MX2013014802A - Derivados de acido biciclo (3.1.0) hexano-2,6-dicarboxilico como agonista del receptor mglu2. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a nuevos agonistas de mGIu2 útiles en el tratamiento de trastorno bipolar, esquizofrenia, y trastorno de ansiedad generalizada.

Description

DERIVADOS DE ACIDO BICICLO(3.1.0)HEXANO-2.6-DICARBOXILICO COMO AGONISTA DEL RECEPTOR MGLU2 La presente invención se refiere a compuestos agonistas del receptor mGlu2, profármacos particulares de los mismo, y sus sales así como también composiciones farmacéuticas y usos farmacéuticos de tales compuestos, profármacos particulares, y sus sales.

El L-Glutamato es el principal neurotransmisor excitatorio en el sistema nervioso central y es referido como un aminoácido excitatorio. Los receptores de glutamato metabotrópico (mGlu) son receptores acoplados a la proteína G que modulan la excitabilidad neuronal. El tratamiento de trastornos neurológicos o psiquiátricos ha sido ligado a la activación selectiva de receptores de aminoácido excitatorios mGlu. Varios estudios soportan la activación del receptor mGlu del Grupo II (el cual incluye mGlu2 y/o mGlu3) para el tratamiento de esquizofrenia. Más particularmente, datos recientes demuestran que un agonista del receptor mGlu2/3 tiene propiedades antipsicóticas y puede proporcionar una nueva alternativa para el tratamiento de esquizofrenia. Estudios en ratones agénicos al receptor mGlu2 y mGlu3 sugieren que la actividad similar i antipsicótica de los agonistas del receptor mGlu2/3 son mediadas por mGlu2. Los estudios también demuestran que los agonistas de mGlu2/3 tienen propiedades ansiolíticas, antidepresivas y neuroprotectoras. Por lo tanto, los agonistas del receptor mGlu2 pueden ser útiles en el tratamiento de trastornos psiquiátricos, tales como trastorno bipolar (también conocido como trastorno depresivo maniaco), también conocido como trastorno DERIVADOS DE ACIDO BICIC LO(3.1.0)H EXANO-2.6-DIC ARBOXILICO COMO AGONISTA DEL RECEPTOR MGLU2 La presente invención se refiere a compuestos agonistas del receptor mGlu2, profármacos particulares de los mismo, y sus sales así como también composiciones farmacéuticas y usos farmacéuticos de tales compuestos, profármacos particulares, y sus sales.

El L-Glutamato es el principal neurotransmisor excitatorio en el sistema nervioso central y es referido como un aminoácido excitatorio. Los receptores de glutamato metabotrópico (mGlu) son receptores acoplados a la proteína G que modulan la excitabilidad neuronal. El tratamiento de trastornos neurológicos o psiquiátricos ha sido ligado a la activación selectiva de receptores de aminoácido excitatorios mGlu. Varios estudios soportan la activación del receptor mGlu del Grupo II (el cual incluye mGlu2 y/o mGlu3) para el tratamiento de esquizofrenia. Más particularmente, datos recientes demuestran que un agonista del receptor mGlu2/3 tiene propiedades antipsicóticas y puede proporcionar una nueva alternativa para el tratamiento de esquizofrenia. Estudios en ratones agónicos al receptor mGlu2 y mGlu3 sugieren que la actividad similar antipsicótica de los agonistas del receptor mGlu2/3 son mediadas por mGlu2. Los estudios también demuestran que los agonistas de mGlu2/3 tienen propiedades ansiolíticas, antidepresivas y neuroprotectoras. Por lo tanto, los agonistas del receptor mGlu2 pueden ser útiles en el tratamiento de trastornos psiquiátricos, tales como trastorno bipolar (también conocido como trastorno depresivo maniaco), también conocido como trastorno depresivo maniaco, esquizofrenia, y trastorno de ansiedad generalizada.

El documento W09717952 describe ciertos compuestos biciclo[3.1.0]hexano 4-sustituidos que se afirman que son antagonistas o agonistas de receptores glutamatos metabotrópicos. El compuesto WO03104217 describe compuestos de biciclo[3.1.Ojhexano y heterobiciclo[3.1.Ojhexano que se afirma son formas de profármaco : de compuestos agonistas del receptor mGlu2.

I i El tono glutamatérgico excesivo se ha implicado en muchos estados de enfermedad del sistema nervioso central; sin embargo, los agentes efectivos para corregir estos estados patosfisiológicos están carentes en la práctica clínica. En particular, la aplicación clínica no' ha sido realizada debido a una carencia de antagonistas de mGlu2 con propiedades similares al fármaco apropiadas. Así, aún existe una necesidad para antagonistas de mGlu2 potentes. Existe también una necesidad para agonistas de mGlu2 eficaces. La presente invención proporciona nuevos biciclo[3.1.0]hexanos 4-sustituidos, que incluyen prófármacos particulares del mismo los cuales proporcionan biodisponibilidad incrementada adecuada para desarrollo clínico, que son agonistas de mGlu2 potentes y eficaces. Tales nuevos compuestos de la presente invención pueden dirigir la necesidad para tratamientos potentes, efectivos de trastornos psiquiátricos tales como trastorno bipolar, esquizofrenia, y trastorno de ansiedad generalizada.

La presente invención proporciona un compuesto de la fórmula: en donde R 1 R2 es hidrógeno, 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o behcilo, en donde bencilo es opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, alquilo -? ^ -?,? opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, o alcoxi -C 1 -C3 ; R3 es hidrógeno, 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo, en donde bencilo es opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, alquilo -C 1 -C 3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, o alcoxi -d-Ca; R4 es hidrógeno, (2S)-2-aminopropanoilo, (2S)-2-amino-4-metilsulfanil-butanoilo, (2S)-2-amino-4-metil-pentanoilo, o 2-aminoacetilo; R5 es alquilo -C C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; siempre que cuando R2 y/o R3 no son hidrógeno entonces R4 es; hidrógeno; siempre que cuando R4 no es hidrógeno entonces R2 y/o R3 son hidrógeno; siempre que R5 puede ser hidrógeno cuando el átomo de azufre está unido al sistema de anillo biciclo[3.1 .0]hexano en la configuración S; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

La presente invención proporciona un método para tratar un trastorno psiquiátrico seleccionado a partir del grupo que consiste de trastorno bipolar, esquizofrenia, y trastorno de ansiedad generalizada que comprende adm inistrar a un paciente en necesidad del m ismo una cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

La presente invención también proporciona u n método para tratar dolor que comprende administrar a un paciente en necesidad del mismo una ca ntidad efectiva de un com puesto de la presente invención o una sa l del m ismo farmacéuticamente aceptable.

La presente invención también proporciona u n método para tratar abuso de sustancias que com prende adm inistrar a u n paciente en necesidad del m ismo una cantidad efectiva de un com puesto de la presente invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

La presente invención proporciona una composición farmacéutica que com prende un com puesto de la i nvención o una sal del mismo farmacéutica mente aceptable. La presente invención proporciona una composición farmacéutica q ue com prende un compuesto de la invención o una sal del mismo farmacéutica mente aceptable, en co'mbinación con uno o más portadores, d il uyentes , o excipientes farmacéuticamente aceptables. En una modalidad particular, la formulación además com prende uno o más de otros agentes terapéuticos.

La presente invención proporciona un compuesto de la invención o una sa l del mismo farmacéuticamente aceptable para uso en terapia , en particular para el tratamiento de un trastorno psiquiátrico. Además, la presente invención proporciona el uso de un com puesto de la invención o una sal del m ismo farmacéuticamente aceptable para la manufactura de un medicamento para el tratam iento de un trastorno psiquiátrico. La presente invención también proporciona un compuesto de la, invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para uso en e tratamiento de un trastorno psiquiátrico.

' La presente invención proporciona un compuesto de la invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para uso en terapia, en particular para el tratamiento de dolor. Además, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de dolor. La presente invención también proporciona un compuesto de la invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para uso en el tratamiento de un dolor.

La presente invención proporciona un compuesto de la invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para uso en terapia, en particular para el tratamiento de abuso de sustancias. Además, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para la manufactura de un' medicamento para el tratamiento de abuso de sustancias. La presente invención también proporciona un compuesto de la invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para uso en el tratamiento de abuso de sustancias.

Adicionalmente, esta invención proporciona una formulación farmacéutica adaptada para el tratamiento de un trastorno psiquiátrico. Además, la presente invención proporciona modalidades preferidas de los métodos y usos como se describe en la presente, en los cuales el trastorno psiquiátrico es seleccionado a partir del grupo que consiste de trastorno bipolar, esquizofrenia, y trastorno de ansiedad generalizada.

Además, esta invención proporciona una formulación farmacéutica adaptada para el tratamiento de dolor. Aún además, esta invención proporciona una formulación farmacéutica adaptada para el tratamiento de abuso de sustancias.

Los términos químicos generales usados en las fórmulas anteriores y a través de la especificación tienen sus significados usuales. Por ejemplo, el término "alquilo -C1-C3" es un grupo alquilo -C1-C3 y se refiere a metilo, etilo, propilo, e /so-propilo. El término "alcoxi -C1-C3" es up grupo alquilo C -C3 unido a un átomo de oxígeno y se refiere a metoxi, etoxi, propoxi, e /'so-propoxi.

Los términos "grupo protector de nitrógeno" o "grupo protector de amino" y "grupo protector de oxígeno" o "grupo protector de carboxilo" son tomados por significar una porción que es estable a condiciones de reacción proyectadas y aún puede ser selectivamente removida por reactivos y condiciones de reacción compatibles con el ácido o amina regenerados. Tales grupos son bien conocidos por el experto en la técnica y !son descritos en la literatura. Véase, por ejemplo, Greene y Wuts, Prptective Groups in Organic Synthesis, Cuarta edición, John Wiley & Sons, Inc., (2007). t ¡ El experto en la técnica apreciará que los compuestos de la invención pueden existir en formas tautoméricas, como se representa por ejemplo en (1), abajo. Cuando cualquier referencia en esta solicitud a uno o más tautómeros específicos de los compuestos de la invención se da, se entiende que abarca tanto formas tautoméricas como todas las mezclas de los mismos. (1) i 1 El experto en la técnica apreciará que los compuestos de la invención están comprendidos de un núcleo que contiene al menos cinco centros quirales: (2) ] Los compuestos con la configuración absoluta en los átomos etiquetados 2 hasta 5, como se ilustra en (2) anterior, son compuestos preferidos de la invención. En el átomo etiquetado 1, la configuración-R es definida cuando el átomo de azufre está unido al sistema de anillo biciclo[3.1.0]hexano en la posición hacia abajo con relación a¡ la posición plana del anillo como se indica por una unión punteada. Contrariamente, la configuración-S es definida cuando el átomo de azufre está unido al sistema de anillo biciclo[3.1.OJhexano en la posición hacia arriba con relación a la posición plana del anillo como se indica por la unión de cuña sólida.

Adicionalmente, el experto en la técnica apreciará que centros quirales adicionales pueden ser creados en los compuestos de la invención por la selección de ciertas variables. En tal caso, la presente invención contempla todos los enantiomeros o diastereómeros individuales, así como también mezclas de los enantiomeros y diastereómeros de tales I compuestos que incluyen racematos.

[ El experto en la técnica también apreciará que las designaciones (R) o (S) de Cahn-Ingold-Prelog para todos los centros quirales variarán dependiendo de los patrones de sustitución del compuesto particular. Los enantiomeros o diastereómeros únicos' pueden ser preparados comenzando con reactivos quirales o por técnicas sintéticas estereoselectivas o estereoespecíficas. Alternativamente, los enantiomeros o diastereómeros únicos pueden ser aislados a partir de mezclas por técnicas de cristalización o cromatográficas quirales estándares en cualquier punto conveniente en la síntesis de compuestos de la invención. Los enantiomeros y diastereómeros únicos de compuestos de la invención son una modalidad preferida de la invención.

Los compuestos de la presente invención son capaces de reacción, por ejemplo, con un número de ácidos orgánicos e inorgánicos para formar sales de adición de ácido o sales de adición básica farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables y metodología común para prepararlas son bien conocidas en la técnica.

Véase, por ejemplo, P. Stahl, et al. Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, (VCHA/Wiley-VCH, 2002); S.M. Berge, et ai., "Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 66, No. 1, Enero 1977. Sales farmacéuticamente aceptables preferidas son aquellas formadas con ácido clorhídrico.

Aunque todos los compuestos de la invención son útiles como agonistas de mGlu2, ciertas clases de compuestos son preferidos. Los siguientes párrafos describen tales clases preferidas: R2 es hidrógeno; 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo opcionalmente sustituido c uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; hidrógeno, 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo opcionalme sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; es bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -C o -OCH3; es hidrógeno; 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R3 es bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R3 es hidrógeno, 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R4 es hidrógeno; R4 es (2S)-2-aminopropanoilo, (2S)-2-amino-4-metilsulfanil-butanoilo, (2S)-2-amino-4-metil-pentanoilo, o 2-aminoacetilo; R5 es alquilo Ci-C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; El compuesto de la invención es una sal farmacéuticamente aceptable; El compuesto de la invención es la sal de clorhidrato.

