MX2013006393A

MX2013006393A - Agentes para la formacion de imagenes.

Info

Publication number: MX2013006393A
Application number: MX2013006393A
Authority: MX
Inventors: Alan Hastings Drummond; David Festus Charles Moffat; Michael Hugh Charlton; Steven John Davies
Original assignee: Chroma Therapeutics Ltd
Priority date: 2010-12-17
Filing date: 2011-12-16
Publication date: 2013-09-13
Also published as: GB201021467D0; SG191121A1; EP2651454A1; ZA201304156B; US20140010762A1; WO2012080705A1; KR20140004676A; BR112013014586A2; EA201370121A1; CN103391789A; CA2821856A1; JP2013545795A; AU2011343017A1

Abstract

La presente invención se refiere a un agente para la formación de imágenes para las células que produce una señal para formar imágenes intracelulares, proporcional a la cantidad de hCE-1 en las células independientemente de la cantidad de la hCE-2 y/o hCE-3 en las células, el agente para la formación de imágenes es un conjugado covalente de (a) un agente para la formación de imágenes y (b) un éster de alfa aminoácido, mono o di-sustituido, en donde (a) está enlazado directamente a (b), o (a) está enlazado indirectamente a (b) por un radical enlazador, y en donde el enlace directo o indirecto es por medio del grupo amino de (b), y en donde el grupo amino no está enlazado directamente a un grupo carbonilo, y en donde la parte del éster del alfa aminoácido, mono o di-sustituido, es hidrolizable selectivamente a la parte del ácido carboxílico correspondiente por la enzima de carboxilesterasa intracelular hCE-1 con relación a las enzimas intracelulares hCE-2 o hCE-3.

Description

AGENTES PARA LA FORMACION DE IMAGENES Campo de la Invención Esta invención se refiere a agentes para la formación de imágenes que producen una señal para formar imágenes intracelulares , proporcional a la cantidad de la carboxi esterasa intracelular hCE-1 en las células independientemente de la cantidad de la carboxi esterasa intracelular hCE-2 y/o hCE-3 en las células. Los mismos contienen una porción de éster de alfa aminoácido enlazada ya sea directa o indirectamente por medio de un radical enlazador al resto del agente, esta porción de éster es una que es hidrolizada de manera más rápida y/o completa al ácido correspondiente por hCEl con relación al hCE-2 y h.CE-3. Los agentes para la formación de imágenes que tienen las porciones de éster del aminoácido pasan fácilmente hacia las células, pero los productos de la hidrólisis, especialmente los ácidos, no pasan fácilmente hacia fuera de las células. Por consiguiente, la señal para la formación de la imagen es más intensa en las células que acumulan el producto de la hidrólisis del ácido. Puesto que las células monocíticas, tales como los macrófagos, contienen hCE-1 pero otros tipos de células en general no lo contienen, o solamente contienen cantidades .insignif cantes de hCE-1, la señal de los agentes para la formación de imágenes de la invención en tales REF.241090 células es más intensa que aquella en otros tipos de células, y los agentes para la formación de imágenes de la invención por lo tanto son útiles como agentes para la formación de imágenes selectivas para los monocitos.

Antecedentes de la Invención Ciertos métodos de diagnóstico médicos hacen posible la investigación o visualización de los tejidos o las células de interés en el cuerpo de un ser humano o animal sin recurrir a técnicas quirúrgicas u otras técnicas invasivas. Una de tales ramificaciones de los diagnósticos médicos se refiere a los agentes para la formación de imágenes, a su administración al cuerpo, y a la recolección y al análisis de los datos para la formación de la imagen, resultantes.

Los agentes para la formación de imágenes son entidades químicas que tienen un grupo detectable que da lugar a una señal que es detectada por medios externos al cuerpo. Una señal para la formación de imágenes es una que surge activamente a partir de una emisión detectable desde el propio agente para la formación de imágenes, o detectable pasivamente como un resultado de la estimulación del agente para la formación de imágenes por medios externos. Una vez que un agente para la formación de imágenes es administrado al cuerpo, su distribución a través de los tejidos, las células y las cavidades internas del cuerpo puede ser verificada por un detector. El detector recolecta la información que es utilizada para generar una imagen, por lo cual proporciona información valiosa acerca del medio ambiente interno del cuerpo. La persona experta en el arte conoce numerosas técnicas de formación de imágenes que involucran agentes de formación de imágenes y medios de detección externos.

Una ramificación bien conocida de las técnicas formadoras de imágenes está basada en agentes para la formación de imágenes etiquetados con uno o más radioisótopos específicos. La técnica para la formación de imágenes conocida como la tomografía computarizada con emisión de un solo fotón (SPECT, por sus siglas en inglés) es utilizada para la detección de la radiación emitida a partir de ciertos radioisótopos en desintegración tales como 99Tc, 123I, y 201T1. Una técnica alternativa conocida como tomografía con emisión de positrones (PET, por sus siglas en inglés) es utilizada para detectar la radiación emitida desde ciertos radioisótopos en desintegración tales como 1:LC, 13N, 18F y 64Cu.

Los agentes para la formación de imágenes fluorescentes, que tienen un grupo detectable fluorescente, también ya son bien conocidos. La radiación emitida desde el grupo fluorescente es detectada y utilizada para generar una imagen que muestra la distribución del agente para la formación de imágenes.

Los agentes para la formación de imágenes de rayos X, también conocidos como agentes de contraste, tienen un grupo detectable que atenúa un haz de rayos X. Por la administración del agente para la formación de imágenes, y tomando una imagen de rayos X del área objetivo, es posible obtener una imagen que muestra la concentración del agente para la formación de imágenes en esta área. Ya se sabe que los miembros que tienen un número elevado de electrones por átomo del elemento (que corresponde al peso atómico elevado) son especialmente efectivos en la atenuación de los rayos X. El yodo es bien conocido como un atenuador de rayos X fuerte, y por lo tanto es utilizado comúnmente en el grupo detectable en los agentes de contraste de los rayos X .

Los agentes para la formación de imágenes pueden ser utilizados en la técnica conocida como la formación de imágenes por resonancia magnética (MRI, por sus siglas en inglés). Los agentes para la formación de imágenes de MRI, también conocidos como agentes de contraste, alteran ciertas propiedades de las moléculas en la proximidad del agente para la formación de imágenes, haciendo posible así que un detector distinga las áreas en las cuales los agentes para la formación de imágenes se han acumulado. La información recolectada del detector hace posible la generación de una imagen que proporciona una visibilidad mejorada de la estructura interna del cuerpo. Los agentes para la formación de imágenes de MRI son detectables a causa de que los mismos alteran los tiempos de relajación de los protones en los tejidos y las cavidades corporales en la proximidad inmediata de los agentes . Los agentes de formación de imágenes utilizados más comúnmente para la mejora del contraste de MRI son macrociclos a base de gadolinio, particularmente que contienen gadolinio.

Existe una necesidad continua de agentes para la formación de imágenes mejorados que hagan posible una visualización más detallada de las células y los tejidos del cuerpo de un ser humano o animal. En particular, existe una necesidad de agentes para la formación de imágenes que puedan ser colocados como objetivos en los tejidos y/o en las células específicas. Varios métodos para ubicar como un objetivo una célula ya son conocidos e incluyen las nanomoléculas activadas por el pH (Org. Lett. 2006, 8, 3363) , la formación mejorada de imágenes de nanopartículas (Cáncer Biomarkers 2009, 5, 59), la Terapia de Enzimas de Profármacos Dirigidas al Anticuerpo ADEPT (Clin Cáncer Res, 2000 6, 765-72) , la conjugación de anticuerpos -fármacos (Curr Opin Chem Biol. 2010, 14, 529-37).

En particular, existe una necesidad de agentes de formación de imágenes que permitan una formación de imágenes selectivas de las células monocíticas, en particular los macrófagos . La formación de imágenes, no invasiva, de tales células es esencial para la identificación in vivo de los sitios de los puntos focales de las células inflamatorias en el progreso de las enfermedades tales como la aterosclerosis, COPD y artritis reumatoide .

Breve Descripción de la Invención Esta invención hace posible obtener agentes para la formación de imágenes que produzcan una señal de formación de imágenes intracelulares proporcional con respecto a la cantidad de la carboxi esterasa intracelular hCEl en las células independientemente de la cantidad de la carboxi esterasa intracelular hCE-2 y/o hCE-3 en las células .

Se aprovecha la ventaja del hecho de que las moléculas lipofílicas (de baja polaridad o de carga neutral) pasen a través de la membrana de la célula y se introducen a las células de manera relativamente fácil, y moléculas hidrofílicas (de polaridad más elevada, cargadas) no lo hacen. Por consiguiente, si una porción lipofílica está fijada a un agente para la formación de imágenes dado, permitiendo que el agente se introduzca a la célula, y si esta porción es convertida en la célula a una de una polaridad más elevada, se va a esperar que el agente con la porción de polaridad más elevada fijada, podría acumularse dentro de la célula. La acumulación del agente para la formación de imágenes con la porción de polaridad más elevada fijada, se espera por lo tanto que conduzca a una concentración incrementada y una residencia prolongada en la célula.

La presente invención hace uso del hecho de que existen enzimas de carboxilesterasa dentro de las células, las cuales pueden ser utilizadas para hidrolizar una porción del éster del alfa aminoácido hasta un agente de formación de imágenes dado con respecto al ácido original. Por lo tanto, un agente para la formación de imágenes puede ser enlazado covalentemente a un éster de alfa aminoácido y administrado, en tal forma que el mismo se introduzca fácilmente a la célula en donde el mismo es hidrolizado eficientemente por una o más carboxilesterasas intracelulares , y el conjugado del agente para la formación de imágenes del alfa aminoácido resultante se acumula dentro de la célula, permitiendo por consiguiente la detección y la formación de imágenes selectiva de este tipo de célula. También se ha encontrado que por la modificación de la porción del alfa aminoácido, o la manera en la cual el mismo es enlazado covalentemente, los agentes para la formación de imágenes pueden ser ubicados como objetivo para los monocitos y los macrófagos. Aquí, a menos que se especifique "monocito" o "monocitos" , el término macrófago o macrófagos será utilizado para denotar los macrófagos (incluyendo los macrófagos asociados al tumor) y/o los monocitos.

Breve Descripción de las Figuras La invención será descrita ahora, a manera de ejemplo con referencia a las figuras, en las cuales: La Figura 1 muestra la expresión absoluta de hCE-1, hCE-2, y hCE-3 en las líneas celulares monocíticas y no monocíticas; y la Figura 2 muestra la expresión relativa de las líneas celulares de hCE-1 en THP-1, HL-60 y KG-1; y la Figura 3 muestra células de HL60 (que contienen cantidades insignificantes de hCE-1) teñidas con un agente para la formación de imágenes de acuerdo con la invención (Ejemplo 1) , 30 minutos después del lavado del tinte; y la Figura 4 muestra las células de THP1 (que contienen cantidades significativas de hCE-1) teñidas con un agente para la formación de imágenes de acuerdo con la invención (Ejemplo 1) , 30 minutos después del lavado del tinte; y la Figura 5 muestra gráficamente el incremento bajo en la fluorescencia después del tratamiento de las células de KG-1 (que contienen cantidades insignificantes de hCE-1) con un agente para la formación de imágenes de acuerdo con la invención (Ejemplo 1) ; y la Figura 6 muestra gráficamente el incremento elevado en la fluorescencia después del tratamiento de las células de THP-1 (que contienen cantidades significativas de hCE-1) con un agente para la formación de imágenes de acuerdo con la invención (Ejemplo 1) .

La Figura 7 muestra esquemáticamente la reducción del agente para la formación de imágenes de la invención a hCE-1.

La Figura 8 muestra el compuesto del Ejemplo 3 y su aglutinación predicha a la estructura cristalina 1XM1 del hCE-1.

Descripción Detallada de la Invención La presente invención hace posible obtener un agente para la formación de imágenes de las células que produce una señal de formación de imágenes intracelulares proporcional a la cantidad de hCE-1 en las células independientemente de la cantidad de hCE-2 y/o hCE-3 en las células, el agente para la formación de imágenes es un conjugado covalente de (a) un agente para la formación de imágenes y (b) un éster de alfa aminoácido, mono o disustituido, en donde (a) está enlazado directamente a (b) , o (a) está enlazado indirectamente a (b) por un radical enlazador, y en donde el enlace directo o indirecto es por medio del grupo amino de (b) , y en donde el grupo amino no está enlazado directamente a un grupo carbonilo, y en donde la parte del éster del alfa aminoácido, mono o di- sustituido, es hidrolizable selectivamente a la parte del ácido carboxílico correspondiente por la enzima de carboxilesterasa intracelular hCE-1 con relación a las enzimas intracelulares hCE-2 o hCE-3.

Como se estableció, la invención está relacionada con la modificación de los agentes para la formación de imágenes. La invención es de aplicación general, no restringida por la identidad química del agente para la formación de imágenes.

La porción del éster del alfa aminoácido obviamente debe ser un substrato para la carboxilesterasa si el primero va a ser hidrolizado por el último dentro de la célula. Las carboxilesterasas intracelulares son más bien confusos en general, porque su capacidad para la hidrolizacion no depende de requerimientos estructurales muy estrictos del substrato del éster de aminoácido. Por consiguiente, la mayoría de los métodos del enlace covalente de la porción del éster del alfa aminoácido a un agente para la formación de imágenes permitirá la hidrólisis.

Las enzimas de carboxilesterasa intracelulares capaces de la hidrolizacion del grupo de éster de un éster de alfa aminoácido conjugado al ácido correspondiente incluyen los tres isotipos hCE-1 (también conocido como CES-1) , hCE-2 (también conocido como CES-2) y hCE-3 (Drug Disc. Today 2005, 313.325) de la enzima de carboxilesterasa humana ("hCE") conocida. Aunque estas se considera que van a ser las enzimas principales, otras enzimas de carboxilesterasa tales como la bifenilhidrolasa (BPH) también puede tener un papel en la hidrolización de los conjugados.

En ensayo de las células rotas descrito posteriormente es un método simple de confirmación de que un conjugado dado del agente para la formación de imágenes y el éster del alfa aminoácido, o un éster del alfa aminoácido dado que va a ser evaluado como una porción del éster de carboxilesterasa posible, es hidrolizado cuando sea requerido. Estas enzimas también pueden ser expresadas fácilmente utilizando técnicas recombinantes , y las enzimas recombinantes pueden ser utilizadas para confirmar o determinar que ocurra la hidrólisis.

Es una característica de la invención que el conjugado deseado retenga la porción del alfa aminoácido enlazado covalentemente cuando es hidrolizado por la carboxilesterasa dentro de la célula, puesto que la misma es el grupo carboxilo polar de aquella porción que previene o reduce la depuración del conjugado hidrolizado desde la célula, y por esto contribuye a su acumulación dentro de la célula. Puesto que las células en general contienen varios tipos de enzimas de peptidasa, es preferible que el conjugado, o más especialmente el conjugado hidrolizado (el ácido correspondiente) , no sea un substrato para tales peptidasas. En particular, se prefiere fuertemente que el grupo de éster del alfa aminoácido no sea el elemento C-terminal de una porción del dipéptido en el conjugado. Además, como se explicará posteriormente, para lograr la selectividad del macrofago es esencial que el grupo amino de la porción del éster de alfa aminoácido no sea enlazada directamente a un grupo carbonilo. Sin embargo, aparte de estas limitaciones sobre el modo de la fijación covalente, el grupo del éster del alfa aminoácido puede ser fijado covalentemente al agente para la formación de imágenes por medio de su grupo amino. En algunos casos el agente para la formación de imágenes tendrá un punto conveniente de fijación para la porción del éster del alfa aminoácido, y en otros casos una estrategia sintética tendrá que ser contemplada para su fijación.

Se ha encontrado que las células que solamente expresan las carboxilesterasas hCE-2, y/o hCE-3 y las formas recombinantes de estas enzimas hidrolizarán solamente los conjugados del éster de aminoácido a sus ácidos resultantes si el nitrógeno del grupo alfa aminoácido está ya sea no sustituido o está enlazado directamente a un grupo carbonilo, mientras que las células que contienen hCE-1, o el hCE-l recombinante puede hidrolizar los conjugados de aminoácidos con una amplia gama de grupos sobre el nitrógeno. Este requerimiento de selectividad de hCE-2 y hCE-3 puede ser cambiado para aprovechar la ventaja en donde se requiera que el modulador deba ubicar como objetivo las enzimas o receptores en ciertos tipos de células solamente. Se ha encontrado que las cantidades relativas de estas tres enzimas de carboxilesterasa varían entre los tipos de células (véase la Figura 1 y la base de datos en http://symatlas.gnf.org/SymAtlas (nótese en esta base de datos que hCE-3/CES3 es referido por el símbolo FLJ21736) ) . Si el modulador está propuesto para actuar solamente en los tipos de células en donde hCE-1 es encontrado, la fijación de una porción del éster del alfa aminoácido en donde el grupo amino está enlazado directamente a un grupo diferente que el carbonilo conduce a un conjugado del modulador hidrolizado que se acumula preferentemente en las células con concentraciones efectivas de hCE-1. Dicho de otra manera, la acumulación específica del ácido derivado del conjugado del agente para la formación de imágenes en las células que expresan hCE-1 puede ser lograda por el enlace de la porción del éster del alfa aminoácido al agente para la formación de imágenes por medio del grupo amino de la parte del éster del aminoácido, pero no de tal modo que el nitrógeno del grupo amino sea enlazado directamente a un grupo carbonilo (por ejemplo el enlace por medio de un enlace de amida -NH-C(=0)-no es permitido) .

