MX2013004083A - Moduladores de gpr 119. - Google Patents

Moduladores de gpr 119.

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MX2013004083A
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Kim Francis Mcclure
Ralph Pelton Robinson Jr
Michael John Munchhof
Vincent Mascitti
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Pfizer
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Abstract

En la presente se describen compuestos que modulan la actividad del receptor GPR119 acoplado a la proteína G y sus usos para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la modulación del receptor GPR119 acoplado a la proteína G en animales.

Description

MODULADORES DE GPR 119 CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a una nueva clase de cianopirazoles, composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos y su uso para modular la actividad del receptor GPR1 19 acoplado a la proteína G.
ANTECEDENTES La diabetes mellitus es un conjunto de trastornos que se manifiesta por altos niveles de glucosa en sangre como consecuencia de la homeostasis anormal de glucosa. Las formas más comunes de diabetes mellitus son la diabetes tipo I (también conocida como diabetes mellitus dependiente de insulina) y diabetes tipo II (también conocida como diabetes mellitus no dependiente de insulina). La diabetes tipo II, que representa aproximadamente el 90% de todos los casos de diabetes, es una enfermedad progresiva grave que produce complicaciones microvasculares (incluso retinopatía, neuropatía y nefropatía) y macrovasculares (incluso ateroesclerosis acelerada, enfermedad cardíaca coronaria y apoplejía).
En la actualidad, no existe cura para la diabetes. Los tratamientos estándar contra la enfermedad son limitados y se enfocan en el control de los niveles de glucosa en sangre a fin de minimizar o demorar las complicaciones. Los tratamientos actuales se dirigen a la resistencia a la insulina (metformina, tiazolidindionas) o a la liberación de insulina de células beta (sulfonilurea, exanatide). Las sulfonilureas y otros compuestos que actúan mediante la despolarización de las células beta promueven la hipoglucemia, dado que estimulan la secreción de insulina independientemente de las concentraciones de glucosa en circulación. Un fármaco aprobado, exanatide, estimula la secreción de insulina solo en presencia de altos niveles de glucosa, pero se debe inyectar debido a la falta de biodisponibilidad oral. Un inhibidor de dipeptidil peptidasa IV, sitagliptin, es un nuevo fármaco que aumenta los niveles en sangre de hormonas incretinas, lo cual puede aumentar la secreción de insulina, reducir la secreción de glucagón y tener otros efectos bien caracterizados. Sin embargo, sitagliptin y otros inhibidores de dipeptidil peptidasas IV también pueden afectar los niveles tisulares de otras hormonas y péptidos, y las consecuencias a largo plazo de este efecto amplio no se han investigado por completo.
En la diabetes tipo II, las células musculares, adiposas y hepáticas no responden de manera normal a la insulina. Esta afección (resistencia a la insulina) puede deberse a cantidades reducidas de receptores de insulina celular, a la interrupción de las vías de señalización celular o a ambas. En un comienzo, las células beta compensan la resistencia a la insulina mediante el aumento de la producción de insulina. Sin embargo, finalmente, las células beta no podrán producir suficiente insulina para mantener niveles normales de glucosa (euglicemia), lo que indica la evolución a diabetes tipo II.
En la diabetes tipo II, la hiperglucemia en ayunas se produce debido a la resistencia a la insulina en combinación con la disfunción de las células beta. La disfunción de las células beta presenta dos aspectos: 1) el aumento de la liberación de insulina basal (que ocurre en concentraciones de glucosa bajas no estimuladoras), que se observa en obesos, en etapas prediabétícas resistentes a la insulina, y en la diabetes tipo II; y 2) en respuesta a un episodio hiperglucémico, la imposibilidad de aumentar la liberación de insulina por encima del nivel basal de por sí ya elevado, lo cual no se produce en etapas prediabétícas y puede ser una señal de transición de estados normoglicémicos resistentes a la insulina a la diabetes tipo II. Las terapias actuales para tratar el último aspecto incluyen inhibidores del canal de potasio sensible a ATP de células beta para desencadenar la liberación de las reservas de insulina endógena y la administración de insulina exógena. Ninguna permite la normalización precisa de los niveles de glucosa en sangre y, además, conllevan el riesgo de producir hipoglucemia.
Por ello, existe un gran interés en el descubrimiento de agentes que funcionen de manera dependiente de la glucosa. Se conocen vías de señalización fisiológicas que funcionan de esta manera, incluso los péptidos intestinales GLP-1 y GIP. La vía de señalización de estas hormonas es a través de los receptores acoplados a la proteína G cognados para estimular la producción de cAMP en células beta pancreáticas. Aparentemente, el aumento de cAMP no produce la estimulación de la liberación de insulina durante el ayuno o el estado preprandial. Sin embargo, una gran cantidad de blancos bioquímicos de cAMP, incluso los canales de potasio sensibles a ATP, los canales de potasio sensibles al voltaje y la maquinaria exocitótica, se modulan de manera tal que se mejora considerablemente la secreción de insulina debido a la estimulación de glucosa posprandial. Por lo tanto, los moduladores agonistas de GPCR de células beta nuevos y de funcionamiento similar, incluso GPR119, también estimularían la liberación de insulina endógena y fomentarían la normalización de los niveles de glucosa en pacientes con diabetes tipo II. También se ha demostrado que el aumento de cAMP, por ejemplo, como resultado de la estimulación de GLP-1 , fomenta la proliferación de células beta, inhibe la muerte de células beta y, por ello, mejora la masa de islotes. Este efecto positivo en la masa de células beta debería de ser beneficioso en la diabetes tipo II, en donde se produce una cantidad insuficiente de insulina.
Se sabe que las enfermedades metabólicas tienen efectos negativos en otros sistemas fisiológicos y, con frecuencia, son concurrentes con numerosos estados de enfermedades (por ejemplo, diabetes tipo I, diabetes tipo II, tolerancia inadecuada a la glucosa, resistencia a la insulina, hiperglucemia, hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia, dislipidemia, obesidad o enfermedades cardiovasculares en el "síndrome X") o con enfermedades secundarias a la diabetes, como enfermedades hepáticas y neuropatía periférica. Por ello, el tratamiento de la afección diabética debería de ser beneficioso para tales estados de enfermedades interconectados.
De acuerdo con la presente invención, se ha descubierto una nueva clase de moduladores GPR 119. Estos compuestos incluyen: 4-{5-ciano-4-[(2,4-difluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-{5-ciano-4-[(2-metilfenoxi)metil]-1 H-pirazol-1-il}piperidin-1-carbox¡lato de isopropilo; 4-{5-ciano-4-[(2,5-difluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-{5-ciano-4-[(2,3-difluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-{4-[(4-carbamoil-2-fluorofenoxi)metil]-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-{4-[(4-carbamoilfenoxi)metil]-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-((4-cianofenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo; 4-(4-((4-(1 H-pirazol-1 -il)fenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo y 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1 -metil-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 - carboxilato de ¡sopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-(2-hidroxietil)-2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperid¡n-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1-(2-hidroxietil)-1 H-tetrazol-5-¡l)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-dano-4-{[2-fluoro-4-(1-metil-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1-il)piperi^ carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-{[4-(1-metil-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1-c^ de 1-metilciclopropilo; 4-(4-((4-carbamoil-3-fluorofenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-{1-[2-fluoro-4-(met¡lsulfonil)fe^ de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{1 -[(2-metilpiridin-3-il)oxi]etil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{2-[2-fluoro-4-(metilsulfonil)fenil]propil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{[(2-metilpiridin-3-il)oxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo; 4-{5-ciano-4-[(2,3,6-trifluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-{5-c¡ano-4-[(2,3,6-trifluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piper¡din-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(1-metil-1 H-imidazol-2-il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(1-met¡l-1 H-imidazol-5-il)fenoxi]metil}-1 H-pirazoí-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-[5-ciano-4-({[2-metil-6-(1 H-1 ,2,4-triazol-1 -il)piridin-3-¡l]ox¡}met¡l)-1 H-pirazol-1 -il]piperidin-1-carboxilato de isopropilo; 4-[5-ciano-4-({[2-metil-6-(1H-1 ,2,4-triazol-1-il)piridin-3-il]amino}metil)-1 H il]piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-[5-ciano-4-({[2-metil-6-(metilsulfonil)piridin-3-il]am¡no}metil)-1 H-pirazo carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{[4-( 1 H-tetrazol-1 -il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo; 1 -[1 -(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-il]-4-{[4-( 1 H-tetrazol-1 -il)fenoxi]met¡l}-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; 4-{5-ciano-4-[(3-cianofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1-il}piperidin-1-carboxilato de isopropilo; 4-{5-ciano-4-[(4-ciano-3-metilfenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-{5-ciano-4-[(4-cianofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-[(4-ciano-2-fluorofenoxi)metil]-1 -[1 -(5-etilpirímidin-2-il)piperidin-4-il]-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; 4-{5-ciano-4-[(4-ciano-2-fluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo; 4-{5-ciano-4-[(2-ciano-4-fluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{[4-(dirnetilcarbamoil)-2-fluorofenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{[4-(dimetilcarbamoil)-2-fluorofenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 - carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(metilcarbamoil)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-({5-ciano-1-[1-(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4^ dimetilbenzamida; 4-{5-ciano-4-[(4-ciano-2-fluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo; (3S,4S)-4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(metilcarbamoil)f^^ fluoropiperidin-1 -carboxilato de fer-butilo; (3R,4S)-4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(metilcarbamoil)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1-il)-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de fer-butilo; (3S,4S)-4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(metilcarbamoil)fenoxi]met¡l}-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; (3R,4R)-4-(5-c¡ano-4-{[2-fluoro-4-(metilcarbamoil)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1-il)-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; (3S,4S)-4-(5-ciano-4-{[(2-metilpiridin-3-il)oxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de fer-butilo; (3S,4R)-4-(5-ciano-4-{[(2-metilpiridin-3-il)oxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropipéridin-1-carboxilato de fer-butilo; (3S,4R)-4-(5-ciano-4-{[(2-metilpiridin-3-il)oxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; (3S,4R)-4-(5-ciano-4-{[(2-metilpiridin-3-il)oxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; (3R,4S)-4-(5-ciano-4-{[(2-metilpiridin-3-il)oxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-{[4-(1 H-1 , 2, 3-triazol-1 -il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)p¡peridin-1 -carboxilato de ter-butilo; 4-(5-ciano-4-{[4-(2H-1 ,2,3-triazol-2-il)fenox¡]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piperid¡n-1 -carboxilato de ter-butilo; 4-(4-((4-(1 H-1 , 2, 3-triazol-1-il)fenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(4-((4-(2H-1 ,2,3-triazol-2-il)fenoxi)met¡l)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-[5-ciano-4-({[1 -(metilsulfonil)piperidin-4-il]oxi}metil)-1 H-pirazol-1 -il]piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo; 4-[5-ciano-4-({2-fluoro-4-[(2-hidroxietil)(meW il]piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo; 4-[5-ciano-4-({2-fluoro-4-[(3-hidroxipirrolidin-1 -il)carbonil]fenoxi}metil)-1 H-pirazol-1 -il]piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo; 4-(4-{[4-(azetidin-1-ilcarbonil)-2-fluorofenoxi]metil}-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de ter-butilo; 4-[5-ciano-4-({[1 -(metilsulfonil)piperidin-4-il]oxi}metil)-1 H-pirazol-1 -il]piperidin-.1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1 H-1 ,2,3-?p3???-1-??)?ß????)G?ß???)-1 ?-??G3???-1-??)???ßp???G?-1-carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 1 -(1 -(5-et¡lpirimidin-2-il)piperid¡n-4-il)-4-((2-fluoro-4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; 4-(4-((4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)fenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-((4-(1H-1 ,2,3-triazol-1-il)fenoxi)met¡ carbonitrilo; 4-(4-((4-(2H-1 ,2,3-triazol-2-il)fenoxi)metil)-5-ciano-1H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de ¡sopropilo; 4-((4-(2H-1 ,2,3-triazol-2-il)fenoxi)metil)-1-(1-(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-il)-1 H carbonitrilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2H-1 ,2,3-triazol-2-il)fenoxi)metil)-1H-pirazol-1-il)piperi carboxilato de 1-metilciclopropilo¡ 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2H-1 ,2,3-triazol-2-il)fenoxi)metil)-1H-pirazol-1-il)piperid^ carboxilato de ¡sopropilo; 1-(1-(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-il)-4-((2-fluoro-4-(2H-1 ,2,3-triazol-2-il)fenox¡)metil)-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; 4-(4-((5-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)piridin-2-iloxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(4-((5-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)piridin-2-iloxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-((3-fluoro-4-(1 H-tetrazol-1 -il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-((3-fluoro-4-(1 H-tetrazol-1 -il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo; 1 -(1 -(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-il)-4-((3-fluoro-4-(1 H-tetrazol-1 -il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; 4-((5-(1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)piridin-2-iloxi)metil)-1 -(1 -(5-etilpirimidin-2-il)pipendin-4-il)-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; 1 -(1 -(5-etilpirimidin-2-tl)piperidin-4-il)-4-((2-metil-6-(1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)piridin-3-iloxi)metil)-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; 4-(5-ciano-4-((2-metil-6-(1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)piridin-3-iloxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-metil-6-(1H-1 ,2,3-tnazol-1-il)piridin-3-iloxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin carboxilato de 1-metilciclopropilo; 1 -(1-(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-il)-4-((2-fluoro-4-(1 -metil-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; 1-(4-((4-(azetidin-1-carbonil)-2-fluorofenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(4-((4-(azetidin-1-carbonil)-2-fluorofenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo; y 4-((4-(azetidin-1 -carbonil)-2-fluorofenoxi)metil)-1 -(1 -(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-il)-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico.
Estos compuestos modulan la actividad del receptor de acoplado a la proteína G. Más específicamente, los compuestos modulan GPR119. Como tales, dichos compuestos son útiles para el tratamiento de enfermedades, como la diabetes, en donde la actividad de GPR1 9 contribuye a la patología o a los síntomas de la enfermedad. Los ejemplos de dichas afecciones incluyen hiperlipidemia, diabetes mellitus tipo I, diabetes mellitus tipo II, diabetes tipo I idiopática (tipo Ib), diabetes autoinmunitaria latente en adultos (LADA), diabetes tipo II de inicio temprano (EOD), diabetes atípica de inicio en la juventud (YOAD), diabetes juvenil de Inicio en la madurez (MODY), diabetes relacionada con la malnutrición, diabetes gestacional, enfermedad cardíaca coronaria, apoplejía isquémica, restenosis después de la angioplastía, enfermedad vascular periférica, claudicación intermitente, infarto de miocardio (por ejemplo, necrosis y apoptosis), dislipidemia, lipemia posprandial, afecciones relacionadas con la intolerancia a la glucosa (IGT), afecciones relacionadas con la alteración de la glucosa en plasma en ayunas, acídosis metabólica, cetosis, artritis, obesidad, osteoporosis, hipertensión, insuficiencia cardíaca congestiva, hipertrofia ventricular izquierda, enfermedad arterial periférica, retinopatía diabética, degeneración macular, cataratas, nefropatía diabética, glomeruloesclerosis, insuficiencia renal crónica, neuropatía diabética, síndrome metabólico, síndrome X, síndrome premenstrual, enfermedad cardíaca coronaria, angina de pecho, trombosis, ateroesclerosis, accidente isquémico transitorio, apoplejía, restenosis vascular, hiperglucemia, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, resistencia a la insulina, alteración del metabolismo de la glucosa, afecciones relacionadas con la alteración de la tolerancia a la glucosa, afecciones relacionadas con la alteración de la glucosa en plasma en ayunas, obesidad, disfunción eréctil, afecciones de la piel y del tejido conectivo, úlceras en el pie y colitis ulcerosa, disfunción endotelial y alteraciones de la distensibilidad vascular. Los compuestos se pueden usar para tratar trastornos neurológicos, tales como enfermedad de Alzheimer, esquizofrenia y deterioro cognitivo. Los compuestos también son beneficiosos en enfermedades gastrointestinales, tales como enfermedad intestinal inflamatoria, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, síndrome del intestino irritable, etc. Como se mencionó anteriormente, los compuestos también se pueden usar para estimular la pérdida de peso en pacientes obesos, especialmente en los diabéticos.
Otra forma de realización de la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de la presente invención. Por lo general, dichas formulaciones contienen un compuesto de la presente invención en una mezcla con al menos un excipiente aceptable desde el punto de vista farmacéutico. Dichas formulaciones también pueden contener al menos un agente farmacéutico adicional. Los ejemplos de tales agentes incluyen agentes contra la obesidad y/o agentes contra la diabetes. Los aspectos adicionales de la invención se refieren al uso de compuestos de la presente invención en la preparación de medicamentos para el tratamiento de la diabetes y afecciones relacionadas, como se describen en la presente.
Cabe destacar que tanto el resumen anterior como la siguiente descripción detallada se incluyen solo con fines explicativos y a modo de ejemplo, y no restringen el alcance de la invención, como se reivindica.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se puede comprender aún con mayor facilidad por referencia a la siguiente descripción detallada de formas de realización de ejemplo de la invención y los ejemplos incluidos en ella.
Cabe destacar que la presente invención no se limita a métodos de realización de síntesis específicos que, por supuesto, pueden variar. Asimismo, cabe destacar que la terminología que se usa en la presente tiene como finalidad describir solamente formas de realización particulares y no pretende limitarlas. El plural y el singular se usan indistintamente, a excepción de cuando se indica la cantidad: a. "Halógeno" se refiere a un átomo de cloro, flúor, yodo o bromo. b. "C1-C4 alquilo" se refiere a un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 a 5 átomos de carbono, tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, etc.; c. "C1-C4 alcoxi" se refiere a un grupo alcoxi de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 a átomos de carbono, tales como metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, isobutoxi, etc.; d. "C3-C6 cicloalquilo" se refiere a un anillo no aromático completamente hidrogenado y que existe como un anillo único. Los ejemplos de dichos anillos carbocíclicos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo; "CrC4 haloalquílo" se refiere a un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 a 4 átomos de carbono, sustituidos con uno o más átomos de halógeno; "C^CA haloalcoxi" se refiere a un grupo alcoxi de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 a 4 átomos de carbono, sustituidos con uno o más átomos de halógeno; "Heteroarilo de 5 a 10 miembros" significa un sistema aromático carbocíclico que tiene un total de 5 a 10 átomos del anillo y que contiene 1 , 2, 3 o 4 heteroátomos seleccionados independientemente de oxígeno, nitrógeno y azufre, y que tiene 1 , 2 o 3 anillos, en donde dichos anillos pueden fusionarse. El término "fusionado" significa que existe un segundo anillo (es decir, unido o formado) que tiene dos átomos adyacentes en común (es decir, compartidos) con el primer anillo. El término "fusionado" es equivalente al término "condensado". El término "heteroarilo" abarca radicales aromáticos, tales como piridina, piridazina, pirazina, pirimidina, imidazo[1 ,2-a]piridina, imidazo[1 ,5-a]piridina, [1 ,2,4]triazolo[4,3-a]piridina, [1 ,2,4]triazolo[4,3-b]piridazina, [1 ,2,4]triazolo[4,3-a]pirimidina y [1 ,2,4]triazolo[1 ,5-ajpiridina; "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una cantidad de un compuesto de la presente invención que (i) trata o previene la enfermedad, afección o trastorno particulares, (ii) atenúa, mejora o elimina uno o más síntomas de la enfermedad, afección o trastorno particulares, o (iii) previene o retrasa el inicio de uno o más síntomas de la enfermedad, afección o trastorno particulares que se describen en la presente; "paciente" se refiere a animales de sangre caliente, tales como cobayos, ratones, ratas, jerbos, gatos, conejos, perros, monos, chimpancés y seres humanos; "tratamiento" abarca tanto el tratamiento preventivo, es decir, profiláctico, como el paliativo, es decir, para aliviar o retrasar el progreso de la enfermedad (o afección) del paciente o cualquier daño tisular asociado con la enfermedad; los términos "modulado", "modulación" o "modular", como se usan en la presente, a menos que se indique lo contrario, se refieren a la activación del receptor GPR1 19 acoplado a la proteína G con compuestos de la presente invención; "aceptable desde el punto de vista farmacéutico" indica que la sustancia o la composición deben ser química y/o toxicológicamente compatibles con los otros ingredientes que comprenden una formulación, y/o con el mamífero que se trata con ellos. "sales" se refiere a sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico y a sales adecuadas para el uso en procesos industriales, tales como la preparación del compuesto. "sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico" se refiere a "sales de adición ácida aceptables desde el punto de vista farmacéutico", o "sales de adición básica aceptables desde el punto de vista farmacéutico ", según la estructura real del compuesto. las "sales de adición ácida aceptables desde el punto de vista farmacéutico" pretenden aplicarse a cualquier sal de adición ácida orgánica o inorgánica no tóxica de los compuestos de base o cualquiera de sus intermediarios. Los ácidos inorgánicos ilustrativos que forman sales adecuadas incluyen ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico y fosfórico, y sales metálicas ácidas, tales como ortofosfato monoácido de sodio y sulfato ácido de potasio. Los ácidos orgánicos ilustrativos, que forman sales adecuadas, incluyen ácidos monocarboxílicos, dicarboxilicos y tricarboxilicos. Los ejemplos de dichos ácidos son el ácido acético, glicólico, láctico, pirúvico, malónico, succínico, glutárico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, maleico, hidroximaleico, benzoico, hidroxibenzoico, fenilacético, cinámico, salicílico, 2-fenoxibenzoico, p-toluensulfónico, y ácidos sulfónicos, tales como ácido metansulfónico y ácido 2-hidroxietansulfónico. Dichas sales pueden existir en forma hidratada o prácticamente anhidra. En general, las sales de adición ácida de estos compuestos son solubles en agua y en varios solventes orgánicos hidrófilos. p. las "sales de adición básica aceptables desde el punto de vista farmacéutico" pretenden aplicarse a cualquier sal de adición básica orgánica o inorgánica no tóxica de los compuestos o cualquiera de sus intermediarios. Las bases ilustrativas que forman sales adecuadas incluyen hidróxidos de metales alcalinos o metales alcalinotérreos, tales como hidróxidos de sodio, potasio, calcio, magnesio o bario; amoniaco y aminas orgánicas alifáticas, alicíclicas o aromáticas, tales como metilamina, dimetilamina, trimetilamina y picolina. q. "isómero" significa "estereoisómero" e "isómero geométrico", como se definen a continuación. "Estereoisómero" se refiere a compuestos que tienen uno o más centros quirales, y cada centro puede existir en la configuración R o S. Los estereoisómeros incluyen todas las formas diastereoméricas, enantioméricas y epiméricas, así como racematos y mezclas de estos. "Isómero geométrico" se refiere a compuestos que pueden existir en formas cis, trans, anti, syn, entgegen (E) y zusammen (Z), así como mezclas de estos.
Determinados compuestos de la presente invención pueden existir como isómeros geométricos. Los compuestos pueden tener uno o más centros asimétricos; por lo tanto, pueden existir como dos o más formas estereoisoméricas. La presente invención incluye todos los estereoisómeros e isómeros geométricos individuales de los compuestos de la presente invención y las mezclas de estos. Los enantiómeros individuales se pueden obtener mediante separación quiral o usando el enantiómero pertinente en la síntesis. Como se mencionó anteriormente, algunos de los compuestos existen como isómeros. Estas mezclas de isómeros se pueden separar en sus isómeros individuales sobre la base de sus diferencias fisicoquímicas mediante métodos conocidos por los expertos en el arte, tales como cromatografía y/o cristalización fraccional. Los enantiómeros se pueden separar convirtiendo la mezcla enantiomérica en una mezcla diastereomérica mediante la reacción con un compuesto ópticamente activo adecuado (por ejemplo, auxiliar quiral, tal como un alcohol quiral o cloruro ácido de Mosher), separando los diastereoisómeros y convirtiendo (por ejemplo, mediante hidrolización) los diastereoisómeros individuales en los enantiómeros puros correspondientes. Los enantiómeros también se pueden separar usando una columna de HPLC quiral. De manera alternativa, los estereoisómeros específicos se pueden sintetizar usando un material de inicio ópticamente activo, mediante síntesis asimétrica con reactivos, sustratos, catalizadores o solventes ópticamente activos, o mediante la conversión de un estereoisómero en otro mediante transformación asimétrica.
La presente invención también abarca compuestos de la presente invención etiquetados de manera isotópica, que son idénticos a los enumerados en la presente, excepto que uno o más átomos se reemplazan por un átomo que tiene una masa atómica o número de masa diferente de la masa atómica o número de masa que se halla habitualmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporar en compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre, flúor, yodo y cloro, tales como H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 150, 170, 180, 31P, 32P, 35S, 18F, 23l, 125l y 36CI, respectivamente.
Ciertos compuestos de la presente invención etiquetados de manera isotópica (por ejemplo, aquellos etiquetados con 3H y 14C) son útiles en ensayos de distribución en tejido sustrato y/o compuesto. Ciertos ligandos etiquetados de manera isotópica, que incluyen tritio, 4C, 35S y 125l, pueden ser útiles en ensayos de unión de radioligando. Los isótopos del tritio (es decir, 3H) y del carbono-14 (es decir, 14C) se prefieren particularmente por su sencilla preparación y detectabilidad. Además, la sustitución con isótopos más pesados, tal como deuterio (es decir, 2H) puede brindar ciertas ventajas terapéuticas que son el resultado de una mayor estabilidad metabólica (por ejemplo, mayor vida media in vivo o menos requisitos de dosificación) y, por ello, pueden ser preferibles en algunas circunstancias. Los isótopos que emiten positrones, tales como 150, 13N, 11C y 18F, son útiles en estudios de tomografia por emisión de positrones (PET) para estudiar la ocupación del receptor. Por lo general, los compuestos de la presente invención etiquetados de manera isotópica se pueden preparar siguiendo procedimientos análogos a los descritos en los Esquemas y/o en los Ejemplos que se encuentran más adelante, sustituyendo un reactivo etiquetado de manera isotópica con un reactivo no etiquetado de manera isotópica.
Determinados compuestos de la presente invención pueden existir en más de una forma de cristal (por lo general, se denominan "polimorfos"). Los polimorfos se pueden preparar mediante cristalización en varias condiciones, por ejemplo, usando diferentes solventes o mezclas de solventes para la recristalización, cristalización a diferentes temperaturas, y/o varios modos de enfriamiento, que varían de un enfriamiento muy rápido a uno muy lento durante la cristalización. Los polimorfos también se pueden obtener mediante el calentamiento o la fusión del compuesto de la presente invención, seguido del enfriamiento gradual o rápido. La presencia de polimorfos se puede determinar mediante espectroscopia de RMN con sonda sólida, espectroscopia IR, calorimetría de barrido diferencial, difracción de rayos X en polvo u otras técnicas similares.
Además, los compuestos de la presente invención pueden existir en forma no solvatada y en forma solvatada con solventes aceptables desde el punto de vista farmacéutico, tales como agua, etanol y similares. En general, a los fines de la presente invención, las formas solvatadas se consideran equivalentes a las formas no solvatadas. Los compuestos también pueden existir en uno o más estados cristalinos, es decir, como cocristales, polimorfos, o pueden existir como sólidos amorfos. La invención y las reivindicaciones abarcan todas dichas formas.
En una forma de realización de la presente invención, la composición también incluye al menos un agente farmacéutico adicional seleccionado del grupo que consiste en un agente contra la obesidad y un agente contra la diabetes. Los ejemplos de agentes contra la obesidad incluyen dirlotapide, mitratapide, implitapide, R56918 (CAS N.° 403987), CAS N.° 913541-47-6, lorcaserin, cetilistat, PYY3.36, naltrexone, oleoyl-estrone, obinepitide, pramlintide, tesofensine, leptin, liraglutide, bromocriptine, orlistat, exenatide, AOD-9604 (CAS N.° 221231-10-3) y sibutramine. Los ejemplos de agentes contra la diabetes incluyen metformin, acetohexamide, chlorpropamide, diabinese, glibenclamide, glipizide, glyburide, glimepiride, gliclazide, glipentide, gliquidone, glísolamide, tolazamide, tolbutamide, tendamistat, trestatin, acarbose, adiposine, camiglibose, emiglitate, mlglitol, voglibose, pradimicin-Q, salbostatin, balaglitazone, ciglitazone, darglitazone, englitazone, isaglitazone, pioglitazone, rosiglitazone, troglitazone, exendin-3, exendin-4, trodusquemine, reservatrol, extracto de hyrtiosal, sitagliptin, vildagliptin, alogliptin y saxagliptin.
En otra forma de realización de un método de la presente invención, los compuestos o las composiciones de la presente invención se pueden administrar en una cantidad eficaz para tratar una. afección seleccionada del grupo que consiste en hiperlipidemia, diabetes tipo I, diabetes mellitus tipo II, diabetes tipo I idiopática (tipo Ib), diabetes autoinmunitaria latente en adultos (LADA), diabetes tipo II de inicio temprano (EOD), diabetes atípica de inicio en la juventud (YOAD), diabetes juvenil de inicio en la madurez (MODY), diabetes relacionada con la malnutrición, diabetes gestacional, enfermedad cardíaca coronaria, apoplejía isquémica, restenosis después de la angioplastía, enfermedad vascular periférica, claudicación intermitente, infarto de miocardio (por ejemplo, necrosis y apoptosis), dislipidemia, lipemia posprandial, afecciones relacionadas con la intolerancia a la glucosa, afecciones relacionadas con la alteración de la glucosa en plasma en ayunas, acidosis metabólica, cetosis, artritis, obesidad, osteoporosis, hipertensión, insuficiencia cardíaca congestiva, hipertrofia ventricular izquierda, enfermedad arterial periférica, retinopatía diabética, degeneración macular, cataratas, nefropatía diabética, glomeruloesclerosis, insuficiencia renal crónica, neuropatía diabética, síndrome metabólico, síndrome X, síndrome premenstrual, enfermedad cardíaca coronaria, angina de pecho, trombosis, ateroesclerosis, infarto de miocardio, accidente isquémico transitorio, apoplejía, restenosis vascular, hiperglucemia, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, resistencia a la insulina, alteración del metabolismo de la glucosa, afecciones relacionadas con la alteración de la tolerancia a la glucosa, afecciones relacionadas con la alteración de la glucosa en plasma en ayunas, obesidad, disfunción eréctil, afecciones de la piel y del tejido conectivo, úlceras en el pie y colitis ulcerosa, disfunción endotelial y alteraciones de la distensibilidad vascular, híper lipoproteinemia apo B, enfermedad de Alzheimer, esquizofrenia, deterioro cognitivo, enfermedad inflamatoria intestinal, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn y síndrome del intestino irritable.
En otra forma de realización, el método también incluye administrar una segunda composición que comprende al menos un agente farmacéutico adicional seleccionado del grupo que consiste en un agente contra la obesidad y un agente contra la diabetes, y al menos un excipiente aceptable desde el punto de vista farmacéutico. Este método se puede usar para la administración de composiciones de manera simultánea o secuencial, y en cualquier orden.
Aun en otra forma de realización, los compuestos de la presente invención son útiles para la fabricación de un medicamento a fin de tratar una enfermedad, afección o trastorno que modula la actividad del receptor GPR1 19 acoplado a la proteína G. Asimismo, los compuestos son útiles para preparar un medicamento para el tratamiento de la diabetes o de una morbilidad asociada a la diabetes.
Síntesis Los esquemas de reacción representados más adelante con fines ilustrativos proporcionan posibles vías para la síntesis de los compuestos de la presente invención y de intermediarios clave. Para una descripción detallada de cada una de las etapas de reacción, véase la sección Ejemplos que se encuentra más adelante. Los expertos en el arte tendrán en cuenta que se pueden usar otras vías de síntesis para sintetizar los compuestos de la invención. Si bien en los esquemas se representan reactivos y materiales de inicio específicos, que se analizan más adelante, se los pueden sustituir fácilmente con otros reactivos y materiales de inicio para proporcionar una variedad de derivados y/o condiciones de reacción. Además, muchos de los compuestos preparados mediante los métodos descritos más adelante se pueden volver a modificar, en función de esta descripción, usando la química convencional conocida por los expertos en el arte.
Los compuestos de la invención se pueden sintetizar mediante vías de síntesis que incluyen procesos análogos a los que se conocen en las artes químicas, en particular, en función de la descripción de la presente. Por lo general, los materiales de inicio están disponibles de fuentes comerciales, como Aldrich Chemicals (Milwaukee, Wl) o se preparan con facilidad usando métodos conocidos por los expertos en el arte (por ejemplo, se preparan mediante métodos descritos en Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reaqents for Or anic Synthesis, v. 1 -19, Wiley, New York (1967-1999 ed.) o Beilsteins Handbuch der orqanischen Chemie. 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlín, incluso suplementos (también disponibles mediante la base de datos en línea Beilstein).
Los compuestos de la presente invención se pueden preparar usando métodos análogos a los conocidos en el arte para la producción de éteres. La atención del lector se dirige a textos tales como: 1) Hughes, D. L; Organic Reactions 1992, 42 Hoboken, NJ, Estados Unidos; 2) Tikad, A.; Routier, S.; Akssira, M.; Leger, J -M I; Jarry, C; Guillaumet, G. Synlett 2006, 12, 1938-42; y 3) Loksha, Y. M.; Globisch, D.; Pedersen, E. B.; La Colla, P.; Collu, G.; Loddo, R. J. Het. Chem. 2008, 45, 1 161-6 que describen dichas reacciones en mayor detalle.
Esquema 1 El Esquema 1 se puede usar para preparar compuestos del a Fórmula N, donde Z es -C(0)-0-R6 o pirimidina sustituida con C1-C4 alquilo, CF3, halógeno, ciano, C3-C6 cicloalquilo o C3-C6 cicloalquilo, en donde un átomo de carbono de dicha porción de cicloalquilo se puede sustituir opcionalmente con metilo o etilo; m es 1 , 2 o 3; n es 0, 1 o 2; R1 es hidrógeno, C1-C4 alquilo o C3-C6 cicloalquilo; R2a es hidrógeno, flúor o ( C4 alquilo; cada R3 se selecciona de manera individual del grupo qué consiste en: hidroxi, halógeno, ciano, C1-C4 alquilo, Ci-C4 alcoxi, C1-C4 haloalquilo, C C4 haloalcoxi, -S02-R7, -P(0)(OR8)(OR9), -C(0)-NR8R9 , -IS CHaVCO-O-íd-C.,) alquilo, -NH-CO-0-(C C4) alquilo,-NH-CO-(C C )alquilo, -N(CH3)-CO-(Ci-C4) alquilo, -NH-(CH2)2-OH y un grupo heteroarilo de 5 a 6 miembros que contiene 1 , 2, 3 o 4 heteroátomos que se seleccionan independientemente de oxígeno, nitrógeno y azufre, en donde un átomo de carbono en dicho grupo heteroarilo es opcionalmente sustituido con R4a, o un átomo de nitrógeno en dicho grupo heteroarilo es opcionalmente sustituido con R4b; R4a es hidrógeno, Ci-C alquilo, C C4 alcoxi, C C4 haloalquilo o halógeno, en donde dicho alquilo es opcionalmente sustituido con hidroxilo o C C alcoxi; R4b es hidrógeno, CVC4 alquilo, -??2-(- -03 haloalquilo, -C2-C4 alquilo-OH o -CH2-C C4 alcoxi; R5 es hidrógeno, o cuando R es hidrógeno, entonces R5 es hidrógeno o C C4 alquilo; R6 es C1-C4 alquilo o C3-C6 cicloalquilo, en donde un átomo de carbono de dicha porción de cicloalquilo se puede sustituir opcionalmente con metilo o etilo; R7 está representado por C C4 alquilo, C3-C3 cicloalquilo, NH2 o -(CH2)2-OH; R8 está representado por hidrógeno o C1-C4 alquilo; y R9 está representado por hidrógeno, C -C4 alquilo, C3-C6 cicloalquilo, -(CH2)2-OH, - (CH2)2-0-CH3, -(CH2)3-OH, -(CH2)3-0-CH3, 3-oxetanilo o 3-hidroxiciclobutilo; o cuando R3 es -C(0)-NR8R9, R8 y R9 se pueden tomar junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo de azetidina, pirrolidina, piperidina o morfolina.
