiento de extracción se lleve a cabo a una temperatura de 0°C a 100°C (más preferiblemente 10°C a 40°C) por aproximadamente 30 a 60 minutos.
El extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) obtenido de
este modo se somete a filtración, centrifugación y similares, si se desea, y después se agrega al mismo una sal inorgánica, seguido por el sometimiento de la mezcla resultante a una electrodiálisis.
La sal inorgánica agregada al extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) no está particularmente limitada siempre y cuando sea una sal formada a partir de un ácido inorgánico y una base inorgánica. Por ejemplo, se pueden mencionar una o más de una sal de potasio como cloruro de potasio, una sal de sodio como cloruro de sodio, una sal de calcio como cloruro de calcio y una sal de magnesio como cloruro de magnesio. Entre estas sales inorgánicas es preferible una sal de magnesio, y es más preferible el cloruro de magnesio. La cantidad de la sal inorgánica agregada al extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) no está particularmente limitada, pero es preferible 0.01 a 0.5 mol/L, y es más preferible 0.02 a 0.2 mol/L, en términos de anhídrido. Estas sales inorgánicas pueden ser hidratos o anhídridos.
Con respecto a un electrodializador para la electrodiálisis, por ejemplo, un electrodializador en el que una región entre un cátodo y un ánodo está particionada alternativamente con una pluralidad de membranas de intercambio catiónico y una pluralidad de membranas de intercambio aniónico, y así se pueden mencionar una cámara de cátodo, una cámara de ánodo, una pluralidad de cámaras de desalado y una pluralidad de cámaras concéntricas que se proporcionan. En tal electrodializador se obtienen una solución concentrada en la que las sustancias iónicas están concentradas, y una solución desalada en la que las sustancias iónicas se han retirado. Esto es,
las regiones que están particionadas con las membranas de intercambio catiónico están ubicadas sobre el lado en donde el cátodo está presente y las membranas de intercambio aniónico que están ubicadas sobre el lado opuesto en donde el ánodo está presente corresponden con las cámaras concéntricas, y cada líquido que refluye en cada cámara de concentración corresponde con la solución concentrada. Además, las regiones que están particionadas con las membranas de intercambio aniónico están ubicadas sobre el lado en donde el cátodo está presente y las membranas de intercambio catiónico que están ubicadas sobre el lado opuesto en donde el ánodo está presente corresponden con las cámaras de desalado, y cada líquido que refluye en cada cámara de desalado corresponde con la solución desalada. Los electrodializadores están comercialmente disponibles, por ejemplo, con los nombres comerciales "ACILYZER" (ASTOM Corporation) y similares, y tales electrodializadores comercialmente disponibles también se pueden utilizar.
La esencia descrita anteriormente de Rubus suavissimus S. Lee
(Rosaceae) se puede obtener de la siguiente manera. Esto es, el extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) al que se le ha agregado la sal inorgánica se refluye en una cámara de desalado en un electrodializador, mientras que agua o similar se refluye en una cámara de concentración, para llevar a cabo el tratamiento de electrodiálisis, y el concentrado resultante se recolecta como la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae). Las condiciones para la electrodiálisis no están particularmente limitadas. Por ejemplo, se puede mencionar un método en el que, mientras una cantidad de
agua equivalente a 5 % a 50 % (preferiblemente 10 % a 30 %) por masa (en lo sucesivo, simplemente referida como "%") del extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) se refluye en la cámara de concentración, un voltaje de 10 a 200 V, preferiblemente 50 a 100 V se aplica a la región entre el ánodo y el cátodo, y una corriente eléctrica de 10 a 200 A, preferiblemente 50 a 100 A se pasa a través de la región para llevar a cabo el tratamiento de electrodiálisis hasta que la conductividad eléctrica en la cámara de desalado alcanza el equilibrio (2 millisiemens por centímetro (mS/cm)), y entonces se recolecta un concentrado para obtener la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae). Para el líquido que se refluye en la cámara de concentración también se puede usar, además de agua, por ejemplo, una solución de electrolito como una solución de salmuera o una solución acuosa de ácido cítrico.
