MX2014005367A - 18-metil-6,7-metilen-3-oxo-17-pregn-4-en-21,17b-carbolactona, preparados farmaceuticos que contienen los compuestos mencionados y su uso en la terapia de la endometriosis. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a 18-metil-6,7-metilen-17-pregn-4 -en-21,17ß-carbolactona de la fórmula general I (ver Fórmula) en donde el grupo 6,7-metileno puede estar en la posición a o ß, preparados farmacéuticos que contienen al menos un isómero de la fórmula I, así como su uso en el tratamiento de la endometriosis.

Description

18-METIL-6.7-METILEN-3-OXO-17-PREGN-4-EN-21.17B-CARBOLACTONA.

PREPARADOS FARMACÉUTICOS QUE CONTIENEN LOS COMPUESTOS MENCIONADOS Y SU USO EN LA TERAPIA DE LA ENDOMETRIOSIS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere al objeto caracterizado en las reivindicaciones de patente, es decir, 18-metil-6,7-metilen-3-oxo-17- pregn-4-en-21 , 17p-carbolactona (fórmula I), en donde el grupo metileno en la posición 6,7 de la estructura del esteroide puede estar en posición a o ß, a preparados farmacéuticos que contienen al menos uno de los isómeros mencionados, así como su uso en la terapia de la endometriosis.

Fórmula I El objeto de la presente invención consiste en proporcionar nuevos compuestos para el tratamiento de la endometriosis, que muestran un perfil de efecto o de efecto secundario mejorado que las terapias de tratamiento disponibles hasta la fecha. En especial, se debe permitir por medio de los compuestos según la invención un tratamiento duradero o a largo plazo de la endometriosis.

Además, mediante el nuevo enfoque terapéutico, se deben evitar los efectos colaterales tal como se presentan al usar gestágenos para el tratamiento de la endometriosis como, por ejemplo, trastornos del comportamiento de sangrado.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La sintomatología de la endometriosis se ha investigado y descrito de manera completa, aun cuando los mecanismos patógenos no se conozcan totalmente. En el caso de la endometriosis se trata de un reestablecimiento de tejido de endometrio fuera de la localización en el área luminal del útero. Estas llamadas lesiones del endometrio se anidan en el área muscular del útero (endometriosis interna, adenomiosis) o en otros sitios del abdomen, por ejemplo, los ligamentos, en el peritoneo parietal del saco de Douglas (endometriosis peritoneal), la pared intestinal, en el ovario (llamado endometrioma) o rectovaginal (rectovaginal, a menudo también endometriosis profunda infiltrante) y conservan las propiedades de su tejido original.

La endometriosis es dependiente de las hormonas en todas sus formas de manifestación y muestra esencialmente un carácter inflamatorio. Afecta al 10-20% de las mujeres en edad reproductiva. La enfermedad aparece sólo en casos excepcionales en mujeres después de la menopausia. Los síntomas centrales de la endometriosis son dolores abdominales crónicos, dismenorrea, dispareunia, disuria, trastornos de sangrado e infertilidad. Los síntomas aparecen mayormente combinados. Se supone que las lesiones por la menstruación llamada retrógrada llegan a la cavidad peri-toneal a través de las trompas de Falopio y luego se anidan allí.

Los enfoques terapéuticos actuales para el tratamiento de una endometriosis diagnosticada son muy limitados.

De esta manera, la endometriosis se puede tratar por medio de una eliminación quirúrgica de las lesiones del endometrio en una intervención laparoscópica. En este caso, se eliminan los focos de endometrio quirúrgicamente con calor (electrocauterización) o por corte (extirpación). Adicionalmente, se pueden disolver adherencias eventualmente existentes, separar los quistes de endometrio y, en caso de desear bebés, ensayar la permeabilidad de las trompas de Falopio por medio de cromopertubación. La tasa de reincidencia después de una intervención de este tipo es, sin embargo, muy alta (25-30%). La histerectomía, es decir, la separación completa del útero, existe en estos casos particularmente difíciles como opción terapéutica final.

En enfermedades particularmente difíciles, a veces recién la eliminación de ambos ovarios y las trompas de Falopio (salpingo-ooforectomía bilateral, adnexectomía) proporciona una liberación definitiva de los síntomas.

Los dolores menstruales y los sangrados prolongados o intensos provenientes de una endometriosis en la musculatura uterina (adenomiosis uteri) también se pueden tratar exitosamente mediante histerectomía.

Sin embargo, estas intervenciones llevan a infertilidad y a una menopausia anticipada con los problemas asociados con ello, por lo cual se debe ponderar bien la utilidad respecto de las desventajas.

Además de las intervenciones invasivas, se puede tener en cuenta también una terapia medicamentosa. Ella se tiene en cuenta a menudo en caso de afecciones de gran superficie, eventualmente no operable por completo, pero también se puede usar en caso de una afección leve a moderada. Además de la terapia neta contra el dolor con los antiinflamatorios no esferoides (NSAID), se tienen en cuenta para ello en principio cuatro grupos de sustancias: (a) anticonceptivos orales combinados (OC, compuestos por estrógeno y gestágeno) (b) gestágenos (c) análogos de GnRH (GnRH = hormona liberadora de la gonadotropina) y (d) Danazol® Los anticonceptivos orales combinados (a) regulan el curso del ciclo y reducen la intensidad menstrual. De ello se desprende probablemente su eficacia en pacientes con endometriosis. Sin embargo, se supone que, por un lado, la tasa de reincidencia para la sintomatología del dolor es bien alta y, por otro lado, nuevos estudios indican que un uso por años de estos principios activos hormonales está asociado con una mayor tasa de endometriosis profunda infiltrante1, una forma de endometriosis particularmente dolorosa.