Una modalidad preferida se refiere a compuestos de la presente invención en donde en donde hidrógeno, 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo, en donde bencilo es opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, alquilo -C^-C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, o alcoxi -C!-Cs; R3 es t hidrógeno, 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo, en donde bencilo es opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, alquilo -C1-C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, o alcoxi -Ci-C3; R4 es hidrógeno, (2S)-2-aminopropanoilo, (2S)-2-amino-4-metilsulfanil-butanoilo, (2S)-2-amino-4-metil-pentanoilo, o 2-aminoacetilo; R5 es alquilo -C1-C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; siempre que cuando R2 y/o R3 no son hidrógeno entonces R4 es hidrógeno; siempre que cuando R4 no es hidrógeno entonces R2 y/o R3 son hidrógeno; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

Otra modalidad preferida se refiere a compuestos de la presente invención en donde R1 es ; R2 es hidrógeno, 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R3 es hidrógeno, 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R4 es hidrógeno, (2S)-2-aminopropanoilo, (2S)-2-am¡no-4-met¡lsulfan¡ l-butano ¡lo, (2S)-2-amino-4-metil-pentanoilo, o 2-áminoacetilo; R5 es alquilo -Ci-C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; siempre que cuando R2 y/o R3 no son hidrógeno entonces R4 es hidrógeno; siempre que cuando R4 no es hidrógeno entonces R2 y/o R3 son hidrógeno; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

Una modalidad preferida adicional se refiere a compuestos de la presente invención en donde R1 es ; R2 es hidrógeno, 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R3 es hidrógeno, 2,2-dimetil- propioniloximetilo, o bencMo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R4 es hidrógeno, (2S)-2-aminopropanoilo, (2S)-2-amino-4-metilsulfanil-butano¡lo, (2S)-2-amino-4-metil-pentanoilo, o 2-aminoacetilo; R5 es alquilo -CrC3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; siempre que cuando R2 y/o R3 no son hidrógeno entonces R4 es hidrógeno; siempre que cuando R4 no es hidrógeno entonces R2 y/o R3 son hidrógeno; siempre que R5 puede ser hidrógeno cuando el átomo de azufre está unido al sistema de anillo biciclo[3. 1 .0]hexano en la configuración S; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

Otra modalidad preferida se refiere a compuestos de la presente invención en donde R es hidrógeno o bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R3 es hidrógeno o bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R4 es hidrógeno, (2S)-2-aminopropanoilo, (2S)-2-amino-4-metilsulfanil-butanoilo, (2S)-2-amino-4-métil-pentanoilo, o 2-aminoacetilo; R5 es alquilo Ci-C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; siempre que cuando R2 y/o R3 no son hidrógeno entonces R4 es hidrógeno; siempre que cuándo R4 no es hidrógeno entonces R2 y/o R3 son hidrógeno; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

Una modalidad preferida adicional se refiere a compuestos de la presente invención en donde R es o ; R2 es hidrógeno o bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R3 es hidrógeno o bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R4 es hidrógeno, (2S)-2-arjiinopropanoilo, (2S)-2-amino-4-metilsulfanil-butanoilo, (2S)-2-amino-4-metil-pentanoilo, o 2-am¡noacetilo; R5 es alquilo C -C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; siempre que cuando R2 y/o R3 no son hidrógeno entonces R4 es hidrógeno; siempre que cuando R4 no es hidrógeno entonces R2 y/o R3 son hidrógeno; siempre que R5 puede ser hidrógeno cuando el átomo de azufre está unido al sistema dé anillo biciclo[3.1.0]hexano en la configuración S; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. t Una modalidad preferida se refiere a compuestos de la presente invención en donde R1 es o ; R2 es 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R3 es 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R4 es hidrógeno; R5 es alquilo C -C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. ' Otra modalidad preferida se refiere a compuestos presente invención en donde R R es 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R3 es 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R4 es hidrógeno; R5 es alquilo Ci-C3 opcionalmente sustituido con 1 a ' 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; siempre que R5 puede ser hidrógeno cuando el átomo de azufre está unido al sistema de anillo biciclo[3.1 0]hexano en la configuración S; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

Una modalidad preferida adicional se refiere a compuestos de la; presente invención en donde R1 es bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -QCH3; R3 es bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R4 es hidrógeno; R5 es alquilo Ci-C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

Una modalidad preferida adicional se refiere a compuestos de la presente invención en donde R es es bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R3 es bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; R4 es hidrógeno; R5 es alquilo C -C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; siempre que R5 puede ser hidrógeno cuando el átomo de azufre está unido al sistema de anillo biciclo[3.1.0]hexano en la configuración S; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

Otra modalidad preferida adicional se refiere a compuestos de la ; R2 es hidrógeno; R3 es hidrógeno; R4 es (2S)-2-aminopropanoilo, (2S)-2-amino-4-metilsulfanil-butanoilo, (2S)-2-amino-4-metil-pentanoilo, o 2- i aminoacetilo; R5 es alquilo C^-Ca opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

Una modalidad preferida además adicional se refiere a compuestos de la presente invención en donde R1 R2 es hidrógeno; R3 es hidrógeno; R4 es (2S)-2-aminopropanoilo, (2S)-2-amino-4-metilsulfanil-butanoilo, (2S)-2-amino-4-metil-pentanoilo, o 2-aminoacetilo; R5 es alquilo C!-C3 opcionalmente sustitu ido con 1 a 3 átomos de flúor, -N H2, o ciclopropilo; siempre q ue R5 puede ser hidrógeno cuando el átomo de azufre está unido al sistema de anillo biciclo[3. 1 .0]hexano en la config uración S ; o una sal del m ismo farmacéuticamente aceptable.

Una modalidad especialmente preferida se refiere a com puestos de la presente invención en donde R2 es hidrógeno; R3 es hidrógeno; R4 es hidrógeno; R5 es alquilo C^ -C^ opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable .

U na modalidad especialmente preferida se refiere a compuestos de la presente invención en donde R es o es hidrógeno; R3 es hidrógeno; R4 es hidrógeno; R5 es alquilo C -C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; siempre que R5 puede ser hidrógeno cuando el átomo de azufre está unido al sistema de ani llo bíciclo[3. 1 .0]hexano en la configuración S ; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

Otra modal idad especialmente preferida se refiere a compuestos de la presente invención en donde R es ; Rz es hidrógeno; R3 es hidrógeno, R4 es hidrógeno; R5 es alquilo C,-C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

Otra modalidad especialmente preferida se refiere a compuestos de la presente invención en donde R1 es R2 es hidrógeno; R3 es hidrógeno, R4 es hidrógeno; R5 es alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; siempre que Rs puede ser hidrógeno cuando el átomo de azufre está unido al, sistema de anillo biciclo[3.1.Ojhexano en la configuración S; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

Los compuestos de la presente invención, o sales de los mismos, pueden ser preparados por una variedad de procedimientos conocidos en la técnica, algunos de los cuales son ilustrados en los Esquemas de reacción, Preparaciones y Ejemplos siguientes. Las etapas sintéticas específicas para cada una de las rutas descritas pueden ser combinadas en diferentes formas, o en conjunto con las etapas a partir de diferentes esquemas de reacción, para preparar compuestos de la invención, o sales de los mismos. Los productos de cada etapa en los esquemas de reacción siguientes pueden ser recuperados por métodos convencionales, que incluyen extracción, evaporación, precipitación, cromatografía, filtración, trituración, y cristalización.

Ciertos centros estereoquímicos se han dejado sin especificar y ciertos sustituyentes han sido eliminados en los siguientes esquemas de reacción con fines de claridad y no están propuestos para limitar las enseñanzas de los esquemas de reacción en cualquier forma. Además, isómeros, enantiómeros o diastereómeros individuales pueden ser separados en cualquier punto conveniente en la síntesis de compuestos de la invención por métodos tales como cromatografía quiral. Adicionalmente, los intermediarios descritos en los siguientes esquemas de reacción contienen un número de grupos protectores para grupos carboxilo y amino. El grupo protector variable puede ser el mismo o diferente en cada caso dependiendo de las condiciones de reacción particulares y las transformaciones particulares a ser realizadas. Las condiciones de protección y desprotección son bien conocidas por el experto en la técnica y se describen en la literatura. Véase por ejemplo, Greene y Wuts, Prptective Groups in Organic Synthesis, supra.

Las abreviaturas usadas en la presente son definidas de conformidad con el Aldrichimica Acta, Vol. 17, No. 1, 1984. Otras abreviaturas son definidas como sigue: "tosilato" es p-toluensulfonilo; "mesilato" es metansulfonilo; "DIPEA" se refiere a diisopropiletilamina; "DIC" se refiere a diisopropilcarbodiimida; "HATU" se refiere a hexafluorofosfato metanaminio de 2-(1 /-/-7-azabenzotriazol-1 -yl)--1 , 1 ,3,3-tetrametil uronio; "HBTU" se refiere a hexafluorofosfato de O-benzotriazol-?/,?/,?/',?/'-tetrametil-uronio; "HOAt" se refiere a 1-hidroxi-7-azábenzotriazol; "PyBOP" se refiere a hexafluorofosfato de benzotriazol-1 - ilóxitripirrolidin-fosfonio; "PyBrop" se refiere a hexafluorofosfato de bromo-tris-pirrolidin fosfonio; "DMAP" se refiere a 4-dimetilaminopiridina; "THF" se refiere a tetrahidrofurano; "SCX" es intercambio catiónico fuerte; "Prep No" es el Número de Preparación; "Ej. No" es el Número de Ejemplo.

En los esquemas de reacción siguientes, todos los sustituyentes a menos que se indique de otro modo, son como se definen previamente. Los reactivos y materiales de partida son en general fácilmente disponibles para uno de habilidad ordinaria en la técnica. Otros pueden ser elaborados por técnicas estándares de química orgánica y I heterociclica los cuales son análogos a la síntesis de compuestos estructuralmente similares conocidos y los procedimientos descritos en las Preparaciones y Ejemplos los cuales siguen que incluyen algunos procedimientos novedosos.

Esquema de reacción I El Esquema de reacción I ilustra la síntesis general de un compuesto de fórmula 5. "PG1" es un grupo protector desarrollado por el grupo carboxilo, tales como los ésteres. "PG2" es un grupo protector desarrollado por el grupo amino, tales como los carbamatos y amidas. Tales grupos protectores son bien conocidos y apreciados en la técnica. "LG" es un grupo saliente, tal como tosilato o mesilato. De este modo, "LG- haluro" es un reactivo, tal como cloruro de para-toluensulfonilo o cloruro demetansulfonilo.

Un compuesto de fórmula 1 reacciona con un compuesto de fórmula 2 en la presencia de una base apropiada, tal como dímetilaminopiridina o trietilamina, en un solvente apropiado, tal como diclorometano, para proporcionar un compuesto de fórmula 3. Un compuesto de fórmula 5 resulta de la reacción de un compuesto dé fórmula 3 con un compuesto apropiado de fórmula 4 en la presencia de una base adecuada, tal como carbonato de potasio o carbonato de sodio, en un solvente apropiado, tal como dimetilformamida, seguido por condiciones para facilitar la remoción de los grupos protectores, los cuales son bien conocidos y apreciados en la técnica. Un compuesto de fórmula 5 puede ser aislado como una base libre o una sal apropiada, tal como la sal de clorhidrato.

Esquema de reacción 1 6 7 El Esquema de reacción II ilustra la síntesis general de un compuesto de fórmula 7. "PG1" y "PG2" son los mismos como se define en el Esquema de reacción I, anterior.

I Un compuesto de fórmula 1 se hace reaccionar con trifenilfosfina y Br2 en un solvente adecuado, tal como tolueno o tetrahidrofurano, para proporcionar el compuesto de bromo resultante de fórmula 6. Un compuesto de fórmula 7 resulta de la reacción de un compuesto de fórmula 6 con un compuesto apropiado de fórmula 4 en la presencia de una base adecuada, tal como carbonato de potasio, en un solvente apropiado, tal como dimetilformamida, seguido por condiciones para facilitar la remoción de los grupos protectores, los cuales son bien conocidos y apreciados en la técnica. Un compuesto de fórmula 7 puede ser aislado como una base libre o una sal apropiada, tal como ja sal de clorhidrato.

Esquema de reacción III El Esquema de reacción III ilustra la síntesis general para generar un compuesto de fórmula 11. "PG " y "PG2" son los mismos como se define en el Esquema de reacción I, anterior. R4 no es hidrógeno.

Un compuesto de fórmula 8 es sometido a las condiciones de desprotección apropiadas para efectuar la remoción de "PG2" para proporcionar un compuesto de fórmula 9. Tales condiciones son bien conocidas y apreciadas en la técnica. Un compuesto de fórmula 11 resulta de la reacción de un compuesto de fórmula 9 con un compuesto de fórmula 10 bajo condiciones de acoplamiento apropiadas seguidas por condiciones para facilitar la remoción de los grupos protectores, los cuales son bien conocidos y apreciados en la técnica. Un experto en la técnica reconocerá que existen un números de métodos y reactivos para formación de amida que resulta de la reacción de ácidos carboxílicos y aminas. Por ejemplo, las condiciones de acoplamiento apropiadas incluyen la reacción de un compuesto apropiado de fórmula 9 con un ácido apropiado de fórmula 10 en la presencia de un reactivo de acoplamiento y una base de amina, tal como DIPEA o trietilamina. Los reactivos de acoplamiento incluyen carbodiimidas, tales como DCC, DIC, EDCI, y reactivos de acoplamiento aromáticos, tales como HOBt y HOAt. Adicionalmente, sales de uronio o fo'sfonio de aniones no nucleofílicos, tales como HBTU, HATU, PyBOP, y PyBrOP pueden ser usados en lugar de los reactivos de acoplamiento más tradicionales. Aditivos tales como DMAP pueden ser usados para mejorar las reacciones. Un compuesto de fórmula 11 puede ser aislado como una base libre o una sal apropiada, tal como la sal de clorhidrato.