En cuanto a la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) obtenida del modo anteriormente descrito, la esencia obtenida directamente de la electrodiálisis se puede usar como está; o la esencia resultante de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) se puede someter a un procedimiento de purificación/concentración por medio de ultrafiltración, centrifugación o similares, y se puede usar el producto purificado/concentrado así obtenido. Alternativamente, el producto purificado/concentrado adicionalmente se puede secar por medio de secado por aspersión, liofilización o similares, y se puede usar el producto en polvo así obtenido.
La cantidad de la esencia anteriormente descrita de Rubus
suavissimus S. Lee (Rosaceae) agregada al medio de cultivo en el que pueden crecer las bacterias de ácido láctico no está particularmente limitada. Por ejemplo, en cuanto a una esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) que exhibe un Brix de 12, la concentración de la esencia en el medio de cultivo es de 0.01 % a 1.0 %, preferiblemente de 0.01 % a 0.5 %, más preferiblemente 0.02 % a 0.2 %. El Brix se refiere a un valor medido con un refractómetro digital como "RX-7000a" (ATAGO CO., LTD.).
Además, en cuanto a cuándo agregar la esencia anteriormente descrita de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) al medio de cultivo, es preferible que la esencia se agregue al mismo antes de fermentar la bacteria de ácido láctico. Sin embargo, el tiempo de adición no está limitado a tal tiempo, y la esencia se puede agregar al medio de cultivo incluso durante la fermentación de la bacteria de ácido láctico o después de la terminación de la fermentación de la bacteria de ácido láctico. Adicionalmente, la esencia también se puede agregar al medio de cultivo más de una vez. En particular, la adición de la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) al medio de cultivo antes de la fermentación de la bacteria de ácido láctico es preferible porque el conteo de células y la supervivencia después de la terminación del cultivo se puede mantener en un nivel superior.
Adicionalmente, en cuanto al medio de cultivo al que se agrega la esencia anteriormente descrita de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae), el medio de cultivo de leche animal que incluye leche cruda (por ejemplo, leche bovina, leche de cabra, leche de caballo y leche de oveja) o productos lácteos
(por ejemplo, leche descremada en polvo, leche entera en polvo y crema fresca); leche líquida derivada de plantas (por ejemplo, leche de soya); o varios medios de cultivo sintéticos se pueden mencionar. Adicionalmente, los ingredientes que se usan en medios de cultivo generales para bacterias de ácido láctico se pueden agregar a los medios de cultivo anteriormente mencionados. Como ejemplos de tales ingredientes se pueden mencionar vitaminas como la vitamina A, vitaminas del complejo B, vitamina C y vitamina E, varios péptidos, aminoácidos, sales de calcio, magnesio y similares.
Adicionalmente, el ácido oleico o derivados del mismo se pueden agregar a los medios de cultivo anteriormente descritos. Como ejemplos de tal ácido oleico o derivados del mismo se pueden mencionar el ácido oleico, o derivados de ácido oleico como sales de ácido oleico (por ejemplo, oleato de sodio, oleato de potasio), y ésteres de ácido oleico como ésteres de ácido glicerin-oleico, ésteres de ácido poliglicerin-oleico o ésteres de ácido sacarosa-oleico. El ácido oleico y derivados del mismo se pueden agregar a los medios de cultivo hasta una concentración final de aproximadamente 5 a 50 ppm, preferiblemente de 5 a 25 ppm en términos de ácido oleico.