En la Etapa 1 , los compuestos de la Fórmula C se pueden preparar mediante una reacción de condensación de los compuesto de la Fórmula A y el compuesto comercial B (Sigma-Aldrich) en una disposición diversa de solventes, que incluye, entre otros, etanol, tolueno y acetonitrilo a temperaturas que varían de 22 °C a 130 °C, en función del solvente usado durante un período de 1 a 72 horas. En los casos en donde los compuestos de la Fórmula A son sales de ácido trifluoroacético o cloruro de hidrógeno, se pueden agregar modificadores de base, tales como acetato de sodio o bicarbonato de sodio en 1 a 3 equivalentes, a fin de neutralizar las sales. La reacción se puede llevar a cabo en solventes polares próticos, tales como metanol y etanol, a temperaturas que varían de 22 °C a 85 °C. Las condiciones típicas para esta transformación incluyen el uso de 3 equivalentes de acetato de sodio en etanol calentados a 85 °C durante 3 horas.
Los compuestos de la Fórmula A se pueden preparar mediante un procedimiento de 4 etapas que comienza con sales de clorhidrato de 4-piperidinona sustituidas o no sustituidas (J. Med. Chem. 2004, 47, 2180). En primer lugar, estas sales se tratan con un cloroformiato de alquilo o dicarbonato de bis(alquilo) adecuados en presencia de un exceso de base para formar el carbamato de alquilo correspondiente. El grupo cetona luego se condensa con hidrazida de íer-butoxicarbonilo para formar el derivado de hidrazona protegida con /V-(ter-butoxi)carbonilo (BOC) correspondiente. Luego, esto se reduce al derivado de hidrazina protegida con BOC correspondiente usando agentes reductores, tales como cianoborohidruro de sodio y triacetoxiborohidruro de sodio. Finalmente, el grupo A/-(ter-butoxi)carbonilo se escinde en condiciones ácidas, tales como ácido trifluoroacético o ácido clorhídrico, para obtener compuestos de la Fórmula A que, por lo general, se aislan y se usan como las sales correspondientes (por ejemplo, sal de diclorhidrato).
En la Etapa 2, los compuestos de la Fórmula D se pueden preparar de compuestos de la Fórmula C mediante la formación de sales de diazonio intermediarias mediante la reacción de Sandmeyer (Comp. Org. Synth., 1991 , 6, 203). Estas sales se pueden preparar mediante diazotización de los compuestos de la Fórmula C con nitrito de sodio y ácidos acuosos, tales como ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico y acético solos o combinados. Por lo general, esta reacción se lleva a cabo en agua de 0 °C a 100 °C. De manera alternativa, se pueden usar condiciones anhidras con nitritos de alquilo, tales como ter-butilnitrito con solventes, tales como acetonitrilo (J. Med. Chem. 2006, 49, 1562) a temperaturas que varían de 0 °C a 95 °C. Luego, estos intermediarios de diazonio se hacen reaccionar con sales de cobre, tales como bromuro de cobre(ll), bromuro de cobre(l) o con tribromometano, para formar compuestos de la Fórmula D. Las condiciones típicas para esta transformación incluyen el uso de ter-butilnitrito, bromuro de cobre(ll) en acetonitrilo a 65 °C durante 30 minutos.
En la Etapa 3, los compuestos de la Fórmula E se pueden preparar de compuestos de la Fórmula D mediante el uso de agentes reductores, tales como hidruro de litio y aluminio, borohidruro de sodio, borohidruro de litio, borano-dimetilsulfuro, borano-tetrahidrofurano en solventes apróticos polares, tales como tetrahidrofurano, dietiléter, 1 ,4-dioxano o 1 ,2-dimetoxietano a temperaturas que varían de O °C a 1 10 °C durante 1 a 24 horas. Las condiciones típicas incluyen el uso de borano-dimetilsulfuro en tetrahidrofurano a 70 °C durante 14 horas.
A fin de preparar compuestos de la Fórmula F de compuestos de la Fórmula E, se debe incorporar un grupo ciano (Etapa 4). Esto se puede lograr mediante una variedad de condiciones. Un método para la introducción del grupo ciano puede ser el uso de una sal de cobre, tal como cianuro de cobre, en un solvente aprótico polar, tal como N,N-dimetilformamida (DMF), /V-metilpirrolidinona (NMP), ? ,/V-dimetilacetamida (DMA), a temperaturas que varían de 22 °C a 200 °C durante 1 a 24 horas. El cianuro de cobre en /V.N-dimetilformamida que se calienta a 165 °C durante 5 horas es un protocolo típico para esta transformación.
De manera alternativa, en la Etapa 4, las sales de cianuro alcalino, tales como cianuro de potasio o de sodio, se pueden usar junto con catalizadores, tales como 18-corona-6 (US2005020564) y/o bromuro de tetrabutílamonio (J. Med. Chem. 2003, 46, 1 144) en solventes apróticos polares, tales como acetonitrilo y dimetilsulfóxido, a temperaturas que varían de 22 °C a 100 °C para la adición de un grupo ciano a este molde.
Finalmente, el uso de catalizadores de metal es común para la transformación representada en la Etapa 4. Las sales de cianuro comunes que se usan en procedimientos catalíticos incluyen cianuro de zinc, cianuro de cobre, cianuro de sodio y hexacianoferrato de potasio (II). Los catalizadores de metal pueden ser catalizadores de cobre, tales como yoduro de cobre, y/o catalizadores de paladio, tales como tris(dibencilidenacetona)dipaladio (Pd2(dba)3), tetrakis-trifenilfosfina de paladio (Pd(PPh3)4) o dicloro(difenil-fosfinoferroceno)-paladio (Pd(dppf)CI2). Estos catalizadores se pueden usar solos o en combinación con cualquiera de las sales de cianuro antes mencionadas. A estas reacciones se pueden agregar ligandos, tales como, 1 ,1'-bis(difenilfosfino)-ferroceno (dppf), o aditivos de metal, tales como metal de cobre o zinc. Las reacciones se llevan a cabo en solventes apróticos polares, tales como NMP, DMF, DMA, con o sin agua como aditivo. Las reacciones se llevan a cabo a temperaturas que varían de 22 °C a 150 °C mediante calentamiento convencional o en microondas durante 1 a 48 horas, y se pueden realizar en un recipiente de reacción sellado o sin sellar. Las condiciones típicas de la Etapa 4 incluyen el uso de cianuro de zinc, Pd2(dba)3, dppf y polvo de zinc en DMA calentado a 120 °C en un microondas durante 1 hora (J. Med. Chem. 2005, 48, 1132).
En la Etapa 5, los compuestos de la Fórmula G se pueden sintetizar de los compuestos de la Fórmula F mediante la reacción de Mitsunobu. Se hace una reseña de la reacción de Mitsunobu en la literatura de síntesis (por ejemplo, Chem. Asían. J. 2007, 2, 1340; Eur. J. Org. Chem. 2004, 2763; S. Chem. Eur. J. 2004, 10, 3130), y se pueden usar muchos de los protocolos de síntesis que se enumeran en estas reseñas. El uso de protocolos de la reacción de Mitsunobu que usan azodicarboxilatos, tales como azodicarboxilato de dietilo (DEAD), azodicarboxilato de di-fer-butilo (TBAD), azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD) y un reactivo de fosfina, tal como trifenilfosfina (PPh3), tributilfosfina (PBu3) y trifenilfosfina soportada por polímero (PS-PPh3), se combinan con compuestos de la Fórmula F y un compuesto de la estructura general X-OH. Los solventes que se usan en esta reacción pueden incluir solventes apróticos, tales como tolueno, benceno, THF, 1 ,4-dioxano y acetonitrilo, a temperaturas que varían de 0 °C a 130 °C, en función del solvente y los azodicarboxilatos que se utilicen. Las condiciones típicas para esta transformación son el uso de DEAD con PS-PPh3 en 1 ,4-dioxano a 22 °C durante 15 horas.
Una alternativa a la reacción de Mitsunobu para la preparación de compuestos de la Fórmula G es convertir los compuestos de la Fórmula F en los derivados de metansulfonato o para-toluensulfonato correspondientes usando cloruro de metansulfonilo o cloruro de para-toluensulfonilo, respectivamente, en presencia de una base, tal como trietilamina o piridina. El éster de sulfonato intermediario luego se combina con un compuesto de X-OH general, en presencia de una base, tal como carbonato de potasio, hidruro de sodio o ter-butóxido de potasio, para obtener compuestos de la Fórmula G.
Los compuestos de la Fórmula K, en donde R1 es C C4 alquilo o C3-C6 cicloalquilo, se pueden preparar de compuestos de la Fórmula F en 3 Etapas: 1 ) oxidación del alcohol primario hasta obtener el aldehido correspondiente de la Fórmula H (Etapa 6, Esquema 1 ); 2) reacción del intermediario aldehido de la Fórmula H con un reactivo organometálico de la Fórmula R1M, en donde M es litio (Li) o haluro de magnesio (MgCI, MgBr o Mgl) para obtener un alcohol secundario de la Fórmula J, en donde R1 es C1 -C4 alquilo o C3-C6 cicloalquilo (Etapa 7); y 3) reacción del alcohol secundario de la Fórmula J con un fenol de la Fórmula X-OH en condiciones de la reacción de Mitsunobu (Etapa 8).
En la Etapa 6 (Esquema 1 ), los compuestos de la Fórmula H se forman mediante procedimientos de oxidación que incluyen el uso de 1 a 20 equivalentes de dióxido de manganeso activado en solventes que incluyen, entre otros, diclorometano, acetonitrilo, hexano o acetona, solos o combinados durante 1 a 72 horas de 22 °C a 80 °C. De manera alternativa, esta oxidación se puede llevar a cabo con 1 a 3 equivalentes de ácido tricloroisocianúrico en presencia de 0, 1 a 1 equivalente de 2,2,6,6-tetramétilpiperidin-l -oxilo (TEMPO) en diclorometano o cloroformo a temperaturas que varían de 0 °C a 22 °C durante 0,1 a 12 horas. Las condiciones típicas para esta transformación son el uso de ácido tricloroisocianúrico en presencia de 0,1 equivalente de TEMPO en diclorometano a 22 °C durante 1 hora.
En el Esquema 1 , también se muestra la preparación de compuestos de la presente invención, en donde Y es NR5. Los compuestos de la Fórmula L se pueden preparar del compuesto intermediario de la Fórmula H (Esquema 1 ) mediante la reacción con un compuesto amino de la Fórmula X-NH-R5 en condiciones de aminación reductora (Etapa 9) (J. Org. Chem., 1996, 61, 3849; Org. React. 2002, 59, 1 ). Se pueden preparar compuestos similares de la Fórmula N, en donde R1 es C C4 alquilo o C3-C6 cicloalquilo en dos etapas del intermediario de la Fórmula J, en donde R1 es CrC4 alquilo o C3-C6 cicloalquilo, mediante 1 ) oxidación hasta obtener la cetona correspondiente de la Fórmula M (Etapa 10), y 2) reacción de la cetona de la Fórmula M con un compuesto amino de la Fórmula X-NH-R5 en condiciones de aminación reductora (Etapa 1 1 ). De manera alternativa, los compuestos de la Fórmula L y de la Fórmula N, en donde R5 es C C4 alquilo, se pueden preparar de los compuestos correspondientes de la Fórmula L, en donde R5 es H, o los compuestos correspondientes de la Fórmula N, en donde R5 es H, mediante alquilación con un haluro de alquilo de la Fórmula (C1-C4)-CI, (C1-C4)-Br o (C C4)-l en presencia de una base.
Los compuestos de la presente invención también se pueden preparar como se muestra en los Esquemas 2 y 3, en donde X, Z, R1, R2a, R3, R4, R5, R6, R7, R8 y R9 son como se describen en el Esquema 1. En particular, los compuestos de la Fórmula R se pueden preparar como se muestra en el Esquema 2.
Esquema 2 En la Etapa 1 del Esquema 2, los compuestos de la Fórmula O se pueden formar de aldehidos de la Fórmula H (véase también el Esquema 1 ) mediante el uso de (diazometil)fosfonato de dimetilo o 1-diazo-2-oxopropilfosfonato de dimetilo, y bases, tales como carbonato de potasio o fer-butóxido de potasio en solventes que incluyen metanol, etanol o tetrahidrofurano a temperaturas que varían de -78 °C a 22 °C durante 0,1 a 24 horas. Las condiciones típicas para esta transformación incluyen el uso de 1-diazo-2-oxopropilfosfonato de dimetilo y 2 equivalentes de carbonato de potasio en metanol a 22 °C durante 0,75 horas.
En la Etapa 2, los compuestos de la Fórmula Q se pueden formar de compuestos de la Fórmula O mediante un procedimiento de acoplamiento de Sonagashira catalizado por metal con compuestos de la estructura general X-P, en donde P es un haluro o trifluorometsulfonato (triflato). La reacción de Sonogashira se revisó extensamente en (Chem. Rev. 2007, 107, 874; Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 46, 834; Angew. Chem. Int. Ed. 2008, 47, 6954), y muchos de los protocolos de síntesis enumerados en esas reseñas se pueden usar para la síntesis de los compuestos de la Fórmula Q. Por lo general, los catalizadores de metal que se usan en esta reacción pueden ser catalizadores de cobre, tales como yoduro de cobre, y/o catalizadores de paladio, tales como Pd2(dba)3, Pd(PPh3)4, Pd(dppf)CI2 o Pd(PPh3)2CI2. Estos catalizadores se pueden usar solos o combinados. Por lo general, en esta reacción, se usan aditivos de base que pueden incluir bases aminas, tales como dietilamina, trietilamina, diisopropiletilamina o pirrolidina, o bases inorgánicas, tales como carbonato de potasio o fluoruro de potasio. Las reacciones se llevan a cabo en solventes, tales como diclorometano, cloroformo, acetonitrilo, DMF, tolueno o 1 ,4-dioxano con o sin agua como aditivo. Las reacciones se llevan a cabo a temperaturas que varían de 0 °C a 150 °C, en función del solvente, durante períodos que varían de 0,1 a 48 horas. Las condiciones típicas para esta transformación incluyen el uso de Cul y Pd(PPh3)2CI2 en DMF a 90 °C durante 2 horas.
Finalmente, en la Etapa 3, los compuestos de la Fórmula R se pueden formar de compuestos de la Fórmula Q mediante hidrogenación, en presencia de catalizadores de metales de transición. Los catalizadores comunes incluyen el uso de 5-20% de paladio en carbono o 5-20% de hidróxido de paladio en carbono. Estas reacciones se pueden llevar a cabo en un aparato agitador Parr o en un reactor de flujo de hidrogenación H-Cube (ThalesNano, Reino Unido) a presiones de hidrógeno que varían de 1 a 50 psi en solventes polares, tales como tetrahidrofurano, acetato de etilo, metanol o etanol, a temperaturas de 22 °C a 50 °C durante períodos que varían de 0, 1 a 24 horas. Las condiciones típicas para la Etapa 3 incluyen el uso de un compuesto de la Fórmula Q en acetato de etilo a una velocidad de flujo de 1 mL/min a través de un cartucho de paladio en carbono al 10% en el aparato de flujo H-Cube con la configuración "hidrógeno total".
El Esquema 3 muestra métodos para la preparación de los compuestos de la Fórmula W.
Esquema 3 En la Etapa 1 del Esquema 3, los compuestos de la Fórmula F (véase también el Esquema 2) se pueden tratar con reactivos, tales como tribromuro de fósforo o tetrabromuro de carbono y trifenilfosfina para obtener compuestos de la Fórmula S. En la Etapa 2, los compuestos de la Fórmula S reaccionan con trifenilfosfina en solventes, tales como diclorometano, cloroformo, tolueno, benceno, tetrahidrofurano (THF) o acetonitrilo, para obtener sales de trifenilfosfonio de la Fórmula T. Las sales de la Fórmula T luego se combinan con compuestos de carbonilo de la Fórmula U en presencia de bases, tales como n-butillitio, bis(trimetilsilil)amida de sodio, bis(trimetilsilil)amida de litio, bis(trimetilsilil)amida de potasio o diisopropilamida de litio en solventes, tales como THF, dietiléter o 1 ,4-dioxano, para obtener compuestos de alqueno de la Fórmula V, que generalmente se aislan como mezclas de isómeros geométricos E y Z (Etapa 3). En la literatura se hace una reseña extensa de esta reacción, habitualmente conocida como reacción de olefinación de Wittig {Chem. Rev. 1989, 89, 863; Modern Carbonyl Olefination 2004, 1-17; Liebigs Ann.Chem. 1997, 1283).
En la Etapa 4, los compuestos de la Fórmula W se forman de compuestos de la Fórmula V mediante hidrogenación, en presencia de catalizadores de metales de transición. Los catalizadores comunes incluyen el uso de 5-20% de paladio en carbono o 5-20% de hidróxido de paladio en carbono. Estas reacciones se pueden llevar a cabo de manera similar a la descrita para la Etapa 3 del Esquema 2.
De manera alternativa, los compuestos de la Fórmula W se pueden preparar de aldehidos de la Fórmula H mediante reacción de Wittig con sales de trifenilfosfonio de la Fórmula AA (Etapa 5, Esquema 3). Con respecto a la Etapa 3, esta reacción produce compuestos de alqueno de la Fórmula V, que por lo general, se vuelven a aislar como mezclas de isómeros geométricos E y Z, y se puede convertir en compuestos de la Fórmula W mediante hidrogenación. Las sales de la fórmula AA se obtienen de manera similar a la que usa para preparar sales de la Fórmula T mediante conversión del alcohol correspondiente en bromuro y la reacción posterior con trifenilfosfina.
Los compuestos de la Fórmula BB que se muestran en continuación, en donde X, Z, R1 y R2a son como se definen en el Esquema 1 , se pueden preparar de alcoholes secundarios de la Fórmula J (véase el Esquema 2) o de cetonas de la Fórmula M (véase el Esquema 2) mediante secuencias de reacción similares a las que se muestran en el Esquema 3. La conversión de compuestos de la Fórmula J en los bromuros correspondientes, seguido de la olefinación de Wittig con aldehidos de la fórmula general X-CHO proporciona alquenos de la Fórmula CC. Los alquenos de la Fórmula CC también se pueden obtener mediante reacción de Wittig de cetonas de la Fórmula M con sales de la estructura general X-CH2-PPh3+Br". Los alquenos de la Fórmula CC luego se convierten en compuestos de la Fórmula BB mediante hidrogenación.
En ciertas ocasiones, es posible cambiar el orden de las etapas que se muestran en los Esquemas 1 , 2 y 3. Por ejemplo, en el Esquema 1 , en ocasiones es posible introducir el grupo ciano en el anillo de pirazol como última etapa, es decir, invirtiendo el orden en el que se realizan las Etapas 4 y 5. Asimismo, en determinados casos, es preferible introducir o modificar sustituyentes R3 en el grupo X más adelante en la síntesis, incluso como última etapa. Por ejemplo, cuando R3 es S02R7, el grupo S02R7 se puede formar en la última etapa mediante oxidación del compuesto correspondiente que tiene un sustituyente de la fórmula general S-R7.
Los compuestos de la presente invención se pueden preparar de acuerdo con secuencias análogas a las que se muestran en los Esquemas 1 , 2 y 3, comenzando con 1 , 1-dimetiletiléster del ácido 3,3-difluoro-4,4-dihidroxi 1-piperidincarboxílico (WO 2008121687). De manera similar a la que se describe para la preparación de intermediarios de la Fórmula A en el Esquema 1 , este material se puede convertir en derivados de hidrazina de la Fórmula DD, que luego se usan de manera similar a los intermediarios de la Fórmula A en el Esquema 1.
Es posible que sea necesaria la protección de la funcionalidad remota (por ejemplo, amina primaria o secundaria) de los intermediarios, como puede resultar evidente para los expertos en el arte. La necesidad de protección variará según la naturaleza de la funcionalidad remota y las condiciones de los métodos de preparación. Los grupos protectores de amino (NH-Pg) adecuados incluyen acetilo, trifluoroacetilo, t-butoxicarbonilo (BOC), benciloxicarbonilo (CBZ) y 9-fluorenilmetilenoxicarbonilo (Fmoc). De manera similar, un "grupo protector de hidroxi" se refiere a un sustituyente de un grupo de hidroxi que bloquea o protege la funcionalidad de hidroxi. Los grupos protectores de hidroxilo (O-Pg) adecuados incluyen, por ejemplo, alilo, acetilo, sililo, bencilo, para-metoxibencilo, tritilo y similares. La necesidad de esa protección la determina con facilidad un experto en el arte. Para una descripción general de grupos protectores y su uso, véase T. W. Greene, Protective Groups in Orqanic Svnthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.
Como se mencionó anteriormente, algunos de los compuestos de la presente invención son ácidos y forman sales con cationes aceptables desde el punto de vista farmacéutico. Algunos de los compuestos de la presente invención son básicos y forman sales con aniones aceptables desde el punto de vista farmacéutico. Todas esas sales se encuentran dentro del alcance de la presente invención y se pueden preparar mediante métodos convencionales, tales como combinando las entidades ácidas y básicas, con frecuencia en un proporción estequiométrica, en un medio acuoso, no acuoso o parcialmente acuoso, según corresponda. Las sales se recuperan por filtración, por precipitación con un no solvente seguido de filtración, por evaporación del solvente, o en el caso de soluciones acuosas, por liofilización, según corresponda. Los compuestos se obtienen en forma cristalina de acuerdo con los procedimientos conocidos en el arte, tales como disolución en un solvente adecuado, como etanol, hexano o mezclas de agua/etanol.
Usos médicos Los compuestos de la presente invención modulan la actividad del receptor GPR1 19 acoplado a la proteína G. Como tales, dichos compuestos son útiles para la profilaxis y el tratamiento de enfermedades, como la diabetes, en donde la actividad de GPR1 19 contribuye a la patología o a los síntomas de la enfermedad. En consecuencia, otro aspecto de la presente invención incluye un método para el tratamiento de una enfermedad metabólica y/o un trastorno relacionado con el metabolismo en un individuo, que comprende administrar al individuo que necesita dicho tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención, una sal de dicho compuesto o una composición farmacéutica que contiene dicho compuesto. Las enfermedades metabólicas y los trastornos relacionados con el metabolismo se seleccionan, entre otros, de hiperlipidemia, diabetes mellitus tipo I, diabetes mellitus tipo II, diabetes tipo I idiopática (tipo Ib), diabetes autoinmunitaria latente en adultos (LADA), diabetes tipo II de inicio temprano (EOD), diabetes atípica de inicio en la juventud (YOAD), diabetes juvenil de Inicio en la madurez ( ODY), diabetes relacionada con la malnutrición, diabetes gestacional, enfermedad cardíaca coronaria, apoplejía isquémica, restenosis después de la angioplastia, enfermedad vascular periférica, claudicación intermitente, infarto de miocardio (por ejemplo, necrosis y apoptosis), dislipidemia, lipemia posprandial, afecciones relacionadas con la intolerancia a la glucosa (IGT), afecciones relacionadas con la alteración de la glucosa en plasma en ayunas, acidosis metabólica, cetosis, artritis, obesidad, osteoporosis, hipertensión, insuficiencia cardíaca congestiva, hipertrofia ventricular izquierda, enfermedad arterial periférica, retinopatía diabética, degeneración macular, cataratas, nefropatía diabética, glomeruloesclerosis, insuficiencia renal crónica, neuropatía diabética, síndrome metabólico, síndrome X, síndrome premenstrual, enfermedad cardíaca coronaria, angina de pecho, trombosis, ateroesclerosis, infarto de miocardio, accidente isquémico transitorio, apoplejía, restenosis vascular, hiperglucemia, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, resistencia a la insulina, alteración del metabolismo de la glucosa, afecciones relacionadas con la alteración de la tolerancia a la glucosa, afecciones relacionadas con la alteración de la glucosa en plasma en ayunas, obesidad, disfunción eréctil, afecciones de la piel y del tejido conectivo, úlceras en el pie, disfunción endotelial, híper lipoproteinemia apo B y alteraciones de la distensibilidad vascular. Además, los compuestos se pueden usar para tratar trastornos neurológicos, tales como enfermedad de Alzheimer, esquizofrenia y deterioro cognitivo. Los compuestos también son beneficiosos en enfermedades gastrointestinales, tales como enfermedad intestinal inflamatoria, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, síndrome del intestino irritable, etc. Como se mencionó anteriormente, los compuestos también se pueden usar para estimular la pérdida de peso en pacientes obesos, especialmente en los diabéticos.
De acuerdo con lo anterior, la presente invención también proporciona un método para prevenir o mejorar los síntomas de cualquier enfermedad o trastorno descrito anteriormente en un sujeto que lo necesita; tal método comprende la administración a un sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención. Otros aspectos de la invención incluyen la preparación de medicamentos para tratar la diabetes y las morbilidades relacionadas con ella.
A fin de mostrar las propiedades terapéuticas descritas anteriormente, los compuestos deben administrarse en una cantidad suficiente para modular la activación del receptor GPR119 acoplado a la proteína G. Esta cantidad puede variar en función de la enfermedad/afección particular que se trata, la gravedad de la enfermedad/afección del paciente, el paciente, el compuesto particular que se administra, la vía de administración, la presencia de otros estadios de la enfermedad subyacente en el paciente, etc. Cuando se administra de manera sistémica, los compuestos habitualmente muestran su efecto a un rango de dosificación de alrededor de 0,1 mg/kg/día a alrededor de 100 mg/kg/día para cualquiera de las enfermedades o afecciones enumeradas anteriormente. Se prefiere la administración diaria reiterada, que variará de acuerdo con las condiciones descritas anteriormente.
Los compuestos de la presente invención se pueden administrar por diferentes vías. Se pueden administrar por vía oral. Los compuestos también se pueden administrar por vía parenteral (es decir, por vía subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal o intratecal), rectal o tópica.
Coadministración Los compuestos de la presente invención también se pueden usar junto con otros agentes farmacéuticos para el tratamiento de las enfermedades, afecciones y/ trastornos que se describen en la presente. Por lo tanto, también se proporcionan métodos de tratamiento que incluyen la administración de compuestos de la presente invención en combinación con otros agentes farmacéuticos. Los agentes farmacéuticas adecuados que se pueden usar en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen agentes contra la obesidad (incluso supresores del apetito), agentes contra la diabetes, agentes contra la hiperglucemia, agentes reductores de lípidos y agentes contra la hipertensión.
Los agentes contra la diabetes adecuados incluyen un inhibidor de acetil-CoA carboxilasa-2 (ACC-2), un inhibidor de diacilglicerol O-aciltransferasa 1 (DGAT-1), un inhibidor de fosfodiesterasa (PDE)-10, una sulfonilurea (por ejemplo, acetohexamide, chlorpropamide, diabinese, glibenclamide, glipizide, glyburide, glimepiride, gliclazide, glipentide, gliquidone, glisolamide, tolazamide y toibutamide), una meglitinida, un inhibidor de a-amilasa (por ejemplo, tendamistat, trestatin y AL-3688), un inhibidor de a-glucósido hidrolasa (por ejemplo, acarbose), un inhibidor de a-glucosidasa (por ejemplo, adiposine, camiglibose, emiglitate, miglitol, voglibose, pradimicin-Q y salbostatin), un agonista de PPARy (por ejemplo, balaglitazone, ciglitazone, darglitazone, englitazone, isaglitazone, pioglitazone, rosiglitazone y troglitazone), un agonista de PPAR a/? (por ejemplo, CLX-0940, GW-1536, GW-1929, GW-2433, KRP-297, L-796449, LR-90, K-0767 y SB-219994), una biguanida (por ejemplo, metformin), un agonista del péptido tipo glucagón 1 (GLP-1) (por ejemplo, exendina-3 y exendina-4), un inhibidor de proteína tirosina fosfatasa-1 B (PTP-1 B) (por ejemplo, trodusquemine, extracto de hyrtiosal y compuestos descritos en Zhang, S., et al., Drug Discovery Today, 12(9/10), 373-381 (2007)), inhibidor de SIRT-1 (por ejemplo, reservatrol), un inhibidor de dipeptidil peptideasa IV (DPP-IV) (por ejemplo, sitagliptin, vildagliptin, alogliptin y saxagliptin), un secretagogo de insulina, un inhibidor de la oxidación de ácidos grasos, un antagonista de A2, un inhibidor de quinasa amino-terminal c-jun (JNK), insulina, un mimético de insulina, un inhibidor de glicógeno fosforilasa, un agonista del receptor VPAC2 y un inhibidor de SGLT2 (inhibidores del transporte de glucosa dependiente de sodio, tal como dapagliflozin, etc). Los agentes contra la diabetes preferidos son metformina e inhibidores de DPP-IV (por ejemplo, sitagliptin, vildagliptin, alogliptin y saxagliptin).
Los agentes contra la obesidad adecuados incluyen inhibidores de 11 ß-hidroxiesteroide deshidrogenasa-1 (11 p-HSD tipo 1), inhibidor de estearoil-CoA desaturasa-1 (SCD-1), agonistas de MCR-4, agonistas de colecistoquinina-A (CCK-A), inhibidores de la reabsorción de monoamina (tal como, sibutramina), agentes simpaticomiméticos, agonistas adrenérgicos ß3, agonistas de dopamina (tal como bromocriptine), análogos de la hormona estimulante de melanocitos, agonistas de 5HT2c, antagonistas de la hormona de concentración de melanina, leptina (la proteina OB), análogos de leptina, agonistas de leptina, antagonistas de galanina, inhibidores de lipasa (tal como, tetrahydrolipstatin, es decir, orlistat), agentes anorexígenos (por ejemplo, un agonista de bombesina), antagonistas del neuropéptido Y (por ejemplo, antagonistas de NPY Y5), YY3-36 (incluso análogos de este), agentes tiromiméticos, deshidroepiandrosterona o un análogo de esta, agonistas o antagonistas de glucocorticoides, antagonistas de orexina, agonistas de péptido tipo glucagón 1 , factores neurotróficos ciliares (por ejemplo, Axokine™, disponible de Regeneron Pharmaceuticals, Inc., Tarrytown, NY y Procter & Gamble Company, Cincinnati, OH), inhibidores de la proteína relacionada con agouti humana (AGRP), antagonistas de grelina, agonistas inversos o antagonistas de histamina 3, agonistas de neuromedina U, inhibidores de MTP/ApoB (por ejemplo, inhibidores de MTP selectivos intestinales , tal como dirlotapide), antagonistas opioides, antagonista de orexina y similares.
Los agentes contra la obesidad preferidos que se usan en los aspectos de combinación de la presente invención incluyen inhibidores de MTP selectivos intestinales (por ejemplo, dirlotapide, mitratapide e implitapide, R56918 (CAS N.e 403987) y CAS N.° 913541-47-6), agonistas de CCKa (por ejemplo, N-bencil-2-[4-(1 H-indol-3-ilmetil)-5-oxo-1 -fenil-4,5-dihidro-2,3,6, 10b-tetraaza-benzo[e]azulen-6-il]-N-isopropil-acetamida descrita en la publicación PCT N.° WO 2005/116034 o en la publicación estadounidense N.° 2005-0267100 A1 ), agonistas de 5HT2c (por ejemplo, lorcaserin), agonista de MCR4 (por ejemplo, los compuestos descritos en US 6.818.658), inhibidor de lipasa (por ejemplo, Cetilistat), PYY3-36 (como se usa en la presente, "PYY3.36" incluye análogos, tal como PYY3. 36 pegilado, por ejemplo, los que se describen en la publicación estadounidense 2006/0178501 ), antagonistas opioides (por ejemplo, naltrexone), oleoil-estrona (CAS N.° 180003-17-2), obinepitide (TM30338), pramlintide (Symlin®), tesofensine (NS2330), leptin, liraglutide, bromocriptine, orlistat, exenatide (Byetta®), AOD-9604 (CAS N.° 221231-10-3) y sibutramine. Preferentemente, los compuestos de la presente invención y las terapias de combinación se administran junto con ejercicio y una dieta equilibrada.
Todas las publicaciones y patentes estadounidenses mencionados anteriormente se incorporan en la presente por referencia.
Formulaciones farmacéuticas La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico, en una mezcla con al menos un excipiente aceptable desde el punto de vista farmacéutico. Las composiciones incluyen aquellas que adoptan formas para el uso oral, tópico o parenteral, y se pueden usar para el tratamiento de la diabetes y de trastornos relacionados, como se describió anteriormente.
La composición se puede formular para la administración mediante cualquier vía conocida en el arte, tal como subdérmica, inhalatoria, oral, tópica, parenteral, etc. Las composiciones pueden adoptar cualquier forma conocida en el arte, que incluye, entre otros, comprimidos, cápsulas, polvos, granulos, pastillas o preparaciones líquidas, tales como soluciones o suspensiones parenterales estériles u orales.
Los comprimidos y las cápsulas para la administración oral pueden adoptar una forma de presentación de dosis unitaria y pueden contener excipientes convencionales, tales como agentes aglutinantes, por ejemplo, jarabe, acacia, gelatina, sorbitól, tragacanto o polivinilpirrolidona; agentes de relleno, por ejemplo, lactosa, azúcar, almidón de maíz, fosfato de calcio, sorbitól o glicina; lubricantes de formación de comprimidos, por ejemplo, estearato de magnesio, talco, polietilenglicol o sílice; desintegrantes, por ejemplo, almidón de papa; o agentes humectantes aceptables, tal como laurilsulfato de sodio. Los comprimidos se pueden recubrir de acuerdo con los métodos conocidos en la práctica farmacéutica convencional.
Las preparaciones líquidas orales pueden adoptar la forma, por ejemplo, de suspensiones, soluciones, emulsiones, jarabes o elixires acuosos u oleosos, o se pueden presentar como un producto seco para la reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes de usarlas. Las preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales, tales como agentes de suspensión, por ejemplo, sorbitol, metilcelulosa, jarabe de glucosa, gelatina, hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa, gel de estearato de aluminio o grasas comestibles hidrogenadas, agentes de emulsión, por ejemplo, lecitina, monooleato de sorbitán o acacia; vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles), por ejemplo, aceite de almendra, ésteres de aceites, tales como glicerina, propilenglicol o alcohol etílico; conservantes, por ejemplo, p-hidroxibenzoato de metil o propilo o ácido sórbico, y si se desea, agentes saborizantes o colorantes convencionales.
Para la administración parenteral, las formas de dosificación unitaria de fluidos se preparan usando el compuesto y un vehículo estéril, preferentemente, agua. En función del vehículo y de la concentración usados, el compuesto se puede suspender o disolver en el vehículo u otro solvente adecuado. Al preparar soluciones, el compuesto se puede disolver en agua para la inyección y esterilizar por filtro antes de rellenar con él un vial o ampolla adecuados, y sellar. Ventajosamente, en el vehículo, se pueden disolver agentes, tales como anestésicos locales, conservantes y agentes de tamponamiento. Para mejorar la estabilidad, la composición se puede congelar antes de rellenar con ella el vial, y se puede retirar el agua al vacio. Luego, el polvo liofilizado seco se sella en el vial, y se puede suministrar otro vial de agua para la inyección ,a fin de reconstituir el líquido antes de usarlo. Las suspensiones parenterales se preparan prácticamente de la misma manera, excepto que el compuesto se suspende en el vehículo en lugar disolverlo, y la esterilización no se puede lograr mediante filtración. El compuesto se puede esterilizar mediante la exposición a óxido de etileno antes de suspenderlo en el vehículo estéril. Ventajosamente, se incluye un tensioactivo o agente humectante en la composición, a fin de facilitar la distribución uniforme del compuesto.
Las composiciones pueden contener, por ejemplo, de alrededor de 0, 1 % a alrededor de 99 en peso del material activo, según el método de administración. Cuando las composiciones comprenden unidades de dosificación, cada unidad contiene, por ejemplo, de alrededor de 0,1 a 900 mg del ingrediente activo, en general, de 1 mg a 250 mg.