Esquema de reacción IV El Esquema de reacción IV ilustra la síntesis general para generar un compuesto de fórmula 14. "PG1" y PG2" son definidos como se describe en el Esquema de reacción I anterior.

Un compuesto de fórmula 12 se obtiene sometiendo un compuesto de fórmula 8 a las condiciones de desprotección apropiadas para efectuar la desprotección de los ácidos solamente. Tales condiciones son bien conocidas y apreciadas en la técnica. Un compuesto de fórmula 13 se obtiene por esterificación de las porciones de ácido cárboxílico libres resultantes con R2OH bajo las condiciones apropiadas. Se observa que R2 = R3. El experto en la técnica apreciará que existe un número de métodos y reactivos para efectuar la esterificación de un ácido cárboxílico libre. Por ejemplo, un exceso de uno de los reactivos, tal como el componente alcohol, puede ser agregado a la mezcla de reacción. Alternativamente, el agua resultante puede ser removida de la reacción por destilación o agente deshidratante. Finalmente, el compuesto resultante de fórmula 13 es sometido a condiciones apropiadas para efectuar la i désprotección de la amina. Tales condiciones son bien conocidas y apreciadas en la técnica. Un compuesto de fórmula 14 puede ser aislado como una base libre o una sal apropiada, tal como la sal de clorhidrato.

Alternativamente, un di-éster en donde R2 y R3 son diferentes pueden lograrse por protección y desprotección selectiva y en forma de pasos de un intermediario apropiado, tal como un compuesto de fórmula 7. Tales condiciones son bien conocidas y apreciadas en la técnica. i Como se apreciará fácilmente, compuestos de fórmula 1 pueden ser prontamente preparados por métodos similares a aquellos descritos en la presente y por procedimientos que son bien conocidos y establecidos en la técnica. Como se entenderá fácilmente, las etapas para preparar los compuestos de la presente invención son dependientes del compuesto particular a ser sintetizado, el compuesto de partida, y la labilidad relativa de las porciones sustituidas.

; Preparaciones y Ejemplos Las siguientes preparaciones y ejemplos ilustran adicionalmente la invención.

Los nombres para los compuestos ejemplificados de la presente invención se proporcionan por SYMYX®Draw 3.2 o ACD/Name versión 12.

Preparación 1 ! (1S,2S,4S,5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-4-(p-tolilsulfoniloxi)biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de diter-butilo Se cargó un matraz de fondo redondo 2 cuellos bajo atmósfera de nitrógeno con (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-4-h¡drox¡-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de diter-butilo (20.7 g, 0.5 mol, véase WO03/104217/A2 para detalles de síntesis), 4-dimetilaminopiridina (10.4 g, 0.85 mol), trietilamina (6.98 mL, 0.5 mmol) y cloruro de p-toluensulfonilo (10.6 g, 0.55 mol) en diclorometano (200 mL), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se agregó solución de sulfato hidrógeno de potasio 1N (200 mL), agua (100 mL) y se extrajo la capa orgánica. Se lavó con agua (200 mL), salmuera (200 mL), se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó a sequedad. Se agregó tetrahidrofurano (30 ml_) después heptanos (90 ml_). La mezcla sé calentó a 60°C y lentamente se agregó más heptanos (200 ml_). La mezcla se enfrió a temperatura ambiente. Lo sólido se filtró y se secó bajó presión reducida para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (24.6 g, 87%). MS (m/z): 590 (M + 23).

Preparación 2 (1R,2S,4R,5R,6R)-4-bromo-2-(ter-bútoxicarbonilamino)biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de diter-butilo Se disolvió trifenilfosfina (41.97 g, 158.4 mmol) en tolueno fresco (660 mL) y se agregó bromo (8.14 mL, 158.4 mmol) hasta que persiste un color amarillo. Se agregó por goteo una solución de (1S,2S,4S,5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-4-hidroxi-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de diter-butilo (32.75 g, 79.2 mmol) en tolueno (176 mL) y piridina anhidra (528 mL) durante 45 min. La reacción se agitó a 75°C durante la noche. Se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo, se filtró y se concentró a sequedad. Lo crudo se sometió a suspensión en metil ter-butil éter, se filtró para remover los sólidos y lo filtrado se concentró a sequedad. Lo crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice (750 g) eluyendo con hexano:acetato de etilo (0:100 a 80:20) para obtener el compuesto del título como un sólido blanco (29.52 g, 78 %). MS (miz): 498, 500 (M+23).

Preparación 3 : (1R,2S,4S,5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-4-(1H-1,2,4-triazol-3-ilsulf añil) biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de diter-butilo Se agregó a una solución de (1 R,2S,4R,5R,6R)-4-bromo-2-(ter-butoxicarbonilamino)biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de diter-butilo (2 g, 4.20 mmol) en dimetilformamida (10 ml_), 1 H-1 ,2,4-triazol-3-tiol (525 mg, 5.04 mmol) y carbonato de potasio (1.16 g, 8.4 mmol). La mezcla se agitó a 80°C durante la noche. Se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con acetato de etilo, se lavó con ácido cítrico al 10% y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a sequedad. Se i purificó por cromatografía en gel de sílice (columna de sílice 80 g) eluyendo con hexano:acetato de etilo (80:20 a 0:100) para obtener el compuesto del título (1,64g, 78%). MS (m/z): 497 (M + 1).

Los siguientes compuestos en la Tabla 1 son preparados a partir de la Preparación 1 o Preparación 2 siguiendo esencialmente el método de la preparación 3.

Tabla 1 t La base usada en la reacción es Na2C03. 1 2 Se calentó la reacción vía microondas.

Preparación 13 i i (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-4-[[5- (trifluorometil)-1H-1 ,2,4-triazol-3-il]sulfanil]biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de diter-butilo Se purgó con nitrógeno una solución de (1 R, 2S,4R, 5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-4-(2H-triazol-4-ilsulfanil)biciclo[3.1 0]hexan-2,6-dicarboxilato de diter-butilo ( 1 1 .8 mg , 20.77 mmol) y 1 H-mercapto-(trifluorometil)-4H-1 ,2,4-triazol, sal de sodio (7.7 g , 38.5 mmol) en di'metilformamida (1 00 mL) y se agitó a 70°C durante la noche. Se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. Se lavó la capa orgánica con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró a sequedad. Se purificó por cromatografía en i columna instantánea eluyendo con isohexano: acetato de etilo (95:5 a i 60:40) para proporcionar el compuesto del título ( 10.9 g , 93.5%). MS (m/z): 587 (M+23).

Los siguientes compuestos en la Tabla 2 son preparados esencialmente siguiendo el método de la preparación 1 3.

Tabla 2 2 Se calentó la reacción vía microondas.

Preparación 18 clorhidrato de (1 R,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-(1 H-[1 ,2,4]triazol-3-ilsulfan¡l)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de dietilo Se cargó a matraz de fondo redondo con (1 R,2S,4S,5R,6R)-2-(tér-butoxicarbonilamino)-4-(4H-1 ,2,4-triazol-3- ' ¡lsulfanil)b¡ciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarbox¡lato de diter-butilo (3.7 g, 7.45 mmol) y etanol (50 mL). Se agregó lentamente cloruro de tionilo (2.71 mL, 37.25 mmol) (reacción exotérmica a 45°C) y la mezcla se agitó a 80 °C durante la noche. Se removió el solvente bajo vacío para dar el compuesto del título como un sólido blanco (2.8 g, 99%). MS (m/z): 341 (M + 1).

Los siguientes compuestos en la Tabla 3 son preparados esencialmente siguiendo el método de la preparación 18.

: Tabla 3 Datos Prep Nombre Quím ico Estructura Físicos No.

(MS(m/z) biciclo[3.1 .0]hexan-2,6- dicarboxilato de dietilo clorhidrato de (1 R,2S,4R, 5R,6R)-2- Amino-4-(5- trifluorometil-1 H- 409 20 [1 ,2,4]triazol-3- (M+ 1 ) ilsulfanil)- HCI biciclo[3.1 .0]hexan-2 ,6- dicarboxilato de dietilo Preparación 21 (1 R,2S,4S,5R,6R)-2-[[-2-(ter-butoxicarbonilamino)acetil]amino]-4-(4H- 1 ,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1 .0]hexan-2,6-dicarboxilato de dietilo A clorhidrato de ( 1 R,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-(4H-1 , 2,4-triazol- 3Hlsulfanil)biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de dietilo (0.869 g, 2.31 mmol) se agregó tetrahidrofurano (11.5 mL) y la mezcla se enfrió a 0-5°C con un baño de agua helada. Se agregó 2-cloro-4,6-dimetox¡-1 ,3,5-triazina (404.9 mg, 2.31 mmol) y ácido (2S)-2-(ter-butoxicarbonilamino)acético (0.404 g, 2.31 mmol). Lentamente se agregó N-metilmorfolina (0.55 mL, 5.07 mmol) y se agitó por 2 horas. Se filtró la mezcla y se lavó lo sólido blanco con tetrahidrofurano. Se desechó lo sólido y la solución se concentró a sequedad. Se purificó por cartucho HLB OASIS® (se cargó en DMSO y se eluyó con gradiente de solución amortiguadora de bicarbonato dé amonio pH=9/acetonitrilo). El compuesto deseado se eluyó con 3:1 (bicarbonato de amonio/acetonitrilo). El solvente se removió. El residuo se disolvió en diclorometano y se lavó con agua. Se desechó la fase acuosa. Se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a sequedad para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (440 mg, 38%). MS (m/z): 498 (M + 1), 520 (M+23).

Preparación 22 (1R,2S,4S,5R,6R)-2-((S)-2-ter-butoxicarbonilamino-própionilamino)-4-(4H-[1 ,2,4]triazol-3-ilsulfanil)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de dietilo j Se combinó clorhidrato de (1 R,2S,4S, 5R,6R)-2-amino-4-(4H- 1 ,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1 .0]hexan-2,6-dicarboxilato de dietilo (354 mg , 0. 894 mmol) , ácido (2S)-2-(ter-butoxicarbonilamino)propanoico (257 mg , 1 .34 mmol), 4-dimetilaminopiridina (1 0.92 mg , 89 pinol), hidrato de 1 -hidroxibenzotriazol (21 9 mg , 1 .41 mmol) y clorhidrato de 1 -(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (208 mg, 1 .34 mmol) en diclorometano (9 m l_) y se agregó trietilamina (373 µ?_, 2.68 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche bajo una atmósfera de nitrógeno. Se lavó con solución ácido cítrico al 10%, solución de carbonato hidrógeno de sodio saturada y salmuera. Se desecharon las capas acuosas, se filtró la capa orgánica a través de un cartucho de tierra diatomácea y el solvente se removió bajo vacío. Se purificó por cromatografía instantánea eluyendo con diclorometano: metanol (1 ^15%) para proporcionar el compuesto del título (412.5mg, 90.2%). MS (m/z): 552 (M + 1 ), 534 (M+23).

Los siguientes compuestos en la Tabla 4 son preparados esencialmente siguiendo el método de la preparación 22.

Tabla 4 Preparación 25 (1R,2S,4R,5R,6R)-2-[2-((S)-ter-butoxicarbonilamino)-propionilamino]-4-(5-trifluorometil-1 H-[1 ,2,4]triazol-3-ilsulfan¡l)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de dietilo Se combinó clorhidrato de (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-amino-4-(5-trifluoromet¡l-1 H-[1 ,2,4]triazol-3-ilsulfan¡l)-b¡ciclo[3.1.0]hexan-2,6- ; dicarboxilato de dietilo (657 mg, 1.48 mmol), hexafluorofosfato de o-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (730 mg, 1.92mmol) y ácido (2S)-2-(ter-butoxicarbonilamino)propanoico (363 mg, 1.92 mmol) en dimetilformamida anhidra (12 mL) a temperatura ambiente, se agregó diisopropiletilamina (3.0 mL, 17.20mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche bajo una atmósfera de nitrógeno. Se diluyó la mezcla de reacción con acetato de etilo (60 mL) y se lavó con solución de carbonato hidrógeno de sodio saturada (30 mL). Se extrajo la fase acuosa con acetato de etilo. Se combinaron las fases orgánicas, se lavaron con agua (30 mL) y salmuera (30 mL). Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y el solvente se removió bajo vacío. Se purificó por cromatografía en gel de sílice (110 g columna de sílice) eluyendo con isohexano: acetato de etilo (95:5 a 10:90) para i I proporcionar el compuesto del título (321 mg , 38%). MS (m/z): 602 (M+23).

Los siguientes compuestos en la Tabla 5 son preparados esencialmente siguiendo el método de la preparación 25.

Tabla 5 I Preparación 31 ( 1 R,2S,4S, 5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-4-( 1 H-1 ,2,4-trjazol-3-ilsulf anil)biciclo[3.1 .0]hexan-2,6-dicarboxilato de dietilo A una suspensión de clorhidrato de (1 R,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-( 1 H-[1 ,2,4]triazol-3-ilsulfanil)-biciclo[3. 1 0]hexan-2,6-dicarboxilato dé dietilo (2.04 g, 5.41 mmol) en 1 ,4-dioxano (27.07 ml_, 317.02 mmol) se agregó diter-butildicarbonato (2.39 g , 10.83 mmol) y carbonato dé potasio ( V.89 g, 1 3.53 mmol). Diez minutos más tarde, se agregó agua (27.07 ml_, 1 .50 mol) , y se agitó a temperatura ambiente por 2 d ías. Se removió dióxano y se diluyó con acetato de etilo. Se separaron las capas y se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El compuesto del título se obtuvo como un sólido blanco (1 .97g, 83%). MS (m/z): 441 (M + 1 ).