La bacteria de ácido láctico que se cultiva para obtener el producto fermentado de bacterias de ácido láctico de la presente invención no está particularmente limitada siempre y cuando sea una bacteria de ácido láctico generalmente usada para fabricación de alimentos. Por ejemplo, se puede mencionar una bacteria que pertenece al género Lactobacillus (por ejemplo, Lactobacillus casei, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus acidophilus,
Lactobacillus cremoris, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus salivaríus, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus yoghurti, Lactobacillus delbrueckii subesp. bulgaricus, Lactobacillus delbrueckii subesp. delbrueckii, y Lactobacillus johnsonii); una bacteria que pertenece al género Streptococcus (por ejemplo, Streptococcus thermophilus); una bacteria que pertenece al género Lactococcus (por ejemplo, Lactococcus lactis subesp. lactis, Lactococcus lactis subesp. cremoris, Lactococcus plantarum, y Lactococcus raffínolactis); y una bacteria que pertenece al género Enterococcus (por ejemplo, Enterococcus faecalis, y Enterococcus faecium). Entre estas bacterias de ácido láctico, se prefieren una o más bacterias de ácido láctico seleccionadas del grupo que consiste en una bacteria que pertenece al género Lactobacillus, una bacteria que pertenece al género Streptococcus, y una bacteria que pertenece al género Lactococcus. Entre ellas es preferible Lactobacillus casei o Lactobacillus gasseri, y Lactobacillus casei YIT9029 (FERM BP-1366; la fecha de recepción: 12 de enero de 1981 ; el Depósito Internacional de Organismos de Patente, el Instituto Nacional de Tecnología y Evaluación ((Tsukuba Central 6, 1-1 , Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, 305-8566, JAPÓN)) es particularmente preferible. La bacteria de ácido láctico (bacterias) en la presente invención se refiere a una bacteria de ácido láctico que es una bacteria anaeróbica facultativa, y por lo tanto no incluye una bacteria que pertenece al género Biffidobacterium, la cual es una bacteria anaeróbica obligada.
Las condiciones para cultivar la bacteria de ácido láctico para
obtener el producto fermentado de bacterias de ácido láctico de la presente invención no están particularmente limitadas. Por ejemplo, se pueden mencionar las condiciones en las que se inocula la bacteria de ácido láctico en el medio de cultivo de modo que el conteo bacterial en el medio de cultivo sea de aproximadamente 1.0 ? 103 a 1.0 ? 09 cfu/mL, y después la bacteria de ácido láctico se cultiva a aproximadamente 30°C a 40°C por aproximadamente 1 a 7 días. Adicionalmente, en cuanto a la condición de cultivo en este caso, una técnica que es adecuada para cultivar una bacteria de ácido láctico usada en el mismo se puede seleccionar apropiadamente de cultivo estático, cultivo revolvedor, cultivo de agitación, cultivo de aireación y similares para llevar a cabo el cultivo de la bacteria de ácido láctico.
El producto fermentado de bacterias de ácido láctico obtenido de este modo exhibirá un conteo de células viables superior, y mantendrá tal conteo de células viables superior, a la vez que no tiene amargor derivado de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) y tiene un mejor sabor. Entonces, el producto fermentado de bacterias de ácido láctico se puede utilizar solo como un producto lácteo fermentado, o se puede mezclar con otros materiales auxiliares que están permitidos para agregarse a los productos lácteos fermentados generales, para preparar un producto lácteo fermentado final.
En la presente invención, el producto lácteo fermentado incluye leche de soya fermentada o leche fermentada definida en la Ordenanza Ministerial Japonesa sobre la Leche y Productos Lácteos en Relación con los Estándares de Composición y similares; las bebidas como bebidas lácteas de
bacterias de ácido láctico, yogur duro, yogur suave, yogur natural, incluso kéfir, queso y similares. Adicionalmente, el producto lácteo fermentado de la presente invención incluye bebidas y alimentos que usan varias bacterias de ácido láctico, e incluye leche fermentada, bebidas de bacterias de ácido láctico, kéfir, queso y similares de, por ejemplo, un tipo natural, tipo saborizado, tipo fruta, tipo edulcorado, tipo suave, tipo bebible, tipo sólido (duro) o tipo congelado.