El uso de los OC también se describe en la literatura de patentes. De esta manera, el documento EP 1257280 revela que la drospirenona micronizada es apropiada para el tratamiento de la endometriosis. En un párrafo más adelante se describe que las composiciones de drospirenona con un bajo contenido de estrógeno o también sin cualquier estrógeno son apropiadas, por ejemplo, para el tratamiento de la endometriosis. Esto se explica a partir de la propiedad gestagénica de la drospirenona. En el documento EP1257280, se describen cantidades de 0,5 a 10 mg de drospirenona como eficaces. A lo largo del tratamiento de la endometriosis con drospirenona, no se revela nada en este documento.

En el documento WO 2008/107373 A1 , se describen antagonistas del receptor de mineralocorticoides para la preparación de un medicamento para el tratamiento de endometriosis. Además del uso de compuestos con un efecto antimineralocorticoide puro, se proponen allí también compuestos que, más allá de ello, también muestran un efecto en el receptor de progesterona, 1 Chapron et al. Hum Reprod. 201 1 Aug;26(8):2028-35 en el receptor de estrógeno, en el receptor de glucocorticoides y/o en el receptor de andrógenos. En especial, los compuestos revelados en el documento WO 2008/107373 A1 espironolactona y la drospirenona antes mencionada también presentan un efecto gestagénico.

El compuesto mencionado en el documento WO 2008/107373 A1 epierenona como antagonista de MR puro muestra una potencia in vitro relativamente débil (comp. la tabla 1). Se prefieren los antagonistas de MR que presentan en ensayos de transactivación in vitro una IC5o al menos 10 veces menor en comparación con la epierenona.

Además de la drospirenona

[0013], también se describen otros gestágenos (b) en el tratamiento de la endometriosis. Aquí, también es un punto de enfoque, por un lado, una supresión de la función de los ovarios y, por otro lado, la inducción de la diferenciación terminal del endometrio, la decidualización que lleva por último a la necrosis de los tejidos.

Los gestágenos simulan al cuerpo un embarazo, logrando así una situación hormonal alterada. Ya no se produce una ovulación y el endometrio retrocede. Por lo general, los trastornos de endometriosis disminuyen después de 6 a 8 semanas.

MPA de depósito (acetato de medroxiprogesterona) y Visanne® (dienogest) se permiten para el tratamiento de endometriosis. En el caso de MPA, se puede producir, en virtud del efecto antiestrogénico del compuesto ya después de una aplicación de 6 meses, una reducción de la masa ósea.

Por ello, por ningún motivo se debe usar durante un período más largo que 2 años2. Bajo tratamiento con gestágenos, se pueden producir, además, como efectos colaterales frecuentes irregularidades en el perfil de sangrado, hemorragias intercurrentes, así como tensiones en las mamas3.

Los gestágenos influyen en general, además del ciclo hormonal, al perfil de sangrado, con trastornos hemorrágicos como uno de los efectos colaterales más frecuentes de los gestágenos. Esto también se refiere a sustancias que son activas en otros receptores de hormonas y, al mismo tiempo, presentan una actividad gestagénica como, por ejemplo, espironolactona. Mediante una angiogénesis deficiente (neovascularización, un proceso que tiene lugar cíclicamente en el endometrio) durante la decidualización del endometrio, las paredes de los vasos se vuelven quebradizas y se producen las llamadas hemorragias intercurrentes que tienen lugar independientemente de un sangrado menstrual y que son características del tratamiento crónico con gestágenos4.

Además, pacientes con endometriosis presentan a menudo la 2 Physician Information zu depo-subQ provera 104; Subcutaneous depot medroxyiprogesterone acétate versus leuprolide acétate en the treatment of endometriosis-associated pain; P. G. Crosignani et al., Human Reproduction Vol. 2 1 , No. 1 pp. 248 - 256, 2006 3 Brown et al., Cochrane Datábase Sist Rev. 2012 Mar 14;3:CD002122.; McCormack Drugs. 2010 Nov 12;70(16).2073-88 4 Lockwood , menopausia. 2011 Apr;18(4):408-1 1 llamada resistencia relativa a la progesterona5. Se supone que la señalización de la progesterona en las lesiones de endometrio puede ser alterada, donde por resistencia a la progesterona se bloquea una transformación completa y descamación del endometrio. Así se pueden beneficiar la persistencia de las lesiones, así como el curso crónico de la enfermedad. Los enfoques terapéuticos, cuya acción no depende de la señalización de la progesterona, sin necesarios para curar la enfermedad de forma duradera.

Los análogos de la hormona liberadora de la gonadotropina (GnRH) (c) representan actualmente el estándar dorado de los agentes terapéuticos admisibles contra todos los estadios de la endometriosis. Los análogos de GnRH bloquean por completo la glándula pituitaria. El ciclo menstrual ya no tiene lugar. Estas sustancias transportan al cuerpo de la mujer transitoriamente de modo artificial a la menopausia y, por ello, el tejido de endometriosis ya no puede sangrar. El tejido se vuelve hipotrófico.

Debido al perfil de efectos colaterales, este enfoque terapéutico, sin embargo, sólo es apropiado para el uso a corto plazo (de hasta 6 meses). Así, los agonistas de GnRH inducen síntomas posmenopáusicos como sofocaciones (80-90%), trastornos del sueño (60-90%), sequedad vaginal (30%), cefaleas (20-30%), alteraciones del humor (10%) y reducción de la 5 Al-Sabbagh et al., Mol Cell Endocrinol. 2012 Jul 25;358(2):208-15 densidad ósea con mayor riesgo de osteoporosis acompañante.