Preparación 32 ácido (1R,2S,4S,5R,6R)-2-[[-2-(ter-butoxicarbonilamino)acetil]amino]-4-(4H-1 ,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxílico Se disolvió (1 R,2S,4S,5R,6R)-2-[[-2-(ter-butoxicarbonilamino)acetil]amino]-4-(4H-1 ,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de dietilo (0.420 g, 0.84 mmol) en tetrahidrofurano (7 mL) después se agregó hidróxido de litio 2.5M (6.7 mL, 16.88 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente por 3.5 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con agua y se lavó con acetato de' etilo. Se desechó la capa orgánica. Se ajustó la fase acuosa a pH=2 con ácido clorhídrico 1N y se extrajo con acetato de etilo. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a sequedad para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (250 mg, 66,%). MS (m/z): 442 (M+1), 464 (M + 23).

' Los siguientes compuestos en la Tabla 6 son preparados esencialmente siguiendo el método de la preparación 32.

Tabla 6 3 La base usada en la reacción es LiOH 2.0M.

Preparación 42 ácido (1R,2S,4S,5R,6R)-2-ter-Butoxicarbonilamino-4-(1H- [1 ,2,4]triazol-3-¡lsulfanil)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxílico A (1 R,2S,4S,5R,6R)-2-ter-butoxicarbonilamino-4-(1 H- [1 ,2,4]triazol-3-ilsulfanil)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de dietilo (1.9 g, 4.31 mmol) en tetrahidrofurano (20 ml_) se agregó solución hidróxido de litio acuosa 2.5M (20.70 mL, 51.76 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se evaporó el tetrahidrofurano. Se diluyó con agua y se lavó con acetato de etilo. Se desechó la capa orgánica. Se ajustó fase acuosa a pH=2 con ácido clorhídrico 5M y se extrajo con acetato de etilo. Se separaron las capas y se secaron los orgánicos sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró. El compuesto del título se obtuvo como un sólido blanco (1.58g, 95%). MS (m/z): 385 (M + 1).

Preparación 43 ácido (1S,2S,5R,6R)-2-(ter-Butoxicarbonilamino)-4-oxo-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxílico ¡ Se agregó hidróxido de sodio 2.5M ( 1 5.55 mL, 38.88 rrímol) a una solución agitada del (1 S,2S, 5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-4-oxo-biciclo[3. 1 .0]hexan-2,6-dicarboxilato de diter-butilo (2.0 g , 4.86 mmol) en tetrahidrofurano (24.3 mL) y etanol (9.72 mL). Se calentó la mezcla de reacción a 60°C y se mantuvo la agitación durante la; noche. Se continuó el calentamiento por 4 horas después se lavó con acetato de etilo. Se enfrió la fase acuosa en un baño helado y se acidificó a pH=2-3 con solución ácido clorhídrico 1 N . Se extrajo con acetato de etilo (3 veces), se secó lo orgánico en sulfato de sodio, se filtró y se concentró para dar el compuesto del titulo como un sólido anaranjado ( 1 .4 g, 96%). MS (m/z): 322 (M+23).

Preparación 44 I (1 S,2S, 5R,6R)-2-ter-butoxicarbonilamino-4-oxo-biciclo[3.1 .0] hexan-2,6-dicarboxilato de dibencilo Se agregó bromuro de bencilo (8.69 m L, 72.9 mmol) por goteo a una suspensión agitada de ácido ( 1 S,2S, 5R,6R)-2-(ter- butoxicarbonilamino)-4-oxo-biciclo[3.1 .0]hexan-2,6-dicarboxilico (7.27 g , 24.3 mmol) y carbonato de cesio ( 15.83 g , 48.6 mmol) en N, N- dimetilformamida seca (60 mL). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante la noche bajo nitrógeno. Se apagó con agua y se diluyó con acetato de etilo. Se extrajo la fase acuosa con acetato de etilo (3 veces) y se lavaron las capas orgánicas con salmuera y agua. Se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para dar el material crudo como un aceite marrón pálido. Se purificó por cromatografía instantánea eluyendo con acetato de etilo: hexano (20: 80 a 30: 70) para dar e{ compuesto del título como espuma amarilla gomosa (9.1 5 g , 78.5%). MS (m/z): 502 (M + 23) .

Preparación 45 (1 S,2S,4S,5R,6R)-2-ter-butoxicarbonilamino-4-hidrox¡- biciclo[3.1 .0]hexan-2 ,6-dicarboxílato de dibencilo Se agregó solución de L-selectrida 1 M en THF (30 mL, 30 mmol) por goteo a una solución agitada de ( 1 S,2S, 5R,6R)-2-(ter- butoxicarbonilamino)-4-oxo-biciclo[3.1 .0]hexan-2,6-dicarboxilato de bis[(fenil)metil] (9.15 g, 19.08 mmol) en tetrahidrofurano (20 ml_) a -78°C. Se agitó la mezcla anaranjada resultante bajo nitrógeno por 1 hora 45 minutos. Se apagó con una solución saturada de carbonato hidrógeno de sodio a -78°C. Se diluyó con agua y acetato de etilo. Se separaron las capas y se lavó la fase orgánica con salmuera y agua. Se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a sequedad para dar el material crudo como un aceite amarillo pálido. Se purificó el material combinado por cromatografía instantánea eluyendo con acetato de etilo:hexanos (20:80 a 50:50) para dar el producto del título como un isómero único (9.19 g, 100%). MS (miz): 504 (M+23) Preparación 46 (1S,2S,4S,5R,6R)-2-ter-butoxicarbonilamino-4-(toluene-4-sulfoniloxi)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de dibencilo El producto del título se preparó esencialmente de conformidad con el método de la preparación 1 (75% rendimiento). MS (m/z): 658 (M+23).

Preparación 47 (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-ter-butoxicarbonilamino-4-(1H-[1 ,2,3]triazol-4-ilsulfan¡l)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarbox¡lato de dibencilo i Se agregó 1 H-5-Mercapto-1 ,2,3-triazol, dihidrato dé sal de sodio (0.174 g, 1.42 mmol) a una solución agitada de éster dibencílico del ácido (1S,2S,4S,5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-4-(tpsiloxi)biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxílico (0.6 g, 0 943 mmol) y en dimetilformamida anhidra (8 mL) y se calentó a 70 °C durante la noche. Se diluyó la mezcla de reacción con acetato de etilo (60 mL) y se lavó capa orgánica con NaHC03 (30 mL) y salmuera (30 mL), se secó sobre Na2S04 anhidro), se concentró, y se purificó vía cromatografía en gel de sílice (40 g columna de sílice) eluyendo con acetato de etilo al 0-60% en isohexano para dar el compuesto del título como una goma incolora (0.405 g, 76% rendimiento). MS (m/z): 587 (M+23).

Preparación 48 Bis-(4-metoxi-bencil)-(1 R,2S,4S,5R,6R)-2-ter-butoxicarbonilamino-4-(1 H-[1 ,2,4]triazol-3-ilsulfanil)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato Se agitó una suspensión de ácido ( 1 R,2S,4S, 5R,6R)-2-ter-butoxicarbonilamino-4-(1 H-[1 ,2,4]triazol-3-ilsulfanil)-biciclo[3. 1 .0]hexan- i 2,6-dicarboxílico (369 mg , 0.959 mmol), hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1 -il)-N, N , N', N'-tetrametiluronio (0.985 g, 2.59 mmol), j diísopropiletilamina (0.920 mL), en diclorometano (9.60 m l_) por 1 5 min. Después, se agregó bencenmetanol , 4-metoxi (0.365 g , 2.59 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El solvente se removió y se purificó vía cromatografía en gel de sílice (12 g cartucho en gel de sílice) eluyendo con gradiente de diclorometano/metanol para proporcionar el compuesto del título (240 mg , 40%) . MS (m/z): 625 (M + 1 ).

El siguiente compuesto en la Tabla 7 se preparó esencialmente siguiendo el método de la preparación 48.

Tabla 7 Preparación 50 (1 R,2S,4S, 5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-4-( 1 H-1 ,2,4- triázol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1 .0]hexan-2,6-dicarboxilato de Bis(2 dimetilpropanoiloximetil) Se agregó bicarbonato de sodio (0.393 g, 4.68 mmol); yoduro de sodio (0.351 g, 2.34 mmol) y éster 2,2-dimetil-clorometilo del ácido propanoico (352.60 mg, 2.34 mmol) a una solución de ácido (ÍR,2S,4S,5Rl6R)-2-ter-butoxicarbonilamino-4-(1H-[1 ,2,4]triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxílico (0.300 g, 0.780 mmol) en 3 ml_ de dimetilformamida seca. Se agitó la mezcla heterogénea resultante por 18 h. El solvente se removió bajo vacío, se agregó agua y se extrajo con acetato de etilo. Se separaron las capas y se secaron los orgánicos sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. Se purificó el producto crudo a través de un cartucho de fase normal Phenomenex STRATA™ 5 g eluyendo con una mezcla de 50% hexano:acetato de etilo I para proporcionar el compuesto del título (96 mg, 20%). MS (m/z): 613 (M+1).

Preparación 51 clorhidrato de 2-ter-Butil-6-etil(1 R,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4- (1H-[1 ,2,4]triazol-3-ilsulfanil)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato Se agregó cloruro de acetilo (1.12 ml_, 15.71 mmol) por goteo a una solución de (1 R,2S,4S,5R,6R)-2-(ter-butoxicarbon¡lamino)-4-(1 H-1 ,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexan-4,6-dicarboxilato de diter-butilo (1.3 g, 2.62 mmol) en etanol (9.14 ml_). Se calentó la mezcla en un tubo sellado a 50°C por 2 horas. Se removió el solvente para proporcionar el compuesto del título (950 mg , 90%) . MS (m/z): 369 (M + 1 ).

Preparación 52 clorhidrato del ácido ( 1 R,2S,4S , 5R,6R)-4-amino-6- etoxicarbonil-2-( 1 H- 1 ,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1 .0]hexan-4- cárboxílico Se disolvió clorhidrato de 2-ter-butil-6-etil( 1 R,2S,4S,5R,6R)-2- amino-4-(1 H-[1 ,2,4]triazol-3-ilsulfanil)-biciclo[3.1 .0]hexan-2,6-dicarboxilato (946 mg , 2.34 mmol) en una solución saturada de gas de cloruro de hidrógeno en acetato de etilo (8 mL) y se agitó a temperatura ambiente por 25 horas. Se removió solvente para proporcionar el compuesto del título (831 mg , 101 %) . MS (m/z): 313 (M + 1 ).

Preparación 53 ácido (1 R,2S,4S,5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-6- etoxicarbonil-4-(1 H-1 ,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3. 1 .0]hexan-2- carboxílico Se agregó diter-butildicarbonato (935.39 mg, 4.24 mmol) y carbonato de potasio (888.5 mg, 6.36 mmol) a una suspensión de clorhidrato del ácido (1 R,2S,4S,5R,6R)-4-amino-6-etoxicarbonil-2-(1 H- I 1 ,¡2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexan-4-carboxílico (740 mg, 2.12 I mmol) en 1,4-dioxano (10.61 mL). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente. Diez minutos más tarde, se agregó agua (10.61 mL) y se agitó a temperatura ambiente por 2 días. Se removió el dioxano y se diluyó con acetato de etilo, se ajustó pH ácido con HCI 5M. Se separaron las capas y se secaron los orgánicos sobre sulfato de magnesio, se filtraron y sé concentraron para proporcionar el compuesto del título (270 mg, 31%). MS i (m/z): 413 (M + 1).

Preparación 54 (1 R,2S,4S,5R,6R)-2-ter-butoxicarbonilamino-4-(1 H-[1 ,,2,4]triazol-3-ilsulfanil)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarbox¡lato de 2-Bencil-6-etilo Se agitó una suspensión de ácido (1 R,2S,4S,5R,6R)-2-(ter-bütoxicarbonilamino)-6-etoxicarbonil-4-(1 H-1 ,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexan-2-carboxílico (270 mg, 0.654 mmol), Hexafluorofosfato de 0-(7-Azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (0.373 g, 0.982 mmol), diisopropiletilamina (0.342 mL, 1.96 mmol), en diclorometano (6.55 mL) por 15 minutos a temperatura ambiente y se agregó alcohol bencílico (0.101 mL, 0.982 mmol). Se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El solvente se removió y se purificó primero vía cromatografía en columna de sílice (4 g cartucho en gel de sílice, eluyente gradiente diclorometano/metanol (el compuesto deseado se eluyó con 6% de metanol), y segundo vía cartucho HLB Waters OASIS® eluyendo con 3:1 acetonitrilo/agua. El compuesto del título se obtuvo como un sólido blanco (100 mg, 30%). MS (m/z): 503 (M+1).