Estos productos lácteos fermentados se pueden obtener mezclando, además de agentes edulcorantes como jarabes, otros varios materiales alimenticios (por ejemplo, ingredientes opcionales como varios carbohidratos, agentes espesantes, agentes emulsionantes o varias vitaminas) en el producto fermentado de bacterias de ácido láctico anteriormente descrito, según sea necesario. Como ejemplos de tales materiales alimenticios se pueden mencionar carbohidratos como sacarosa, glucosa, fructosa, palatinosa, trehalosa, lactosa, xilosa y maltosa; alcoholes de azúcar como sorbitol, xilitol, eritritol, lactitol, palatinita, jarabe de almidón reducido y jarabe de maltosa reducido; edulcorantes de alta intensidad como aspartame, taumatina, sucralosa, acesulfame K y stevia; varios agentes espesantes (estabilizadores) como agar, gelatina, carragenina, goma de guayaco, goma de xantano, pectina, goma de algarroba, goma gellan, carboximetilcelulosa, polisacáridos de soja y alginato de propilenglicol; agentes emulsionantes como ésteres de ácido graso de sacarosa, ésteres de ácido graso de glicerina, ésteres de ácido graso de poliglicerina, ésteres de ácido graso de sorbitán y
lecitina; grasas lácteas como crema, mantequilla y crema agria; ingredientes ácidos como ácido cítrico, ácido láctico, ácido acético, ácido málico, ácido tartárico y ácido glucónico; varias vitaminas como vitamina A, vitaminas del complejo B, vitamina C y vitamina E; minerales como calcio, magnesio, cinc, hierro y manganeso; y sabores como yogur, baya, naranja, membrillo, perilla, cítrico, manzana, menta, uva, albaricoque, pera, crema pastelera, durazno, melón, plátano, tropical, herbal, té negro o café.
El producto lácteo fermentado obtenido de este modo tiene un mejor sabor, y también el deterioro en el sabor y una reducción en el conteo de células viables rara vez ocurren incluso durante el almacenamiento. Por lo tanto, el producto lácteo fermentado es altamente valioso, y es útil para mejorar la salud.
EJEMPLOS
En lo sucesivo la presente invención se describirá con referencia a los Ejemplos. Sin embargo, la presente invención no ha de considerarse limitada a los Ejemplos.
EJEMPLO DE REFERENCIA 1
Producción de un extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae)
Las hojas de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) se
sometieron a tratamientos como aplastamiento, y después a las hojas tratadas se les agregó 15 veces su volumen de agua y una cantidad de ácido cítrico equivalente al 5 % de las hojas, el pH se ajustó a 3.8 y se llevó a cabo una extracción a 20°C por 60 minutos. Además, la solución de extracción resultante se concentró 5 veces con un evaporador, obteniendo así un extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) que exhibe un Brix de 13.
EJEMPLO DE PRODUCCIÓN 1
Producción de una esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) (1)
Se agregó cloruro de magnesio al extracto anterior de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) obtenido a través de la extracción a 20°C por 60 minutos hasta una concentración final de 0.05 mol/L. Entonces la solución resultante se cargó en cámaras de desalación en un electrodializador (membrana electrodialítica: AC220-50; nombre del producto: Micro Acilyzer-S-3; fabricante del equipo: ASTOM Corporation), mientras que una cantidad de agua equivalente a 17 % del extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) se cargó en las cámaras de concentración, se condujo entonces un tratamiento de electrodiálisis hasta que la conductividad eléctrica en las cámaras de desalación alcanzó el equilibrio (específicamente, hasta que la conductividad eléctrica alcanzó 2 milisiemens por centímetro (mS/cm)), y se recolectó un concentrado. Además, el concentrado se concentró 5 veces con un evaporador, obteniendo así la esencia de Rubus suavissimus S. Lee
(Rosaceae) 1 que exhibe un Brix de 12.
EJEMPLO 1
Producción de un producto de cultivo (1)
Se usó una solución de leche descremada en polvo al 10 % como medio de base, 0.2 % de esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) 1 preparada en el Ejemplo de Producción 1 se agregó al medio de base, y el medio resultante se sometió a esterilización por calor a 100°C por 15 minutos, preparando así un medio de cultivo. 0.1 % de un iniciador de Lactobacillus casei (YIT9029) se inoculó en el medio de cultivo (conteo bacterial inicial: 1.5x106 cfu/mL). El medio de cultivo inoculado se incubó a 37°C por 24 horas, y después se enfrió a menos de 10°C, obteniendo así un producto de cultivo. Adicionalmente, para comparar, en lugar de la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) 1 , 0.2 % del extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) se agregó al medio de base, obteniendo así otro medio de cultivo, y se obtuvo otro producto de cultivo del mismo modo con este otro medio de cultivo.