Independientemente de los efectos colaterales mencionados, una vez terminado el tratamiento en un lapso de dos a tres meses, vuelve nuevamente el ciclo normal. En más del 60% de las mujeres afectadas, también retornan los trastornos de la endometriosis, de modo que se debe ponderar un nuevo ciclo de tratamiento.

Debido a las desventajas mencionadas, los análogos de GnRH no lograron hasta ahora una amplia aplicación en el tratamiento de la endometriosis, aunque hayan desplazado a la terapia estándar establecida en los años 70 con Danazol®, un andrógeno gestagénico, en virtud del perfil de efectos colaterales algo mejor.

Danazol® (d) fue el primer terapéutico "clásico" de la endometriosis y hasta los años 70, el estándar de oro. Danazol® produce, con un uso prolongado, similar a la testosterona sexual masculina, una masculinización de la mujer. Como otros efectos colaterales, se producen los efectos conocidos para los andrógenos tales como acné, hiperandrogenismo, hirsutismo y cambios del humor (irreversibles).

Danazol® actúa, como también los agonistas de GnRH, sobre la glándula pituitaria que es responsable de la producción de hormonas, que estimulan los ovarios. Así, se regula la producción de estrógenos en los ovarios.

Por ello, existe una necesidad imperiosa de preparados alternativos que permiten un tratamiento no invasivo de la endometriosis y que no presentan las desventajas del estado de la técnica.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN Un objeto de la presente invención consiste así en proporcionar nuevas sustancias que dejan de lado las desventajas del estado de la técnica, en especial en el caso de sus efectos colaterales causados por gestágeno como, p. ej., alteraciones del sangrado, o se evitan los síntomas causados por falta de estrogenos como degradación de la masa ósea y depresiones, es decir, es un objeto de la invención proporcionar sustancias no gestagénicas.

Otro objeto de la invención es también proporcionar, mediante un mejor perfil de efectos colaterales, sustancias para la terapia crónica.

Se halló que los compuestos de la fórmula I Fórmula I solucionan las tareas según la invención y son excelentes para usar en la terapia de la endometriosis. Se prefiere en particular el isómero de 6ß,7ß-metileno. Los dos isómeros se mencionan por primera ves en el documento WO 2012/059594 (Figuras 4 y 5), que se presentó el 4 de noviembre de 2012 y cuya prioridad se reivindica en la presente solicitud.

La invención se refiere así a compuestos de la fórmula I, preparados farmacéuticos que contienen al menos un isómero de la fórmula I, así como su aplicación en el tratamiento de la endometriosis.

Sorprendentemente, estos compuestos, tanto el isómero 6ß,7ß, que se describe con mayor detalle en el Ejemplo 5, Tabla 1 , #1 (datos de tranasactivación in vitro en el receptor de mineralocorticoides y receptor de progesterona, efecto gestagénico in vivo), como también el isómero 6a,7a, que se describe con mayor detalle en el Ejemplo 5, Tabla 1 , #1A, no muestran una eficacia gestagénica en modelos de animales relevantes, a pesar de que compuestos estructuralmente muy similares, tal como se revelan por ejemplo por Muhn et al.6 o bien por Kuhnz et al.7, presentan propiedades gestagénicas (ver el Ejemplo 5 #2 & #3 en la Tabla 1 ). En especial, el aumento de la potencia in vivo gestagénica convencional para el experto al introducir un grupo metilo adicional en la posición 18 de la estructura esferoide sorprendentemente no se observa, tal como muestra la comparación de las entradas en el Ejemplo 5 #1 y #2 vs. #3 y #4 en la Tabla 1.

Los compuestos antes mencionados, entre ellos en especial el 6 Muhn et al, Contraception 1994, 51 :99-110 7 Kuhnz et al, Contraception 1995, 51 (2):131-139 isómero 6ß,7ß, muestran un perfil de efectos y efectos secundarios mejor que los enfoques terapéuticos disponibles hasta la fecha y, así, son un recurso terapéutico mejorado contra la endometriosis.

También los compuestos según la invención, en comparación con los antagonistas del receptor de mineralocorticoides conocidos (eplerenona, espironolactona, drospirenona), se caracterizan por una mayor potencia y la falta de un efecto gestagénico.

Como antagonistas potentes del receptor de mineralocorticoides en el sentido de la presente invención se designan aquellos compuestos que presentan en ensayos de transactivación in vitro una IC50 10 veces menor en comparación con eplerenona.

Los antagonistas del receptor de mineralocorticoides sin una actividad gestágenica digna de mencionar son aquellas sustancias que no muestran un efecto en ensayos de transactivación del receptor de progesterona in vitro y/o en ensayos in vivo (los ensayos de mantenimiento de embarazo sensibles a gestágenos).

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 es una representación de los tamaños de las lesiones en el modelo de endometriosis de xenoinjerto después del tratamiento con sustancia de ensayo 6 Eje Y: pesos de las lesiones después del tratamiento en un modelo de endometriosis por xenoinjerto (endometrio de primates trasplantados a ratones SCID).

Eje X: grupos: A = vehículo, B/C/D = sustancia de ensayo 6 0,3/1 ,0/3,0 mg/kg s.c. * p < 0,05 ANOVA, post-hoc Dunnett La Figura 2 es una representación de los tamaños de las lesiones en el modelo de endometriosis de xenoinjerto después del tratamiento con sustancia de ensayo 6 Eje Y: pesos de las lesiones después del tratamiento en un modelo de endometriosis por xenoinjerto (endometrio de primates trasplantados a ratones SCID).