Ejemplo 1 clorhidrato del ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-Amino-4-(2H-[1 ,2,3]triazol-4-ilsulfanil)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxílico Se agregó dibromuro de zinc (0.88 g, 3.91 mmol) a una solución agitada de (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-ter-butoxicarbonilamino-4-(2H- [1,2,3]triazol-4-ilsulfanil)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de diter- i butilo (194 mg, 0.39 mmol) en diclorometano (30 ml_). Se agitó durante la noche a 50 °C. Se agregó más dibromuro de zinc (0.44 g, 1.95 mmol) y se I continuo la agitación a 50°C hasta que el material de partida se consumió completamente. Se evaporó el solvente y se agitó el residuo en ácido clorhídrico acuoso 2M (5ml_) a 50 °C hasta que únicamente está presente el producto deseado. Se enfrió la mezcla de reacción y se purificó el residuo por cromatografía de intercambio catiónico (DOWEX® 50WX8-100). El compuesto se dejó fluir a través de la columna a una velocidad de goteo de aproximadamente 1 gota cada 1-2 segundos. Después que el volumen de carga inicial ha bajado a la superficie de resina, se enjuagó con agua (5 i a O ml_) y se repitió 3 veces. Se monitoreó el pH del efluente y el enjuague se continuo con agua hasta que se completó la aplicación (pH ciclo observado:efluente de la columna inicialmente a pH=7 después goteo a pH = 1 y regresó nuevamente a pH=7). Se lavó la columna con al menos un volumen de columna cada uno de agua, agua:tetrahidrofurano (1:1) después agua. Se desplazó el producto de la resina con piridina al 10%:agua. Se continuó la elución con piridina 10%:agua hasta que no se detectó producto adicional. Se concentraron las fracciones que contienen el producto para obtener un sólido incoloro. Se secó lo sólido. Se disolvió en ácido clorhídrico 2M y se evaporó para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (94 mg, 75%). MS (m/z): 285 (M+ 1 ) .

Los siguientes compuestos en la Tabla 8 son preparados esencialmente siguiendo el método del Ejemplo 1 .

Tabla 8 1 Los compuestos finales son aislados directamente de cromatografía de intercambio catiónico y se concentraron a sequedad.

Ejemplo 8 clorhidrato del ácido ( 1 R, 2S,4R,5R,6R)-2-Amino-4-(5- difluorometil-1 H-[1 , 2,4]triazol-3-ilsulfanil)-biciclo[3.1 .0]hexan-2 ,6- dicarboxílico Se agregó (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-4-[[5- (difluorometil)-4H-1 ,2,4-triazol-3-il]sulfanil]biciclo[3.1 .0]hexan-2,6- dicarboxilato de diter-butilo (0.356 g, 651 .3 umol) en 1 ,4-dioxano (1 .63 mL) a una solución de cloruro de hidrógeno (4M en dioxano). Se calentó la mezcla a 50°C con agitación. Un precipitado sólido de la solución inmediatamente después que comenzó el calentamiento. Se enfrió la mezcla de reacción y se concentró bajo presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía en gel de sílice (40 g de Si02) eluyéndo con ácido clorhídrico al 0-20% (0.01 M acuoso) en gradiente de acetonitrilo durante 60 minutos a velocidad de flujo de 40 mL/minuto. Se concentró bajo presión reducida para proporcionar el material crudo como aceite. Se purificó nuevamente usando las mismas condiciones. Se concentró bajo prjesión reducida para dar el compuesto del título como un sólido blanco (0.196 g, 93%). MS (m/z): 335 (M+1).

El siguiente compuesto en la Tabla 9 se preparó esencialmente siguiendo el método del Ejemplo 8.

Tabla 9 Ejemplo 10 ácido (1R,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-(1H-1,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxílico j Se agregó cloruro de hidrógeno 4M en 1,4-dioxano (20 mL) a upa solución de (1 R,2S,4S,5R,6R)-2-ter-butoxicarbonilam¡no-4-(1 H-[1¡,2,4]tr¡azol-3-¡lsulfanil)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de diter-butilo (1.64 g, 3.30 mmol) en 1,4-dioxano (20 mL) y se agitó mezcla a 50°C durante la noche. Se concentró a sequedad. Se purificó por intercambio catiónico iónico (DOWEX® Marathón C, Na+ Forma fuertemente ácida). El residuo se disolvió en una cantidad mínima de agua para solubilizar el material y se cargó en la resina. Se lavó la resina sucesivamente con 2 volúmenes en columna de agua, después 2 volúmenes en columna de agua:tetrahidrofurano (1:1) y 2 volúmenes en columna de agua. Se eluyó el próducto deseado con 2 volúmenes en columna de piridina 10% en agua i para dar el compuesto del título como un sólido blanco. MS (m/z): 285 (M+1). 1H NMR (300 MHz, D20): 4,25 (d, J= 7,3 Hz, 1H), 2,53-2,38 (m, 3H), 2,23 (dd, J= 8,1, 16,1 Hz, 1H), 1,95 (t, J= 3,3 Hz, 1H).

Los siguientes compuestos en la Tabla 10 son preparados esencialmente siguiendo el método del Ejemplo 10.

Tabla 10 Datos Ej. Físicos Nombre Químico Estructura No. MS (m/z) clorhidrato del ácido (1R,2S,4S,5R,6R)-2- Amino-4-(1 H-triazol- 285 11 4-ilsulfanil)biciclo (M + 1) [3.1 ,0]hexan-2,6- dicarboxílico5 clorhidrato de ácido (1R,2S,4S,5R,6R)-2- Amino-4-[[5- (trifluorometil)-l H- 353 12 1,2,4-triazol-3- (M+1) il]sulfanil]biciclo[3.1.0 HCI ]hexan-2,6- dicarboxílico5 5 Se agregó HCI 2 M a la solución resultante y se concentró bajo presión reducida.

Ejemplo 13 ácido (1R,2S,4R,5R,6R)-2-am¡no-4-[(5-metil-4H-1,2,4-triazol-3-il)sulfanil]biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxílico Se disolvió ( 1 R,2S,4R,5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-4- [(5-metil-4H-1 ,2,4-triazol-3-il)sulfanil]biciclo[3. 1 .0]hexan-2 ,6-dicarboxilato de diter-butilo (85 mg , 0.166 mmol) , acético ácido (1 mL) y agua (1 mL). Se calentó la mezcla a 160°C a aproximadamente 40 Watts en un microondas I njtiator BIOTAGE® por 6 minutos. Se concentró la mezcla de reacción bajo presión reducida. Se agregó agua y se removió bajo presión reducida dbs veces para remover el exceso de acético ácido para dar el compuesto del título como un sólido blanco (40 mg, 88.6%). MS (m/z): 299 (M + 1 ).

Los siguientes compuestos en la Tabla 1 1 son preparados esencialmente siguiendo el método del Ejemplo 1 3.

Tábla 1 1 Ejemplo 16 clorhidrato del ácido ( 1 R,2S,4R, 5R,6R)-2-[[(2S)-2-Aminopropanoil]amino-4-[[5-(trifluorometil)-1 H-1 ,2,4-triazol-3-il]tio]biciclo[3.1 .0]hexan-2,6-dicarboxílico ; Se trató ácido (1 R, 2S,4R,5R,6R)-2-[2-((S)-ter-butoxicarbonilamino)-propionilamino]-4-(5-trifluorometil-1 H-[1 , 2 ,4]triazol-3-ilsulfanil)-biciclo[3.1 .0]hexan-2,6-dicarboxílico (340 mg, 0.65 mmol) con ácido clorhídrico acuoso (2M, 7 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se concentró la mezcla de reacción a sequedad y se purificó el residuo por cromatografía de intercambio catiónico (DOWEX® 50WX8-100). Se disolvió el compuesto en agua y se ajustó a pH=2. El compuesto se dejó fluir a través de la columna a una velocidad de goteo de aproximadamente 1 gota cada 1 -2 segundos. Después que el volumen de carga inicial ha bajado a la superficie de resina , se enjuagó con agua (5 a: 10 ml_) y se repitió 3 veces. Se monitoreó el pH del efluénte y se continuó el enjuague con agua hasta que se completó la aplicación (pH ciclo observado: efluente de la columna inicialmente a pH=7 después goteo a pH=1 y regresó nuevamente a pH=7). Se lavó la columna con al menos un volumen de columna cada una de agua, agua:tetrahidrofurano (1:1) después agua. Se desplazó el producto de la resina con piridina 10%:agua. Se continuó la elución con piridina 10%:agua hasta que no se el'uyó producto adicional. Se concentraron las fracciones que contienen el i producto para obtener un sólido incoloro (204 mg). Se disolvió lo sólido en agua, se agregó ácido clorhídrico 2M (1.5eq) y se liofilizó la solución por 48 horas para dar el compuesto del título como un sólido blanco (225 mg, 75.4%). MS (m/z): 424 (M + 1).

Los siguientes compuestos en la Tabla 12 son preparados esencialmente siguiendo el método del Ejemplo 16.

Tabla 12 Ejemplo 22 (1R,2S,4S,5R,6R)-2-[(-2-Aminoacetil)amino]-4-(4H-1,2,4-triázol-3-ilsulfanil)biciclo[3. .0]hexan-2,6-dicarboxílico ácido clorhidrato de Se disolvió ácido (1 R,2S,4S,5R,6R)-2-[[-2-(ter-butoxicarbonilamino)acetil]amino]-4-(4H-1 ,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxílico (220 mg, 0.49 mmol) en una sólución saturada de gas de cloruro de hidrógeno en acetato de etilo (7 mL) y se agitó a temperatura ambiente por 2 horas. El solvente se removió para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (180 mg, 98%). MS (m/z): 342 (M+1).

Los siguientes compuestos in Tabla13 son preparados esencialmente siguiendo el método del Ejemplo 22.

Tabla 13 Ejemplo 26 clorhidrato de (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-amino-4-(1 H-[1 ,2,3]triazol- 4-ilsulfanil)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de dibencilo Se agregó ácido trifluoroacético (3 mL, 40 mmol) a una solución de éster dibencilico del ácido (1 R,2S,4R,5R,6R)-2-ter-butoxicarbonilamino-4-(1 H-[1 ,2,3]triazol-4-ilsulfanil)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxílico (0.4 g, 0.71 mmol) en diclorometano (12 mL) y se agitó a temperatura ambiente por 4.5 h. Se concentró la mezcla de reacción bajo presión reducida, se disolvió en acetonitrilo (10 mL) y se cargó en un cartucho SCX-2 10 g (preacondicionado con acetonitrilo). Se lavó el cartucho con acetonitrilo (20 mL) después se eluyó con una solución de 90:10 v acetonitrilo/ hidróxido de amonio (fracciones 5><20 mL). Se evaporaron las fracciones que contienen el producto y se purificaron por cromatografía en gel de sílice (12 g columna de sílice) eluyendo con 90:10:1 diclorometano/metanol/ hidróxido de amonio para obtener el producto base libre como una goma incolora. Se disolvió la goma en diclorometano (10 mL), se agregó ácido clorhídrico (0.25 mL de una solución 2M en éter dietílico; 0.5 mmol), y se evaporó el solvente para obtener el compuesto del título como un sólido blanco (0.2 g, 56.3%). MS (m/z) 465 (M+1).

Ejemplo 27 ( 1 R,2S,4S, 5R,6R)-2-amino-4-( 1 H-1 , 2,4-triazol-3-ilsulfanil)b¡ciclo[3. 1 .0]hexan-2,6-dicarboxilato de dibencilo i En un tubo sellado, se agregó ácido p-toluensulfón¡co (5 I eq) a una solución agitada de (1 R,2S,4S, 5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-4-( 1 H-1 ,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1 .0]hexan-2,6- i dióarboxilato de diter-butilo (1 .00g , 2.01 mmol) en alcohol bencílico (0.1 5 M). Se calentó la mezcla de reacción con agitación a 80°C por 4 días. Se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente. Se purificó nuevamente por columna SCX-2 (1 0 g). Se cargó la mezcla de reacción en una columna pre-acondicionada con metanol, se lavó con metanol (x3) para remover el exceso del alcohol bencílico correspondiente, y se eluyó con solución amon íaco 2N en metanol. Se evaporó el solvente bajo presión reducida para dar un aceite. El aceite resultante se disolvió en acetato de etilo y se lavó con una solución saturada de carbonato de sodio para remover el monoéster formado en la reacción. La capa orgánica se secó y se concentró para dar un aceite. Se purificó el aceite por cromatografía instantánea eluyendo con diclorometano/ amonio:metanol 2N (98:2) para dar el compuesto del título como un sólido. (270 mg, 28%) MS (m/z): 465 (M + 1 ).

, El siguiente compuesto en la Tabla 14 se preparó esencialmente siguiendo el método del Ejemplo 27.

Tabla 14 Ejemplo 29 I clorhidrato de (1 R,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-(1 H-1 ,2,4-triazol-3 ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de Bis[[2 (trifluorometil)fenil]metilo] En un tubo sellado, se agregó ácido p-toluensulfónico (3 eq) a una solución agitada de (1 R,2S,4S,5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-4- (1H-1 ,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de diter- butilo (500mg, 1.01 mmol) en alcohol 2-trifluorometilbencílico (30 eq). Se calentó la mezcla de reacción con agitación a 88°C por 4 horas. Se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente. Se cargó la mezcla de reacción en una columna SCX-2 (10 g) pre-acondicionada con metanol, se lavó con metanol (x3) para remover el exceso de alcohol bencílico correspondiente después se eluyó con solución amoníaco 2N en metanol. Sé evaporó el solvente bajo presión reducida para dar un aceite. El aceite se trató con acetato de etilo resultando en un sólido precipitado, el cual es el monoéster. Lo sólido se filtró y lo filtrado se concentró bajo presión reducida para dar un aceite. Se purificó el aceite por cromatografía instantánea eluyendo con diclorometano:metanol (95:5) para dar el compuesto del título como un aceite (40 mg, 6%) ! Se disolvió bis[[2-(trifluorometil)fenil]metil] (1 R,2S,4S,5R,6R)- 2-amino-4-(1 H-1 ,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato (0.07 mmol), en una solución saturada de gas de cloruro de hidrógeno en acetato de etilo (1 ml_). La mezcla se agitó (30 min) a temperatura ambiente. Se removió solvente bajo presión reducida y se secó lo sólido resultante en un horno a vacío a 50°C durante la noche. (30 mg, 65%) MS (m/z): 601 (M+1).