Los valores de pH de los productos de cultivo se midieron con un medidor de pH (HORIBA F-52), y los conteos de bacterias de ácido láctico se midieron con medios de cultivo BCP (fabricados por EIKEN CHEMICAL CO., LTD.). También se midió la acidez de los productos de cultivo (una titulación obtenida tomando 9 g. del producto de cultivo y titulando los ácidos orgánicos
en el mismo con una solución 0.1 N de hidróxido de sodio hasta que el pH alcanzó 8.5; unidades: mL). Adicionalmente se evaluaron los sabores de los productos lácteos resultantes por medio de un panel de tres expertos sobre los criterios de evaluación descritos anteriormente, y los resultados se muestran en el Cuadro 1.
Criterios de evaluación de los sabores
Puntuaciones Contenido
5 No se detectó amargor.
4 Se detectó poco amargor.
3 Se detectó un ligero amargor.
2 Se detectó amargor.
1 Se detectó un fuerte amargor.
CUADRO 1
Como se puede ver claramente en el Cuadro 1 , se reconoció que los productos lácteos en los que se agregó el extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) o la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) 1 exhibieron valores inferiores de pH, en comparación con el producto lácteo derivado del medio de base solo, y que los conteos superiores de células viables se pudieron obtener en los productos lácteos en los que se ha agregado el extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) o la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) 1. Adicionalmente, se reconoció que el producto lácteo obtenido usando la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) 1 tuvo un muy buen sabor, mientras que tuvo un valor de pH y un conteo de células viables casi equivalentes a los del producto lácteo obtenido usando el extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae).
EJEMPLO DE PRODUCCIÓN 2
Producción de una esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) (2)
Se produjeron las esencias de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) 2 a 5 de la misma manera que en el Ejemplo de Producción 1 , excepto porque se usaron las mismas cantidades de cloruro de sodio, cloruro de potasio, cloruro de calcio y citrato de tripotasio, respectivamente, en lugar de hexahidrato de cloruro de magnesio.
EJEMPLO 2
Producción de productos de cultivo (2)
Los productos de cultivo (conteos iniciales de bacterias: 1.5x10 cfu/mL) se obtuvieron de la misma manera que en el Ejemplo 1 , excepto porque se usaron las mismas cantidades de las esencias de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) 2 a 5 en lugar de la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) 1. Con respecto a estos productos de cultivo, se midieron los valores de pH, acidez y conteos de células viables, y los sabores se evaluaron de la misma manera que en el Ejemplo 1. Los resultados se muestran en el Cuadro 2.
CUADRO 2
Como se puede ver claramente en el Cuadro 2, se reconoció que 0 la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) obtenida por medio de la adición de cloruro de magnesio fue superior en un efecto promotor del crecimiento en comparación con las esencias de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) obtenidas por medio de la adición de otras sales. Adicionalmente, se reconoció sólo un pequeño efecto promotor del crecimiento 5 en el citrato de tripotasio que es una sal orgánica.
EJEMPLO DE PRODUCCIÓN 3
Producción de una esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) (3)
0 Se produjeron las esencias de Rubus suavissimus S. Lee
(Rosaceae) 6 a 10 de la misma manera que en el Ejemplo de Producción 3, excepto porque se usaron 0.01 , 0.02, 0.1 , 0.2 y 0.5 mol/L respectivamente, de cloruro de magnesio en lugar de 0.05 mol/L de cloruro de magnesio.
EJEMPLO 3
Producción de productos de cultivo (3)
Los productos de cultivo (conteos iniciales de bacterias: 1.5x106 cfu/mL) se obtuvieron de la misma manera que en el Ejemplo 1 , excepto porque se usaron las mismas cantidades de las esencias de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) 6 a 10 producidas en el Ejemplo de Producción 3 en lugar de la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) 1. Con respecto a estos productos de cultivo, se midieron los valores de pH, acidez y conteos de células viables, y los sabores se evaluaron de la misma manera que en el Ejemplo 1. Los resultados se muestran en el Cuadro 3.