Eje X: grupos: A = vehículo, B/C/D = sustancia de ensayo 6 0,3/1 ,0/3,0 mg/kg s.c. * p < 0,05 ANOVA, post-hoc Dunnett DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La preparación del compuesto que se emplea según la invención se realiza como se describe a continuación. La ruta de síntesis para la novedosa 18-metil-6,7-metilen-3-oxo-17-pregn- -en-21 , 17ß-carbolactona de acuerdo con el esquema 1 parte, por ejemplo, de la endiona8 2.

Kerb, Ger. Offen. (1970), DE 1921396, CAS [31320-40-8] CH2=CHCH2OPO(NMe2); BuLi, TMEDA 6 7 Esquema 1 El éter dienólico 3 se prepara por eterificación isomerizante de la endiona 2 según procedimientos conocidos, por ejemplo, para R = -metilo con 2,2-dimetoxipropano y p-toluensulfonato de piridinio y se establece la espirolactona 4, por ejemplo, según el método de Sturtz9 o alternativamente a través de procedimientos conocidos10. La introducción del enlace doble 6,7 se realiza por bromación del éter 3,5-dienólico 4, así como una posterior separación del ácido bromhídrico11.

La bromación del éter dienólico se puede realizar, por ejemplo, análogamente a la disposición de J. A. Zderic, et al.12. La separación del ácido bromhídrico resulta por calentamiento del compuesto de 6-bromo con reactivos básicos como, por ejemplo, bromuro de litio o carbonato de litio en solventes apróticos como dimetilformamida a temperaturas de 50-120°C o al calentar los compuestos de 6-bromo en un solvente como colidina o lutidina en el compuesto 513. Se convierten luego por ciclopropanación del enlace doble 6,7 según procedimientos conocidos, por ejemplo, con metiluro de dimetiisulfoxonio [ver, por ejemplo, los documentos DE-A 1 1 83 500, DE-A 29 22 500, EP-A 0 019 690, US-A 4.291.029; E. J. Corey y M. Chaykovsky, J. Am. Chem. Soc. 84, 867 (1962)] en los compuestos de la fórmula I según la invención, es decir, los estereoisómeros de la fórmula 6 y 7. La mezcla de los 6,7-a- y ß-estereoisómeros se pueden separar, por ejemplo, por cromatografía, en isómeros individuales. 9 Sturz Synthesis 1980, 289 10 Bittler Angew. i.e. 21 1982, 696; Laurent J. Steroid Biochem. 19 1983, 771 " J. Fried, J.A. Edwards, Organic Reactions in Steroid Chemistry, von Nostrand Reinhold Company 1972, S. 265-374) 12 J.A. Zderic, Humberto Carpió, A. Bowers y Cari Djerassi en Steroids 1 , 233 (1963) 13 Strike en FR 1529949 (1S68), CAS[23675-27-6] El principio activo/los principios activos se pueden mezclar en este caso con los excipientes farmacéuticos usuales. Los antagonistas del receptor de mineralocorticoides se formulan en una forma conocida por el experto.

La dosis terapéuticamente eficaz depende del peso corporal, vía de aplicación, comportamiento individual, el tipo de preparación y el momento o intervalo en el que se realiza la aplicación. Un intervalo típico de dosis para una mujer con 70 kg de peso corporal es de 1-100 mg/día, con preferencia entre 5 y 20 mg/día. Se prefiere en especial una dosis de 10 mg/día.

Otro objeto de la presente invención se refiere a medicamentos que contienen al menos un compuesto según la invención y eventualmente al menos uno o varios otros principios activos, así como su uso para el tratamiento de la endometriosis. Como principios activos combinados apropiados se han de mencionar a modo de ejemplo y con preferencia: moduladores selectivos del receptor de estrógeno (SERMs), antagonistas del receptor de estrógenos (ER), inhibidores de aromatasa, inhibidores de 17ß— HSD1 , inhibidores de la esteroide-sulfatasa (STS), agonistas y antagonistas apropiados de GnRH (en especial superagonistas), antagonistas del receptor de kisspeptina (KISSR), moduladores selectivos del receptor de andrógeno (SARMs), inhibidores de la 5a-reductasa, moduladores selectivos del receptor de progesterona (SPRMs), gestágenos, antigestágenos, anticonceptivos orales, inhibidores de las proteína quinasas activadas por mitógenos (MAP), así como inhi-bidores de las MAP quinasas (Mkk3/6, Mek1/2, Erk1/2), inhibidores de las proteína quinasas B (???a/ß/?; Akt1/2/3), inhibidores de las fosfoinositida-3-quinasas (PI3K), inhibidores de la quinasa dependiente de ciclina (CDK1/2), inhibidores de la vía de señales inducida por hipoxia (inhibidores HIFIalfa, activadores de las prolilhidroxilasas), inhibidores de la histona desacetilasa (HDAC), antagonistas del receptor de prostaglandina F (FP) (PTGFR) o antiinflamatorios no esferoides (NSAIDs).

Los compuestos de acuerdo con la invención pueden actuar en forma sistémica y/o loca. Para tal fin pueden ser administrados en forma adecuada, como por ejemplo, oral, parenteral, pulmonar, nasal, sublingual, lingual, bucal, rectal, dérmica, transdérmica, conjuntival, tópica o como implante.

Para estas vías de administración, los compuestos a usar de acuerdo con la invención se pueden convertir en formas de administración adecuadas.

Si aparte del compuesto de acuerdo con la invención de acuerdo con la Fórmula I están contenidos otros principios activos, estos pueden estar formulados en una forma de administración conjunta o eventualmente también pueden ser administrados como preparado combinado.

