TWI433843B - Ｇｐｒ１１９調節子 - Google Patents

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Description

GPR 119調節子
本發明係關於新穎類別之氰基吡唑，含有該等化合物之醫藥組合物及其調節G蛋白偶聯受體GPR119之活性的用途。
糖尿病為由於葡萄糖恆定異常而出現高血糖含量之病症。糖尿病之最常見形式為I型糖尿病(亦稱為胰島素依賴性糖尿病)及II型糖尿病(亦稱為非胰島素依賴性糖尿病)。II型糖尿病佔所有糖尿病病例之約90%，為嚴重進行性疾病，其引起微血管併發症(包括視網膜病變、神經病變及腎病變)以及大血管併發症(包括加速性動脈粥樣硬化(accelerated atherosclerosis)、冠心病及中風)。
當前糖尿病尚無法治癒。用於該疾病之標準療法有限且集中於控制血糖含量以使併發症減至最少或延緩併發症。當前療法以胰島素抗性(二甲雙胍(metformin)、噻唑啶二酮(thiazolidinediones))或胰島素自β細胞之釋放(磺醯基脲(sulphonylureas)、艾塞那肽(exanatide))為目標。磺醯基脲及其他經由使β細胞去極化起作用之化合物促進低血糖症，因為其與循環葡萄糖濃度無關地刺激胰島素分泌。一種批准之藥物艾塞那肽僅在高葡萄糖存在下刺激胰島素分泌，但由於缺乏口服生物可用性而必須注射使用。二肽基肽酶IV抑制劑西他列汀(Sitagliptin)為增加血液中腸促胰島素(incretin)激素含量之新型藥物，腸促胰島素激素可增加 胰島素分泌、減少升糖素分泌且具有其他尚未得到充分表徵之作用。然而，西他列汀及其他二肽基肽酶IV抑制劑亦可能影響組織中其他激素及肽之含量，且此廣泛作用之長期後果尚未充分研究。
在II型糖尿病中，肌肉、脂肪及肝細胞無法對胰島素正常反應。此病狀(胰島素抗性)可能由細胞胰島素受體數目減少、細胞信號傳導路徑破壞或其兩者引起。起初，β細胞藉由增加胰島素輸出來補償胰島素抗性。然而，β細胞最終變為不能產生足以維持正常葡萄糖含量(血糖正常)之胰島素，指示發展為II型糖尿病。
在II型糖尿病中，由於胰島素抗性與β細胞功能障礙之組合而出現空腹高血糖症。β細胞缺陷功能障礙存在兩種態樣：1)基底胰島素釋放增加(在較低非刺激性葡萄糖濃度下發生)，其見於肥胖、胰島素抗性前期糖尿病階段以及II型糖尿病中，及2)回應於高血糖挑戰(hyperglycemic challenge)，胰島素釋放不能增加超過已升高之基底含量，其在前期糖尿病階段中不會發生且可能為正常血糖胰島素抗性狀態轉變為II型糖尿病之信號。用於治療後一態樣之當前療法包括用於觸發內源性胰島素儲存釋放之β細胞ATP敏感性鉀離子通道抑制劑及投與外源性胰島素。兩種療法均不能使血糖含量準確正常化且均具有引發低血糖之風險。
因此，對發現以葡萄糖依賴性方式起作用之藥劑存在極大關注。以此方式起作用之生理學信號傳導路徑已為吾人 所熟知，包括腸肽GLP-1及GIP。該等激素經由同源G蛋白偶聯受體進行信號傳導以刺激胰臟β細胞中cAMP之產生。在空腹或用餐前狀態期間，cAMP增加似乎不刺激胰島素釋放。然而，cAMP之許多生化目標(包括ATP敏感性鉀離子通道、電壓敏感性鉀離子通道及胞吐機構)調節成使得由餐後葡萄糖刺激引起之胰島素分泌顯著增強。因此，以類似方式起作用之新穎β細胞GPCR(包括GPR119)之促效調節子亦將刺激內源性胰島素釋放且促進II型糖尿病患者中葡萄糖含量之正常化。亦已證實cAMP增加(例如由GLP-1刺激引起)可促進β細胞增殖，抑制β細胞死亡且因此提高胰島質量(islet mass)。此對β細胞質量之正面影響應在胰島素產生不足之II型糖尿病中有益。
熟知代謝疾病對其他生理系統具有負面影響且通常同時發生多種疾病病況(例如「症候群X」中之I型糖尿病、II型糖尿病、葡萄糖耐受性不足、胰島素抗性、高血糖症、高脂血症、高三酸甘油酯血症、高膽固醇血症、血脂異常、肥胖症或心血管疾病)或繼發於糖尿病發生之繼發性疾病，諸如腎病及周邊神經病變。因此，糖尿病病狀之治療應對該等互有聯繫之疾病病況有益。
根據本發明，發現新穎類別之GPR 119調節子。該等化合物包括：4-{5-氰基-4-[(2,4-二氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯； 4-{5-氰基-4-[(2-甲基苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯；4-{5-氰基-4-[(2,5-二氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-{5-氰基-4-[(2,3-二氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-{4-[(4-胺甲醯基-2-氟苯氧基)甲基]-5-氰基-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-{4-[(4-胺甲醯基苯氧基)甲基]-5-氰基-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-((4-氰基苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(4-((4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯及4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-甲基-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-(2-羥基乙基)-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1-(2-羥基乙基)-1H-四唑-5-基)苯氧 基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-{[4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(4-((4-胺甲醯基-3-氟苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-{1-[2-氟-4-(甲基磺醯基)苯氧基]乙基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{1-[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]乙基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{2-[2-氟-4-(甲基磺醯基)苯基]丙基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-{5-氰基-4-[(2,3,6-三氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-{5-氰基-4-[(2,3,6-三氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-[5-氰基-4-({[2-甲基-6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基]氧 基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸異丙酯；4-[5-氰基-4-({[2-甲基-6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基]胺基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸異丙酯；4-[5-氰基-4-({[2-甲基-6-(甲基磺醯基)吡啶-3-基]胺基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{[4-(1H-四唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；1-[1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-4-{[4-(1H-四唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-5-甲腈；4-{5-氰基-4-[(3-氰基苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯；4-{5-氰基-4-[(4-氰基-3-甲基苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯；4-{5-氰基-4-[(4-氰基苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯；4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1-[1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑-5-甲腈；4-{5-氰基-4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸第三丁酯；4-{5-氰基-4-[(2-氰基-4-氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{[4-(二甲基胺甲醯基)-2-氟苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{[4-(二甲基胺甲醯基)-2-氟苯氧基]甲基}-1H- 吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-({5-氰基-1-[1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑-4-基}甲氧基)-3-氟-N,N-二甲基苯甲醯胺；4-{5-氰基-4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；(3S,4S)-4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯；(3R,4S)-4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯；(3S,4S)-4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；(3R,4R)-4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；(3S,4S)-4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯；(3S,4R)-4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯；(3S,4R)-4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；(3S,4R)-4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；(3R,4S)-4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H- 吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-{[4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯；4-(5-氰基-4-{[4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯；4-(4-((4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(4-((4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-[5-氰基-4-({[1-(甲基磺醯基)哌啶-4-基]氧基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯；4-[5-氰基-4-({2-氟-4-[(2-羥基乙基)(甲基)胺甲醯基]苯氧基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯；4-[5-氰基-4-({2-氟-4-[(3-羥基吡咯啶-1-基)羰基]苯氧基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯；4-(4-{[4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)-2-氟苯氧基]甲基}-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯；4-[5-氰基-4-({[1-(甲基磺醯基)哌啶-4-基]氧基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-((2-氟-4-(1H-1,2,3-三 唑-1-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-5-甲腈；4-(4-((4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-((4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯氧基)甲基)-1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲腈；4-(4-((4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-((4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基)甲基)-1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲腈；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-((2-氟-4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-5-甲腈；4-(4-((5-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-2-基氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(4-((5-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-2-基氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-((3-氟-4-(1H-四唑-1-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-((3-氟-4-(1H-四唑-1-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-((3-氟-4-(1H-四唑-1- 基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-5-甲腈；4-((5-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-2-基氧基)甲基)-1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲腈；1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-((2-甲基-6-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-3-基氧基)甲基)-1H-吡唑-5-甲腈；4-(5-氰基-4-((2-甲基-6-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-3-基氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-((2-甲基-6-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-3-基氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-((2-氟-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-5-甲腈；4-(4-((4-(氮雜環丁烷-1-羰基)-2-氟苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(4-((4-(氮雜環丁烷-1-羰基)-2-氟苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；及4-((4-(氮雜環丁烷-1-羰基)-2-氟苯氧基)甲基)-1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲腈；或其醫藥學上可接受之鹽。
該等化合物調節G蛋白偶聯受體之活性。更特定言之，該等化合物調節GPR119。因此，該等化合物適用於治療GPR119之活性促成疾病之病理學或症狀之疾病，諸如糖尿病。該等病狀之實例包括高脂血症、I型糖尿病、II型糖尿病、特發性I型糖尿病(Ib型)、潛伏性成人自體免疫性糖尿病(latent autoimmune diabetes in adults；LADA)、早發 性2型糖尿病(early-onset Type 2 diabetes；EOD)、青少年發作型非典型糖尿病(youth-onset atypical diabetes；YOAD)、青年人成年發作型糖尿病(maturity onset diabetes of the young；MODY)、與營養不良有關之糖尿病、妊娠期糖尿病、冠心病、缺血性中風、血管成形術後再狹窄、周邊血管疾病、間歇性跛行、心肌梗塞(例如壞死及細胞凋亡)、血脂異常、餐後脂血症、葡萄糖耐受性異常(IGT)病狀、空腹血漿葡萄糖異常病狀、代謝性酸中毒、酮病、關節炎、肥胖症、骨質疏鬆症、高血壓、充血性心臟衰竭、左心室肥大、周邊動脈疾病、糖尿病性視網膜病變、黃斑變性、白內障、糖尿病性腎病變、腎小球硬化症、慢性腎衰竭、糖尿病性神經病變、代謝症候群、症候群X、經前症候群、冠心病、心絞痛、血栓症、動脈粥樣硬化、短暫性缺血性發作、中風、血管再狹窄、高血糖症、高胰島素血症、高脂血症、高三酸甘油酯血症、胰島素抗性、葡萄糖代謝異常、葡萄糖耐受性異常病狀、空腹血漿葡萄糖異常病狀、肥胖症、勃起困難、皮膚及結締組織病症、足部潰瘍及潰瘍性結腸炎、內皮功能障礙及血管順應性異常。該等化合物可用於治療神經病症，諸如阿茲海默症(Alzheimer's disease)、精神分裂症及認知功能障礙。該等化合物亦將有益於胃腸疾病，諸如發炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、大腸急躁症等。如上所述，該等化合物亦可用於刺激肥胖患者之體重減輕，尤其是罹患糖尿病之患者。
本發明之另一實施例係關於含有本發明化合物之醫藥組合物。該等調配物將通常含有本發明化合物與至少一種醫藥學上可接受之賦形劑之混合物。該等調配物亦可含有至少一種其他醫藥劑。該等藥劑之實例包括抗肥胖劑及/或抗糖尿病劑。本發明之其他態樣係關於本發明化合物之用途，其係用於製備用以治療如本文中所描述之糖尿病及相關病狀之藥劑。