CUADRO 3
Como se puede ver claramente en el Cuadro 3, se reconoció que el uso de las esencias de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) que fueron concentrados obtenidos a través de la electrodiálisis de extractos de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) en los que se había agregado cloruro de magnesio, particularmente esencias de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) en las que se había agregado 0.02 % o más de cloruro de magnesio, tuvieron una tendencia a producir efectos significativos promotores del crecimiento contra bacterias de ácido láctico. Adicionalmente, se reconoció que, aún cuando se agregó cloruro de magnesio al extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae), el sabor no fue afectado siempre y cuando la cantidad de cloruro de magnesio fuera de 0.2 % o inferior.
EJEMPLO 4
Producción de productos de cultivo (4)
Los productos de cultivo (conteos iniciales de bacterias: 1.5?106 cfu/mL) se obtuvieron de la misma manera que en el Ejemplo 1 , excepto porque la cantidad de la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) 1 agregada se cambió a 0.01 %, 0.02 %, 0.05 %, 0.1 % y 0.5 %. Con respecto a estos productos de cultivo, se midieron los valores de pH, acidez y conteos de células viables, y los sabores se evaluaron de la misma manera que en el Ejemplo 2. Los resultados se muestran en el Cuadro 4. El medio de cultivo 5 en el Cuadro 4 es idéntico al medio de cultivo del Ejemplo 1 al que se le agregó la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) 1.
CUADRO 4
Como se puede ver claramente en el Cuadro 4, se reconoció que los efectos promotores del crecimiento contra bacterias de ácido láctico se proporcionaron por medio de la adición de la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae), mientras que los productos lácteos se vieron muy poco afectados. En particular, se reveló que los conteos superiores de células viables y los mejores sabores se obtuvieron por medio de la adición de 0.02 % a 0.2 % de la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae).
EJEMPLO 5
Producción de productos de cultivo (5)
Usando Lactobacillus casei (YIT9029) o Lactobacillus gasseri (YIT0192) como la bacteria de ácido láctico y usando el medio de base y el medio de cultivo (medio de cultivo 5) que contiene 0.2 % de la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae), los productos de cultivo (conteo bacterial inicial: 1.5?106 cfu/mL para Lactobacillus casei y 4.5x105 cfu/mL por Lactobacillus gasseri) se obtuvieron de la misma manera que en el Ejemplo 1. Con respecto a estos productos de cultivo, se midieron los valores de pH, acidez y conteos de células viables, y los sabores se evaluaron de la misma manera que en el Ejemplo 1. Los resultados se muestran en el Cuadro 5.
CUADRO 5
Como se puede ver claramente en el Cuadro 5, se reconoció que un efecto promotor del crecimiento se proporcionó también contra una bacteria de ácido láctico como Lactobacillus gasserí la cual no creció bien en el medio de base, por medio de la adición de la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae).
EJEMPLO 6
Producción de un producto de cultivo (6)
Se usó una solución de leche descremada en polvo al 15 % que contiene 4 % de glucosa y 3 % de fructosa como medio de base, 0.2 % de la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) 1 preparada en el Ejemplo de Producción 1 se agregó a la misma, y el medio se sometió a una esterilización por calor a 100°C por 60 minutos, preparando así un medio de cultivo. 0.5% de un iniciador de Lactobacillus casei (YIT9029) se inoculó en el
medio de cultivo (conteo bacterial inicial: 7.6x107 cfu/mL). El medio de cultivo inoculado se incubó a 37°C hasta que el pH alcanzó 3.7, y después se enfrió a menos de 10°C, obteniendo así un producto de cultivo. Con respecto a los productos de cultivo, se midió el tiempo requerido para cultivar, y se midió el conteo de células viables en el producto de cultivo de la misma manera que en el Ejemplo 1. Los resultados se muestran en el Cuadro 6.