Los compuestos de la invención se pueden formular para la administración de cualquier manera conveniente, a fin de usarlos en medicina humana o en veterinaria, por analogía con otros agentes contra la diabetes. Dichos métodos se conocen en el arte y se sintetizaron anteriormente. Para un análisis más detallado de la preparación de dichas formulaciones, véase Remington"s Pharmaceutical Sciences, 21st Edition, de la Universidad de Ciencias en Filadelfia.
Las formas de realización de la presente invención se ilustran mediante los siguientes Ejemplos. Sin embargo, cabe destacar que las formas de realización de la invención no se limitan a los detalles específicos de estos Ejemplos, ya que otras variaciones se conocerán o serán evidentes para los expertos en el arte a la luz de la presente descripción.
EJEMPLOS A menos que se especifique lo contario, los materiales de inicio están generalmente disponibles de fuentes comerciales, tales como Aldrich Chemicals Co. (Milwaukee, Wl), Lancaster Synthesis, Inc. (Windham, NH), Acros Organics (Fairlawn, NJ), Maybridge Chemical Company, Ltd. (Cornwall, Inglaterra), Tyger Scientific (Princeton, NJ) y AstraZeneca Pharmaceuticals (Londres, Inglaterra), Mallinckrodt Baker (Phillipsburg NJ); EMD (Gibbstown, NJ).
Procedimientos experimentales generales El espectro de RMN se registra en Varían Unity™ 400 (sonda DG400-5) o 500 (sonda DG500-5 - ambos disponibles de Varían Inc., Palo Alto, CA) a temperatura ambiente a 400 MHz o 500 MHz, respectivamente, para el análisis de protones. Los desplazamientos químicos se expresan en partes por millón (delta) con respecto al solvente residual como referencia interna. Las formas de los picos se indican de la siguiente manera: s, singulete; d, doblete; dd, doblete de doblete, t, triplete; q, cuarteto; m, multiplete; br s, singulete amplio, 2s, dos singuletes.
Los espectros de masa de ionización química a presión atmosférica (APCI) se obtienen en un espectrómetro Waters™ (Micromass ZMD, gas portador: nitrógeno) (disponible de Waters Corp., Milford, MA, EE.UU.) a una velocidad de flujo de 0,3 mL/minuto y con un sistema eluyente de 50:50 de agua/acetonitrílo. Los espectros de masa de ionización por electrospray (ES) se obtienen en un espectrómetro de masa de cromatografía de líquidos de Waters™ (instrumento Micromass ZQ o ZMD (gas portador: nitrógeno) (Waters Corp., Milford, MA, EE.UU.) usando un gradiente de 95:5 - 0:100 de agua en acetonitrilo con ácido fórmico al 0,01% agregado a cada solvente. Estos instrumentos usan una columna Varían Polaris 5 C18-A de 20 x 2,0 mm (Varían Inc., Palo Alto, CA) con velocidades de flujo de 1 mL/minuto durante 3,75 minutos o 2 mL/minuto durante 1 ,95 minutos.
La cromatografía de columna se realiza en gel de sílice con columnas Flash 40 Biotage™ (ISC, Inc., Shelton, CT) o cartucho SNAP KPsíl de Biotage™ o sílice Redisep Rf (de Teledyne Isco Inc) bajo presión de nitrógeno. La HPLC preparativa se realiza mediante un sistema Waters FractionLynx con matriz de fotodiodos (Waters 2996) y esquemas detectores de espectrometría de masa (Waters/Micromass ZQ). La HPLC analítica se lleva a cabo con Waters 2795 Alliance HPLC o Waters ACQUITY UPLC con matriz de fotodiodos, esquemas detectores evaporativos de dispersión de luz y masa cuadrupolar unitaria.
Concentración al vacío se refiere a la evaporación de solvente a presión reducida usando un evaporador giratorio.
A menos que se indique lo contrario, las reacciones químicas se realizan a temperatura ambiente (alrededor de 23 °C). Además, a menos que se indique lo contrario, las reacciones químicas se ejecutan en una atmósfera de nitrógeno.
DATOS FARMACOLÓGICOS La práctica de la invención para el tratamiento de enfermedades moduladas por la activación del agonista del receptor GPR1 19 acoplado a la proteína G con los compuestos de la invención se puede constatar mediante la actividad en uno o más de los ensayos funcionales descritos a continuación en la presente. La fuente de suministro se indica entre paréntesis.
Ensayos funcionales in-v¡tro ß-lactamasa: El ensayo para los agonistas GPR1 19 usa un constructo indicador a base de células (hGPR1 19 HEK293-CRE beta-lactamasa), en donde la activación del agonista de GPR1 19 humano se acopla a la producción de beta-lactamasa mediante un elemento de respuesta a AMP cíclico (CRE). Luego, la actividad de GPR1 19 se mide usando un sustrato de beta-lactamasa con capacidad para FRET, CCF4-AM (kit de carga Live Blazer FRET-B/G, Invitrogen cat # K1027). Específicamente, las células de hGPR1 19-HEK-CRE-beta-lactamasa (Invitrogen 2,5 x 107/mL) se retiran del almacenamiento en nitrógeno líquido y se diluyen en un medio de colocación en placas (medio Eagle modificado por Dulbecco con alta glucosa (DMEM; Gibco Cat # 1 1995-065), 10% de suero bovino fetal inactivado por calor (HIFBS; Sigma Cat # F4135), 1X MEM de aminoácidos no esenciales (Gibco Cat # 15630-080), 25 mM de HEPES, pH 7,0 (Gibco Cat # 15630-080), 200 nM de clavulanato de potasio (Sigma Cat # P3494). La concentración celular se ajusta usando un medio de colocación en placas celular, se agregan 50 microL de esta suspensión celular (12,5 x 104 células viables) a cada cavidad de una placa negra de fondo transparente recubierta con poli-d-lisina de 384 cavidades (Greiner Bio-One cat # 781946) y se incuban a 37 °C en un entorno húmedo que contiene dióxido de carbono al 5%. Después de 4, se retira el medio de colocación en placas y se reemplaza con 40 microL de medio de ensayo (el medio de ensayo es medio de colocación en placas sin clavulanato de potasio y HIFBS). Luego se agregan diversas concentraciones de cada compuesto por evaluar en un volumen de 10 microL (DMSO final < 0,5%), y las células se incuban durante 16 horas a 37 °C en un entorno húmedo que contiene dióxido de carbono al 5%. Las placas se retiran de la incubadora y se equilibran a temperatura ambiente durante aproximadamente 15 minutos. Se agregan 10 microL de solución de tintura funcional 6 X CCF4/AM (preparada de acuerdo con las instrucciones en el kit de carga Live Blazer FRET-B/G, Invitrogen cat # K1027) por cavidad y se incuban a temperatura ambiente durante 2 horas en la oscuridad. La fluorescencia se mide en un lector de placa fluorimétrico EnVision, con excitación a 405 nm, emisión de 460 nm/535 nm. Las determinaciones de EC50 se obtienen de curvas de respuesta al agonista analizadas con un programa de ajuste de curvas usando una ecuación logística de respuesta a la dosis de 4 parámetros. cAMP: La actividad del agonista GPR1 19 también se determina con un ensayo a base de células usando un kit de detección de cAMP HTRF (fluorescencia homogénea de resolución temporal) (kit de ensayo dinámico 2 de cAMP; Cis Bio cat # 62AM4PEC) que mide los niveles de cAMP en la célula. El método es un inmunoensayo competitivo entre el cAMP nativo producido por las células y el cAMP rotulado con la tintura d2. La fijación del trazador se visualiza mediante un Mab anti-cAMP rotulado con criptato. La señal específica (es decir, la transferencia de energía) es inversamente proporcional a la concentración de cAMP en el estándar o en la muestra.
Específicamente, la células hGPR119 HEK-CRE beta-lactamasa (Invitrogen 2,5 x 107/mL; la misma línea celular que se usa en el ensayo de beta-lactamasa antes descrito) se retiran de la criopreservación y se diluyen en un medio de crecimiento (medio Eagle modificado por Dulbecco con alta glucosa (DMEM; Gibco Cat # 11995-065), 1 % de suero bovino fetal tratado con dextrano de carbón (suero CD; HyClone Cat # SH30068.03), 1 x MEM de aminoácidos no esenciales (Gibco Cat # 15630-080) y 25 mM de HEPES, pH 7,0 (Gibco Cat # 15630-080)). La concentración celular se ajusta a 1 ,5 x 105 células/mL, se agregan 30 mL de esta suspensión a un frasco T-175 y se incuban a 37 °C en un entorno húmedo en dióxido de carbono al 5%. Después de 16 horas (durante la noche), se retiran las células del frasco T-175 (golpeteando el lado del frasco), se centrifugan a 800 x g y luego se vuelven a suspender en un medio de ensayo (1 HBSS +CaCI2 + MgCI2 (Gibco Cat # 14025-092) y 25 mM de HEPES pH 7,0 (Gibco Cat # 15630-080)). La concentración celular se ajusta a 6,25 x 105 células/mL con un medio de ensayo, y se agregan 8 de esta suspensión celular (5000 células) a cada cavidad de una placa de ensayo blanca Greiner de volumen bajo de 384 cavidades (VWR cat # 82051-458).
Se diluyen varias concentraciones de cada compuesto por evaluar en un amortiguador de ensayo que contiene 3-isobutil-1-metilxantin (IBMX; Sigma cat # I5879) y se agregan a la placa de ensayo en un volumen de 2 microL (la concentración final de IBMX es 400 microM, y la concentración final de DMSO es 0,58%). Después de 30 minutos de incubación a temperatura ambiente, se agregan 5 microL de d2 cAMP etiquetado y 5 microL de anticuerpo anti-cAMP (ambos diluidos en 1 :20 de amortiguador de lisis celular; como se describe en el protocolo del ensayo de los fabricantes) a cada cavidad de la placa de ensayo. Las placas se incuban a temperatura ambiente y, después de 60 minutos, se leen cambios en la señal de HTRF con un lector de placas multimarcador Envision 2104 con excitación de 330 nm y emisiones de 615 y 665 nm. Los datos sin procesar se convierten en nM cAMP mediante interpolación de una curva estándar cAMP (como se describe en el protocolo de ensayo del fabricante), y las determinaciones de EC50 se realizan de curvas de respuesta al agonista analizadas con un programa de ajuste de curvas usando una ecuación logística de respuesta a la dosis de 4 parámetros.
Se reconoce que las respuestas de cAMP debido a la activación de GPR1 19 podrían generarse en células que no son las líneas celulares específicas usadas en la presente. ß-arrestina: La actividad del agonista GPR1 19 también se determina con un ensayo a base de células usando tecnología de ensayo celular de ß-arrestina DiscoverX PathHunter y su línea celular de ß-arrestina U20S hGPR119 (DiscoverX Cat # 93-0356C3). En este ensayo, la activación del agonista se determina midiendo la interacción inducida por agonista de ß-arrestina con GPR1 19 activado. Se agrega un pequeño fragmento enzimático de 42 aminoácidos, denominado ProLink al terminal C de GPR1 19. Se fusiona arrestina a un fragmento enzimático más grande, denominado EA (aceptor enzimático). La activación de GPR119 estimula la fijación de arrestina y fuerza la complementación de los dos fragmentos enzimáticos, lo cual genera la formación de una enzima ß-galactosidasa funcional capaz de hidrolizar sustrato y generar una señal quimioluminiscente.
Específicamente, las células de ß-arrestina U20S hGPR119 (DiscoverX 1 x 107/ml_) se retiran de la criopreservación y se diluyen en un medio de crecimiento (medio esencial mínimo (MEM; Gibco Cat # 11095-080), 10% de suero bovino fetal inactivado por calor (HIFBS; Sigma Cat # F4135-100), 100 mM de piruvato de sodio (Sigma Cat # S8636), 500 microg/mL de G418 (Sigma Cat # G8168) y 250 microg/mL de higromicina B (Invitrogen Cat # 10687-010). La concentración celular se ajusta a 1 ,66 x 105 células/mL, se agregan 30 mL de esta suspensión a un frasco T-175 y se incuban a 37 °C en un entorno húmedo en dióxido de carbono al 5%. Después de 48 horas, las células se retiran del frasco T-175 con un amortiguador de disociación celular libre de enzimas (Gibco cat # 13151-014), centrifugado a 800 x g, y luego se vuelven a suspender en un medio de colocación en placas (Opti-MEM I (Invitrogen/BRL Cat # 31985-070) y 2% de suero bovino fetal tratado con dextrano de carbón (CD serum; HyClone Cat # SH30068.03). La concentración celular se ajusta a 2,5 x 105 células/mL con un medio de colocación en placas, se agregan 10 microL de esta suspensión celular (2500 células) a cada cavidad de una placa de ensayo blanca Greíner de volumen bajo de 384 cavidades (VWR cat # 82051 -458), y las placas se incuban a 37 °C en un entorno húmedo en dióxido de carbono al 5%.
Después de 16 horas (durante la noche), se retiran las placas de ensayo de la incubadora, y se agregan diversas concentraciones de cada compuesto por evaluar (diluido en amortiguador de ensayo (1 x HBSS +CaCI2 + MgCI2 (Gibco Cat # 14025-092), 20 mM de HEPES, pH 7,0 (Gibco Cat # 15630-080) y BSA al 0,1 % (Sigma Cat # A9576)) a las cavidades de la placa de ensayo en un volumen de 2,5 microL (la concentración final de DMSO es 0,5%). Después de 90 minutos de incubación a 37 °C en un entorno húmedo en dióxido de carbono al 5%, se agregan 7,5 microL de sustrato de ß-galactosidasa Galacton Star (PathHunter Detection Kit (DiscoveRx Cat # 93-0001 ); preparado como se describe en el protocolo de ensayo de los fabricantes) a cada cavidad de la placa de ensayo. Las placas se incuban a temperatura ambiente y, después de 60 minutos, se leen cambios en la luminescencia con un lector de placas multimarcador Envision 2104 a razón de 0, 1 segundos por cavidad. Las determinaciones de EC50 se obtienen de curvas de respuesta al agonista analizadas con un programa de ajuste de curvas usando una ecuación logística de respuesta a la dosis de 4 parámetros.
Expresión de GPR119 usando BacMam y ensayo de fijación GPR119 GPR119 humano de tipo silvestre (publicado en la publicación de patente PCT N.° 2010/106457) se amplifica mediante reacción en cadena de polimerasa (PCR) (Pfu Turbo Mater Mix, Stratagene, La Jolla, CA) usando plRES-puro-hGPR1 19 como molde y los siguientes parámetros: hGPR119 BamH1 , superior 5'-TAAATTGGATCCACCATGGAATCATCTTTCTCATn"GGAG-3' (inserta un sitio BamHI en el extremo 5') hGPR119 EcoRI, inferior 5'-TAAATTGAATTCTTATCAGCCATCAAACTCTGAGC-3' (inserta un sitio EcoRI en el extremo 3') El producto amplificado se purifica (Qiaquick Kit, Qiagen, Valencia, CA) y digiere con BamH1 y EcoRI (New England BioLabs, Ipswich, MA) de acuerdo con el protocolo del fabricante. El vector pFB-VSVG-CMV-poly (publicado en la publicación de patente PCT N.° 2010/106457) se digiere con BamHI y EcoRI (New England BioLabs, Ipswich, MA). El ADN digerido se separa mediante electroforesis en gel de agarosa al 1 %; los fragmentos se separan del gel y se purifican (Qiaquick Kit, Qiagen, Valencia, CA). El vector y los fragmentos génicos se ligan (Rapid Ligase Kit, Roche, Pleasanton, CA) y se transforman en células T1 R OneShot DH5alpha (Invitrogen, Carlsbad, CA). Se cultivan 8 colonias resistentes a ampicilina ("clones 1-8") para la minipreparación (Qiagen Miniprep Kit, Qiagen, Valencia, CA) y se secuencian para adaptarse a la identidad y orientación correcta del inserto.
El constructo pFB-VSVG-CMV-poly-hGPR1 19 (clon #1) se transforma en células OneShot DHIOBac (Invitrogen, Carlsbad, CA) de acuerdo con los protocolos de los fabricantes. Se vuelven a rayar 8 colonias positivas (es decir, blancas) para confirmar que son "positivas" y, a continuación, se cultivan para el aislamiento de bácmidos. El bácmido hGPR119 recombinante se aisla mediante un procedimiento de lisis alcalina modificado con los amortiguadores de un kit Qiagen Miniprep (Qiagen, Valencia, CA). En síntesis, las células en forma de pelets se lisan en amortiguador P1 , se neutralizan en amortiguador P2 y precipitan con amortiguador N3. El precipitado se convierte en pelets mediante centrifugación (17.900 xg durante 10 minutos), y el sobrenadante se combina con isopropanol para que el ADN precipite. El ADN se convierte en pelets mediante centrifugación (17.900 xg durante 30 minutos), se lava una vez con etanol al 70% y se vuelve a suspender en 50 µ? de amortiguador EB (Tris-HCL, pH 8,5). Se usa la reacción en cadena de polimerasa (PCR) con cebadores disponibles en el comercio (M13F, M13R, Invitrogen, Carisbad, CA) para confirmar la presencia del inserto hGPR1 19 en el bácmido.
Generación de baculovirus recombinante hGPR119 Creación de la reserva del virus PO Las células Sf9 adaptadas a la suspensión que se cultivaron en un medio Sf900ll (Invitrogen, Carisbad, CA) se transfectan con 10 microL de ADN de bácmido hGPR1 19 de acuerdo con el protocolo del fabricante (Cellfectin, Invitrogen, Carisbad, CA). Después de 5 días de incubación, el medio condicionado (es decir, la reserva del virus "PO") se centrifuga y se filtra a través de un filtro de 0,22 µ?? (Steriflip, Millipore, Billerica, MA).
Creación de reservas de virus congelado (BMC) Para el almacenamiento de virus a largo plazo y la generación de reservas virales funcionales (es decir, "P1"), se crean reservas congeladas de BMC (células de insectos infectadas por baculovirus) de la siguiente manera: las células Sf9 adaptadas a la suspensión se cultivan en un medio SÍ900II (Invitrogen, Carisbad, CA) y se infectan con reserva de virus hGPR1 19 PO. Después de 24 horas de crecimiento, las células infectadas se centrifugan con cuidado (aproximadamente 100 x g), se vuelven a suspender en un medio de congelación (DMSO al 10%, albúmina al 1% en un medio Sf900ll) a una densidad final de 1 x 107 células/mL y se congelan de acuerdo con protocolos estándares de congelación en alícuotas de 1 mL.
Creación de reservas de virus funcionales ?1 ") Las células Sf9 adaptadas a la suspensión que se cultivaron en un medio Sf900ll (Invitrogen, Carisbad, CA) se infectan con una dilución 1 :100 de reserva de hGPR119 descongelada y se incuban durante varios días (27 °C con agitación). Cuando la viabilidad de las células alcanza el 70%, el medio condicionado se cosecha mediante centrifugación, y la titulación del virus se determina mediante ELISA (BaculoElisa Kit, Clontech, Mountain View, CA).
Sobreexpresión de hGPR1 19 en células HEK 293FT adaptadas a la suspensión Las células HEK 293FT (Invitrogen, Carlsbad, CA) se cultivan en un frasco de agitación en medio 293Freestyle (Invitrogen) enriquecido con 50 Llmicrog/mL de neomicina y 10 mM de HEPES (37 °C, dióxido de carbono al 8%, agitación). Las células se centrifugan con cuidado (aproximadamente 500 xg, 10 minutos), y el pelet se vuelve a suspender en una mezcla de PBS de Dulbecco (menos Mg++/-Ca++) enriquecido con 18% de suero bovino fetal (Sigma Aldrich) y virus P1 , de manera que la multiplicidad de la infección (MOI) es 10 y la densidad celular final es 1 ,3 x 106/mL (volumen total de 2,5 litros). Las células se transfieren a un Wave Bioreactor Wavebag de 5 litros (I) y se incuban durante 4 horas a 27 °C (17 movimientos/min, ángulo de plataforma de 7 grados); al final del período de incubación, se agrega un volumen igual (2,5 litros) de medio 293Freestyle enriquecido con 30 mM de butirato de sodio (Sigma Aldrich) (concentración final = 15 mM), y las células se cultivan durante 20 horas (37 °C, C02 al 8% [0,2 litros/min], 25 movimientos/min, ángulo de plataforma de 7 grados). Las células se cosechan mediante centrifugación (3.000 xg, 10 minutos), se lavan una vez en DPBS (menos Ca++/Mg++), se vuelven a suspender en sacarosa 0,25M, 25 mM de HEPES, 0,5 mM de EDTA, pH 7,4, y se congelan a -80 °C.
Preparación de membrana para ensayos de fijación de radioliqando Las células congeladas se descongelan en hielo y se centrifugan a 700 x g (1400 rpm) durante 10 minutos a 4 °C. El pelet celular se vuelve a suspender en 20 ml_ de solución salina amortiguada con fosfato y se centrifuga a 1400 rpm durante 10 minutos. El pelet celular se vuelve a suspender en un amortiguador de homogeneización (10 m de HEPES (Gibco #15630), pH 7,5, 1 mM de EDTA (BioSolutions, #BIO260-15), 1 mM de EGTA (Sigma, #E-4378), 0,01 mg/mL de benzamidina (Sigma #B 6506), 0,01 mg/mL de bacitracina (Sigma #B 0125), 0,005 mg/mL de leupeptina (Sigma #L 851 1 ), 0,005 mg/mL de aprotinina (Sigma #A 1 153)) y se incuba en hielo durante 10 minutos. Luego, las células se lisan con 15 golpes suaves de un homogeneizador de vidrio Dounce de ajuste hermético. El homogenado se centrifuga a 1000 x g (2200 rpm) durante 10 minutos a 4 °C. El sobrenadante se transfiere a nuevos tubos centrífugos en hielo. El pelet celular se vuelve a suspender en un amortiguador de homogeneización y se centrifuga de nuevo a 1000 x g (2200 rpm) durante 10 minutos a 4 °C, después de lo cual se retira el sobrenadante y el pelet se vuelve a suspender en amortiguador de homogeneización. Este proceso se repite por tercera vez, después de lo cual se combinan los sobrenadantes, se agregan benzonasa (Novagen # 71206) y MgCI2 (Fluka #63020) a las concentraciones finales de 1 U/mL y 6 mM, respectivamente, y se incuba en hielo durante 1 hora. Luego, la solución se centrifuga a 25.000 x g (15000 rpm) durante 20 minutos a 4 °C, se descarta el sobrenadante, y el pelet se vuelve a suspender en un amortiguador de homogeneización nuevo (menos benzonasa y MgCI2). Después de repetir la etapa de centrifugación a 25.000 x g, el pelet de membrana final se vuelve a suspender en un amortiguador de homogeneización y se congela a -80 °C. La concentración proteica se determina con el kit de ensayo proteico Pierce BCA (reactivos de Pierce A #23223 y B #23224).
Síntesis y purificación de [ H1-compuesto A Compuesto A (CataSzador de Crabtree) [3H]-Compuesto A CH2CI2 Se disuelve el compuesto A (4-(1-(4-(metilsulfon¡l)fenil)-3a,7a-dihidro-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-iloxi)piperidin-1-carboxilato de isopropilo, como se indicó anteriormente) (4 mg, 0,009 mmol) en 0,5 mL de diclorometano, y la solución resultante se trata con hexafluorofosfato de (1 ,5-ciclooctad¡en)(piridina)(triciclohexilfosfina)-iridio(l) (J. Organometal. Chem. 1979, 168, 183) (5 mg, 0,006 mmol). El recipiente de reacción se sella, y la solución se agita en una atmósfera de gas tritio durante 17 h. Se retira el solvente de reacción a presión reducida, y el residuo resultante se disuelve en etanol. La purificación del [3H]-compuesto A crudo se realiza mediante HPLC preparativa usando las siguientes condiciones.
Columna: Atlantis, 4,6 x 150 mm, 5 pm Fase móvil A: agua / acetonitrilo / ácido fórmico (98 / 2 / 0, 1) Fase móvil B: acetonitrilo Gradiente: Tiempo % B 0,00 30,0 1 ,00 30,0 13,00 80,0 Tiempo de ejecución: 16 min.
Tiempo posterior: 5 min Velocidad de flujo: 1 ,5 mL/minuto Volumen de inyección: 20-50 µ?_ Solvente de inyección: DMSO Detección: UV a 210 nm y 245 nm Mediante espectroscopia de masa se determina que la actividad específica de [3H]-compuesto A purificado es 70 Ci/mmol.
Alternativamente, el ensayo de fijación se puede realizar con [3H]-compuesto B.
Síntesis y purificación de [3Hl-com puesto B Compuesto B (Cataízador de Crabtree) [3H]-Compuesto B CH2CI2 Se disuelve el compuesto B (4-(1-(4-(metilsulfonil)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimídin-4-¡loxi)piper¡din-1-carboxilato de ter-butilo, como se indicó anteriormente) (5 mg, 10,6 µ?t???) en 1 ,0 mL de diclorometano, y la solución resultante se trata con catalizador de Crabtree (5 mg, 6,2 µpt???). El recipiente de reacción se sella, y la solución se agita en una atmósfera de gas tritio durante 17 h. Se retira el solvente de reacción a presión reducida, y el residuo resultante se disuelve en etanol. La purificación de [3H]-compuesto B crudo se realiza mediante cromatografía de columna flash en gel de sílice, que se eluye con 70% de hexanos/30% de acetato de etilo, seguido de cromatografía de columna flash en gel de sílice, que se eluye con éter de 60% de petróleo/40% de acetato de etilo.
Mediante espectroscopia de masa, se determina que la actividad específica de [3H]-compuesto B purificado es 57,8 Ci/mmol.
Ensayo de unión de radioligando GPR119 Los compuestos de prueba se diluyen en serie en DMSO al 100% (J.T. Baker #922401 ). Se agregan 2 microL de cada dilución a cavidades adecuadas de una placa de 96 cavidades (cada concentración en triplicado). El compuesto A (o el compuesto B) sin etiquetar, en una concentración final de 10 microM, se usa para determinar la fijación no específica.
El [3H]-compuesto A (o [3H]-compuesto B) se diluye en amortiguador de fijación (50 mM de Tris-HCI, pH 7,5, (Sigma #T7443), 10 mM de MgCI2 (Fluka 63020), 1 mM de EDTA (BioSolutions #BIO260-15), 0, 15% de albúmina sérica bovina (Sigma #A751 1 ), 0,01 mg/mL benzamidina (Sigma #B 6506), 0,01 mg/mL de bacitracina (Sigma #B 0125), 0,005 mg/mL de leupeptina (Sigma #L 851 1 ), 0,005 mg/mL de aprotinina (Sigma #A 1 153)) a una concentración de 60 nM, y se agregan 100 microL a todas las cavidades de una placa de 96 cavidades (Nalge Nunc # 267245).
Las membranas que expresan GPR1 19 se descongelan y se diluyen a una concentración final de 20 pg/100D microL por cavidad en el amortiguador de fijación, y se agregan 100 microL de membranas diluidas a cada cavidad de una placa de 96 cavidades.
La placa se incuba durante 60 minutos con agitación a temperatura ambiente (aproximadamente 25 °C). El ensayo se termina mediante filtración al vacío en placas de filtro GF/C (Packard # 6005174) previamente embebido en 0,3% de polietilnamina, usando un cosechador Packard. Luego, los filtros se lavan 6 veces con un amortiguador de lavado (50 mM de Tris-HCI, pH 7,5 a 4 °C). Las placas de filtro se secan al aire a temperatura ambiente durante la noche. Se agregan 30 µ? de fluido de centelleo (Ready Safe, Beckman Coulter #141349) a cada cavidad, se sellan las placas, y se mide la radiactividad asociada a cada filtro con un contador de centelleo basado en placas Wallac Trilux MicroBeta.
El Kd del [3H]-compuesto A (o [3H]-compuesto B) se determina realizando la fijación por saturación, con análisis de datos mediante regresión no lineal, ajustados a una hipérbola de un sitio (Graph Pad Prism). Las determinaciones de IC50 se obtienen de curvas de competición, analizadas con un programa de ajuste de curvas registrado (SIGHTS) y una ecuación logística de respuesta a la dosis de 4 parámetros. Los valores Ki se calculan de los valores IC50 usando la ecuación Cheng-Prusoff.
Los siguientes resultados se obtuvieron para Beta-lactamasa, Beta-arrestina, cAMP y ensayos de fijación: *La actividad intrínseca es el porcentaje de actividad máxima del compuesto de prueba con respecto a la actividad de un agonista GPR1 19 estándar, isopropiiéster del ácido 4- [[6-[(2-fluoro-4 metilsulfonilfenil) amino]pirimidin-4-il]oxi]piperidin-1 -carboxilico (WO2005121 121 ) o 4-(1-fluoro-2-(2-(2,3,6-trifluorofenil)acetamido)etil)piperidin-1-carboxilato de (S)-l-metilciclopropilo (véase la Figura a continuación), con una concentración final de 10 micromolares. **la curva se extrapola al 100% para calcular EC50.
Téngase en cuenta que los espacios en blanco indican que no se realizó la prueba para ese Ejemplo.
Estructura de 4-(1-fluoro-2-(2-(2,3,6-trifluorofenil)acetam¡do)-etil)piperid¡n-1 -carboxilato de (S)-l-metilciclopropilo*** ***Presentado en el taller SMASH "NMR, It's Not Just For Structures: Determination of Physicochemical Properties" en Portland, Oregon el martes 28 de septiembre de 2010 The Gauche effect: Using Conformational Restriction of a Ethyl Amide Series to Improve the Physical Properties of Analogues' de Kathleen Farley.
Datos in vivo Todos los protocolos ¡n vivo fueron aprobados por el Comité de Bienestar Animal de Pfizer. Las ratas macho Winstar no sometidas previamente a experimentación (200-250 g de peso corporal al recibirlas) se obtienen de Harían Laboratories (Indianapolis, IN), se albergan de a pares en jaulas de plástico colgantes sobre lechos de aserrín Sani-chips y se alimentan ad libitum con comida Purina 5001. Las ratas se albergan con un ciclo de luz controlada (luz de 6 am a 6 pm) con temperatura controlada y condiciones de humedad. Las ratas se aclimatan a la instalación durante al menos 1 semana antes del estudio.
Preparación de los compuestos El Ejemplo 50 se formula como SDD al 10% en el vehículo, 20 mM de amortiguador Tris a pH 7,4 con metilcelulosa al 0,5% y HPMCAS-HF al 0,5%. La dosis (75 mg/kg) se formula a 15 mg/mL para la administración a 5 mL/kg; se agrega el volumen requerido a un mortero y se muele con una pequeña cantidad de vehículo hasta obtener una pasta suave; se agrega más vehículo hasta que la mezcla fluya, en cuyo momento se transfiere a un recipiente de agitación, y el mortero se enjuaga varias veces con la cantidad restante de vehículo y se tapa para evitar la evaporación. El compuesto se formula el día de su preparación y se agita constantemente con una barra magnética agitadora antes y durante el procedimiento de dosificación.
Protocolo de la prueba de tolerancia a la glucosa oral (OGTT) Las ratas se estratifican (n=8/grupo) en 1 de 4 grupos de dosis 90 min o 30 min de vehículo antes de la glucosa (20 mM de amortiguador Tris a pH 7,4 con 0,5% de metilcelulosa y 0,5% de Succinato acetato de hidroxipropil metilcelulosa, alto grado, partícula fina (HPMCAS-HF), o 90 min o 30 min anterior a la glucosa 75 mg/kg, Ejemplo 50. La estratificación se realiza según el peso corporal el día -1 para asegurar que cada grupo tenga los mismos valores de peso corporal promedio por grupo. Las ratas ayunan durante la noche en jaulas limpias (~ 15 h) antes de la prueba de tolerancia a la glucosa oral. Los pesos corporales se registran en la mañana del estudio (después del ayuno) para calcular el volumen de dosis. Las muestras de sangre se recolectan de la vena de la cola de todas las ratas antes de la dosificación con el vehículo o compuesto de prueba mediante gavaje oral (5 mL/kg). Después de 90 o 30 minutos, las ratas se desangran e, inmediatamente, se les administra una dosis oral de glucosa (2 g/kg). Las ratas se vuelven a desangrar 15, 30, 60 y 120 minutos luego de la carga de glucosa. Las muestras de sangre (-250 microlitro/punto temporal) se recolectan en tubos EDTA con aprotinina/DPPIVi (0,6 TIU/20 microlitro por mL de sangre completa). Los tubos de sangre se invierten varias veces inmediatamente después de la recolección, se colocan sobre hielo y luego se hacen girar a 14.000 rpm en una centrífuga refrigerada durante 5 minutos. Las muestras de plasma se analizan para determinar los niveles de glucosa usando un analizador de química clínica Roche c311 , las concentraciones de insulina en plasma se determinan usando AIpco Ultra-Sensitive Insulin Rat ELISA, y las concentraciones de GLP-1 amida total se determinan usando el kit MSD ELISA.
Los resultados se indican como media +/- SEM (error estándar de la media) a menos que se indique lo contrario. La evaluación estadística de los datos se realiza mediante el análisis de varianza de un factor (ANO A) con análisis post-hoc adecuados entre vehículos sincronizados y grupos de tratamiento. Las diferencias comparadas con el vehículo con P<0,05 se consideran importantes a nivel estadístico usando la prueba T no ajustada.
Tabla 1 : Efecto del Ejemplo 50 durante OGTT Glucosa 0-120 Insulina 0-60 GLP-1 amida min AUC min AUC total 0-120 min Tiempo de Dosis (porcentaje de (porcentaje de AUC (porcentaje dosis (Ejemplo 50) respuesta al respuesta al de respuesta al vehículo) vehículo) vehículo) 90 min antes ++ 75 mg/kg de la glucosa 90 82 103 30 min antes ++ 75 mg/kg de la glucosa 89 94 153 ++ p < 0,01 en comparación con el vehículo sincronizado Preparación de los materiales de inicio Preparación 1 : Sal de diclorhidrato de 4-hidrazinopiperidin-1-carboxilato de isopropilo Se disuelve 4-{2-(íer-butoxicarbonil)hidrazinil}piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (obtenido como se describe en WO2008137436) (20,2 g, 67,02 mmol) en etanol absoluto (250 mL), y la solución se agita en nitrógeno a temperatura ambiente. Se agrega lentamente ácido clorhídrico acuoso concentrado (27,9 mL, 335 mmol). La solución se agita en nitrógeno a temperatura ambiente durante 4 h. La reacción se concentra hasta obtener un sólido blanco que contiene algo de material de inicio. El sólido se trata con una solución de cloruro de hidrógeno 4M en 1 ,4-dioxano (100 mL, 400 mmol), y la mezcla resultante se agita durante 14 h a temperatura ambiente. Luego, la reacción se concentra a presión reducida para obtener un sólido blanco, que se trata con heptano (100 mL) y se concentra de nuevo para obtener el compuesto del título como un sólido blanco (15 g, 81 %). 1H MN (400MHz, metanol-d4) delta 4.9 (m, 1 H), 4.1 (m, 2 H), 3.2 (m, 1 H), 2.9 (m, 2 H), 2.0 (m, 2H), 1.4 (m, 2H), 1.2, (d, 6 H); LCMS (ES+): 202 (M+1 ).