應理解，前述[發明內容]及以下[實施方式]均僅為例示性及說明性且不對所主張之本發明造成限制。
可藉由參考以下對本發明之例示性實施例及其中所包括之實例的詳細描述更容易地理解本發明。
應理解，本發明不限於特定合成製備方法，其當然可存在變化。亦應理解，本文中所用之術語僅出於描述特定實施例之目的且不欲構成限制。除指定數目外，複數與單數應可互換使用：
a.「鹵素」係指氯、氟、碘或溴原子；b.「C1 -C4 烷基」係指含有1至5個碳原子之分支鏈或直鏈烷基，諸如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基等；c.「C1 -C4 烷氧基」係指含有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈烷氧基，諸如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基等；d.「C3 -C6 環烷基」係指完全氫化且以單環形式存在之 非芳族環。該等碳環之實例包括環丙基、環丁基、環戊塞及環己基；e.「C1 -C4 鹵烷基」係指經一或多個鹵素原子取代之含有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈烷基；f.「C1 -C4 鹵烷氧基」係指經一或多個鹵素原子取代之含有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈烷氧基；g.「5至10員雜芳基」意謂具有總共5至10個環原子且含有1、2、3或4個獨立地選自氧、氮及硫之雜原子且具有1、2或3個環之碳環芳族系統，其中該等環可稠合。術語「稠合」意謂所存在(亦即連接或形成)之第二環具有與第一環共有(亦即共用)之兩個相鄰原子。術語「稠合」與術語「縮合」等效。術語「雜芳基」涵蓋芳族基團，諸如吡啶、噠嗪、吡嗪、嘧啶、咪唑并[1,2-a]吡啶、咪唑并[1,5-a]吡啶、[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶、[1,2,4]三唑并[4,3-b]噠嗪、[1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶及[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶；h.「治療有效量」意謂達成以下目的時本發明化合物之量：(i)治療或預防特定疾病、病狀或病症，(ii)減輕、改善或消除特定疾病、病狀或病症之一或多種症狀，或(iii)預防或延緩本文中所描述之特定疾病、病狀或病症之一或多種症狀發作；i.「患者」係指溫血動物，諸如天竺鼠、小鼠、大鼠、沙鼠、貓、兔、犬、猴子、黑猩猩及人類； j.「治療」涵蓋預防性(亦即防治性)治療及緩解性治療，亦即減輕、緩和或減緩患者疾病(或病狀)之進展或與疾病相關之任何組織損傷；k.除非另有說明，否則如本文中所用之術語「調節」係指用本發明化合物活化G蛋白偶聯受體GPR119；l.「醫藥學上可接受」指示物質或組合物必須在化學上及/或毒理學上與構成調配物之其他成分及/或用其治療之哺乳動物相容。
m.「鹽」欲指醫藥學上可接受之鹽及適用於工業製程(諸如化合物製備)之鹽。
n.視化合物之實際結構而定，「醫藥學上可接受之鹽」欲指「醫藥學上可接受之酸加成鹽」或「醫藥學上可接受之鹼加成鹽」。
o.「醫藥學上可接受之酸加成鹽」意欲適用於鹼化合物或其任何中間物之任何無毒有機或無機酸加成鹽。形成合適鹽之說明性無機酸包括鹽酸、氫溴酸、硫酸及磷酸以及酸金屬鹽，諸如正磷酸氫二鈉及硫酸氫鉀。形成合適鹽之說明性有機酸包括單羧酸、二羧酸及三羧酸。該等酸之說明性實例為例如乙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、反丁烯二酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、順丁烯二酸、羥基順丁烯二酸、苯甲酸、羥基-苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水楊酸、2-苯 氧基苯甲酸、對甲苯磺酸及磺酸(諸如甲烷磺酸及2-羥基乙烷磺酸)。該等鹽可以水合形式或實質上無水形式存在。通常，該等化合物之酸加成鹽可溶於水及各種親水性有機溶劑中。
p.「醫藥學上可接受之鹼加成鹽」意欲適用於化合物或其任何中間物之任何無毒有機或無機鹼加成鹽。形成合適鹽之說明性鹼包括鹼金屬氫氧化物或鹼土金屬氫氧化物，諸如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鎂或氫氧化鋇；氨，及脂族、脂環族或芳族有機胺，諸如甲胺、二甲胺、三甲胺及甲基吡啶。
q.「異構體」意謂如下文所定義之「立體異構體」及「幾何異構體」。「立體異構體」係指具有一或多個對掌性中心且各中心可以R或S組態存在之化合物。立體異構體包括所有非對映異構、對映異構及差向異構形式以及外消旋體及其混合物。「幾何異構體」係指可以順式(cis)、反式(trans)、逆式(anti)、同式(syn)、異側(E)及同側(Z)形式存在之化合物以及其混合物。
某些本發明化合物可以幾何異構體形式存在。化合物可具有一或多個不對稱中心，因此以兩種或兩種以上立體異構形式存在。本發明包括本發明化合物之所有個別立體異構體及幾何異構體以及其混合物。個別對映異構體可藉由 對掌性分離或在合成中使用相關對映異構體獲得。如上所述，一些化合物以異構體形式存在。該等異構體混合物可基於其物理化學差異藉由熟習此項技術者熟知的方法(諸如藉由層析及/或分步結晶)分離為其個別異構體。亦可藉由與合適光活性化合物(例如對掌性助劑，諸如對掌性醇或莫夏氏酸氯化物(Mosher's acid chloride))反應將對映異構混合物轉化為非對映異構混合物，分離非對映異構體且將個別非對映異構體轉化(例如水解)為相應純對映異構體來分離對映異構體。亦可藉由使用對掌性HPLC管柱分離對映異構體。或者，可藉由使用光活性起始物質、藉由使用光活性試劑、基質、催化劑或溶劑進行不對稱合成或藉由不對稱轉型使一種立體異構體轉化為另一立體異構體來合成特定立體異構體。
本發明亦涵蓋本發明之同位素標記化合物，除其中一或多個原子置換為具有與在自然界中通常發現之原子質量或質量數不同之原子質量或質量數的原子外，其與本文中所述之化合物相同。可併入本發明化合物中之同位素之實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘及氯之同位素，分別諸如2 H、3 H、11 C、13 C、14 C、13 N、15 N、15 O、17 O、18 O、31 P、32 P、35 S、18 F、123 I、125 I及36 Cl。
本發明之某些同位素標記化合物(例如經3 H及14 C標記之化合物)適用於化合物及/或受質組織分佈分析法中。某些包括氚、14 C、35 S及125 I之同位素標記配位體可適用於放射 性配位體結合分析法中。氚(亦即3 H)及碳-14(亦即14 C)同位素由於其易於製備及偵測而尤其較佳。此外，以諸如氘(亦即2 H)之重同位素進行取代可產生由較高代謝穩定性引起的某些治療優勢(例如活體內半衰期增加或劑量需求降低)且因此在一些情況下可為較佳的。諸如15 O、13 N、11 C及18 F之正電子發射同位素適用於正電子發射斷層攝影法(PET)研究以檢驗受體佔用率。本發明之同位素標記化合物通常可根據與下文流程及/或實例中所揭示類似之程序藉由用同位素標記試劑取代非同位素標記試劑來製備。
某些本發明化合物可以一種以上晶形存在(通常稱為「多晶型物」)。多晶型物可藉由以下方法製備：在各種條件下結晶，例如使用不同溶劑或不同溶劑混合物進行再結晶；在不同溫度下結晶；及/或在結晶期間使用各種冷卻模式(範圍為極快至極慢冷卻)。亦可藉由加熱或熔融本發明化合物，接著逐漸或快速冷卻來獲得多晶型物。可藉由固體探針NMR光譜學、IR光譜學、差示掃描熱量測定、粉末X射線繞射或此類其他技術測定多晶型物之存在。
此外，本發明化合物可以未溶劑化形式以及與醫藥學上可接受之溶劑(諸如水、乙醇及其類似物)形成之溶劑化形式存在。通常，出於本發明之目的，溶劑化形式視為等效於未溶劑化形式。化合物亦可以一或多種結晶狀態(亦即共晶體、多晶型物)存在或其可以非晶形固體形式存在。本發明及申請專利範圍涵蓋所有該等形式。
在本發明組合物之一實施例中，組合物進一步包括至少一種選自由抗肥胖劑及抗糖尿病劑組成之群的其他藥劑。例示性抗肥胖劑包括迪羅哌德(dirlotapide)、米瑞他匹(mitratapide)、英普他派(implitapide)、R56918(CAS編號403987)、CAS編號913541-47-6、氯卡色林(lorcaserin)、賽利司他(cetilistat)、PYY3-36 、納曲酮(naltrexone)、油醯基-雌酮、奧尼匹肽(obinepitide)、普蘭林肽(pramlintide)、特索芬辛(tesofensine)、瘦素(leptin)、利拉魯肽(liraglutide)、溴隱亭(bromocriptine)、羅氏鮮(orlistat)、艾塞那肽(exenatide)、AOD-9604(CAS編號221231-10-3)及諾美婷(sibutramine)。例示性抗糖尿病劑包括二甲雙胍(metformin)、乙醯苯磺醯環己脲(acetohexamide)、氯磺丙脲(chlorpropamide)、特泌胰(diabinese)、格列本脲(glibenclamide)、格列吡嗪(glipizide)、格列本脲(glyburide)、格列美脲(glimepiride)、格列齊特(gliclazide)、格列太特(glipentide)、格列喹酮(gliquidone)、格列索脲(glisolamide)、妥拉磺脲(tolazamide)、甲苯磺丁脲(tolbutamide)、澱粉酶抑肽(tendamistat)、萃他汀(trestatin)、醣祿(acarbose)、脂解素(adiposine)、卡格列波糖(camiglibose)、乙格列酯(emiglitate)、米格列醇(miglitol)、伏格列波糖(voglibose)、普拉米星-Q(pradimicin-Q)、沙波他汀(salbostatin)、巴格列酮 (balaglitazone)、環格列酮(ciglitazone)、達格列酮(darglitazone)、恩格列酮(englitazone)、伊薩列酮(isaglitazone)、吡格列酮(pioglitazone)、羅格列酮(rosiglitazone)、曲格列酮(troglitazone)、腸促胰島素類似物-3(exendin-3)、腸促胰島素類似物-4(exendin-4)、特羅杜明(trodusquemine)、白藜蘆醇(reservatrol)、西替歐醛萃取物(hyrtiosal extract)、西他列汀(sitagliptin)、維格列汀(vildagliptin)、阿格列汀(alogliptin)及沙格列汀(saxagliptin)。
在本發明方法之另一實施例中，本發明之化合物或組合物可以有效治療選自由以下組成之群之病狀的量投與：高脂血症、I型糖尿病、II型糖尿病、特發性I型糖尿病(Ib型)、潛伏性成人自體免疫性糖尿病(LADA)、早發性2型糖尿病(EOD)、青少年發作型非典型糖尿病(YOAD)、青年人成年發作型糖尿病(MODY)、與營養不良有關之糖尿病、妊娠期糖尿病、冠心病、缺血性中風、血管成形術後再狹窄、周邊血管疾病、間歇性跛行、心肌梗塞(例如壞死及細胞凋亡)、血脂異常、餐後脂血症、葡萄糖耐受性異常(IGT)病狀、空腹血漿葡萄糖異常病狀、代謝性酸中毒、酮病、關節炎、肥胖症、骨質疏鬆症、高血壓、充血性心臟衰竭、左心室肥大、周邊動脈疾病、糖尿病性視網膜病變、黃斑變性、白內障、糖尿病性腎病變、腎小球硬化症、慢性腎衰竭、糖尿病性神經病變、代謝症候群、症候 群X、經前症候群、冠心病、心絞痛、血栓症、動脈粥樣硬化、心肌梗塞、短暫性缺血性發作、中風、血管再狹窄、高血糖症、高胰島素血症、高脂血症、高三酸甘油酯血症、胰島素抗性、葡萄糖代謝異常、葡萄糖耐受性異常病狀、空腹血漿葡萄糖異常病狀、肥胖症、勃起困難、皮膚及結締組織病症、足部潰瘍及潰瘍性結腸炎、內皮功能障礙及血管順應性異常、高載脂蛋白B脂蛋白血症、阿茲海默症、精神分裂症、認知功能障礙、發炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病及大腸急躁症。
在另一實施例中，該方法進一步包括投與第二組合物，該第二組合物包含至少一種選自由抗肥胖劑及抗糖尿病劑組成之群的其他藥劑及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑。該方法可用於同時或依序且以任何次序投與組合物。
在又一實施例中，本發明化合物適用於製造用以治療疾病、病狀或病症之藥劑，其調節G蛋白偶聯受體GPR119之活性。此外，該等化合物適用於製備用以治療糖尿病或與該等糖尿病相關之病態之藥劑。
合成
出於說明目的，下文描繪之反應流程提供用於合成本發明化合物以及關鍵中間物之可能途徑。關於個別反應步驟之更詳細描述，參見以下實例部分。熟習此項技術者應瞭解，可使用其他合成途徑合成本發明化合物。儘管特定起始物質及試劑在流程中描繪且在下文論述，但可容易地以 其他起始物質及試劑替代以提供多種衍生物及/或反應條件。此外，可根據本揭示案使用熟習此項技術者熟知的習知化學過程進一步改質由下述方法製備之多種化合物。
可藉由包括與化學技術中所熟知類似之製程的合成途徑，尤其根據本文中所含之描述合成本發明化合物。起始物質通常可自商業來源(諸如Aldrich Chemicals(Milwaukee,WI))獲得或使用熟習此項技術者已知的方法容易地製備(例如藉由Louis F.Fieser及Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis ，第1-19卷，Wiley,New York(1967-1999版)或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie ,4,Aufl.編，Springer-Verlag,Berlin，包括增刊(亦可經由Beilstein 線上資料庫獲得)中大體描述之方法製備)。
可使用與此項技術中已知用於產生醚類似之方法製備本發明化合物。讀者可參閱以下文獻，諸如：1)Hughes,D.L.；Organic Reactions 1992,42 Hoboken,NJ,United States；2)Tikad,A.；Routier,S.；Akssira,M.；Leger,J.-M.I；Jarry,C.；Guillaumet,G.Synlett 2006,12 ,1938-42；及3)Loksha,Y.M.；Globisch,D.；Pedersen,E.B.；La Colla,P.；Collu,G.；Loddo,R.J.Het.Chem.2008,45 ,1161-6，其更詳細地描述該等反應。
流程1可用於製備式N化合物，其中 X為或；Z為-C(O)-O-Ro 或經C1 -C4 烷基、CF3 、鹵素、氰基、C3 -C6 環烷基或如下C3 -C6 環烷基取代之嘧啶，其中該環烷基部分之一個碳原子可視情況經甲基或乙基取代；m為1、2或3；n為0、1或2；R1 為氫、C1 -C4 烷基或C3 -C6 環烷基；R2a 為氫、氟或C1 -C4 烷基；各R3 個別地選自由以下組成之群：羥基、鹵素、氰基、C1 -C4 烷基、C1 -C4 烷氧基、C1 -C4 鹵烷基、C1 -C4 鹵烷氧基、-SO2 -R7 、-P(O)(OR8 )(OR9 )、-C(O)-NR8 R9 、-N(CH3 )-CO-O-(C1 -C4 )烷基、-NH-CO-O-(C1 -C4 )烷基、-NH-CO-(C1 -C4 )烷基、-N(CH3 )-CO-(C1 -C4 )烷基、-NH-(CH2 )2 -OH及含有1、2、3或4個各自獨立地選自氧、氮及硫之雜原子的5員至6員雜芳基，其中該雜芳基上之碳原子視情況經R4a 取代或該雜芳基上之氮原子視情況經R4b 取代；R4a 為氫、C1 -C4 烷基、C1 -C4 烷氧基、C1 -C4 鹵烷基或鹵素，其中該烷基視情況經羥基或C1 -C4 烷氧基取代；R4b 為氫、C1 -C4 烷基、-CH2 -C1 -C3 鹵烷基、-C2 -C4 烷基-OH或-CH2 -C1 -C4 烷氧基；R5 為氫，或當R1 為氫時，則R5 為氫或C1 -C4 烷基； R6 為C1 -C4 烷基或C3 -C6 環烷基，其中該環烷基部分之一個碳原子可視情況經甲基或乙基取代；R7 由C1 -C4 烷基、C3 -C6 環烷基、NH2 或-(CH2 )2 -OH表示；R8 由氫或C1 -C4 烷基表示；及R9 由氫、C1 -C4 烷基、C3 -C6 環烷基、-(CH2 )2 -OH、-(CH2 )2 -O-CH3 、-(CH2 )3 -OH、-(CH2 )3 -O-CH3 、3-氧雜環丁烷基或3-羥基環丁基表示；或當R3 為-C(O)-NR8 R9 時，R8 及R9 可其所連接之氮原子共同形成氮雜環丁烷、吡咯啶、哌啶或嗎啉環。
在步驟1中，視所用溶劑而定，可經由式A化合物與市售化合物B(Sigma-Aldrich)於不同溶劑系統(包括(但不限於)乙醇、甲苯及乙腈)中在22℃至130℃範圍內之溫度下歷時1至72小時時段之縮合反應製備式C化合物。在式A化合物為氯化氫或三氟乙酸鹽之情況下，可添加1至3當量的鹼改質劑(諸如乙酸鈉或碳酸氫鈉)以中和鹽。反應可在極性質子性溶劑(諸如甲醇及乙醇)中在22℃至85℃範圍內之溫度下進行。用於此轉化之典型條件包括使用在85℃下加熱3小時之含3當量乙酸鈉之乙醇。
可以經取代或未經取代之4-哌啶酮鹽酸鹽為起始物質經由四步驟程序製備式A化合物(J .Med .Chem .2004 ,47 ,2180)。首先在過量鹼存在下用適當氯甲酸烷基酯或二碳酸雙(烷基)酯處理該等鹽以形成相應胺基甲酸烷基酯。接著使酮基與第三丁氧基羰基醯肼縮合以形成相應經N -(第 三丁氧基)羰基(BOC)保護之腙衍生物。其接著使用還原劑(諸如氰基硼氫化鈉或三乙醯氧基硼氫化鈉)還原為相應經BOC保護之肼衍生物。最終，在酸性條件(諸如三氟乙酸或鹽酸)下裂解N -(第三丁氧基)羰基得到式A化合物，其通常以相應鹽(例如二鹽酸鹽)形式分離及使用。
在步驟2中，可自式C化合物經由利用桑德邁爾反應(Sandmeyer reaction)形成中間物重氮鹽來製備式D化合物(Comp .Org .Synth .,1991 ,6,203)。該等鹽可經由利用亞硝酸鈉及酸水溶液(諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及乙酸，單獨或以組合形式)對式C化合物進行重氮化來製備。該反應通常於水中在0℃至100℃下進行。或者，可在0℃至95℃範圍內之溫度下利用使用亞硝酸烷基酯(諸如亞硝酸第三丁酯)及溶劑(諸如乙腈)之無水條件(J .Med .Chem .2006 ,49 ,1562)。接著使該等重氮中間物與銅鹽(諸如溴化銅(II)、溴化銅(I))或三溴甲烷反應以形成式D化合物。用於此轉化之典型條件包括在65℃下於乙腈中使用亞硝酸第三丁酯、溴化銅(II)歷時30分鐘。
在步驟3中，可自式D化合物經由在0℃至110℃範圍內之溫度下於極性非質子性溶劑(諸如四氫呋喃、乙醚、1,4-二噁烷或1,2-二甲氧基乙烷)中使用還原劑(諸如氫化鋰鋁、硼氫化鈉、硼氫化鋰、硼烷-二甲基硫醚、硼烷-四氫呋喃)歷時1至24小時製備式E化合物。典型條件包括在70℃下於四氫呋喃中使用硼烷-二甲基硫醚歷時14小時。
為自式E化合物製備式F化合物，必須引入氰基(步驟 4)。此舉可經由多種條件達成。一種引入氰基之方法可為在22℃至200℃範圍內之溫度下於極性非質子性溶劑(諸如N,N -二甲基甲醯胺(DMF)、N -甲基吡咯啶酮(NMP)、N,N -二甲基乙醯胺(DMA))中使用銅鹽(諸如氰化銅)歷時1至24小時。用於此轉化之典型方案為在165℃下加熱含氰化銅之N,N -二甲基甲醯胺5小時。
或者在步驟4中，鹼金屬氰化物鹽(諸如氰化鉀或氰化鈉)可在22℃至100℃範圍內之溫度下於極性非質子性溶劑(諸如乙腈及二甲亞碸)中與催化劑(諸如18-冠-6(US2005020564))及/或溴化四丁銨(J .Med .Chem .2003 ,46 ,1144)結合使用以向此模板添加氰基。