Para la administración oral son adecuados de acuerdo con el estado de la técnica funcional los compuestos a usar de acuerdo con la invención en formas de administración rápidas y/o modificadas que contienen los compuestos de acuerdo con la invención en forma cristalina y/o amorra y/o disuelta, como por ejemplo, comprimidos (comprimidos no recubiertos o recubiertos, por ejemplo, con recubrimientos insolubles o de solubilidad retardada o resistentes a los jugos gástricos, que controlan la liberación del compuesto a utilizar de acuerdo con la invención), comprimidos que de deshacen rápidamente en la cavidad bucal o películas/obleas (wafers), películas/liofilizados, cápsulas (por ejemplo, cápsulas de gelatina duras o blandas), grageas, granulados, pellets, polvo, emulsiones, suspensiones, aerosoles o soluciones.

La administración parenteral se puede realizar evitando un paso de resorción (por ejemplo, en forma endovenosa, intraarterial, intracardial, intraespinal o intralumbar) o involucrando una resorción (por ejemplo, intramuscular, subcutánea, intracutánea, percutánea o intraperitoneal). Para administración parenteral son adecuadas como formas de administración, entre otros, los preparados de inyección e infusión en forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, liofilizados o polvos estériles.

Para las otras vías de administración son adecuadas, por ejemplo, las formas de medicamentos por inhalación (entre otros, inhaladores de polvo, nebulizadores), gotas, soluciones o sprays nasales, comprimidos de administración lingual, sublingual o bucal, películas/obleas o cápsulas, supositorios, cápsulas vaginales, suspensiones acuosas (lociones, mezclas para agitar), suspensiones lipófilas, pomadas, cremas, sistemas terapéuticos transdérmicos (por ejemplo, parches), leches, pastas, espumas, polvo para dispersar o implantes.

Se prefiere la administración oral o parenteral, en especial la administración oral y la endovenosa.

Los compuestos a utilizar de acuerdo con la invención pueden convertirse en las formas de administración indicadas. Esto se puede realizar de manera conocdia por mezclado con sustancias auxiliares inertes, no tóxicas, aceptables farmacéuticamente. Estas sustancias auxiliares comprenden, entre otras, sustancias portadoras (por ejemplo, celulosa microcristalina, lactosa, manitol), solventes (p. ej., polietilenglicoles líquidos), emulsionantes y agentes dispersantes o reticulantes (por ejemplo, dodecilsulfato de sodio, polioxisorbitanoleato), ligantes (por ejemplo, polivinilpirrolidona), polímeros sintéticos y naturales (por ejemplo, albúmina), estabilizadores (por ejemplo, antioxidantes, como por ejemplo, ácido ascórbico), colorantes (por ejemplo, pigmentos inorgánicos, como por ejemplo, óxido de hierro) y mejoradores del sabor y/o el olor.

A pesar de ello puede ser necesario eventualmente desviarse de las cantidades mencionadas, dependiendo del peso corporal, la vía de administración, el comportamiento individual con respecto al principio activo, el tipo de preparación y el momento o intervalo en el cual se realiza la administración. Así, en algunos casos, puede ser suficiente utilizar menos de la cantidad mínima mencionada más arriba, mientras que en otros casos debe superarse el límite máximo mencionado más arriba. En el caso de la administración de cantidades mayores puede ser aconsejable distribuir estas en varias administraciones individuales durante el día.

Como se halló en el modelo animal de endometriosis (Ratón Ejemplo 4), en el caso de la administración del compuesto de acuerdo con la invención en el rango de dosis mencionado se puede observar una reducción de las lesiones endometriales in vivo.

En forma sorprendente, los compuestos de acuerdo con la invención, no muestran con una alta potencia vitro en el MR un efecto gestágeno (ver Tabla 1 , ej. 5).

Ejemplos La invención se explica por medio de los siguientes ejemplos, sin que estos ejemplos sean limitativos.