Los siguientes compuestos en la Tabla 15 son preparados esencialmente siguiendo el método del Ejemplo 29.

Tabla 15 Ejemplo 35 ' Bis[(4-metoxibencil)(1R,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-(1H- [1 ^^Itriazol-S-ilsulfani bicicloIS.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato Se disolvió (1 R, 2S,4S, 5R,6R)-2-ter-butoxicarbonilamino-4-( 1 H-[1¡,2,4]triazol-3-ilsulfanil)-biciclo[3.1 .0]hexan-2 ,6-dicarboxilato de bis-(4-metoxi-bencilo) (1 02 mg, 163.3 µ????) en una solución saturada de gas de cl¡oruro de hidrógeno en acetato de etilo (0.5 mL) y se agitó a temperatura ambiente por 1 0 min. El solvente se removió. Se cargó la mezcla de reacción en una columna SCX pre-acondicionada con acetonitrilo, se lavó con acetonitrilo (x2) después se eluyó con solución amoníaco 2N en metanol:acetonitrilo (2 volúmenes en columna después se evaporó el solvente bajo presión reducida. Se purificó el residuo crudo vía cromatografía en gel de sílice (4 g), eluyendo con un gradiente de diclorometano/ solución amoníaco 2N 6% en metanol para proporcionar el compuesto del título (30 mg , 37%). MS (m/z): 525 (M + 1 ).

Ejemplo 36 clorhidrato de ( 1 R, 2S,4S, 5R,6R)-2-amino-4-(1 H-1 ,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3. 1 .0]hexan-2,6-dicarboxílato de Bis[3- (trjfluorometil)bencilo] Se disolvió bis-(3-trifluorometil-bencil) éster del ácido (1R,2S,4S,5R,6R)-2-ter-Butoxicarbonilamino-4-(1H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil)-biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxílico (200 mg, 285 µ????) en una solución saturada de gas de cloruro de hidrógeno en acetato de etilo (2 ml_) y se agitó a temperatura ambiente. Después de 2h, la conversión al producto deseado es total. Por lo tanto, el solvente se removió in vacuo. Lo sólido se lavó con acetato de etilo y se secó a 50°C in vacuo durante la noche para dar el título, 0.17g (94%), %). MS (m/z): 601 (M + 1).

Ejemplo 37 (1R,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-(1H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil)-bibiclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de Bis-(2,2-Dimetil-propioniloximetilo) Se disolvió (1 R,2S,4S,5R,6R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-4-(1H-1 ,2,4-triazol-3-ilsulfanil)bic¡clo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de bis(2,2-dimetilpropanoiloximetilo) (98 mg, 156 pmol) en una solución saturada de gas de cloruro de hidrógeno en acetato de etilo (2 mL) y se agitó a temperatura ambiente por 2 horas. El solvente se removió. Se obtuvo un sólido blanco por el compuesto deseado (68 mg, 79%). MS (miz): 399 (M+1).

Ejemplo 38 [ clorhidrato de 4-Bencil-6-etil(1 R,2S,4S,5R,6R)-2-amino-4-(1 H- 1 ,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato Se disolvió (1R,2S,4S,5R,6R)-2-ter-butoxicarbonilam¡no-4-(1H-[1;2,4]triazol-3-ilsulfanil)-b¡ciclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarboxilato de 2-bencil-6-etilo (78 mg, 155.20 pmol) en una solución saturada de gas de cloruro de hidrógeno en acetato de etilo (2 mL) y se agitó a temperatura ambiente por 2 horas. El solvente se removió. El compuesto del título se obtuvo como un sólido blanco (60 mg, 91%). MS (m/z): 403 (M+1).

Los receptores de mGlu son receptores acoplados a la proteína-G que modulan la excitabilidad neuronal. Aunque la neurotransmisión del glutamato disregulada ha sido ligada a la esquizofrenia, todos los antipsicóticos comúnmente prescritos actúan en los receptores de dopamina. Varios estudios soportan la activación del receptor mGlu del Grupo II (el cual incluye mGlu2, mGlu3, o ambos) para el tratamiento de esquizofrenia. En particular, datos recientes demuestran que un agonista del receptor mGlu 2/3 tiene propiedades antipsicóticas y puede proporcionar una nueva alternativa para el tratamiento de esquizofrenia (Patil et al., Nature Medicine (2007) 13(3), 1102-1107). Estudios preclínicos que usan ratones de depleción de gen sugieren que la actividad similar antipsicótica de agonistas de mGlu2/3 es predominantemente mediada por el receptor mGlu2. Los modelos de eficacia preclínica adicionales indican propiedades ansiolíticas, antidepresivas y neuroprotectoras de agonistas del receptor mGlu2/3. Por lo tanto, agonistas de mGlu2 pueden ser útiles en el tratamiento de trastornos psiquiátricos, tales como trastorno bipolar, esquizofrenia, depresión, y trastorno de ansiedad generalizada.

Ensayo FLIPR® Agonista de mGlu2 humano Líneas de células AV-12, derivadas de fibroblastos de Hámster Sirio y que expresan establemente el receptor mGlu2 humano y co-transfectadas con el transportador de glutamato de rata EAAT 1 (Transportador de Aminoácido Excitatorio 1) y la subunidad Ga15, son usadas para estos estudios. La expresión de Ga15 permite a los receptores acoplados a Gi la señal a través de la trayectoria de fosfolipasa C, resultando en la capacidad para medir la activación del receptor por un ensayo fluorométrico de respuesta de calcio. Las líneas celulares son mantenidas por cultivo en Medio de Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) con alta glucosa y clorhidrato de piridoxina suplementado con 5% de suero bovino fetal dializado, 1 mM de piruvato de sodio, 10 mM de HEPES (ácido i 4-(2-hidroxietil)-1-p¡peraz¡netansulfónico), 1 mM de L-glutamina, y 5 pg/mL de blasticidina (todos los medios son adquiridos de Invitrogen). Los cultivos confluentes son pasados cada dos semanas usando una solución de disociación libre de enzima (Chemicon S-004-B). Las células son recolectadas 24 horas previo al ensayo y dispensadas usando una » sembradora celular de Matrix Well-Mate a 85,000 (mGlu2) o 115,000 (mGlu3) células por cavidad en placas recubiertas con poli-D-lisina, de pared negra, de 96 cavidades (BD BioCoat #354640) en medio que contiene solamente 250 (mGlu2) o 125 (mGlu3) µ? de L-glutamina (recientemente agregada).

Los niveles de calcio intracelular son monitoreados antes y después de la adición de compuestos usando un Lector de Placa de Formación de Imágenes Fluorométricas (FLIPR®, Molecular Devices). El amortiguador de ensayo está comprendido de Solución de Sal Amortiguada de Hank (HBSS; Sigma) suplementado con 20 mM de HEPES. El medio es removido y las células son incubadas con 8 µ? de Fluo-3AM (Molecular Probes, F-1241; 50 pL por cavidad) en amortiguador de ensayo por 90 minutos a 25°C. La solución de tinte es removida y colocada con amortiguador de ensayo fresco (50 µ? por cavidad). Se conduce un ensayo FLIPR® de adición única que genera una curva de respuesta de concentración de 11 puntos (diluciones 3X partiendo a 10µ?) para el glutamato agonista (Fisher A125-100) previo a cada experimertto para confirmar la respuesta EC50 típica. Los resultados son analizados usando PRISM® v4.03 (Software GraphPad). Los compuestos ejemplificados de la présente invención son probados en un ensayo FLIPR® de adición única usando un perfil de respuesta de concentración de 10 puntos usando diluciones 3X partiendo a una concentración final de 25 µ?. Los compuestos ejemplificados de la presente invención son solubilizados como soluciones base de 10 mM en NaOH 0.1N y almacenados a -20C. Son diluidos a través de una serie de dilución de tres partes en amortiguador de ensayo. Después de tomar una lectura fluorescente de 5-ségundos inicial en el instrumento FLIPR®, un compuesto de la invención es agregado a la placa celular (50 µ? por cavidad). Los datos son I recolectados cada segundo por los primeros 30 segundos y después cada 3 segundos para un total de 90 segundos para detectar actividad agonista. La respuesta máxima es definida como aquella inducida por ECmax (100 µ? de glutamato). El efecto del compuesto es medido como alturas de pico máximas menos mínimas en unidades fluorescentes relativas (RFUs) corregidas para fluorescencia basal medida en la ausencia de glutamato. Se llevaron a cabo determinaciones usando las placas individuales. Los efectos agonistas son cuantificados como porcentaje de estimulación inducido por el compuesto solo con relación a la respuesta de glutamato máxima. Todos los datos son calculados como valores EC50 relativos usando un programa de ajuste de curva logística de cuatro parámetros (ACTIVITY BASE® V5.3.1.22).

Los compuestos ejemplificados en la presente fueron probados esencialmente como se describe y presenta un valor EC50 relativo en el ensayo FLIPR® de hMGLUR2 inferior de 0.5 µ?.

' Los siguientes compuestos ejemplificados en la Tabla 16 fueron probados esencialmente como se describe anteriormente y i i : 1 presentan la siguiente actividad: Tabla 16 ' Estos datos resumen la actividad de los compuestos de las Tabla 16 para actividad agonista funcional en el ensayo FLIPR® de hrhGlu2 y demuestran que los compuestos son agonistas de mGlu2.

Reversión de Actividad Hiperlocomotora Inducida por Fenciclidina (PCP) en Ratas ! La administración de agonistas del receptor NMDA, tales como cetamina o fenciclidina (PCP), produce efectos similares psicotomiméticos en¡ humanos que son similares a aquellos síntomas observados en pacientes con esquizofrenia. La capacidad de los agentes para revertir los efectos estimulantes locomotores de antagonistas de NMDA son a menudo usadas como un modelo animal de psicosis, demostrando buena validez i prédictiva para detectar eficacia clínica de medicaciones para esquizofrenia y trastorno bipolar.

La actividad motora es monitoreada colocando ratas macho Sprague-Dawley individuales (Harían, Indianápolis, IN) en jaulas de cajas dé zapato de plástico, transparentes, de las dimensiones 45 x 25 x 20cm, con 1 cm de profundidad de virutas de madera como cama, y una rejilla de metal en la parte superior de la jaula. Los monitores motores (Kinder Scientific) consisten de un bastidor rectangular de 12 fotohaces arreglados en una formación 8 x 4, (o una agrupamiento de alta densidad de 22 en un patrón 15x7) a una altura de 5 cm, con un segundo bastidor (para medir lo's comportamientos de crianza) a una altura de 15 cm. La jaula de caja de zapatos es colocada dentro de estos bastidores, con los bastidores en la parte superior de la mesa de 91 cms (3 pies) de alto en un cuarto aislado. Un compuesto de la presente invención es dosificado (ruta intraperitoneal (i. ., sin fármaco) dentro de un rango de 0.3 - 10 mg/kg, 30 minutos previo a una dosis de estimulación de 5 mg/kg de feniciclidina (PCP). Un compuesto de la presente invención es dosificado (ruta oral, profármaco) dentro de un rango de 0.3 - 30 mg/kg, en ratas ayunadas durante la noche, 4 horas previo a una dosis de estimulación de 5 mg/kg de PCP. En el día de la prueba, las ratas son colocadas en la jaula de prueba y dejadas para aclimatarse por 30 minutos previo a la estimulación de PCP; las ratas son monitoreadas por unos 60 minutos adicionales después de la administración de PCP.

Los análisis de datos y cálculos de ED50 se conducen usando GraphPad PRISM® (San Diego, CA. USA). Los análisis de potencia han determinado que 8-10 ratas por grupo son necesarias para tener una potencia estadística apropiada para detectar diferencias de tratamiento (potencia = 0.8). Un análisis de varianza de una vía (ANOVA) con una prueba de comparación múltiple de Dunnett post-hoc se conduce en la actividad locomotora de 60 minutos totales. Los cálculos de ED50 se realizan usando ajuste de curva de regresión no lineal en el porcentaje de reversión de datos transformados para cada dosis.

El compuesto de Ejemplo 10 y sus profármacos correspondientes (Ejemplo 25) fueron medidos en este ensayo, corrido sustancialmente como anteriormente, resultó en valores ED50 de 0.9 mg/kg (administración i.p.) y 6.4 mg/kg (administración oral), respectivamente. Estos resultados demuestran que el precursor activo y su forma de profármaco presentan fuerte eficacia en este modelo farmacológico predictivo de eficacia en pacientes que sufren de esquizofrenia y trastorno bipolar.

Reversión de Actividad Hiperlocomotora Inducida por Fenciclidina (PCP) en Ratones Este ensayo para Reversión de Actividad Hiperlocomotora Inducida por Fenciclidina (PCP) en Ratones es corrido sustancialmente con la iReversión de Actividad Hiperlocomotora Inducida por Fenciclidina (PCP) en¡ Ratas proporcionado anteriormente, usando ratones en lugar de ratas y con los cambios observados abajo.