最終，步驟4中描繪之轉化過程通常使用金屬催化。催化程序中所用之常用氰化物鹽包括氰化鋅、氰化銅、氰化鈉及六氰亞鐵酸鉀。金屬催化劑可為銅催化劑(諸如碘化銅)及/或鈀催化劑(諸如參(二苯亞甲基丙酮)二鈀(Pd2 (dba)3 )、肆-三苯基膦鈀(Pd(PPh3 )4 )或二氯(二苯基-膦基二茂鐵)鈀(Pd(dppf)Cl2 ))。該等催化劑可單獨使用或以與以上任何氰化物鹽以任何組合形式使用。可向該等反應中添加配位體(諸如1,1'-雙(二苯膦基)-二茂鐵(dppf))或金屬添加劑(諸如鋅或銅金屬)。反應於極性非質子性溶劑(諸如NMP、DMF、DMA)中在存在或不存在水作為添加劑下進行。反應在22℃至150℃範圍內之溫度下經由習知或微波加熱進行1至48小時且可於密封或非密封反應容器中進行。用於步驟4之典型條件包括於DMA中使用氰化鋅、 Pd2 (dba)3 、dppf及鋅塵在微波中在120℃下加熱1小時(J .Med .Chem .2005 ,48 ,1132)。
在步驟5中，可自式F化合物經由光延反應(Mitsunobu reaction)合成式G化合物。光延反應已於合成文獻(例如Chem .Asian .J .2007 ,2 ,1340；Eur .J .Org .Chem .2004 ,2763；S.Chem .Eur .J .2004 ,10 ,3130)中評述且可使用該等評述中列出之多種合成方案。利用偶氮二羧酸酯(諸如偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二-第三丁酯(TBAD)、偶氮二甲酸二異丙酯(DIAD))及膦試劑(諸如三苯基膦(PPh3 )、三丁基膦(PBu3 )及聚合物支撐之三苯基膦(PS-PPh3 ))之光延反應方案與式F化合物及通式結構X-OH之化合物組合使用。視所用溶劑及偶氮二羧酸酯而定，在0℃至130℃範圍內之溫度下，此反應中所用之溶劑可包括非質子性溶劑，諸如甲苯、苯、THF、1,4-二噁烷及乙腈。用於此轉化之典型條件為在22℃下於1,4-二噁烷中使用DEAD及PS-PPh3 歷時15小時。
用於製備式G化合物之光延反應之替代方案為在鹼(諸如三乙胺或吡啶)存在下分別使用甲烷磺醯氯或對甲苯磺醯氯將式F化合物轉化為相應甲烷磺酸酯或對甲苯磺酸酯衍生物。接著使中間物磺酸酯與通式X-OH之化合物在鹼(諸如碳酸鉀、氫化鈉或第三丁醇鉀)存在下組合以產生式G化合物。
可自式F化合物以3個步驟製備式K化合物，其中R1 為C1 -C4 烷基或C3 -C6 環烷基：1)使一級醇氧化為相應式H之醛 (步驟6，流程1)，2)使式H之醛中間物與式R1 M之有機金屬試劑(其中M為鋰(Li)或鹵化鎂(MgCl、MgBr或MgI))反應產生式J之二級醇，其中R1 為C1 -C4 烷基或C3 -C6 環烷基(步驟7)，及3)使式J之二級醇與式X-OH之酚在光延反應條件下反應(步驟8)。
在步驟6(流程1)中，可經由氧化程序形成式H化合物，氧化程序包括在22℃至80℃下於溶劑(包括(但不限於)二氯甲烷、乙腈、己烷或丙酮，單獨或以組合形式)中使用1至20當量活化二氧化錳歷時1至7小時。或者，此氧化可在0℃至22℃範圍內之溫度下於二氯甲烷或氯仿中在0.1至1當量2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基(TEMPO)存在下用1至3當量三氯異三聚氰酸進行0.1至12小時。用於此轉化之典型條件為在22℃下於二氯甲烷中在0.1當量TEMPO存在下使用三氯異三聚氰酸歷時1小時。
流程1中亦展示Y為NR5 之本發明化合物之製備。可自中間物式H化合物(流程1)藉由與式X-NH-R5 之胺基化合物在還原胺化條件下反應來製備式L化合物(步驟9)(J .Org .Chem .,1996 ,61 ,3849；Org .React .2002 ,59,1)。類似地，可藉由以下方式自式J中間物(其中R1 為C1 -C4 烷基或C3 -C6 環烷基)以兩個步驟製備式N化合物(其中R1 為C1 -C4 烷基或C3 -C6 環烷基)：1)氧化為相應式M之酮(步驟10)，及2)使式M之酮與式X-NH-R5 之胺基化合物在還原胺化條件下反應(步驟11)。或者，可自相應式L化合物(其中R5 為H)或相應式N化合物(其中R5 為H)藉由利用式(C1 -C4 )-Cl、 (C1 -C4 )-Br或(C1 -C4 )-I之烷基鹵化物在鹼存在下進行烷基化來製備式L及式N之化合物(其中R5 為C1 -C4 烷基)。
亦可如流程2及3中所示製備本發明化合物，其中X、Z、R1 、R2a 、R3 、R4 、R5 、R6 、R7 、R8 及R9 與流程1中所述相同。詳言之，可如流程2中所示製備式R化合物。
在流程2之步驟1中，可自式H之醛(亦參看流程1)經由在-78℃至22℃範圍內之溫度下於溶劑(包括甲醇、乙醇或四氫呋喃)中使用(重氮甲基)膦酸二甲酯或1-重氮基-2-側氧基丙基膦酸二甲酯及鹼(諸如碳酸鉀或第三丁醇鉀)歷時0.1 至24小時來形成式O化合物。用於此轉化之典型條件包括在22℃下於甲醇中使用1-重氮基-2-側氧基丙基膦酸二甲酯及2當量碳酸鉀歷時0.75小時。
在步驟2中，可自式O化合物經由利用通式結構X-P之化合物(其中P為鹵基或三氟甲磺酸酯基)進行之金屬催化之薗頭偶合程序(Sonagashira coupling procedure)形成式Q化合物。薗頭反應已有廣泛評述(Chem .Rev .2007 ,107 ,874；Angew .Chem .Int .Ed .2007,46,834；Angew .Chem .Int .Ed .2008,47,6954)且可使用該等評述中列出之多種合成方案來合成式Q化合物。通常，此反應中所用之金屬催化劑可為銅催化劑(諸如碘化銅)及/或鈀催化劑(諸如Pd2 (dba)3 、Pd(PPh3 )4 、Pd(dppf)Cl2 或Pd(PPh3 )2 Cl2 )。該等催化劑可單獨使用或以任何組合形式使用。鹼添加劑通常用於此反應中且可包括胺鹼(諸如二乙胺、三乙胺、二異丙基乙胺或吡咯啶)或無機鹼(諸如碳酸鉀或氟化鉀)。反應於溶劑(諸如二氯甲烷、氯仿、乙腈、DMF、甲苯或1,4-二噁烷)中在存在或不存在水作為添加劑下進行。視溶劑而定，反應在0℃至180℃範圍內之溫度下進行0.1至48小時範圍內之時間。用於此轉化之典型條件包括在90℃下於DMF中使用CuI及Pd(PPh3 )2 Cl2 歷時2小時。
最終，在步驟3中可自式Q化合物在過渡金屬催化劑存在下經由氫化作用形成式R化合物。常用催化劑包括使用5-20%披鈀碳或5-20%碳上氫氧化鈀。該等反應可在Parr搖動器裝置或H-Cube氫化流式反應器(ThalesNano,U.K.)中 在22℃至50℃之溫度下於極性溶劑(諸如四氫呋喃、乙酸乙酯、甲醇或乙醇)中在1至50 psi範圍內之氫氣壓力下進行0.1至24小時範圍內之時間。用於步驟3之典型條件包括在設定為「全氫」設定之H-Cube流式裝置上以1 mL/min之流動速率流經10%披鈀碳濾筒於乙酸乙酯中使用式Q化合物。
流程3展示製備式W化合物之方法。
在流程3之步驟1中，可用諸如三溴化磷或四溴化碳及三苯基膦之試劑處理式F化合物(亦參見流程2)得到式S化合物。在步驟2中，接著使式S化合物與三苯基膦於溶劑(諸如二氯甲烷、氯仿、甲苯、苯、四氫呋喃(THF)或乙腈)中反應得到式T之三苯基鏻鹽。接著式T之鹽與式U之羰基化 合物於溶劑(諸如THF、乙醚或1,4-二噁烷)中在鹼(諸如正丁基鋰、雙(三甲基矽烷基)胺基鈉、雙(三甲基矽烷基)胺基鋰、雙(三甲基矽烷基)胺基鉀或二異丙胺基鋰)存在下組合產生式V之烯化合物，其通常分離為E幾何異構體與Z幾何異構體之混合物(步驟3)。此反應(通常稱為維蒂希烯化反應(Wittig olefination reaction))已於文獻中廣泛評述(Chem .Rev .1989 ,89 ,863；Modern Carbonyl Olefination 2004 ,1-17；Liebigs Ann .Chem .1997 ,1283)。
在步驟4中，自式V化合物在過渡金屬催化劑存在下經由氫化作用形成式W化合物。常用催化劑包括使用5-20%披鈀碳或5-20%碳上氫氧化鈀。該等反應可以與關於流程2之步驟3所述類似之方式進行。
或者，可自式H之醛經由與式AA之三苯基鏻鹽(步驟5，流程3)進行之維蒂希反應製備式W化合物。與步驟3相同，此反應產生式V之烯化合物，其通常亦分離為E幾何異構體與Z幾何異構體之混合物且可藉由氫化作用轉化為式W化合物。經由使相應醇轉化為溴化物且接著與三苯基膦反應以與用於製備式T之鹽類似之方式來獲得式AA鹽。
可自式J之二級醇(參見流程2)或式M之酮(參見流程2)經由與流程3中所示類似的反應程序製備下文所示之式BB化合物，其中X、Z、R1 及R2a 如流程1中所定義。式J化合物轉化為相應溴化物，接著與通式X-CHO之醛進行維蒂希烯化反應產生式CC之烯。亦可經由式M之酮與通式結構X-CH2 -PPh3 + Br- 之鹽進行維蒂希反應獲得式CC之烯。接著 藉由氫化作用使式CC之烯轉化為式BB化合物。
在某些情況下，可改變流程1、2及3中所示之步驟次序。舉例而言，在流程1中，有時可在吡唑環上引入氰基作為最後步驟，亦即顛倒步驟4及步驟5之進行次序。此外，在某些情況下，較佳在合成中稍後(甚至作為最後步驟)在基團X上引入或改質取代基R3 。舉例而言，當R3 為SO2 R7 時，可在最後步驟中藉由使帶有通式S-R7 之取代基之相應化合物發生氧化形成SO2 R7 基團。
可以3,3-二氟-4,4-二羥基-1-哌啶甲酸1,1-二甲基乙酯(WO 2008121687)為起始物質根據與流程1、2及3中所示類似之程序製備本發明化合物。以與關於流程1中製備式A中間物所述類似之方式，此物質可轉化為式DD之肼衍生物，其接著與流程1中式A中間物類似地使用。
如熟習此項技術者顯而易知，可能必需保護中間物之遠端官能基(例如一級胺或二級胺)。該保護之需要將視遠端 官能基之性質及製備方法之條件而變化。合適胺基保護基(NH-Pg)包括乙醯基、三氟乙醯基、第三丁氧基羰基(BOC)、苯甲氧基羰基(CBZ)及9-茀基亞甲基氧基羰基(Fmoc)。類似地，「羥基保護基」係指阻斷或保護羥基官能基之羥基取代基。合適羥基保護基(O-Pg)包括例如烯丙基、乙醯基、矽烷基、苯甲基、對甲氧基苯甲基、三苯甲基及其類似基團。熟習此項技術者可容易地確定該保護之需要。關於保護基及其使用之一般性描述，請參見T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis ,John Wiley & Sons,New York,1991。
如上所述，一些本發明化合物為酸性且其與醫藥學上可接受之陽離子形成鹽。一些本發明化合物為鹼性且與醫藥學上可接受之陰離子形成鹽。所有該等鹽均屬於本發明之範疇且其可由習知方法製備，諸如適當時於水性、非水性或部分水性介質中組合酸性實體與鹼性實體，通常以化學計量比率組合。適當時藉由過濾、藉由利用非溶劑進行沈澱接著過濾、藉由蒸發溶劑或在水溶液之情況下藉由凍乾來回收鹽。化合物根據此項技術中已知的程序以結晶形式獲得，諸如藉由溶解於適當溶劑(諸如乙醇、己烷或水/乙醇混合物)中。
醫療用途
本發明化合物調節G蛋白偶聯受體GPR119之活性。因此，該等化合物適用於預防及治療GPR119活性有助於疾病之病理學或症狀之疾病，諸如糖尿病。因此，本發明之 另一態樣包括用於治療個體之代謝疾病及/或代謝相關性病症之方法，其包含投與需要該治療之個體治療有效量之本發明化合物、該化合物之鹽或含有該化合物之醫藥組合物。代謝疾病及代謝相關性病症選自(但不限於)高脂血症、I型糖尿病、II型糖尿病、特發性I型糖尿病(Ib型)、潛伏性成人自體免疫性糖尿病(LADA)、早發性2型糖尿病(EOD)、青少年發作型非典型糖尿病(YOAD)、青年人成年發作型糖尿病(MODY)、與營養不良有關之糖尿病、妊娠期糖尿病、冠心病、缺血性中風、血管成形術後再狹窄、周邊血管疾病、間歇性玻行、心肌梗塞(例如壞死及細胞凋亡)、血脂異常、餐後脂血症、葡萄糖耐受性異常(IGT)病狀、空腹血漿葡萄糖異常病狀、代謝性酸中毒、酮病、關節炎、肥胖症、骨質疏鬆症、高血壓、充血性心臟衰竭、左心室肥大、周邊動脈疾病、糖尿病性視網膜病變、黃斑變性、白內障、糖尿病性腎病變、腎小球硬化症、慢性腎衰竭、糖尿病性神經病變、代謝症候群、症候群X、經前症候群、冠心病、心絞痛、血栓症、動脈粥樣硬化、心肌梗塞、短暫性缺血性發作、中風、血管再狹窄、高血糖症、高胰島素血症、高脂血症、高三酸甘油酯血症、胰島素抗性、葡萄糖代謝異常、葡萄糖耐受性異常病狀、空腹血漿葡萄糖異常病狀、肥胖症、勃起困難、皮膚及結締組織病症、足部潰瘍、內皮功能障礙、高載脂蛋白B脂蛋白血症及血管順應性異常。此外，化合物可用於治療神經病，諸如阿茲海默症、精神分裂症及認知功能障礙。化合 物亦將有益於胃腸道疾病，諸如發炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病、大腸急躁症等。如上所述，化合物亦可用於刺激肥胖患者之體重減輕，尤其罹患糖尿病之患者。
根據前述內容，本發明進一步提供用於預防或改善有需要之個體之上述任何疾病或病症之症狀的方法，該方法包含投與個體治療有效量之本發明化合物。本發明之其他態樣包括製備用於治療糖尿病及其相關併發症之藥劑。
為展現上述治療性質，需要投與足以調節G蛋白偶聯受體GPR119之活化之量的化合物。此量可視所治療之特定疾病/病狀、患者疾病/病狀之嚴重性、患者、所投與之特定化合物、投藥途徑及患者體內其他潛在疾病病況之存在等而變化。當全身性投與時，化合物通常在約0.1毫克/公斤/天至約100毫克/公斤/天之劑量範圍內對以上列舉之任何疾病或病狀展現其作用。可能需要重複每天投藥且將根據以上概述之病狀而變化。
本發明化合物可由多種途徑投與。其可經口投與。化合物亦可非經腸(亦即皮下、靜脈內、肌肉內、腹膜內或鞘內)、經直腸或局部投與。
共同投藥
本發明化合物亦可與其他用於治療本文中所描述之疾病、病狀及/或病症之醫藥劑結合使用。因此，亦提供包括投與本發明化合物與其他醫藥劑之組合的治療方法。可與本發明化合物組合使用之合適醫藥劑包括抗肥胖劑(包括食慾抑制劑)、抗糖尿病劑、抗高血糖劑、降脂劑及抗 高血壓劑。
合適抗糖尿病劑包括乙醯輔酶A羧化酶-2(ACC-2)抑制劑、二醯基甘油O-醯基轉移酶1(DGAT-1)抑制劑、磷酸二酯酶(PDE)-10抑制劑、磺醯脲(例如乙醯苯磺醯環己脲、氯磺丙脲、特泌胰、格列本脲、格列吡嗪、格列本脲、格列美脲、格列齊特、格列太特、格列喹酮、格列索脲、妥拉磺脲及甲苯磺丁脲)、美格替耐(meglitinide)、α-澱粉酶抑制劑(例如澱粉酶抑肽、萃他汀及AL-3688)、α-葡萄糖苷水解酶抑制劑(例如醣祿)、α-葡糖苷酶抑制劑(例如脂解素、卡格列波糖、乙格列酯、米格列醇、伏格列波糖、普拉米星-Q及沙波他汀)、PPARγ促效劑(例如巴格列酮、環格列酮、達格列酮、恩格列酮、伊薩列酮、吡格列酮、羅格列酮及曲格列酮)、PPAR α/γ促效劑(例如CLX-0940、GW-1536、GW-1929、GW-2433、KRP-297、L-796449、LR-90、MK-0767及SB-219994)、雙胍(例如二甲雙胍)、類升糖素肽1(GLP-1)促效劑(例如腸促胰島素類似物-3及腸促胰島素類似物-4)、蛋白質酪胺酸磷酸酶-1B(PTP-1B)抑制劑(例如特羅杜明、西替歐醛萃取物及由Zhang,S.等人，Drug Discovery Today ,12(9/10),373-381(2007)揭示之化合物)、SIRT-1抑制劑(例如白藜蘆醇)、二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制劑(例如西他列汀、維格列汀、阿格列汀及沙格列汀)、胰島素促泌素、脂肪酸氧化抑制劑、A2拮抗劑、c-jun胺基端激酶(JNK)抑制劑、胰島素、胰島素模擬劑、糖原磷酸化酶抑制劑、VPAC2受體促效劑及SGLT2 抑制劑(鈉依賴性葡萄糖轉運體抑制劑，諸如達帕歐辛(dapagliflozin)等)。較佳抗糖尿病劑為二甲雙胍及DPP-IV抑制劑(例如西他列汀、維格列汀、阿格列汀及沙格列汀)。
合適抗肥胖劑包括11β-羥基類固醇脫氫酶-1(11β-HSD 1型)抑制劑、硬脂醯輔酶A去飽和酶-1(SCD-1)抑制劑、MCR-4促效劑、縮膽激肽-A(CCK-A)促效劑、單胺再吸收抑制劑(諸如諾美婷)、擬交感神經劑、β3 腎上腺素激導性促效劑、多巴胺促效劑(諸如溴隱亭)、促黑素細胞激素類似物、5HT2c促效劑、黑色素濃集激素拮抗劑、瘦素(OB蛋白質)、瘦素類似物、瘦素促效劑、甘丙胺素拮抗劑(galanin antagonist)、脂肪酶抑制劑(諸如四氫利普司他汀(tetrahydrolipstatin)，亦即羅氏鮮)、厭食劑(諸如鈴蟾素促效劑(bombesin agonist))、神經肽-Y拮抗劑(例如NPY Y5拮抗劑)、PYY3-36 (包括其類似物)、擬甲狀腺素劑、脫氫表雄固酮或其類似物、糖皮質激素促效劑或拮抗劑、食慾激素拮抗劑、類升糖素肽-1促效劑、纖毛神經營養因子(諸如可自Regeneron Pharmaceuticals,Inc.,Tarrytown,NY及Procter & Gamble Company,Cincinnati,OH獲得之AxokineTM )、人類刺鼠相關蛋白(AGRP)抑制劑、胃內激素拮抗劑、組織胺3拮抗劑或反向促效劑、神經激肽U促效劑(neuromedin U agonists)、MTP/ApoB抑制劑(例如腸選擇性MTP抑制劑，諸如迪羅哌德)、類鴉片拮抗劑、食慾激素拮抗劑及其類似物。
本發明之組合態樣中所用之較佳抗肥胖劑包括腸選擇性MTP抑制劑(例如迪羅哌德、米瑞他匹及英普他派、R56918(CAS編號403987)及CAS編號913541-47-6)、CCKa促效劑(例如PCT公開案第WO 2005/116034號或美國公開案第2005-0267100 A1號中所述之N-苯甲基-2-[4-(1H-吲哚-3-基甲基)-5-側氧基-1-苯基-4,5-二氫-2,3,6,10b-四氮雜-苯并[e]薁-6-基]-N-異丙基-乙醯胺)、5HT2c促效劑(例如氯卡色林)、MCR4促效劑(例如US 6,818,658中所述之化合物)、脂肪酶抑制劑(例如賽利司他)、PYY3-36 (如本文中所用，「PYY3-36 」包括類似物，諸如聚乙二醇化PYY3-36 ，例如美國公開案2006/0178501中所述者)、類鴉片拮抗劑(例如納曲酮)、油醯基-雌酮(CAS編號180003-17-2)、奧尼匹肽(TM30338)、普蘭林肽(Symlin®)、特索芬辛(NS2330)、瘦素、利拉魯肽、溴隱亭、羅氏鮮、艾塞那肽(Byetta®)、AOD-9604(CAS編號221231-10-3)及諾美婷。本發明化合物及組合療法較佳與運動及節食(sensible diet)結合投與。
所有上述美國專利及公開案均以引用的方式併入本文中。
醫藥調配物
本發明亦提供醫藥組合物，其包含治療有效量之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與至少一種醫藥學上可接受之賦形劑混合。組合物包括呈適於經口、局部或非經腸使用之形式之組合物且可用於治療如上文所描述之糖尿病及相關病狀。
組合物可調配成藉由此項技術中已知的任何途徑(諸如皮下、吸入、經口、局部、非經腸等)投藥。組合物可呈此項技術中已知的任何形式，包括(但不限於)錠劑、膠囊、散劑、顆粒劑、口含錠或液體製劑，諸如口服或無菌非經腸溶液或懸浮液。
用於經口投與之錠劑及膠囊可呈單位劑量呈遞形式，且可含有習知賦形劑，諸如黏合劑，例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨糖醇、黃蓍膠或聚乙烯吡咯酮；填充劑，例如乳糖、糖、玉米澱粉、磷酸鈣、山梨糖醇或甘胺酸；製錠潤滑劑，例如硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇或二氧化矽；崩解劑，例如馬鈴薯澱粉；或可接受之濕潤劑，諸如十二烷基硫酸鈉。可根據正常醫藥實踐中熟知的方法對錠劑進行包衣包覆。