CUADRO 6
Como se puede ver claramente en el Cuadro 6, el tiempo requerido para el cultivo de Lactobacillus casei se pudo reducir a dos tercios agregando la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) al medio de cultivo.
EJEMPLO 7
Producción de una bebida de bacterias de ácido láctico
Una solución acuosa que contiene 30 % de jarabe de azúcar de glucosa-fructosa, 25 % de jarabe de almidón hidrogenado, 0.3 % de vitamina C, 0.3 % de polisacáridos de soja y 0.03 % de sucralosa se esterilizó a 100°C por 10 minutos, 75 partes en peso de la solución acuosa esterilizada se agregaron a 25 partes en peso de una mezcla obtenida homogeneizando el producto de cultivo producido en el Ejemplo 6 a 15 MPa, y después se agregó 0.1 % de un sabor yogur (fabricado por Kabushiki Kaisha Yakult Material) a la mezcla, produciendo así una bebida de bacterias de ácido láctico. La bebida de bacterias de ácido láctico se empacó en un contenedor de poliestireno de 65 mL. Con respecto a la bebida de bacterias de ácido láctico obtenida, de la misma manera que en el Ejemplo 1, se midió el conteo de células viables y se evaluó el sabor, inmediatamente después de la producción (inmediatamente después del empacado) y después de 21 días de almacenamiento a 10°C. Los resultados se muestran en el Cuadro 7. Adicionalmente, la tasa de supervivencia después de 21 días de almacenamiento de la bebida de bacterias de ácido láctico a 10°C se calculó por medio de la siguiente fórmula.
CUADRO 7
Fórmula Matemática 1
Tasa de supervivencia (%) = conteo de células viables después de 21 días de almacenamiento a 10°C/conteo de células viables inmediatamente después del empacadoxI OO
Como se puede ver claramente en el Cuadro 7, se mostró que, con respecto a la bebida de bacterias de ácido láctico preparada con el medio de cultivo que contiene la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae), se suprimió una reducción en el conteo de células viables después del almacenamiento en comparación con la bebida de bacterias de ácido láctico preparada con el medio de cultivo que no contiene la esencia.
Aplicabilidad Industrial
El producto de cultivo de bacterias de ácido láctico de la presente invención se puede usar para productos lácteos fermentados y similares que son útiles para mejorar la salud.
Claims (7)
1.- Un producto de cultivo de bacterias de ácido láctico que se obtiene cultivando una bacteria de ácido láctico en un medio de cultivo, en donde el medio de cultivo comprende una esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) que es un concentrado obtenido a través de la electrodiálisis de una mezcla obtenida agregando una sal inorgánica a un extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae).
2.- El producto de cultivo de bacterias de ácido láctico de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la sal inorgánica es al menos una seleccionada de una sal de potasio, una sal de sodio, una sal de calcio y una sal de magnesio.
3.- El producto de cultivo de bacterias de ácido láctico de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la sal inorgánica es una sal de magnesio.
4. - El producto de cultivo de bacterias de ácido láctico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado además porque la cantidad de la sal inorgánica agregada al mismo es de 0.02 a 0.2 mol/L.
5. - Un producto lácteo fermentado que comprende el producto de cultivo de bacterias de ácido láctico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.
6. - Un método para producir un producto de cultivo de bacterias de ácido láctico, el método comprende: mezclar una esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) en un medio de cultivo en una etapa arbitraria en la producción del producto de cultivo de bacterias de ácido láctico, el cual se obtiene cultivando una bacteria de ácido láctico en el medio de cultivo, en donde la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) es un concentrado obtenido a través de la electrodiálisis de una mezcla obtenida agregando una sal inorgánica a un extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae).
7. - Un método para promover el crecimiento de una bacteria de ácido láctico, el método comprende: mezclar una esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) en un medio de cultivo, en donde la esencia de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) es un concentrado obtenido a través de la electrodiálisis de una mezcla obtenida agregando una sal inorgánica a un extracto de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae); y cultivar la bacteria de ácido láctico en el medio de cultivo.
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