Los macrófagos ya se sabe que desempeñan un papel clave en los trastornos inflamatorios por medio de la liberación de las citoquinas en particular TNFa e IL-1 (van oon et al Arthritis and Rheumatism, 2003, 1229-1238). En la artritis reumatoide los mismos son contribuyentes principales a la inflamación de las articulaciones y la destrucción de las articulaciones (Conell en N. Eng J. Med. 2004, 350, 2591-2602) . Los macrófagos también están involucrados en el crecimiento y desarrollo de los tumores (Naldini y Carraro en Curr Drug Targets Inflamm Allergy, 2005, 3-8) . Por consiguiente, los agentes que forman imágenes selectivamente de las células de los macrófagos podrían ser valiosas en el diagnóstico del cáncer, la inflamación y las enfermedades autoinmunológicas , por ejemplo la artritis. La ubicación como objetivo de los tipos de células específicas se podría esperar que conduzca a un mayor contraste en los resultados de la formación de imágenes, por ejemplo la artritis. La presente invención hace posible un método de ubicación como objetivo de los agentes para la formación de imágenes con respecto a los macrófagos, el cual está basado en la observación anterior acerca de la manera en la cual la porción del éster del alfa aminoácido está enlazada al agente para la formación de imágenes lo cual determina si es hidrolizada por las carboxilesterasas específicas, y por consiguiente si el ácido resultante ya sea se acumula o no en los diferentes tipos de células. Específicamente, se ha encontrado que la enzima de hCE-1 es expresada principalmente en las células monocíticas, tales como los macrófagos. En los conjugados de la invención, cuando el nitrógeno de la porción del éster del alfa aminoácido está sustituido pero no enlazado directamente a una porción del grupo carbonilo, el éster solamente será hidrolizado por hCE-1 y por consiguiente los conjugados del agente de formación de imágenes hidrolizado con esterasa solamente se acumulará en las células que contienen hCE-1 tales como las células monocíticas, por ejemplo los macrófagos.

Por lo tanto, la presente invención también proporciona un método para la formación de imágenes, para la formación de imágenes de las células de macrófagos que comprenden llevar a cabo un estudio para la formación de imágenes sobre un sujeto utilizando el agente para la formación de imágenes de la invención. El método puede comprender una etapa de proporcionar el agente para la formación de imágenes al sujeto, o el agente para la formación de imágenes puede ser pre-suministrado .

La presente invención también proporciona el agente para la formación de imágenes de la invención para su uso como un agente para la formación de imágenes para las células de los macrófagos. El agente para la formación de imágenes también puede ser utilizado en un método que comprende suministrar el agente a un sujeto y formar imágenes de las células de los macrofagos del sujeto. Además se proporciona el uso de un agente para la formación de imágenes de la invención en la manufactura de un agente para su uso en un método que comprende el suministro del agente a un sujeto y formar imágenes de las células de macrofagos del sujeto.

La invención puede ser utilizada en una variedad de estudios para la formación de imágenes que incluyen, por ejemplo, la formación de imágenes de placas ateroscleróticas o las articulaciones de los pacientes artríticos.

Existen por supuesto muchos grupos de ésteres posibles que en un principio pueden estar presentes en la porción del éster de carboxilesterasa para la fijación al agente para la formación de imágenes. De manera semejante, existen muchos alfa aminoácidos, tanto naturales como no naturales, que difieren de las cadenas laterales sobre el carbón alfa, que pueden ser utilizados como ésteres en la porción del éster de carboxilesterasa. Algunos ésteres de alfa aminoácido son hidrolizados rápidamente por uno o más de los isotipos hCE-1, 2 y 3 o las células que contienen estas enzimas, mientras que los otros son hidrolizados más lentamente, o hidrolizados solamente a un grado muy pequeño. En general, si la carboxilesterasa hidroliza el éster del aminoácido libre al ácido original, someterá al N-carbonilo bajo la dependencia de hCE-2 y hCE-3 descritos anteriormente, también hidroliza la porción del éster de aminoácido cuando se conjuga covalentemente con el agente para la formación de imágenes. Por consiguiente, el ensayo de células rotas y/o el ensayo de carboxilesterasa aislada descrito aquí, proporciona un primer tamiz para los esteres, directo, rápido y simple, que tiene el perfil de hidrólisis requerido. Las porciones del éster de aminoácido seleccionadas porque la manera puede ser entonces reevaluada en el mismo ensayo de carboxilesterasa cuando se conjuga con el agente para la formación de imágenes por medio de la química de conjugación elegida, para confirmar que está todavía un substrato de carboxilesterasa en estos fondos. Los tipos adecuados de los ésteres de aminoácidos serán descritos posteriormente, pero en este punto se puede mencionar que se ha encontrado que los ésteres de t-butilo de los alfa aminoácidos son substratos relativamente pobres para hCE-1, 2 y 3, mientras que los ésteres de ciclopentilo son hidrolizados efectivamente. Los alfa aminoácidos adecuados también serán descritos con mayor detalle posteriormente, pero en este punto se puede mencionar que la enilalanina, homofenilalanina, fenilglicina y leucina son generalmente adecuados, y los ésteres de los alcoholes secundarios son preferidos .

Como se estableció anteriormente, el éster de alfa aminoácido puede ser conjugado hasta el agente para la formación de imágenes por medio del grupo amino del éster del aminoácido. Un radical enlazador puede estar presente entre la porción del éster de aminoácido y el agente para 1 formación de imágenes. Por ejemplo, el éster del alf aminoácido puede ser conjugado hasta el agente para 1 formación de imágenes como un radical de la fórmula (IA) (IB) : en donde Ri es un grupo éster que es hidrolizable por una o más enzimas de carboxilesterasa intracelular a un grupo de ácido carboxílico; R2 es la cadena lateral de un alfa aminoácido natural o no natural; R3 es H o R2; Y es un enlace -S(=0)2-, -C(=S)-NR4-, -C(=NH)NR4-, -S(=0)2NR -, o -NR4-C(=0) en donde R4 es hidrógeno o alquilo de Ci-C6 sustituido opcionalmente; L es un radical divalente de la fórmula - (Alq^míQ lq^p- en donde m, n y p son independientemente 0 ó 1, Q es (i) un radical carbocíclico o heterocíclico, mono o bicíclico, divalente, sustituido opcionalmente , que tiene 5-13 miembros del anillo, o (ii) , en el caso en donde tanto m como p son 0 , un radical divalente de la fórmula -X^Q1- o -?^-?2- en donde X2 es -0-, -S- o NRA- en donde RA es hidrógeno o alquilo de Ci-C3 sustituido opcionalmente, y Q1 es un radical carbocíclico o heterocíclico, mono o bicíclico, divalente, sustituido opcionalmente, que tiene 5-13 miembros del anillo, Alq1 y Alq2 representan independientemente radicales de cicloalquilo de C3-C7, divalentes, sustituidos opcionalmente, o radicales de alquileno de Ci-C6, alquenileno de C2-C6, o alquinileno de C2-C6, rectos o ramificados, sustituidos opcionalmente, que pueden contener o terminar opcionalmente en un enlace de éter (-0-) , tioéter (-S-), o amino ( -NRA) en donde RA es hidrógeno o alquilo de Ci-C3 sustituido opcionalmente; X representa un enlace, -O-, -C(=0)-, -NR«C(=0)-, -C(=0)NR4-, -NR4C(=0)NR5-, -NR4S(=0)2-, o -S(=0)2NR - en donde R4 y R5 son independientemente hidrógeno o alquilo de C3.-C6 sustituido opcionalmente; z es 0 ó 1; y el anillo D es un grupo heterociclilo de 3 a 7 miembros, sustituido opcionalmente, en donde: Ri está enlazado a un carbono del anillo adyacente al nitrógeno del anillo mostrado, y el anillo D está fusionado opcionalmente a un segundo anillo que comprende un fenilo, un heteroarilo de 5 a 6 miembros, carbociclilo de C3-7 o un grupo heterociclilo de 5 a 6 miembros, en donde cuando el anillo D está fusionado a un segundo anillo que comprende un grupo fenilo, heteroarilo de 5 a 6 miembros, carbociclilo de C3-7 o heterociclilo de 5 a 6 miembros, entonces el grupo enlazador -Y-L-X- (CH2) z puede ser de un átomo del anillo en el anillo D o el segundo anillo.

En un aspecto de la invención, X representa un enlace C(=0)-, -S(=0)2-, -NR4C(=0)-, -C(=0)NR4-, -NR4C (=0) NR5- , -NR4S( =0) 2 - , o -S( =0)2NR4- en donde R4 y R6 son independientemente hidrógeno o alquilo de Ci-C6 sustituido opcionalmente .

En estos radicales Ri es un grupo éster de carboxilo que es hidrolizable por una o más enzimas de carboxilesterasa intracelular hasta un grupo de ácido carboxílico y el grupo Ri-C-NH- forma el grupo del alfa aminoácido. En la fórmula (IA) el alfa aminoácido es lineal y está enlazado por medio del grupo amino al enlazador -Y-L-X-(CH2)Z- y por consiguiente al agente para la formación de imágenes. En la fórmula (IB) el grupo del alfa aminoácido es cíclico, con un anillo formado entre el grupo amino y el átomo de carbono alfa, el anillo está enlazado además al agente para la formación de imágenes por medio del radical enlazador -Y-L-X- (CH2) z- .

El término "éster" o "grupo de carboxilo esterificado" significa un grupo R90(C=0)- en el cual R9 es el grupo que caracteriza el éster, derivado notacionalmente del alcohol R9OH.

Cuando se utilice aquí, el término "alquilo de (Ca- Cb) " en donde a y b son números enteros, se refiere a un radical alquilo de cadena recta o ramificada que tiene desde a hasta b átomos de carbono. Así, cuando a es 1 y b es 6, por ejemplo, el término incluye metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, n-pentilo y n-hexilo.

Cuando se utilice aquí, el término "radical de (Ca- Cb)alquileno divalente" en donde a y b son números enteros se refiere a una cadena de hidrocarburos saturada que tiene desde a hasta b átomos de carbono y dos valencias insatisfechas .

Cuando se utilice aquí, el término "(Ca- Cb) alquenilo" en donde a y b son números enteros se refiere a una porción de alquenilo de cadena recta o ramificada que tiene desde a hasta b átomos de carbono que tiene al menos un doble enlace de la estereoquímica ya sea E o Z en donde sea aplicable. El término incluye, por ejemplo, vinilo, alilo, 1 y 2-butenilo y 2-metil-2-propenilo.

Cuando se utilice aquí, el término "radical de (Ca- Cb) alquenileno divalente" significa una cadena de hidrocarburos que tiene desde a hasta b átomos de carbono, al menos un doble enlace, y dos valencias no satisfechas.

Cuando se utilice aquí, el término "alquinilo de Ca-Cb" en donde a y b son números enteros se refiere a grupos de hidrocarburos de cadena recta o de cadena ramificada que tienen desde dos hasta seis átomos de carbono y que tienen además un triple enlace. Este término podría incluir, por ejemplo, etinilo, 1-propinilo, 1- y 2-butinilo, 2-metil-2-propilo, 2-pentinilo, 3-pentinilo, 4-pentinilo, 2-hexinilo, 3-hexinilo, 4-hexinilo y 5-hexinilo.

Cuando se utilice aquí, el término "radical de (Ca-Cb) alquinileno divalente" en donde a y b son números enteros, se refiere a una cadena de hidrocarburos divalentes que tiene desde 2 hasta 6 átomos de carbono, y al menos un triple enlace .

Cuando se utilice aquí, el término "carbocíclico" se refiere a un radical mono, bi o tricíclico que tiene hasta 16 átomos del anillo, la totalidad de los cuales son carbono, e incluyen arilo y cicloalquilo .

Cuando se utilice aquí, el término "cicloalquilo" se refiere a un radical carbocíclico saturado, monocíclico, que tiene desde 3-8 átomos de carbono e incluye, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo.

Cuando se utilice aquí, el término no calificado "arilo" se refiere a un radical aromático, carbocíclico, mono, bi o tri-cíclico, e incluye los radicales que tienen dos anillos aromáticos carbocíclicos monocíclicos que están enlazados directamente por un enlace covalente . Son ilustrativos de tales radicales el fenilo, bifenilo y naftilo .

Cuando se utilice aquí, el término no calificado "heteroarilo" se refiere a un radical aromático mono, bi o tri-cíclico que contiene uno o más heteroatomos seleccionados de S, N y O, e incluye radicales que tienen dos anillos monocíclicos, o uno de tales anillos monocíclicos y un anillo de arilo monocíclico, que están enlazados directamente por un enlace covalente. Son ilustrativos de tales radicales el tienilo, benzotienilo, furilo, benzofurilo, pirrolilo, imidazolilo, bencimidazolilo, tiazolilo, benzotiazolilo, isotiazolilo, bencisotiazolilo, pirazolilo, oxazolilo, benzoxazolilo, isoxazolilo, bencisoxazolilo, isotiazolilo, triazolilo, benzotriazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, indolilo y indazolilo.

Cuando se utilice aquí, el término no calificado "heterociclilo" o "heterocíclico" incluye "heteroarilo" como se definió anteriormente, y en su significado no aromático se refiere a un radical no aromático, mono, bi o tricíclico (por ejemplo saturado) que contiene uno o más heteroátomos seleccionados de S, N y O, y a los grupos que consisten de un radical no aromático monocíclico que contiene uno o más de tales heteroátomos que están enlazados covalentemente a otros de tales radicales o a un radical carbocíclico monocíclico. Son ilustrativos de tales radicales los grupos pirrolilo, furanilo, tienilo, piperidinilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, pirazolilo, piridinilo, pirrolidinilo, pirimidinilo, azepinilo, morfolinilo, piperazinilo, indolilo, morfolinilo, benzfuranilo, piranilo, isoxazolilo, bencimidazolilo, metilendioxifenilo, etilendioxifenilo, maleimido y succinimido.

A menos que se especifique de otra manera en el contexto en el cual esto ocurre, el término "sustituido" cuando se aplica a cualquier porción aquí, significa sustituido con hasta cuatro substituyentes compatibles, cada uno de los cuales puede ser independientemente, por ejemplo, (C!-C6) alquilo, (Ci-C6) alcoxi , hidroxi, hidroxi (Ci-C6) alquilo, mercapto, mercapto (Ci-C6) alquilo, (Ci-Cg) alquiltio, fenilo, halo, (incluyendo fluoro, bromo y cloro) , trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, nitrilo (-CN), oxo, -COOH, -COORA, -CORA, -S02RA, -CONH2, -S02NH2, -CONHRA, -S02NHRA, -CONRARB, -S02NRARB, -NH2, -NHRA, -NRARB, -OCONH2, -OCONHRA, -OCONRARB, -NHCORA, -NHCOORA, -NRBCOORA, -NHS02ORA, -NRBS02OH, -NRBS02ORA, -NHCONH2, -NRACONH2) -NHCONHRB, -NRACONHRB, -NHCONRARB, o -NRACONRARB en donde RA y RB son independientemente un (Ci-C6) alquilo, (C3-C6) cicloalquilo, fenilo o heteroarilo monocicliclo que tiene 5 ó 6 átomos de anillo. Un "substituyente opcional" puede ser uno de los grupos substituyentes anteriores.

El término "cadena lateral de un alfa aminoácido natural o no natural" se refiere al grupo R1 en un aminoácido natural o no natural de la fórmula NH2-CH (R1) -COOH.

Los ejemplos de las cadenas laterales de los alfa aminoácidos naturales o no naturales, incluyen aquellos de alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, cistina, ácido glutámico, histidina, 5-hidroxilisina, 4-hidroxiprolina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina, valina, ácido a-aminoadipíco, ácido oc-amino-n-butírico, 3 , -dihidroxifenilalanina, homoserina, cc-metilserina, ornitina, ácido pipecólico, y tiroxina. Las cadenas laterales preferidas incluyen aquellas de L-leucina, L-fenilglicina, L-ciclohexilglicina, L-tButil serina, dimetil glicina y alanina.

Los alfa-aminoácidos naturales que contienen los substituyentes funcionales, por ejemplo los grupos amino, carboxilo, hidroxi, mercapto, guanidilo, imidazolilo, o indolilo en sus cadenas laterales características incluyen arginina, lisina, ácido glutámico, ácido aspártico, triptófano, histidina, serina, treonina, tirosina, y cisteína. Cuando R2 en los compuestos de la invención es una de estas cadenas laterales, el substituyente funcional puede estar protegido opcionalmente .

El término "protegido" cuando se utiliza con relación a un sustituyente funcional en una cadena lateral de un alfa-aminoácido natural significa un derivado de tal sustituyente que es substancialmente no funcional. Por ejemplo, los grupos carboxilo pueden ser esterificados (por e emplo como un éster de alquilo de Ci-C6) , los grupos amino pueden ser convertidos a las amidas (por ejemplo como una NHCOCi-C6 alquil amida) o carbamatos (por ejemplo como un NHC (=0) OCx-Cg alquilo o NHC ( =0) 0CH2Ph carbamato) , los grupos hidroxilo pueden ser convertidos a los éteres (por ejemplo un OC!-C6 alquilo o un éter 0(Ci-C6 alquilo) fenílico) o ésteres (por ejemplo un éster de 0C(=0)Ci-C6 alquilo) y los grupos tiol pueden ser convertidos a los tioéteres (por ejemplo un tioéter de tere-butilo o bencilo) o tioésteres (por ejemplo un tioéster de SC(=0)Ci-C6 alquilo) .

Los ejemplos de las cadenas laterales de los alfa aminoácidos no naturales incluyen aquellos referidos posteriormente en la descripción de los grupos R2 adecuados para su uso en los compuestos de la presente invención.