口服液體製劑可呈例如水性或油性懸浮液、溶液、乳液、糖漿或酏劑形式，或可以乾燥產品形式提供以供使用前用水或其他合適媒劑復原。該等液體製劑可含有習知添加劑，諸如懸浮劑，例如山梨糖醇、甲基纖維素、葡萄糖漿、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化可食用脂肪；乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨糖醇單油酸酯或阿拉伯膠；非水性媒劑(其可包括可食用油),例如杏仁油、油性酯(諸如甘油)、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯或山梨酸；及必要時習知調味劑或著色劑。
對於非經腸投藥，利用化合物及無菌媒劑(較佳為水)製 備流體單位劑型。視所用媒劑及濃度而定，化合物可懸浮或溶解於媒劑或其他合適溶劑中。在製備溶液時，化合物可溶解於注射用水中且進行過濾滅菌，隨後填充至合適小瓶或安瓿中且密封。諸如局部麻醉劑、防腐劑及緩衝劑等之藥劑宜溶解於媒劑中。為增強穩定性，組合物可在填充至小瓶中且在真空下移除水後進行冷凍。接著將無水凍乾粉末密封於小瓶中且可隨附供應一小瓶注射用水以在使用前復原液體。以實質上相同之方式製備非經腸懸浮液，除化合物懸浮而非溶解於媒劑中且不能藉由過濾實現滅菌以外。可藉由在懸浮於無菌媒劑中之前暴露於環氧乙烷來對化合物進行滅菌。組合物中宜包括界面活性劑或濕潤劑以促進化合物之均勻分佈。
視投藥方法而定，組合物可含有(例如)約0.1重量%至約99重量%活性物質。當組合物包含劑量單位時，各單位將含有(例如)約0.1至900 mg，更通常1 mg至250 mg活性成分。
與其他抗糖尿病劑類似，本發明化合物可調配成以任何便利方式投藥以供人類或獸醫學使用。該等方法在此項技術中已知且已於上文中概述。關於製備該等調配物之更詳細論述，讀者請參閱Remington's Pharmaceutical Sciences ，第21版，University of the Sciences in Philadelphia。
藉由以下實例說明本發明之實施例。然而，應理解，本發明之實施例不限於該等實例之特定細節，因為一般技術者將已知或根據本揭示案顯而易知該等實例之其他變體。
實例
除非另有說明，否則起始物質通常自商業來源獲得，諸如Aldrich Chemicals Co.(Milwaukee,WI)、Lancaster Synthesis,Inc.(Windham,NH)、Acros Organics(Fairlawn,NJ)、Maybridge Chemical Company,Ltd.(Cornwall,England)、Tyger Scientific(Princeton,NJ)及AstraZeneca Pharmaceuticals (London,England)、Mallinckrodt Baker(Phillipsburg NJ)；EMD(Gibbstown,NJ)。
一般實驗程序
在室溫下用Varian UnityTM 400(DG400-5探針)或Varian UnityTM 500(DG500-5探針，均可自Varian Inc.,Palo Alto,CA獲得)分別在400 MHz或500 MHz下記錄NMR譜以進行質子分析。化學位移表示為相對於作為內部參考之殘餘溶劑之百萬分率(δ)。峰形表示如下：s，單峰；d，二重峰；dd，雙二重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；bs，寬單峰；2s，兩個單峰。
在0.3毫升/分鐘流動速率下且利用50：50水/乙腈溶離劑系統在WatersTM 光譜儀(Micromass ZMD，載氣：氮)(可自Waters Corp.,Milford,MA,USA獲得)上獲得大氣壓化學電離質譜(APCI)。利用95：5-0：100含水乙腈(各溶劑中添加有0.01%甲酸)之梯度在來自WatersTM (Micromass ZQ或ZMD器具(載氣：氮))(Waters Corp.,Milford,MA,USA)之液相層析質譜儀上獲得電噴霧電離質譜(ES)。該等器具利用Varian Polaris 5 C18 -A 20×2.0 mm管柱(Varian Inc.,Palo Alto,CA)，以1毫升/分鐘流動速率維持3.75分鐘或2毫升/分鐘流動速率維持1.95分鐘。
在氮氣壓力下藉由Flash 40 BiotageTM 管柱(ISC,Inc.,Shelton,CT)或BiotageTM SNAP濾筒KPsil或Redisep Rf二氧化矽(來自Teledyne Isco Inc)使用矽膠進行管柱層析。使用Waters FractionLynx系統藉由光電二極體陣列(Waters 2996)及質譜儀(Waters/Micromass ZQ)偵測流程進行製備型HPLC。用Waters 2795 Alliance HPLC或Waters ACQUITY UPLC藉由光電二極體陣列、單四級質譜及蒸發光散射偵測流程進行分析型HPLC工作。
在真空中濃縮係指使用旋轉蒸發器在減壓下蒸發溶劑。
除非另有說明，否則在室溫(約23℃)下進行化學反應。此外，除非另有說明，否則在氮氣氛圍下進行化學反應。
藥理學資料
用本發明化合物治療受G蛋白偶聯受體GPR119之促效劑活化調節之疾病的本發明之實踐可由下文中描述之一或多種功能性分析法中之活性證明。供應源提供於括號中。
活體外功能分析法
β-內醯胺酶：
GPR119促效劑分析法利用基於細胞(hGPR119 HEK293-CRE β-內醯胺酶)之報導構築體，其中人類GPR119之促效劑活化經由環AMP反應元件(CRE)與β-內醯胺酶偶聯。接著利用FRET賦能β-內醯胺酶受質CCF4-AM(Live Blazer FRET-B/G負載套組，Invitrogen目錄號K1027)量測GPR119 活性。特定言之，自液氮儲存器移除hGPR119-HEK-CRE-β-內醯胺酶細胞(Invitrogen 2.5×107 個/毫升)且於塗鋪培養基(杜貝克改良伊格爾培養基(Dulbecco's modified Eagle medium；DMEM；Gibco目錄號11995-065)(高葡萄糖)、10%熱不活化胎牛血清(HIFBS；Sigma目錄號F4135)、1×MEM非必需胺基酸(Gibco目錄號15630 080)、25 mM HEPES pH 7.0(Gibco目錄號15630-080)、200 nM棒酸鉀(Sigma目錄號P3494))中稀釋。使用細胞塗鋪培養基調節細胞濃度且將50微升該細胞懸浮液(12.5×104 個活細胞)添加至黑色、透明底部、經聚-d-離胺酸塗佈之384孔板(Greiner Bio-One目錄號781946)之各孔中且在37℃下於含有5%二氧化碳之含濕氣環境中培育。4小時後，移除塗鋪培養基且置換為40微升分析培養基(分析培養基為不含棒酸鉀及HIFBS之塗鋪培養基)。接著添加10微升體積不同濃度之各待測試化合物(最終DMSO0.5%)且細胞在37℃下於含有5%二氧化碳之含濕氣環境中培育16小時。自培育箱移除板且平衡至室溫保持約15分鐘。每孔添加10微升6×CCF4/AM工作染料溶液(根據Live Blazer FRET-B/G負載套組，Invitrogen目錄號K1027中之說明書製備)且在室溫下在黑暗中培育2小時。用EnVision螢光板讀取器量測螢光，激發波長405 nm，發射波長460 nm/535 nm。由使用4參數邏輯劑量-反應方程利用曲線擬合程式分析得到之促效劑反應曲線進行EC50 測定。
cAMP：
亦利用量測細胞中cAMP含量之HTRF(均勻時差式螢光)cAMP偵測套組(cAMP動態2分析套組；Cis Bio目錄號62AM4PEC)藉由基於細胞之分析法測定GPR119促效劑活性。該方法為由細胞產生之天然cAMP與經染料d2標記之cAMP之間的競爭性免疫分析法。藉由經穴狀化合物標記之Mab抗cAMP觀測示蹤劑結合。特定信號(亦即能量轉移)與標準物或樣品中cAMP之濃度成反比。
特定言之，自低溫保存移除hGPR119 HEK-CRE β-內醯胺酶細胞(Invitrogen 2.5×107 個/毫升；與上述β-內醯胺酶分析法中所用之細胞株相同)且於生長培養基(杜貝克改良伊格爾培養基(DMEM；Gibco目錄號11995-065)(高葡萄糖)、1%炭葡聚糖處理之胎牛血清(CD血清；HyClone目錄號SH30068.03)、1×MEM非必需胺基酸(Gibco目錄號15630-080)及25 mM HEPES pH 7.0(Gibco目錄號15630-080))中稀釋。細胞濃度調節為1.5×105 個細胞/毫升且將30 mL該懸浮液添加至T-175燒瓶中且在37℃下於含濕氣環境中於5%二氧化碳中培育。16小時(隔夜)後，自T-175燒瓶移除細胞(藉由輕敲燒瓶側壁)，在800×g下離心且接著再懸浮於分析培養基(1×HBSS+CaCl2 +MgCl2 (Gibco目錄號14025-092)及25 mM HEPES pH 7.0(Gibco目錄號15630-080))中。用分析培養基將細胞濃度調節至6.25×105 個細胞/毫升且將8 μl該細胞懸浮液(5000個細胞)添加至白色Greiner 384孔、低容量分析板(VWR目錄號82051-458)之各孔中。
不同濃度之各待測試化合物於含有3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX；Sigma目錄號I5879)之分析緩衝液中稀釋且以2微升體積添加至分析板孔中(最終IBMX濃度為400微莫耳濃度且最終DMSO濃度為0.58%)。在室溫下培育30分鐘後，5微升經標記之d2 cAMP及5微升抗cAMP抗體(均於細胞溶解緩衝液中以1：20稀釋；如製造商分析方案中所描述)添加至分析板之各孔中。接著在室溫下培育板且在60分鐘後，用Envision 2104多標記板讀取器使用330 nm之激發波長及615 nm及665 nm之發射波長讀取HTRF信號之變化。自cAMP標準曲線(如製造商分析方案中所描述)藉由內插法將原始資料轉化為nM cAMP且由使用4參數邏輯劑量反應方程利用曲線擬合程式分析之促效劑反應曲線進行EC50 測定。
發現除本文中所用之特定細胞株外，細胞中可產生由GPR119活化引起之cAMP反應。
β-抑制蛋白(β-Arrestin)：
亦利用DiscoverX PathHunter β-抑制蛋白細胞分析技術及其U2OS hGPR119 β-抑制蛋白細胞株(DiscoverX目錄號93-0356C3)藉由基於細胞之分析法測定GPR119促效劑活性。在此分析法中，藉由量測促效劑誘導之β-抑制蛋白與活化型GPR119之相互作用來測定促效劑活化。使42個胺基酸之小酶片段(稱為ProLink)附接至GPR119之C端。使抑制蛋白與較大酶片段(稱為EA(酶受體))融合。GPR119之活化刺激抑制蛋白結合且促使兩個酶片段互補，導致形成能 夠水解受質且產生化學螢光信號之功能性β-半乳糖苷酶。
特定言之，自低溫保存移除U2OS hGPR119 β-抑制蛋白細胞(DiscoverX 1×107 個/毫升)且於生長培養基(最低必需培養基(MEM；Gibco目錄號11095-080)、10%熱不活化胎牛血清(HIFBS；Sigma目錄號F4135-100)、100 mM丙酮酸鈉(Sigma目錄號S8636)、500微克/毫升G418(Sigma目錄號G8168)及250微克/毫升潮黴素B(Hygromycin B)(Invitrogen目錄號10687-010))中稀釋。細胞濃度調節為1.66×105 個細胞/毫升且將30 mL該懸浮液添加至T-175燒瓶中且在37℃下於含濕氣環境中於5%二氧化碳中培育。48小時後，細胞利用不含酶之細胞解離緩衝液(Gibco目錄號13151-014)自T-175燒瓶移除，在800×g下離心且接著再懸浮於塗鋪培養基(Opti-MEM I(Invitrogen/BRL目錄號31985-070)及2%炭葡聚糖處理之胎牛血清(CD血清；HyClone目錄號SH30068.03))中。細胞濃度用塗鋪培養基調節至2.5×105 個細胞/毫升且將10微升該細胞懸浮液(2500個細胞)添加至白色Greiner 384孔低容量分析板(VWR目錄號82051-458)之各孔中且在37℃下於含濕氣環境中於5%二氧化碳中培育板。
16小時(隔夜)後，自培育箱移除分析板且將不同濃度之各待測試化合物(於分析緩衝液(1×HBSS+CaCl2 +MgCl2 (Gibco目錄號14025-092)、20 mM HEPES pH 7.0(Gibco目錄號15630-080)及0.1% BSA(Sigma目錄號A9576))中稀釋)以2.5微升體積添加至分析板孔中(最終DMSO濃度為 0.5%)。在37℃下於含濕氣環境中於5%二氧化碳中培育90分鐘後，添加7.5微升Galacton Star β-半乳糖苷酶受質(PathHunter偵測套組(DiscoveRx目錄號93-0001)；如製造商分析方案中所描述製備)至分析板之各孔中。在室溫下培育板且在60分鐘後，用Envision 2104多標記板讀取器以0.1秒/孔讀取螢光變化。由使用4參數邏輯劑量反應方程利用曲線擬合程式分析之促效劑反應曲線進行EC50 測定。
使用BacMam及GPR119結合分析法分析GPR119之表現
使用pIRES-puro-hGPR119(作為模板)及以下引子經由聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction；PCR)(Pfu Turbo Mater Mix,Stratagene,La Jolla,CA)擴增野生型人類GPR119(在PCT專利公開案第2010/106457中公開)：hGPR119 BamH1，上部5'-TAAATTGGATCCACCATGGAATCATCTTTCTCATTTGGAG-3'(在5'末端插入BamHI位點)hGPR119 EcoRI，下部5'-TAAATTGAATTCTTATCAGCCATCAAACTCTGAGC-3'(在3'末端插入EcoRI位點)
根據製造商方案純化(Qiaquick套組，Qiagen,Valencia,CA)擴增產物且用BamH1及EcoRI(New England BioLabs,Ipswich,MA)進行消化。用BamHI及EcoRI(New England BioLabs,Ipswich,MA)消化載體pFB-VSVG-CMV-poly(在PCT專利公開案第2010/106457號中公開)。在1%瓊脂糖凝膠上藉由電泳分離消化之DNA；自凝膠切除片段且純化 (Qiaquick套組，Qiagen,Valencia,CA)。連接載體與基因片段(快速連接酶套組(Rapid Ligase Kit)，Roche,Pleasanton,CA)且轉型至OneShot DH5α T1R細胞(Invitrogen,Carlsbad,CA)中。培養8個安比西林(ampicillin)抗性群落(「純系1-8」)以用於小規模製備(miniprep)(Qiagen Miniprep套組，Qiagen,Valencia,CA)且進行定序以確認身分及正確插入定向。
根據製造商方案將pFB-VSVG-CMV-poly-hGPR119構築體(純系#1)轉型至OneShot DH10Bac細胞(Invitrogen,Carlsbad,CA)中。重新標記8個陽性(亦即白色)群落以確認為「陽性」且接著生長以用於穿梭載體(bacmid)分離。使用來自Qiagen Miniprep套組(Qiagen,Valencia,CA)之緩衝液經由修改之鹼性溶解程序分離重組hGPR119穿梭載體。簡言之，使細胞小球於緩衝液P1中溶解，於緩衝液P2中中和且利用緩衝液N3進行沈澱。經由離心(17,900×g 10分鐘)使沈澱物成糰粒且將上清液與異丙醇組合以使DNA沈澱。經由離心(17,900×g 30分鐘)使DNA成糰粒，用70%乙醇洗滌一次且再懸浮於50 μL緩衝液EB(Tris-HCL，pH 8.5)中。使用利用市售引子(M13F、M13R，Invitrogen,Carlsbad,CA)進行之聚合酶鏈反應(PCR)以確認穿梭載體中hGPR119插入物之存在。
產生hGPR119重組桿狀病毒
產生P0病毒儲備液
根據製造商方案(Cellfectin,Invitrogen,Carlsbad,CA)用 10微升hGPR119穿梭載體DNA轉染於Sf900II培養基(Invitrogen,Carlsbad,CA)中生長之適於懸浮之Sf9細胞。培育5天後，離心條件培養基(亦即「P0」病毒儲備液)且經由0.22 μm過濾器(Steriflip,Millipore,Billerica,MA)進行過濾。
產生冷凍病毒(BIIC)儲備液
對於長期病毒儲存及產生工作(亦即「P1」)病毒儲備液，如下產生冷凍BIIC(經桿狀病毒感染之昆蟲細胞)儲備液：適於懸浮之Sf9細胞於Sf900II培養基(Invitrogen,Carlsbad,CA)中生長且用hGPR119 P0病毒儲備液感染。生長24小時後，溫和離心感染之細胞(約100×g)，於冷凍培養基(含10% DMSO、1%白蛋白之Sf900II培養基)中再懸浮至1×107 個細胞/毫升之最終密度且根據標準冷凍方案以1 mL等分試樣進行冷凍。
產生工作(「P1」)病毒儲備液
於Sf900II培養基(Invitrogen,Carlsbad,CA)中生長之適於懸浮之Sf9細胞用解凍hGPR119 BIIC儲備液之1：100稀釋液感染且培育若干天(27℃下伴隨搖動)。當細胞活力達到70%時，藉由離心收集條件培養基且藉由ELISA(BaculoElisa套組，Clontech,Mountain View,CA)測定病毒效價。
適於懸浮之HEK 293FT細胞中hGPR119之過表現
HEK 293FT細胞(Invitrogen,Carlsbad,CA)在搖瓶中於補充有50微克/毫升新黴素(neomycin)及10 mM HEPES之 293Freestyle培養基(Invitrogen)中生長(37℃，8%二氧化碳，搖動)。溫和離心細胞(約500×g，10分鐘)且細胞小球再懸浮於補充有18%胎牛血清(Sigma Aldrich)及P1病毒之杜貝克PBS(Dulbecco's PBS)(除去Mg++/-Ca++)中以使得感染倍率(multiplicity of infection；MOI)為10且最終細胞密度為1.3×106 個/毫升(總體積為2.5公升)。細胞轉移至5公升Wave Bioreactor Wavebag(Wave Technologies,MA)中且在27℃下培育4小時(17次搖動/分鐘，7度平台傾角)；在培育期結束時，添加等體積(2.5公升)的補充有30 mM丁酸鈉(Sigma Aldrich)之293Freestyle培養基(最終濃度=15 mM)，且細胞生長20小時(37℃，8% CO2 [0.2公升/分鐘]，25次搖動/分鐘，7度平台傾角)。經由離心(3,000×g，10分鐘)收集細胞，用DPBS(除去Ca++/Mg++)洗滌一次，再懸浮於0.25 M蔗糖、25 mM HEPES、0.5 mM EDTA(pH 7.4)中且在-80℃下冷凍。
用於放射性配位體結合分析法之細胞膜製備
冷凍細胞在冰上解凍且在4℃下在700×g(1400 rpm)下離心10分鐘。細胞小球再懸浮於20 mL磷酸鹽緩衝生理鹽水中且在1400 rpm下離心10分鐘。接著細胞小球再懸浮於均質化緩衝液(10 mM HEPES(Gibco #15630)(pH 7.5)、1 mM EDTA(BioSolutions，#BIO260-15)、1 mM EGTA(Sigma，#E-4378)、0.01 mg/mL苯甲脒(Sigma #B 6506)、0.01 mg/mL桿菌肽(Sigma #B 0125)、0.005 mg/mL抗纖維蛋白溶酶肽(leupeptin)(Sigma #L 8511)、0.005 mg/mL抑肽酶 (Sigma #A 1153))中且在冰上培育10分鐘。接著用緊密配合玻璃杜恩斯均質機(Dounce homogenizer)溫和搖動15次使細胞溶解。勻漿在4℃下在1000×g(2200 rpm)下離心10分鐘。上清液轉移至冰上之新離心管中。細胞小球再懸浮於均質化緩衝液中且在4℃下在1000×g(2200 rpm)下再離心10分鐘，接著移除上清液且細胞小球再懸浮於均質化緩衝液中。重複此過程3次，接著合併上清液，添加Benzonase(Novagen #71206)及MgCl2 (Fluka #63020)分別至1 U/mL及6 mM之最終濃度且在冰上培育1小時。接著溶液在4℃下在25,000×g(15000 rpm)下離心20分鐘，丟棄上清液且小球再懸浮於新鮮均質化緩衝液(除去Benzonase及MgCl2 )中。在重複25,000×g離心步驟後，最終細胞膜小球再懸浮於均質化緩衝液中且在-80℃下冷凍。使用Pierce BCA蛋白質分析套組(Pierce試劑A #23223及B #23224)測定蛋白質濃度。