' La actividad motora es monitoreada colocando ratones macho ICR individuales (CD-1) (Harían, Indianápolis, IN) en jaulas de cajas de zapato de plástico, transparentes, de las dimensiones 45 x 25 x 20cm, con 0.5 cm de profundidad de virutas de madera como cama, y una rejilla de mejtal en la parte superior de la jaula. Los monitores motores (Kinder Scientific) consisten de un bastidor rectangular de 12 fotohaces arreglados en una formación 8 x 4, (o una agrupamiento de alta densidad de 22 en un patrón 15x7) a una altura de 2.5 cm. La jaula de caja de zapatos es colocada dentro de estos bastidores, con los bastidores en la parte superior de la mesa de 91 cms (3 pies) de alto en un cuarto aislado. Un compuesto de la presente invención es dosificado (ruta intraperitoneal, sin profármaco) usualmente dentro de un rango de 0.3 - 10 mg/kg: aunque dosis superiores pueden ser usadas, 30 minutos previo a una dosis de estimulación de 7.5 mg/kg de feniciclidina (PCP). En el día de la prueba, los ratones son colocados en la jaula de prueba y dejados para aclimatarse pór 45 minutos previo a la estimulación de PCP; los ratones son mpnitoreados por unos 60 minutos adicionales después de la administración de PCP.

Los análisis de potencia han determinado que 7-8 ratones por grupo son necesarios para tener potencia estadística apropiada para detectar diferencias de tratamiento (potencia = 0.8). i Se condujeron experimentos de respuesta de dosis en los Ejemplos 1, 2, 3, y 11 después de la administración i.p. Los valores ED50 fueron como sigue: Ejemplo 1 = 18.4 mg/kg; Ejemplo 2 = 14.4 y 14.3 (2 experimentos independientes); Ejemplo 3 = 17.1 mg/kg; Ejemplo 11 = 1.2 mg/kg. Finalmente, el Ejemplo 8 invierte la actividad locomotora inducida por PCT de reversión por 52% después de una dosis única de 10 mg/kg. Estos resultados demuestran que compuestos ejemplificados dentro del alcance de la presente invención son medicamentos útiles para la esquizofrenia y trastorno bipolar.

Atenuación de Hipertermia Inducida por Estrés en Ratas La hipertermia, una elevación en la temperatura corporal nuclear, es un fenómeno natural que ha sido confiablemente demostrado en muchos mamíferos, incluyendo humanos, en respuesta al estrés. En muchos trastornos de ansiedad, la hipertermia ocurre como parte de la patología y es considerada un síntoma de la enfermedad. Los compuestos los cuales atenúan la hipertermia inducida por estrés en animales se cree son útiles en el tratamiento de trastornos de ansiedad en humanos. El trastorno de ansiedad generalizada es un ejemplo de tales trastornos que pueden ser tratados con tales compuestos. El método mínimamente invasivo y convencional para analizar hipotermia inducida por estrés es midiendo la temperatura corporal, e incrementos inducidos por estrés en la temperatura corporal vía termómetro rectal. Ratas macho Fischér F-344 (Harían, Indianápolis, IN, USA) que pesan entre 275 - 350 g son probadas. Todos los animales son individualmente alojados con alimento y agua automatizados disponibles opcional (ad libitum), y mantenidos en un ciclo de 12 h de luz/oscuridad (luces a las 06:00). Los animales son ayunados pojr aproximadamente 12-18 horas antes del experimento, el .cual es conducido durante la fase de luz. Las ratas son dosificadas una hora previo al experimento por ruta de administración intraperitoneal (i.p.) en un volumen de dosis de 1 mL/kg. El vehículo usado fue agua con suficiente NaOH agregado para lograr un pH de entre 5-7. El antagonista de mGluR5 MTEP (3-[(2-metil-1 ,3-tiazol-4-il)etinil]piridina), y agonista mGlu2/3 LY317206 se usaron como controles de calidad, dado que producen eficacia confiable en este modelo inmediatamente después de la dosificación, las ratas son regresadas a sus jaulas de hogar, y el experimentador apaga las luces y deja la habitación. La habitación de dosificación es oscurecida por el restante periodo de pretratamiento de 1 hora.

Después del periodo de tratamiento, las ratas son tomadas individualmente a una sala adyacente brillantemente iluminada donde las temperaturas corporales de línea base son determinadas por inserción de una sonda rectal lubricada con aceite mineral. La temperatura corporal es valorada usando un Termómetro Microprobe PHYSITEMP BAT-12® con una sonda rectal para rata PHYSITEMP RET-2® (Physitemp Instruments Inc., Clifton, NJ, USA). La sonda es insertada aproximadamente 2 cm en el recto, para medir la temperatura corporal nuclear (esta es la temperatura corporal de línea base, T1, en grados Celsius). Diez minutos después se registra una segunda medición de temperatura corporal (T2). La diferencia eri temperatura corporal (T2 - T1) es definida como la respuesta hipertérmica inducida por estrés. La dosis en la cual un compuesto de la invención produce una reducción del 35% en respuesta hipertérmica inducida por estrés, con relación a la respuesta del vehículo, es definida como la dosis T35.

El compuesto de Ejemplo 10 se midió en este ensayo corrido sustancialmente como anteriormente por tener un T35 de 1.7 mg/kg y una reducción máxima de hipertemia inducida por estrés de 75% a 10 mg/kg. En comparación, MTEP (3 mg/kg) y LY317206 (20 mg/kg) reducen la hipertemia inducida por estrés por 53% y 32%, respectivamente. Estos resultados demuestran que la actividad agonista de mGlu2 produce un efecto similar ansiolítico en este modelo de rata de ansiedad inducida por estrés y son consistentes con la actividad ansiolítica reportada de agonistas de mGlu2/3 en estudios preclinicos (Imre (2007) CNS Drug Rev. 13: 444-464) y clínicos (Dunayevich et al., (2008) Neuropsychopharm. 33: 1603-1610). Estos resultados sugieren la utilidad clínica potencial del agonismo de mGlu2 para el tratamiento de trastornos de ansiedad Prueba de nado forzado en ratones El ensayo de prueba de nado forzado en roedores es bien caracterizado y presenta buena validez predictiva para detectar actividad similar antidepresiva de medicaciones actuales para trastorno depresivo mayor. En este ensayo, los mecanismos con actividad similar antidepresivo süpuestos disminuyen la inmovilidad en un breve episodio de nado forzado ineludible. 1 La prueba de nado forzado se condujo en ratones (ratones macho, NIH-Swiss, de 20-25 g, Harían Sprague-Dawley, Indianápolis, IN). Los ratones se colocaron en cilindros de plástico (diámetro 10 cm; altura: 25 cm) llenos a 6 cm con agua a 22-25°C por seis minutos. La duración de la; inmovilidad se registra durante los últimos 4 minutos de un ensayo de seis minutos. Los compuestos de los Ejemplos 2, 3, 8, 11 y 12 son probados después de la dosificación interaperitoneal, 60 minutos previos a la prueba. La imipramina se usa como un control positivo para estos estudios. Los compuestos son formulados en un vehículo acuoso, con NaOH mínimo agregado. La cantidad de tiempo inmóvil consumido (definida como movimientos solamente necesarios para mantener la cabeza del sujeto arriba del agua) es la medida dependiente y registrada por un observador blindado al tratamiento de fármaco de los sujetos. Los datos son analizados por prueba Dunnett post-hoc con nivel alfa ajustado a 0.05. Un valor ED60 (60% de la cantidad de inmovilidad relativa a los controles de vehículo) se calcula para estimar la potencia de los l compuestos de prueba.

El Ejemplo 2 se probó en dos experimentos independientes y produce valores ED60 de 9.8 y 4.2 mg/kg. El Ejemplo 3 fue más potente y el valor ED60 se estimó por ser menor que la dosis más baja probada de 3 mg/kg. El ED60 para el Ejemplo 8 fue 7.95 mg/kg. El ejemplo 11 tiene un ED6o ele 0.88 mg/kg; sin embargo, la eficacia se perdió en un segundo estudio en los cuales se evaluaron dosis superiores (3 - 30 mg/kg). El Ejemplo 12 produce un ED6o de 3.31 mg/kg. Estos resultados demuestran que los compuestos dentro del alcance de la presente invención son medicaciones potencialmente útiles para depresión.

Tamiz de Inhibición de GlySar PepT1 in vitro y Determinación de IC50 Se establecieron ensayos de PepT1 para examinar la capacidad de los compuestos de profármacos de aminoácido para interactuar con el transportador de la absorción intestinal PepT1.

Células HeLa, derivadas de células de cáncer humano, (American Type Culture Collection) se hicieron crecer en medio Hyclone (Invitrogen, Cat# SH30243) que contiene 10% de suero bovino fetal (FBS), 0.1; mM de aminoácidos no esenciales (NEAA), y 100 unidades/mL de penicilina con 100 pg/mL de estreptomicina a 37°C en una atmósfera al 5% humidificada de C02. La línea celular es usada por hasta 40 pasajes y después desechada. Células congeladas en viales de 1 mi son descongeladas en baño maría por 1-2 minutos y agregadas a 5 mL de medio celular a 37°C. Cada uno de los matraces-T es proporcionado con 8;.5 mL del medio fresco y 1.5 mL de la solución base celular. Las células son pasadas dos veces durante una semana. Esto se logra enjuagando los matraces con 10 mL de salina amortiguada con fosfato-ácido etilendiaminatetraacético (PBS-EDTA), agregando 2 mL de tripsina por 2-5 minutos, para separar las células y agregar 8 mL de medio fresco para inhibir la actividad adicional de tripsina. Cada nuevo matraz recibe una combinación de 8.5 mL de medio fresco y 1.5 mL de solución base celular, para obtener una dilución celular 1:6. Las células son incubadas a 37°C, hasta la lectura para el estudio de absorción.

' Las células que son 70-80% confluentes en los matraces-T son plaqueadas 1 día previo al procedimiento de transfección. El matraz con la solución base celular es tratado con PBS-EDTA y tripsina para separar las células, y el medio de transfección es usado a partir de este punto. El medio de transfección consiste de Medio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) + NEAA. A cada cavidad, se agregaron 0.5 mL de mezcla celular (1:3x10 es la concentración celular deseada) y las células son incubadas a 37°C durante la noche. Veinticuatro horas antes del ensayo, las células son transfectadas con PEPT1. La mezcla de transfección es preparada mezclando 600 pL de medio de transfección libre de suero, 18 pL de FUGENE6® (Roche Diagnostics), y 11 pg del DNA de PepT1. El complejo de; reactivo de transfección-DNA es incubado por 20 minutos y se agregan 24 µ? del complejo de reactivo-DNA a cada cavidad.

La inhibición de la actividad de absorción de [glicil-1-2- 4C]Gliclisarcosina (GlySar) mediada por PEPT1 es medida en las células cultivadas en las placas de 24 cavidades 24 horas post-transfección como se publica previamente (Zhang et al. 2004. J. Pharm. Exper Ther. 310:437-445). Para medir la capacidad de un compuesto de la invención para inhibir la absorción de [1 C]Gly-Sar, los compuestos de profármacos son incubados con 80 a 90% de células HeLa temporalmente transfectadas con PéPT1 confluentes a 5 mM en pH 6.0 de medio de absorción en la presencia de 5 µ? de [14C]Gly-Sar (Moravek Biochemicals) y 20 µ? de GlySar frío. El medio de absorción consiste de 140 mM de NaCI, 5.4 mM de KCI, 1.8 mM de CaCI2, 0.8 mM de MgS04, 5 mM de Glucosa, 25 mM de amortiguador tris(hidroximetil)aminometano (TRIS). La solución es entonces llevada a pH 6.0 usando ácido 2-(N-morfolino)etansulfónico. El volumen de incubación es 500 µ? y es realizado a temperatura ambiente por 3 minutos. Para detener la absorción en la conclusión del tiempo de incubación, el medio de absorción es aspirado de la monocapa celular y 5?? iL de PBS enfriado en hielo se agregan a la cavidad. Las células son lavadas 3 veces con 500 \il de PBS a temperatura ambiente sin Ca+2 y Mg+2. Las células son entonces Usadas con 300 µ? de 1% de solución de H20 de TRITON® X100. Una alícuota de 200 µ? es removida y la radioactividad se determina por conteo de escintilación liquida para medir el [14C]Gly-Sar presente en cada una de las cavidades de incubación. Un control sin inhibidor es establecido y el porcentaje de inhibición de cada profármaco es calculado con respecto a este control. Un control negativo (Glicina) y dos controles positivos (cefadroxil y cefalexina) se realizan en paralelo en cada experimento para demostrar la viabilidad del sistema de ensayo. Los compuestos profármacos con inhibición de absorción GlySar igual o mejor que cefalexina son considerados aceptables. Los valores medios ± desviación estándar son 10.1 ±9.5% (n = 19) para Glicina, 53.2 ± 13.2 % (n = 19) para Cefadroxil, y 37.5±14.7% (n = 18) para Cefalexina.

Para el ensayo de IC50 de PepT, los compuestos de profármacos son incubados a un rango de concentraciones (0.0625 a 25 mM) en la presencia de 5 µ? de [14C]Gly-Sar y 20 µ? de Gly-Sar frío. Los procedimientos de muestreo e incubación son exactamente los mismos como para el tamiz PepT1 descrito anteriormente. Los datos de absorción de [14C]Gly-Sar son evaluados para cada una de las concentraciones del compuesto de profármaco y los valores IC50 son calculados.