Cuando se utilice aquí el término "sal" incluye sales de adición básica, de adición acida y sales cuaternarias. Los compuestos de la invención que son ácidos pueden formar sales, incluyendo sales farmacéuticamente aceptables, con bases tales como hidróxidos de metal alcalino, por ejemplo hidróxidos de sodio y potasio; hidróxidos de metal alcalinotérreo por ejemplo hidróxidos de calcio, bario y magnesio; con bases orgánicas por ejemplo la N-metil-D-glucamina, colina tris (hidroximetil) amino-metano, L-arginina, L-lisina, N-etil piperidina, dibencilamina y semejantes. Aquellos compuestos que son básicos pueden formar sales, incluyendo las sales farmacéuticamente aceptables con ácidos inorgánicos, por ejemplo ácidos hidrohálicos tales como los ácidos clorhídrico o bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico o ácido fosfórico y semejantes, y con ácidos orgánicos por ejemplo con los ácidos acético, tartárico, succínico, fumárico, maleico, málico, salicílico, cítrico, metanosulfónico, p- toluenosulfónico, benzoico, bencenosulfónico, glutámico, láctico, y mandélico y semejantes.

El grupo éster Rj Además del requerimiento de que el grupo éster deba ser hidrolizable por una o más enzimas intracelulares , puede ser preferible para algunas aplicaciones (por ejemplo para la administración sistémica del conjugado) que sea resistente a la hidrólisis por las enzimas de hidrolización de éster de carboxilo en el plasma, puesto que esto asegura que el modulador conjugado sobrevivirá después de la administración sistémica durante un periodo lo suficientemente prolongado para penetrar las células como el éster. Es un asunto simple probar cualquier conjugado dado para medir su vida media útil en el plasma como el éster, por incubación en el plasma. Sin embargo, se ha encontrado que los ásteres derivados notacionalmente de los alcoholes secundarios son más estables con respecto a las enzimas de hidrolización del éster de carboxilo en el plasma que aquellas derivadas de los alcoholes primarios. Además, se ha encontrado que aunque los esteres derivados notacionalmente de los alcoholes terciarios son generalmente estables con respecto a las enzimas de hidrolización del éster de carboxilo en el plasma, las mismas frecuentemente también son relativamente estables con respecto a las carboxilesterasas intracelulares . Tomando estos descubrimientos en cuenta, actualmente se prefiere que Ri en las fórmulas (IA) y (IB) anteriores, sean un grupo éster de la fórmula -(C=0)ORi en donde Ri4 es R8R9Ri0C- en donde (i) R8 es hidrógeno o (Ci-C3) alquil- (Z1) a- [ (Cx- C3)alquil]b- o (C2-C3) alquenil- (Z1) a- [ (d-C3) alquil] b- , sustituido opcionalmente , en donde a y b son independientemente 0 o 1 y Z1 es -O-, -S-, o -NRn- en donde Rn es hidrógeno o (Ci-C3) alquilo; y R9 y Rio son independientemente hidrógeno o (Ci-C3) alquil- ; (ii) R8 es hidrógeno o R12R13N- (C1-C3) alquil- , sustituido opcionalmente, en donde Ra2 es hidrógeno o (Ci-C3) alquilo y Ri3 es hidrógeno o (C1-C3) alquilo; o Ri2 y R13 junto con el nitrógeno al cual los mismos están fijados forman un anillo heterocíclico monocíclico, sustituido opcionalmente, de 5 ó 6 átomos del anillo o un sistema de anillo heterocíclico bicíclico de 8 a 10 átomos del anillo, y R9 y R10 son independientemente hidrógeno o (C1-C3) alquil- ; o (iii) R8 y R9 tomados junto con el carbono al cual los mismos están fijados, forman un anillo carbocíclico monocíclico unido por un puente o monocíclico sustituido opcionalmente, de 3 a 7 átomos del anillo o un sistema de anillo carbocíclico monocíclico unido por un puente o bicíclico de 8 a 10 átomos del anillo, y Rio es hidrógeno.

En los casos (i) , (ii) y (iii) anteriores, "alquilo" incluye fluoroalquilo .

Dentro de estas clases (i) , (ii) y (iii) , io frecuentemente es hidrógeno. Los ejemplos específicos de R14 incluyen metilo, trifluorometilo, etilo, n- o iso-propilo, n- , sec- o tere-butilo, neopentilo, ciclohexilo, ciclopentilo, norbornilo, alilo, fenilo, bencilo, 2-, 3- o 4-piridilmetilo, N-metilpiperidin-4 - ilo, tetrahidrofuran- 3 - ilo o metoxietilo, por ejemplo metilo, trifluorometilo, etilo, n-o iso-propilo, n- , sec- o tere-butilo, ciclohexilo, norbornilo, alilo, fenilo, bencilo, 2-, 3- o -piridilmetilo, N-metilpiperidin-4-ilo, tetrahidrofuran-3-ilo o metoxietilo. Actualmente se prefiere en donde Ri4 es neopentilo o ciclopentilo, en particular ciclopentilo.

La cadena lateral R2 de aminoácidos Sujeto al requerimiento de que el grupo éster Ri sea hidrolizable por las enzimas de carboxilesterasa intracelulares , la selección del grupo R2 de la cadena lateral puede determinar la velocidad de la hidrólisis. Por ejemplo, cuando el carbono en R2 adyacente al carbono del alfa aminoácido no contiene una ramificación, por ejemplo cuando R2 es etilo, isobutilo o bencilo, el éster es hidrolizado más fácilmente que cuando R2 está ramificado, por ejemplo como el isopropilo o t-butilo.

Los ejemplos de las cadenas laterales del aminoácido incluyen los grupos alquilo de Ci-C6, fenilo, 2,- 3-, o 4-hidroxifenilo, 2,- 3-, o 4 -metoxifenilo, 2, 3-, o 4 -piridilmetilo, bencilo, feniletilo, 2-, 3-, o 4 -hidroxibencilo, 2,- 3-, o 4 -benciloxibencilo, 2,- 3-, o 4- alcoxibencilo de Ci-C6, y benciloxi (alquilo de Ci-C6)-; el grupo de caracterización de un a aminoácido natural, en el cual cualquier grupo funcional puede ser protegido; los grupos - [Alq] nRs en donde Alq es un grupo (Ci-C6) alquilo o (C2-C6) alquenilo interrumpido opcionalmente por uno o más átomos de -0-, o -S- o los grupos -N(R7) - [en donde R7 es un átomo de hidrógeno o un grupo (Ci-C6) alquilo] , n es 0 ó 1, y R6 es un grupo cicloalquilo o cicloalquenilo sustituido opcionalmente ; un grupo bencilo sustituido en el anillo de fenilo por un grupo de la fórmula -OCH2COR8 en donde R8 es hidroxilo, amino, (Ci-C6) alcoxi , fenil (Ci-C8) alcoxi, (Ci.Ce) alquilamino, di ( (Ci-C6) alquil) amino, fenil (Ci.C6) alquilamino, el residuo de un aminoácido o un haluro ácido, el derivado de éster o amida del mismo, el residuo que está enlazado por medio de un enlace de amida, el aminoácido que es seleccionado de glicina, o ß alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptófano, serina, treonina, cisteína, metionina, asparagina, glutamina, lisina, histidina, arginina, ácido glutámico, y ácido aspártico; un grupo de (Ci-C6) alquilo heterocíclico, ya sea no sustituido o mono o di-sustituido en el anillo heterocíclico con halo, nitro, carboxi, (Ci-C3) alcoxi, ciano, (Ci-C6) alcanoilo, trifluorometil (Ci-C6) alquilo, hidroxi, formilo, amino, (Ci-C6) alquilamino, di- (Ci-C6) alquilamino, mercapto, (Ci-C6) alquiltio, hidroxi (Ci-C6) alquilo, mercapto (Ci-C6) alquilo o (Ci-C6) alquilfenilmetilo; y un grupo -CRaRt>Rc en el cual: cada uno de Ra, b y Rc es independientemente hidrógeno, (Ci-C6) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, fenil (Ci-Cg) alquilo, (C3-C8) cicloalquilo; o Rc es hidrógeno y Ra y Rb son independientemente fenilo o heteroarilo tal como piridilo; o Rc es hidrógeno, (Ci-C6) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, fenil (Cx-Ce) alquilo, o (C3-C8) cicloalquilo, y a Y ¾> junto con el átomo de carbono al cual los mismos están fijados, forman un cicloalquilo de 3 a 8 miembros o un anillo heterocíclico de 5 a 6 miembros; o Ra, ¾ y Rc junto con el átomo de carbono al cual los mismos están fijados forman un anillo tricíclico (por ejemplo adamantilo) ; o Ra y Rb son cada uno independientemente (Ci-C6) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, fenil (Ci-C6) alquilo, o un grupo como se definió para Rc posteriormente, diferente del hidrógeno, o Ra o Rb junto con el átomo de carbono al cual los mismos están fijados forman un anillo de cicloalquilo o heterocíclico, y Rc es hidrógeno, -OH, -SH, halógeno, -CN, -C02H, (Ci-C ) perfluoroalquilo, -CH2OH, -C02 (Ci-C6) alquilo, -O (??-06) alquilo, -O (C2-C6) alquenilo, -S (Ci-Ce) alquilo, -SO (Ci-C6) alquilo, -S02 (Ci-C6) alquilo, -S (C2-C6) alquenilo, -SO (C2-C6) alquenilo, -S02 (C2-C6) alquenilo o un grupo -Q-W en donde Q representa un enlace u -O, -S-, -SO-o -S02- y W representa un grupo fenilo, fenilalquilo, (C3-C8) cicloalquilo, (C3.C8) cicloalquilalquilo, (C4-C8) cicloalquenilo, (C4-C8) cicloalquenilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo, tal grupo puede estar sustituido opcionalmente por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de, hidroxilo, halógeno, -CN, -C02H, -C02 (Ci-C6) alquilo, -CONH2, -CONH (Ci-C6) alquilo, -CO HÍd-C6) alquilo) 2, -CHO, -CH2OH, (C1-C4) perfluoroalquilo, -0(Ci_ C6) alquilo, -S (Ci-C6) alquilo, -SO (Ci-C6) alquilo, -S02(Ci-C6) alquilo, N02, -NH2 , -NH (Ci-C6) alquilo, -N( (Ci-C6) alquil) 2, - HCOÍCi-Ce) alquilo, (Q Ce) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, (C3-C8) cicloalquilo, (C4-C8) cicloalquenilo, fenilo o bencilo.

Los ejemplos de los grupos R2 particulares incluyen bencilo, fenilo, ciclohexilmetilo, piridin-3 -ilmetilo, terc-butoximetilo, iso-butilo, sec-butilo, tere-butilo, 1-benciltio-l-metiletilo, 1-metiltio-l-metiletilo, y 1-mercapto-l-metiletilo, feniletilo. Actualmente, se prefieren los grupos R2 que incluyen fenilo, bencilo, terc-butoximetilo, feniletilo e iso-butilo.

El radical -Y-L-X- [CH2] a- Cuando el éster del alfa aminoácido es conjugado con el agente para la formación de imágenes por un radical de la fórmula (IA) o (IB) este radical (o enlace) surge de la estrategia de la química particular elegida para enlazar la porción del éster del aminoácido RiC(R3) (R2)NH-, o el grupo del aminoácido cíclico en el caso de la fórmula (IB) , al agente para la formación de imágenes. Claramente, la estrategia química para esta unión puede variar ampliamente, y así son posibles muchas combinaciones de las variables Y, L, X y z.

También se debe señalar que los beneficios de la porción del éster del alfa aminoácido descritos anteriormente (fácil entrada en la célula, la hidrólisis de la carboxilesterasa dentro de la célula, y la acumulación dentro de la célula del producto de la hidrólisis del ácido carboxílico) son mejor logrados cuando el enlace entre la porción del éster del aminoácido y el agente para la formación de imágenes no es un substrato para la actividad de la peptidasa dentro de la célula, lo cual podría conducir a la escisión del aminoácido desde la molécula. Por supuesto, la estabilidad para las peptidasas intracelulares es probada fácilmente por la incubación del compuesto con los contenidos de las células, alterados, y el análisis de cualquiera de tales escisiones.

Con las observaciones generales anteriores en mente, tomando las variables que establecen el radical -Y-L-X- [CH2] z- su vez: z puede ser 0 ó 1, de modo que un radical de metileno enlazado al modulador sea opcional. cuando el éster del alfa aminoácido es conjugado con el inhibidor como un radical de la fórmula (IA) o (IB) , Y se selecciona por ejemplo de un enlace, -S(=0)2-/ -C(=S)-NR4-, -C(=NH)-NR4- y -S(=0)2NR4, en donde R4 es hidrógeno o alquilo de Ci-C6 sustituido opcionalmente; y preferentemente Y es un enlace .

En el radical L, los ejemplos de los radicales de Alq1 y Alq2, cuando están presentes, incluyen -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2- , -CH=CH-, -CH=CHCH2-, -CH2CH=CH-, CH2CH=CHCH2- , -C=C-, -C=CCH2-, CH2C=C- , y CH2C=CCH2. Los ejemplos adicionales de Alq1 y Alq2 incluyen -CH2W-, -CH2CH2W-, -WCH2CH2W-, -CH2CH2WCH2-, -CH2CH2WCH (CH3) - , -CH2 CH2CH2- , -CH2WCH2CH2WCH2- , y -WCH2CH2- en donde W es -O-, -S-, -NH- , -N(CH3)-, o -CH2CH2N(CH2CH2OH) CH2- ; por ejemplo -CH2W-, -CH2CH2 -, -CH2CH2 CH2- , -CH2CH2WCH (CH3 ) - , -CH2 CH2CH2- , -CH2WCH2CH2WCH2- , y -WCH2CH2- en donde W es -O-, -S-, -NH- , -N(CH3)-, o -CH2CH2N (CH2CH2OH) CH2- . Los ejemplos adicionales de Alq1 y Alq2 incluyen los radicales de ciclopropilo, ciclopentenilo y ciclohexilo divalentes.

En L, cuando n es 0, el radical es una cadena de hidrocarburos (sustituida opcionalmente y que quizás tiene un enlace de éter, tioéter o amino) . Actualmente se prefiere que no existan sustituyentes opcionales en L. Cuando tanto m como p son 0, L es un radical carbocíclico o heterocíclico, mono o bicíclico, divalente, con 5-13 átomos del anillo (sustituido opcionalmente) . Cuando n es 1 y al menos uno de m y p es l, L es un radical divalente que incluye una cadena o cadenas de hidrocarburos y un radical carbocíclico o heterocíclico, mono o bicíclico, con 5-13 átomos de anillo (sustituido opcionalmente) . Cuando está presente, Q puede ser, por ejemplo, un radical fenilo, naftilo, ciclopropilo, ciclopentilo, o ciclohexilo divalente, o un radical heterocíclico, mono o bi-cíclico que tiene 5 a 13 miembros del anillo, tales como un radical piperidinilo, piperazinilo, indolilo, piridilo, tienilo, o pirrolilo, pero el 1,4-fenileno es preferido actualmente.

Específicamente, en algunas modalidades de la invención, m y p pueden ser 0 con n que es 1. En otras modalidades, n y p pueden ser 0 con m que es 1. En las modalidades adicionales, m, n y p todos pueden ser 0. En las modalidades todavía adicionales m puede ser 0, n puede ser 1 con Q que es un radical heterocíclico monocíclico, y p puede ser 0 ó 1. En las modalidades todavía adicionales, m y n ambos pueden ser iguales a 1 con Q que es un radical heterocíclico monocíclico y p que es 0 ó 1. Alq1 y Alq2, cuando están presentes, pueden ser seleccionados de -CH2-, -CH2CH2-, y -CH2CH2CH2- y Q puede ser 1 , 4 - fenileno . Alternativamente, Alq1 y Alq2, cuando están presentes, pueden ser seleccionados de -(CH2)X-, -Het1- (CH2) x- (Het1) y- y -CH=CH-, en donde x es O, 1, 2 Ó 3, y es O ó l y Het1 es -O- o -NH-, en particular de -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -0-CH2-, -0(CH2)2-, -0(CH2)20-, -0(CH2)2NH- y -CH=CH- y Q puede ser 1 , 4 -fenileno . En particular Alq1 puede ser metileno.

X puede representar un enlace, -O- o -NR4C(=0)-, en donde el N está enlazado al grupo Y, y en donde R4 representa hidrógeno o metilo, preferentemente hidrógeno.

Los ejemplos específicos del radical -Y-L-X- (CH2) z-incluyen -(CH2)V-, -(CH2)vO-, (CH2)wO- .j/ —(oyjoj- y " -(CHj)"0f" en donde v es l, 2, 3 o 4 y w es 1, 2 o 3, tal como -CH2-, -CH20-.

Los ejemplos adicionales del radical -Y-L-X- (CH2) z-incluyen - (CH2) X-Het2- , -CH2-Ph- (Het1) yy- (CH2) x- (Het2) y- y -CH2-Ph-CH=CH- , en donde Ph es un grupo 1 , 4 - fenileno, Het1 es -O- o -NH-, Het2 es -O-, -NH- o -NHC(=0)-, x es 0, 1 ó 2, y es 0 ó 1 e yy es 0 ó 1. En una modalidad, x, y e yy son todos 0. Alternativamente, y puede ser 1 y x puede ser 0, 1 ó 2, mientras que yy es 0 ó 1. En una modalidad adicional, y es 0, x es 1 ó 2 e yy es 1. Los ejemplos específicos del radical -Y-L-X- (CH2) z- incluyen -CH2-Ph-0- (CH) 2- , -CH2-Ph-0- (CH) 2-0- , CH2-Ph-0- (CH)2-NH-, -CH2-, -CH2CH2-, -CH2-Ph-, -CH2-Ph-0-, -CH2-Ph-CH=CH- , -CH2-Ph- (CH) 2-N-C(=0) - y - (CH) 2-N-C ( =0) - .