[ 3 H]-化合物A之合成及純化
化合物A(4-(1-(4-(甲基磺醯基)苯基)-3a,7a-二氫-1H-吡 唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸異丙酯，如上所示)(4 mg，0.009 mmol)溶解於0.5 mL二氯甲烷中，且所得溶液用六氟磷酸(1,5-環辛二烯)(吡啶)(三環己基膦)-銥(I)(J .Organometal .Chem .1979 ,168,183)(5 mg，0.006 mmol)處理。密封反應容器且溶液在氚氣氛圍下攪拌17小時。在減壓下移除反應溶劑且所得殘餘物溶解於乙醇中。使用以下條件藉由製備型HPLC進行粗[3 H]-化合物A之純化。
管柱：Atlantis，4.6×150 mm，5 μm移動相A：水/乙腈/甲酸(98/2/0.1)移動相B：乙腈 操作時間：16分鐘後處理時間(Post time)：5分鐘流動速率：1.5毫升/分鐘注射體積：20~50 μL注射溶劑：DMSO偵測：210 nm及245 nm下UV
藉由質譜分析測定經純化之[3 H]-化合物A之比活性為70 Ci/mmol。
或者，可用[3 H]-化合物B進行結合分析。
[ 3 H]-化合物B之合成及純化
化合物B(4-(1-(4-(甲基磺醯基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸第三丁酯，如上所示)(5 mg，10.6 μmol)溶解於1.0 mL二氯甲烷中且所得溶液用卡波崔催化劑(5 mg，6.2 μmol)處理。密封反應容器且溶液在氚氣氛圍下攪拌17小時。在減壓下移除反應溶劑且所得殘餘物溶解於乙醇中。藉由矽膠急驟管柱層析用70%己烷/30%乙酸乙酯溶離接著進行矽膠急驟管柱層析用60%石油醚/40%乙酸乙酯溶離進行粗[3 H]-化合物B之純化。
藉由質譜分析測定經純化之[3 H]-化合物B之比活性為57.8 Ci/mmol。
GPR119放射性配位體結合分析法
測試化合物於100% DMSO(J.T.Baker #922401)中連續稀釋。2微升各稀釋液添加至96孔板之適當孔中(各濃度一式三份)。使用最終濃度為10微莫耳濃度之未標記化合物A(或化合物B)測定非特異性結合。[3 H]-化合物A(或[3H]- 化合物B)於結合緩衝液(50 mM Tris-HCl(pH 7.5)(Sigma #T7443)、10 mM MgCl2 (Fluka 63020)、1 mM EDTA(BioSolutions #BIO260-15)、0.15%牛血清白蛋白(Sigma #A7511)、0.01 mg/mL苯甲脒(Sigma #B 6506)、0.01 mg/mL桿菌肽(Sigma #B 0125)、0.005 mg/mL抗纖維蛋白溶酶肽(Sigma #L 8511)、0.005 mg/mL抑肽酶(Sigma #A 1153))中稀釋至60 nM濃度且將100微升稀釋液添加至96孔板(Nalge Nunc #267245)之所有孔中。解凍表現GPR119之細胞膜且於結合緩衝液中稀釋至每孔20微克/100微升之最終濃度，且100微升稀釋之細胞膜添加至96孔板之各孔中。
板在室溫下(約25℃)在搖動下培育60分鐘。使用Packard收集器藉由在預浸於0.3%聚乙烯胺中之GF/C濾板(Packard #6005174)上真空過濾來終止分析。接著使用洗滌緩衝液(維持在4℃下之50 mM Tris-HCl，pH 7.5)洗滌過濾器6次。接著濾板在室溫下風乾隔夜。添加30 μl閃爍流體(Ready Safe，Beckman Coulter #141349)至各孔中，密封板且使用Wallac Trilux MicroBeta(基於板之閃爍計數器)量測與各過濾器結合之放射性。
藉由擬合至單點雙曲線(Graph Pad Prism)之非線性回歸進行之資料分析，藉由執行飽和結合來測定[3 H]-化合物A(或[3 H]-化合物B)之Kd。自利用專屬曲線擬合程式(SIGHTS)及4參數邏輯劑量反應方程分析之競爭曲線進行IC50 測定。使用鄭-普魯索夫方程(Cheng-Prusoff equation) 自IC50 值計算Ki值。
獲得β-內醯胺酶、β-抑制蛋白、cAMP及結合分析法之以下結果： 性相對於標準GPR119促效劑4-[[6-[(2-氟-4-甲基磺醯基苯基)胺基]嘧啶-4-基]氧基]哌啶-1-甲酸異丙酯(WO 2005121121)或(S)-4-(1-氟-2-(2-(2,3,6-三氟苯基)乙醯胺基)乙基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯(參見下圖)之活性之百分比。
＊＊ 曲線外推至100%以計算EC50 。
請注意，空白回車部分(blank entry space)表示未對該實例進行測試。
(S)-4-(1-氟-2-(2-(2,3,6-三氟苯基)乙醯胺基)-乙基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯之結構 ＊＊＊
＊＊＊ 在2010年9月28日星期二之SMASH研討會「NMR,It's Not Just For Structures：Determination of Physicochemical Properties」(Portland,Oregon)上由Kathleen Farley之「The Gauche effect：Using Conformational Restriction of a Ethyl Amide Series to Improve the Physical Properties of Analogues」呈示。
活體內資料
所有活體內方案均獲得輝瑞動物福利委員會(Pfizer's Animal Welfare Committee)批准。自Harlan Laboratories (Indianapolis,IN)獲得未處理雄性韋斯大鼠(Wistar rat)(接收時體重為200-250 g)，於懸掛式塑膠籠框中在Sani-Chips木屑床上成對圈養且隨意取食Purina 5001食物。大鼠在受控溫度及濕度條件下在受控光照循環(光照時間6 am至6 pm)下圈養。在研究前，使大鼠適應設施至少1週。
化合物製備
實例50調配為含10% SDD之媒劑20 mM Tris緩衝液(pH 7.4，具有0.5%甲基纖維素及0.5% HPMCAS-HF)。劑量(75 mg/kg)調配為15 mg/mL用於以5 mL/kg投藥，所需塊體添加至研缽中且與少量媒劑一起用杵研磨為平滑糊狀物，添加其他媒劑直至混合物流動，當其轉移至攪拌容器中時，用剩餘量之媒劑沖洗研缽若干次且加蓋以防止蒸發。化合物在給藥當天調配且在給藥程序之前及期間用磁性攪拌棒連續攪拌。
口服葡萄糖耐受性測試(OGTT)方案
大鼠分配至4個給藥組中之1組(n=8隻/組)，該等4個給藥組為投與葡萄糖前90分鐘或30分鐘投與媒劑(20 mM Tris緩衝液，pH 7.4，具有0.5%甲基纖維素及0.5%乙酸丁二酸羥丙基甲基纖維素-高級，細粒(HPMCAS-HF))，或在投與葡萄糖前90分鐘或30分鐘投與75 mg/kg實例50。在第-1天根據體重進行分組以確保各組具有相等組平均體重值。在口服葡萄糖耐受性測試前，大鼠於潔淨籠子中空腹隔夜(約15小時)。在研究當天早晨(空腹後)記錄體重以用於劑量體積計算。在經由經口管飼給與媒劑或測試化合物(5 mL/kg) 前，經由尾靜脈自所有大鼠收集血樣。90或30分鐘後，對大鼠進行取血且即刻給與口服劑量之葡萄糖(2 g/kg)。在葡萄糖負載後15、30、60及120分鐘時再對大鼠進行取血。血樣(約250微升/時間點)收集至具有抑肽酶/DPPIVi(0.6 TIU/20微升/毫升全血)之EDTA管中。在收集後即刻翻轉血液管若干次且置放於冰上，接著在冷凍離心機中以14,000 rpm旋轉5分鐘。使用Roche c311臨床化學分析器分析血漿樣品之葡萄糖含量，使用Alpco Ultra-Sensitive胰島素大鼠ELISA測定血漿胰島素濃度且使用MSD ELISA套組測定總醯胺GLP-1濃度。
除非另有說明，否則結果呈示為平均值+/- SEM(平均值之標準誤差)。使用單因子變異數分析(ANOVA)利用時間匹配媒劑與處理組之間的適當事後分析進行資料之統計評估。使用未修正t檢定，P<0.05時與媒劑相比之差異視為統計顯著。
製備起始物質 製備1：4-肼基哌啶-1-甲酸異丙酯二鹽酸鹽
4-{2-(第三丁氧基羰基)肼基}哌啶-1-甲酸異丙酯(如WO 2008137436中所述獲得)(20.2 g，67.02 mmol)溶解於絕對乙醇(250 mL)中且在室溫下在氮氣下攪拌溶液。緩慢添加濃鹽酸水溶液(27.9 mL，335 mmol)。在室溫下在氮氣下攪拌溶液4小時。反應物濃縮為含有一些起始物質之白色固體。固體用4 M氯化氫之1,4-二噁烷溶液(100 mL，400 mmol)處理且在室溫下攪拌所得混合物14小時。接著在減壓下濃縮反應物得到白色固體，用庚烷(100 mL)處理且再次濃縮產生呈白色固體狀之標題化合物(15 g，81%)。1 H NMR(400 MHz，甲醇-d 4 )δ 4.9(m,1H),4.1(m,2H),3.2(m,1H),2.9(m,2H),2.0(m,2H),1.4(m,2H),1.2,(d,6H)；LCMS(ES+)：202(M+1)。
製備2：4-[5-胺基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-哌啶-1-甲酸異丙酯
在85℃下攪拌4-肼基哌啶-1-甲酸異丙酯二鹽酸鹽(7.08 g，25.8 mmol)、2-氰基-3-乙氧基丙烯酸乙酯(4.81 g，28.4 mmol)、乙酸鈉(6.49 g，77.5 mmol)及乙醇(80 mL)之混合物3小時。混合物濃縮至初始體積之約三分之一。添加水(50 mL)、飽和碳酸氫鈉(50 mL)及鹽水(50 mL)。所得混合物用乙酸乙酯(2×50 mL)萃取。合併之有機萃取物用鹽水洗滌且經硫酸鎂乾燥。過濾混合物且在真空下濃縮濾液得到呈淺黃色固體狀之粗標題化合物(9.8 g)，其未經純化即用於下一步驟中。藉由經矽膠層析用30%至60%乙酸乙酯之庚烷溶液溶離進行純化製備分析樣品。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ 1.26(d,6H)1.35(t,3H)1.86-1.95(m,2H)2.04-2.17(m,2H)2.84-2.96(m,2H)3.89-3.98(m,1H)4.28(q,2H)4.25-4.40(m,2H)4.89-4.97(m,1H)5.06(s,2H)7.64(s,1H)；LCMS(ES+)：325.1(M+1)。
製備3：4-[5-溴-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-哌啶-1-甲酸異丙酯
純亞硝酸第三丁酯(4.8 mL，39.3 mmol)在室溫下緩慢添加至經攪拌之4-[5-胺基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-哌啶-1-甲酸異丙酯(製備2)(8.5 g，26.2 mmol)及溴化銅(II)(3.7 g，16 mmol)於乙腈(100 mL)中之混合物中。觀測到顯著放熱效應且使混合物升溫至約50℃。在65℃下繼續加熱30分鐘後，冷卻反應物至室溫且接著在真空下濃縮。添加過量10%氨水且混合物用乙酸乙酯萃取。有機相用水 及鹽水洗滌且在真空下濃縮。藉由矽膠層析用含30%至70%乙酸乙酯之庚烷溶離純化殘餘物得到呈黃色油狀之標題化合物，根據NMR及LCMS測定其純度為約70%。物質未經進一步純化即用於下一步驟中。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 1.23(d,6H)1.34(t,3H)1.84-1.95(m,2H)2.01-2.15(m,2H)2.82-2.98(m,2H)4.25-4.36(m,2H)4.30(q,2H)4.45-4.56(m,1H)4.86-4.96(m,1H)7.95(s,1H)；LCMS(ES+)：387.9(M+1)。
製備4：4-[5-溴-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸異丙酯
向冷卻至0℃之4-[5-溴-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸異丙酯(3.59 g，6.5 mmol)於四氫呋喃(32 mL)中之溶液中添加2 M硼烷-甲硫醚複合物之四氫呋喃溶液(14.6 mL，29.2 mmol)。反應混合物在回流下加熱21小時且接著在室溫下攪拌4小時。冷卻混合物至0℃且添加甲醇。使所得溶液升溫至室溫且攪拌10分鐘。溶液再冷卻至0℃且逐滴添加2 M氫氧化鈉水溶液(10 mL)。所得混合物用乙酸乙酯稀釋且劇烈攪拌30分鐘。分離各層且水相用乙酸乙酯萃取2次。合併之有機層相繼用水及鹽水洗滌且接著經硫酸鎂乾燥。過濾混合物且在真空下濃縮濾液。用含55%至 70%乙酸乙酯之庚烷溶離進行矽膠層析得到呈油狀之標題化合物(1.89 g，84%)。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 1.23(d,6H),1.87-1.95(br m,3H),2.06(qd,2H),2.89(br t,2H),4.29(br s,2H),4.39(tt,1H),4.50(d,2H),4.90(m,1H),7.58(s,1H)；LCMS(ES+)348.0(M+1)。
製備5：4-[5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸異丙酯
在微波小瓶中合併4-[5-溴-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸異丙酯(1.42 g，4.10 mmol)、參(二苯亞甲基丙酮)二鈀(156 mg，0.170 mmol)、1-1'-雙(二苯膦基)二茂鐵(192 mg，0.346 mmol)、鋅塵(68.8 mg，1.06 mmol)、氰化鋅(497 mg，4.23 mmol)及N,N -二甲基乙酸胺(20 mL)。小瓶用氮氣吹拂，密封且在微波反應器(Biotage Initiator 2.2)中在120℃下加熱1小時。反應混合物穿過FlorisilTM 墊，用乙酸乙酯稀釋且接著添加水。水相用乙酸乙酯萃取3次且合併之有機層經硫酸鎂乾燥。過濾混合物且在真空下蒸發濾液。用含55%至70%乙酸乙酯之庚烷溶離進行矽膠層析得到呈綠色油狀之標題化合物(1.06 g，88%)，其在靜置時固化。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 1.24(d,6H),1.99(br d,2H),2.06-2.17(m,3H),2.93(br t,2H), 4.31(br s,2H),4.48(tt,1H),4.71(d,2H),4.92(m,1H),7.60(s,1H)；LCMS(ES+)：293.1(M+H)。
製備6：2-氟-4-[(2-羥基乙基)硫基]苯酚
向4-溴-2-氟苯酚(0.75 mL，6.8 mmol)及二異丙基乙胺(3.5 mL，20.09 mmol)於1,4-二噁烷(35 mL)中之溶液中添加9,9-二甲基-4,5-雙(二苯膦基)二苯并哌喃(415 mg，0.717 mmol)、雙(二苯亞甲基丙酮)鈀(322 mg，0.351 mmol)及2-巰基乙醇(0.46 mL，6.86 mmol)，且在110℃下加熱深褐色反應溶液16小時。反應物冷卻至室溫，用水稀釋且用乙酸乙酯萃取4次。合併有機萃取物且經硫酸鎂乾燥。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液得到栗色油狀物，藉由矽膠層析進行純化得到呈栗色固體狀之標題化合物(985 mg，76%)。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 3.00(t,2H,J =5.95 Hz)3.69(d,2H,J =3.71 Hz)6.89-6.95(m,1H)7.11(ddd,1H,J=8.39,2.15,1.17 Hz)7.17(dd,1H,J=10.54,2.15 Hz)。
製備7：4-[(2-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}乙基)硫基]-2-氟苯酚
向2-氟-4-[(2-羥基乙基)硫基]苯酚(985 mg，5.24 mmol)及咪唑(371 mg，5.30 mmol)於N,N -二甲基甲醯胺(5 mL)中之溶液中逐份添加第三丁基二甲基矽烷基氯(814 mg，5.24 mmol)且在室溫下攪拌反應物4小時。在減壓下濃縮反應物且殘餘物用水稀釋，接著用乙酸乙酯萃取3次。合併之有機萃取物用鹽水洗滌且經硫酸鎂乾燥。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液得到呈橙色油狀之標題化合物(1.43 g，90%)，其未經進一步純化即使用。LCMS(ES+)：301.1(M-1)。
製備8：1-[4-(苯甲氧基)-3-氟苯基]-1H-四唑
在氮氣氛圍下向4-(苯甲氧基)-3-氟苯胺(1.04 g，4.8 mmol)(WO 2005030140)之懸浮液中添加乙酸(2.3 mL，38.3 mmol)、原甲酸三乙酯(2.44 mL，14.4 mmol)及疊氮化鈉(0.34 g，5.3 mmol)且在95℃下加熱反應混合物2.5小時。接著溶液冷卻至室溫且添加水，接著用乙酸乙酯萃取3次。合併萃取物且用鹽水洗滌且經硫酸鎂乾燥。過濾混合物且在減壓下濃縮，且藉由矽膠層析(含20%-40%乙酸乙酯之庚烷)純化粗物質得到呈白色固體狀之標題化合物(1.12 g，86%)。1 H NMR(400 MHz，氘代甲醇)δ 9.65(s,1H),7.73-7.68(dd,1H,J =11,2.5 Hz),7.60-7.57(m,1H) 7.47-7.45(m,2H),7.40-7.30(m,5H),5.24(s,2H)；LCMS(ES+)：271.1(M+1)。
製備9：2-氟-4-(1H-四唑-1-基)苯酚
向Parr搖動器燒瓶中之1-[4-(苯甲氧基)-3-氟苯基]-1H-四唑(1.12 g，4.14 mmol)中添加乙醇(40 mL)且溶液用氮氣淨化。添加10%披鈀碳(0.30 g)且反應物用Parr搖動器裝置在40 psi氫下氫化30分鐘。接著混合物經微孔過濾器過濾且在減壓下濃縮濾液得到呈白色固體狀之標題化合物(0.67 g，90%)，其未經純化即使用。1 H NMR(400 MHz，氘代甲醇)δ 9.62(s,1H),7.65-7.62(dd,1H,J =11,2.5 Hz),7.50-7.46(m,1H)7.47-7.45(dd,1H,J=9.0,9.0 Hz)；LCMS(ES+)：181.1(M+1)。
製備10：4-(5-氰基-4-((甲基磺醯基氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
4-(5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(製備5)(75 mg，0.24 mmol)溶解於1 mL無水二氯甲烷中且添加三乙胺(0.1 mL，0.74 mmol)。反應混合物在冰浴中冷卻且接著添加甲烷磺酸酐(62 mg，0.34 mmol)。自冰浴 移除溶液且攪拌30分鐘。藉由添加碳酸氫鈉飽和水溶液淬滅反應物且分離各層。水層用二氯甲烷再萃取3次。合併有機萃取物且用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮濾液得到油狀物(75 mg，產率100%)。粗物質未經進一步純化即用於後續步驟中。