Preparación 2: 4-f5-amino-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -ill-piperidin-1 -carboxilato de isopropilo Se agita una mezcla de sal de diclorhidrato de 4-hidrazinopiperidin-1-carboxilato de isopropilo (7,08 g, 25,8 mmol), 2-ciano-3-etoxiacrilato de etilo (4,81 g, 28,4 mmol), acetato de sodio (6,49 g, 77,5 mmol) y etanol (80 mL) a 85 °C durante 3 h. La mezcla se concentra a alrededor de un tercio del volumen inicial. Se agregan agua (50 mL), bicarbonato de sodio saturado (50 mL) y salmuera (50 mL). La mezcla resultante se extrae con acetato de etilo (2 x 50 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera y se secan en sulfato de magnesio. La mezcla se filtra, y el filtrado se concentra al vacío para obtener el compuesto crudo del título como un sólido amarillo claro (9,8 g), que se usa en la siguiente etapa sin purificación. Se prepara una muestra analítica mediante purificación por cromatografía en gel de sílice, que se eluye con 30% a 60% de solución de acetato de etilo en heptano. 1H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta 1.26 (d, 6 H) 1.35 (t, 3 H) 1 .86 - 1.95 (m, 2 H) 2.04 - 2.17 (m, 2 H) 2.84 - 2.96 (m, 2 H) 3.89 -3.98 (m, 1 H) 4.28 (q, 2 H) 4.25 - 4.40 (m, 2 H) 4.89 - 4.97 (m, 1 H) 5.06 (s, 2 H) 7.64 (s, 1 H); LCMS (ES+): 325, 1 (M+1 ).
Preparación 3: 4-[5-bromo-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -inpiperidin-1 -carboxilato de isopropilo Se agrega lentamente nitrito de fer-butilo puro (4,8 mL, 39,3 mmol) a una mezcla agitada de 4-[5-amino-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -il]-piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (Preparación 2) (8,5 g, 26,2 mmol) y bromuro de cobre (II) (3,7 g, 16 mmol) en acetonitrilo (100 mL) a temperatura ambiente. Se observa un efecto exotérmico considerable cuando la mezcla se calienta a alrededor de 50 °C. Después de calentarla en forma continua a 65 °C durante 30 minutos, la reacción se enfría a temperatura ambiente y luego se concentra al vacío. Se agrega un exceso de amoníaco acuoso al 10%, y la mezcla se extrae con acetato de etilo. La fase orgánica se lava con agua y salmuera, y se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice, que se eluye con 30% a 70% de acetato de etilo en heptano para obtener el compuesto del título como un aceite amarillo, que es alrededor de 70% puro mediante RMN y LCMS. El material se usa en la siguiente etapa sin purificación adicional. 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 1.23 (d, 6 H) 1.34 (t, 3 H) 1 .84 - 1 .95 (m, 2 H) 2.01 - 2.15 (m, 2 H) 2.82 - 2.98 (m, 2 H) 4.25 - 4.36 (m, 2 H) 4.30 (q, 2 H) 4.45 - 4.56 (m, 1 H) 4.86 - 4.96 (m, 1 H) 7.95 (s, 1 H); LCMS (ES+): 387,9 (M+1 ).
Preparación 4: 4-r5-bromo-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1 -illpiperidin-1 -carboxilato de isopropilo A una solución de 4-[5-bromo-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -il]piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (3,59 g, 6,5 mmol) en tetrahidrofurano (32 mL) enfriada a 0 'C se agrega una solución 2M de complejo de borano-sulfuro de metilo en tetrahidrofurano (14,6 mL, 29,2 mmol). La mezcla de reacción se calienta a reflujo durante 21 h y luego se agita durante 4 h a temperatura ambiente. La mezcla se enfría a 0 °C, y se agrega metanol. La solución resultante se calienta a temperatura ambiente y se agita durante 10 minutos. La solución se vuelve a enfriar a 0 °C, y se agrega por goteo una solución acuosa de hidróxido de sodio 2M (10 mL). La mezcla resultante se diluye con acetato de etilo y se agita vigorosamente durante 30 minutos. Las capas se separan, y la fase acuosa se extrae dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavan secuencialmente con agua y salmuera, y luego se secan en sulfato de magnesio. La mezcla se filtra, y el filtrado se concentra al vacío. La cromatografía en gel de sílice que se eluye con 55% a 70% de acetato de etilo en heptano produce el compuesto del título como un aceite (1 ,89 g, 84%). 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 1 .23 (d, 6 H), 1.87 - 1.95 (br m, 3 H), 2.06 (qd, 2 H), 2.89 (br t, 2 H), 4.29 (br s, 2 H), 4.39 (tt, 1 H), 4.50 (d, 2 H), 4.90 (m, 1 H), 7.58 (s, 1 H); LCMS (ES+) 348.0 (M+1 ).
Preparación 5: 4-r5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1-inp¡peridin-1 -carboxilato de isopropilo En un vial para microondas se combinan 4-[5-bromo-4-(hidroximetil)-1 H-p¡razol-1 -il]piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (1 ,42 g, 4,10 mmol), tris-(dibencilidenacetona) dipaladio (156 mg, 0,170 mmol), 1 -1 '-bis-(difenilfosfino) ferroceno (192 mg, 0,346 mmol), polvo de zinc (68,8 mg, 1 ,06 mmol), cianuro de zinc (497 mg, 4,23 mmol) y N,N-dimetilacetamida (20 ml_). El vial se purga con nitrógeno, se sella y se calienta a 120 °C durante 1 h en un reactor de microondas (Biotage Initiator 2.2). La mezcla de reacción se hace pasar a través de una almohadilla de Florisil™, se diluye con acetato de etilo, y luego se agrega agua. La fase orgánica se extrae 3 veces con acetato de etilo, y las capas orgánicas combinadas se secan en sulfato de magnesio. La mezcla se filtra, y el filtrado se evapora al vacío. La cromatografía en gel de sílice que se eluye con 55% a 70% de acetato de etilo en heptano produce el compuesto del título como un aceite verde que se solidifica luego de estar en reposo (1 ,06 g, 88%). 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 1.24 (d, 6 H), 1.99 (br d, 2 H), 2.06 - 2.17 (m, 3 H), 2.93 (br t, 2 H), 4.31 (br s, 2 H), 4.48 (tt, 1 H), 4.71 (d, 2 H), 4.92 (m, 1 H), 7.60 (s, 1 H); LCMS (ES+): 293.1 (M+H).
Preparación 6: 2-fluoro-4-[(2-hidroxietiiniolfenol A una solución de 4-bromo-2-fluorofenol (0,75 ml_, 6,8 mmol) y diisopropiletilamina (3,5 ml_, 20,09 mmol) en 1 ,4-dioxano (35 mL), se agregan 9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)xanteno (415 mg, 0,717 mmol), bis(dibencilidenacetona)paladio (322 mg, 0,351 mmol) y 2-mercaptoetanol (0,46 mL, 6,86 mmol), y la solución de reacción marrón oscuro se calienta a 110 °C durante 16 h. La reacción se enfría a temperatura ambiente, se diluye con agua y se extrae 4 veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinan y se secan en sulfato de magnesio. La mezcla se filtra, y el filtrado se concentra a presión reducida para obtener un aceite color granate que se purifica mediante cromatografía en gel de sílice para obtener el compuesto del título (985 mg, 76%) como un sólido color granate. 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 3.00 (t, 2H, J=5.95 Hz) 3.69 (d, 2 H. vM3.71 Hz) 6.89-6.95 (m, 1 H) 7.1 1 (ddd, 1 H, J=8.39, 2.15, 1.17 Hz) 7.17 (dd, 1 H, J=10.54, 2.15 Hz).
Preparación 7: 4-f(2-fffer-butil(dimetil)silil1oxi)etil)tio1-2-fluorofenol A una solución de 2-fluoro-4-[(2-hidroxietil)tio]fenol (985 mg, 5,24 mmol) e imidazol (371 mg, 5,30 mmol) en W./V-dimetilformamida (5 mL), se agrega en porciones cloruro de ter-butildimetilsililo (814 mg, 5,24 mmol), y la reacción se agita a temperatura ambiente durante 4 h. La reacción se concentra a presión reducida, y el residuo se diluye con agua y se extrae 3 veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera y se secan en sulfato de magnesio. La mezcla se filtra, y el filtrado se concentra a presión reducida para obtener el compuesto del título como un aceite naranja (1 ,43 g, 90%) que se usa sin purificación adicional. LCMS (ES+): 301.1 (M-1 ).
Preparación 8: 1-f4-(benciloxi)-3-fluorofenin-1 H-tetrazol A una suspensión de 4-(benciloxi)-3-fluoroanilina (1 ,04 g, 4,8 mmol) (WO 2005030140) en una atmósfera de nitrógeno, se agrega ácido acético (2,3 mL, 38,3 mmol), lortoformiato de trietilo (2,44 mL, 14,4 mmol) y azida de sodio (0,34 g, 5,3 mmol), y la mezcla de reacción se calienta a 95 °C durante 2,5 h. La solución se enfría a temperatura ambiente, y se agrega agua luego de extraer 3 veces con acetato de etilo. Los extractos se combinan y se lavan con salmuera, y se secan en sulfato de magnesio. La mezcla se filtra y se concentra a presión reducida, y el material crudo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice (20 - 40% de acetato de etilo en heptano) para obtener el compuesto del título como un sólido blanco (1 , 12 g, 86%). 1H RMN (400 MHz, deuterometanol) delta 9.65 (s, 1 H), 7.73 - 7.68 (dd, 1 H, J=1 1 , 2.5 Hz), 7.60 - 7.57 (m, 1 H) 7.47 - 7.45 (m, 2H), 7.40 - 7.30 (m, 5H), 5.24 (s, 2H); LCMS (ES+): 271 , 1 (M+1 ).
Preparación 9: 2-fluoro-4-(1 H-tetrazol-1-il)fenol A 1-[4-(benciloxi)-3-fluorofenil]-1 H-tetrazol (1 ,12 g, 4, 14 mmol) en un frasco agitador Parr, se agrega etanol (40 mL), y la solución se purga con gas nitrógeno. Se agrega 10% de paladio en carbono (0,30 g), y la reacción se hidrogena en un aparato agitador Parr a 40 psi de hidrógeno durante 30 minutos. Luego, la mezcla se filtra a través de un filtro de microporos, y el filtrado se concentra a presión reducida para obtener el compuesto del título como un sólido blanco (0,67 g, 90%) que se usa sin purificación adicional. 1H RMN (400 MHz, deuterometanol) delta 9.62 (s, 1 H), 7.65 - 7.62 (dd, 1 H, J=11 , 2.5 Hz), 7.50 - 7.46 (m, 1 H) 7.47 - 7.45 (dd, 1 H, J=9.0, 9.0 Hz); LCMS (ES+): 181 ,1 (M+1 ).
Preparación 10: 4-(5-ciano-4-((metilsulfoniloxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piper¡din-1 -carboxilato de isopropilo Se disuelve 4-(5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (Preparación 5) (75 mg, 0,24 mmol) en 1 mL diclorometano anhidro, y se agrega trietilamina (0,1 mL, 0,74 mmol). La mezcla de reacción se enfría en un baño de hielo, y luego se agrega anhídrido metansulfónico (62 mg, 0,34 mmol). Se retira la solución del baño de hielo y se agita durante 30 minutos. La reacción se inactiva mediante la adición de bicarbonato de sodio acuoso saturado, y se separan las capas. La capa acuosa se extrae tres veces más con diclorometano. Los extractos orgánicos se combinan y se lavan con salmuera, se secan en sulfato de sodio, se filtran, y el filtrado se concentra para obtener un aceite (75 mg, 100% de rendimiento). El material crudo se usa en las siguientes etapas sin purificación adicional.
Preparación 1 1 : sal de clorhidrato de 4-hidrazinopiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo A una solución de 4-oxopiperidin-1-carboxilato de ter-butilo (50 g, 0,25 mmol) en metanol (500 ml_) en autoclave se agrega monoclorhidrato de hidrazina (17,2 g, 0,25 mmol) en agua (100 mL). La mezcla blanca se agita en argón y luego se agrega 5% de platino en carbono (750 mg) como una suspensión en agua. El autoclave se sella y se carga a 60 atmósferas con hidrógeno, y la reacción se agita durante 15 h. Una vez que se completa, la reacción se filtra a través de Celite®, y la almohadilla se lava con metanol. Esta preparación se realiza 6 veces. Los filtrados combinados se concentran a presión reducida, y el subproducto del precipitado blanco resultante (di-fer-butil-4,4'-hidrazin-1 ,2-diildipiperidin-1-carboxilato) se recolecta por filtración y se lava varias veces con agua. Luego, el filtrado acuoso se concentra a presión reducida para obtener el producto deseado (221 g, 59%) como un sólido incoloro. 1H RMN (400MHz, deuterocloroformo) delta 4.13 (br s, 2H), 3.32 (br t, 1 H), 2.77 (br t, 2H), 2.16 (m, 2H), 1.66 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).
Preparación 12: 4-í5-amino-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -inpiperidin-1-carboxilato de ter-butilo Se agita una mezcla de sal de clorhidrato de 4-hidrazinopiperidin-1-carboxilato de ter-butilo (221 g, 880 mmol), 2-ciano-3-etoxiacrilato de etilo (153 g, 880 mmol), acetato de sodio trihidrato (477 g, 352 mmol) y etanol (2000 mL) a 85 °C durante 8 h. La mezcla se concentra a presión reducida, y el residuo se disuelve en acetato de etilo y agua. Las capas se separan, y la capa acuosa se extrae con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se secan en sulfato de magnesio. La mezcla se filtra, y el filtrado se concentra a presión reducida. El material crudo se purifica mediante filtración a través de un tapón corto de gel de sílice que se eluye con 40% de acetato de etilo en heptano para obtener el producto como un sólido amarillo pálido (214 g, 72%). 1H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta 7.60 (s, 1 H), 5.27 (br s, 2H), 4.23 (br q, 4H), 3.91 (m, 1 H), 2.81 (br s, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.86 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.29 (t, 3H).
Preparación 13: 4-[5-bromo-4-(etox¡carbonil)-1 H-pirazol-1-illpiperidin-1-carboxilato de ter-butilo A una solución de bromuro de cobre (II) (1 ,69 g, 770 mmol) en acetonitrilo (1000 mL), se agrega lentamente nitrito de rer-butilo (112 mL, 960 mmol), y la solución se calienta a 65 °C. A esto se agrega por goteo una solución de 4-[5-amino-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -il]piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo (215 g, 640 mmol) en acetonitrilo (650 mL) durante 30 minutos. Luego de 4 h, la reacción se enfría a temperatura ambiente y se vierte en ácido clorhídrico 2M (1500 mL) en hielo. La mezcla se extrae 3 veces con acetato de etilo, y los extractos orgánicos combinados se lavan con bicarbonato de sodio acuoso saturado y luego se secan en sulfato de magnesio. La mezcla se filtra, y el filtrado se concentra a presión reducida. El residuo resultante se purifica por filtración a través de un tapón corto de gel de sílice que se eluye inicialmente con 10% de heptano en diclorometano seguido de diclorometano para obtener el compuesto del título (137 g, 53%) como un aceite amarillo que se solidifica luego del reposo. 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 7.95 (s, 1 H), 4.48 (m, 1 H), 4.28 (br q, 4H), 2.86 (br s, 2H), 2.06 (m, 2H), 1.90 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.34 (t, 3H).
Preparación 14: 4-r5-bromo-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1-illpiperidin-1-carboxilato de ter- butilo A una solución de 4-[5-bromo-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -il]piperidin-1-carboxilato de íer-butilo (137 g, 0,34 mol) en tetrahidrofurano (1300 ml_) enfriada a 0 °C, se agrega lentamente sulfuro de borano-metilo (97 ml_, 1 ,02 mol). La solución se calienta a temperatura ambiente y luego se calienta a reflujo durante 15 h. Luego, la reacción se enfría en un baño de hielo, y se agrega metanol (40 mL) por goteo. Luego, la solución se agita a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se agrega hidróxido de sodio acuoso 2M (1200 mL), y las capas se separan. La capa acuosa se extrae con acetato de etilo, y las capas orgánicas combinadas se lavan con salmuera, se secan en sulfato de magnesio, y el solvente se retira a presión reducida. El residuo resultante se purifica mediante filtración a través de un tapón corto de gel de sílice que se eluye con 30% de acetato de etilo en heptano para obtener el compuesto del título como un sólido incoloro (61 ,4 g, 50%). El material impuro de esta purificación se purifica adicionalmente mediante el procedimiento cromatográfico anterior para obtener un segundo lote del compuesto del título (22 g, 18%) como un sólido incoloro. 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 7.59 (s, 1 H), 4.52 (s, 2H), 4.37 (m, 1 H), 4.25 (br s, 2H), 2.86 (br s, 2H), 2.06 (m br s, 2H), 1.89 (m, 2H), 1.45 (s, 9H).
Preparación 15: 4-r5-ciano-4-(h¡droximetil)-1 H-pirazol-1 -inpiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo Se agrega cianuro de cobre (I) (2,97 g, 33,3 mmol) a una solución agitada de 4-[5-bromo-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1-il]piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo (10 g, 27,8 mmol) en dimetilformamida desgasificada (100 ml_). Luego, la reacción se calienta a 165 ° C durante 4 h y se enfría a temperatura ambiente. También se enfría en un baño de hielo, y se agrega una solución de etilendiamina (5,5 mL) en agua (20 mL) seguido de la dilución con más agua (70 mL). Luego, la mezcla se extrae con acetato de etilo, y las capas se separan. La capa orgánica se lava secuencialmente con agua y salmuera, y luego se seca en sulfato de magnesio. La mezcla se filtra, y el filtrado se concentra a presión reducida. Este procedimiento se realiza en 8 lotes. Los residuos crudos finales se combinan y purifican mediante cromatografía de columna en gel de sílice repetida que se eluye con 40% de acetato de etilo en heptano para obtener el compuesto del título (1 1 ,6 g, 17%) como un sólido incoloro. 1H RMN (400MHz, deuterocloroformo) 7.59 (s, 1 H), 4.71 (s, 2H), 4.45 (m, 1 H), 4.26 (br s, 2H), 2.88 (br t, 2H), 2.08 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 1.48 (s, 9H); LCMS (ES+): 207.1 (M-Boc+H).
Para una síntesis alternativa de 4-[5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1 -il]piper¡din- 1 -carboxílato de ter-butilo, véase el Ejemplo 50.
Preparación 16: 4-(5-ciano-4-((metilsulfoniloxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo A una solución agitada de 4-(5-ciano-4-(hídroximetil)-1 H-pirazol-1 -il)p¡peridin-1 -carboxilato de ter-butilo (202 mg, 0,659 mmol) en diclorometano (6,6 mL), se agrega trietilamina (0,18 mL, 1 ,32 mmol) seguido de anhídrido metansulfónico (189 mg, 1 ,1 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agita durante 4,5 h antes de diluirla con diclorometano y bicarbonato acuoso saturado. Las capas se separan, y la capa acuosa se extrae con diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera, se secan en sulfato de magnesio, se filtran, y el filtrado se concentra al vacío para obtener 4-(5-ciano-4-((metilsulfoniloxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo como un aceite que se usa sin purificación adicional.
Preparación 17: 2-fluoro-4-(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-tetrazol-5-il)fenol y 2-fluoro-4-(2-(í2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-2H-tetrazol-5-il)fenol A) 4-(benciloxi)-3-fluorobenzonitrilo A una solución agitada de 3-fluoro-4-hidroxibenzonitrilo (1 ,00 g, 7,30 mmol) en 20 mL de acetonitrilo, se agrega carbonato de potasio en porciones (2,02 g, 14,6 mmol). La mezcla resultante se agita durante 10 minutos antes de agregar bromuro de bencilo (1 ,33 mL, 10,9 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 70 h antes de diluirla con acetato de etilo y agua. La fase orgánica se separa, se lava con agua, salmuera, se seca en sulfato de magnesio, se filtra, y el filtrado se concentra al vacio. El residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 5 a 20% de acetato de etilo en heptano para obtener 4-(benciloxi)-3-fluorobenzonitrilo como un sólido blanco (1 ,33 g).
B) 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenin-1 H-tetrazol v 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofen¡n-2H-tetrazol Un vial cargado con 4-(benciloxi)-3-fluorobenzonitrilo (250 mg, 1 ,10 mmol), azida de sodio (214 mg, 3,30 mmol), cloruro de amonio (176 mg, 3,30 mmol) y 3 mL de N,N-dimetilformamida se calienta a 110 °C durante 18 h. La mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente, se diluye con agua y acetato de etilo, y el pH se ajusta a 3 con ácido clorhídrico acuoso 1 N. La fase orgánica se separa y se lava con salmuera, se seca en sulfato de magnesio, se filtra, y el filtrado se concentra al vacío para obtener el compuesto del título como un sólido blanco (270 mg). Este material se usa en las etapas posteriores sin purificación.
C) 5-(4-(benciloxn-3-fluorofenin-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-tetrazol y 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-2-((2-(tr¡metilsilinetoxi)metil)-2H-tetrazol A una solución de 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-1 H-tetrazol y 5-(4-(bencilox¡)-3-fluorofenil)-2H-tetrazol (270 mg, 1 mmol) disuelta en tetrahidrofurano se agrega hidruro de sodio (44 mg, 1 ,1 mmol) en 4 porciones, y la mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 15 minutos. Luego se agrega (2-(clorometoxi)etil)trimetilsilano (0,19 mL, 1 ,0 mmol), y la mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 16 h. La reacción se inactiva mediante la adición de agua, y se agrega acetato de etilo. La fase orgánica se separa, y la fase acuosa se extrae dos veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera, se secan en sulfato de magnesio, se filtran, y el filtrado se concentra a presión reducida. La purificación por cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de acetato de etilo y heptano (de 5 a 20% de acetato de etilo) produce el producto deseado como un sólido blanco (270 mg, 67% de rendimiento).
D) 2-fluoro-4-(1-((2-(trimetilsilinetoxi)metin-1 H-tetrazol-5-infenol v 2-fluoro-4-(2-((2-(trimetilsilil)etoxi)metin-2H-tetrazol-5-il)fenol A una solución de 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-tetrazol y 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-2-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-2H-tetrazol (140 mg, 0,35 mmol) disuelta en una mezcla de 2 mL de etanol y 2 mL de tetrahidrofurano, se agregan negro de paladio (56 mg, 0,53 mmol) y ácido fórmico (0, 14 mL, 3,5 mmol). La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 4 h antes de filtrarla a través de una almohadilla de Celite®. El filtrado se concentra a presión reducida, y el material crudo resultante se usa en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Preparación 18: 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenilV1-(2-(trimetilsililoxi)etil)-1 H-tetra2ol y 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-2-(2-(trimetilsililoxi)etil)-2H-tetrazol A una solución de 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-1 H-tetrazol y 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-2H-tetrazol (Preparación 17, Etapa B) (550 mg, 2 mmol) disuelta en N,N-dimetilformamida (8 mL) se agrega hidruro de sodio (163 mg, 4 mmol) en dos porciones, y la mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 5 minutos. Luego, se agrega (2-bromoetoxi)tr¡metilsilano (1 ,3 mL, 6 mmol), y la mezcla de reacción se agita a 70 °C durante 16 h antes de enfriarla a temperatura ambiente. La reacción se inactiva mediante la adición de agua, y se agrega acetato de etilo. La fase orgánica se separa y la fase acuosa se extrae dos veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera, se secan en sulfato de magnesio, se filtran y se concentran a presión reducida. El residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de acetato de etilo y heptano (de 5 a 30% de acetato de etilo) para obtener 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-1-(2-(trimetilsililoxi)etil)-1 H-tetrazol (100 mg, 12% de rendimiento) y 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-2-(2-(trimetilsililoxi)etil)-2H-tetrazol (600 mg, 69% de rendimiento).
Preparación 19: 2-fluoro-4-(2-(2-(trimetils¡l¡loxi)et¡n-2H-tetrazol-5-infenol A una solución de 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-2-(2-(trimetilsililoxi)etil)-2H-tetrazol (Preparación 18) (230 mg, 0,54 mmol) disuelta en una mezcla de 6 mL de etanol y 6 mL de tetrahidrofurano se agregan negro de paladio (86 mg, 0,806 mmol) y ácido fórmico (0,215 mL, 5,4 mmol). La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 4 h antes de filtrarla a través de una almohadilla de Celite®. El filtrado se concentra a presión reducida, y el material crudo resultante (180 mg) se usa en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Preparación 20: 2-fluoro-4-(1-(2-(trimetilsililoxi)etil)-1 H-tetrazol-5-il)fenol A una solución de 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-1 -(2-(trimetilsililoxi)etil)-1 H-tetrazol (Preparación 18) (130 mg, 0,30 mmol) disuelta en una mezcla de 2 mL de etanol y 2 mL de tetrahidrofurano se agregan negro de paladio (48 mg, 0,45 mmol) y ácido fórmico (0,12 mL, 3 mmol). La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 4 h antes de filtrarla a través de una almohadilla de Celite®. El filtrado se concentra a presión reducida, y el material crudo resultante (94 mg) se usa en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Preparación 21 : 2-fluoro-4-(1-metil-1 H-tetrazol-5-¡l)fenol A) 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-1 -metil-1 H-tetrazol v 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-2-metil-2H-tetrazol A una solución agitada de 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-1 H-tetrazol y 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-2H-tetrazol (Preparación 17, Etapa B) (1 ,50 g, 5,55 mmol) en 30 mL de tetrahidrofurano, se agrega hidruro de sodio (444 mg, 1 1 ,1 mmol) en dos porciones a temperatura ambiente. Luego de 5 minutos, se agrega iodometano (1 ,04 mL, 16,6 mmol), y la reacción se agita en una atmósfera de nitrógeno durante 15 h a temperatura ambiente. La mezcla se diluye con agua y se extrae dos veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera, se secan en sulfato de magnesio, se filtran, y el filtrado se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con 10-40% de acetato de etilo en heptano para obtener 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-2-metil-2H-tetrazol como un sólido blanco (1 ,1 g) y 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-1-metil-1 H-tetrazol como un sólido blanco (450 mg). 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-1-metil-1 H-tetrazol. 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 4.15 (s, 3 H) 5.23 (s, 2 H) 7.15 (t, 8.39 Hz, 1 H) 7.31 - 7.48 (m, 6 H) 7.52 (dd, J=1 1.13, 2.15 Hz, 1 H). LCMS (M+1 ) 285.1.
B) 2-fluoro-4-(1 -metil-1 H-tetrazol-5-il)fenol A una solución de 5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-1 -metil-1 H-tetrazol (500 mg, 1 ,76 mmol) en 6 mL de etanol y 6 mL de tetrahidrofurano, se agregan ácido fórmico (0,7 mL, 17,6 mmol) y, luego, negro de paladio (281 mg, 2,64 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla de reacción se filtra a través de Celite®, y el filtrado se concentra al vacío para obtener 2-fluoro-4-(1 -metil-1 H-tetrazol-5- il)fenol como un sólido blanco (330 mg) que se usa para las reacciones posteriores sin purificación adicional.
Preparación 22: 4-(1 -metil-1 H-tetrazol-5-il)fenol A) 4-(benciloxi)-N-metilbenzamida A un frasco cargado con cloruro de tionilo (0,35 mL, 4,82 mmol) se agrega una solución de ácido 4-benciloxibenzoico disponible en el comercio (1 ,00 g, 4,38 mmol) en 10 mL de diclorometano y 0,01 mL de ?/, /V-dimetilformamida a 0 °C con agitación. Se retira el baño de hielo, y la solución se agita durante 4 h a temperatura ambiente. La mezcla se concentra al vacío para obtener un sólido blanco. El sólido se absorbe en 10 mL de metilamina (2M en tetrahidrofurano), y la solución resultante se agita a temperatura ambiente durante 70 h. La mezcla se diluye con acetato de etilo y agua, y la capa orgánica se separa, se seca en sulfato de magnesio, se filtra, y el filtrado se concentra al vacío para obtener un sólido blanco. Este sólido se vuelve a cristalizar de acetato de etilo y heptano para obtener 4-(benciloxi)-N-metilbenzamida como agujas blancas (850 mg).
B) 5-(4-(benciloxi)fenil)-1 -metil-1 H-tetrazol A una solución agitada de 4-(benciloxi)-N-metilbenzamida (200 mg, 0,829 mmol) en 3 mL de acetonitrilo y una gota de /S/, A/-dimetilformamida, en un frasco que tiene en la parte superior un condensador de reflujo, se agrega trietilamina (0, 12 mL) en una atmósfera de nitrógeno.
La mezcla de reacción se agita durante 10 minutos antes de agregar cloruro de tionilo (0,078 mL, 1 ,08 mmol) por goteo. La mezcla de reacción amarilla se agita durante 1 hora a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno. Luego se agrega lentamente trietilamina (0,36 ml_), seguido de cloruro de tetrabutilamonio (37,4 mg, 0, 12 mmol) y azida de sodio (61 1 mg, 1 ,82 mmol). La suspensión amarilla resultante se agita vigorosamente durante 70 h a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se diluye con agua y acetato de etilo. La capa orgánica se separa, se lava con salmuera, se seca en sulfato de magnesio, se filtra, y el filtrado se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 10 a 40% de acetato de etilo en heptano para obtener 5-(4-(benciloxi)fenil)-1-metil-1 H-tetrazol como un sólido blanco (180 mg).
C) 4-(1-metil-1 H-tetrazol-5-il)fenol A una solución agitada de 5-(4-(benciloxi)fenil)-1-metil-1 H-tetrazol (180 mg, 0,676 mmol) en 3 mL de etanol y 3 mL de tetrahidrofurano, se agregan ácido fórmico (0,27 mL, 6,76 mmol) y luego negro de paladio (108 mg, 1 ,01 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla de reacción se filtra a través de Celite®, y el filtrado se concentra para obtener 4-(1 -metil-1 H-tetrazol-5-il)fenol como un sólido blanco (1 10 mg) que se usa en las reacciones posteriores sin purificación adicional.
Preparación 23: 3-fluoro-4-hidroxibenzamida Se calienta a reflujo una mezcla de 3-fluoro-4-hidroxibenzonitrilo disponible en el comercio (500 mg, 3,65 mmol) e hidróxido de potasio (1 ,02 g, 18,2 mmol) en 10 mL de etanol al 80% durante 16 h. Después de enfriarla a temperatura ambiente, la mezcla se concentra al vacío, y el residuo se absorbe en agua, se acidifica con ácido acético y se extrae con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se secan en sulfato de magnesio, se filtran, y el filtrado se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 20 a 60% de acetato de etilo en heptano para obtener 3-fluoro-4-hidroxibenzamida como un sólido blanco (210 mg).
Alternativamente, 3-fluoro-4-hidroxibenzamida se puede preparar de la siguiente manera: A una solución agitada de peróxido de hidrógeno y urea (4,2 g, 43,8 mmol) en 12 mL de agua, se agrega hidróxido de sodio sólido (1 ,04 g, 25,5 mmol). La solución resultante se enfría en un baño de hielo antes de agregar una solución de 3-fluoro-4-hidroxibenzonitrilo (1 ,00 g, 7,29 mmol) en 5 mL de etanol. La mezcla se agita vigorosamente durante 2 h a temperatura ambiente antes de diluirla con agua (100 mL) y acetato de etilo (100 mL). La mezcla se agita durante 5 minutos antes de agregar ácido clorhídrico 1 M hasta obtener pH 4. La capa acuosa se separa y se extrae con acetato de etilo (3 x 100 mL). Las capas orgánicas combinadas se secan en sulfato de magnesio, se filtran, y el filtrado se concentra para obtener un sólido blanco. Este sólido se tritura con dietiléter y heptano (2: 1 , 90 mL) durante 1 hora, antes de filtrarlo para obtener 3-fluoro-4-hidroxibenzamida como un sólido blanco (1 ,05 g). 1H RMN (400 MHz, deutero dimetil sulfóxido) delta 6.93 (t, J=8.69 Hz, 1 H) 7.19 (br. s., 1 H) 7.53 (dd, =8.39, 1.95 Hz, 1 H) 7.62 (dd, J=12.40, 2.05 Hz, 1 H) 7.77 (br. s., 1 H) 10.39 (s, 1 H). LCMS (ES) 156.0 (M+1 ).
Preparación 24: 2-fluoro-4-hidroxibenzamida A una solución agitada de peróxido de hidrógeno y urea (2,1 g, 21 ,9 mmol) en 6 mL de agua, se agrega hidróxido de sodio sólido (521 mg, 12,8 mmol). La solución resultante se enfría en un baño de hielo antes de agregar una solución de 2-fluoro-4-hidroxibenzonitrilo (500 mg, 3,65 mmol) en 2 mL de etanol. La mezcla se agita vigorosamente durante 2 h a temperatura ambiente antes de diluirla con agua (100 mL) y acetato de etilo (100 mL). La mezcla se agita durante 5 minutos antes de agregar ácido clorhídrico 1 M hasta obtener pH=4. La capa acuosa se separa y se extrae con acetato de etilo (3 x 50 mL). Las capas orgánicas combinadas se secan en sulfato de magnesio, se filtran, y el filtrado se concentra para obtener 2-fluoro-4-hidroxibenzamida como un sólido blanco.
Preparación 25: 4-(5-c¡ano-4-(1-hidroxietil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo Se disuelve 4-(5-ciano-4-formil- H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo (Ejemplo 9, Etapa A) (51 mg, 0,18 mmol) en 2 mL de tetrahidrofurano anhidro y se enfría a -78 °C en una atmósfera de nitrógeno. Luego se agrega por goteo bromuro de metllmagnesio (0,070 mL, 0,21 mmol, 3M en dietiléter). Se retira el baño frío, y la mezcla se agita durante 1 h a temperatura ambiente. La mezcla se diluye con bisulfato de potasio acuoso 1 M y se extrae tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera, se secan en sulfato de sodio, se filtran, y el filtrado se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de acetato de etilo en heptano (de 20 a 100% de acetato de etilo) para obtener 4-(5-ciano-4-(1 -hidroxietil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo como un sólido blanco (33 mg) que se usa en las siguientes etapas sin purificación.
Preparación 26: Carbonato de 1-metilciclopropil 4-nitrofenilo A) 1 -metilciclopropanol Se carga un frasco de 1 L con metóxido de titanio (100 g), ciclohexanol (232 g) y tolueno (461 mL). El frasco tiene una trampa Dean-Stark y un condensador. La mezcla se calienta a 140 °C hasta que se retira el metanol. El tolueno se retira a 180 °C. Se agrega más tolueno, y este proceso se repite dos veces. Una vez que se retira todo el tolueno, el frasco se seca en alto vacío. Al frasco se agrega dietiléter (580 mL) para preparar una solución 1 M en dietiléter. Un frasco de tres cuellos de 5 L se equipa con un agitador superior, una entrada de gas inerte y un embudo de adición con ecualizador de presión. El frasco se purga con gas nitrógeno y se carga con acetato de metilo (60,1 mL, 756 mmol), ciclohexilóxido de titanio (solución 1 M en éter, 75,6 mL) y dietiléter (1500 mL). La solución se agita mientras se mantiene el frasco de reacción en un baño de agua a temperatura ambiente. El embudo de adición se carga con la solución de bromuro de etilmagnesio 3M (554 mL, 1 ,66 moles). Se agrega por goteo el reactivo de Grignard durante 3 h a temperatura ambiente. La mezcla se convierte en una solución amarillo claro, y luego se forma de manera gradual un precipitado que finalmente se vuelve una mezcla de color verde/marrón/negro. Después de agitar durante 15 minutos más, luego de la adición de Grignard, la mezcla se vierte cuidadosamente en una mezcla de ácido sulfúrico concentrado al 10% en 1 L de agua. La mezcla resultante se agita hasta que se disuelven todos los sólidos. La capa acuosa se separa y se extrae con dietiléter (2 x 500 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavan secuencialmente con agua, salmuera, se secan en carbonato de potasio (500 g) durante 30 minutos, se filtran, y el filtrado se concentra al vacío para obtener un aceite. Se agrega bicarbonato de sodio (200 mg), se destila el material crudo, y se recolectan las fracciones que entran en ebullición a alrededor de 100 °C para obtener el compuesto del título (23 gramos) con metiletilcetona y 2-butanol como impurezas secundarias. 1H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta 0.45 (app. t, J=6.59 Hz, 2 H), 0.77 (app. t, J=5.61 Hz, 2 H), 1.46 (s, 3 H). La preparación del compuesto del título también se describe en WO09105717.