Como se describió anteriormente, la parte del éster de> los conjugados del éster del alfa aminoácido de la invención es hidrolizado selectivamente hasta la parte del ácido carboxílico correspondiente por la carboxilesterasa intracelular hCE-1 con relación a hCE-2 y hCE-3. Por ejemplo, la parte del éster puede ser hidrolizada al menos 2 veces más rápido que el ensayo de las células rotas (descrito posteriormente) basado en las células monocíticas que en el mismo ensayo utilizando células no monocíticas. Preferentemente, los conjugados del agente para la formación de imágenes son hidrolizados al menos 3 veces más rápido en las células monocíticas con relación a las células no monocíticas; más preferentemente al menos 5 veces más rápido; todavía más preferentemente al menos 10 veces más rápido; y todavía más preferentemente al menos 20 veces más rápido.

Para los compuestos de la invención que van a ser administrados de manera sistémica, los ésteres con una velocidad lenta de la escisión de la carboxilesterasa son preferidos, puesto que los mismos son menos susceptibles al metabolismo pre-sistémico. Su capacidad para alcanzar su tejido objetivo intacto por lo tanto es incrementada, y el éster puede ser convertido dentro de las células del tejido objetivo en el producto ácido. Sin embargo, para la administración local, en donde el éster es aplicado ya sea directamente al tejido objetivo o dirigido hacia allí, por ejemplo, por inhalación, frecuentemente será deseable que el éster tenga una velocidad rápida de escisión de la esterasa, para minimizar la exposición sistémica y los efectos secundarios indeseables consecuentes . En donde la porción de esterasa esté enlazada al agente para la formación de imágenes por medio de su grupo de amino, como en la fórmula (IA) o (IB) anteriores, si el carbono adyacente al carbón alfa del éster del alfa aminoácido está monosustituido, es decir R2 es CH2RZ (Rz es el mono-sustituyente) entonces los ásteres tienden a ser escindidos más rápidamente que si el carbono está di o tri-sustituido, como en el caso en donde R2 es, por ejemplo, fenilo o ciclohexilo. anillo D En el caso de la fórmula (IB) , el anillo D es típicamente un grupo heteroarilo o heterociclilo , de 3 a 7 miembros, no fusionado, en donde Rj. está enlazado a un átomo de carbono adyacente al átomo de nitrógeno mostrado en el anillo D. Típicamente, el anillo D es un grupo heteroarilo o heterociclilo, de 5 a 7 miembros, no fusionado, preferentemente un grupo heteroarilo o heterociclilo, de 5 ó 6 miembros, no fusionado. Más preferentemente el anillo D es un grupo heterociclilo de 5 a 6 miembros, no fusionado, por ejemplo un grupo heterociclilo de 5 a 6 miembros no fusionado, saturado, que contiene, además del átomo de nitrógeno mostrado en el anillo D, ninguno, uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y S. Los ejemplos de los grupos adecuados para el anillo D incluyen los grupos pirrolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo, piperidinilo, hexahidropirimidinilo, piperazinilo, morfolinilo y tiomorfolinilo . Más preferentemente el anillo D es un grupo pirrolidinilo, piperazinilo o piperidinilo, más preferentemente un grupo piperidilo o piperazinilo, en particular un grupo piperazinilo .

El anillo D puede ser conectado al grupo Y por medio de un átomo de carbono en el anillo D, por medio de un anillo fusionado al anillo D o, en el caso en que un átomo de nitrógeno adicional esté presente, por medio del átomo de nitrógeno adicional. Preferentemente, el anillo D está conectado al grupo Y por medio de un átomo de carbono en el anillo D o por medio de un átomo de nitrógeno adicional. En una modalidad, el anillo D es un anillo de piperazinilo en donde un átomo de nitrógeno forma una parte del grupo del aminoácido y el otro átomo de nitrógeno está conectado al grupo Y .

Además de llevar el grupo Rx, el anillo D puede llevar un grupo R2 sobre el mismo átomo de carbono que lleva el grupo Ri . Los grupos adecuados R2 son aquellos descritos anteriormente. En una modalidad, R2 no está presente y el átomo de carbono del anillo que lleva Rx no está sustituido adicionalmente . Además de los grupos Ri y R2, el anillo D preferentemente está sustituido o no sustituido por uno o dos grupos seleccionados de los átomos de halógeno y los grupos de alquilo de Ci-C4, alcoxi de Ci-C4 e hidroxilo. Más preferentemente el anillo D, aparte de llevar los grupos Rx y opcionalmente R2, no está sustituido.

Los grupos del anillo D, preferidos, son los radicales (a) , (b) y (c) , más preferentemente (c) : En una modalidades de la invención, un agente para la formación de imágenes está conjugado con el éster del aminoácido mono o di -sustituido, alfa, por la conjugación con un radical como se muestra en la fórmula (IA) : en donde Rx es un grupo éster el cual es hidrolizable por una o más enzimas de carboxilesterasa intracelulares hasta un grupo de ácido carboxílico; R2 es una cadena lateral de un alfa aminoácido, natural o no natural; R3 es H o R2; Y es un enlace, -S(=0)2-, -C(=S)-NR4-, -C(=NH)NR4-, -S(=0)2NR , o -NR4-C(=0) en donde R4 es hidrógeno o alquilo de Cj.-C6, sustituido opcionalniente; L es un radical divalente de la fórmula - (Alq1)m(Q)n(Alq2)p- en donde m, n y p son independientemente 0 ó 1, Q es (i) un radical carbocíclico o heterocíclico, mono o bicíclico, divalente, sustituido opcionalmente , que tiene 5-13 miembros del anillo, o (ii) , en el caso en donde tanto m como p son 0, un radical divalente de la fórmula -X2-Q1- o -Q1-X2- en donde X2 es -O-, -S- o NRA- en donde RA es hidrógeno o alquilo de Ci-C3, sustituido opcionalmente, y Q1 es un radical carbocíclico o heterocíclico, mono o bicíclico, divalente, sustituido opcionalmente, que tiene 5-13 miembros del anillo, Alq1 y Alq2 representan independientemente radicales ciclocalquilo de C3-C7 divalentes, sustituidos opcionalmente, o radicales de alquileno de Ci-C6, alquenileno de C2-C6, o alquinileno de C2-C6, rectos o ramificados, sustituidos opcionalmente, los cuales pueden contener o terminar opcionalmente en un enlace de éter (-0-), tioéter (-S-), o amino (-NRA-) en donde RA es hidrógeno o alquilo de Ci-C3 substituido opcionalmente; X representa un enlace, -O-, -C(=0)-, -S(=0)2-, -NR4C(=0)-, -C(=0)NR4-, -NR4C(=0)NR5-, -NR4S(=0)2-, o -S(=0)2NR4- en donde R4 y R5 son independientemente hidrógeno o alquilo de Ci-C6, sustituido opcionaltnente; z es 0 ó 1.

En la modalidad precedente R3 frecuentemente es H.

En otra modalidad, Rx es un grupo éster de la fórmula -(C=0)ORi4 en donde R14 es R8R9R10C- en donde (i) R8 es hidrógeno o {Cx-C^} alquil- (Z1) a- [ (Ci-C3)alquil]b- o (C2-C3) alquenil- (Z1) a- [ (Cx-Cj) alquil] b- , sustituido opcionalmente , en donde a y b son independientemente 0 ó 1 y Z1 es -O-, -S-, o -NRn- en donde Rn es hidrógeno o (Ci-C3) alquilo; y R9 y Ri0 son independientemente hidrógeno o (C -C3 ) alquil- ; (ii) R8 es hidrógeno o Ri2Ri3 - (Ci-C3) alquil- , sustituido opcionalmente, en donde Ri2 es hidrógeno o (Ci-C3) alquilo y Ri3 es hidrógeno o (Ci-C3) alquilo; o R12 Y 13 junto con el nitrógeno al cual los mismos están fijados forman un anillo heterocíclico monocíclico, sustituido opcionalmente, de 5 ó 6 átomos del anillo o un sistema de anillo heterocíclico bicíclico de 8 a 10 átomos del anillo, y R9 y Rio son independientemente hidrógeno o (Ci-C3) alquil- ; o (iii) R8 y R9 tomados junto con el carbono al cual los mismos están fijados, forman un anillo carbocíclico, monocíclico unido por un puente o monocíclico, sustituido opcionalraente , de 3 a 7 átomos del anillo o un sistema de anillo carbocíclico monocíclico unido por un puente o bicíclico, de 8 a 10 átomos del anillo, y Ri0 es hidrógeno; en donde en los casos en donde (i) , (ii) y (iii) anteriores, "alquilo" incluye fluoroalquilo; R2 se selecciona de: los grupos alquilo de Ci-C6, fenilo, 2-, 3-, o 4-hidroxifenilo, 2-, 3-, o 4 -metoxifenilo, 2-, 3-, o 4 -piridilmetilo, bencilo, feniletilo, 2-, 3-, o 4-hidroxibencilo, 2-, 3-, o 4 -benciloxibencilo, 2-, 3-, o 4 -alcoxibencilo de Ci-C6, y benciloxi (alquil de Ci-C6)-; el grupo de caracterización de un aminoácido natural, en el cual cualquier grupo funcional puede ser protegido; grupos - [Alq] nR6 en donde Alq es un grupo (Ci-C6) alquilo o (C2-C6) alquenilo interrumpido opcionalmente por uno o más átomos-O- , o -S- o los grupos -N(R7) [en donde R7 es un átomo de hidrógeno o un grupo (Ci-C6) alquilo] , n es 0 ó 1, y R6 es un grupo cicloalquilo o cicloalquenilo sustituido opcionalmente ; un grupo bencilo sustituido en el anillo fenilo por un grupo de la fórmula -OCH2COR8 en donde R8 es hidroxilo, amino, (d-C6) alcoxi, fenil (Ci-C6) alcoxi, (Ci-C6) alquilamino, di ( (Ci-C6) alquil) amino, fenil (Ci-C6) alquilamino, el residuo de un haluro ácido o aminoácido, el derivado de éster o amida del mismo, el residuo está enlazado por medio de un enlace de amida, el aminoácido se selecciona de glicina, a o ß alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptófano, serina, treonina, cisteína, metionina, asparagina, glutamina, lisina, histidina, arginina, ácido glutámico, y ácido aspártico; un grupo de (Cx-C6) alquilo heterocíclico, ya sea no sustituido o mono o di-sustituido en el anillo heterocíclico con halo, nitro, carboxi, (Ci-C6) alcoxi, ciano, (Ci-C6) alcanoilo, trifluorometil (Ci-C6) alquilo, hidroxi, formilo, amino, (Ci-C6) alquilamino, di- (Ci-C6) alquilamino, mercapto, (Ci-C6) alquiltio, hidroxi (Ci-C6) alquilo, mercapto (Ci-C6) alquilo o (Ci-C6) alquilfenilmetilo; y un grupo -CRaRbRc en el cual: cada uno de Ra, Rb y Rc es independientemente hidrógeno, (Ci-C6) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, fenil (Ci-C6) alquilo, (C3-C8) cicloalquilo ; o Rc es hidrógeno y Ra y Rb son independientemente fenilo o heteroarilo tal como piridilo o Rc es hidrógeno, (Ci-Ce) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, fenil (Ci-C6) alquilo, o (C3-C8) cicloalquilo, y Ra y ¾ junto con el átomo de carbono al cual los mismos están fijados, forman un cicloalquilo de 3 a 8 miembros o un anillo heterocíclico de 5 a 6 miembros; o Ra b y c junto con el átomo de carbono al cual los mismos están fijados forman un anillo tricíclico (por ejemplo adamantilo) ; o Ra y Rb son cada uno independientemente (Cx-C6) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, fenil(Ci-C6)alquilo, o un grupo como se definió para Rc posteriormente, diferente del hidrógeno, o Ra y R junto con el átomo de carbono al cual los mismos están fijados forman un anillo de cicloalquilo o heterocíclico, y Rc es hidrógeno, -OH, -SH, halógeno, -CN, -C02H, (d-C )perfluoroalquilo, -CH2OH, -C02(d-C6) alquilo, -O (Ci-C6) alquilo, -O (C2-C6) alquenilo, -S(d-C6) alquilo, -SO (Ci-C6) alquilo, -S02 (d-d) alquilo, -S(C2-C6) alquenilo, -SO (C2-C6) alquenilo, -S02 (C2-C6) alquenilo o un grupo -Q-W en donde Q representa un enlace u -O, -S-, -SO- o -S02- y W representa un grupo fenilo, fenilalquilo, (C3-C8) cicloalquilo, (C3-C8) cicloalquilalquilo, (C4-C8) cicloalquenilo, (C4-C8) cicloalquenilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo, tal grupo W puede estar sustituido opcionalmente por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de, hidroxilo, halógeno, -CN, -C02H, -C02 (Ci_C6) alquilo, -C0NH2, -CONH (Ci-C6) alquilo, -C0NH(Ci-C6) alquil) 2, -CHO, -CH2OH, (Ci-C4) perfluoroalquilo, -Oíd-Ce) alquilo, -S (Ci-C6) alquilo, -SO (Ci-C6) alquilo, -S02(d-C6)alquilo, -N02, -NH2, -NH (Ci-Ce) alquilo, -N{ (d-C6) alquil) 2# -NHCO (Ci-C6) alquilo, (Ci-C6) alquilo, (C2C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, (C3-C8) cicloalquilo, (C4-C8) cicloalquenilo, fenilo o bencilo; R3 es H o R2; Y es un enlace; L es un radical divalente de la fórmula - (Alq1)m(Q)n(Alq2)p- en donde m, n y p son independientemente 0 ó 1, Q es 1, -fenileno; Alq1 y Alq2 representan independientemente -CH2-, -CH2CH2- -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2- , -CH=CH-, -CH=CHCH2-, -CH2CH=CH-, CH2CH=CHCH2- , -C=C-, -C=CCH2-Í CH2C=C- , CH2C=CCH2, -CH2W-, -CH2CH2W-, -WCH2CH2W-, -CH2CH2WCH2- , -CH2CH2WCH (CH3 ) - , -CH2WCH2CH2- , -CH2 CH2CH2WCH2- , o -WCH2CH2- en donde W es -O-, -S-, -NH- , -N(CH3)-, o -CH2CH2N(CH2CH2OH) CH2-, o Alq1 y Alq2 podrían representar independientemente los radicales ciclopropilo, ciclopentilo o ciclohexilo; X representa un enlace, -O-, o -NHC(=0)-; y z es 0 ó 1.

En otra modalidad, Ri es un grupo éster de COORi4 en donde Ri4 se selecciona de metilo, trifluorometilo, etilo, n-o iso-propilo, n- , sec- o tere-butilo, neopentilo, ciclohexilo, ciclopentilo, norbornilo, alilo, fenilo, bencilo, 2, 3 ó 4 -piridilmetilo, N-metilpiperidin-4-ilo, tetrahidrofuran-3 -ilo o metoxietilo; R2 se selecciona de bencilo, fenilo, ciclohexilmetilo, piridin-3-ilmetilo, terc-butoximetilo, iso-butilo, sec-butilo, tere-butilo, 1-benciltio-l-metiletilo, 1-raetiltio-l-metiletilo, y 1-mercapto-l-metiletilo, feniletilo; R3 es H o R2; el radical -Y-L-X- [CH2] z- se selecciona de -(CH2)V-/ -(CH2)vO-, -(CH2)wO- en donde v es l, 2, 3 6 4 y w es 1, 2 ó 3, y de - (CH2) X-Het2- , -CH2-Ph- (Het1)^- (CH2)X- (Het2)y- y -CH2-Ph-CH=CH- , en donde Ph es un grupo 1, 4-fenileno, Het1 es -O- o -NH- , Het2 es -0-, -NH-, o -NHC(=0)-, x es O, 1 Ó 2, y es O ó l e yy es O ó l.

En las modalidades anteriores, el agente para la formación de imágenes de la invención es por lo tanto de la fórmula (IA' ) : en donde Ri, R2, Y, L, X y z son como se definieron anteriormente e Im es un agente para la formación de imágenes .