製備11：4-肼基哌啶-1-甲酸第三丁酯鹽酸鹽
向高壓釜中4-側氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯(50 g，0.25 mmol)於甲醇(500 mL)中之溶液中添加含肼單鹽酸鹽(17.2 g，0.25 mmol)之水(100 mL)。在氬氣下攪拌白色混合物，接著添加呈水中漿液狀之5%碳上鉑(750 mg)。密封高壓釜且以氫氣填充至60大氣壓，且攪拌反應物15小時。完成時，反應物經Celite® 過濾且濾墊用甲醇洗滌。此製備過程進行6次。在減壓下濃縮合併之濾液，且藉由過濾收集所得白色沈澱物(4,4'-肼-1,2-二基二哌啶-1-甲酸二-第三丁酯)副產物且用水洗滌若干次。接著在減壓下濃縮水性濾液得到呈無色固體狀之所需產物(221 g，59%)。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 4.13(br s,2H),3.32(br t,1H),2.77(br t,2H),2.16(m,2H),1.66(m,2H),1.43(s,9H)。
製備12：4-[5-胺基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-哌啶-1-甲酸第三丁酯
在85℃下攪拌4-肼基哌啶-1-甲酸第三丁酯鹽酸鹽(221 g，880 mmol)、2-氰基-3-乙氧基丙烯酸乙酯(153 g，880 mmol)、三水合乙酸鈉(477 g，352 mmol)及乙醇(2000 mL)之混合物8小時。在減壓下濃縮混合物且殘餘物溶解於乙酸乙酯及水中。分離各層且水層用乙酸乙酯萃取。接著合併之有機萃取物經硫酸鎂乾燥。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液。藉由經短矽膠塞過濾用含40%乙酸乙酯之庚烷溶離純化粗物質得到呈淡黃色固體狀之產物(214 g，72%)。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ 7.60(s,1H),5.27(br s,2H),4.23(br q,4H),3.91(m,1H),2.81(br s,2H),2.04(m,2H),1.86(m,2H),1.44(s,9H),1.29(t,3H)。
製備13：4-[5-溴-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯
向溴化銅(II)(1.69 g，770 mmol)於乙腈(1000 mL)中之溶液中緩慢添加亞硝酸第三丁酯(112 mL，960 mmol)且加熱溶液至65℃。經30分鐘向其中逐滴添加4-[5-胺基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(215 g，640 mmol)於乙腈(650 mL)中之溶液。4小時後，使反應物冷卻 至室溫且接著傾入含2 M鹽酸(1500 mL)之冰中。混合物用乙酸乙酯萃取3次，且合併之有機萃取物用碳酸氫鈉飽和水溶液洗滌且接著經硫酸鎂乾燥。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液。藉由經短矽膠塞過濾開始用含10%庚烷之二氯甲烷溶離，接著用二氯甲烷溶離純化所得殘餘物得到呈黃色油狀之標題化合物(137 g，53%)，其在靜置時固化。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 7.95(s,1H),4.48(m,1H),4.28(br q,4H),2.86(br s,2H),2.06(m,2H),1.90(m,2H),1.44(s,9H),1.34(t,3H)。
製備14：4-[5-溴-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯
向冷卻至0℃之4-[5-溴-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(137 g，0.34 mol)於四氫呋喃(1300 mL)中之溶液中緩慢添加硼烷-甲硫醚(97 mL，1.02 mol)。使溶液升溫至室溫且接著在回流下加熱15小時。接著反應物於冰浴中冷卻且逐滴添加甲醇(40 mL)。接著在室溫下攪拌溶液20分鐘。添加2 M氫氧化鈉水溶液(1200 mL)且分離各層。水層用乙酸乙酯萃取且合併之有機層用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥且在減壓下移除溶劑。藉由經短矽膠塞過濾用含30%乙酸乙酯之庚烷溶離純化所得殘餘物得到呈無色固體狀之標題化合物(61.4 g，50%)。經由上述層析程序進 一步純化來自此純化過程之不純物質得到第二批呈無色固體狀之標題化合物(22 g，18%)。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 7.59(s,1H),4.52(s,2H),4.37(m,1H),4.25(br s,2H),2.86(br s,2H),2.06(m br s,2H),1.89(m,2H),1.45(s,9H)。
製備15：4-[5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯
氰化銅(I)(2.97 g，33.3 mmol)添加至經攪拌之4-[5-溴-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(10 g，27.8 mmol)於脫氣二甲基甲醯胺(100 mL)中之溶液中。接著在165℃下加熱反應物4小時且冷卻至室溫。其在冰浴中進一步冷卻且添加乙二胺(5.5 mL)於水(20 mL)中之溶液，接著用更多水(70 mL)稀釋。接著混合物用乙酸乙酯萃取且分離各層。有機層相繼用水及鹽水洗滌且接著經硫酸鎂乾燥。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液。此程序以8個批次進行。合併最終粗殘餘物且藉由重複矽膠管柱層析用含40%乙酸乙酯之庚烷溶離純化得到呈無色固體狀之標題化合物(11.6 g，17%)。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)7.59(s,1H),4.71(s,2H),4.45(m,1H),4.26(brs,2H),2.88(br t,2H),2.08(m,2H),1.98(m,2H),1.48(s,9H)；LCMS(ES+)：207.1(M-Boc+H)。
關於4-[5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯之替代合成，請參見實例50。
製備16：4-(5-氰基-4-((甲基磺醯基氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯
在室溫下向經攪拌之4-(5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(202 mg，0.659 mmol)於二氯甲烷(6.6 mL)中之溶液中相繼添加三乙胺(0.18 mL，1.32 mmol)及甲烷磺酸酐(189 mg，1.1 mmol)。攪拌混合物4.5小時，隨後其用二氯甲烷及碳酸氫鹽飽和水溶液稀釋。分離各層且水層用二氯甲烷萃取。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液得到呈油狀之4-(5-氰基-4-((甲基磺醯基氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯，其未經進一步純化即使用。
製備17：2-氟-4-(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-四唑-5-基)苯酚及2-氟-4-(2-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)苯酚
A)4-(苯甲氧基)-3-氟苯甲腈
向經攪拌之3-氟-4-羥基苯甲腈(1.00 g，7.30 mmol)於20 mL乙腈中之溶液中逐份添加碳酸鉀(2.02 g，14.6 mmol)。攪拌所得混合物10分鐘，隨後添加苄基溴(1.33 mL，10.9 mmol)。在室溫下攪拌混合物70小時，隨後其用乙酸乙酯及水稀釋。分離有機相且用水、鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液。藉由急驟層析用含5%至20%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化殘餘物得到呈白色固體狀之4-(苯甲氧基)-3-氟苯甲腈(1.33 g)。
B)5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-1H-四唑及5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-2H-四唑
在110℃下加熱裝有4-(苯甲氧基)-3-氟苯甲腈(250 mg，1.10 mmol)、疊氮化鈉(214 mg，3.30 mmol)、氯化銨(176 mg，3.30 mmol)及3 mLN,N -二甲基甲醯胺之小瓶18小時。反應混合物冷卻至室溫，用水及乙酸乙酯稀釋且pH值使用1 N鹽酸水溶液調節至3。分離有機相且用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液得到呈白色固體狀之標題化合物(270 mg)。此物質未經純化即用於後續步驟中。
C)5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-四唑及5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-2-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑
分4份向5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-1H-四唑及5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-2H-四唑(270 mg，1 mmol)溶解於四氫 呋喃中之溶液中添加氫化鈉(44 mg，1.1 mmol)且在室溫下攪拌所得混合物15分鐘。接著添加(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基矽烷(0.19 mL，1.0 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物16小時。藉由添加水淬滅反應物且添加乙酸乙酯。分離有機相且水相用乙酸乙酯萃取2次。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液。藉由急驟層析用乙酸乙酯及庚烷(5%至20%乙酸乙酯)之梯度溶離純化得到呈白色固體狀之所需產物(270 mg，產率67%)。
D)2-氟-4-(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-四唑-5-基)苯酚及2-氟-4-(2-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)苯酚
向5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-四唑及5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-2-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑(140 mg，0.35 mmol)溶解於2 mL乙醇與2 mL四氫呋喃之混合物中的溶液中添加鈀黑(56 mg，0.53 mmol)及甲酸(0.14 mL，3.5 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物4小時，隨後經Celite® 墊過濾。在減壓下濃縮濾液且所得粗物質未經進一步純化即用於後續步驟中。
製備18：5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-1-((2-(三甲基矽烷氧基)乙基)-1H-四唑及5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-2-(2-(三甲基矽烷氧基)乙基)-2H-四唑
分2份向5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-1H-四唑及5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-2H-四唑(製備17，步驟B)(550 mg，2 mmol)溶解於N,N -二甲基甲醯胺(8 mL)中之溶液中添加氫化鈉(163 mg，4 mmol)且在室溫下攪拌所得混合物5分鐘。接著添加(2-溴乙氧基)三甲基矽烷(1.3 mL，6 mmol)且在70℃下攪拌反應混合物16小時，隨後冷卻至室溫。藉由添加水淬滅反應物且添加乙酸乙酯。分離有機相且水相用乙酸乙酯萃取2次。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由急驟層析用乙酸乙酯及庚烷(5%至30%乙酸乙酯)之梯度溶離純化殘餘物得到5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-1-(2-(三甲基矽烷氧基)乙基)-1H-四唑(100 mg，產率12%)及5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-2-(2-(三甲基矽烷氧基)乙基)-2H-四唑(600 mg，產率69%)。
製備19：2-氟-4-(2-(2-(三甲基矽烷氧基)乙基)-2H-四唑-5-基)苯酚
向5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-2-(2-(三甲基矽烷氧基)乙 基)-2H-四唑(製備18)(230 mg，0.54 mmol)溶解於6 mL乙醇與6 mL四氫呋喃之混合物中之溶液中添加鈀黑(86 mg，0.806 mmol)及甲酸(0.215 mL，5.4 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物4小時，隨後經Celite® 墊過濾。在減壓下濃縮濾液且所得粗物質(180 mg)未經進一步純化即用於後續步驟中。
製備20：2-氟-4-(1-(2-(三甲基矽烷氧基)乙基)-1H-四唑-5-基)苯酚
向5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-1-(2-(三甲基矽烷氧基)乙基)-1H-四唑(製備18)(130 mg，0.30 mmol)溶解於2 mL乙醇與2 mL四氫呋喃之混合物中之溶液中添加鈀黑(48 mg，0.45 mmol)及甲酸(0.12 mL，3 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物4小時，隨後經Celite® 墊過濾。在減壓下濃縮濾液且所得粗物質(94 mg)未經進一步純化即用於後續步驟中。
製備21：2-氟-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯酚
A)5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-1-甲基-1H-四唑及5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-2-甲基-2H-四唑
在室溫下分2份向經攪拌之5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-1H-四唑及5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-2H-四唑(製備17，步驟B)(1.50 g，5.55 mmol)於30 mL四氫呋喃中之溶液中添加氫化鈉(444 mg，11.1 mmol)。5分鐘後，添加碘甲烷(1.04 mL，16.6 mmol)且在室溫下於氮氣氛圍下攪拌反應物15小時。混合物用水稀釋且用乙酸乙酯萃取2次。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液。藉由急驟層析用含10%-40%乙酸乙酯之庚烷溶離純化殘餘物得到呈白色固體狀之5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-2-甲基-2H-四唑(1.1 g)及呈白色固體狀之5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-1-甲基-1H-四唑(450 mg)。
5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-1-甲基-1H-四唑。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 4.15(s,3H)5.23(s,2H)7.15(t,J =8.39 Hz,1H)7.31-7.48(m,6H)7.52(dd,J =11.13,2.15 Hz,1H)。LCMS(M+1)285.1。
B)2-氟-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯酚
向5-(4-(苯甲氧基)-3-氟苯基)-1-甲基-1H-四唑(500 mg，1.76 mmol)於6 mL乙醇與6 mL四氫呋喃中之溶液中相繼添加甲酸(0.7 mL，17.6 mmol)及鈀黑(281 mg，2.64 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物4小時。反應混合物經Celite® 過濾且在真空中濃縮濾液得到呈白色固體狀之2-氟-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯酚(330 mg)，其未經進一步純化即用 於後續反應中。
製備22：4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯酚
A)4-(苯甲氧基)-N-甲基苯甲醯胺
在0℃下伴隨攪拌向裝有亞硫醯氯(0.35 mL，4.82 mmol)之燒瓶中添加市售4-苯甲氧基苯甲酸(1.00 g，4.38 mmol)於10 mL二氯甲烷及0.01 mLN,N -二甲基甲醯胺中之溶液。移除冰浴且在室溫下攪拌溶液4小時。在真空中濃縮混合物得到白色固體。此固體溶解於10 mL甲胺(2 M於四氫呋喃中)中且在室溫下攪拌所得溶液70小時。混合物用乙酸乙酯及水稀釋且分離有機層，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液得到白色固體。使此固體自乙酸乙酯及庚烷中再結晶得到呈白色針狀之4-(苯甲氧基)-N-甲基苯甲醯胺(850 mg)。
B)5-(4-(苯甲氧基)苯基)-1-甲基-1H-四唑