B) Carbonato de 1-metilciclopropil 4-nitrofenilo Se enfría a 0 °C una solución de 1 -metilciclopropanol (10 g, 137 mmol), cloroformiato de 4-nitrofenilo (32 g, 152 mmol) y algunos cristales de 4-dimetilaminopiridina (150 mg, 1 ,2 mmol) en diclorometano (462 mL). Se agrega por goteo trietilamina (36,5 g, 361 mmol). Luego de 10 minutos, se retira el baño de hielo, y la reacción se agita a temperatura ambiente durante 14 h. La mezcla de reacción se lava dos veces con carbonato de sodio acuoso saturado. La fase acuosa se extrae con diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se lavan con agua, se secan en sulfato de magnesio, se filtran, y el filtrado se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía flash en gel de sílice, que se eluye con una mezcla de gradiente de acetato de etilo en heptano (de 0 a 5% de acetato de etilo durante los primeros 10 minutos, luego ¡socrático al 5% de acetato de etilo en heptano) para obtener 20,8 g del carbonato deseado como un aceite transparente. Este aceite se solidifica luego del reposo. 1H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta 0.77 (app. t, J=6.59 Hz, 2 H), 1.09 (app. t, J=7.07 Hz, 2 H), 1.67 (s, 3 H), 7.40 (app. dt, J=9.27, 3.17 Hz, 2 H), 8.29 (app. dt, J=9.27, 3.17 Hz, 2 H).
Alternativamente, 1-metilciclopropanol se puede preparar de la siguiente manera: 1 -metilciclopropanol Un frasco de cuatro cuellos de 2000 mL se equipa con un agitador mecánico, una entrada de gas inerte, un termómetro y dos embudos de adición con ecualizador de presión. El frasco se purga con nitrógeno y se carga con 490 mL de dietiléter y, luego, 18,2 mL (30 mmol) de tetra(2-etilhexilóxido) de titanio. Se carga un embudo de adición con una solución preparada de 28,6 mL (360 mmol) de acetato de metilo diluido en 120 mL con éter. El segundo embudo de adición se carga con 200 mL de bromuro de etilmagnesio 3M en una solución de éter. El frasco de reacción se enfría en un baño de agua helada para mantener la temperatura interna igual o menor a 10 °C. Al frasco se agregan 40 mililitros de la solución de acetato de metilo. Luego se agrega por goteo el reactivo de Grignard del embudo de adición a una velocidad de alrededor de 2 gotas por segundo y no más de 2 mL por minuto. Una vez que se agregan los primeros 40 mL de reactivo de Grignard, se agrega otra porción de 20 mL de acetato de metilo en solución de éter. Una vez que se agregan los segundos 40 mL de reactivo de Grignard, se agrega otra porción de 20 mL de acetato de metilo en solución de dietiléter. Una vez que se agregan los terceros 40 mL de reactivo de Grignard, se agrega otra porción de 20 mL de acetato de metilo en solución de éter. Una vez que se agregan los cuartos 40 mL de reactivo de Grignard, se agrega la última porción de 20 mL de acetato de metilo en solución de éter.
La mezcla se agita durante otros 15 minutos una vez que se completa la adición del reactivo de Grignard. Luego, la mezcla se vierte en una mezcla de 660 g de hielo y 60 mL de ácido sulfúrico concentrado con agitación rápida para disolver todos los sólidos. Las fases se separan, y la fase acuosa se extrae nuevamente con 50 mL de dietiléter. Los extractos combinados de éter se lavan con 15 mL de carbonato de sodio acuoso al 10%, 15 mL de salmuera y se secan en 30 gramos de sulfato de magnesio durante 1 hora con agitación. Luego se filtra la solución de éter. Se agregan tri-n-butilamina (14,3 mL, 60 mmol) y mesitileno (10 mL). Se retira la mayor parte de dietiléter por destilación a presión atmosférica usando una columna encamisada de 2,5 cm x 30 cm de Vigreux. El líquido restante se transfiere a un frasco de destilación más pequeño usando dos porciones de 10 ml_ de hexano para facilitar la transferencia. La destilación a presión atmosférica continúa a través de una columna encamisada de 2 cm x 20 cm de Vigreux. Se recolecta el líquido que se destila a 98 - 105 °C para obtener 14 g del compuesto del título como un líquido incoloro. 1H RMN (400 MHz, deuterocioroformo) delta 0.42 - 0.48 (m, 2 H), 0.74 -0.80 (m, 2 H), 1.45 (s, 3 H), 1.86 (br. s., 1 H).
Preparación 27: 2-fluoro-4-(1 -metil-1 H-imidazol-5-il)fenol A) 5-(3-fluoro-4-metoxifenil)-1-metil-1 H imidazol Se colocan 2-fluoro-4-bromo anisol (0,216 ml_, 1 ,63 mmol), tri(2-furil)fosfina (25,9 mg, 0, 108 mmol) y carbonato de potasio (300 mg, 2,17 mmol) en un vial para microondas y se disuelven en /V./V-dimetilformamida anhidra (4,8 ml_). La mezcla se desgasifica con una corriente de gas nitrógeno durante 10 minutos, se agregan 1-metilimidazol (0,087 mL, 1 ,1 mmol) y acetato de paladio (II) (12,4 mg, 0,054 mmol), y la mezcla se desgasifica durante 10 minutos más. El recipiente se coloca en un reactor de microondas a 140 °C durante 2 h. La mezcla se diluye con acetato de etilo, se filtra a través de Celite®, y el filtrado se concentra a presión reducida. El material crudo se purifica mediante cromatografía, que se eluye con un gradiente de 25 a 100% de acetato de etilo en heptano, luego de 0 a 10% de metanol en gradiente de diclorometano para obtener el compuesto del título como un aceite amarillo (210 mg). 1H RMN (500 MHz, deuterocioroformo) delta 3.57 (s, 3 H), 3.85 (s, 3 H), 6.95 - 6.98 (m, 2 H), 7.00 - 7.07 (m, 2 H), 7.42 (s, 1 H). El desplazamiento protónico a 7,42 indica el isómero de imidazol deseado en comparación con la literatura (Eur. J. Org. chem., 2008, 5436 y Eur. J. Org., 2006, 1379).
B) 2-fluoro-4-( 1 -metil-1 H-imidazol-5-il)fenol A una solución de 5-(3-fluoro-4-metoxifenil)-1 -metil-1 H imidazol (101 ,8 mg, 0,494 mmol) en diclorometano (2,0 mL ) se agrega una solución de bromuro de boro (III) (0,50 mL, solución 1 ,0M en heptano) a -30 °C. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 20 h. Luego, la mezcla se enfría a -30 °C, y se agrega metanol (2 mL) a la mezcla. La mezcla se concentra al vacío, y el residuo se disuelve en agua y se neutraliza con hidróxido de sodio 1 M. La solución se concentra para obtener el compuesto del título como un sólido amarillo (90 mg). Este compuesto se usa sin purificación adicional.
Preparación 28: 2-fluoro-4-(1 -metil-1 H-imidazol-2-il)fenol A) 2-(3-fluoro-4-metoxifenil)-1 -metil-1 H imidazol Se colocan 2-fluoro-4-bromoanisol (0,256 mL, 1 ,93 mmol) y yoduro de cobre (I) (375 mg, 1 ,93 mmol) en un vial para microondas y se disuelven en /V,/V-dimetilformamida (4,8 mL). La mezcla se desgasifica durante 10 minutos con una corriente de gas nitrógeno, se agregan 1-metilimidazol (0,078 mL, 0,96 mmol) y acetato de paladio (II) (11 mg, 0,048 mmol), y la mezcla se desgasifica durante otros 10 minutos. El recipiente se coloca en un reactor de microondas a 140 °C durante 2 h. La mezcla se diluye con acetato de etilo (3 mL), se vierte en una solución de cloruro de amonio acuoso saturado, se agita al aire libre durante 30 minutos y se extrae dos veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavan con agua, se secan en sulfato de sodio, se filtran, y el filtrado se concentra al vacío. El material crudo se purifica mediante cromatografía, que se eluye con una mezcla de gradiente de acetato de etilo en heptano (de 25 a 100% acetato de etilo/heptano, luego de 0 a 10% de metanol en diclorometano) para obtener 2- (3-fluoro-4-metoxifenil)-1-metil-1 H imidazol como un aceite amarillo (35,8 mg). 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 3.66 (s, 3 H), 3.88 (s, 3 H), 6.90 (s, 1 H), 6.96 (m 1 H), 7.10 (s, 1 H), 7.24 - 7.33 (m, 2 H). La RMN protónica indica el isómero de imidazol deseado en comparación con la RMN protónica de 5-(3-fluoro-4-metoxifenil)-1-metil-1 H imidazol (preparación 27) y la literatura Eur. J. Org. chem., 2008, 5436 y Eur. J. Org., 2006, 1379).
B) 2-fluoro-4-(1-metil-1 H-imidazol-2-il)fenol Se prepara 2-fluoro-4-(1-metil-1 H-imidazol-2-il)fenol de 2-(3-fluoro-4-metoxifenil)-1-metil-1 H imidazol de acuerdo con un procedimiento análogo al de la Preparación 27 (B) para obtener el compuesto del título como un sólido marrón (33,4 mg). El material crudo se usa sin purificación adicional.
Preparación 29: 2-fluoro-4-(metilsulfonil)-1 -(prop-1 -en-2-il)benceno A una solución de 1-bromo-2-fluoro-4-(metilsulfonil)benceno (199 mg, 0,790 mmol) y isopropeniltrifluoroborato de potasio (300 mg, 2,57 mmol) en 2-propanol (10 mL) se agregan secuencialmente el catalizador dicloruro de 1 ,1 '-bis-(difenilfosfino)-ferrocenpaladio (67 mg, 0,089 mmol) y trietilamina (0, 17 mL, 1 ,20 mmol). La reacción se calienta a 90 °C durante 15 h, y luego, la reacción se agita a temperatura ambiente durante 48 h. Se agregan agua y acetato de etilo, y se separan las capas. La capa acuosa se extrae con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinan, se lavan con salmuera y se secan en sulfato de sodio. La mezcla se filtra, y el filtrado se concentra a presión reducida. El residuo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice (10 a 100% de acetato de etilo en heptano) para obtener el compuesto del título como un sólido blanco (130 mg, 80%). 1H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta 2.17 (s, 3 H), 3.08 (s, 3 H), 5.29 - 5.43 (m, 2 H), 7.51 (t, J=7.56 Hz, 1 H), 7.64 (dd, J=9.88, 1.59 Hz, 1 H), 7.70 (dd, J=8.05, 1.71 Hz, 1 H).
Preparación 30: 4-hidroxi-2-metilbenzonitrilo Se agrega lentamente tricloruro de boro en diclorometano (61 ,2 ml_, 1 M) a diclorometano (93 ml_) y se enfría a -78 °C. A esto se agrega una solución de 4-metox¡-2-metilbenzonitrilo (3,00 g, 20,4 mmol) y yoduro de tetrabutilamonio (7,17 g, 61 ,2 mmol) en diclorometano (20 mL). La mezcla de reacción se agita a -78 °C durante 5 minutos. Luego, la mezcla de reacción se calienta gradualmente a temperatura ambiente y se agita durante 2 h. Se agrega lentamente una suspensión helada para inactivar la reacción. La reacción se agita durante 30 minutos, y se separan las capas. La capa acuosa se extrae con diclorometano (2x), y los extractos orgánicos combinados se hacen pasar a través de un cartucho de separación de fases y se concentran al vacío. La mezcla cruda se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con 0 a 60% de acetato de etilo en pentano para obtener el compuesto deseado como un sólido amarillo (1 ,85 g, 68%). 1 H RMN deuterometanol delta ppm 7.40 (d, 1 H), 6.80 (s, 1 H), 6.70 (d, 1 H), 2.40 (s, 3H); GCMS (método Cl) ES+= 133 [M] AP+ = 133 [M].
Preparación 31 A; 3-fluoro-4-hidroxi-N-metilbenzamida A) 4-(benciloxi)-3-fluorobenzoato de bencilo Se combinan ácido 3-fluoro-4-hidroxibenzoico (5,00 g, 32,06 mmol), bromuro de bencilo (8,22 ml_, 67,3 mmol) y carbonato de potasio (13,3 g, 96,24 mmol) en acetona y se calientan a reflujo durante 18 h. La solución se enfría a temperatura ambiente, los sólidos se filtran, y el filtrado se diluye con acetato de etilo. La fase orgánica se lava con solución de salmuera acuosa saturada, se seca en sulfato de magnesio, se filtra, y el filtrado se concentra a presión reducida para obtener el producto deseado 4-(bencilox¡)-3-fluorobenzoato de bencilo. 1 H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta ppm 5.22 (s, 2 H) 5.36 (s, 2 H) 7.03 (t, J=8.42 Hz, 1 H) 7.29 - 7.52 (m, 10 H) 7.76 - 7.89 (m, 2 H); LCMS (ES+)= 381.2 (M+45) B) Ácido 4-(benciloxi)-3-fluorobenzoico Se disuelve 4-(benciloxi)-3-fluorobenzoato de bencilo (1 1 ,6 g, 34,2 mmol) en tetrahidrofurano (50 mL) y metanol (50 mL). Se agrega hidróxido de sodio acuoso (70 mL, 1 M) a la mezcla de reacción y se agita durante 18 h. La reacción se enfría en un baño de hielo y se acidifica a pH 3 mediante la adición cuidadosa de una solución acuosa 1 M de ácido clorhídrico. Un sólido blanco precipita, se filtra y se seca durante la noche para obtener el producto deseado, ácido 4-(benciloxi)-3-fluorobenzoico, como un sólido blanco (7,6 g, 90%). 1 H RMN (500 MHz, deuterodimetilsulfóxido) delta ppm 3.32 (br. s., 1 H) 5.27 (s, 2 H) 7.34 - 7.39 (m, 2 H) 7.42 (t, J=7.44 Hz, 2 H) 7.45 - 7.50 (m, 2 H) 7.68 (dd, J=1 1.83, 2.07 Hz, 1 H) 7.75 (d, J=8.78 Hz, 1 H) C) 4-(benciloxi)-3-fluoro-N-metilbenzamida Se agrega cloruro de tionilo (2,7 mL, 37 mmol) a una solución de ácido 4- (benciloxi)-3-fluorobenzoico en dimetilformamida (0,048 mL, 0,617 mmol) y diclorometano (100 mL) a 0 °C, y la solución resultante se agita a temperatura ambiente durante 20 h. La reacción se concentra a presión reducida y se seca en alto vacío durante 2 h. El sólido amarillo resultante se disuelve en tetrahidrofurano (60 mL), se agrega una solución 2M de metilamina en tetrahidrofurano (35 mL), y la reacción se agita a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla de reacción se concentra a presión reducida hasta la mitad del volumen original, y precipita un sólido blanco. El sólido se filtra, se lava con agua y se seca en un horno al vacío durante la noche para obtener el producto deseado como un sólido blanco (6,00 g, 70%). 1 H RMN (500 MHz, deuterodimetilsulfóxido) delta ppm 2.76 (d, J=4.39 Hz, 3 H) 5.24 (s, 2 H) 7.30 - 7.38 (m, 2 H) 7.41 (t, J=7.32 Hz, 2 H) 7.45 - 7.50 (m, 2 H) 7.58 - 7.75 (m, 2 H) 8.37 (d, J=4.39 Hz, 1 H) D) 3-fluoro-4-hidroxi-N-metilbenzamida Se suspende 4-(benciloxi)-3-fluoro-N-metilbenzamida (1 ,03 g, 3,97 mmol) en etanol (20 mL) en una botella Parr. Se agrega paladio en carbono al 10% (80 mg) en alrededor de 1 ,5 mL de agua en una corriente constante de nitrógeno. La reacción se agita a 50 psí de atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 64 h. La mezcla de reacción se filtra cuidadosamente a través de una almohadilla de Celite® que se lava con una abundante cantidad de acetato de etilo. El filtrado se concentra a presión reducida para obtener el producto deseado (628 mg, 93%) como un sólido amarillo amarronado claro. 1 H RMN (500 MHz, deuterodoroformo) delta ppm 3.02 (d, J=4.88 Hz, 3 H) 7.05 (t, J=8.42 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=9.76 Hz, 1 H) 7.60 (dd, J=1 1.10, 2.07 Hz, 1 H) Preparación 31 B: 3-fluoro-4-hidroxi-N,N-dimetilbenzamida Se combinan ácido 3-fluoro-4-hidroxibenzoico (2,00 g, 12,8 mmol), clorhidrato de dimetilamina (4,28 g, 20,5 mmol), 1-hidroxi benzotriazol monohidrato (1 ,96 g, 12,8 mmol) y diisopropiletilamina (4,5 ml_, 26 mmol) en diclorometano. Se agrega clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (3,93 g, 20,5 mmol), y el recipiente de reacción se purga con nitrógeno, se tapa y se agita durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se diluye con diclorometano y ácido fosfórico 1 . Se filtra el precipitado que se formó, y la capa de diclorometano se lava con bicarbonato de sodio acuoso diluido y salmuera, se seca en sulfato de sodio, se filtra, y el filtrado se concentra a presión reducida. El residuo se purifica mediante cromatografía flash que se eluye con 65% de acetato de etilo en heptano para obtener el producto deseado (218 mg, 9%). LC/MS (ES+): 184.1 (M+1) Preparación 32: 3-hidroxi-4,4-dimetoxipiperidin-1-carboxilato de rer-butilo Se disuelve 4-oxo-1-piperidincarboxilato de ter-butilo (2,00 g, 10 mmol) en metanol (20 mL), y se enfría a 0 °C. Se agrega hidróxido de potasio en polvo (1 ,26 g, 22,1 mmol). Se disuelve yodo (2,8 g, 11 mmol) en metanol (25 mL), y se agrega por goteo a la reacción durante 45 minutos. Luego, la reacción se calienta lentamente a temperatura ambiente y se agita durante 16 h. Se concentra la reacción, y se agrega tolueno (50 mL). Los sólidos resultantes se filtran y se lavan con tolueno. El filtrado se concentra a presión reducida, y el residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 30% a 100% de acetato de etilo en heptano para obtener 3-hidroxi-4,4-dimetoxipiperidin-1-carboxilato de ter-butilo (1 ,89 g, 72%). 1 H RMN (deuterometanol, 400 MHz) delta ppm 4.06-4.00 (m, 1 H), 3.99-3.91 (m, 1 H), 3.80-3.73 (m, 1 H), 3.29 (s, 3H), 3.28 (s, 3H), 3.22-3.10 (br m, 1 H), 2.95-2.80 (br m, 1 H), 1.91 -1 .77 (m, 2H), 1 .50 (s, 9 H).
Preparación 33: 3-hidroxi-4-oxopiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo Se disuelve 3-hidroxi-4,4-dimetoxipiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo (6,70 g, 26 mmol) en acetona (135 mL), y se agrega ácido p-toluensulfónico (244 mg, 1 ,28 mmol). La reacción se agita a temperatura ambiente durante 16 h. Se concentra la mezcla, y el residuo resultante se disuelve en íer-butilmetiléter y se lava con solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado. La capa orgánica se seca en sulfato de sodio, se filtra, y el filtrado se concentra a presión reducida para obtener 3-hidroxi-4-oxopiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo como un aceite (4,67 g, 69%). GC/MS (método 1 ): R, = 4,95 min; MS (ESlpos): m/z = 159 [M-tBu]+.
Preparación 34: 4-hidrazino-3-hidroxipiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo Se disuelve 3-hidroxi-4-oxopiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo (5,50 g, 26 mmol) en metanol (120 mL) y se desgasifica con una corriente de nitrógeno en una botella Parr Shaker tapada. Se disuelve clorhidrato de hidrazina (1 ,44 mg, 21 mmol) eh agua (20 mL) y se agrega a la reacción. El frasco se enjuaga con 5 mL de agua, y también se agrega a la reacción. Se suspende catalizador de platino en carbono al 10% (500 mg) en agua y se agrega a la mezcla de reacción. La mezcla se agita a 50 psi de atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 16 h. La reacción se filtra a través de una almohadilla de Celite® que se lava con metanol. El filtrado se concentra a presión reducida, luego se diluye con heptanos y se concentra a presión reducida para obtener el producto deseado, 4-hidrazino-3-hidroxipiperidin-1-carboxilato de ter-butilo.
Preparación 35: 4-f5-amino-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1-¡n-3-hidroxipiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo Se combinan 4-hidrazino-3-hidroxipiperid¡n-1 -carboxilato de ter-butilo (5,30 g, 20 mmol) y etil(etoximet¡len)cianoacetato (3,42 g, 19,8 mmol) en etanol absoluto (170 mL). Luego, se agrega acetato de sodio trihidrato (10,90 g, 79,2 mmol), y la mezcla de reacción se agita a reflujo durante 4 h. La reacción se enfría a temperatura ambiente, se concentra a presión reducida, y el residuo resultante se diluye con agua y acetato de etilo. La capa orgánica se seca en sulfato de sodio, se filtra, y el filtrado se concentra a presión reducida. El aceite crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 10% a 100% de acetato de etilo en heptanos para obtener 4-[5-amino-4-(etoxicarbonil)-l H-pirazol-1 -il]-3-hidroxipiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo.
Preparación 36: 4-r5-amino-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -ill-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo Se disuelve 4-[5-amino-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -il]-3-hidroxipiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo (1 ,71 g, 4,82 mmol) en diclorometano (50 mL) y se enfría a -78 °C. Se agrega por goteo trifluoruro de dietilaminosulfuro (0,710 mL, 0,58 mmol), y luego se calienta a 0 °C durante 25 minutos. La solución de reacción se enfría a -78 "C, y se agrega cuidadosamente metanol (10 mL). La reacción se concentra a presión reducida, y el residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 10% a 100% de acetato de etilo en heptano para obtener 4-[5-amino-4-(etoxícarbonil)-1 H-pirazol-1 -il]-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo.
Preparación 37: 4-f5-bromo-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -ill-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo Se disuelve 4-[5-amino-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -il]-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo (710 mg, 1 ,99 mmol) en acetonitrilo (25 mL). Se agrega bromuro de cobre (II) (539 mg, 2,39 mmol), y la reacción se calienta a 60 °C. Se agrega por goteo nitrilo de ter-butilo (0,315 mL, 2,9 mmol), y la mezcla se calienta a 65 °C durante 15 minutos. La reacción se enfría a temperatura ambiente, se vierte en ácido clorhídrico frío 1 N y se extrae con acetato de etilo (2x). Los extractos orgánicos combinados se lavan con bicarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera, se secan en sulfato de sodio, se filtran, y el filtrado se concentra a presión reducida. El residuo crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 10% a 50% de acetato de etilo en heptanos para obtener 4-[5-bromo-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -il]-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo (320 mg, 38%). 1 H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta ppm 1.37 (t, 3 H) 1.49 (s, 9 H) 1.98 (d, J=13.42 Hz, 1 H) 2.12 - 2.26 (m, 1 H) 2.90 (br. s., 2 H) 4.18 (br. s., 1 H) 4.33 (q, J=7.24 Hz, 2 H) 4.44 - 4.70 (m, 2 H) 4.85 - 5.05 (m, 1 H) 8.04 (s, 1 H) Preparación 38: 5-ciano-1 -(3-fluoropiperidin-4-il)-1 H-pirazol-4-carboxilato de etilo Se combinan 4-[5-bromo-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -il]-3-f luoropiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo (185 mg, 0,31 mmol), 1 ,1 'bis (difenilfosfino)ferroceno (18 mg, 0,032 mmol), polvo de zinc (18 mg, 0,27 mmol), cianuro de zinc (39,1 mg, 0,33 mmol) y negro de paladio al 10% (19,2 mg, 0,021 mmol) en dimetilacetamida (3 ml_) en un vial para microondas. La mezcla de reacción se desgasifica con nitrógeno y se calienta a 170 °C durante 4,5 h. La mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y se diluye con acetato de etilo. La reacción se filtra a través de una almohadilla de Celite®, y el filtrado se diluye con agua y se extrae con acetato de etilo (2x). Los extractos orgánicos combinados se lavan con agua, luego con salmuera, se secan en sulfato de sodio, se filtran, y el filtrado se concentra a presión reducida. El residuo crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 10% a 100% de acetato de etilo en heptanos para obtener 5-ciano-1-(3-fluoropiperidin-4-il)-1 H-pirazol-4-carboxilato de etilo (80 mg, 98%).
Preparación 39: 4-f5-ciano-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -ill-3-fluorop¡per¡d¡n-1 -carboxilato de ter-butilo Se disuelve 5-ciano-1 -(3-fluorop¡peridin-4-il)-1 H-pirazol-4-carboxilato de etilo (60 mg, 0,22 mmol) en tetrahidrofurano (3 mL), y se agrega trietilamina (40 uL, 0,27 mmol). Luego se agrega carbonato de di-ter-butilo (50 mg, 0,225 mmol), y la reacción se agita a temperatura ambiente en nitrógeno durante 3 h. La reacción se concentra a presión reducida, y el residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 10% a 100% de acetato de etilo en heptano para obtener 4-[5-ciano-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1-il]-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de ter-butilo como un aceite (52 mg, 63%).
Preparación 40: Ácido 1-n-(fer-butoxicarbonil)-3-fluoropiperidin-4-in-5-ciano-1 H-pirazol-4-carboxílico Se disuelve 4-[5-ciano-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -il]-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de ter-butilo (80 mg, 0,22 mmol) en tetrahidrofurano (2,5 mL), agua (1 ,5 mL) y metanol (0,4 mL). La solución se enfría a 0 °C, y se agrega hidróxido de litio monohidrato (19 mg, 0,436 mmol). La reacción se calienta lentamente a temperatura ambiente durante 2,5 h. Se concentra la mezcla de reacción; el residuo se disuelve en agua y se extrae con acetato de etilo y metilterbutiléter . La capa orgánica se extrae con agua. Los extractos acuosos combinados se acidifican con bisulfato de sodio acuoso 1 N a pH 2. La solución ácida se extrae con acetato de etilo (3x), y los extractos se lavan con salmuera, se secan en sulfato de sodio, se filtran, y el filtrado se concentra a presión reducida para obtener ácido 1-[1-(fer-butoxicarbonil)-3-fluoropiperidin-4-il]-5-ciano-1 H-pirazol-4-carboxílico como un sólido blanco.
Preparación 41 : 4-í5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1 -ill-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo Se disuelve cloruro cianúrico recién cristalizado (de heptanos) (78 mg, 0,414 mmol) en dimetoxietano (2 mL), y se agrega 4-metil-morfolina (0,020 mL, 0,215 mmol). A esta solución gomosa se agrega ácido 1-[1 -(ter-butoxicarbonil)-3-fluoropiperidin-4-il]-5-ciano-1 H-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,21 mmol) que se disuelve en dimetoxietano (2 mL). La reacción se calienta a 60°C en nitrógeno durante 3 h. La reacción se enfría a temperatura ambiente y se filtra a través de una almohadilla de Celite® que se lava con dimetoxietano. El filtrado se enfría a 0 °C, y se agrega lentamente una solución de borohidruro de sodio (17 mg, 0,474 mmol) disuelta en agua (0,4 mL) (por goteo). Una vez que se completa la adición, la reacción se calienta a temperatura ambiente durante 2,5 h. La solución de reacción se diluye adicionalmente con agua y se acidifica a pH 2,5 usando bisulfato de sodio 1 M. La capa acuosa se extrae con acetato de etilo (2x), y las capas orgánicas combinadas se secan en sulfato de sodio, se filtran, y el filtrado se concentra a presión reducida. El residuo crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 10% a 100% de acetato de etilo en heptanos para obtener 4-[5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1 -il]-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo como un aceite (28 mg, 42%).
Preparación 42: 4-(5-ciano-4-{f(metilsulfonil)oxnmetil)-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo Se disuelve 4-[5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1 -il]-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo (28 mg, 0,086 mmol) en diclorometano (3 mL). Se agrega trietilamina (0,036 mL, 0,258 mmol), y la mezcla se enfría a 0 °C. Se agrega por goteo anhídrido metansulfónico (20 mg, 0,112 mmol), y se calienta lentamente a temperatura ambiente durante 2 h. Se agregan diclorometano y bicarbonato de sodio acuoso saturado a la solución de reacción, y se separa la solución bifásica. La capa acuosa se extrae con diclorometano (2x), y los extractos orgánicos combinados se hacen pasar a través de un tapón de algodón. El filtrado se concentra a presión reducida para obtener 4-(5-ciano-4-{[(metilsulfonil)oxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo como un aceite (33 mg, 95%). 1 H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta ppm 1.25 - 1.30 (m, 2 H) 1.50 (s, 9 H) 2.01 - 2.06 (m, 1 H) 2.75 - 2.85 (m, 2 H) 3.08 (s, 3 H) 4.64 - 4.74 (m, 1 H) 4.79 - 4.98 (m, 2 H) 5.26 (s, 2 H) 7.75 (s, 1 H) Preparación 43: Isómeros de 3-fluoro-4-hidroxipiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo (B y C) Los detalles del experimento se describen en detalle a continuación, Esquema 4.
Esquema 4 Etapa A) 4-r(trirnetils¡lil)ox¡1-3,6-dihidropiridin-1 (2H)-carboxilato de ter-butilo A una solución de /V-ter-butoxicarbonil-4-piperidona (30,0 g, 0, 15 mol) en N,N-dimetilformamida seca (300 mL) a temperatura ambiente, se agrega cloruro de trimetilsililo (22,9 mL, 0, 18 mol) y trietilamina (50,4 mL, 0,36 mol) sucesivamente mediante embudos de adición. La solución resultante se calienta a 80 °C durante la noche y luego se enfría a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluye con agua y heptano. Las capas se separan, y la capa acuosa se extrae con heptano. Las capas combinadas de heptano se lavan secuencialmente con agua y salmuera, y luego se secan en sulfato de magnesio. La mezcla se filtra, y el filtrado se concentra a presión reducida para obtener el producto crudo como un aceite amarillo. El aceite se purifica haciéndolo pasar a través de un tapón de gel de sílice, que se eluye con 9: 1 de heptano/acetato de etilo para obtener el compuesto del título como un aceite incoloro (33,6 g, 82%). 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 4.78 (br s, 1 H), 3.86 (br s, 2H), 3.51 (t, 2H), 2.09 (br s, 2H), 1.45 (s, 9H), 0.18 (s, 9H).
Etapa B) 3-fluoro-4-oxopiperidin-1-carboxilato de ter-butilo A una solución agitada de 4-[(trimetilsilil)oxi]-3,6-dihidropiridin-1 (2H)-carboxilato de ter-butilo (28,8 g, 0,1 1 mol) en acetonitrilo (300 mL) a temperatura ambiente, se agrega Selectfluor™ (41 ,4 g, 0,12 mol). La suspensión resultante de color amarillo pálido se agita a temperatura ambiente durante 1 ,5 h. Se agregan bicarbonato de sodio acuoso saturado (300 mL) y acetato de etilo (300 mL), y se separan las capas. La capa acuosa se extrae dos veces con acetato de etilo, todas las capas acuosas se combinan y se lavan secuencialmente con bicarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera, y luego se secan en sulfato de magnesio. La mezcla se filtra, y el filtrado se concentra a presión reducida para obtener el producto crudo como un aceite amarillo pálido. La purificación de este material mediante cromatografía de columna en gel de sílice repetida con gradiente de he pta no/acetato de etilo (2:1 a 1 :1 ) produce el compuesto del título como un sólido blanco (15,5 g, 67%). H RMN (400 MHz, deuterocloroformo): delta 4.88 (dd, 0.5 H), 4.77 (dd, 0.5H), 4.47 (br s, 1 H), 4.17 (ddd, 1 H), 3.25 (br s, 1 H), 3.23 (ddd, 1 H), 2.58 (m, 1 H), 2.51 (m, 1 H), 1.49 (8, 9H).
Alternativamente, la Etapa B se puede realizar de la siguiente manera, aislando el hidrato de la cetona.
A una solución agitada de 4-[(trimetilsilil)oxi]-3,6-dihidropiridin-1 (2H)-carboxilato de ter-butilo (41 ,3 g, 0,15 mol) en acetonitrilo (500 mL) a temperatura ambiente, se agrega Selectfluor™ (56,9 g, 0, 16 mol). La suspensión resultante de color amarillo pálido se agita a temperatura ambiente durante 4 h y 10 minutos. Se agregan bicarbonato de sodio acuoso saturado y acetato de etilo, y se separan las capas. La capa acuosa se extrae dos veces con acetato de etilo, todas las capas acuosas se combinan y se lavan secuencialmente con bicarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera, y luego se secan en sulfato de magnesio. La mezcla se filtra, y el filtrado se concentra a presión reducida para obtener 3-fluoro-4-oxopiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo crudo como un sólido blanco. El 3-fluoro-4-oxopiperidin-1-carboxilato de ter-butilo crudo se suspende en tetrahidrofurano (120 mL), y se agrega agua (120 mL). La solución resultante se agita a temperatura ambiente durante 5,5 h y luego se concentra a presión reducida. El residuo se seca en alto vacío, se transfiere a un frasco Erlenmeyer y se suspende en diclorometano (250 mL). La suspensión resultante se agita durante 5 minutos, y los sólidos se recolectan mediante filtración con un embudo de vidrio aglomerado. La torta de filtro resultante se lava intensamente con diclorometano (200 mL), una mezcla 1 :1 de diclorometano (200 mL) y heptano (100 mL). Luego, el sólido se seca en alto vacío para obtener 3-fluoro-4,4-dihidroxipiperidin-1-carboxilato de ter-butilo (26,4 g). 1 H RMN (500 MHz, deutero dimetil sulfóxido) delta 1.38 (s, 9 H), 1.49-1.52 (m, 1 H), 1.63-1.68 (m, 1 H), 2.82 -3.20 (m, 2 H) 3.75 (br, 1 H), 3.97 (br, 1 H), 4.12 (d, J = 45, 1 H), 5.92 (s, 1 H), 5.97 (S, 1 H).
Etapa C) Isómeros de (/?*)-ter-butil-3-(S)-fluoro-4-(ff)-h¡droxipiperidin-1 -carboxilato (racémico) A una solución de 3-fluoro-4-oxopiperidin-1-carboxilato de ter-butilo (15,5 g, 71 ,3 mmol) en metanol (150 mL) a 0 °C se agrega borohidruro de sodio (3,51 g, 93,7 mmol). La mezcla resultante se agita a 0 °C durante 2 h y luego se calienta a temperatura ambiente. Se agrega cloruro de amonio acuoso saturado (200 mL), y la mezcla se extrae tres veces con acetato de etilo. Los extractos combinados se lavan con salmuera y se secan en sulfato de magnesio. Se filtra la mezcla, y el filtrado se concentra a presión reducida para obtener la mezcla de producto crudo que se purifica mediante cromatografía de columna en gel de sílice, que se eluye con heptano-acetato de etilo (3:2 - 1 : 1 ) para obtener el primer producto de elución, (3, 4-frans)-3-fluoro-4-hidroxipiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo (compuesto C, Esquema 4) (3,81 g, 24%), como un aceite amarillo pálido que se solidifica en reposo hasta obtener un sólido blanco. 1 H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 4.35 (ddd, 0.5 H), 4.18 (ddd, 0.5 H), 4.15 (br s, 1 H), 3.89-3.74 (m, 2H), 2.97 (br s, 1 H), 2.93 (ddd, 1 H), 2.47 (s, 1 H), 2.05-1.92 (m, 1 H), 1.58-1.46 (m, 1 H), 1.44 (s, 9H).
El segundo compuesto de elución, (3,4-c/s)-3-fluoro-4-hidroxi-piper¡din-1-carboxilato de ter-butilo (compuesto B, Esquema 4) (10,57 g, 68%) se aisla como un sólido blanco. 1 H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 4.69 - 4.65 (m, 0.5H), 4.53-4.49 (m, 0.5H), 3.92 - 3.86 (m, 2H), 3.69 (br s, 1 H), 3.39 (br s, 1 H), 3.16 (br s, 1 H), 2.13 (s, 1 H), 1.88 - 1.73 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).