En otra modalidad, un agente para la formación de imágenes es conjugado con el éster del alfa aminoácido mono o di-sustituido por la conjugación con un radical como se muestra en la fórmula (IB) : en donde : el anillo D es un grupo heterociclilo de 5 a 6 miembros, no fusionado, saturado, que contiene, además del átomo de nitrógeno que muestra un anillo D, ninguno, uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y S, el anillo está sustituido con un grupo R1 y opcionalmente un grupo R2 , en donde Ri está enlazado a un átomo de carbono del anillo adyacente al átomo de nitrógeno del anillo mostrado, y en donde R2 se lleva sobre el mismo átomo de carbono que lleva el grupo R1 , y en donde el anillo D está sustituido o no sustituido adicionalmente por 1 ó 2 grupos seleccionados de los átomos de halógeno y los grupos de alquilo de Ci - C4 , alcoxi de Ci-C4 e hidroxilo; Ri es un grupo éster de la fórmula - (C=0) OR14 en donde Ri4 es R8R9Ri0C- en donde (i) R8 es hidrógeno o ( Ci - C3 ) alquil- (Z1) a- [ ( Ci -C3) alquil] b- o (C2-C3) alquenil- (Z1) a- [ (d-C3) alquil] b-sustituido opcionalmente en donde a y b son independientemente 0 ó 1 y Z1 es -O-, -S-, o -NRn - en donde R es hidrógeno o (Ci-C3) alquilo; y R9 y R10 son independientemente hidrógeno o (Ci-C3 ) alquil- ; (ii) R8 es hidrógeno o R12Ri3N- (C1-C3) alquil- , sustituido opcionalmente, en donde R12 es hidrógeno o (Ci-C3) alquilo y Ri3 es hidrógeno o (C1-C3) alquilo; o R12 y R13 junto con el nitrógeno al cual los mismos están fijados forman un anillo heterocíclico monocíclico, sustituido opcionalmente, de 5 ó 6 átomos del anillo o un sistema de anillo heterocíclico bicíclico de 8 a 10 átomos del anillo, y R9 y Rio son independientemente hidrógeno o (C1-C3) alquil- ; o (iii) R8 y R9 tomados junto con el carbono al cual los mismos están fijados, forman un anillo carbocíclico monocíclico unido por un puente o monocíclico, sustituido opcionalmente de 3 a 7 átomos del anillo o un sistema de anillo carbocíclico monocíclico unido por un puente o bicíclico, de 8 a 10 átomos del anillo y Rio es hidrógeno; en donde en los casos en donde (i), (ii) y (iii) anteriores, "alquilo" incluye fluoroalquilo; R2, cuando está presente, se selecciona de: los grupos alquilo de Ci-C6, fenilo, 2-, 3-, o 4 -hidroxifenilo, 2-, 3-, o 4-metoxifenilo, 2-, 3-, o 4 -piridilmetilo, bencilo, feniletilo, 2-, 3-, o 4-hidroxibencilo, 2-, 3-, o 4-benciloxibencilo, 2-, 3-, o 4-alcoxibencilo de C1-C6, y benciloxi (alquilo de Ci-C6) -; el grupo de caracterización de un a aminoácido natural, en el cual cualquier grupo funcional puede ser protegido; los grupos - [Alq] nR6 en donde Alq es (Ci-C6) alquilo o un grupo (C2-Ce) alquenilo interrumpido opcionalmente por uno o más átomos de -O-, o -S- o los grupos -N(R7)- [en donde R7 es un átomo de hidrógeno o un grupo (Ci-C6) alquilo] , n es 0 ó 1, y ¾ es un grupo cicloalquilo o cicloalquenilo sustituido opcionalmente ; un grupo bencilo sustituido en el anillo de fenilo por un grupo de la fórmula -OCH2COR8 en donde R8 es hidroxilo, amino, (Ci.Ce) alcoxi, fenil (Ci-C6) alcoxi , (Ci-C6) alquilamino, di ( (Ci-C6) alquil) araino, fenil ( Ci-C6 ) alquilamino , el residuo de un aminoácido o un haluro ácido, el derivado de éster o amida del mismo, el residuo que está enlazado por medio de un enlace de amida, el aminoácido que es seleccionado de glicina, a o ß alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptófano, serina, treonina, cisteína, metionina, asparagina, glutamina, lisina, istidina, arginina, ácido glutámico, y ácido aspártico; un grupo de (Ci-C6) alquilo heterocíclico, ya sea no sustituido o mono o di-sustituido en el anillo heterocíclico con halo, nitro, carboxi, (Ci-C6) alcoxi , ciano, (Cx-C6) alcanoilo, trifluorometilo (Ci-C6) alquilo, hidroxi, formilo, amino, (Ci-C6) alquilamino, di- (Ci-C6) alquilamino, mercapto, (Ci-C6) alquiltio, hidroxi (Ci-C3) alquilo, mercapto(Ci -C5) alquilo o {C -C5) alquilfenilmetilo; y un grupo -CRaRbRc en el cual: cada uno de Ra, Rb y Rc es independientemente hidrógeno, (Ci-C6) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, fenil (C!-C6) alquilo, (C3-C8) cicloalquilo; o Rc es hidrógeno y Ra y Rb son independientemente fenilo o heteroarilo tal como piridilo; o Rc es hidrógeno, (C1-C6) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, fenil (C!-C6) alquilo, o (C3-C8) cicloalquilo, y Ra y Rb junto con el átomo de carbono al cual los mismos están fijados, forman un cicloalquilo de 3 a 8 miembros o un anillo heterocíclico de 5 a 6 miembros; o Ra, Rb y Rc junto con el átomo de carbono al cual los mismos están fijados forman un anillo tricíclico (por ejemplo adamantilo) ; o Ra y Rb son cada uno independientemente (Ci- C6) alquilo, (C2-Ce) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, fenil (Ci-C6) alquilo, o un grupo como se define para Rc posteriormente, diferente del hidrógeno, o Ra o Rb junto con el átomo de carbono al cual los mismos están fijados forman un anillo de cicloalquilo o heterocíclico, y Rc es hidrógeno, -OH, -SH, halógeno, -CN, -C02H, (Ci-C4) perfluoroalquilo, -CH2OH, -C02 (Ci-C6) alquilo, -0(Ci-C6)alquilo, -O (C2-C6) alquenilo, -S (Ci-C6) alquilo, -SO(Ci-C6) alquilo, -S02 (Ci-Ce) alquilo, - S ( C2 - 6 ) alqueni lo , -SO(C2-C6) alquenilo, -S02 (C2-C6) alquenilo o un grupo -Q-W en donde Q representa un enlace u -O, -S-, -SO- o -S02- y representa un grupo fenilo, fenilalquilo, (C3-C8) cicloalquilo, (C3-C8) cicloalquilalquilo, (C4- C8) cicloalquenilo, (C4-C8) cicloalquenilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo , tal grupo W puede estar sustituido opcionalmente por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de, hidroxilo, halógeno, -CN, -C02H, -C02 (Ci-C6) alquilo, -CONH2, -CONH (Ci-C6) alquilo, -CONH(Ci-C6)alquil)2, -CEO, -CH2OH, (C1-C4) perf luoroalquilo, -0(Ci-Ce)alquilo, -S (Ci_C6) alquilo, -SO (Ci-C6) alquilo, -S02(Ci-C6)alquilo, N02 , -NH2 , -NH (Ci-C6) alquilo, -N ( ( Ci- Ce ) alquil ) 2 , -NHCO (Ci-C6) alquilo, (Ci-C6) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-Ce) alquinilo, (C3-C8) cicloalquilo, (C4-C8) cicloalquenilo, fenilo o bencilo; Y es un enlace; L es un radical divalente de la fórmula - (Alq1)m(Q)n(Alq2)p- en donde m, n y p son independientemente 0 ó 1, Q es 1, 4-fenileno; Alq1 y Alq2 representan independientemente -CH2-, -CH2CH2- -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2- , -CH=CH-, -CH=CHCH2-, -CH2CH=CH-, CH2CH=CHCH2-, -C=C-, -C=CCH2-, CH2C=C- , CH2C=CCH2, -CH2W-, -CH2CH2 -, - CH2CH2W-, -CH2CH2WCH2- , -CH2CH2 CH (CH3) - , -CH2WCH2CH2- , -CH2 CH2CH2WCH2- , o - CH2CH2- en donde W es -O-, -S-, -NH-, -N(CH3)-, o -CH2CH2N (CH2CH20H) CH2- , O Alq1 y Alq2 podrían representar independientemente los radicales ciclopropilo, ciclopentilo o ciclohexilo; X representa un enlace, -0-, o -NHC(=0)-; y z es 0 ó 1.

Típicamente, en la modalidad anterior, R2 está ausente .

En otra modalidad, el anillo D es un grupo seleccionado de (a) (b) (c) Ri es un grupo éster de C00Ri4, en donde Ri4 se selecciona de metilo, trifluorometilo, etilo, n- o iso-propilo, n- , sec- o tere-butilo, neopentilo, ciclohexilo, ciclopentilo, norbornilo, alilo, fenilo, bencilo, 2-, 3- o 4-piridilmetilo, N-metilpiperidin-4-ilo, tetrahidrofuran-3-ilo o metoxietilo; el radical -Y-L-X- [CH2] z- se selecciona de -(CH2)V-/ -(CH2)vO-, -(CH2)w0- -(CH2)w0j- en donde v es l, 2, 3 ó 4 y es 1, 2 Ó 3, y de -(CH2)-Het2-, -CH2-Ph- (Het1) yy- (CH2) x - (Het2) y- y -CH2-Ph-CH=CH- , en donde Ph es un grupo 1, 4-fenileno, Het1 es -0- o -NH-, Het2 es -0-, -NH-, o -NHC(=0)-, x es O, 1 Ó 2, y es O ó l e yy es O ó 1.

En los radicales de la fórmula (IB) , el radical -Y-L-X- [CH2] z- es más preferentemente un grupo alquileno -(CH2)V-en donde v es O, 1, 2, 3 o 4 o un grupo -(CH2)-Ph- en donde Ph es un grupo 1, 4-fenileno, más preferentemente un grupo alquileno -(CH2)V-.

En las modalidades anteriores en donde el radical de aminoácido está conjugado como un radical de la fórmula (IB) , el agente para la formación de imágenes es de la fórmula (IB' ) : en donde Ri, D, Y, L, X y z son como se definieron anteriormente e Im es un agente para la formación de imágenes .

Los ejemplos específicos de los agentes para la formación de imágenes de acuerdo con la invención son los compuestos de la fórmula: y las sales de los mismos.

Preferentemente los agentes para la formación de imágenes descritos aquí son para su uso como agentes para la formación de imágenes para las células de macrófagos .

Agentes para la formación de imágenes Los principios de esta invención pueden ser aplicados a una amplia gama de agentes para la formación de imágenes. Una porción del éster del alfa aminoácido apropiado puede ser enlazada directa o indirectamente a cualquiera de una amplia gama de agentes para la formación de imágenes. Por ejemplo, la Tabla 1 lista algunos agentes para la formación de imágenes adecuados .

Tabla 1 Tabla 1 (cont . ) Tabla 1 (cont . ) Tabla 1 (cont.) Los agentes para la formación de imágenes listados en la Tabla 1 son solamente ejemplares de los agentes para la formación de imágenes disponibles para su uso en la presente invención. Las variaciones de los agentes para la formación de imágenes anteriores o agentes de formación de imágenes alternativos también están contemplados. En particular, algunos agentes para la formación de imágenes disponibles comercialmente pueden incorporar grupos funcionales adicionales. Tales grupos funcionales pueden estar ausentes en el agente para la formación de imágenes de la invención.

Para propósito de ilustración, ahora se hace referencia a la Tabla 2, la cual lista los ejemplos que ilustran cómo puede ser enlazado el éster de alfa aminoácido, directa o indirectamente a un agente para la formación de imágenes, conocido.

Tabla 2 Tabla 2 (cont . ) Tabla 2 (cont . ) * Cu- 64 es un núclido radioactivo de cobre que tiene propiedades de desintegración únicas haciéndolo útil en la formación de imágenes. El complejo de Cu- 64 está basado en un quelador de cobre conocido (Solvent Extraction. Classical and Novel Approaches, Vladimir S. Kislik. También, Inorg. Nucí. Chem, Vol. 42, pp 431-439).

Un método semejante también puede ser utilizado para los otros agentes para la formación de imágenes identificados en la Tabla 1.

Se puede observar de lo anterior que la posición de fijación del agente para la formación de imágenes con respecto al éster del alfa aminoácido, mono o di -sustituido, puede variar ampliamente y en general un punto de fijación adecuado puede ser seleccionado por la persona experta en el arte. El punto de fijación de la porción del éster del aminoácido debe ser seleccionado para preservar la función del agente para la formación de imágenes y la capacidad de hidrolización del grupo del éster del alfa aminoácido. Los agentes para la formación de imágenes de la invención pueden ser sintetizados por la producción separada de la sección de aminoácidos y el agente para la formación de imágenes, y por la conjugación de las dos partes, por ejemplo utilizando la química de adición estándar. Alternativamente, el agente para la formación de imágenes de la invención puede ser sintetizado a partir de los materiales de partida alternativos. Las síntesis ejemplares son provistas en la sección de Ejemplos que se da posteriormente.

Será además evidente de las Tablas 1 y 2 anteriores que en las fórmulas (IA' ) e (??') anteriores, el radical del agente para la formación de imágenes Im puede ser seleccionado de: agentes para la formación de imágenes para su uso en el PET, por ejemplo 18F, 11C, 13N y 64Cu, incluyendo los complejos de e4Cu, por ejemplo en donde R es H o un substituyente, por ejemplo un grupo alquilo de Ci-C6; agentes para la formación de imágenes para su uso en SPECT por ejemplo 99Tc, 123I y 201T1 y los radicales que contienen 99Tc, 123I o 201T1, por ejemplo fluoróforos, por ejemplo y los derivados de los mismos incluyendo los radicales sustituidos de los mismos; agentes de contraste de MRI incluyendo los complejos de Gd3+, por ejemplo agentes para la formación de imágenes de rayos X tales como los radicales que contienen yodo, por ejemplo los compuestos de 2 , 4 , 6-yodofenilo, por ejemplo De las Figuras se puede observar que el tratamiento con un agente para la formación de imágenes de acuerdo con la invención hace posible que las células expresen cantidades significativas de hCE-1 (Figura 4) que van a ser distinguidas más fácilmente del fondo comparado con aquellas células que no expresan significativamente hCE-1 (Figura 3) . De esta manera, el conjugado del agente para la formación de imágenes hace posible la formación de imágenes selectivas de las células que expresan cantidades significativas de hCE-1 incluyendo las células monocíticas, tales como los macrófagos. En otras palabras, los conjugados del agente para la formación de imágenes, reivindicados, realzan selectivamente las células monocíticas comparado con las células no monocíticas.

Se puede observar de las gráficas mostradas en las Figuras 5 y 6 que después del tratamiento con un agente para la formación de imágenes de acuerdo con la invención, las células monocíticas de THP-1 que expresan cantidades significativas de hCE-1 (Figura 6) exhiben un nivel mucho más elevado de fluorescencia comparado con las células no monocíticas de KG-1 que no expresan significativamente hCE-1 (Figura 5) . Como se explicó anteriormente, la mayor fluorescencia observada en las células monocíticas se debe a la hidrólisis selectiva del éster del aminoácido del conjugado por hCE-1.

El (los) punto (s) de fijación preferido (s) del radical del éster del aminoácido con respecto al agente para la formación de imágenes puede (n) ser considerado (s) que utilizan estudios de acoplamiento del conjugado del éster del aminoácido/agente para la formación de imágenes, propuesto, en la estructura cristalina obtenida por rayos X de hCE-1 para asegurar un buen ajuste del éster en el sitio activo de la enzima, como se muestra en la Figura 7. El sitio de fijación del enlazador no debe interferir con la estructura del núcleo para la formación de imágenes principal .

La invención será descrita ahora con detalle con referencia a los ejemplos 1 a 3 los cuales son las modalidades específicas de la invención.

Ejemplo 1. (2S) - [ (4-{3- [ (7-nitro-2, 1, 3-benzoxadiazol-4-il) amino] propoxi}bencil) amino] (fenil) etanoato de ciclopentilo El agente para la formación de imágenes del Ejemplo 1 es un conjugado covalente de un agente para la formación de imágenes, fluorescente, y un éster de aminoácido alfa-sustituido. Durante la entrada en las células, la porción del éster del aminoácido es hidrolizada selectivamente por el hCE-1 hasta el ácido correspondiente, que tiene una permeabilidad celular baja, provocando por consiguiente que el conjugado hidrolizado se acumule selectivamente dentro de las células que tienen una expresión significativa de hCE-1, tales como las células monocíticas, por ejemplo los macrófagos .

Preparación del Ejemplo 1 Los agentes para la formación de imágenes de la invención, en particular el Ejemplo 1, pueden ser preparados, por los métodos descritos posteriormente.

Síntesis Existen múltiples estrategias sintéticas para la síntesis de los agentes para la formación de imágenes con los cuales está relacionada la presente invención, pero todos están basados en la química conocida, la cual es conocida por el especialista en química orgánica sintética. Por consiguiente, los agentes para la formación de imágenes pueden ser sintetizados de acuerdo con los procedimientos descritos en la literatura estándar y son bien conocidos por un experto en el arte. Las fuentes de literatura típicas son "Advanced organic chemistry", 4/a. Edición (Wiley) , J March; " Comprehensive Organic Transformation" , 2/a. Edición (Wiley), R. C. Larock; "Handbook of Heterocyclíc Chemistry", 2/a. Edición (Pergamon) , A. R. Katritzky; los artículos de revisiones tales como los encontrados en "Synthesis", "Acc. Chem. Res.", "Chem. Rev" , o las fuentes de literatura primaria identificadas por las búsquedas de la literatura estándar en la línea o de fuentes secundarias tales como " Chemical Abstracts" o "Beilstein" . Las rutas sintéticas utilizadas en la preparación del Ejemplo 1, y los compuestos intermedios del mismo, pueden ser adaptados para la preparación de los compuestos análogos.

Abreviaturas MeOH = metanol EtOH = etanol EtOAc = acetato de etilo Boc = terc-butoxicarbonilo BF3.OEt2 = trifluoruro de boro - eterato de dietilo DC = diclorómetaño DCE = l, 2-dicloroetano DMAP = dimetilaminopiridina TFA = ácido trifluoroacético THF = tetrahidrofurano NaHC03 = carbonato ácido de sodio HC1 = ácido clorhídrico ac = solución acuosa sat = saturada STAB = triacetoxiborohidruro de sodio N2 = nitrógeno Na2S0 = sulfato de sodio Et3N = trietilamina MgS04 = sulfato de magnesio EDC = clorhidrato de la N- (3-dimetilaminopropil) -N'-etilcarbodiimida TLC = cromatografía de capa delgada LCMS = cromatografía líquida / espectrometría de masa mi = mililitro (s) g = gramo ( s ) mg = miligramo (s) mol = mol (es) mmol = milimol(es) HPLC = cromatografía líquida de alta resolución RMN = resonancia magnética nuclear t. a. = temperatura ambiente h ( s) = hora ( s) .