在氮氣氛圍下向頂部具有回流冷凝器之燒瓶中經攪拌之4-(苯甲氧基)-N-甲基苯甲醯胺(200 mg，0.829 mmol)於3 mL乙腈及1滴N,N -二甲基甲醯胺中之溶液中添加三乙胺(0.12 mL)。攪拌反應混合物10分鐘，隨後逐滴添加亞硫醯氯(0.078 mL，1.08 mmol)。在室溫下於氮氣氛圍下攪拌黃色反應混合物1小時。接著緩慢添加三乙胺(0.36 mL)，接著添加氯化四丁銨(37.4 mg，0.12 mmol)及疊氮化鈉(611 mg，1.82 mmol)。在室溫下於氮氣氛圍下劇烈攪拌所得黃色懸浮液70小時。混合物用水及乙酸乙酯稀釋。分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液。藉由急驟層析用含10%至40%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化殘餘物得到呈白色固體狀之5-(4-(苯甲氧基)苯基)-1-甲基-1H-四唑(180 mg)。
C)4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯酚
向經攪拌之5-(4-(苯甲氧基)苯基)-1-甲基-1H-四唑(180 mg，0.676 mmol)於3 mL乙醇與3 mL四氫呋喃中之溶液中相繼添加甲酸(0.27 mL，6.76 mmol)及鈀黑(108 mg，1.01 mmol)。在室溫下攪拌混合物4小時。反應混合物經Celite® 過濾且濃縮濾液得到呈白色固體狀之4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯酚(110 mg)，其未經進一步純化即用於後續反應中。
製備23：3-氟-4-羥基苯甲醯胺
在回流下加熱市售3-氟-4-羥基苯甲腈(500 mg，3.65 mmol)及氫氧化鉀(1.02 g，18.2 mmol)於10 mL 80%乙醇中之混合物16小時。冷卻至室溫後，在真空中濃縮混合物且殘餘物溶解於水中，用乙酸酸化且用乙酸乙酯萃取。合併之有機萃取物經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液。藉由急驟層析用含20%至60%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化殘餘物得到呈白色固體狀之3-氟-4-羥基苯甲醯胺(210 mg)。
或者，可如下製備3-氟-4-羥基苯甲醯胺：向經攪拌之過氧化脲(4.2 g，43.8 mmol)於12 mL水中之溶液中添加固體氫氧化鈉(1.04 g，25.5 mmol)。所得溶液於冰浴中冷卻，隨後添加3-氟-4-羥基苯甲腈(1.00 g，7.29 mmol)於5 mL乙醇中之溶液。在室溫下劇烈攪拌混合物2小時，隨後其用水(100 mL)及乙酸乙酯(100 mL)稀釋。攪拌混合物5分鐘，隨後添加1 M鹽酸直至pH 4。分離水層且用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取。合併之有機層經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮濾液得到白色固體。該固體用乙醚及庚烷(2：1，90 mL)濕磨1小時，隨後過濾得到呈白色固體狀之3-氟-4-羥基苯甲醯胺(1.05 g)。1 H NMR(400 MHz，氘代二甲亞碸)δ 6.93(t,J =8.69 Hz,1H)7.19(br.s.,1H)7.53(dd,J =8.39,1.95 Hz,1H)7.62(dd,J =12.40,2.05 Hz,1H)7.77(br.s.,1H)10.39(s,1H)。LCMS(ES)156.0(M+1)。
製備24：2-氟-4-羥基苯甲醯胺
向經攪拌之過氧化脲(2.1 g，21.9 mmol)於6 mL水中之溶液中添加固體氫氧化鈉(521 mg，12.8 mmol)。所得溶液於冰浴中冷卻，隨後添加2-氟-4-羥基苯甲腈(500 mg，3.65 mmol)於2 mL乙醇中之溶液。在室溫下劇烈攪拌混合物2小時，隨後其用水(100 mL)及乙酸乙酯(100 mL)稀釋。 攪拌混合物5分鐘，隨後添加1 M鹽酸直至pH=4。分離水層且用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取。合併之有機層經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮濾液得到呈白色固體狀之2-氟-4-羥基苯甲醯胺。
製備25：4-(5-氰基-4-(1-羥基乙基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
4-(5-氰基-4-甲醯基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(實例9，步驟A)(51 mg，0.18 mmol)溶解於2 mL無水四氫呋喃中且在氮氣氛圍下冷卻至-78℃。接著逐滴添加溴化甲基鎂(0.070 mL，0.21 mmol，3 M於乙醚中)。移除冷浴且在室溫下攪拌混合物1小時。混合物用1 M硫酸氫鉀水溶液稀釋且用乙酸乙酯萃取3次。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液。藉由急驟層析用含乙酸乙酯之庚烷(20%至100%乙酸乙酯)之梯度溶離純化殘餘物得到呈白色固體狀之4-(5-氰基-4-(1-羥基乙基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(33 mg)，其未經純化即用於後續步驟中。
製備26：碳酸1-甲基環丙酯4-硝基苯酯
A)1-甲基環丙醇
向1 L燒瓶中裝入甲醇鈦(100 g)、環己醇(232 g)及甲苯(461 mL)。燒瓶配備迪安-斯塔克分離器(Dean-Stark trap)及冷凝器。在140℃下加熱混合物直至移除甲醇。在180℃下移除甲苯。再添加甲苯且重複此過程2次。在移除所有甲苯後，在高真空下乾燥燒瓶。添加乙醚(580 mL)至燒瓶中以製備於乙醚中之1 M溶液。3頸5 L燒瓶配備頂置式攪拌器、惰性氣體入口及壓力平衡加料漏斗。用氮氣吹拂燒瓶且裝入乙酸甲酯(60.1 mL，756 mmol)、環己基氧化鈦(於乙醚中之1 M溶液，75.6 mL)及乙醚(1500 mL)。攪拌溶液同時保持反應燒瓶處於室溫水浴中。加料漏斗中裝入3 M溴化乙基鎂溶液(554 mL，1.66莫耳)。在室溫下經3小時逐滴添加格林納試劑(Grignard reagent)。混合物變為淺黃色溶液，且接著逐漸形成沈澱物，最終變為深綠色/褐色/黑色混合物。再攪拌15分鐘後，添加格林納，隨後混合物小心傾入10%濃硫酸於1 L水中之混合物中。攪拌所得混合物直至所有固體溶解。分離水層且用乙醚(2×500 mL)萃取。合併之有機萃取物相繼用水、鹽水洗滌，經碳酸鉀(500 g)乾燥30分鐘，過濾且濾液在真空中濃縮為油狀物。添加碳酸氫鈉(200 mg)且蒸餾粗物質，收集在約100℃下沸騰之部分得到具有少量雜質甲基乙基酮及2-丁醇之標題化合物(23公克)。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ 0.45(明顯三重峰，J =6.59 Hz,2H),0.77(明顯三重峰，J =5.61 Hz,2H),1.46(s,3H)。標題化合物之製備亦描述於WO 09105717中。
B)碳酸1-甲基環丙酯4-硝基苯酯
冷卻1-甲基環丙醇(10 g，137 mmol)、氯甲酸4-硝基苯酯(32 g，152 mmol)及少量4-二甲胺基吡啶晶體(150 mg，1.2 mmol)於二氯甲烷(462 mL)中之溶液至0℃。逐滴添加三乙胺(36.5 g，361 mmol)。10分鐘後，移除冰浴且在室溫下攪拌反應物14小時。反應混合物用碳酸鈉飽和水溶液洗滌2次。水相用二氯甲烷萃取。合併之有機萃取物用水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液。藉由急驟矽膠層析用含乙酸乙酯之庚烷的梯度混合物(前10分鐘內0至5%乙酸乙酯，接著等濃度含5%乙酸乙酯之庚烷)溶離純化殘餘物得到20.8 g呈澄清油狀之所需碳酸酯。此油在靜置時固化。
1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ 0.77(明顯三重峰，J =6.59 Hz,2H),1.09(明顯三重峰，J =7.07 Hz,2H),1.67(s,3H),7.40(明顯雙三重峰，J =9.27,3.17 Hz,2H),8.29(明顯雙三重峰，J =9.27,3.17 Hz,2H)。
或者，可如下製備1-甲基環丙醇：
1-甲基環丙醇
2000 mL 4頸燒瓶配備機械攪拌器、惰性氣體入口、溫度計及兩個壓力平衡加料漏斗。燒瓶用氮氣吹拂且相繼裝入490 mL乙醚及18.2 mL(30 mmol)四(2-乙基己基氧)鈦。1個加料漏斗中裝入由28.6 mL(360mmol)乙酸甲酯用乙醚稀釋至120 mL製備之溶液。第二個加料漏斗中裝入200 mL 3 M溴化乙基鎂之乙醚溶液。反應燒瓶於冰水浴中冷卻以保持內部溫度為10℃或10℃以下。添加40毫升乙酸甲酯溶液至燒瓶中。接著自加料漏斗以約2滴/秒且不超過2毫升/分鐘之速率逐滴添加格林納試劑。在添加第一批40 mL格林納試劑後，添加另一份20 mL乙酸甲酯之乙醚溶液。在添加第二批40 mL格林納試劑後，添加另一份20 mL乙酸甲酯之乙醚溶液。在添加第三批40 mL格林納試劑後，添加另一份20 mL乙酸甲酯之乙醚溶液。在添加第四批40 mL格林納試劑後，添加最後一份20 mL乙酸甲酯之乙醚溶液。
在格林納試劑添加完成後，再攪拌混合物15分鐘。接著混合物在快速攪拌下傾入660 g冰與60 mL濃硫酸之混合物中以溶解所有固體。分離各相且水相再用50 mL乙醚萃取。合併之乙醚萃取物用15 mL 10%碳酸鈉水溶液、15 mL鹽水洗滌，且在攪拌下經30公克硫酸鎂乾燥1小時。接著過濾乙醚溶液。添加三-正丁胺(14.3 mL，60 mmol)及均三甲苯(10 mL)。使用2.5 cm×30 cm夾套維格羅分餾柱(Vigreux column)藉由在大氣壓力下蒸餾移除大部分乙醚。剩餘液體轉移至較小蒸餾瓶中，使用兩份10 mL己烷促進轉移。經2 cm×20 cm夾套維格羅分餾柱繼續在大氣壓力下蒸餾。收集在98-105℃下餾出之液體得到14 g呈無色液體狀之標題化合物。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 0.42-0.48(m,2H),0.74-0.80(m,2H),1.45(s,3H),1.86(br.s.,1H)。
製備27：2-氟-4-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)苯酚
A)5-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-咪唑
2-氟-4-溴苯甲醚(0.216 mL，1.63 mmol)、三(2-呋喃基)膦(25.9 mg，0.108 mmol)及碳酸鉀(300 mg，2.17 mmol)置放於微波小瓶中且溶解於無水N,N -二甲基甲醯胺(4.8 mL)中。混合物用氮氣流脫氣10分鐘，添加1-甲基咪唑(0.087 mL，1.1 mmol)及乙酸鈀(II)(12.4 mg，0.054 mmol)，且混合物再脫氣10分鐘。容器於微波反應器中在140℃下置放2小時。混合物用乙酸乙酯稀釋，經Celite® 過濾且在減壓下濃縮濾液。藉由層析相繼用含25%至100%乙酸乙酯之庚烷及含0至10%甲醇之二氯甲烷梯度溶離純化粗物質得到呈黃色油狀之標題化合物(210 mg)。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ 3.57(s,3H),3.85(s,3H),6.95-6.98(m,2H),7.00-7.07(m,2H),7.42(s,1H)。與文獻(Eur .J .Org .Chem .,2008 ,5436及Eur .J .Org .,2006 ,1379)相比，7.42處之質子位移表示所需咪唑異構體。
B)2-氟-4-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)苯酚
在-30℃下向5-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-咪唑(101.8 mg，0.494 mmol)於二氯甲烷(2.0 mL)中之溶液中添加溴化硼(III)之溶液(0.50 mL，於庚烷中之1.0 M溶液)。在室溫下攪拌混合物20小時。接著冷卻混合物至-30℃且添加甲醇(2 mL)至混合物中。在真空中濃縮混合物且殘餘 物溶解於水中且用1 M氫氧化鈉中和。濃縮溶液得到呈黃色固體狀之標題化合物(90 mg)。該化合物未經純化即使用。
製備28：2-氟-4-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)苯酚
A)2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-咪唑
2-氟-4-溴苯甲醚(0.256 mL，1.93 mmol)及碘化銅(I)(375 mg，1.93 mmol)置放於微波小瓶中且溶解於N,N -二甲基甲醯胺(4.8 mL)中。混合物用氮氣流脫氣10分鐘，添加1-甲基咪唑(0.078 mL，0.96 mmol)及乙酸鈀(II)(11 mg，0.048 mmol)，且混合物再脫氣10分鐘。容器於微波反應器中在140℃下置放2小時。混合物用乙酸乙酯(3 mL)稀釋，傾入氯化銨飽和水溶液中，露天攪拌30分鐘且用乙酸乙酯萃取2次。合併之有機相用水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液。藉由層析相繼用含乙酸乙酯之庚烷(25至100%乙酸乙酯/庚烷)及含0至10%甲醇之二氯甲烷的梯度混合物溶離純化粗物質得到呈黃色油狀之2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-咪唑(35.8 mg)。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 3.66(s,3H),3.88(s,3H),6.90(s,1H),6.96(m1H),7.10(s,1H),7.24-7.33(m,2H)。與5-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-咪唑(製備27)及文獻Eur .J .Org .Chem .,2008 ,5436及Eur .J .Org .,2006 ,1379相比，質子NMR指示 所需咪唑異構體。
B)2-氟-4-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)苯酚
根據與製備27(B)中類似之程序自2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-咪唑製備2-氟-4-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)苯酚得到呈褐色固體狀之標題化合物(33.4 mg)。粗物質未經進一步純化即使用。
製備29：2-氟-4-(甲基磺醯基)-1-(丙-1-烯-2-基)苯
向1-溴-2-氟-4-(甲基磺醯基)苯(199 mg，0.790 mmol)及異丙烯基三氟硼酸鉀(300 mg，2.57 mmol)於2-丙醇(10 mL)中之溶液中相繼添加催化劑1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵二氯化鈀(67 mg，0.089 mmol)及三乙胺(0.17 mL，1.20 mmol)。在90℃下加熱反應物15小時，且接著在室溫下攪拌反應物48小時。接著添加水及乙酸乙酯且分離各層。用乙酸乙酯萃取水層。合併有機萃取物，用鹽水洗滌且經硫酸鈉乾燥。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠層析(含10%至100%乙酸乙酯之庚烷)純化殘餘物得到呈白色固體狀之標題化合物(130 mg，80%)。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ 2.17(s,3H),3.08(s,3H),5.29-5.43(m,2H),7.51(t,J =7.56 Hz,1H),7.64(dd,J =9.88,1.59 Hz,1H),7.70(dd,J =8.05,1.71 Hz,1H)。
製備30：4-羥基-2-甲基苯甲腈
含三氯化硼之二氯甲烷(61.2 mL，1 M)緩慢添加至二氯甲烷(93 mL)中且冷卻至-78℃。向其中添加4-甲氧基-2-甲基苯甲腈(3.00 g，20.4 mmol)及碘化四丁銨(7.17 g，61.2 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液。在-78℃下攪拌反應混合物5分鐘。接著使反應混合物逐漸升溫至室溫且攪拌2小時。緩慢添加冰漿以淬滅反應物。攪拌反應物30分鐘且分離各層。水層用二氯甲烷(2×)萃取且合併之有機萃取物穿過相分離濾筒且在真空中濃縮。藉由急驟層析用含0%至60%乙酸乙酯之戊烷溶離純化粗混合物得到呈黃色固體狀之目標化合物(1.85 g，68%)。1 H NMR氘代甲醇δ ppm 7.40(d,1H),6.80(s,1H),6.70(d,1H),2.40(s,3H)；GCMS(CI方法)ES+=133[M]AP+=133[M]。
製備31A：3-氟-4-羥基-N-甲基苯甲醯胺
A)4-(苯甲氧基)-3-氟苯甲酸苯甲酯
3-氟-4-羥基苯甲酸(5.00 g，32.06 mmol)、苄基溴(8.22 mL，67.3 mmol)及碳酸鉀(13.3 g，96.24 mmol)於丙酮中合併且在回流下加熱18小時。冷卻溶液至室溫，過濾固體且 濾液用乙酸乙酯稀釋。有機相用飽和鹽水溶液洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液得到所需產物4-(苯甲氧基)-3-氟苯甲酸苯甲酯。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ ppm 5.22(s,2H)5.36(s,2H)7.03(t,J=8.42 Hz,1H)7.29-7.52(m,10H)7.76-7.89(m,2H)；LCMS(ES+)=381.2(M+45)。
B)4-(苯甲氧基)-3-氟苯甲酸
4-(苯甲氧基)-3-氟苯甲酸苯甲酯(11.6 g，34.2 mmol)溶解於四氫呋喃(50 mL)及甲醇(50 mL)中。添加氫氧化鈉水溶液(70 mL，1 M)至反應混合物中且攪拌18小時。反應物於冰浴中冷卻且藉由小心添加1 M鹽酸水溶液酸化至pH 3。沈澱出白色固體且過濾並乾燥隔夜得到呈白色固體狀之所需產物4-(苯甲氧基)-3-氟苯甲酸(7.6 g，90%)。1 H NMR(500 MHz，氘代二甲亞碸)δ ppm 3.32(br.s.,1H)5.27(s,2H)7.34-7.39(m,2H)7.42(t,J=7.44 Hz,2H)7.45-7.50(m,2H)7.68(dd,J=11.83,2.07 Hz,1H)7.75(d,J=8.78 Hz,1H)。
C)4-(苯甲氧基)-3-氟-N-甲基苯甲醯胺
在0℃下添加亞硫醯氯(2.7 mL，37 mmol)至4-(苯甲氧基)-3-氟苯甲酸於二甲基甲醯胺(0.048 mL，0.617 mmol)及二氯甲烷(100 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌所得溶液20小時。在減壓下濃縮反應物且在高真空下乾燥2小時。所得黃色固體溶解於四氫呋喃(60 mL)中且添加2 M甲胺之四氫呋喃溶液(35 mL)且在室溫下攪拌反應物18小時。在減 壓下濃縮反應混合物至原始體積的一半且沈澱出白色固體。濾出固體，用水洗滌且在真空烘箱中乾燥隔夜得到呈白色固體狀之所需產物(6.00 g，70%)。1 H NMR(500 MHz，氘代二甲亞碸)δ ppm 2.76(d,J=4.39 Hz,3H)5.24(s,2H)7.30-7.38(m,2H)7.41(t,J=7.32 Hz,2H)7.45-7.50(m,2H)7.58-7.75(m,2H)8.37(d,J=4.39 Hz,1H)。