Alternativamente, la Etapa C se puede realizar a partir del 3-fluoro-4,4-dihidroxipiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo hidrato (Etapa 2) de la siguiente manera.
A una solución agitada de 3-fluoro-4,4-dihidroxipiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo (20,0 g, 85 mmol) en tetrahidrofurano (500 mL) a -35 °C se agrega por goteo una solución de L-Selectride® en tetrahidrofurano (170 mL, 1 M, 170 mmol) durante 30 minutos. La mezcla de reacción se calienta a 0 °C durante 1 ,5 h. La mezcla de reacción se inactiva con cloruro de amonio acuoso saturado (150 mL) y se agita vigorosamente durante 15 minutos. A esta mezcla a 0 °C se agrega amortiguador de fosfato a pH 7 (150 mL), seguido de la adición por goteo de una solución de peróxido de hidrógeno al 35% (150 mL). La mezcla resultante se agita durante 30 minutos y se diluye con acetato de etilo. La capa orgánica se separa y se agregan secuencialmente agua, tiosulfato de sodio acuoso saturado y salmuera. La capa orgánica se seca en sulfato de magnesio anhidro, se filtra, y el filtrado se concentra a presión reducida para obtener la mezcla de producto crudo que se purifica mediante cromatografía de columna en gel de sílice [columna combiflash ISCO 330 g] que se eluye con heptano-acetato de etilo (de 10 a 60% de gradiente) para obtener (3,4-c/'s)-3-fluoro-4-hidroxipiperid¡n-1-carboxilato de ter-butilo (13,9 g).
Etapa D) Enantiómeros de (3,4-c/'s)-3-fluoro-4-hidroxi-piperídin-1 -carboxilato de ter-butilo Se purifica 1 gramo de muestra de (3,4-c/s)-3-fluoro-4-hidroxi-piperidin-1-carboxilato de ter-butilo racémico en sus enantiómeros mediante cromatografía preparativa de líquidos de alto rendimiento mediante el uso de una columna Chiralpak AD-H (10 x 250 mm) con una fase móvil de 90: 10 de dióxido de carbono y etanol, respectivamente, a una velocidad de flujo de 10 mUminuto. La longitud de onda para controlar la separación es de 210 nM. La pureza analítica de cada enantiómero se determina mediante cromatografía analítica de alta presión usando una columna Chiralpak AD-H (4,6 mm x 25 cm) con una fase móvil ¡socrática de 90:10 de dióxido de carbono y etanol, respectivamente, a una velocidad de flujo de 2,5 mUminuto. La longitud de onda para controlar los picos es de 210 nm. Se obtienen los siguientes dos isómeros: Compuesto E, Esquema 4) 3-fluoro-4-hidrox¡pipehdin-1-carbox¡lato de (3SAR)-ter-butilo, enantiómero 1 (363 mg): Rf = 2,67 min (100% ee) (rotación óptica en diclorometano = +21 ,2 °) y Compuesto D, Esquema 4) 3-fluoro-4-hidroxipiperidin-1 -carboxilato de (3RAS)-ter-butilo. enantiómero 2 (403 mg): R, = 2,99 min (88% ee).
La estereoquímica absoluta de los isómeros de (3,4-c/s)-3-fluoro-4-hidroxi-piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo se determina mediante la obtención de una sal de ácido (1 S)-(+)-canforsulfónico de 5-(6-((3S,4R)-3-fluoropiperidin-4-iloxi)-5-metilpirimidin-4-il)-1 -metil-1 ,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol (véase más adelante la preparación por analogía en forma racémica), preparado usando el enantiómero 1 anterior.
Preparación de 5-(6-(r(3,4-c/5)-3-fluoropiperidin-4-inoxi -5-metilpirimidin-4-il)-1 -metil-1 ,4,5,6-tetrahidropirrolor3,4-c1pirazol (racémico) A. Preparación de 5-(6-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-1 -metil-1 ,4,5.6-tetrahidropirrolo[3,4-clpirazol Se suspenden sal de bis-clorhidrato de 1-metil-1 ,4,5,6-tetrahidrop¡rrolo[3,4-c]p¡razol (2,00 g, 10,2 mmol) y 4,6-dicloro-5-metilpirimidina (1 ,66 g, 10,2 mmol) en tetrahidrofurano (51 mL) a temperatura ambiente. A esto se agrega trietilamina (4,41 mL, 31 ,6 mmol), lo cual genera turbieza en la mezcla y produce un sólido marrón que se adhiere a las paredes del frasco. Esta mezcla se agita a temperatura ambiente durante 4 h y luego se calienta a 50 °C durante otras 19 h. La mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y se diluye con agua (100 mL). Esta mezcla se extrae con acetato de etilo (3 x 100 mL). Los extractos orgánicos se agrupan, se lavan con salmuera, se secan en sulfato de sodio y se filtran. El filtrado se reduce hasta secarse al vacío para obtener el compuesto del título como un sólido marrón claro (1 ,95 g, 78%), que se usa en la siguiente etapa sin purificación adicional.
H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta 2.54 (s, 3 H) 3.88 (s, 3 H) 4.90 (app. d, J=3.66 Hz, 4 H) 7.28 (s, 1 H) 8.29 (s, 1 H).
B. Preparación de (3,4-c s)-3-fluoro-4-{f5-metil-6-(1-metil-4,6-dihidropirrolor3,4-clpirazol-5(1 H)-il)pirim¡din-4-il1oxi>piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo (racémico) Se disuelve una mezcla de (3,4-c/s)-3-fluoro-4-hidroxipiperidin-1-carboxilato de ter-butilo (1 ,67 g, 7,62 mmol) y 5-(6-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-metil-1 , 4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol preparado anteriormente (900 mg, 3,60 mmol) en 1 ,4- dioxano (20 mL), y se calienta a 105 °C. Después de calentar durante 10 minutos, todos los materiales se absorben en la solución, y se agrega rápidamente bis(trimetils¡lil)amida sódica (4,3 mL, 4,3 mmol, 1 M en tolueno) a la mezcla, lo cual da por resultado una mezcla amarillo turbio que luego se agita durante 2 h a 105 °C. Luego, la reacción se enfría a temperatura ambiente y se inactiva mediante la adición de un volumen igual de mezcla de agua y solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado. La mezcla se extrae con acetato de etilo (3 x 15 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera, se secan en sulfato de sodio y se filtran. El filtrado se concentra al vacío para obtener un residuo amarillo que se purifica mediante cromatografía de columna en gel de sílice, que se eluye con 60 a 100% de acetato de etilo en heptano. Se usa una mezcla del compuesto del título, y se aisla el 5-(6-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-1 -metil-1 , 4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pírazol de inicio como un sólido blanco (1 ,20 g) que se usa sin purificación adicional en reacciones posteriores.
Mediante HPLC se purifica un lote de (3,4-c s)-3-fluoro-4-{[5-metil-6-(1 -metil-4,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-5(1 H)-il)pirimidin-4-il]oxi}piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo crudo de una reacción separada, ejecutada en las mismas condiciones. La muestra cruda (9,5 mg) se disuelve en sulfóxido de dimetilo (1 mL) y se purifica mediante HPLC preparativa de fase inversa en una columna Waters XBridge Ci8 de 19 x 100 mm, 0,005 mm, que se eluye con un gradiente lineal de 80% agua /acetonitrilo (0,03% de modificador de hidróxido de amonio) a 0% agua/acetonitrilo en 8,5 minutos, seguido de un período de 1 ,5 minutos con 0% de agua/acetonitrilo; velocidad de flujo: 25 mL/minuto. De esta manera, se obtiene el compuesto del título (5 mg). LCMS analítica: tiempo de retención 2,81 minutos (Waters XBridge C18 4,6 x 50 mm, columna de 0,005 mm; gradiente lineal de 90% agua/acetonitrilo a 5% agua/acetonitrilo durante 4,0 minutos, seguido de un período de 1 minuto con 5% agua/acetonitrilo; 0,03% de modificador de hidróxido de amonio; velocidad de flujo: 2,0 mL/minuto); LC S (ES+) 433,2 (M+1).
C. Preparación de 5-(6-{f(3,4-c/'s)-3-fluoropiperidin-4-illoxi)-5-metilpirimidin-4-il)-1-metil-1 ,4,5,6-tetrahidropirrolo[3.4-clpirazol (racémico) Se disuelve (3,4-c/s)-3-fluoro-4-{[5-metil-6-(1-metil-4,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol- 5(1 H)-il)pirimidin-4-il]oxi}piperidin-1-carboxilato de fer-butilo crudo (1 ,20 g) preparado anteriormente en diclorometano (12 mL), y a esta solución se agrega ácido trifluoroacético (5 mL). La reacción se agita a temperatura ambiente durante 1 hora. El solvente se retira al vacío, y el residuo se disuelve en agua (50 mL) y solución de ácido clorhídrico acuoso 1 N (10 mL). La mezcla se extrae con diclorometano (10 x 30 mL). La capa acuosa se lleva a pH 12 mediante la adición de solución de hidróxido de sodio acuoso 1N (20 mL) y se extrae tres veces con diclorometano (40 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera, se secan en sulfato de sodio y se filtran. El filtrado se concentra a presión reducida para obtener 5-(6-{[(3,4-c/s)-3-fluoropiperidin-4-il]oxi}-5-metilpirimidin-4-il)-1-metil-1 ,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol (0,72 g, 60% en dos etapas) como un sólido blanco que se usa sin purificación adicional. 1H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta 1.84 - 2.08 (m, 2 H) 2.33 (s, 3 H) 2.69 - 2.84 (m, 1 H) 2.83 - 3.01 (m, 1 H) 3.16 (d, J=13.66 Hz, 1 H) 3.27 - 3.44 (m, 1 H) 3.86 (s, 3 H) 4.78-4.91 (m, 1 H) 4.86 (d, J=1.95 Hz, 2 H) 4.88 (d, J=1.95 Hz, 2 H) 5.21 - 5.32 (m, 1 H) 7.26 (s, 1 H) 8.18 (s, 1 H); LCMS (ES+) 333.4 (M+1).
Nota: El número de ejemplo comienza en 11.
Ejemplo 11 : 4-f5-ciano-4-f(2.4-difluorofenoxi)met¡n-1H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo Se coloca 4-(5-ciano-4-((metilsulfoniloxi)metil)-1 H-pirazol-1-¡l)piperid¡n-1 -carboxilato de isopropilo (Preparación 10) (166,5 mg, 0,449 mmol), 2,4-difluorofenol (0,052 ml_, 0,539 mmol) y carbonato de cesio (293 mg, 0,898 mmol ) en un vial para microondas, se disuelve en acetonitrilo (3 ml_) y se calienta en un reactor de mícroondas a 1 10 °C durante 20 minutos. La mezcla se enfría a temperatura ambiente, se concentra al vacío, se diluye con solución de hidróxido de sodio 1 N y se extrae tres veces con diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera, se secan en sulfato de sodio, se filtran, y el filtrado se concentra al vacío. El material crudo se purifica mediante HPLC preparativa de fase inversa en una columna Waters Atlantis Ci8 de 4,6 x 50 mm, 0,005 mm, que se eluye con un gradiente de agua en acetonitrilo (0,05% de modificador de ácido trifluoroacético) para obtener 4-{5-ciano-4-[(2,4-difluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de isopropilo. LCMS analítica, tiempo de retención: 3,62 minutos (Waters Atlantis Cíe 4,6 x 50 mm, 0,005 mm; gradiente lineal de 95% agua/acetonitrilo a 5% agua/acetonitrilo durante 4,0 min; 0,05% de modificador de ácido trifluoroacético; velocidad de flujo 2,0 mlJminuto); LCMS (ES +): 405.18 (M + H).
Ejemplo 12: 4-(5-ciano-4-r(2-metilfenoxi)metin-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de isopropilo A una solución agitada de orto-cresol (21 mg, 0, 19 mmol) y 4-(5-ciano-4-((metilsulfoniloxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (Preparación 10) (60 mg, 0,16 mmol) en acetonitrilo (1 ,6 ml_) se agrega carbonato de cesio (106 mg, 0,32 mmol). La mezcla se calienta a reflujo durante 15 h. Después de enfriarlo a temperatura ambiente, el material crudo se concentra hasta secarse al vacío, y el residuo se absorbe en agua y se extrae 3 veces con acetato de etilo (20 ml_ cada extracción). Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera, se secan en sulfato de sodio, se filtran, y el filtrado se concentra hasta secarse al vacío para obtener un residuo tostado (0,065 g, 100%). La muestra cruda se disuelve en sulfóxido de dimetilo (1 mL) y se purifica mediante HPLC preparativa de fase inversa en una columna Waters Sunfire C18 de 19 x 100 mm, 0,005 mm, que se eluye con un gradiente lineal de 80% agua/acetonitrilo a 0% agua/acetonitrilo en 8,5 minutos, seguido de un período de 1 ,5 minutos con 0% agua/acetonitrilo (0,05% de modificador de ácido trifluoroacético); velocidad de flujo: 25 mL/minuto. LCMS analítica: tiempo de retención 3,82 minutos (Water Atlantis Cíe 4,6 x 50 mm, columna de 0,005 mm; gradiente lineal de 95% agua/acetonitrilo a 5% agua/acetonitrilo durante 4,0 minutos, seguido de un período de 1 minuto con 5% agua/acetonitrilo; 0,05% de modificador de ácido trifluoroacético; velocidad de flujo: 2,0 mL/minuto); LCMS (ES+) 383,2 (M+1).
Ejemplo 13: 4-{5-ciano-4-f(2,5-difluorofenoxi)met¡n-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo A) 4-(5-ciano-4-((2,5-difluorofenoxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de ter-butilo A una solución agitada de 2,5-difluorofenol (54 mg, 0,39 mmol) y 4-(5-ciano-4-((metilsulfoniloxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de ter-butilo (Preparación 16) (126 mg, 0,33 mmol) en 3 mL de acetonitrilo se agrega carbonato de cesio (214 mg, 0,66 mmol). La mezcla se calienta a reflujo durante 15 h. La mezcla se enfría a temperatura ambiente y se diluye con acetato de etilo y agua. Las capas se separan, y la fase acuosa se extrae con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavan con salmuera, se secan en sulfato de magnesio, se filtran, y el filtrado se concentra al vacío para obtener 4-(5-ciano-4-((2,5-difluorofenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo que se usa en la siguiente etapa sin purificación adicional.
B) 4-((2,5-difluorofenoxi)metil)-1 -(piperidin-4-il)-1 H-pirazol-5-carbonitrilo A una solución de 4-(5-ciano-4-((2,5-difluorofenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de fer-butilo (137 mg, 0,33 mmol) en 5 mL de diclorometano, se agregan 0,82 mL de ácido clorhídrico (4M en 1 ,4-dioxano). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 2 h antes de concentrar la mezcla al vacío para obtener 4-((2,5-difluorofenoxi)metil)-1-(piperidin-4-il)-1 H-pírazol-5-carbonitrilo que se usa en la siguiente etapa sin purificación.
C) 4-(5-ciano-4-f(2,5-difluorofenoxi)metill-1 H-pirazol-1 -il>piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo A una solución agitada de 4-((2,5-difluorofenoxi)metil)-1-(piper¡dín-4-il)-1 H-pirazol-5-carbonitrilo (104 mg, 0,33 mmol) en 3,3 mL de diclorometano, se agrega trietilamina (0,18 ml_, 1 ,3 mmol) seguido de carbonato de 1 -metilciclopropil 4-nitrofenilo (véase Preparación 26 y WO09105717) (171 mg, 0,72 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante de color amarillo intenso se agita durante 15 h en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se diluye con diclorometano y agua. Las capas se separan, y la fase acuosa se extrae con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se lavan con bicarbonato de sodio acuoso saturado, salmuera, se secan en sulfato de magnesio, se filtran, y el filtrado se concentra al vacío para obtener 225 mg de material crudo. Una parte (45 mg) de este material se disuelve en sulfóxido de dimetilo (0,9 mL) y se purifica mediante HPLC preparativa de fase inversa en una columna Waters XBridge Cíe 19 x 100 mm, 0,005 de elución de columna con un gradiente de agua en acetonitrilo (0,03% de modificador de hidróxido de amonio). LCMS analítica: tiempo de retención 3,60 minutos (Atlantis C18 4,6 x 50 mm, columna de 5 micrómetros; gradiente lineal de 95% agua/acetonitrilo a 5% agua/acetonitrilo durante 4 minutos; 0,05% de modificador trifluoroacético; velocidad de flujo 2,0 mL/minuto; LCMS (ES+): 417.1 (M+H).
Ejemplo 14: 4 5-ciano-4-r(2,3-difluorofenoxi)metin-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo El compuesto del título se prepara con 2,3-difluorofenol disponible en el comercio siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 13. El material crudo (49 mg) se disuelve en sulfóxido de dimetilo (0,9 mL) y se purifica mediante HPLC preparativa de fase inversa en una columna Waters XBridge C18 19 x 100 mm, 0,005 de elución de columna con un gradiente de agua en acetonitrilo (0,03% de modificador de hidróxido de amonio). LCMS analítica: tiempo de retención 3,62 minutos (Atlantis C18 4,6 x 50 mm, columna de 5 micrómetros; gradiente lineal de 95% agua/acetonitrilo a 5% agua/acetonitrilo durante 4 minutos; 0,05% de modificador trifluoroacetico; velocidad de flujo 2,0 mIJminuto; LCMS (ES+): 417.2 (M+H).
Ejemplo 15: 4-(4-[(4-carbamoil-2-fluorofenoxi)metill-5-ciano-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de 1-metilciclopropilo A) 4-(4-((4-carbamoil-2-fluorofenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de íer-butilo A una solución agitada de 4-(5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de íer-butilo (Preparación 15) (200 mg, 0,65 mmol), 3-fluoro-4-hidroxibenzamida (Preparación 23) (100 mg, 0,64 mmol) y trifenilfosfina (188 mg, 0,72 mmol) en 3 ml_ de 1 ,4-dioxano, se agrega por goteo azodicarboxilato de dietilo (0,11 ml_, 0,69 mmol). La mezcla resultante se agita durante la noche a temperatura ambiente antes de que se concentre la mezcla al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 30 a 70% de acetato de etilo en heptano para obtener 4-(4-((4-carbamoil-2-fluorofenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de íer-butilo como un sólido blanco (215 mg).
B) 4-((5-ciano-1 -f piperidin-4-il)-1 H-p¡razol-4-iQmetoxi)-3-fluorobenzamida A una solución agitada de 4-(4-((4-carbamoil-2-fluorofenoxí)metil)-5-ciano-1 H-ptrazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de íer-butilo (215 mg, 0,48 mmol) en 2 mL de diclorometano, se agrega 1 mL de ácido trifluoroacético a temperatura ambiente. Después de 1 hora, la solución se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con una mezcla de gradiente de 1 a 15% de metanol en diclorometano, que contiene 2% de amoníaco acuoso) para obtener 4-((5-cíano-1-(piperidin-4-il)-1 H-pirazol-4-il)metoxi)-3-fluorobenzamida como un sólido blanco (150 mg). C) 4-(4-r(4-carbamo¡l-2-fluorofenoxi)metill-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il>piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo A una solución agitada de 4-((5-ciano-1-(piperidin-4-il)-1 H-pirazol-4-il)metoxi)-3-fluorobenzamida (40 mg, 0,12 mmol) en 1 mL de diclorometano se agrega trietilamina (0,036 mL, 0,26 mmol), seguido de carbonato de 1-metilciclopropil 4-nitrofenilo (Preparación 26 y WO09105717) (60 mg, 0,26 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante de color amarillo intenso se agita durante 2 h en una atmósfera de nitrógeno a 65 °C. La reacción se enfría a temperatura ambiente, se diluye con agua y se extrae dos veces con diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se lavan con bicarbonato de sodio saturado, se secan en sulfato de sodio, se filtran, y el filtrado se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 40 a 90% de acetato de etilo en heptano para obtener 4-{4-[(4-carbamoil-2-fluorofenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo como un sólido blanco (34 mg). 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 0.59 - 0.67 (m, 2 H), 0.83 - 0.92 (m, 2 H), 1.54 (s, 3 H), 2.02 (d, J=4.10 Hz, 2 H), 2.04 - 2.22 (m, 2 H), 2.91 (br. s., 2 H), 4.1 1 - 4.43 (m, 2 H), 4.44 - 4.55 (m, 1 H), 5.15 (s, 2 H), 7.03 - 7.10 (m, 1 H), 7.52 - 7.62 (m, 2 H), 7.68 (s, 1 H). 1 H RMN indica la presencia de menos de 10% de lo que se considera que es el derivado de carbamato de isopropilo correspondiente (del carbonato de isopropil 4-nitrofenilo que contamina el carbonato de 1-metilciclopropil 4-nitrofenilo). LCMS (ES) 442.4 (M+1 ).
Ejemplo 16: 4-{4-r(4-carbamoilfenoxi)metin-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1-carboxil^ de 1-metilciclopropilo El compuesto del título se prepara usando 4-hidroxibenzamida disponible en el comercio, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 15. H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 0.57 - 0.67 (m, 2 H), 0.84 - 0.91 (m, 2 H), 1.56 (s, 3 H), 1.93 -2.05 (m, 2 H), 2.05 - 2.19 (m, 2 H), 2.91 (t, J=15.62 Hz, 2 H), 4.26 (br. s., 2 H), 4.44 - 4.55 (m, 1 H), 5.09 (s, 2 H), 6.96 - 7.04 (m, 2 H), 7.66 (s, 1 H), 7.75 - 7.82 (m, 2 H). 1H RMN indica la presencia de menos de 10% de lo que se cree es el derivado de carbamato de ¡sopropilo (del carbonato de isopropil 4-nitrofenilo que contamina el carbonato de 1-metilciclopropilo 4-nitrofenilo). LCMS (ES) 424.4 (M+1 ).
Ejemplo 17: 4-(5-ciano-4-((4-c¡anofenoxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo El compuesto del título se prepara usando 4-hidroxibenzonitrilo disponible en el comercio, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 15. La purificación de la mezcla de reacción cruda se realiza mediante cromatografía flash, que se eluye con una mezcla de gradientes de acetato de etilo en heptano (de 0 a 100% de acetato de etilo). 1 H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta 0.60 - 0.70 (m, 2 H), 0.84 - 0.94 (m, 2 H), 1.23 -1.31 (m, 1 H), 1.56 (s, 3 H), 2.01 - 2.15 (m, 4 H), 2.93 (m, 2 H), 4.1 1 - 4.37 (m, 1 H), 4.49 -4.55 (m, 1 H), 5.10 (s, 2 H), 7.03 (d, J=8.78 Hz, 2 H), 7.63 (d, J=8.78 Hz, 2 H), 7.67 (s, 1 H).
Ejemplo 18: 4-(4-((4-(1 H-pirazol-1-il)fenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo El compuesto del título se prepara usando 4-(1 H-pirazol-1-il)fenol (WO 2003072547 ), siguiendo un procedimiento análogo al del Ejemplo 12. La purificación de la mezcla de reacción cruda se realiza mediante cromatografía flash, que se eluye con una mezcla de gradientes de acetato de etilo en heptano (de 0 a 100% de acetato de etilo). 1 H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta 1.28 (d, J=6.34 Hz, 6 H), 2.01 - 2.09 (m, 2 H), 2.17 (m, 2 H), 2.91 - 2.99 (m, 2 H), 4.37 (m, 2 H), 4.50 - 4.58 (m, 1 H), 4.93-4.98 (m, 1 H), 5.1 1 (s, 2 H), 6.47 (t, J=2.07 Hz, 1 H), 7.07 (d, J=9.03 Hz, 2 H), 7.64 (d, J=9.03 Hz, 2 H), 7.70 (s, 1 H), 7.72 (d, J=1.71 Hz, 1 H), 7.86 (d, J=2.44 Hz, 1 H). LCMS (ES) 435.4(M+1 ).
Ejemplo 19: 4-(5-c¡ano-4-((2-fluoro-4-(1 H-tetrazol-5-¡nfenoxi)metin-1 H-pirazol-1- il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo y 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2H-tetrazol-5-il)fenox¡)metil)-1 H-pirazoH-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo A) 4-(5-ciano-4-((2-fluoro^-(1-((2-(trimetilsiN 1 H-pirazol-1 -il)piperid¡n-1 -carboxilato de isopropilo y 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-((2-ftrimetils¡l¡netoxi¾metil)-2H-tetrazol-5-infenoxi)met¡n-1 H-pirazol-l-iltpiperidin-1 -carboxilato de isopropilo A una solución agitada de 4-(5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (94 mg, 0,322 mmol), 2-fluoro-4-(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-tetrazol-5-il)fenol y 2-fluoro-4-(2-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-2H-tetrazol-5-il)fenol (Preparación 17) (100 mg, 0,322 mmol) y trifenilfosfina (110 mg, 0,42 mmol) en 5 mL de 1 ,4-dioxano, se agrega por goteo azodicarboxilato de dietilo (0,060 mL, 0,39 mmol). La mezcla resultante se agita durante la noche a temperatura ambiente antes de que se concentre la mezcla al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 10 a 40% de acetato de etilo en heptano para obtener 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo y 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-((2-(trimetils¡IN)etox¡)metil)-2H-tetrazol-5-il)fenoxi)me de isopropilo (140 mg, 74% de rendimiento). 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo. 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta -0.05-0.01 (m, 9 H), 0.90 - 1.00 (m, 2 H), 1.18 - 1.27 (m, 6 H), 2.02 (br. s., 2 H), 2.13 (m, 2 H) 2.93 (br. s., 2 H), 3.65 - 3.78 (m, 2 H), 4.30 (d, J=7.22 Hz, 2 H), 4.46 - 4.58 (m, 1 H), 4.86 - 4.98 (m, 1 H), 5.16 (s, 2 H), 5.89 (s, 2 H), 7.09 - 7.18 (m, 1 H), 7.69 (s, 1 H), 7.88 - 7.96 (m, 2 H). LCMS (ES) 585.1 (M+1 ).
B) 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)meti^ carboxilato de isopropilo y 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo Se disuelven 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1 -((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo y 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo (220 mg, 0,38 mmol) en etanol (3 mL), y se agrega por goteo una solución de ácido clorhídrico acuoso 2M (3 mL). La mezcla resultante se agita a 50 °C durante 4 horas antes de enfriarla a temperatura ambiente y filtrarla. El sólido blanco resultante se lava con acetato de etilo y heptano (volumen 1/1) y se seca a presión reducida para obtener el compuesto del título (80 mg, 47% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, deutero dimetil sulfóxido) delta 1.16 (d, J=6.25 Hz, 6 H), 1.76 - 1.90 (m, 2 H), 1.98 (dd, J=14.45, 3.12 Hz, 2 H), 2.99 (br. s., 2 H), 4.04 (d, J=15.81 Hz, 2 H), 4.59 - 4.71 (m, 1 H), 4.70 - 4.82 (m, 1 H), 5.27 (s, 2 H), 7.47 - 7.57 (m, 1 H), 7.80 - 7.83 (m, 1 H), 7.83 - 7.87 (m, 1 H), 7.90 (s, 1 H). LCMS (ES) 455.0 (M+1 ).
Ejemplo 20: 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-( 1 -metil-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo y Ejemplo 21 : 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo A una solución de 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo y 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-plrazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo (70 mg, 0, 15 mmol) a temperatura ambiente en tetrahidrofurano (2 mL), se agrega hidruro de sodio (14 mg, 0,31 mmol) en dos porciones, y la mezcla resultante se agita durante 5 minutos. Luego, se agrega iodometano (0,03 mL, 0,46 mmol), y la mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante otras 16 horas. La reacción se inactiva mediante la adición de agua, y la mezcla se diluye con acetato de etilo. La fase orgánica se separa, y la fase acuosa se extrae dos veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera, se secan en sulfato de magnesio, se filtran, y el filtrado se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía flash en gel de sílice, que se eluye con una mezcla de gradientes de acetato de etilo en heptano (de 30 a 60% de acetato de etilo) para obtener 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1-metil-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (10 mg, 14% de rendimiento) y 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (30 mg, 42% de rendimiento). 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1-metil-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (Ejemplo 20). 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 1.18 - 1.28 (m, 6 H), 1.95 - 2.06 (m, 2 H), 2.13 (m, 2 H), 2.85 -3.02 (m, 2 H), 4.17 (s, 3 H), 4.36 (d, J=10.15 Hz, 2 H), 4.46 - 4.57 (m, 1 H) 4.92 (spt, 1 H), 5.19 (s, 2 H), 7.17 - 7.24 (m, 1 H), 7.48 - 7.58 (m, 2 H), 7.70 (s, 1 H). LCMS (ES) 469.0 (M+1 ). 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1-¡l)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (Ejemplo 21 ). 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 1.24 (d, J=6.25 Hz, 6 H) 1.95 - 2.05 (m, 2 H) 2.13 (m, 2 H) 2.93 (t, J=12.59 Hz, 2 H) 4.31 (br. s., 2 H) 4.37 (s, 3 H) 4.51 (m, 1 H) 4.92 (m, 1 H) 5.16 (s, 2 H) 7.09 - 7.16 (m, 1 H) 7.69 (s, 1 H) 7.83 - 7.87 (m, 1 H) 7.87 - 7.90 (m, 1 H). LCMS (ES) 469.0 (M+1).
Ejemplo 22: 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-(2-hidroxietil)-2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo A) 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-(2-(trimetilsililoxi)etil)-2H-tetrazol-5-infenoxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo A una solución agitada de 4-(5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo (Preparación 5) (78 mg, 0,266 mmol), 2-fluoro-4-(2-(2-(trimetilsililoxi)etil)-2H-tetrazol-5-il)fenol (Preparación 19) (90 mg, 0,27 mmol) y trifenilfosfina (77 mg, 0,29 mmol) en 5 mL de 1 ,4-dioxano, se agrega por goteo azodicarboxilato de dietilo (0,046 mL, 0,28 mmol). La mezcla resultante se agita durante 15 horas a temperatura ambiente antes de que se concentre la mezcla al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 5 a 40% de acetato de etilo en heptano para obtener 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-(2-(trimetilsililoxi)etil)-2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (140 mg, 86% de rendimiento).
B) 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-(2-hidroxietil)-2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo Se disuelve 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-(2-(trimetilsililoxi)etil)-2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (140 mg, 0,228 mmol) en metanol (2 ml_), y se agrega por goteo una solución de ácido clorhídrico 4M (1 mL) en 1 ,4-dioxano. La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 2 horas antes de concentrarla a presión reducida. Se divide el residuo (160 mg), y se purifican ca. 50 mg del crudo mediante HPLC de fase inversa para obtener el compuesto del título (30 mg, 26%) (columna: Waters XBridge C18 19 x 100, 5 micrómetros; fase móvil A: 0,03% de hidróxido de amonio en agua (v/v); fase móvil B: 0,03% de hidróxído de amonio en acetonitrilo (v/v); gradiente: 80% de agua/15% de acetonitrilo lineal a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 8,5 minutos, mantenido a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 10,0 minutos. Flujo: 25 mL/mín. Detección: 215 nm. LCMS (ES+): 499,5 (M+1 ).
Ejemplo 23: 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1-(2-hidroxietil)-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piper¡din-1 -carboxilato de isopropilo A) 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1-(2-(trimetilsililoxi)etil)-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo A una solución agitada de 4-(5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1- carboxilato de isopropilo (43 mg, 0,15 mmol), 2-fluoro-4-(1-(2-(trimetilsililoxi)etil)-1 H-tetrazol-5-il)fenol (preparación 20) (50 mg, 0,15 mmol) y trifenilfosfina (43 mg, 0,16 mmol) en 3 ml_ de 1 ,4-dioxano, se agrega por goteo azodicarboxilato de dietilo (0,025 mL, 0, 16 mmol). La mezcla resultante se agita durante la noche a temperatura ambiente antes de que se concentre la mezcla al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 30 a 70% de acetato de etilo en heptano para obtener 4-(5-c¡ano-4-((2-fluoro-4-(1-(2-(trimetilsililoxi)eti^ il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (50 mg, 55% de rendimiento).
B) 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1 -(2-hidroxietil)-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo Se disuelve 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1 -(2-(trimetilsililoxi)etil)-1 H-tetrazol-5-¡l)fenoxi)metil)-1 H-p¡razol-1-il)p¡peridin-1 -carboxilato de isopropilo (50 mg, 0,082 mmol) en metanol (2 mL), y se agrega por goteo una solución de ácido clorhídrico 4M (1 mL) en 1 ,4-dioxano. La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 2 horas antes de concentrarla a presión reducida. El residuo (60 mg) se purifica mediante HPLC de fase inversa para obtener el compuesto del título (20 mg, 49% de rendimiento) (columna: Waters XBridge C18 19 x 100, 5 micrómetros; fase móvil A: 0,03% de hidróxido de amonio en agua (v/v); fase móvil B: 0,03% de hidróxido de amonio en acetonitrilo (v/v); gradiente: 80% de agua/20% de acetonitrilo lineal a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 8,5 minutos, mantenido a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 10,0 minutos. Flujo: 25 mL/min. Detección: 215 nm LCMS (ES+): 499.4 (M+1 ).
Ejemplo 24: 4-(5-ciano-4-(r2-fluoro-4-(1-metil-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi1metilH H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo El compuesto del título se prepara usando 2-fluoro-4-(1-metil-1 H-tetrazol-5-il)fenol (Preparación 21 ), siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 15. 1H R N (400 MHz, deuterocloroformo) delta 0.58 - 0.67 (m, 2 H), 0.83 - 0.92 (m, 2 H), 1.57 (s, 3 H), 1.94 - 2.05 (m, 2 H), 2.05 - 2.21 (m, 2 H), 2.92 (t, J=12.98 Hz, 2 H), 4.17 (s, 3 H), 4.32 (br. s., 2 H), 4.43 - 4.56 (m, 1 H), 5.19 (s, 2 H), 7.17 - 7.24 (m, 1 H), 7.48 - 7.58 (m, 2 H), 7.70 (s, 1 H). 1 H NMR indica la presencia de menos de 10% de lo que se considera que es el derivado de carbamato de isopropilo correspondiente (del carbonato de isopropil 4-nitrofenilo que contamina el carbonato de 1 -metilciclopropil 4-nitrofenilo). LCMS (ES) 481.6 (M+1 ).
Ejemplo 25: 4-(5-ciano-4-(r4-(1 -metil-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi1metil)-1 H-pirazol-1 -iQpiperidin- 1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo El compuesto del título se prepara usando 4-( -metil-1 H-tetrazol-5-il)fenol (Preparación 22), siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 15. 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 0.60 - 0.67 (m, 2 H), 0.83 - 0.91 (m, 2 H), 1.58 (s, 3 H), 1.96 - 2.06 (m, 2 H), 2.06 - 2.21 (m, 2 H), 2.84 - 3.00 (m. 2 H), 4.16 (s, 3 H), 4.33 (br. s., 2 H), 4.45 - 4.57 (m, 1 H), 5.12 (s, 2 H), 7.10 - 7.15 (m, 2 H), 7.68 (s, 1 H), 7.69 - 7.74 (m, 2 H). 1 H NMR indica la presencia de menos de 10% de lo que se considera que es el derivado de carbamato de isopropilo correspondiente (del carbonato de isopropil 4-nitrofenilo que contamina el carbonato de 1-metilciclopropil 4-nitrofenilo). LCMS (ES) 463.5 (M+1 ).
Ejemplo 26: 4-(4-((4-carbamoil-3-fluorofenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo El compuesto del título se prepara usando 2-fluoro-4-hidroxibenzamida (Preparación 24), siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 13. 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 0.57 - 0.65 (m, 2 H), 0.82 - 0.89 (m, 2 H), 1.53 (s, 3 H), 1.92 - 2.04 (m, 2 H), 2.10 (qd, =12.14, 4.20 Hz, 2 H), 2.90 (br. s., 2 H), 4.32 (br. s., 2 H), 4.49 (tt, J=1 1.25, 4.37 Hz, 1 H), 5.02 - 5.09 (m, 2 H), 6.00 (br. s., 1 H), 6.51 - 6.64 (m, 1 H), 6.69 (dd, J=13.66, 2.54 Hz, 1 H), 6.84 (dd, J=8.78, 2.54 Hz, 1 H), 7.64 (s, 1 H), 8.07 (t, J=9.08 Hz, 1 H). 1 H NMR indica la presencia de menos de 10% de lo que se considera que es el derivado de carbamato de isopropilo correspondiente (del carbonato de isopropil 4-nitrofenilo que contamina el carbonato de 1-metilciclopropil 4-nitrofenilo). LCMS (ES) 442.4 (M+1 ).