Ejemplo 1 18-metil-3-oxo-17-pregna-4,6-dien-21 ,17p- carbolactona En una solución de 27 g de 18-metil-androsta 4,6-dien-3,17-d¡ona (Kerb, Ger. Offen. (1970), DE 1921396, CAS [31320^*0-8]) en 540 mi de 2,2-dimetoxipropano, se incorporaron 3,9 g de tosilato de piridinio. Luego se agitó durante 8 h a 100°C de temperatura de baño. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, se añadieron 5,3 mi de piridina y se concentró al vacío hasta sequedad. El residuo se extrajo con 80 mi de metanol y se filtró por succión. Se obtuvieron 24.8 g de 3-metoxi-18-metil-androsta-3,5-dien-17-ona en forma de sólido incoloro. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): d = 5,29 - 5,22 (m, 1 H), 5,14 (s, 1 H), 3,58 (s, 3H), 2,43 (dd, 1 H), 2,36 - 2,20 (m, 2H), 2,16 - 2,03 (m, 3H), 1 ,99 -1 ,57 (m, 8H), 1 ,49 - 1 ,04 (m, 7H), 1 ,00 (s, 3H), 0,80 (t, 3H) [ppm]. b) 3-metoxi-18-metil-17-pregna-3,5-dien-21 ,17p-carbolactona Se dispusieron 226 mi de solución 1 ,6 M de butil-litio (en hexano) a -55 °C y se vertieron gota a gota 36.5 g de tetrametilfosforodiamidato de alilo, se disolvieron en 59 mi de tetrahidrofurano. Después de 1 h a -55°C de agitación, se calentó hasta -20°C, se incorporaron 46 mi de ?,?,?,?-tetrametiletandiamina y se dejó calentar hasta temperatura ambiente. Una solución de 18,9 g de 3-metoxi-18-metil-androsta-3,5-dien-17-ona en 213 mi de tetrahidrofurano se añadió y se agitó durante 5 horas a 80°C. Luego se añadió solución acuosa saturada de cloruro de amonio y se vertió en agua, se extrajo tres veces con acetato de etilo, se lavó con agua y solución de cloruro de sodio neutra, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró al vacío a 40 °C. Se obtuvieron 22,3 g de 3-metoxi-18-metil-17-pregna-3,5-dien-21 ,17B-carbolactona. 1H-RMN (400 Hz, cloroformo-d): d = 5,26 -5,20 (m, 1 H), 5,13 (s, 1 H), 3,58 (s, 3H), 2,54 - 2,25 (m, 5H), 2,19 (dt, 1 H), 2.10 (dd, 1 H), 1 ,97 - 1 ,77 (m, 5H), 1 ,73 - 1 ,51 (m, 6H), 1 ,42 (qd, 1 H), 1 ,34 - 1 ,12 (m, 4H), 0,98 (s, 3H), 0,97 (t, 3H) [ppm]. c) 18-metil-3-oxo-17-pregna-4,6-dien-21 ,17p-carbolactona Una suspensión de 22 g de 3-metoxi-18-metil-17-pregna-3,5-dien-21 ,17 -carbolactona en 220 mi de dimetilformamida se mezcló sucesivamente a 0 °C con 22 mi de una solución al 10% de acetato de sodio, así como a esta temperatura con 8,84 g de 1 ,3-dibromo-5,5-dimetilhidantoína en porciones, se agitó durante 0,.5 horas a 0 °C (baño de hielo), se mezcló con 8,25 g de bromuro de litio, así como 7,24 g de carbonato de litio, y se agitó durante 5 horas a 80 °C de temperatura del baño. Luego se agitó en agua helada / cloruro de sodio, se filtró el precipitado, se lavó con agua, y se cromatografió en gel de sílice con hexano / acetato de etilo. Se obtuvieron 10,7 g de 18-metil-3-oxo-17-pregna-4,6- dien-21 ,17 -carbolactona. 1H-RMN (400 MHz, cloroformo-d): d = 6,17- 6,12 (m, 1 H), 6,12 -6,07 (m, 1 H), 5,69 (s, 1 H), 2,66 - 2,32 (m, 7H), 2,07 - 1 ,79 (m, 5H), 1 ,78 -1 ,50 (m, 6H), 1 ,46 - 1 ,36 (m, 1 H), 1 ,32 - 1 ,17 (m, 3H), 1 ,13 (s, 3H), 1 ,01 (t, 3H) [ppm].

Ejemplo 2 18-metil-6B,7B-metilen-3-oxo-17-pregn-4-en-21 ,17B-cabolactona (6) Una suspensión de 50 g de yoduro de trimetilsulfoxonio en 750 mi de dimetilsulfóxido con 9,73 g de hidruro de sodio (al 55% en aceite) se disolvió durante 2 horas a temperatura ambiente bajo argón, se mezcló con 24,7 g de 18-metil-3-oxo-17-pregna-4,6-dien-21 ,17p-carbolactona (preparada como se describió en el Ejemplo 1) y se agitó durante otras 24 horas a temperatura ambiente. Luego se agitó en 15 I de agua helada / cloruro de sodio, se filtró el precipitado, se lavó con agua y se secó al vacío a 60 °C. Se obtuvieron 22,4 g de producto crudo. Después de la cromatografía en gel de sílice con hexano / acetato de etilo como fracción II, se obtuvieron 7,5 g de 18-met¡l-6B,7R-metilen-3-oxo-17-pregn- -en-21 , 17R-cabolactona. 210-21 1 °C, [a]D -151 ,9° +/- 0,05° (cloroformo, c = 10 mg/ml) 1H-RMN (600 MHz, cloroformo-d): d = 6,02 (s, 1H), 2,62 - 2,44 (m, 3H), 2,43 - 2,36 (m, 3H), 1 ,98 - 1 ,81 (m, 6H), 1 ,75 -1 ,65 (m, 2H), 1 ,65 -1 ,42 (m, 8H), 1,28 -1,11 (m, 4H), 1,09 (s, 3H), 1,08 -1,01 (m, 2H), 0,96 (t, 3H), 0,80 (q, 1H) [ppm].

Ejemplo 3 18-metil-6a,7ct -metilen-3-oxo-17-pregn-4-en-21,17B-cabolactona (7) Según el método del Ejemplo 2, se obtuvieron después de la cromatografía como fracción I 2,9 g de 18-metil-6a,7a -metilen-3-oxo-17-pregn— 4-en-21,17ft-cabolactona como sustancia sólida con un punto de fusión de 230-231 °C, [a]D = 102,6° +/- 0,11° (cloroformo, c = 10 mg/ml). 1H-RMN (600 MHz, cloroformo-d): d = 5,95 (s, 1H), 2,58 - 2,44 (m, 3H), 2,43-2,34 (m, 3H), 2,21 -2,15 (m, 2H), 1,98-1,86 (m, 5H), 1,81 -1,74 (m, 2H), 1,65-1,48 (m, 6H), 1,34-1,26 (m, 2H), 1,17-1,07 (m, 2H), 1,14 (s, 3H), 0,98 (t, 3H), 0,89 - 0,84 (m, 1 H), 0,77 - 0,71 (m, 1 H), 0,47 (q, H) [ppm].