Los siguientes compuestos se probaron esencialmente como se describe anteriormente y presentan la siguiente actividad: Tabla 17 Estos resultados demuestran que los compuestos de la Tabla 17ison capaces de ser oralmente absorbidos vía el transportador PepT1 y son tan buenos como o mejor que el cefadroxil y cefalexina (Zhang et al, 2004. JPET 310:437-445), lo cual es predictivo de la absorción oral humana vía el transportador PepTL Ensayo de Hidrólisis de Profármaco Intestinal in vitro Homogenados intestinales de duodeno humano congelados (relación de tejido:amortiguador 1:2 usando 100 mM de amortiguador de Fsofato Tris, pH 7.4) se obtienen de Tecnologías Celsius ' In Vitro (Baltimore, MD) que fueron libres tanto de fenilmetilsulfonilfluoruro (PMSF) como EDTA.

Cada lote de duodeno humano se obtiene de un donador único y el intestino es raspado y las secciones son congeladas separadas. Todas las recolecciones de tejido original son realizadas a 4°C e inmediatamente congeladas a -70°C. Los homogenados intestinales humanos son déscongelados y diluidos a una concentración de proteína final de 0.5 mg/mL en 100 mM de amortiguador PBS, pH 7.4 inmediatamente previo a las incubaciones.

| Las incubaciones son conducidas en placas de 96 cavidades y todos los compuestos de profármaco son corridos en duplicados en cada día. Las soluciones base del compuesto de profármaco son preparadas en agua a una concentración de 1 mM. Una alícuota de 200 \ L de 0.5 mg/mL de homogenado intestinal y 196 µ? de 100 mM de amortiguador de PBS son colocadas en una placa de 96 cavidades a baño maría a 37°C. Para asegurar que la hidrólisis no es debido a la inestabilidad química, los cojmpuestos de profármaco son también incubados con amortiguador de PBS solo sin homogenado intestinal. Usando un pipeteador de 96 cavidades, se transfieren 4 µ?_ de 1 mM de solución del compuesto de profármaco en el homogenado. Inmediatamente después de la adición del compuesto de profármaco (tiempo cero) y después de 1 hora de incubación, 50 µ? de las muestras de la mezcla de incubación son removidas usando un pipeteador de 96 cavidades simultáneo desechable automatizado y agregadas directamente a 200 µ?_ de metanol de solución de apagado que contiene 100 ng/mL de Estándar Interno. Las muestras son entonces centrifugadas a 3500 rpm por 5 minutos a 10 °C. El sobrenadante (200 \iL) es transferido a una placa final de PCR de 96 cavidades y sellada para análisis por LC/MS/MS.

Las concentraciones de compuestos hidrolizados de la presente invención en las mezclas de incubación son determinadas usando detección de LC/MS/MS en un espectrómetro de masas cuádruplo Sciex API 4000™ con Analyst versión 1.4.2, TURBOIONSPRAY®, ionización positiva, y Monitoreo de Reacción Seleccionada (SRM). Una columna de HPLC Waters ATLANTIS® T3 (20 x 2.1 mm, 5 µ?) se usa a temperatura ambiente con una velocidad de flujo de 1.0 mL/min y un gradiente de fase móvil desde 0.1% de fase móvil A hasta 99% de fase móvil A. La fase móvil A es 1000:5 agua: ácido heptafluorobutérico y la fase móvil B es 1:1 metanol:ácido helado acético.

Las concentraciones de compuestos hidrolizados de la présente invención en las mezclas de incubación intestinal son determinadas de curvas estándares preparadas por réplicas de dilución de dos partes partiendo a 10 µ? en 100 mM de PBS pH 7.4 y subsecuentemente apagadas con solución estándar interna-metanol idénticas a las muestras. Los promedios y desviaciones estándares son calculados usando MICROSOFT® Office EXCEL® 2007. La cantidad de hidrólisis es determinada como un porcentaje molar de compuesto formado con relación a la concentración del compuesto de profármaco agregado. La hidrólisis del control positivo, Compuesto de Profármaco Interno A al Compuesto Interno de Fármaco A, corrida en cada lote promedió 75.3% (n=20). Los valores finales son entonces normalizados con relación a la formación del Compuesto Interno de Fármaco A.

Los siguientes compuestos se probaron esencialmente como se describe anteriormente y presentan la siguiente actividad: Tabla 18 Estos resultados demuestran que los compuestos de la Tabla 18 son capaces de ser hidrolizados en el intestino humano.

Ensayo de Hidrólisis de Homogenado S-9 de Hígado Humano in vitro ' Se obtuvieron fracciones S9 de hígado de Xenotech LLC (Lenexa, MO). El lote es de una combinación de dos donadores, uno masculino y uno femenino. La fracción S9 de hígado es preparada y diluida usando un amortiguador de homogenización que consiste de 50mM de Tris, pH 7.4 a 4°C y 150mM de cloruro de potasio sin EDTA. Los compuestos de profármacos son incubados en el homogenado de hígado por 2 horas a 37°C, después de lo cual la concentración del compuesto es determinada por LC/MS/MS. La hidrólisis de Clopidogrel a Ácido Carboxílico de Clopidogrel es utilizada como un control positivo de ensayo.

Las incubaciones se conducen en un formato de 96 cavidades y todos los compuestos de profármacos se corren por duplicado cada día. Las soluciones base del compuesto de profármaco son preparadas en agua a juna concentración de 1 mM. La fracción S9 de hígado humano es diluida a una concentración final de proteína de 0.5mg/ml en 100mM de amortiguador de PBS, pH 7.4.

Una alícuota de 200 µ? de 0.5mg/mL de homogenado S-9 de hígado humano y 196 pL de 100 mM de amortiguador de PBS son cdlocadas en una placa de 96 cavidades en baño maría a 37°C. Usando un pipeteador de 96 cavidades, se transfieren 4 pL de la solución de prófármaco de 1 mM en el homogenado. Para asegurar que la hidrólisis no esi debida a la inestabilidad química, los compuestos de profármaco son también incubados con amortiguador de PBS solo sin S-9 de hígado. Inmediatamente después de la adición del compuesto de profármaco (tiempo cero) y después de 1 hora de incubación, se remueven 50 µ? de muestra de la mezcla de incubación usando un pipeteador de 96 cavidades simultáneo desechable automatizado y se agregan directamente a 200 pL de metanol de solución de apagado que contiene 100 ng/mL de Estándar Interno. Las muestras son centrifugadas a 3500 rpm por 5 minutos a 10°C. El sobrenadante (200 uL) es transferido a una placa final de PGR de 96 cavidades y sellado para análisis por LC/MS/MS.

La cuantificación de LC/MS/MS del compuesto formado durante la incubación se realiza en un Sciex API 4000, Analyst versión 1.4.2, TURBOIONSPRAY®, ionización positiva, y Monitoreo de Reacción Seleccionada (SRM). La columna de HPLC usada es una Waters ATLANTIS® T3 (20 x 2.1 mm, 5µ??) a temperatura ambiente con una velocidad de flujo de fase móvil de 1.0 mL/min. La fase móvil A es 1000:5 agua: ácido heptafluorobutérico y la fase móvil B es 1:1 metanol/ácido helado acético. Se utiliza un gradiente de fase móvil partiendo a la relación de fase móvil A/B de 99.9/0.1 y terminando a 1/99.

Las concentraciones de compuesto hidrolizado en las mezclas de incubación se determinan de curvas estándares preparadas por replicas I de dilución de dos partes partiendo a 10 µ? en 100 mM de PBS pH 7.4 y subsecuentemente apagadas con solución de estándar interno-metanol I idéntica a las muestras. Los promedios y desviaciones estándares son calculados usando MICROSOFT® Office EXCEL® 2007. Los valores finales son presentados como un porcentaje molar de compuesto formado con relación a la concentración de compuesto de profármaco agregado. La hidrólisis de Clopidogrel a Ácido Carboxílico de Clopidogrel se usa como el control positivo y promedia 73.0% (n=27).

! Los siguientes compuestos fueron probados esencialmente como se describe anteriormente y presentan la siguiente actividad: Tabla 19 Estos resultados demuestran que los compuestos de la Tabla 19 son capaces de ser hidrolizados en el hígado humano.

Los compuestos de la presente invención son preferiblemente formulados como composiciones farmacéuticas usando uno o más portadores, diluyentes, o excipientes farmacéuticamente aceptables y administrados por una variedad de rutas. Preferiblemente, tales composiciones son para administración oral o intravenosa. Tales composiciones farmacéuticas y procesos para prepararlas son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (A. Gennaro, et al., eds., 21st ed., Mack Publishing Có., 2005).

Los compuestos de la presente invención son en general efectivos sobre un amplio intervalo de dosificación. Por ejemplo, dosificaciones por día normalmente caen dentro del intervalo de aproximadamente 0.3 hasta aproximadamente 30 mg/kg de peso corporal. En algunos casos niveles de dosificación por debajo del límite inferior del intervalo mencionado antes pueden ser menos que adecuados, mientras en otros casos dosis todavía más grandes pueden ser empleadas, y por lo tanto el intervalo anterior no está propuesto para limitar el alcance de la invención en cualquier forma. Se entenderá que la cantidad del compuesto actualmente administrado será determinada por un especialista, a la luz de las circunstancias relevantes, que incluyen la condición a ser tratada, la ruta elegida de administración, el compuesto actual o compuestos administrados, la edad, el peso, y la respuesta del paciente individual, y la severidad de los síntomas del paciente.

Claims (18)

REIVINDICACIONES compuesto de la fórmula caracterizado porque R es ; R2 es hidrógeno, 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo, en donde bencilo es opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, alquilo -CrC3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, o alcoxi -Ci-C3; R3 es hidrógeno, 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo, en donde bencilo es opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, alquilo -C1-C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, o alcoxi -C1-C3; R es hidrógeno, (2S)-2-aminopropanoilo, (2S)-2-amino-4-metilsulfanil-butanoilo, (2S)-2-amino-4-metil-pentanoilo, o 2-aminoacetilo; R5 es alquilo -Ci-Cs opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; siempre que cuando R2 y/o R3 no son hidrógeno entonces R4 es hidrógeno; siempre que cuando R4 no es hidrógeno entonces R2 y/o R3 son hidrógeno; siempre que R5 puede ser hidrógeno cuando el átomo de azufre está unido al sistema de anillo biciclo[3.

1.0]hexano en la configuración S; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

2. Un compuesto de conformidad con la Reivindicación 1, caracterizado porque R1 es o ; R2 es hidrógeno, 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo, en donde bencilo es opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, alquilo -Ci-C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, o alcoxi -Ci-C3; R3 es ! i hidrógeno, 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo, en donde béncilo es opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, alquilo -C1-C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, o alcoxi -( C3; R4 es hidrógeno, (2S)-2-aminopropanoilo, (2S)-2-amino-4-metilsulfanil-butanoilo, (2S)-2-amino-4-metil-pentanoilo, o 2-aminoacetilo; R5 es alquilo -C1-C3 opcionalmente sustituido con 1 a 3 átomos de flúor, -NH2, o ciclopropilo; siempre que cuando R2 y/o R3 no son hidrógeno entonces R4 es hidrógeno; siempre que cuando R4 no es hidrógeno entonces R2 y/o R3 son hidrógeno; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

; 3. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 2, caracterizado porque R2 es hidrógeno, 2,2-dimetil-propioniloximetilo, o bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3 y R3 es hidrógeno, 2,2-dimetil-própioniloximetilo, o bencilo opcionalmente sustituido con uno a dos átomos de flúor, -CF3, o -OCH3; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

4. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque R es sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

5. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque R2 es hidrógeno; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

! 6. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque R3 es hidrógeno; ó una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

7. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque R4 es hidrógeno; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

8. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende el compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 7, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

¡ 9. Una composición farmacéutica de conformidad con la Reivindicación 8, caracterizada porque además comprende uno o más de otros agentes terapéuticos.

10. Un método para tratar un trastorno psiquiátrico seleccionado a partir del grupo que consiste de trastorno bipolar, esquizofrenia, y trastorno de ansiedad generalizada, caracterizado porque comprende administrar a un paciente en necesidad del mismo una cantidad efectiva del compuesto, o sal del mismo farmacéuticamente aceptable, de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 7.

11. El método de conformidad con la Reivindicación 10, caracterizado porque el trastorno psiquiátrico es trastorno bipolar.

12. El método de conformidad con la Reivindicación 10, caracterizado porque el trastorno psiquiátrico es esquizofrenia.

13. El método de conformidad con la Reivindicación 10, caracterizado porque el trastorno psiquiátrico es trastorno de ansiedad generalizada.

14. El compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 7, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para uso en terapia.

15. El compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 7, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para uso en el tratamiento de un trastorno psiquiátrico seleccionado a partir del grupo que consiste de trastorno bipolar, esquizofrenia, y trastorno de ansiedad generalizada.

16. El compuesto de conformidad con la Reivindicación 15, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para uso en el tratamiento de trastorno bipolar.

17. El compuesto de conformidad con la Reivindicación 15, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para uso en el tratamiento de esquizofrenia.

18. El compuesto de conformidad con la Reivindicación 15, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para uso en el tratamiento de trastorno de ansiedad generalizada. 1 9. El uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 7, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizado porque es para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de un trastorno psiquiátrico seleccionado a partir del grupo que consiste de trastorno bipolar, esquizofrenia, y trastorno de ansiedad generalizada.