Ejemplo 27: 4-(5-ciano-4-f 1 -[2-fluoro-4-(metilsulfonil)fenoxnetil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo El compuesto del título se prepara usando 2-fluoro-4-(metilsulfonil)fenol y 4-(5-c¡ano-4-(1-hidroxietil)-1 H-p¡razol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (Preparación 25), siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 15. La muestra se purifica mediante HPLC de fase inversa (columna: Waters XBridge C18 19 x 100, 5 micrómetros; fase móvil A: 0,03% de hidróxido de amonio en agua (v/v); fase móvil B: 0,03% de hidróxido de amonio en acetonitrilo (v/v); gradiente: 80% de agua/20% de acetonitrilo lineal a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 8,5 minutos, mantenido a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 10,0 minutos. Flujo: 25 mL/minuto. LCMS ( ES+): 479.2 M+1).
Ejemplo 28: 4-(5-ciano-4-(H(2-metilpiridin-3-il)oxi1etil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo El compuesto del título se prepara usando 2-metilpiridin-3-ol y 4-(5-ciano-4-(1-hidroxietil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (Preparación 25), siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 15. La muestra se purifica mediante HPLC de fase inversa (columna: Waters XBridge C18 19 x 100, 5 micrómetros; fase móvil A: 0,03% de hidróxido de amonio en agua (v/v); fase móvil B: 0,03% de hidróxido de amonio en acetonitrilo (v/v); gradiente: 85% de agua/15% de acetonitrilo lineal a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 8,5 minutos, mantenido a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 10,0 minutos. Flujo: 25 mL/minuto. LCMS (ES+): 398.2 M+1 ).
Ejemplo 29: 4-(5-ciano-4-(2-f2-fluoro-4-(metilsulfoninfenillpropil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo A) 4-(5-ciano-4-vinil-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo A una mezcla agitada de bromuro de (metil)-trifenilfosfonio (323 mg, 0,88 mmol) en tetrahidrofurano (5 mL) a -78 °C, se agrega por goteo n-butillitio (0,360 mL, 0,89 mmol, 2,5 M en hexanos). La mezcla amarilla resultante se agita a -78 °C durante 30 minutos, y luego se agrega una solución de 4-(5-ciano-4-formil-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (Ejemplo 9, Etapa A) (171 mg, 0,59 mmol) en tetrahidrofurano (2,5 mL). Se retira el baño frío, y la mezcla de reacción se agita durante 3,75 horas a temperatura ambiente. La reacción se inactiva con cloruro de amonio acuoso saturado, y la mezcla se extrae dos veces con acetato de etilo. Los extractos combinados se lavan secuencialmente con agua y salmuera, y luego se secan en sulfato de sodio. La mezcla se filtra, y el filtrado se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice, que se eluye con una mezcla de gradientes de acetato de etilo en heptano (de 10 a 100%) para obtener el compuesto del título como un aceite transparente (1 16 mg, 68%). 1H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta 0.88 (d, J=6.10 Hz, 6 H), 1.55 - 1 .67 (m, 2 H), 1.68 - 1.84 (m, 2 H), 2.43 - 2.73 (m, 2 H), 3.95 (br. s., 2 H), 4.04 -4.21 (m, 1 H) 4.44 - 4.67 (m, 1 H), 5.02 (d, J=1 1.22 Hz, 1 H), 5.43 (d, J=17.81 Hz, 1 H), 6.20 (dd, J=17.81 , 11.22 Hz, 1 H), 7.27 (s, 1 H).
B) 4-(5-ciano-4-(2-(2-fluoro-4-(metilsulfonil)fenil)prop-1 -enil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 - carboxilato de (E,Z)-isopropilo A una solución de 4-(5-ciano-4-vinil-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (116 mg, 0,4 mmol) y 2-fluoro-4-(metilsulfonil)-1-(prop-1-en-2-il)benceno (Preparación 29) (43 mg, 0,20 mmol) en diclorometano anhidro (2 ml_), se agrega catalizador de segunda generación Hoveyda-Grubbs (disponible en el comercio de Aldrich) (12,5 mg, 0,020 mmol). La solución verde se calienta a 40 °C durante 72 horas, y se agrega diclorometano periódicamente. El material se concentra a presión reducida, y el residuo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice (de 10 a 100% de acetato de etilo en heptano) para obtener el producto como un aceite impuro (8 mg, 8%). Este material se usa en el estado en que se encuentra. LCMS (APCI): 473.2 (M - 1).
C) 4-(5-ciano-4-(2-f2-fluoro-4-(metilsulfonil)fenillDropilV1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo Una solución de 4-(5-ciano-4-(2-(2-fluoro-4-(metilsulfonil)-fenil)prop-1-enil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de (E,Z)-isopropilo (8 mg, 0,02 mmol) en acetato de etilo (3 ml_) se hidrogena en H-Cube™ con la configuración "hidrógeno total" usando un cartucho de paladio en carbono al 10% a una velocidad de flujo de 1 mL/minuto. El material se concentra al vacio, y el residuo (4 mg) se purifica mediante HPLC de fase inversa (columna: Waters XBridge C18 19 x 100, 5 micrómetros; fase móvil A: 0,03% de hidróxido de amonio en agua (v/v); fase móvil B: 0,03% de hidróxido de amonio en acetonitrilo (v/v); gradiente: 80% de agua/20% de acetonitrilo lineal a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 8,5 minutos, mantenido a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 10,0 minutos. Flujo: 25 mL/minuto) para obtener el compuesto del título (1,9 mg, 23%): LCMS (ES+): 477.2 (M+1).
Ejemplo 30: 4-(5-ciano-4-(r(2-metilpiridin-3-il)oxilmetil)-1 H-pirazol-1 -inpiperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo El compuesto del título se prepara usando 2-metilp¡rid¡n-3-ol, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 13. El material crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con una mezcla de gradientes de acetato de etilo en heptano (de 60 a 100% de acetato de etilo) para obtener 77 mg del compuesto del título como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta 0.60 - 0.66 (m, 2 H), 0.83 - 0.90 (m, 2 H), 1.55 (s, 3 H), 1.96 - 2.05 (m, 2 H), 2.05 - 2.20 (m, 2 H), 2.49 (s, 3 H), 2.84 - 2.98 (m, 2 H), 4.11 - 4.42 (m, 2 H), 4.46 - 4.55 (m, 1 H), 5.04 (s, 2 H), 7.06 - 7.16 (m, 2 H), 7.65 (s, 1 H), 8.12 (dd, J=4.49, 1.56 Hz, 1 H).
Ejemplo 31 : 4-f5-ciano-4-r(2,3,6-trifluorofenoxi)metin-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de 1-metilciclopropilo A) 4-(5-ciano-4-((2,3,6-tr¡fluorofenoxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de fer-butilo Se colocan 4-(5-ciano-4-((metilsulfoniloxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de fer-butilo (Preparación 16) (87,8 mg, 0,228 mmol), 2,3,6-trifluorofenol (51 ,7 mg, 0,342 mmol) y carbonato de cesio (149 mg, 0,456 mmol) en un vial para microondas y se disuelven en acetonitrilo (3 mL). El vial se calienta en un reactor de microondas a 1 10 °C durante 20 minutos. La mezcla se concentra a presión reducida, y el residuo se absorbe en solución de hidróxido de sodio 1 N (5 ml_) y se extrae tres veces con diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera, se secan en sulfato de sodio, se filtran, y el filtrado se concentra a presión reducida. El material crudo se purifica mediante cromatografía que se eluye con un gradiente de 0 a 30% de acetato de etilo en heptano para obtener 36,2 mg de 4-(5-ciano-4-((2,3,6-trifluorofenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperid¡n-1 -carboxilato de fer-butilo como un aceite transparente.
B) 4 5-ciano-4-f(2,3,6-trifluorofenoxi)metin-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de 1-metilciclopropilo Se prepara 4-{5-ciano-4-[(2,3,6-trifluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1-il}piperidin-1-carboxilato de 1 -metilciclopropilo usando 2,3,6-trifluorofenol disponible en el comercio, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 13 (B y C). El material crudo (17,1 mg) se purifica mediante HPLC preparativa de fase inversa en una columna Sepax 2-Etil piridina 250 x 21 ,2 mm, 0,005, que se eluye con un gradiente de etanol en heptano. LCMS analítica: tiempo de retención 1 1 ,769 minutos (columna Phenomenex Luna (2) C18 150 x 3,0 mm, 5 micrómetros); gradiente lineal de 95% agua/metanol a 100% metanol durante 12,5 minutos; 0,1 % de modificador de ácido fórmico; velocidad de flujo 0,75 mL/minuto; LCMS (ES+): 456.9 ( M + Na). H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta 0.64 - 0.66 (m, 2 H), 0.88 - 0.91 (m, 2 H), 1.57 (s, 3 H), 2.00 (d, J=10.49 Hz, 2 H), 2.07 - 2.18 (m, 2 H), 2.91 - 2.95 (m, 2 H), 4.18 (br. s., 1 H), 4.36 (br. s., 1 H), 4.50 (tt, J=11.34, 4.15 Hz, 1 H), 5.19 (s, 2 H), 6.83 - 6.90 (m, 2 H), 7.67 (s, 1 H).
Ejemplo 32: 4-(5-ciano-4-í(2,3,6-trifluorofenoxi)metin-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo El compuesto del título se prepara usando 2,3,6-trifulorofenol disponible en el comercio, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 1 1. El material crudo se purifica mediante cromatografía de columna que se eluye con un gradiente de 0 a 25% de acetato de etilo en heptano para obtener 4-{5-ciano-4-[(2,3,6-trifluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piper¡din-1-carboxilato de isopropilo como un aceite transparente. 1H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta 1.26 (d, J=6.10 Hz, 6 H), 2.01 (d, J=11.22 Hz, 2 H) 2.13 (qd, J=12.28, 4.64 Hz, 2 H), 2.88 - 3.01 (m, 2 H), 4.32 (br. s., 2 H) 4.51 (tt, J=1 1.34, 4.15 Hz, 1 H), 4.90 - 4.98 (m,1 H), 5.18 (s, 2 H), 6.82 - 6.92 (m, 2 H), 7.67 (s, 1 H); LCMS (ES+): 423.4 ( M + H).
Ejemplo 33: 4-(5-ciano-4-(r2-fluoro-4-(1-metil-1 H-imida2ol-2-il)fenoxilmetil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo El compuesto del título se prepara de 2-fluoro-4-(1-metil-1 H-imidazol-2-il)fenol (Preparación 28) y 4-(5-ciano-4-((metilsulfoniloxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperid¡n-1-carboxilato de isopropilo (Preparación 10), siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 1 1. El material crudo se purifica mediante HPLC preparativa de fase inversa en Sepax Silica 250 x 21 ,2 mm, 0,005 mm, que se eluye con un gradiente de etanol en heptano. LCMS analítica: tiempo de retención 8,598 minutos (columna Phenomenex Luna (2) Cíe 150 x 3,0 mm, 5 micrómetros); gradiente lineal de 95% agua/metanol a 100% metanol durante 12,5 minutos; 0,1 % de modificador de ácido fórmico; velocidad de flujo 0,75 mL/minuto; LCMS (ES+): 467.0 (M + H). 1H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta 1.27 (d, J=6.10 Hz, 6 H), 1.97 - 2.09 (m, 2 H), 2.16 (m, 2 H), 2.93 - 2.98 (m, 2 H), 3.76 (s, 3 H) 4.25 - 4.43 (m, 2H), 4.50 - 4.57 (m, 1 H), 4.91-4.99 (m, 1 H), 5.17 (s, 2 H), 6.97 (s, 1 H), 7.1 1 (s, 1 H), 7.12 - 7.15 (m, 1 H), 7.42 (dd, J=11.71 , 1.95 Hz, 1 H), 7.38 - 7.44 (m, 1 H), 7.72 (s, 1 H).
Ejemplo 34: 4-(5-ciano-4-(r2-fluoro-4-(1 -metil-1 H-imidazol-5-il)fenoxilmetil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo El compuesto del título se prepara de 2-fluoro-4-(1-metil-1 H-imidazol-5-il)fenol (Preparación 27) y 4-(5-ciano-4-((metilsulfoniloxi)met¡l)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (Preparación 10), siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 1 1. El material crudo se purifica mediante HPLC preparativa de fase inversa en Sepax Silica 250 x 21 ,2 mm, 0,005, que se eluye con un gradiente de etanol en heptano. LCMS analítica: tiempo de retención 8,797 minutos (columna Phenomenex Luna (2) C18 150 x 3,0 mm, 5 micrómetros); gradiente lineal de 95% agua/metanol a 100% metanol durante 12,5 minutos; 0,1 % de modificador de ácido fórmico; velocidad de flujo 0,75 mL/minuto; LCMS (ES+): 467.0 (M + H). 1H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta 1.27 (d, J=6.34 Hz, 6 H), 2.03 (d, J=1 1.22 Hz, 2 H), 2.1 1 - 2.20 (m, 2 H), 2.95 (br. s., 2 H), 3.66 (s, 3 H), 4.34 (br. s., 2 H), 4.50 - 4.57 (m,1 H), 4.94 (dt, J=12.44, 6.22 Hz, 1 H), 5.15 (s, 2 H), 7.07 (s, 1 H), 7.10 - 7.17 (m, 3 H), 7.51 (s, 1 H), 7.71 (s, 1 H).
Ejemplo 35: 4-r5-ciano-4-((r2-metil-6-(1 H-1 ,2,4-triazol-1-il)piridin-3-il1oxi metil)-1 H-pirazol-1 -illpiperidin-1 -carboxilato de isopropilo El compuesto del título se prepara usando 2-metil-6-(1 H-1 ,2,4-triazol-1 -il)piridin-3-ol siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 12. La muestra se purifica mediante HPLC de fase inversa (columna: Waters XBridge C18 19 x 100, 5 micrómetros; fase móvil A: 0,03% de hidróxido de amonio en agua (v/v); fase móvil B: 0,03% de hidróxido de amonio en acetonitrilo (v/v); gradiente: 80% de agua/20% de acetonitrilo lineal a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 8,0 minutos, mantenido a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 9,5 minutos. Flujo: 25 mL/minuto. LCMS (MS ES+:451.1 ).
Ejemplo 36: 4-r5-ciano-4-((f2-metil-6-(1 H-1 ,2,4-triazol-1 -il)piridin-3-illamino)metil)-1 H-pirazol-1 -illpiperidin-l -carboxilato de isopropilo A una solución agitada de 4-(5-dano-4-((metilsulfoniloxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo (Preparación 10) (44 mg, 0,12 mmol) en 0,75 mL de tetrahidrofurano se agrega A/,A/-diisopropiletilamina (0,042 mL, 0,24 mmol) y, luego, 2-metil-6-(1 H-1 ,2,4-triazol-1-il)p¡ridin-3-amina (21 mg, 0, 12 mmol). La mezcla de reacción se calienta a 60 °C durante 16 horas antes de enfriarla a temperatura ambiente y diluirla con agua y salmuera. La mezcla se extrae tres veces con 15 mL de acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera, se secan en sulfato de sodio, se filtran, y el filtrado se concentra al vacío para obtener 52 mg de una espuma amarilla. La muestra se purifica mediante HPLC de fase inversa (columna: Waters Sunfire C18 19 x 100, 5 micrómetros; fase móvil A: 0,05% de ácido trifluoroacético en agua (v/v); fase móvil B: 0,05% de ácido trifluoroacético en acetonitrilo (v/v); gradiente: 90% de agua/10% de acetonitrilo lineal a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 8,5 minutos, mantenido a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 10,0 minutos. Flujo: 25 mL/minuto. LCMS (MS ES+: 450, 1 ).
Ejemplo 37: 4-[5-ciano-4-((f2-metil-6-(metilsulfonil)piridin-3-illaminolmetin-1 H-pirazol-1 -illpiperidin-1 -carboxilato de isopropilo El compuesto del título se prepara usando 2-metil-6-(metilsulfonil)piridin-3-amina siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 36. La muestra se purifica mediante HPLC de fase inversa (columna: Waters XBridge C18 19 x 100, 5 micrómetros; fase móvil A: 0,03% de hidróxido de amonio en agua (v/v); fase móvil B: 0,03% de hidróxido de amonio en acetonitrilo (v/v); gradiente: 85% de agua/15% de acetonitrilo lineal a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 8,5 minutos, mantenido a 0% de agua/100% de acetonitrilo en 10,0 minutos. Flujo: 25 mL/minuto. LCMS (ES+): 461.0 (M+1 ).
Ejemplo 38: 4-(5-ciano-4-(r4-(1 H-tetrazol-1-il)fenoxilmetil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de 1 -metilciclopropilo El compuesto del título se prepara usando 4-tetrazol-1 -il-fenol disponible en el comercio, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 15. El material crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 0% a 75% de acetato de etilo en heptanos. 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta ppm 0.60 - 0.66 (m, 2 H) 0.84 - 0.90 (m, 2 H) 1.19 (t, J=7.03 Hz, 1 H) 1.55 (s, 3 H) 2.03 (br. s., 2 H) 2.06 -2.19 (m, 2 H) 2.92 (br. s., 2 H) 3.46 (q, J=7.09 Hz, 1 H) 4.46 - 4.56 (m, 1 H) 5.1 1 (s, 2 H) 7.1 1 - 7.16 (m, 2 H) 7.60 - 7.65 (m, 2 H) 7.68 (s, 1 H) 8.90 (s, 1 H) Ejemplo 39: 1 -M -(5-etilpirimidin-2-iltoiperidin-4-in-4-(r4-( 1 H-tetrazol-1 -iMenoxilmetilV-1 H-pirazol-5-carbonitrilo A) 4-(5-ciano-4-(r4-(1 H-tetrazol-1-il)fenoxilmetil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo A una solución agitada, fría (0 °C) de trifenilfosfina (283 mg, 1 ,08 mmol) en tetrahidrofurano (2 ml_), se agrega por goteo azodicarboxilato de dietilo (0, 17 mL, 1.1 mmol). La mezcla de reacción fría se agita durante 20 minutos antes de agregar una solución de 4-tetrazol-1-il-fenol (165,5 mg, 1 ,021 mmol) en tetrahidrofurano. Después de 35 minutos, se agrega una solución de 4-(5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin- 1-carboxilato de ter-butilo (Preparación 15) (300 mg, 0,979 mmol) en tetrahidrofurano, y la reacción se deja calentar lentamente a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se concentra a presión reducida, y el residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 0% a 80% de acetato de etilo en heptanos para obtener el compuesto del título como un sólido blanco esponjoso (304 mg, 68%). H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta ppm 1.46 (s, 9 H) 2.03 (s, 2 H) 2.06 - 2.20 (m, 2 H) 2.90 (br. s., 2 H) 4.28 (br. s., 2 H) 4.46 - 4.56 (m, 1 H) 5.12 (s, 2 H) 7.10 - 7.18 (m, 2 H) 7.59 - 7.66 (m, 2 H) 8.90 (S, 1 H); LCMS (ES) 451.1 (M+1 ) B) 1-piperidin-4-il-4-([4-(1 H-tetrazol-1-il)fenoxilmetil)-1 H-pirazol-5-carbonitrilo Se disuelve 4-(5-ciano-4-{[4-(1 H-tetrazol-1-il)fenoxi]metíl}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de íer-butilo (298 mg, 0,663 mmol) en diclorometano (1 ,6 mL). Se agrega ácido trifluoroacético (0,15 mL), y la reacción se agita a temperatura ambiente en nitrógeno durante 1 ,5 horas. La reacción se concentra y se usa en el estado en que se encuentra en la etapa siguiente sin purificación adicional. LCMS (ES+) 351.1 (M+1) C) 4-(5-ciano-4-(f4-(1 H-tetrazol-1 -il)fenoxilmetil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo Se disuelven 1-piperidin-4-il-4-{[4-(1 H-tetrazol-1 -il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-5-carbonitrilo (30 mg, 0,086 mmol) y diisopropiletilamina (0,12 mi, 0,688 mmol) en acetonitrilo (2 mL) en un tubo sellado. Se agrega 2-cloro-5-etilpirimidina (0,020 mL, 0,2 mmol), y la reacción se calienta a 120 °C durante 18 horas y a temperatura ambiente durante 36 horas. La mezcla de reacción se concentra a presión reducida, y el material crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 0% a 70% de acetato de etilo en heptanos para obtener un sólido marrón. El sólido se tritura con cantidades mínimas de éter para obtener el compuesto del título como un sólido marrón claro (3 mg, 8%). LCMS (ES+) 457.1 (M+1 ) 1 H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta ppm 1.16 - 1.22 (m, 3 H) 2.10 (br. s., 2 H) 2.13 - 2.25 (m, 2 H) 2.43 - 2.50 (m, 2 H) 3.00 - 3.10 (m, 2 H) 3.43 - 3.50 (m, 1 H) 4.88 - 4.96 (m, 2 H) 5.12 (s, 2 H) 7.10 - 7.16 (m, 2 H) 7.60 - 7.64 (m, 2 H) 7.66 (s, 1 H) 8.12 - 8.24 (m, 2 H) 8.90 (s, 1 H) Ejemplo 40: 4-(5-ciano-4-f(3-cianofenoxi)metill-1 H-pirazol-1-il}piperidin-1 -carboxilato de isopropilo El compuesto del título se prepara usando 3-cianofenol disponible en el comercio, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 12. El material crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 0% a 40% de acetato de etilo en heptano para obtener 16,4 mg (62%) del compuesto del título como un residuo incoloro transparente. 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta ppm 1.28 (d, J=6.25 Hz, 6 H) 1.99 - 2.09 (m, 2 H) 2.10 - 2.24 (m, 2 H) 2.88 - 3.06 (m, 2 H) 4.35 (br. s., 2 H) 4.48 - 4.60 (m, 1 H) 4.90 - 5.01 (m, 1 H) 5.08 (s, 2 H) 7.19 - 7.25 (m, 2 H) 7.32 (d, J=7.82 Hz, 1 H) 7.39 - 7.47 (m, 1 H) 7.68 (s, 1 H) Ejemplo 41 : 4-(5-ciano-4-f(4-ciano-3-metilfenoxi)metill-1 H-pirazol-1 -ilk)iperidin-1 -carboxilato de isopropilo El compuesto del titulo se prepara usando 4-hidroxi-2-metilbenzonitrilo, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo12. El material crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 0% a 40% de acetato de etilo en heptanos para obtener 18,8 mg (69%) del compuesto del título como un residuo transparente. 1 H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta ppm 1.27 (d, J=6.25 Hz, 6 H) 1.96 - 2.08 (m, 2 H) 2.09 - 2.23 (m, 2 H) 2.54 (s, 3 H) 2.96 (t, J=12.51 Hz, 2 H) 4.35 (br. s., 2 H) 4.54 (tt, J=1 1.29, 4.15 Hz, 1 H) 4.95 (spt, J=6.25 Hz, 1 H) 5.09 (s, 2 H) 6.85 (dd, J=8.60, 2.35 Hz, 1 H) 6.90 (s, 1 H) 7.57 (d, J=8.60 Hz, 1 H) 7.67 (s, 1 H) Ejemplo 42: 4-{5-ciano-4-r(4-c¡anofenoxi)metill-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo El compuesto del título se prepara usando 4-cianofenol disponible en el comercio, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 12. El material crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 0% a 40% de acetato de etilo en heptanos para obtener 14,7 mg (56%) del compuesto del título como un sólido blanco pegajoso. 1 H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta ppm 1.27 (d, J=6.25 Hz, 6 H) 1.95 - 2.08 (m, 2 H) 2.16 (m, 2 H) 2.85 - 3.08 (m, 2 H) 4.35 (br. s., 2 H) 4.54 (tt, J=11.29, 4.15 Hz, 1 H) 4.95 (dt, J=12.51 , 6.25 Hz, 1 H) 5.1 1 (s, 2 H) 7.04 (d, J=8.99 Hz, 2 H) 7.64 (d, J=8.99 Hz, 2 H) 7.68 (s, 1 H) Ejemplo 43: 4-r(4-ciano-2-fluorofenoxi)metil1-1-í1-(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-in-1 H-pirazol-5-carbonitrilo El compuesto del título se prepara usando 4-ciano-2-fluorofenol disponible en el comercio, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 39. El material crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 0% a 1 ,5% de metanol en diclorometano. Los sólidos resultantes se purifican también mediante recristalización de 10% metanol/acetato de etilo para obtener 3,67 g (60%) de producto puro como un sólido casi blanco. 1H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta ppm 1.22 (t, =7.56 Hz, 3 H) 2.07 - 2.15 (m, 2 H) 2.15 - 2.28 (m, 2 H) 2.50 (q, J=7.56 Hz, 2 H) 3.03 -3.13 (m, 2 H) 4.66 (tt, J=11.44, 4.18 Hz, 1 H) 4.95 (d, J=13.66 Hz, 2 H) 5.19 (s, 2 H) 7.13 (t, J=8.17 Hz, 1 H) 7.42 (dd, J=10.37, 1.83 Hz, 1 H) 7.47 (d, J=8.29 Hz, 1 H) 7.70 (s, 1 H) 8.21 (s, 2 H) Ejemplo 44: 4-{5-ciano-4-f (4-ciano-2-fluorofenoxi)metill-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de fer-butilo El compuesto del título se prepara usando 4-ciano-2-fluorofenol disponible en el comercio, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 15. El material crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 10% a 40% de acetato de etilo en heptanos para obtener el compuesto del título (21 g, 100%). 1 H RMN (deuterocloroformo) delta ppm 7.71 (s, 1 H), 7.44 - 7.48 (m, 1 H), 7.40 - 7.43 (m, 1 H), 7.09 -7.15 (m, 1 H), 5.18 (s, 2H), 4.48 - 4.56 (m, 1 H), 4.22 - 4.38 (m, 2H), 2.84 - 3.01 (m, 2H), 2.09 - 2.19 (m, 2H), 1.99 - 2.06 (m, 2H), 1.49 (s, 9H) Ejemplo 45: 4-(5-ciano-4-r(2-ciano-4-fluorofenoxi)metin-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo El compuesto del título se prepara usando 2-ciano-4-fluorofenol disponible en el comercio, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 15. El material crudo se purifica mediante HPLC (columna Waters Atlantis dC18 4,6 x 50 mm, 5 micrómetros; modificador: 0,05% de ácido trifluoroacético; gradiente: 95% de agua/5% de acetonitrílo lineal y 5% de agua/95% de acetonitrílo durante 4,0 min; mantenido a 5% de agua/95% de acetonitrílo en 5,0 min; flujo: 2,0 mUmin) para obtener 35,8 mg (73%) del compuesto del titulo. LCMS (ES+): 412. 0 (M+1 ).
Ejemplo 46: 4-(5-ciano-4-{f4-(dimetilcarbamoil)-2-fluorofenoxilmetil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo El compuesto del título se prepara usando 3-fluoro-4-hidroxi-N,N-dimetilbenzamida (Preparación 31 B), siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 15. El material crudo se purifica mediante HPLC (columna Waters Atlantis dC18 4,6 x 50 mm, 5 micrometros; modificador: 0,05% de ácido trifluoroacético; gradiente: 95% de agua/5% de acetonitrilo lineal y 5% de agua/95% de acetonitrilo durante 4,0 min; mantenido a 5% de agua/95% de acetonitrilo en 5,0 min; flujo: 2,0 mL/min) para obtener 6,8 mg (12%) del compuesto del título. LC/ S (ES+): 458,0 (M+1 ).
Ejemplo 47: 4-(5-ciano-4-( r4-(d¡metilcarbamoi0-2-fluorofenoxi1metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo El compuesto del título se prepara usando 3-fluoro-4-hidroxi-N,N-dimetilbenzamida (Preparación 31 B), siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 15. El material crudo se purifica mediante HPLC (columna Waters Atlantis dC 18 4,6 x 50 mm, 5 micrometros; modificador: 0,05% de ácido trifluoroacético; gradiente: 95% de agua/5% de acetonitrilo lineal y 5% de agua/95% de acetonitrilo durante 4,0 min; mantenido a 5% de agua/95% de acetonitrilo en 5,0 min; flujo: 2,0 mL/min) para obtener 28,7 mg (51 %) del compuesto del título. LC/MS ( ES+): 470,1 (M+1 ).
Ejemplo 48: 4-(5-ciano-4-([2-fluoro-4-(metilcarbamoil)fenoxflmetil)-1 H-pirazol-1 -iPpiperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo El compuesto del título se prepara usando 3-fluoro-4-hidroxi-N-metilbenzamida (Preparación 31 A), siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 15. El material crudo se purifica mediante HPLC (columna Waters Atlantis dC 18 4,6 x 50 mm, 5 micrómetros; modificador: 0,05% de ácido trifluoroacético; gradiente: 95% de agua/5% de acetonitrilo lineal y 5% de agua/95% de acetonitrilo durante 4,0 min; mantenido a 5% de agua/95% de acetonitrilo en 5,0 min; flujo: 2,0 mL/min) para obtener 35,6 mg (65%) del producto del título. LC/MS (ES+): 456,0 (M+1).
Ejemplo 49: 4-({5-ciano-1 -Í1 -(5-etilpirimid¡n-2-il)p¡peridin-4-¡n-1 H-pirazol-4-il)metoxi)-3-fluoro-N,N-dimetilbenzamida El compuesto del título se prepara usando 3-fluoro-4-hidroxi-N,N-d¡metilbenzamida (Preparación 31 B), siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 39. El material crudo se purifica mediante HPLC (columna Waters Atlantis dC 18 4,6 x 50 mm, 5 micrómetros; modificador: 0,05% de ácido trifluoroacético; gradiente: 95% de agua/5% de acetonitrilo lineal y 5% de agua/95% de acetonitrilo durante 4,0 min; mantenido a 5% de agua/95% de acetonitrilo en 5,0 min; flujo: 2,0 mlJmin) para obtener 26,7 mg del producto del título. LC/MS (ES+): 478,0 (M+1).
Ejemplo 50: 4-f5-ciano-4-r(4-ciano-2-fluorofenoxi)metill-1 H-pirazol-1 -il>piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo La síntesis se describe en el Esquema 5 a continuación.
Esquema 5 A) 4-r5-ciano-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -¡llpiperidin-l -carboxilato de ter-butilo Se disuelven 5-ciano-1 H-pirazol-4-carboxilato de etilo (Jubilant Chemsys Ltd. D-12, Sector-59, 201 301 , Noida, U.P. India) (50 g, 300 mmol), 4-hidroXipiperidin-1 -carboxilato de íer-butilo (67 g, 333 mmol) y trifenilfosfina (111 g, 420 mmol) en tetrahidrofurano de 2-metllo (200 mL) y se enfrían a 0 °C. Se agrega por goteo una solución de de azodicarboxilato de dietilo al 40% en tolueno (76,5 mL, 420 mmol). Una vez que se completa la adición, la reacción se calienta a temperatura ambiente durante 1 h y luego se agita a temperatura ambiente durante 18 horas. Mientras se agita vigorosamente, se agrega cuidadosamente heptano (1400 ml_), y después de 1 hora se forma una suspensión. Los sólidos se filtran, y el filtrado se lava con una mezcla de heptano (400 mL) y acetato de etilo (200 mL). Luego, el filtrado se concentra, y el residuo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con 25% de acetato de etilo en heptanos y, luego, se vuelve a cristalizar de acetato de etilo-heptano para obtener el producto deseado (35,2 g, 33%). 1 H RMN (deuterocloroformo) delta ppm 7.97 (s, 1 H), 4.49 - 4.59 (m, 1 H), 4.36 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.22 - 4.30 (m, 2H), 2.80 - 2.99 (m, 2H), 2.06 - 2.19 (m, 2H), 1.S3 - 2.02 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.37 (t, J = 7.1 Hz, 3H) B): 4-f5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1 -illpiperidin-1 -carboxilato de fer-butilo Se disuelve 4-[5-ciano-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -il]piperidin-1 -carboxilato de fer-butilo (45,5 g, 131 mmol) en tetrahidrofurano (350 mL) y se enfría a -78 °C. Se agrega por goteo una solución de hidruro de diisobutilaluminío 1 ,5M en tolueno (50 g, 350 mmol) durante 75 minutos manteniendo la temperatura interna entre -65 °C y -60 °C. Una vez que se completa la adición, la mezcla de reacción se calienta a -10 °C durante 90 minutos. Mientras se mantiene una temperatura a -10 °C, se agrega cuidadosamente por goteo una solución acuosa de hidróxido de potasio 4M (350 mL, 10,7 eq). Una vez que se completa la adición, la mezcla de reacción se calienta lentamente a temperatura ambiente con agitación vigorosa y luego se agita a temperatura ambiente durante 20 horas. Se agregan metil fer-butiléter (200 mL) y heptanos (400 mL), y se separa la fase orgánica. Se lava la fase orgánica con sulfato ácido de potasio acuoso 1 M, salmuera, y se seca en una mezcla de sulfato de magnesio y 30 g de gel de sílice. Los sólidos se filtran, y el filtrado se concentra a presión reducida. En el momento de la concentración, comienza a formarse un precipitado. El residuo húmedo resultante se tritura con 500 mL de metil fer-butiléter al 10% en heptano a 60 °C durante 1 hora, y la suspensión se enfría lentamente a temperatura ambiente mientras se agita. Los sólidos resultantes se filtran y se secan en un horno al vacío configurado a 40 °C para obtener 4-[5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1 -il]piperidin-1 -carboxilato de íer-butilo (31 ,2g, 78%). 1 H RMN (deuterocloroformo) delta ppm 7.59 (s, 1 H), 4.70 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 4.41 - 4.51 (m, 1 H), 4.17 - 4.32 (m, 2H), 2.81 -2.96 (m, 2H), 2.01 - 2.16 (m, 3H), 1.94 - 2.00 (m, 2H), 1.45 (s, 9H) C) 4-(5-ciano-4-í(4-c¡ano-2-fluorofenoxi)met¡ll-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de fer-butilo En una botella de 4 L, se cargan 4-[5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1-il]piperidin-1 -carboxilato de íer-butilo (336 g, 1 , 10 moles), trifenilfosfina (359,58 g, 1 ,37 moles), 4-ciano-2-fluorofenol (157,89 g, 1 ,15 moles) y 2-metiltetrahidrofurano (2,02 L, 20, 10 moles). La mezcla se agita hasta convertirse en una solución y se mantiene en nitrógeno a temperatura ambiente. En otra botella de 4 L, se carga una solución de diacendicarboxilato de dietilo en tolueno (564,33 mL, 620,76 g, 1 ,43 moles) y 2-metiltetrahidrofurano (2,12 L, 21 ,11 moles). La mezcla se agita para garantizar una solución completa y se mantiene en nitrógeno a temperatura ambiente. Se usa una sola bomba peristáltica (dos líneas de alimentación) para bombear los dos corrientes hacia una pieza T (inoxidable), seguido de 100 mL de volumen de bobina (1/8" seguido de 1/4" de tubos ID PTE) con una velocidad de flujo combinada de 20 mL/min. Después de 8 horas de flujo, las botellas de alimentación se vacían, se usan 2 x 25 mL de metiltetrahidrofurano para enjuagar las botellas y se bombean a través de las líneas. La corriente de producto se usa en el estado en que se encuentra en la siguiente reacción. D) Sal de tosilato de 4-r(4-ciano-2-fluorofenoxi)metill-1-piperidin-4-il-1 H-pirazol-5-carbonitrilo La corriente de 4-{5-ciano-4-[(4-c¡ano-2-fluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1-il}piperidin-1 -carboxilato de íer-butilo recolectada en la Etapa C se divide en dos frascos de un solo cuello de 5 L. Se divide ácido p-toluensulfónico monohidrato (344,22 g, 1 ,81 moles), se carga en la mezcla, y el frasco se caliente usando un baño evaporador giratorio que se mantiene a 75 °C durante 8 horas. La reacción se enfría a temperatura ambiente y se granula durante la noche. La mezcla se filtra y se retira seca al vacío durante 3 horas para obtener el producto deseado como la sal de tosilato (480 g, 88% en dos etapas).