Ejemplo 4 modelos de endometriosis in vivo Modelo de endometriosis por xenoinjerto con endometrio de primates: Para examinar el efecto del compuesto de acuerdo con la invención sobre el crecimientos de lesiones del endometrio, se usó un modelo de endometriosis por xenoinjerto en ratones SCID inmunodeficientes, en los cuales se implantó endometrio de monos Rhesus.

A los ratones SCID ovariectomizados se les realizó una sustitución hormonal con cápsulas de estradiol y progesterona, para crear un medio hormonal óptimo para el endometrio de los primates. Los monos dadores fueron tratados durante 7 días con estradiol y progesterona. A continuación se realizó un curetaje del endometrio de los animales y se cortó en trozos grandes de 2x2x4 mm. Por medio de una laparotomía se transplantó el endometrio en la cavidad abdominal de los ratones o se implantó en forma subcutánea. Las lesiones se dejaron crecer durante 14 días bajo tratamiento con estradiol y progesterona, seguido por 14 días de tratamiento con estradiol (de acuerdo con un ciclo de menstruación). El tratamiento comenzó con una administración s.c. diaria del compuesto de acuerdo con la invención durante un período de tiempo de 28 días con dosis de 0,3, 1 ,0 y 3,0 mg/kg, en donde se continuó con la suplementación con estradiol. Después de finalizar el período de tratamiento se sometió a los animales a una laparotomía final y se calculó el peso de las lesiones por animal. Se usó espironolactona como control positivo con una dosis de 10 mg/kg (vehículo: benzoato de bencilo/aceite de ricino). El compuesto de acuerdo con la invención 6 mostró con 1 ,0 y 3,0 mg/kg/d un efecto significativo sobre el crecimiento de la lesión en comparación con el vehículo (A) y el grupo de dosis más baja (B = 0,3 mg/kg). El resultado de las mediciones se representa en la figura 1/2.

Modelo de endometriosis en el ratón singénico: La inducción singénica de la endometriosis en ratones representa un modelo animal usual para ensayar el efecto de las sustancias para la terapia de la endometriosis. La endometriosis se induce experimentalmente por transplante de fragmentos de útero murinos de un ratón donante de la misma especie en la cavidad abdominal del ratón receptor. Se usaron animales hembras de la especie de ratón balb/c. Por medio de un legrado vaginal se determinó el ciclo del ratón. Se usaron exclusivamente animales dadores que se encontraban en el estro. Los animales dadores se sacrificaron y se retiraron los cuernos uterinos y a continuación se cortaron longitudinalmente. De los úteros se cortaron con un punzón 2 mm de bioptatos, los que a continuación se cosieron en los animales receptores. Los animales receptores fueron narcotizados y se sometieron a una laparotomía. Durante la intervención se cosieron 6 muestras sacadas con punzón del útero de un ratón dador en el peritoneo parietal del ratón receptor. El día después de esta intervención comenzó el tratamiento de 4 semanas con las sustancias por ensayar (vehículo: Tween 80/ Captex 200P). Después de 28 días se abrieron los animales en una laparotomía final y se determinó el tamaño de las lesiones. Las lesiones que crecieron se captaron fotográficamente y se midió la superficie por medio de software AxioVision. Por cada grupo de tratamiento se usaron 14 animales.

Aquí se ensayó la sustancia de prueba 6 en 3 diferentes esquemas de dosificación y se evaluó el tamaño de la lesión en comparación con los animales tratados con vehículo (Grupo A). Se ensayaron las siguientes dosificaciones: 3, 10 y 30 mg/kg/día (Grupos B, C, D). En la figura 2/2 se representan los tamaños de lesiones medios (en mm2) por animal (eje y).

Ejemplo 5 Efecto in vitro/in vivo en MR y PR En la Tabla 1 se representan los datos in vivo para la acción gestagénica de las sustancias. La acción gestagénica in vivo se puede calcular por medio de dos ensayos diferentes, por un lado con ayuda de un ensayo para mantener la preñez en la rata, por el otro por medio de un ensayo de Mcfail en el conejo (transformación endometrial). Se presentan los datos disponibles para los compuestos 6 y 7 de acuerdo con la invención (Tabla 1 #1 y #1A) así como para comparación para espironolactona. Para garantizar la comparabilidad en los ensayos, se presentan los gestágenos drospirenona y Levonorgestrel, de los cuales se conocen datos de ambos ensayos. Además se presenta la Noretisterona, para demostrar junto con Levonorgestrel el efecto de un grupo metilo 18 sobre la potencia gestagénica.

Tabla 1 : 6 Muhn et al., Contraception 1994, 51 :99-1 10 7 Kuhnz et al., Contraception 1995, 51 (2): 131-139 1 Phillips et al., Contraception 1987, 36(2): 181 -192 La determinación de los datos de transactivación in vitro (valores de IC5o), así como de la actividad in vivo gestagénica se realizó tal como se describe a continuación. 1. Ensayo celular, in vitro para la determinación de la actividad inhibidora MR y la selectividad MR en comparación con otros receptores de hormonas esferoides La identificación de antagonistas del receptor humano de mineralocorticoides (MR) así como la cuantificación del efecto de los compuestos aquí descriptos, se realiza con ayuda de una línea celular recombinante. La célula se deriva originalmente de una célula epitelial del ovario del hámster (Chínese Hámster Ovary, CHO K1 , ATCC: American Tipe Culture Collection, VA 20108, USA).

En esta línea celular CHO K1 se usa un sistema de quimeras establecido en el cual los dominios de ligadura de ligandos de los receptores humanos de hormonas esteroides se fusionan a los dominios de ligadura de ADN del factor de transcripción de levadura GAL4. Las quimeras de receptores de hormonas esteroides GAL4 así formadas se co-transfectan y expresan en forma estable en las células de CHO con un constructo reportero.