Los reactivos y solventes disponibles comercialmente (grado HPLC) fueron utilizados sin purificación adicional. Los solventes fueron removidos utilizando un evaporador rotatorio de Buchi . La irradiación con microondas se llevó a cabo utilizando un sintetizador de microondas Biotage Initiator™ Eight . La purificación de los compuestos por cromatografía en columna por desorción súbita se lleva a cabo utilizando gel de sílice, tamaño de partícula 40-63µ µp? (malla 230-400) obtenida de Fluorochem. La cromatografía en columna de fase inversa se efectúa utilizando una pre-columna sobre Merck liChroprep RP-18 (40-60 µp?) antes de la purificación sobre un aparato de CombiFlash Companion (Teledyne Isco, Nebraska, EUA) utilizando las columnas RediSep Rf C18 (Presearch, Basingstoke, UK) . La purificación de los compuestos por HPLC preparativa se efectuó sobre los sistemas de Gilson utilizando columnas Luna C18 prep de Axia™, de fase inversa, (10 µp?a, 100 x 21.2 mm) , gradiente 0-100 % B (A = agua/0.05 % TFA, B = acetonitrilo/0.05 % TFA) durante 10 minutos, flujo = 25 ml/min, detección de UV a 254 nm.

Los espectros de 1H RMN fueron registrados sobre un espectrómetro AV de 300 MHz Bruker en solventes deuterados . Los cambios químicos (d) son en partes por millón. El análisis de cromatografía de capa delgada (TLC, por sus siglas en inglés) se efectúa con placas de Kieselgel 60 F254 (Merck) y se visualizan utilizando luz UV. La HPLC/MS analítica se efectuó sobre un sistema Agilent HP-1100 LC utilizando columnas Luna C18 de fase inversa (3 µ µp?, 50 x 4.6 mm) , gradiente 5-95 % B (A = agua/0.1 % ácido fórmico, B = acetonitrilo/0.1 % ácido fórmico) sobre 2.25 min, flujo = 2.25 ml/min. Los espectros de UV fueron registrados a 220 y 254 nm utilizando un detector G1315B DAD. Los espectros de masa fueron obtenidos sobre un intervalo de m/z de 150 a 800 sobre un detector SL G1956B de LC/MSD. Los datos fueron integrados y reportados utilizando el software de ChemStation y el software de los analizadores de datos ChemStation.

Esquema de Reacción 1 - Metodología para la preparación del Ejemplo 1 Etapa 4 Ejemplo 1 Etapa 1. {3- [4- (hidroximetil) fenoxi] ropil} carbamato de terc- butilo A una solución del bromuro de 4 -hidroxibencilo (0.1 g, 0.8 mmol) y el ( 3 -bromopropil ) carbamato de tere-butilo (0.29 g, 1.2 mmol) en DMF (5 mi) se agrega carbonato de potasio (0.44 g, 3.2 mmol) . La reacción se calienta a 70 °C toda la noche. La TLC indicó solamente el 30 % del complemento y así la reacción se calienta toda la noche nuevamente. La reacción se diluye con acetato de etilo (10 mi) y se lava con agua (10 mi) . La capa acuosa se lava con acetato de etilo (1 x 5 mi) y las capas orgánicas combinadas se secan (Na2S04) . El solvente fue removido bajo presión reducida y el residuo se purifica por TLC preparativa (gel de sílice, acetato de etilo al 50 % en heptano) para dar el producto (120 mg) como un aceite viscoso.

Etapa 2. Trifluoroacetato de [4- (3-aminopropoxi) fenil] metanol Se disuelve el {3 - [4- (hidroximetil) fenoxi] propiljcarbamato de tere-butilo (120 mg) en 2 % de TFA en DCM y se deja reposar a t. a. durante 20 minutos. El solvente se remueve bajo presión reducida para dar el trifluoroacetato de [4 - (3 -aminopropoxi) fenil] metanol (135 mg) , LCMS : m/z 182 [M+H]+.

Etapa 3. (4- {3- [ (7-nitro-2 , 1, 3 -benzoxadiazol-4 -il) amino] propoxi} fenil) metanol A una solución agitada del trifluoroacetato de [4-(3 -aminopropoxi) fenil] metanol (135 mg, 0.47 mmol) en EtOH (2 mi) se agrega carbonato de potasio (126 mg, 0.91 mmol) . A esta solución se agrega por goteo una solución del 4-cloro-7-nitro-2, 1, 3 -benzoxadiazol (91 mg, 0.47 mmol) en EtOH (3 mi) a t. a. durante 2 horas. El solvente se evapora y el residuo se purifica por TLC preparativa (gel de sílice, 50 % de acetato de etilo en heptanos) para dar el (4-{3- [ (7-nitro-2, l, 3- benzoxadiazol-4-il) amino] propoxi }fenil) metaño1 (20 mg) como un sólido amarillo brillante. LCMS: m/z 345 [M+H]+.

Etapa 4. 4- {3- [ (7-nitro—2, 1, 3 -benzoxadiazol-4- il) amino] propoxi jbenzaldehído A una solución del (4-{3- [ (7-nitro-2, 1, 3-benzoxadiazol-4-il) amino] propoxi } fenil) metanol (20 mg, 5.8 mmol) en CH2C12 (0.5 mi) se agrega dióxido de manganeso (25 mg, 0.29 mmol) y la reacción se agita a t. a. toda la noche. Se agrega dióxido de manganeso adicional (12 mg) y la agitación se continúa durante 5 días. La reacción se filtra a través de una almohadilla de Celite, la cual se lavó completamente con DCM. Los filtrados combinados se evaporan y el residuo se utiliza en la siguiente etapa sin purificación.

Etapa 5. (2S) - [ (4- (3- [ (7-nitro-2 , 1, 3-benzoxadiazol-4-il) amino] propoxi jbencil) amino] (fenil) etanoato de ciclopentilo A una solución del 4- {3- [ (7 -nitro—2, 1, 3-benzoxadiazol-4-il) amino] propoxijbenzaldehído (20 mg, 0.01 mmol) y el tosilato y L-fenilglicinato de ciclopentilo* (33 mg, 0.01 mmol) se agrega carbonato de potasio (11 mg, 0.01 mmol), cianoborohidruro de sodio (7 mg, 0.011 mmol) y ácido acético (1 gota) y la reacción se agita a t. a. durante 12 horas. La reacción se evapora a sequedad y el residuo se reparte entre EtOAc (10 mi) y agua (3 mi) y la capa orgánica se lava con (2 x 3 mi) . La capa orgánica se seca (Na2S04) y se evapora. El residuo se purifica por TLC preparativa (EtOAC al 60 % en heptanos) para dar el ( 2S) - [ (4 - { 3 - [ ( 7 -nitro- 2 , 1 , 3 -benzoxadiazol-4-il) amino] propoxi }bencil) amino] (fenil) etanoato de ciclopentilo (8 mg) .

LCMS: m/z 546 [M+H] . XU RMN (CD3OD) d ppm: 8.39 (1 H, d, J = 8.0 Hz) , 7.31-7.16 (5H, m) , 7.08 (1 H, d, J = 7.0 Hz) , 6.82 (1 H, d, J = 7.0 Hz), 6.31 (1 H, d, J = 7.0 Hz) , 5.48 (1 H, S) , 5.02 (1 H, m) , 4.17 (2H, s) , 4.03 (2H, m) , 3.51 (2H, m) , 2.47 (2H, m) , 2.14 (2H, m) , 1.78-1.26 (10 H, m) .

* La síntesis del tosilato y L- fenilglicinato de ciclopentilo se describe posteriormente Una suspensión de la (S) -fenilglicina (5 g, 33.1 mmol) en ciclohexano (150 mi) se agrega ciclopentanol (29.84 mi, 331 mmol) y el ácido p-tolueno sulfónico (6.92 g, 36.4 mmol) . La reacción se equipa con un receptor de Dean-Stark y se calienta a 135 °C para la disolución completa. Después de 12 horas, la reacción se enfría a t. a. conduciendo a la precipitación de un sólido blanco. El sólido se filtra y se lava con EtOAc antes del secado bajo presión reducida para dar el producto requerido como un polvo blanco (11.01 g, 85 % ) . ?? N (300 MHz , dff-DMSO) d; 8.82 (2H, S am.), 8.73 (1 H, s am.), 7.47 (7H, m) , 7.11 (2H, d) , 5.25 (1 H, s am. ) , 5.18 (1H, m) , 2.29 (3H, s) , 1.87-1.36 (8H, m) .

Los siguientes bloques de construcción fueron empleados en la síntesis de los Ejemplos 2 y 3 descritos aquí: Bloque de Construcción A Bloque de Construcción B Bloque de Construcción A - El L-leucinato de ciclopentilo se prepara utilizando la metodología descrita enseguida: A una suspensión de la L-leucina (5 g, 30.5 mmol) en ciclohexano (150 mi) se agrega ciclopentanol (27.5 mi, 305 mmol) y el ácido p-tolueno sulfónico (6.33 g, 33.3 mmol). La reacción se equipa con un receptor de Dean-Stark y se calienta a 135 °C para la disolución completa. Esta temperatura fue mantenida durante un periodo de 12 horas, después de tal tiempo la reacción se ha complementado. La reacción se enfría a t. a. con la precipitación de un sólido blanco. El sólido se filtra y se lava con EtOAc antes del secado bajo presión reducida. El producto requerido fue aislado como una sal de tosilato (10.88 g, 85 %) .

LCMS: m/z 200 [M+H]+. XH RMN (300 Hz, CD3OD) d: 1.01 (6H, t, J=5.8 Hz) , 1.54-2.03 (11 H, m) , 2.39 (3H, s) , 3.96 (1 H, t, J=6.5 Hz) , 5.26-5.36 (1 H, m) , 7.25 (2H, d, J=7.9 Hz) , 7.72 (2H, d, J=8.3 Hz) .

Bloque de Construcción B - piperazin-1, 2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-ciclopentilo El piperazin-1, 2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-ciclopentilo se sintetiza utilizando la ruta mostrada en el Esquema de Reacción 2.

Esquema de Reacción 2 Etapa 1. piperazin-1, 2, 4-tricarboxilato de 4-bencil 1-terc-butil 2-ciclopentilo El ácido 4- [ (benciloxi) carbonilj -1- (terc-butoxicarbonil) piperazin-2-carboxílico (9.96 g, 27 mmol) se disuelve en DCM (50 mi) y se enfría a 0 °C. Luego se agregan ciclopentanol (7.4 mi, 82 mmol), EDC (7.86 g, 41 mmol) y DMAP (0.33 g, 2.7 mmol) y la reacción se deja que se caliente a t. a., y se agita durante 24 horas. Luego se agregan agua (100 mi) y DCM (50 mi) y las capas se separan. La capa acuosa se vuelve a extraer con DCM (2 x 50 mi) y las capas orgánicas combinadas se secan entonces sobre MgS04 y se concentran in vacuo. La purificación por cromatografía en columna (40 % de EtOAc/heptano) produjo el compuesto del título como un aceite incoloro (10.4 g, 88 %) LCMS: m/z 455 [M+Na] + .

Etapa 2. piperazin- 1 , 2 -dicarboxilato de 1-terc-butil 2-ciclopentilo El piperazin-1, 2, 4-tricarboxilato de 4-bencil 1-terc-butil 2-ciclopentilo (10.4 g) se disuelve en acetato de etilo (100 mi) , y se agita con paladio al 10 % sobre carbón (2 g, 20 % p/p) bajo hidrógeno a presión atmosférica durante 18 horas. La mezcla de la reacción se filtra entonces a través de Celite® y el solvente se remueve in vacuo para dar el compuesto del título como un sólido blanco (6.62 g, 92 %) .

XH RMN (300 MHz , CDC13) d: 5.27 (1H, m) , 4.50 (1H, m) , 3.81 (1H, m) , 3.50 (1H, m) , 2.82-3.2 (2H, m) , 2.72 (1H, m) , 1.55-1.95 (8H, m am.) , 1.4 (9H, s) .

Ejemplo 2 - 1, 3 , 5, 7-Tetrametil-8- (4-ciclopentil N-bencil-L-leucinato) -4,4' -difluoroborodiazaindaceno Esquema de Reacción 3 - Metodología para la preparación del Ejemplo 2 del Bloque de Construcción A Construcción A Ejemplo 2 Etapa 1 - N- [4- (dietoximetil) bencil] -L-leucinato de ciclopentilo Al Bloque de Construcción A (5.35 g, 14.4 ramol) en DCE (20 mi) se agrega el tereftaldehído mono-dietil acetal (2 g, 9.6 mmol) . La mezcla de la reacción se agita a temperatura ambiente durante 1 hora y luego se agrega en porciones STAB (4.07 g, 19.2 mmol) y se agita a temperatura ambiente durante 18 horas. Luego se agrega DCM (100 mi) y la mezcla de la reacción se lava con NaHC03 saturado (2 x 100 mi) , se seca (MgS04) y se concentra bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna por desorción súbita (10 %-25 % EtOAc/heptanos) produjo el producto deseado como un aceite incoloro (1.85 g, 49 % de rendimiento).

LCMS: m/z 392 [M+H] +.

Etapa 2 - N- (4- formilbenci1) -L-leucinato de ciclopentilo Al N- [4- (dietoximetil) encil] -L-leucinato de ciclopentilo (1.85 g) en THF (10 mi) se agrega HCl 1 M (10 mi) . La mezcla de la reacción se agita a temperatura ambiente durante 18 horas para el complemento de la reacción. El THF fue removido bajo presión reducida y se agrega EtOAc (50 mi) , se lava con NaHC03 saturado (100 mi) , se seca (MgS0 ) y se concentra bajo presión reducida para dar el producto deseado como un aceite incoloro, el cual fue utilizado sin purificación adicional. (1.18 g, 79 % de rendimiento) .

LCMS: m/z 318 [M+H]+.

XH RMN (300 MHZ, CDC13) d: 10.0 (1H, s) , 7.84 (2H, d, J=8.1 Hz) , 7.51 (2H, d, J=8.1 Hz) , 5.25 (1H, m) , 3.91 (1H, d, J=13.8 Hz) , 3.68 (1H, d, J=13.8 Hz) , 3.2 (1H, t, J=7.2 Hz), 1.95-1.55 (9H, m am.), 1.45 (2H, t, J=7.5 Hz) , 0.93 (3H, d, J=6.9 Hz) , 0.88 (3H, d, J=6.9 Hz) .

Etapa 3 - 1, 3, 5, 7-Tetrametil-8- (N-bencil-L-leucinato de 4-ciclopentilo) -4,4' -difluoroborodiazaindaceno El N- (4 - formilbencil) -L-leucinato de ciclopentilo (1.18 g, 3.72 mmol) se disuelve en DCM (250 mi) y se agrega el 2 , 4-dimetilpirrol (707 mg, 7.44 mmol) . Se agregan 3 gotas de TFA y se agita a temperatura ambiente durante 15 horas. Se agregan unas 2 gotas adicionales de TFA y se agita durante 2 horas para el complemento de la reacción. Luego se agrega tetraclorobenzoquinona (915 mg, 3.72 mmol) en DCM (150 mi), agitando durante 30 minutos antes de la adición de Et3N (12 mi) y BF3.OEt2 (12 mi). Después de agitación durante otras 18 horas, la mezcla de la reacción sin refinar se lava con agua (2 x 100 mi) , se seca (MgS04) y se concentra bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna (0 %-5 % de MeOH/DCM) produjo el producto requerido el cual se convirtió en una suspensión en heptano (150 mi) . La capa de heptano se recolecta, se evapora bajo presión reducida para dar el Ejemplo 2 como una goma roja oscura (184 mg, 9 %) .

*H RMN (300 Hz, CDC13) d: 7.4 (2H, d, J=8.4 Hz) , 7.15 (2H, d, J=8.4Hz), 5.9 (2H, s) , 5.2 (1H, m) , 3.85 (1H, d, J=13.2 Hz), 3.6 (1H, d, J=13.2 Hz) , 3.15 (1H, t, J=7.2 Hz) , 2.48 (6H, s) , 1.75-1.9 (3H, m) , 1.51-1.74 (8H, m) , 1.4 (1 H, t, J=7.0 Hz), 1.31 (6H, s) , 0.85 (3H, d, J=6.5 Hz), 0.79 (3H, d, J=6.4 Hz) . LCMS: m/z 537 [M+H] +.

Ejemplo 3 - 1, 3 , 5, 7-Tetrametil-8- (4-bencilpiperazin-2-carboxilato de 4-ciclopentilo) -4, ' -difl oroborodiazaindaceno Esquema de Reacción 4 - Metodología para la preparación del Ejemplo 3 a partir del Bloque de Construcción B Ejemplo 3 Etapa 1 - El 4- [4- (dietoximetil) bencil] piperazin-1, 2-dicarboxilato de 1-terc-butil 2-ciclopentilo se preparó a partir del bloque de construcción B como sigue: Al Bloque de Construcción B (479 mg, 1.6 mmol) en DCM (5 mi) se agrega el tereftaldehído mono-dietil acetal (222 mg, 1.07 mmol). La mezcla de la reacción se agita a temperatura ambiente durante 1 hora y luego se agrega en porciones STAB (453 mg, 2.14 mmol) y se agita a temperatura ambiente durante 18 horas. Se agrega DCM (100 mi) y la mezcla de la reacción se lava con NaHC03 saturado (2 x 50 mi) , se seca (MgS04) y se concentra bajo presión reducida para dar el producto requerido como un aceite claro el cual se utilizó sin purificación adicional (606 mg, > 100 % de rendimiento) .

LCMS: m/z 491 [M+H]+.