E) 4-{5-ciano-4-í(4-ciano-2-fluorofenoxi)metill-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo La sal de tosilato de 4-[(4-ciano-2-fluorofenoxi)metil]-1-piperidin-4-il-1 H-pirazol-5-carbonitrilo (478 g, 960,71 mmoles) se disuelve en 2-metiltetrahidrofurano (2,39 L, 23,83 moles) y agua (478,00 mL) en una botella de 4L. Se agregan trietilamina (200,86 mL, 1 ,44 moles) y carbonato de 1-metilciclopropil 4-nitrofenilo (Preparación 26) (229,83 g, 960,71 mmoles) y se agitan durante 48 horas. La mezcla de reacción se lava con hidróxido de sodio acuoso 1N (1 L). La mezcla de agita, y las capas se separan. La capa orgánica se lava varias veces con hidróxido de sodio acuoso 1 N (1 L), se seca en sulfato de magnesio, se filtra, y el filtrado se concentra a presión reducida para obtener sólidos amarillo brillante. Estos sólidos se suspenden en acetato de etilo a temperatura ambiente durante la noche. Los sólidos se filtran, y los sólidos resultantes amarillo pálido se vuelven a suspender en acetato de etilo (3 volúmenes), se filtran y se retiran secos al vacío para obtener el compuesto deseado como un sólido blancuzco (313 g, en dos lotes, 77%). 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta ppm 0.60 - 0.66 (m, 2 H) 0.84 - 0.90 (m, 2 H) 1.55 (s, 3 H) 1.96 - 2.04 (m, 2 H) 2.11 (qd, J=12.10, 4.68 Hz, 2 H) 2.92 (br. s., 2 H) 4.07 -4.41 (m, 2 H) 4.50 (tt, J=11.27, 4.15 Hz, 1 H) 5.16 (s, 2 H) 7.09 (t, J=8.20 Hz, 1 H) 7.36 -7.46 (m, 2 H) 7.68 (s, 1 H).
Punto de fusión = 144,6 °C Análisis de combustión para (Quantitative Technologies Inc. (QTI) 291 Route 22 East Salem Ind. Park - Bldg 5 Whitehouse NJ 08888-0470 C22H22FN503 C (Teórico = 62,40%) 62,28% 62,29 % H (Teórico = 5,24%) 5,17 % 5, 13 % N (Teórico = 16,54%) 16,42% 16,50 % Ejemplo 51 : (3S,4S)-4-(5-ciano-4-(r2-fluoro-4-(metilcarbamoil)fenoxilmetil)-1 H-pirazol-1-il)-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de fer-butilo A) (3S,4S)-4-[5-ciano-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -ill-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de fer-butilo Se prepara (3S,4S)-4-[5-ciano-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -il]-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de fer-butilo de 5-ciano-1 H-pirazol-4-carboxilato de etilo y 3-fluoro-4-hidroxipiperidin-1 -carboxilato de (3S,4R)-ter-butilo (Preparación 43 B) de manera similar a la que se describe para la preparación de 4-[5-ciano-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -il]piperidin-1 -carboxilato de íer-butilo (Ejemplo 50, Etapa A). El material crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 0% a 30% de acetato de etilo en heptanos para obtener el producto deseado como un aceite transparente espeso, (149,4 mg, 32%).
B) (3S,4S)-4-f5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1 -il1-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de fer-butilo Se prepara (3S,4S)-4-[5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1 -il]-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de fer-butilo de (3S,4S)-4-[5-ciano-4-(etoxicarbonil)-1 H-pirazol-1 -il]-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de fer-butilo de manera similar a la que se describe para la preparación de 4-[5-ciano-4-(hidroximetil)-1 H-pirazol-1-il]piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo (Ejemplo 50, Etapa B). El producto crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 5% a 50% de acetato de etilo en heptanos para obtener el producto deseado como un aceite transparente espeso, que se solidifica luego del reposo (74 mg, 56%).
C) (3S,4S)-4-(5-ciano-4-(r2-fluoro-4-(metilcarbamoil)fenoxilmetil)-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo El compuesto del título se prepara usando 3-fluoro-4-hidroxi-N-metilbenzamida (Preparación 31 A), siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 50. El material crudo se purifica mediante HPLC (columna: Waters Xbridge C12 4,6 x 50 mm, 5 micrometros; modificador: 0,05% de hidróxido de amonio; gradiente: 95% de agua/5% de acetonitrilo lineal y 5% de agua/95% de acetonitrílo durante 4,0 min; mantenido a 5% de agua/95% de acetonitrilo en 5,0 min; flujo: 2,0 mLJmin) para obtener el producto deseado. LC/MS (ES+): 476,4 (M+1).
Ejemplo: 52: (3R,4S)-4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(metilcarbamoil)fenoxilmetil)-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de ter-butilo El compuesto del título se prepara usando 3-fluoro-4-hidroxi-N-metilbenzamida (Preparación 31 A), siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 51. El material crudo se purifica mediante HPLC (columna: Waters Xbridge C12 4,6 x 50 mm, 5 micrometros; modificador: 0,05% de hidróxido de amonio; gradiente: 95% de agua/5% de acetonitrilo lineal y 5% de agua/95% de acetonitrilo durante 4,0 min; mantenido a 5% de agua/95% de acetonitrilo en 5,0 min; flujo: 2,0 mL/min) para obtener el producto deseado. LC/MS (ES+): 476,4 (M+1 ).
Ejemplo 53: (3S,4S)-4-(5-ciano-4-(r2-fluoro-4-(metilcarbamoil)fenoxilmetilM H-pirazol-1 -ih-3-fluorop¡peridin-1-carboxilato de 1-metilciclopropilo El compuesto del título se prepara usando 3-fluoro-4-hidroxi-N-metilbenzamida (Preparación 31 A), siguiendo procedimientos análogos a los de los Ejemplos 50 y 51. El material crudo se purifica mediante HPLC (columna: Princeton 2-etil piridina 250 x 21 ,2 mm, 5 micrómetros; gradiente: 95% de heptano/5% de etanol durante 1 ,5 minutos, lineal a 0% de heptano/100% de etanol durante 10 min, mantenido a 0% de heptano/100% de etanol en 5,0 min durante 1 minuto y lineal a 95% de heptano/5% de etanol; flujo: 28 mL/min) para obtener el producto deseado. LC/MS (ES+): 473,9 (M+1 ).
Ejemplo 54: (3R,4R)-4-(5-ciano-4-fí2-fluoro-4-(metilcarbamoil)fenoxilmetil)-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de 1-metilciclopropilo El compuesto del título se prepara usando 3-fluoro-4-hidroxi-N-metilbenzamida (Preparación 31 A), siguiendo procedimientos análogos a los de los Ejemplos 50 y 51. El material crudo se purifica mediante HPLC (columna: Princeton 2-etil piridina 250 x 21 ,2mm, 5 micrómetros; gradiente: 95% de heptano/5% de etanol durante 1 ,5 minutos, lineal a 0% de heptano/100% de etanol durante 10 min, mantenido a 0% de heptano/100% de etanol en 5,0 min durante 1 minuto y lineal a 95% de heptano/5% de etanol; flujo: 28 mL/min) para obtener el producto deseado.
LC/MS (ES+): 473,9 (M+1 ).
Ejemplo 55: (3S.4S -4-(5-ciano-4-(r(2-metilpiridin-3-il)oxi1metil -1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de fer-butilo Se disuelve 4-(5-ciano-4-{[(metilsulfonil)oxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de fer-butilo (Preparación 42) (33 mg, 0,082 mmol) en acetonitrilo (3 ml_), y se agregan carbonato de cesio (53 mg, 0, 164 mmol) y 3-hidroxi-2-metilpiridina (9 mg, 0,082 mmol). La mezcla de reacción se calienta a 80 °C durante 1 ,5 horas. La reacción se enfría a temperatura ambiente y se concentra a presión reducida. El residuo crudo se diluye con agua y se extrae con acetato de etilo (3x). Los extractos orgánicos combinados se lavan con hidróxido de sodio acuoso 0,5 N, agua y salmuera, y se secan en sulfato de sodio, se filtran, y el filtrado se concentra a presión reducida. El residuo crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 30% a 100% de acetato de etilo en heptanos para obtener el producto racémico como un aceite color ámbar (30 mg, 70%). 1 H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta ppm 1.50 (s, 9 H) 2.1 1 (m, 1 H) 2.25 - 2.39 (m, 1 H) 2.53 (s, 3 H) 2.93 (br. s., 2 H) 4.30 (br. s., 1 H) 4.43 - 4.71 (m, 2 H) 4.72 - 4.91 (m, 1 H) 5.09 (s, 2 H) 7.09 - 7.20 (m, 2 H) 7.75 (s, 1 H) 8.16 (d, J=3.90 Hz, 1 H) Ejemplo 56: (3S,4R)-4-(5-ciano-4-(f(2-metilpiridin-3-il)oxi1metil>-1 H-pirazol-1-il)-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de ter-butilo El compuesto del título se prepara usando 3-hidroxi-2-metilpirid¡na disponible en el comercio, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 55. El material crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 30% a 100% de acetato de etilo en heptano para obtener el producto deseado como un aceite color ámbar. 1 H RMN (500 MHz, deuterocloroformo) delta ppm 1.50 (s, 9H), 2.01 - 2.08 (m, 1 H) 2.52 (s, 3 H) 2.74 - 2.88 (m, 1 H) 2.94 - 3.14 (m, 1 H) 3.14 - 3.34 (m, 1 H) 4.27 - 4.57 (m, 2 H) 4.61 - 4.75 (m, 1 H) 4.80 - 5.01 (m, 1 H) 5.09 (s, 2 H) 7.10 - 7.18 (m, 2 H) 7.73 (s, 1 H) 8.15 (d, J=3.66 Hz, 1 H) Ejemplo 57: (3S.4R)-4-(5-ciano-4- [(2-metilpiridin-3-il)oxilmetil)-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de 1 -metilciclopropilo El compuesto del título se prepara usando 3-h¡droxi-2-metilpiridina disponible en el comercio, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 55. El material crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 40% a 100% de acetato de etilo en heptanos para obtener el producto racémico deseado como un sólido blanco. 1 H RMN (400 MHz, deuterocloroformo) delta ppm 0.66 (br. s., 2 H) 0.91 (br. s., 2 H) 1.57 (s, 3 H) 2.05 (d, J=12.10 Hz, 1 H) 2.52 (s, 3 H) 2.82 (br. d, J=9.00 Hz, 1 H) 3.05 (br. d, J=9.00 Hz, 1 H) 3.15 - 3.40 (m, 1 H) 4.20 - 4.60 (m, 2 H) 4.60 - 4.77 (m, 1 H) 4.77 -5.03 (m, 1 H) 5.09 (s, 2 H) 7.06 - 7.21 (m, 2 H) 7.73 (s, 1 H) 8.16 (d, J=4.29 Hz, 1 H) Ejemplo 58: (3S,4R)-4-(5-ciano-4 r(2-metilpiridin-3-il)oxilmetilV1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de 1-metilciclopropilo El compuesto del titulo se prepara usando 3-hidroxi-2-metilpiridina disponible en el comercio, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 55. El material crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 40% a 100% de acetato de etilo en heptanos para obtener el producto racémico que se purifica adicionalmente mediante HPLC quiral con las siguientes condiciones: Columna: chiralcel OJ-H 4,6 mm x 25 cm; fase móvil: 85/15 de dióxido de carbono/metanol; modificador: 0,2% de isopropilamina; velocidad de flujo: 2,5 mL/minuto para obtener el compuesto del título. LC/MS (ES+): 414,1 (M+1).
Ejemplo 59: (3R.4S)-4-(5-ciano-4-(f(2-metilPiridin-3-¡noxilmetill-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de 1-metilciclopropilo El compuesto del título se prepara usando 3-hidroxi-2-met¡lpir¡dina disponible en el comercio, siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 55. El material crudo se purifica mediante cromatografía flash, que se eluye con un gradiente de 40% a 100% de acetato de etilo en heptanos para obtener el producto racémico que se purifica adicionalmente mediante HPLC quiral con las siguientes condiciones: Columna: chiralcel OJ-H 4,6 mm x 25 cm; fase móvil: 85/15 de dióxido de carbono/metanol; modificador: 0,2% de isopropilamina; velocidad de flujo: 2,5 mL/minuto para obtener el compuesto del título. LC/MS (ES+): 414,1 (M+1).
Ejemplo 60: 4-(5-ciano-4-(í4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)fenoxilmetil)-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de ter-butilo El compuesto del título se prepara usando 4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)fenol (solicitud de patente estadounidense N.° PCT/US2009/038315, Publicación N.° WO 2009/129036 A1) siguiendo procedimientos análogos a los del Ejemplo 15. El material crudo se purifica mediante HPLC (columna: Phenomenex Gemini C18 250 x 21 ,2 mm, 8 micrómetros; fase móvil: de 50% de acetonitrilo (amoníaco pH 10) en agua (amoníaco pH 10) a 55% de acetonitrilo (amoníaco pH 10) en agua (amoníaco pH 10); velocidad de flujo: 25 mL/minuto; longitud de onda: 220 nm) para obtener el compuesto del título. LC/MS (ES+): 450,1 ( +1 ).
Ejemplo 61 : 4-(5-ciano-4-(f4-(2H-1.2.3-triazol-2-infenoxilmetil>-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de ter-butilo El compuesto del título se prepara usando 4-(2H-1 ,2,3-triazol-2-il)fenol (solicitud de patente estadounidense N.° PCT/US2009/038315, Publicación N.° WO 2009/129036 A1) siguiendo procedimientos análogos a los de Ejemplo 15. El material crudo se purifica mediante HPLC (columna: Phenomenex Gemini C18 250 x 21 ,2 mm, 8 micrometros; fase móvil: 63% de acetonitrilo (amoníaco pH 10) en agua (amoníaco pH 10); velocidad de flujo: 25 mL/minuto; longitud de onda: 220 nm) para obtener el compuesto del título. LC/MS (ES+): 450,1 (M+1 ).
Ejemplo 62: 4-(4-((4-(1 H-1 ,2.3-triazol-1 -il)fenoxi)metil)-5-ciano-1 H-p¡razol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo El compuesto del título se prepara de manera análoga al del Ejemplo 60, a partir del Ejemplo 60. El material crudo se purifica mediante HPLC de fase inversa: columna: Kromasil Etemity-5-C18 150 x 30 mm x 5 micrómetros; fase móvil: de 38% de acetonitrilo (0,225% de ácido fórmico) en agua (0,225% de ácido fórmico) a 58% de acetonitrilo (0,225% de ácido fórmico) en agua (0,225% de ácido fórmico); velocidad de flujo: 30 mUmin longitud de onda: 220 nm 1 H RMN (400 MHz, deuterocloroformo): delta ppm 7.92 (s, 1 H), 7.84 (s, 1 H), 7.68 (d, 3H), 7.1 1 (t, 2H), 5.1 1 (s, 2H), 4.53 (m, 1 H), 4.26 (m, 2H), 2.93 (s, 2H), 2.12(t, 2H), 2.03 (d, 2H) 1.56 (s, 3H), 0.88 (t, 2H), 0.64 (t, 2H) Ejemplo 63: 4-(4-((4-(2H-1.2.3-triazol-2-il)fenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de 1 -metilciclopropilo El compuesto del título se prepara de manera análoga al del Ejemplo 61 , a partir del Ejemplo 61. El residuo crudo se purifica mediante HPLC preparativa para obtener 50 mg (39%) del compuesto del título como un sólido blanco: columna: Boston Symmetrix ODS-H 150 x 30 mm x 5 micrómetros fase móvil: de 50% de acetonitrilo (0,225% de ácido fórmico) en agua (0,225% de ácido fórmico) a 70% de acetonitrilo (0,225% de ácido fórmico) en agua (0,225% de ácido fórmico); velocidad de flujo: 30 mUmin longitud de onda: 220 nm 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo): delta ppm 8.01 (d, 2H), 7.78 (s, 2H), 7.69 (s, 1 H), 7.07 (d, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.51 (m, 1 H), 4.33 (m, 2H), 2.93 (s, 2H), 2.1 1 (t, 2H), 2.03 (d, 2H) 1.56 (s, 3H), 0.80 (s, 2H), 0.65 (d, 2H).
Ejemplo 64: 4-[5-ciano-4-({ri-(metilsulfonil)piperidin-4-illoxi)metil)-1 H-pirazol-1-illpiperidin-1-carboxilato de fer-butilo El compuesto del título se prepara de manera análoga al del Ejemplo 13. El compuesto crudo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice usando una mezcla 1 :4 de éter de petróleo y acetato de etilo.
H RMN (400 MHz, deuterocloroformo): delta ppm 7.54 (s, 1 H), 4.53 (s, 2H), 4.48 (m, 1 H), 4.28 (br, 2H), 3.69 (m, 1 H), 3.31 (m, 4H), 2.90 (m, 2H), 2.79 (s, 3H), 2.1 1 (m, 2H), 1.88-2.00 (m, 6H), 1.47 (s, 9H).
Ejemplo 65: 4-r5-ciano-4-((2-fluoro-4-r(2-hidroxietil)(metil)carbamoinfenoxi)metil)-1 H-pirazol-l -illpiperidin-l -carboxilato de fer-butilo El compuesto del título se prepara de manera análoga al del Ejemplo 46. El material crudo se purifica mediante HPLC de fase inversa: columna: Phenomenex Gemini C18 250 x 21 ,2 mm x 8 micrómetros fase móvil: de 40% de acetonitrilo (amoníaco pH 10) en agua (amoníaco pH 10) a 60% de acetonitrilo (amoníaco pH 10) en agua (amoníaco pH 10); velocidad de flujo: 25 mUmin longitud de onda: 220 nm 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo): delta ppm 7.69 (s, 1 H), 7.28 (d, 1 H), 7.24 (s, 1 H), 7.05 (d, 1 H), 5.18 (s, 2H), 4.50 (q, 1 H) , 4.29 (d, 2H), 3.90 (s, 2H), 3.71 (s, 2H), 3.10 (s, 3H), 2.91 (s, 2H), 2.14 (q, 2H), 1.99 (s, 2H), 1.48 (s, 9H).
Ejemplo 66: 4-r5-ciano-4-((2-fluoro-4-r(3-hidroxipirrolidin-1 -il)carbonillfenoxi)metil)-1 H-pírazol-1 -illPipe din-1 -carboxilato de ter-butilo El compuesto del título se prepara de manera análoga al del Ejemplo 46. El material crudo se purifica mediante HPLC de fase inversa: columna: Phenomenex Gemini C18 250 x 21 ,2 mm x 8 micrómetros fase móvil: de 40% de acetonitrilo (amoníaco pH 10) en agua (amoníaco pH 10) a 60% de acetonitrilo (amoníaco pH 10) en agua (amoníaco pH 10); velocidad de flujo: 25 mL/min longitud de onda: 220 nm 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo): delta ppm 7.69 (s, 1 H), 7.32 (d, 2H), 7.05 (t, 1 H), 5.14 (s, 2H), 4.52 (q, 2H) , 4.29 (s, 2H), 3.78 (d, 2H), 3.64 (d, 1 H), 3.45 (d, 1 H), 2.90 (s, 2H), 2.14 (q, 2H), 2.00 (d, 4H), 1.47 (s, 9H).
Ejemplo 67: 4-(4-{í4-(azetidin-1-ilcarbon¡l)-2-fluorofenox¡1metil>-5-ciano-1 H-pírazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo El compuesto del título se prepara de manera análoga al del Ejemplo 46. El material crudo se purifica mediante HPLC de fase inversa: columna: Phenomenex Gemini C18 250 x 21 ,2 mm x 8 micrómetros fase móvil: de 40% de acetonitrilo (amoníaco pH 10) en agua (amoníaco pH 10) a 60% de acetonitrilo (amoníaco pH 10) en agua (amoníaco pH 10); velocidad de flujo: 25 mUmin longitud de onda: 220 nm 1H RMN (400 MHz, deuterocloroformo): delta ppm 7.69 (s, 1 H), 7.43 (d, 1 H), 7.41 (s, 1 H), 7.04 (t, 1 H), 5.14 (s, 2H), 4.50 (q, 1 H) , 4.31 (d, 6H), 2.90 (d, 2H), 2.38 (q, 2H), 2.15 (q, 2H), 2.08 (d, 2H), 1.47 (s, 9H).
Ejemplo 68: 4-r5-ciano-4-((f 1 -(metilsulfonil)piperidin-4-¡lloxi|metil)-1 H-pirazol-1 -illpiperidin-1 -carboxilato de -metilciclopropilo El compuesto del título se prepara de manera análoga al del Ejemplo 64. El material crudo se purifica mediante HPLC de fase inversa: columna: Phenomenex Synergi C18 150 x 30 mm x 4 micrómetros fase móvil: 43% de acetonitrilo (0,225% de ácido fórmico) en agua (0,225% de ácido fórmico) a 53% de acetonitrilo (0,225% de ácido fórmico) en agua (0,225% de ácido fórmico); Velocidad de flujo: 30 mL/min 1 H R N (400 MHz, deuterocloroformo): delta ppm 7.54 (s, 1 H), 4.53 (s, 2H), 4.48 (m, 1 H), 4.35 (d, 2H), 3.69 (m, 1 H), 3.31 (m, 4H), 2.91 (m, 2H), 2.78 (s, 3H), 2.12(m, 2H), 1.87-1.98 (m, 6H), 1.56 (s, 3H), 0.88 (t, 2H), 0.66 (t, 2H).
En la presente solicitud, se hace referencia a varias publicaciones. Las descripciones de estas publicaciones se incorporan en su totalidad a la presente solicitud por referencia para todos los fines.
Será evidente para los expertos en el arte que se pueden realizar varias modificaciones y variaciones en la presente invención sin alejarse del alcance o espíritu de la invención. Otras formas de realización de la invención serán evidentes para los expertos en el arte a partir de la memoria descriptiva y práctica de la invención descrita en la presente. Se pretende que la memoria descriptiva y los ejemplos se consideren únicamente a modo de ejemplo, mientras que las siguientes reivindicaciones indican un alcance y espíritu verdaderos de la invención.

Claims (12)

REIVINDICACIONES
1 . Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en: 4-{5-ciano-4-[(2,4-difluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-{5-ciano-4-[(2-metilfenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-{5-ciano-4-[(2,5-difluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo; 4-{5-ciano-4-[(2,3-difluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1-carboxilato de 1 -metilciclopropilo; 4-{4-[(4-carbamoil-2-fluorofenoxi)metil]-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo; 4-{4-[(4-carbamoilfenoxi)metil]-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-((4-cianofenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(4-((4-(1 H-pirazol-1 -il)fenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -Íl)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo y 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1 -metil-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2-(2-hidroxietil)-2H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1-(2-hidroxietil)-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1-¡l)piper¡din-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(1-metil-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piper¡din carboxilato de 1-met¡lciclopropilo; 4-(5-c¡ano-4-{[4-(1-metil-1 H-tetrazol-5-il)fenox¡]metil}-1 H-p¡razol-1 -¡l)piperid¡n-1-carboxilato de 1 -metilciclopropilo; 4-(4-((4-carbamoil-3-fluorofenoxi)metil)-5-ciano-1H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-{1 -[2-fluoro-4-(met¡lsulfonil)fenoxi]et¡l}-1 H-pirazol-1 -il)p¡per¡din-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{1-[(2-metilpiridin-3-il)oxi]etil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{2-[2-fluoro-4-(metilsulfonil)fenil]propil}-1 H-pirazol-1-il)piperidin^ de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{[(2-metilpiridin-3-il)oxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo; 4-{5-ciano-4-[(2,3,6-trifluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1-il}piperidin-1-carboxilato 1-metilciclopropilo; 4-{5-ciano-4-[(2,3,6-trifluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1-il}piperidin-1-carboxila^^ de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(1-metil-1 H-imidazol-2-il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(1 -metil-1 H-imidazol-5-il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-[5-ciano-4-({[2-metil-6-(1 H-1 ,2,4-triazol-1-il)piridin-3-il]oxi}metil)-1 H-pirazo 1 -carbox'ilato de isopropilo; 4-[5-c¡ano-4-({[2-met¡l-6-(1 H-1 ,2,4-triazol-1-il)pir¡d¡n-3-¡l]amino}metil)-1 H-pirazol-1-il]p¡peridin-1-carboxilato de isopropilo; 4-[5-ciano-4-({[2-metil-6-(metilsulfonil)p¡ridin-3-il]am¡no}metil)-1 H-p¡razol-1-¡l]p¡per¡d^ carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{[4-(1 H-tetrazol-1-il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 1 -[1 -(5-etilpirirnidin-2-il)piperidin-4-il]-4-{[4-(1 H-tetrazol-1 -il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; 4-{5-ciano-4-[(3-cianofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-{5-ciano-4-[(4-ciano-3-metilfenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-{5-ciano-4-[(4-cianofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-[(4-ciano-2-fluorofenoxi)metil]-1 -[1 -(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-il]-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; 4-{5-ciano-4-[(4-ciano-2-fluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo; 4-{5-ciano-4-[(2-ciano-4-fluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{[4-(dimetilcarbamo¡l)-2-fluorofenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-{[4-(dimetilcarbamoil)-2-fluorofenoxi]metil}-1 H-pírazol-1-il)piperidin carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(metilcarbamoil)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1-il)piperidin de 1-metilciclopropilo; 4-({5-ciano-1-[1-(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-il]-1 H-pirazol-4-il}metoxi)-3-fluoro-N,N-dimetilbenzamida; 4-{5-ciano-4-[(4-ciano-2-fluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo; (3S,4S)-4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(metilcarbamoil)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo; (3R,4S)-4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(metilcarbamoil)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1-il)-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de ter-butilo; (3S,4S)-4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(metilcarbamoil)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo; (3R,4R)-4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(metilcarbamoil)fenoxi]rnetil}-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo; (3S,4S)-4-(5-ciano-4-{[(2-metilpiridin-3-il)oxi]metil}-1 H-pirazol-1-il)-3-fluoropiperid¡n-1-carboxilato de ter-butilo; (3S,4R)-4-(5-ciano-4-{[(2-metilpiridin-3-il)oxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de ter-butilo; (3S,4R)-4-(5-ciano-4-{[(2-metilpiridin-3-il)oxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)-3-fluoropiperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo; (3S,4R)-4-(5-ciano-4-{[(2-met¡lpiridin-3-il) carboxilato de 1 -metilciclopropilo; (3R,4S)-4-(5-ciano-4-{[(2-metilpiridin-3-il)oxi]metil}-1H-pirazol-1-il)-3-fluoropiperi^ carboxilato de -metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-{[4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo; 4-(5-ciano-4-{[4-(2H-1 ,2,3-triazol-2-il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de fer-butilo; 4-(4_((4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)fenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo; 4-(4-((4-(2H-1 ,2,3-triazol-2-il)fenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-[5-ciano-4-({[1 -(metilsulfonil)piperidin-4-il]oxi}metil)-1 H-pirazol-1 -il]piperidin-1 -carboxilato de fer-butilo; 4-[5-ciano-4-({2-fluoro-4-[(2-hidroxietil)(metil)carbamoil]fenoxi}metil)-1 H-pira^ il]piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo; 4-[5-ciano-4-({2-fluoro-4-[(3-hidroxipirrolidin-1-il)carbonil]fenoxi}metil)-1 H-pira il]piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo; 4-(4-{[4-(azetidin-1 -ilcarbonil)-2-fluorofenoxi]metil}-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de ter-butilo; 4-[5-ciano-4-({[1 -(metilsulfonil)piperidin-4-il]oxi}metil)-1 H-pirazol-1 -il]piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(5-dano-4-((2-fluoro-4-(1H-1 ,2,3-triazol-1-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo; 1 -(1-(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-il)-4-((2-fluoro-4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)fen pirazol-5-carbonitrilo; 4-(4-((4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)fenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxila^ de isopropilo; 4-((4-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)fenoxi)metil)-1-(1-(5-etilpirimidin-2-il)piperi^ carbonitrilo; 4-(4-((4-(2H-1 ,2,3-triazol-2-il)fenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de ¡sopropilo; 4-((4-(2H-1 ,2,3-tnazol-2-il)fenoxi)metil)-1-(1-(5-etilpinmidin-2-il)piperidin-4-il)-1 H-pirazol-5 carbonitrilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2H-1 ,2,3-tnazol-2-il)fenoxi)met¡l)-1H-p¡razol-1-¡l)piper¡din-1-carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-fluoro-4-(2H-1,2,3-triazol-2-il)fenoxi)metil)-1H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo; 1-(1-(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-il)-4-((2-fluoro-4-(2H-1 ,2,3-triazol-2-il)fenoxi)metH pirazol-5-carbonitrilo; 4-(4-((5-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)piridin-2-iloxi)m^ carboxilato de 1-metilciclopropilo; H-1 ,2,3-triazol-1-il)piridin-2-iloxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-((3-fluoro-4-(1 H-tetrazol-1 -il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-((3-fluoro-4-(1 H-tetrazol-1 -il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; 1-(1-(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-il)-4-((3-fluoro-4-(1 H-tetrazol-1 -il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; 4-((5-(1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)piridin-2-iloxi)metil)-1 -(1 -(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-il)-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; 1 -(1 -(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-il)-4-((2-metil-6-(1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)piridin-3-iloxi)metil)-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; 4-(5-ciano-4-((2-metil-6-(1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)piridin-3-iloxi)metil)-1 H-pirazol-1-il)pipe carboxilato de isopropilo; 4-(5-ciano-4-((2-metil-6-(1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)piridin-3-iloxi)metil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de 1-metilciclopropilo; 1-(1-(5-etilpirim¡din-2-il)piperidin-4-il)-4-((2-fluoro-4-(1-metil-1 H-tetrazol-5-il)fenoxi)metil)-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; 1-(4-((4-(azetidin-1-carbonil)-2-fluorofenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(4-((4-(azetidin-1 -carbonil)-2-fluorofenoxi)metil)-5-ciano-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de isopropilo; y 4-((4-(azetidin-1 -carbonil)-2-fluorofenoxi)metil)-1 -(1 -(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-il)-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico.
2. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en: 4-(5-ciano-4-{[2-fluoro-4-(1-metil-1H-tetrazol-5-il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1-carboxilato de 1-metilciclopropilo; 4-(5-ciano-4-{[4-(1 H-tetrazol-1 -il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de 1 -metilciclopropilo; 1-[1-(5-etilpirimidin-2-il)prperidin-4-¡l]-4-{[4-(1 H-tetrazol-1-il)fenoxi]metil}-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; 4-[(4-ciano-2-fluorofenoxi)metil]-1-[1-(5-etilpirimidin-2-il)piperidin-4-il]-1 H-pirazol-5-carbonitrilo; y 4-{5-ciano-4-[(4-ciano-2-fluorofenoxi)metil]-1 H-pirazol-1 -il}piper¡din-1 -carboxilato de 1-metilciclopropilo; o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico.
3. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-2, presente en una cantidad terapéuticamente eficaz, en una mezcla con al menos un excipiente aceptable desde el punto de vista farmacéutico.
4. La composición de acuerdo con la reivindicación 3 que también comprende al menos un agente farmacéutico adicional seleccionado del grupo que consiste en un agente contra la obesidad y un agente contra la diabetes.
5. La composición de acuerdo con la reivindicación 4, en donde dicho agente contra la obesidad se seleccione del grupo que consiste en dirlotapide, mitratapide, implitapide, R56918 (CAS N.° 403987), CAS N.° 913541-47-6, lorcaserin, cetilistat, PYY3.36, naltrexone, oleoil-estrone, obinepitide, pramlintide, tesofensine, leptin, liraglutide, bromocriptine, orlistat, exenatide, AOD-9604 (CAS N.° 221231-10-3) y sibutramine.
6. La composición de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el agente contra la diabetes se selecciona del grupo que consiste en metformin, acetohexamide, chlorpropamide, diabinese, glibenclamide, glipizide, glyburide, glimepiride, gliclazide, glipentide, gliquidone, glisolamide, tolazamide, tolbutamide, tendamistat, trestatin, acarbose, adiposine, camiglibose, emiglitate, miglitol, voglibose, pradimicin-Q, salbostatin, balaglitazone, ciglitazone, darglitazone, englitazone, isaglitazone, pioglitazone, rosiglitazone, troglitazone, exendin-3, exendin-4, trodusquemine, reservatrol, hyrtiosal extract, sitagliptin, vildagliptin, alogliptin y saxagliptin.
7. Un método para el tratamiento de la diabetes, que comprende administrar a un paciente que lo necesita una cantidad eficaz del compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2.
8. Un método para el tratamiento de una enfermedad, afección o trastorno metabólicos o relacionados con el metabolismo, que comprende la etapa de administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2.
9. Un método para tratar una afección seleccionada del grupo que consiste en hiperlipidemia, diabetes tipo I, diabetes mellitus tipo II, diabetes tipo I idiopática (Tipo Ib), diabetes autoinmunitaria latente en adultos, diabetes tipo II de inicio temprano, diabetes atípica de inicio en la juventud, diabetes juvenil de Inicio en la madurez, diabetes relacionada con la malnutrición, diabetes gestacional, enfermedad cardíaca coronaria, apoplejía isquémica, restenosis después de la angioplastía, enfermedad vascular periférica, claudicación intermitente, infarto de miocardio (por ejemplo, necrosis y apoptosis), dislipidemia, lipemia posprandial, afecciones relacionadas con la intolerancia a la glucosa, afecciones relacionadas con la alteración de la glucosa en plasma en ayunas, acidosis metabólica, cetosis, artritis, obesidad, osteoporosis, hipertensión, insuficiencia cardíaca congestiva, hipertrofia ventricular izquierda, enfermedad arterial periférica, retinopatía diabética, degeneración macular, cataratas, nefropatía diabética, glomeruloesclerosis, insuficiencia renal crónica, neuropatía diabética, síndrome metabólico, síndrome X, síndrome premenstrual, enfermedad cardíaca coronaria, angina de pecho, trombosis, ateroesclerosis, infarto de miocardio, accidente isquémico transitorio, apoplejía, restenosis vascular, hipergiucemia, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, resistencia a la insulina, alteración del metabolismo de la glucosa, afecciones relacionadas con la alteración de la tolerancia a la glucosa, afecciones relacionadas con la alteración de la glucosa en plasma en ayunas, obesidad, disfunción eréctil, afecciones de la piel y del tejido conectivo, úlceras en el pie y colitis ulcerosa, disfunción endotelial y alteraciones de la distensibilidad vascular, híper lipoproteinemia apo B, enfermedad de Alzheimer, esquizofrenia, deterioro cognitivo, enfermedad inflamatoria intestinal, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn y síndrome del intestino irritable, que comprende la administración de una cantidad eficaz de un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2.
10. Un método para el tratamiento de una enfermedad, afección o trastorno metabólicos o relacionados con el metabolismo, que comprende la etapa de administrar a un paciente que necesite dicho tratamiento dos composiciones farmacéuticas separadas, que comprenden: (i) una primera composición de acuerdo con la reivindicación 3; y (¡i) una segunda composición que comprende al menos un agente farmacéutico adicional seleccionado del grupo que consiste en un agente contra la obesidad y un agente contra la diabetes, y al menos un excipiente aceptable desde el punto de vista farmacéutico.
1 1. El método de acuerdo con la reivindicación 10, en donde dicha primera composición y dicha segunda composición se administran simultáneamente.
12. El método de acuerdo con la reivindicación 10, en donde dicha primera composición y dicha segunda composición se administran secuencialmente y en cualquier orden.
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