Clonaciones: Para la generación de las quimeras de los receptores de hormonas esteroides GAL4 se clona el dominio de ligadura GAL4-ADN (Aminoácidos 1-147) del vector pFC2-dbd (Firma Stratagene) con los dominios de ligadura de ligandos amplificados por PCR del receptor de mineralocorticoides (MR, Aminoácidos 734-985) y del receptor de progesterona (PR, Aminoácidos 680-933) en el vector plRES2 (Firma Clontech). El constructo reportero que contiene cinco copias del sitio de ligadura GAL4 antepuestos a un promotor de timidinaquinasa, lleva a la expresión de la luciferasa de luciérnaga (Photinus pyralis) después de la activación y ligadura de las quimeras del receptor de hormonas esteroides GAL4 a través de los agonistas específicos en cada caso aldosterona (MR) y progesterona (PR).

Desarrollo del ensayo: Las células MR y PR, el día antes del ensayo se colocan en medio (Optimem, 2,5% FCS, 2 mM de glutamina, 10 mM de HEPES) en placas de microtitulación de 96 (o 384 o 1536) cavidades y se mantienen en una incubadora de células (96% de humedad ambiente, 5% v/v C02, 37°C). El día de la prueba se toman las sustancias por ensayar en el medio arriba mencionado y se agregan a las células. Aproximadamente 10 a 30 minutos después del agregado de las sustancias de prueba, se agregan los agonistas específicos en cada caso de los receptores de hormonas esteroides. Después de un período de incubación adicional de 5 a 6 horas se mide la actividad de luciferasa con ayuda de una videocámara. Las unidades lumínicas relativas medidas dan, dependiendo de la concentración de las sustancias, una curva de estimulación sigmoide. El cálculo de los valores IC50 se realiza con ayuda del programa para computadora GraphPad PRISM (Versión 3.02). 2. Ensayo con respecto a la actividad gestagénica in vivo: Mantenimiento de la preñez en la rata El ensayo de mantenimiento de la preñez representa un modelo en el cual se investiga en forma muy sensible la respuesta del endometrio con respecto a un gestágeno. Sólo en presencia de un gestágeno efectivo continúa la preñez. Ratas preñadas fueron castradas y tratadas con la sustancia de prueba o controles positivos durante un período de tiempo de 7 días. Al final del tratamiento se determina la cantidad de fetos vivos y muertos como medida del efecto gestagénico, es decir, de mantenimiento de la preñez, de la sustancia ensayada. 3. Ensayo con respecto a la actividad gestagénica in vivo: Ensayo de Mcfail en el conejo Conejos hembras fueron ovariectom izados. Siete días después de la ovariectomía los animales recibieron estradiol durante 6 días. Los animales se trataron durante 5 días con la sustancia de prueba, y a continuación se retira el útero y se prepara y se procesa histológicamente. Como medida del efecto gestagénico se evalúa la transformación secretora del endometrio (dosis umbral a partir de la cual se produce una transformación secretora).

Claims (7)

REIVINDICACIONES

1. 18-metil-6,7-metilen-3-oxo-17-pregn-^-en-21 , 17ß-carbolactona de la fórmula I, en donde el grupo 6,7-metileno puede estar en la posición a o ß Fórmula I

2. Compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 , a saber, 18-metil-6R,7ft-metilen-3-oxo-17-pregn-4-en-21 , 17p-carbolactona.

3. 18-metil-6,7-metilen-3-oxo-17-pregn- -en-21 ,17ß-carbolactona para usar en la terapia de la endometriosis.

4. 18-metil-6B,7R-metilen-3-oxo-17-pregn-4-en-21 ,17ß-carbolactona para usar en la terapia de la endometriosis.

5. Preparados farmacéuticos que contienen al menos un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, así como al menos un portador farmacéuticamente aceptable.

6. Preparados farmacéuticos de acuerdo con la reivindicación 5 que contienen al menos un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, así como al menos otro principio activo farmacéutico seleccionado del grupo de los moduladores selectivos del receptor de estrógenos (SERMs), antagonistas del receptor de estrógenos (ER), inhibidores de aromatasa, inhibidores de 17 ~HSD1 , inhibidores de la esteroide-sulfatasa (STS), agonistas y antagonistas de GnRH, antagonistas del receptor de Kisspeptina (KISSR), moduladores selectivos del receptor de andrógenos (SARMs), inhibidores de 5a-reductasa, moduladores selectivos del receptor de progesterona (SPRMs), gestágenos, antigestágenos, anticonceptivos orales, inhibidores de las proteína quinasas activadas por mitógeno (MAP), así como inhibidores de las MAP quinasas (Mkk3/6, Mek1/2, Erk1/2), inhibidores de las proteína quinasas B (???a/ß/?; Akt1/2/3), inhibidores de las fosfoinositida-3-quinasas (PI3K), inhibidores de la quinasa dependiente de ciclina (CDK1/2), inhibidores de la vía de señales inducida por hipoxia (HIFIalfa), activadores de las prolilhidroxilasas), inhibidores de la histona desacetilasa (HDAC), antagonistas del receptor de prostaglandina F (FP) (PTGFR) o antiinflamatorios no esteroides (NSAIDs) en un portador farmacéuticamente aceptable.

7. Preparados farmacéuticos de acuerdo con la reivindicación 6 que contienen un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, así como al menos otro principio activo farmacéutico seleccionado del grupo de los antagonistas ER, inhibidores de aromatasa, inhibidores de quinasas o NSAID.