Etapa 2 - 4- (4-formilbencil) piperazin-1, 2 -dicarboxilato de 1-terc-butil 2-ciclopentilo Al 4 - [4 - (dietoximetil) bencil] piperazin-1 , 2 -dicarboxilato de 1-terc-butil 2-ciclopentilo (606 mg) en THF (6 mi) se agrega HC1 1 M (6 mi) . La mezcla de la reacción se agita a temperatura ambiente durante 18 horas para el complemento de la reacción. La mezcla de la reacción se diluye con EtOAc (50 mi) , se lava con NaHC03 saturado (2 x 50 mi) , se seca (MgS04) y se concentra bajo presión reducida para dar el producto deseado como un aceite incoloro, el cual se utiliza sin purificación adicional. (440 mg, 99 % de rendimiento) .

LCMS: m/z 417 [M+H]+.

Etapa 3 - 1 , 3 , 5 , 7 -Tetrametil- 8 - (4 -bencilpiperazin-2-carboxilato de 4 -ciclopentilo) -4 , 41 -difluoroborodiazaindaceno El 4- (4 -formilbencil) iperazin-1, 2-dicarboxilato de l-terc-butil 2 -ciclopentilo (440 mg, 1.06 mmol) se disuelve en DCM (90 mi) y se agrega el 2 , 4 -dimetilpirrol (200 mg, 2.12 mmol) . Se agregan 3 gotas de TFA y se agita a temperatura ambiente durante 15 horas para el complemento de la reacción. Luego se agrega tetraclorobenzoquinona (260 mg, 1.06 mmol) en DCM (60 mi) , agitando durante 15 minutos antes de la adición de Et3N (5 mi) y BF3.OEt2 (5 mi). Después de agitación durante otras 18 horas, la mezcla de la reacción sin refinar se lava con agua (2 x 100 mi) , se seca (MgS04) y se concentra bajo presión reducida. La purificación por cromatografía en columna (0 % - 5 % de MeOH/DCM) , produjo el material que se convirtió en una suspensión adicionalmente en heptano (100 mi) . La capa de heptano se recolecta y se evapora bajo presión reducida. Los datos de LCMS mostraron que existió una mezcla de productos no protegidos y protegidos con Boc.

Los 112 mg del material sin refinar se disuelven en HC1 2M en éter dietílico (50 mi) y se agitan a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla de la reacción se concentra bajo presión reducida y se purifica por cromatografía en columna (0 % - 5 % de MeOH/DC ) para dar el producto deseado como un aceite anaranjado (5.6 mg, 3 %¦) .

LCMS: m/z 535 [M+H] +.

XH RMN (300 MHz , CDC13) d: 7.37 (2H, d, J=8.1 Hz) , 7.15 (2H, d, J=8.1 Hz) , 5.91 (2H, s) , 5.14 (1H, m) , 3.55 (2H, s) , 3.49 (1H, m) , 3.05 (1H, m) , 2.80 (2H, m) , 2.48 (6H, s) , 2.35 (1H, m) , 2.27-2.00 (3H, m am.), 1.80 (2H, m) , 1.69-1.45 (6H, m am. ) , 1.30 (6H, s) .

La Figura 8 muestra la aglutinación predicha del Ejemplo 3 a la estructura cristalina - 1MX1 de hCEl desde el Banco de Datos de las Proteínas . El éster está cercano a la serina 221, haciendo posible que ocurra la hidrólisis del éster. También, la naturaleza expuesta al solvente del núcleo para la formación de imágenes significa que existe una pequeña interferencia del núcleo con la aglutinación del éster del aminoácido a la esterasa.

Ensayos Biológicos Ensayo de Carboxilesterasa para las Células Rotas Los compuestos pueden ser evaluados para la hidrólisis selectiva en las células monocíticas tales como los macrófagos en un ensayo de hidrólisis de células rotas (descrito posteriormente) . Cuando este ensayo es efectuado sobre las células monocíticas (tales como las células U937) las velocidades de la hidrólisis típicamente exceden varios miles de pg/ml/min. Sin embargo, este mismo experimento se llevó a cabo con las células no raonocíticas (tales como HCT116 y las células HuT78) proporcionando velocidades de la hidrólisis que son típicamente menores que 100 pg/ml/min.

Preparación del extracto de las células Las células tumorales U937 (monocíticas o HCT 116 (no monocíticas) (~ 109) se lavan en 4 volúmenes de Dulbeccos PBS (~ 1 litro) y se convierten en pelotillas a 525 g durante 10 minutos a 4 °C. Esto fue repetido dos veces y al final las pelotillas de las células se volvieron a suspender en 35 mi de un amortiguador de la homogeneización frío (Trizma 10 mM, NaCl 130 mM, CaCl2 0.5 mM pH 7.0 a 25 °C). Los materiales homogéneos fueron preparados por cavitación con nitrógeno (49.26 kg/cm2 (700 psi) durante 54 minutos a 4 °C) . El material homogéneo fue mantenido en hielo y se complementa con un cóctel de inhibidores a las concentraciones finales de: Leupeptina 1 µ? Aprotinina 0.1 µ? E64 8 µ? Pepstatina 1.5 µ? Bestatina 162 µ? Quimostatina 33 µ? Después de la aclaración del material homogéneo celular por centrifugación a 525 g durante 10 minutos, el sobrenadante resultante se utiliza como una fuente de la actividad de la esterasa y se almacena a -80 °C hasta que sea requerida .

Medición de la escisión del éster La hidrólisis de los ésteres a los ácidos carboxllicos correspondientes puede ser medida utilizando el extracto de las células, preparado como anteriormente. Para este efecto, el extracto de las células (~30 µ9/??1?p??? del ensayo total de 0.5 mi) se incuba a 37 °C en un amortiguador de Tris-HCl 25 mM, NaCl 125 mM, pH 7.5 a 25 °C. En el tiempo cero, el éster (el substrato) se agrega entonces a una concentración final de 2.5 µ? y las muestras se incuban a 37 °C durante el intervalo de tiempo apropiado (usualmente 0 a 80 min) . Las reacciones fueron detenidas por la adición de 3 x volúmenes de acetonitrilo . Para el tiempo cero, las muestras del acetonitrilo son agregadas previo al compuesto del éster. Después de la centrifugación a 12000 g durante 5 min, las muestras fueron analizadas para verificar el éster y su ácido carboxílico correspondiente a temperatura ambiente por LCMS (Sciex API 3000, bomba binaria HP1100, CTC PAL) . La cromatografía estuvo basada en una columna AcCN (75*2.1 mm) y una fase móvil de 5-95 % de acetonitrilo en agua/0.1 % de ácido fórmico) .

Como se describió aquí, típicamente, si una carboxiesterasa hidroliza un éster del aminoácido libre (por ejemplo un éster del aminoácido cíclico, libre) hasta el ácido original, también hidrolizará la misma porción el éster cuando se ha enlazado por el radical enlazador -Y-L-X- (CH2) 2-a un agente para la formación de imágenes. Por consiguiente, el ensayo de células rotas descrito aquí puede ser utilizado para probar que los ásteres de los aminoácidos libres determinan si el éster del aminoácido es hidrolizable por las enzimas de carboxiesterasa intracelulares y el resultado de esta prueba proporciona una buena indicación en cuanto a las propiedades de la molécula conjugada. Una porción del éster seleccionada de esta manera puede ser re-evaluada en el mismo ensayo de carboxiesterasa cuando se conjuga hasta el inhibidor por medio de los radicales enlazadores respectivos, el radical enlazador es para confirmar que todavía existe un substrato de carboxiesterasa en este fondo.

Cuantificación de la expresión de hCE-1, hCE-2 y hCE-3 en las líneas celulares monocíticas y no monocíticas Los cebadores específicos para los genes fueron utilizados para amplificar por PCR el hCE-1, 2 y 3 del ADNc humano. Los productos de PCR fueron clonados en un vector del plásmido y se verificaron en la secuencia. Los mismos fueron entonces diluidos en serie para su uso como las curvas estándares en las reacciones de PCR de tiempo real . El ARN total fue extraído a partir de varias líneas celulares humanas y se prepara en ADNc. Para cuantificar los niveles absolutos de las hCEs en las líneas celulares, los niveles de la expresión del gen fueron comparados con los estándares del producto de PCR clonado en un ensayo de PCR con verde de SYBR de tiempo real. La Figura 1 muestra que el hCE-1 solamente es expresado hasta una cantidad significativa en una línea celular monocítica. El mismo método fue utilizado para buscar los niveles de expresión relativos como se muestra en la Figura 2. En este caso, los niveles fueron evaluados en comparación con la expresión de GAPDH.

Experimento de Teñido (como se muestra en las Figuras 3 y 4) Las células THP1 o HL60 fueron sembradas el día antes del teñido a 1 x 104/ml en el medio completo a un volumen total de 50 mi. Para HL60, fue utilizado RMPI1640 + 10 % de suero de bovino fetal, 1 % de glutamina y 1 % de penicilina/estreptomicina. Para THP1, se utilizó RMPI1640 + 10 % de suero de bovino fetal, 1 % de glutamina y 1 % de penicilina/estreptomicina, 0.05 mM de mercaptoetanol . Las células fueron incubadas toda la noche a 37 °C en un incubador humidificado con 5 % de C02.

Las células fueron centrifugadas y lavadas entonces con 50 mi de PBS a 37 °C una vez más antes de la re-suspensión en 2 mi del medio libre del suero. El agente para la formación de imágenes del Ejemplo 1 fue preparado a 50 µ? en el medio libre del suero y se agregan 2 mi a la suspensión celular (4 mi del volumen total con una concentración final de 25 µ?) , y la mezcla resultante se coloca en placas en una placa de 6 cavidades, y se incuba a 37 °C durante 45 minutos. La etapa de lavado fue repetida, y las pelotillas celulares fueron re-suspendidas en 4 mi del medio completo, y se incuban a 37 °C durante unos 30 minutos adicionales.

Se diluyen 0.5 mi de la suspensión celular en 4 mi, y 100 µ? de cada muestra diluida se transfieren a una placa de 96 cavidades que va a ser examinada utilizando un microscopio de fluorescencia. Las imágenes de las dos líneas celulares fueron recolectadas a la misma amplificación utilizando tanto la iluminación con luz blanca para observar la densidad celular como utilizando un filtro de 460-490 nm para excitar el agente para la formación de imágenes del Ejemplo 1 o el producto de la hidrólisis del Ejemplo 1.

Medición de la fluorescencia contra el tiempo en las líneas celulares monocíticas y no monocíticas (como se muestra en las Figuras 5 y 6) El grado de fluorescencia en las líneas celulares monocíticas y no monocíticas después del tratamiento con el Ejemplo 1 fue evaluada utilizando citometría del flujo. Esta evaluación fue efectuada utilizando el sistema de citometría de flujo de BD Biosciences BD FACSCanto™.

Las líneas celulares son tratadas con una solución 3000 nM del Ejemplo 1. La mezcla resultante es muestreada en los tiempos de 0 , 1 h, 2 h, 4 h y 6 h. En cada instante del tiempo una muestra de las células es recolectada por centrifugación, se lava y se deja reposar durante 30 minutos luego se lava nuevamente y se re-suspende en un volumen pequeño para el análisis por citometría de flujo (FACSCanto™ A BD Biosciences) a una excitación de la emisión de la línea lasérica azul de 488 nM medida en un detector de FITC utilizando un filtro dicroico de paso largo de 502 nm y un filtro de paso de banda de 530 + 15. Los datos son expresados como la intensidad de la fluorescencia promedio (MFI, por sus siglas en inglés) para la población de las células en el canal FITC, y se gráfica contra el tiempo en una gráfica lineal. Las líneas no teñidas son fijadas a un MFI de 100.

Se puede observar de las Figuras 5 y 6 que 2 horas después del tratamiento con un agente para la formación de imágenes de acuerdo con la invención, la intensidad de la fluorescencia de las células que expresan una cantidad significativa de hCE-1 es al menos tres veces más grande que aquella de las células que no expresan una cantidad significativa de hCE-1.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un agente para la formación de imágenes de las células que produce una señal de formación de imágenes intracelulares proporcional a la cantidad de hCE-1 en las células independientemente de la cantidad de hCE-2 y/o hCE-3 en las células, el agente para la formación de imágenes es un conjugado covalente de (a) un agente para la formación de imágenes y (b) un éster de alfa aminoácido, mono o disustituido, caracterizado porque (a) está enlazado directamente a (b) , o (a) está enlazado indirectamente a (b) por un radical enlazador, y en donde el enlace directo o indirecto es por medio del grupo amino de (b) , y en donde el grupo amino no está enlazado directamente a un grupo carbonilo, y en donde la parte del éster del alfa aminoácido, mono o di-sustituido, es hidrolizable selectivamente a la parte del ácido carboxílico correspondiente por la enzima de carboxilesterasa intracelular hCE-1 con relación a las enzimas intracelulares hCE-2 o hCE-3.

2. Un agente para la formación de imágenes de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el éster del alfa aminoácido mono o di-substituido está enlazado indirectamente al agente para la formación de imágenes por un radical de la fórmula (IA) o (IB) : en donde Ri es un grupo éster que es hidrolizable por una o más enzimas de carboxilesterasa intracelular a un grupo de ácido carboxílico; R2 es la cadena lateral de un alfa aminoácido natural o no natural; R3 es H o R2 ; Y es un enlace -S(=0)2-, -C(=S)-NR4-, -C(=NH)NR4-, -S(=0)2NR4-, o -NR4-C(=0) en donde R es hidrógeno o alquilo de Ci-C6 sustituido opcionalmente ; L es un radical divalente de la fórmula - (Alq1)m(Q)n(Alq2)p- en donde m, n y p son independientemente 0 ó 1, Q es (i) un radical carbocíclico o heterocíclico, mono o bicíclico, divalente, sustituido opcionalmente , que tiene 5-13 miembros del anillo, o (ii) , en el caso en donde tanto m como p son 0, un radical divalente de la fórmula -X^Q1- o -Q^X2- en donde X2 es -O-, -S- o NRA- en donde RA es hidrógeno o alquilo de C1-C3 sustituido opcionalmente, y Q1 es un radical carbocíclico o heterocíclico, mono o bicíclico, divalente, sustituido opcionalmente, que tiene 5-13 miembros del anillo, Alq1 y Alq2 representan independientemente radicales de cicloalquilo de C3-C7, divalentes, sustituidos opcionalmente, o radicales de alquileno de C ~C6i alquenileno de C2-C6, o alquinileno de C2-C6, rectos o ramificados, sustituidos opcionalmente, que pueden contener o terminar opcionalmente en un enlace de éter (-0-), tioéter (-S-) , o amino ( -NRA) en donde RA es hidrógeno o alquilo de Ci-C3 sustituido opcionalmente; X representa un enlace, -O-, -C(=0)-, -S(=0)2-, -NR4C(=0)-, -C(=0)NR4-, -NR4C(=0)NR5-, -NR4S(=0)2-, o -S(=0)2NR4- en donde R4 y R5 son independientemente hidrógeno o alquilo de Ci-C6 sustituido opcionalmente; z es 0 ó 1; y el anillo D es un grupo heterociclilo de 3 a 7 miembros, sustituido opcionalmente, en donde: Ri está enlazado a un carbono del anillo adyacente al nitrógeno del anillo mostrado; y el anillo D está fusionado opcionalmente a un segundo anillo que comprende un fenilo, un heteroarilo de 5 a 6 miembros, carbociclilo de C3-7 o un grupo heterociclilo de 5 a 6 miembros, en donde cuando el anillo D está fusionado a un segundo anillo que comprende un grupo fenilo, heteroarilo de 5 a 6 miembros, carbociclilo de C3-7 o heterociclilo de 5 a 6 miembros, entonces el grupo enlazador -Y-L-X- (CH2) z puede ser de un átomo del anillo en el anillo D o el segundo anillo.

3. Un agente para la formación de imágenes de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque R3 es H.

4. Un agente para la formación de imágenes de conformidad con la reivindicación 2 ó 3, caracterizado porque el éster del alfa aminoácido mono o di-substituido está enlazado directamente al agente para la formación de imágenes por un radical de la fórmula (IA) en donde: Rx es un grupo éster de la fórmula -(C=0)OR14 en donde R14 es R8R9Ri0C- en donde (i) R8 es hidrógeno o (C!-C3) alquil- (Z1) a- [ (Ci-C3) alquil] b- o (C2-C3) alquenil- (Z1) a- [ (C1-C3) alquil] b- , sustituido opcionalmente, en donde a y b son independientemente 0 ó 1 y Z1 es -O-, -S-, o -NRU- en donde R11 es hidrógeno o (Ci-C3) alquilo; y R9 y R10 son independientemente hidrógeno o (C1-C3 ) alquil- ; (ii) R8 es hidrógeno o Ri2Ri3N- (Ci-C3) alquil- , sustituido opcionalmente, en donde Ri2 es hidrógeno o (Ci-C3) alquilo y R13 es hidrógeno o (C1-C3) alquilo; o R12 y Ri3 junto con el nitrógeno al cual los mismos están fijados forman un anillo heterocíclico monocíclico, sustituido opcionalmente, de 5 ó 6 átomos del anillo o un sistema de anillo heterocíclico bicíclico de 8 a 10 átomos del anillo, y R9 y Rio son independientemente hidrógeno o (Ci-C3) alquil- ; o (iii) R8 y R9 tomados junto con el carbono al cual los mismos están fijados, forman un anillo carbocíclico monocíclico unido por un puente o monocíclico sustituido opcionalmente, de 3 a 7 átomos del anillo o un sistema de anillo carbocíclico monocíclico unido por un puente o bicíclico de 8 a 10 átomos del anillo, y Rio es hidrógeno ,- en donde en los casos (i), (ii) y (iii) anteriores, "alquilo" incluye fluoroalquilo; R2 se selecciona de: los grupos alquilo de Ci-C6, fenilo, 2,- 3-, o 4 -hidroxifenilo, 2,- 3-, o 4 -metoxifenilo, 2, 3-, o 4-piridilmetilo, bencilo, feniletilo, 2-, 3-, o 4-hidroxibencilo, 2,- 3-, o 4-benciloxibencilo, 2,- 3-, o 4- alcoxibencilo de Ci-C6, y benciloxi (alquilo de Ci-C6)-; el grupo de caracterización de un a aminoácido natural, en el cual cualquier grupo funcional puede ser protegido; los grupos - [Alq] nRs en donde Alq es un grupo (Ci-C6) alquilo o (C2-C5) alquenilo interrumpido opcionalmente por uno o más átomos de -0-, o -S- o los grupos -N(R7)- [en donde R7 es un átomo de hidrógeno o un grupo (Ci-C6) alquilo] , n es 0 ó 1, y Re es un grupo cicloalquilo o cicloalquenilo sustituido opcionalmente; un grupo bencilo sustituido en el anillo de fenilo por un grupo de la fórmula -OCH2COR8 en donde R8 es hidroxilo, amino, (Ci-C6) alcoxi, fenil (Ci-C8) alcoxi, (Ci.C6) alquilamino, di ( (Ci-C6) alquil) amino, fenil (Ci-C6) alquilamino, el residuo de un aminoácido o un haluro ácido, el derivado de éster o amida del mismo, el residuo que está enlazado por medio de un enlace de amida, el aminoácido que es seleccionado de glicina, a o ß alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptófano, serina, treonina, cisteína, metionina, asparagina, glutamina, lisina, histidina, arginina, ácido glutámico, y ácido aspártico; un grupo de (Ci-C6) alquilo heterocíclico, ya sea no sustituido o mono o di-sustituido en el anillo heterocíclico con halo, nitro, carboxi, (Ci-C6) alcoxi, ciano, (Cx-C6) alcanoilo, trifluorometil (Ci-C6) alquilo, hidroxi, formilo, amino, (Ci-C6) alquilamino, di- (Ci- Ce) alquilamino, mercapto, (Cj-C6) alquiltio, hidroxi (C;L-C6) alquilo, mercapto (Ci-C6) alquilo o (Ci-C6) alquilfenilmetilo; y un grupo -CRaRbRc en el cual: cada uno de Ra, ¾ y Rc son independientemente hidrógeno, (Ci-C6) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, fenil (Ci-C6) alquilo, (C3-C8) cicloalquilo; o Rc es hidrógeno y Ra y Rb son independientemente fenilo o heteroarilo tal como piridilo; o Rc es hidrógeno, (Ci-C6) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, fenil (Ci-C6) alquilo, o (C3-C8) cicloalquilo, y Ra y ¾ junto con el átomo de carbono al cual los mismos están fijados, forman un cicloalquilo de 3 a 8 miembros o un anillo heterocíclico de 5 a 6 miembros; o Ra, Rb y Rc junto con el átomo de carbono al cual los mismos están fijados forman un anillo tricíclico (por ejemplo adamantilo) ; o Ra y Rb son cada uno independientemente (Ci-C6) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C3) alquinilo, fenil (Cx-C6) alquilo, o un grupo como se definió para Rc posteriormente, diferente del hidrógeno, o Ra o Rb junto con el átomo de carbono al cual los mismos están fijados forman un anillo de cicloalquilo o heterocíclico, y Rc es hidrógeno, -OH, -SH, halógeno, -CN, -C02H, (Ci-C4) perfluoroalquilo, -CH2OH, -C02 (Ci-C6) alquilo, -O (d-C6) alquilo, -O (C2-C6) alquenilo, -S (Ci-C6) alquilo, -SO (Ci-C6) alquilo, -S02 (Ci-C6) alquilo, -S (C2-C6) alquenilo, -SO (C2-C6) alquenilo, -S02 (C2-C6) alquenilo o un grupo -Q-W en donde Q representa un enlace u -O, -S-, -SO-o -S02- y W representa un grupo fenilo, fenilalquilo, (C3-C8) cicloalquilo, (C3-C8) cicloalquilalquilo, (C4- C8) cicloalquenilo, (C4-C8) cicloalquenilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo, tal grupo W puede estar sustituido opcionalmente por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de, hidroxilo, halógeno, -CN, -C02H, -C02 (Ci-C6) alquilo, -CONH2, -CONH (Ci-C3) alquilo, -CONH(d-C6) alquilo) 2, -CHO, -CH2OH, (Ci-C ) perfluoroalquilo, -0(Ci-C6) alquilo, -S (Ci_Ce) alquilo, -SO (Ci-C6) alquilo, -S02(Ci-C6)alquilo, N02, -NH2 , - H(d-C6) alquilo, -N ( (Ci-Ce) alquil) 2, -NHCO (Ci-C6) alquilo, (Ci-C6) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, (C3-C8) cicloalquilo, (C4-C8) cicloalquenilo, fenilo o bencilo; R3 es H o R2; Y es un enlace; L es un radical divalente de la fórmula -(Alq1)m(Q)n(Alq2)p- en donde m, n y p son independientemente 0 ó 1, Q es 1, 4-fenileno; Alq1 y Alq2 representan independientemente -CH2-, -CH2CH2- -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2- , -CH=CH-, -CH=CHCH2-, -CH2CH=CH-, CH2CH=CHCH2-, -C=C-, -C=CCH2-, CH2C=C-, CH2C=CCH2, -CH2W-, -CH2CH2W-, -WCH2CH2W-, -CH2CH2WCH2- , -CH2CH2WCH (CH3 ) - , -CH2WCH2CH2- , -CH2WCH2CH2WCH2- , o -WCH2CH2- en donde W es -O-, -S-, -NH-, -N(CH3) -, o -CH2CH2N(CH2CH2OH) CH2- , o Alq1 y Alq2 podrían representar independientemente los radicales ciclopropilo, ciclopentilo o ciclohexilo; X representa un enlace, -O-, o -NHC (=0) - ; y z es 0 ó 1.

5. Un agente para la formación de imágenes de conformidad con las reivindicaciones 2 a 4, caracterizado porque el éster del alfa aminoácido mono o di-substituido está enlazado directamente al agente para la formación de imágenes por un radical de la fórmula (IA) en donde: Ri es un grupo éster COORi4 en donde Ri4 se selecciona de metilo, trifluorometilo, etilo, n- o iso-propilo, n- , sec- o tercbutilo, neopentilo, ciclohexilo, ciclopentilo, norbornilo, alilo, fenilo, bencilo, 2, 3 ó -piridilmetilo, N-metilpiperidin-4-ilo, tetrahidrofuran-3-ilo o metoxietilo,- R2- se selecciona de bencilo, fenilo, ciclohexilmetilo, piridin-3-ilmetilo, terc-butoximetilo, iso-butilo, sec-butilo, tere-butilo, 1-benciltio-l-metiletilo, 1-metiltio-l-metiletilo, y 1-mercapto-l-metiletilo, feniletilo ; R3 es H o R2; el radical -Y-L-X- [CH2] z- se selecciona de -(CH2)V-, -(CH2)vO-, -(CH2)w0- en donde v es l, 2, 3 ó 4 y w es 1, 2 ó 3, y de - (CH2) X-Het2- , -CH2-Ph- (Het^yy- (CH2)X- (Het2)y- y -CH2-Ph-CH=CH- , en donde Ph es un grupo 1, 4-fenileno, Het1 es -0- o -NH- , Het2 es -O-, -NH- , o -NHC(=0)-, es O, 1 Ó 2, y es O ó l e yy es O ó l.

6. Un agente para la formación de imágenes de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el éster del alfa aminoácido mono o di-substituido está enlazado indirectamente al agente para la formación de imágenes por un radical de la fórmula (IB) en donde: el anillo D es un grupo heterociclilo de 5 a 6 miembros, no fusionado, saturado, que contiene, además del átomo de nitrógeno mostrado en el anillo D, ninguno, uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y S, el anillo está sustituido con un grupo R1 y opcionalmente un grupo R2, en donde Ri está enlazado a un átomo de carbono del anillo adyacente al átomo de nitrógeno del anillo mostrado, y en donde R2 se lleva sobre el mismo átomo de carbono que lleva el grupo R1, y en donde el anillo D está sustituido o no sustituido adicionalmente por 1 ó 2 grupos seleccionados de los átomos de halógeno y los grupos de alquilo de Ci-C4, alcoxi de Cx-C4 e hidroxilo; x es un grupo éster de la fórmula -(C=0)ORi4 en donde Ri4 es ReRgRioC- en donde (i) R8 es hidrógeno o (C1-C3) alquil- (Z1) a- [ (Ci-C3) alquil] b- o (C2-C3) alquenil- (Z1) a- [ (d-C3) alquil] b-sustituido opcionalmente en donde a y b son independientemente 0 o 1 y Z1 es -O-, -S-, o - U- en donde Rii es hidrógeno o (C1- C3 ) alquilo; y R9 y R10 son independientemente hidrógeno o (Ci-C3) alquil- ; (ii) R8 es hidrógeno o R12Ri3N- (C1-C3) alquil- , sustituido opcionalmente , en donde Ri2 es hidrógeno o (C1- C3 ) alquilo y Ri3 es hidrógeno o (Ci-C3) alquilo; o Ri2 y 13 junto con el nitrógeno al cual los mismos están fijados forman un anillo heterocíclico monocíclico, sustituido opcionalmente, de 5 ó 6 átomos del anillo o un sistema de anillo heterocíclico bicíclico de 8 a 10 átomos del anillo, y R9 y Rio son independientemente hidrógeno o (C1-C3) alquil- ; o (iii) R8 y R9 tomados junto con el carbono al cual los mismos están fijados, forman un anillo carbocíclico monocíclico unido por un puente o monocíclico, sustituido opcionalmente de 3 a 7 átomos del anillo o un sistema de anillo carbocíclico monocíclico unido por un puente o bicíclico, de 8 a 10 átomos del anillo y Rio es hidrógeno; en donde en los casos en donde (i), (ii) y (iii) anteriores, "alquilo" incluye fluoroalquilo; R2, cuando está presente, se selecciona de: los grupos alquilo de i- 6, fenilo, 2-, 3-, o 4 -hidroxifenilo, 2-, 3-, o 4-metoxifenilo, 2-, 3-, o 4 -piridilmetilo, bencilo, feniletilo, 2-, 3-, o 4-hidroxibencilo, 2-, 3-, o 4 -benciloxibencilo, 2-, 3-, o 4 -alcoxibencilo de Ci-C6, y benciloxi (alquilo de Ci-C6)-; el grupo de caracterización de un a aminoácido natural, en el cual cualquier grupo funcional puede ser protegido; los grupos - [Alq] nR6 en donde Alq es (Ci-C6) alquilo o un grupo (C2-C6) alquenilo interrumpido opcionalmente por uno o más átomos de -O-, o -S- o los grupos -N(R7)- [en donde R7 es un átomo de hidrógeno o un grupo (Ci-C6) alquilo] , n es 0 ó 1, y R6 es un grupo cicloalquilo o cicloalquenilo sustituido opcionalmente ,· un grupo bencilo sustituido en el anillo de fenilo por un grupo de la fórmula -OCH2COR8 en donde R8 es hidroxilo, amino, ( Cx-C6 ) alcoxi , fenil (Cx-C6) alcoxi , (Cj.-C6) alquilamino, di ( (Ci-C6) alquil) amino, fenil (Ci- C6) lqui lamino, el residuo de un aminoácido o un haluro ácido, el derivado de éster o amida del mismo, el residuo que está enlazado por medio de un enlace de amida, el aminoácido que es seleccionado de glicina, a o ß. alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptófano, serina, treonina, cisteína, metionina, asparagina, glutamina, lisina, histidina, arginina, ácido glutámico, y ácido aspártico; un grupo de (Ci-C6) alquilo heterocíclico, ya sea no sustituido o mono o di-sustituido en el anillo heterocíclico con halo, nitro, carboxi, (Ci-C6) alcoxi , ciano, (Ci-C6) alcanoilo, trifluorometilo (Ci_C6) alquilo, hidroxi, formilo, amino, (Ci-C6) alquilamino, di- (Ci-C6) alquilamino, mercapto, (Ci-C3) alquiltio, hidroxi (d-C6) alquilo, mercapto(Ci -C6) alquilo o (Ci-C6) alquilfenilmetilo; y un grupo -CRaRbRc en el cual: cada uno de Ra, ¾ y Rc es independientemente hidrógeno, (Ci-C6) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, fenil (Ci-C6) alquilo, (C3-C8) cicloalquilo; o Rc es hidrógeno y Ra y Rb son independientemente fenilo o heteroarilo tal como piridilo; o Rc es hidrógeno, (d-C6) alquilo, (C2-Ce) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, fenil (Ci-C6) alquilo, o (C3-C8) cicloalquilo, y R y ¾ junto con el átomo de carbono al cual los mismos están fijados, forman un cicloalquilo de 3 a 8 miembros o un anillo heterocíclico de 5 a 6 miembros; o Ra, Rb y Rc junto con el átomo de carbono al cual los mismos están fijados forman un anillo tricíclico (por ejemplo adamantilo) ; o a y Rb son cada uno independientemente (Cx-Cs) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, fenil (C:.-C6) alquilo, o un grupo como se define para Rc posteriormente, diferente del hidrógeno, o Ra o Rb junto con el átomo de carbono al cual los mismos están fijados forman un anillo de cicloalquilo o heterocíclico, y Rc es hidrógeno, -OH, -SH, halógeno, -CN, -C02H, (Ci-C4) perfluoroalquilo, -CH2OH, -C02(Ci-C6) alquilo, -O (Ci-C6) alquilo, -O (C2-C6) alquenilo, -SiCx-C6) alquilo, -SO (Ci-C6) alquilo, -S02 (Ci-Cg) alquilo, -S(C2- C6) alquenilo, -SO (C2-C6) alquenilo, -S02 (C2-C6) alquenilo o un grupo -Q-W en donde Q representa un enlace u -0, -S-, -SO- o -S02- y W representa un grupo fenilo, fenilalquilo, (C3-C8) cicloalquilo, (C3-C8) cicloalquilalquilo, (C4-C8) cicloalquenilo, (C4-C8) cicloalquenilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo, tal grupo W puede estar sustituido opcionalmente por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de, hidroxilo, halógeno, -CN, -C02H, -C02 (Ci-C6) alquilo, -CONH2, -CONH (Ci-C6) alquilo, -C0NH{Ci. C6) alquil) 2, -CHO, -CH2OH, (Ci-C4) perfluoroalquilo, -0(Ci-C6) alquilo, -S (Ci-C6) alquilo, -SO (Ci-C6) alquilo, -S02(Ci-C6) alquilo, N02, -NH2, -NH (d-Cg) alquilo, -N ( (d-C6) alquil) 2, -NHC0(Ci-C5) alquilo, (Ci-C6) alquilo, (C2-C6) alquenilo, (C2-C6) alquinilo, (C3-C8) cicloalquilo, (d-d) cicloalquenilo, fenilo o bencilo Y es un enlace; L es un radical divalente de la fórmula - (Alq1)m(Q)n(Alq2)p- en donde m, n y p son independientemente 0 ó 1, Q es 1, 4-fenileno; Alq1 y Alq2 representan independientemente -CH2-, -CH2CH2- -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2- , -CH=CH-, -CH=CHCH2-, -CH2CH=CH-, CH2CH=CHCH2- , -C=C-, -C=CCH2-, CH2C=C- , CH2C=CCH2, -CH2W-, -CH2CH2W-, -WCH2CH2W-, -CH2CH2WCH2- , -CH2CH2WCH (CH3 ) - , -CH2WCH2CH2- , -CH2 CH2CH2WCH2- , o -WCH2CH2- en donde w es -O-, -S-, -NH-, -N(CH3)-, o -CH2CH2N(CH2CH20H) CH2-, o Alq1 y Alq2 podrían representar independientemente los radicales ciclopropilo, ciclopentilo o ciclohexilo; X representa un enlace, -O-, o -NHC(=0)-; y z es 0 ó 1.

7. Un agente para la formación de imágenes de conformidad con la reivindicación 2 ó 6, caracterizado porque el éster del alfa aminoácido mono o di-substituido está enlazado directamente al agente para la formación de imágenes por un radical de la fórmula (IB) en donde: el anillo D es un grupo seleccionado de (a) (b) (c) Rx es un grupo éster de COORi , en donde Ri4 se selecciona de metilo, trifluorometilo, etilo, n- o iso-propilo, n-, sec- o tere-butilo, neopentilo, ciclohexilo, ciclopentilo, norbornilo, alilo, fenilo, bencilo, 2-, 3- o 4-piridilmetilo, N-metilpiperidin-4 -ilo, tetrahidrofuran-3-ilo o metoxietilo; el radical -Y-L-X- [CH2] z- se selecciona de -(CH2)V-, -(CH2)vO-, -(CH2)wO- en donde v es l, 2, 3 ó 4 y w es 1, 2 Ó 3, y de -(CH2)-Het2-, -CH2-Ph- (Het1)yy- (CH2)X- (Het2)y- y -CH2-Ph-CH=CH- , en donde Ph es un grupo 1 , 4-fenileno, Het1 es -O- o -NH-, Het2 es -O-, -NH-, o -NHC(=0)-, x es 0, 1 ó 2, y es 0 ó 1 e yy es 0 ó 1.

8. agente para la formación de imágenes de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se selecciona de los compuestos que tienen la fórmula: y las sales de los mismos.

9. un agente para la formación de imágenes de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque se utiliza como un agente para la formación de imágenes para las células de macrófagos.

10. Un método para la formación de imágenes, para formar imágenes de las células de macrófagos, caracterizado porque comprende llevar a cabo un estudio para la formación de imágenes sobre un sujeto utilizando el agente para la formación de imágenes de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.