D)3-氟-4-羥基-N-甲基苯甲醯胺
4-(苯甲氧基)-3-氟-N-甲基苯甲醯胺(1.03 g，3.97 mmol)懸浮於Parr瓶中之乙醇(20 mL)中。在穩定氮氣流下添加含10%披鈀碳(80 mg)之約1.5 mL水。在室溫下於50 psi氫氛圍下搖動反應物64小時。反應混合物經Celite®墊用大量乙酸乙酯洗滌小心過濾。在減壓下濃縮濾液得到呈淺褐色固體狀之所需產物(628 mg，93%)。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ ppm 3.02(d,J=4.88 Hz,3H)7.05(t,J=8.42 Hz,1H)7.44(d,J=9.76 Hz,1H)7.60(dd,J=11.10,2.07 Hz,1H)。
製備31B：3-氟-4-羥基-N,N-二甲基苯甲醯胺
3-氟-4-羥基苯甲酸(2.00 g，12.8 mmol)、二甲胺鹽酸鹽(4.28 g，20.5 mmol)、單水合1-羥基苯并三唑(1.96 g，12.8 mmol)及二異丙基乙胺(4.5 mL，26 mmol)於二氯甲烷 中合併。添加1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(3.93 g，20.5 mmol)且反應容器用氮氣吹拂，加蓋且在室溫下攪拌隔夜。反應物用二氯甲烷及1 M磷酸稀釋。濾出形成之沈澱物且二氯甲烷層用稀碳酸氫鈉水溶液及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液。藉由急驟層析用含65%乙酸乙酯之庚烷溶離純化殘餘物得到所需產物(218 mg，9%)。LC/MS(ES+)：184.1(M+1)。
製備32：3-羥基-4,4-二甲氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯
4-側氧基-1-哌啶甲酸第三丁酯(2.00 g，10 mmol)溶解於甲醇(20 mL)中且冷卻至0℃。添加粉狀氫氧化鉀(1.26 g，22.1 mmol)。碘(2.8 g，11 mmol)溶解於甲醇(25 mL)中且經45分鐘逐滴添加至反應物中。接著反應物緩慢升溫至室溫且攪拌16小時。濃縮反應物且添加甲苯(50 mL)。濾出所得固體且用甲苯洗滌。在減壓下濃縮濾液且藉由急驟層析用含30%至100%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化殘餘物得到3-羥基-4,4-二甲氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯(1.89 g，72%)。1 H NMR(氘代甲醇，400 MHz)δ ppm 4.06-4.00(m,1H),3.99-3.91(m,1H),3.80-3.73(m,1H),3.29(s,3H),3.28(s,3H),3.22-3.10(br m,1H),2.95-2.80(brm,1H),1.91-1.77(m,2H),1.50(s,9H)。
製備33：3-羥基-4-側氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯
3-羥基-4,4-二甲氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯(6.70 g，26 mmol)溶解於丙酮(135 mL)中且添加對甲苯磺酸(244 mg，1.28 mmol)。在室溫下攪拌反應物16小時。濃縮混合物且所得殘餘物溶解於第三丁基甲基醚中且用碳酸氫鈉飽和水溶液洗滌。有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液得到呈油狀之3-羥基-4-側氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯(4.67 g，69%)。GC/MS(方法1)：R=4.95 min；MS(ESIpos)：m/z=159[M-tBu]+ 。
製備34：4-肼基-3-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯
3-羥基-4-側氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯(5.50 g，26 mmol)溶解於甲醇(120 mL)中且在加蓋Parr搖動器瓶中用氮氣流脫氣。肼鹽酸鹽(1.44 mg，21 mmol)溶解於水(20 mL)中且添加至反應物中。燒瓶用5 mL水沖洗且其亦添加至反應物中。10%碳上鉑催化劑(500 mg)於水中製成漿液且添加至反應混合物中。混合物在室溫下於50 psi氫氛圍下搖動16小時。反應經Celite®墊用甲醇洗滌過濾。在減壓下濃縮濾液且接著用庚烷稀釋且在減壓下濃縮得到所需產物4-肼基-3-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯。
製備35：4-[5-胺基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-3-羥基 哌啶-1-甲酸第三丁酯
4-肼基-3-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(5.30 g，20 mmol)及(乙氧基亞甲基)氰基乙酸乙酯(3.42 g，19.8 mmol)於絕對乙醇(170 mL)中合併。添加三水合乙酸鈉(10.90 g，79.2 mmol)且反應混合物在回流下加熱4小時。反應物冷卻至室溫，在減壓下濃縮且所得殘餘物用水及乙酸乙酯稀釋。有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液。藉由急驟層析用含10%至100%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗油狀物得到4-[5-胺基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-3-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯。
製備36：4-[5-胺基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯
4-[5-胺基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-3-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(1.71 g，4.82 mmol)溶解於二氯甲烷(50 mL)中且冷卻至-78℃。逐滴添加三氟化二乙胺基硫(0.710 mL，0.58 mmol)且接著升溫至0℃保持25分鐘。反應溶液 冷卻至-78℃且小心添加甲醇(10 mL)。在減壓下濃縮反應物且藉由急驟層析用含10%至100%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化殘餘物得到4-[5-胺基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯。
製備37：4-[5-溴-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯
4-[5-胺基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯(710 mg，1.99 mmol)溶解於乙腈(25 mL)中。添加溴化銅(II)(539 mg，2.39 mmol)且加熱反應物至60℃。逐滴添加第三丁基腈(0.315 mL，2.9 mmol)且在65℃下加熱混合物15分鐘。反應物冷卻至室溫且傾入冷的1 N鹽酸中且用乙酸乙酯(2×)萃取。合併之有機萃取物用碳酸氫鈉飽和水溶液及鹽水洗滌且經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液。藉由急驟層析用含10%至50%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗殘餘物得到4-[5-溴-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯(320 mg，38%)。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ ppm 1.37(t,3H)1.49(s,9H)1.98(d,J=13.42 Hz,1H)2.12-2.26(m,1H)2.90(br.s.,2H)4.18(br.s.,1H)4.33(q,J=7.24 Hz,2H) 4.44-4.70(m,2H)4.85-5.05(m,1H)8.04(s,1H)。
製備38：5-氰基-1-(3-氟哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
在微波小瓶中將4-[5-溴-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯(185 mg，0.31 mmol)、1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵(18 mg，0.032 mmol)、鋅塵(18 mg，0.27 mmol)、氰化鋅(39.1 mg，0.33 mmol)及10%鈀黑(19.2 mg，0.021 mmol)於二甲基乙醯胺(3 mL)中合併。反應混合物用氮氣脫氣且在170℃下加熱4.5小時。反應混合物冷卻至室溫且用乙酸乙酯稀釋。反應物經Celite®墊過濾且濾液用水稀釋且用乙酸乙酯(2×)萃取。合併之有機萃取物相繼用水及鹽水洗滌且經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液。藉由急驟層析用含10%至100%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗殘餘物得到5-氰基-1-(3-氟哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(80 mg，98%)。
製備39：4-[5-氰基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯
5-氰基-1-(3-氟哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(60 mg，0.22 mmol)溶解於四氫呋喃(3 mL)中且添加三乙胺(40 μL，0.27 mmol)。添加二碳酸二-第三丁酯(50 mg，0.225 mmol)且在室溫下在氮氣下攪拌反應物3小時。在減壓下濃縮反應物且藉由急驟層析用含10%至100%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化殘餘物得到呈油狀之4-[5-氰基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯(52 mg，63%)。
製備40：1-[1-(第三丁氧基羰基)-3-氟哌啶-4-基]-5-氰基-1H-吡唑-4-甲酸
4-[5-氰基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯(80 mg，0.22 mmol)溶解於四氫呋喃(2.5 mL)、水(1.5 mL)及甲醇(0.4 mL)中。溶液冷卻至0℃且添加單水合氫氧化鋰(19 mg，0.436 mmol)。反應物經2.5小時緩慢升溫至室溫。濃縮反應混合物；殘餘物溶解於水中且用乙酸乙酯及甲基第三丁基醚萃取。有機層用水萃取。合併之水性萃取物用1 N硫酸氫鈉水溶液酸化至pH 2。酸性溶液用乙酸乙酯(3×)萃取且萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液得到呈白色固體狀之 1-[1-(第三丁氧基羰基)-3-氟哌啶-4-基]-5-氰基-1H-吡唑-4-甲酸。
製備41：4-[5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯
新近再結晶(自庚烷)之三聚氰醯氯(78 mg，0.414 mmol)溶解於二甲氧基乙烷(2 mL)中且添加4-甲基-嗎啉(0.020 mL，0.215 mmol)。向此膠狀溶液中添加溶解於二甲氧基乙烷(2 mL)中之1-[1-(第三丁氧基羰基)-3-氟哌啶-4-基]-5-氰基-1H-吡唑-4-甲酸(70 mg，0.21 mmol)。在60℃下加熱反應物3小時。反應物冷卻至室溫且經Celite®墊用二甲氧基乙烷洗滌過濾。濾液冷卻至0℃且極緩慢地(逐滴)添加硼氫化鈉(17 mg，0.474 mmol)溶解於水(0.4 mL)中之溶液。一旦添加完成，即使反應物升溫至室溫保持2.5小時。反應溶液再用水稀釋且用1 M硫酸氫鈉酸化至pH 2.5。水層用乙酸乙酯(2×)萃取且合併之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液。藉由急驟層析用含10%至100%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗殘餘物得到呈油狀之4-[5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯(28 mg，42%)。
製備42：4-(5-氰基-4-{[(甲基磺醯基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯
4-[5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯(28 mg，0.086 mmol)溶解於二氯甲烷(3 mL)中。添加三乙胺(0.036 mL，0.258 mmol)且混合物冷卻至0℃。逐滴添加甲烷磺酸酐(20 mg，0.112 mmol)且經2小時緩慢升溫至室溫。添加二氯甲烷及碳酸氫鈉飽和水溶液至反應溶液中且分離雙相溶液。水層用二氯甲烷(2×)萃取且合併之有機萃取物穿過棉花塞。在減壓下濃縮濾液得到呈油狀之4-(5-氰基-4-{[(甲基磺醯基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯(33 mg，95%)。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ ppm 1.25-1.30(m,2H)1.50(s,9H)2.01-2.06(m,1H)2.75-2.85(m,2H)3.08(s,3H)4.64-4.74(m,1H)4.79-4.98(m,2H)5.26(s,2H)7.75(s,1H)。
製備43：3-氟-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯之異構體(B及C)
實驗細節詳細描述於以下流程4中。
步驟A)4-[(三甲基矽烷基)氧基]-3,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯
在室溫下經由加料漏斗向N -第三丁氧基羰基-4-哌啶酮(30.0 g，0.15 mol)於無水N,N -二甲基甲醯胺(300 mL)中之溶液中相繼添加三甲基矽烷基氯(22.9 mL，0.18 mol)及三乙胺(50.4 mL，0.36 mol)。在80℃下加熱所得溶液隔夜且接著冷卻至室溫。反應混合物用水及庚烷稀釋。分離各層且水層用庚烷萃取。合併之庚烷層相繼用水及鹽水洗滌且 接著經硫酸鎂乾燥。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液得到呈黃色油狀之粗產物。藉由使油狀物穿過矽膠塞用9：1庚烷/乙酸乙酯溶離來純化得到呈無色油狀之標題化合物(33.6 g，82%)。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 4.78(br s,1H),3.86(br s,2H),3.51(t,2H),2.09(br s,2H),1.45(s,9H),0.18(s,9H)。
步驟B)3-氟-4-側氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯
在室溫下向經攪拌之4-[(三甲基矽烷基)氧基]-3,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯(28.8 g，0.11 mol)於乙腈(300 mL)中之溶液中添加SelectfluorTM (41.4 g，0.12 mol)。在室溫下攪拌所得淡黃色懸浮液1.5小時。添加碳酸氫鈉飽和水溶液(300 mL)及乙酸乙酯(300 mL)且分離各層。水層用乙酸乙酯萃取2次，且合併所有有機層並相繼用碳酸氫鈉飽和水溶液及鹽水洗滌且接著經硫酸鎂乾燥。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液得到呈淡黃色油狀之粗產物。藉由重複矽膠管柱層析用庚烷/乙酸乙酯梯度(2：1至1：1)純化此物質得到呈白色固體狀之標題化合物(15.5 g，67%)。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)：δ 4.88(dd,0.5H),4.77(dd,0.5H),4.47(br s,1H),4.17(ddd,1H),3.25(br s,1H),3.23(ddd,1H),2.58(m,1H),2.51(m,1H),1.49(s,9H)。
或者，可如下進行步驟B，分離酮之水合物。
在室溫下向經攪拌之4-[(三甲基矽烷基)氧基]-3,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯(41.3 g，0.15 mol)於乙腈(500 mL)中之溶液中添加SelectfluorTM (56.9 g，0.16 mol)。在室溫下攪拌所得淡黃色懸浮液4小時10分鐘。添加碳酸氫鈉飽和水溶液及乙酸乙酯且分離各層。水層用乙酸乙酯萃取2次，且合併所有有機層並相繼用碳酸氫鈉飽和水溶液及鹽水洗滌且接著經硫酸鎂乾燥。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液得到呈白色固體狀之粗3-氟-4-側氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯。粗3-氟-4-側氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯懸浮於四氫呋喃(120 mL)中且添加水(120 mL)。在室溫下攪拌所得溶液5.5小時且接著在減壓下濃縮。殘餘物在高真空下乾燥，轉移至錐形瓶中且懸浮於二氯甲烷(250 mL)中。攪拌所得懸浮液5分鐘且使用燒結玻璃漏斗藉由過濾收集固體。所得濾餅用二氯甲烷(200 mL)、二氯甲烷(200 mL)與庚烷(100 mL)之1：1混合物充分洗滌。接著在高真空下乾燥固體得到3-氟-4,4-二羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(26.4 g)。1 H NMR(500 MHz，氘代二甲亞碸)δ 1.38(s,9H),1.49-1.52(m,1H),1.63-1.68(m,1H),2.82-3.20(m,2H)3.75(br,1H),3.97(br,1H),4.12(d,J=45,1H),5.92(s,1H),5.97(s,1H)。
步驟C)(R ＊ )-3-(S)-氟-4-(R)-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(外消旋)
在0℃下向3-氟-4-側氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯(15.5 g，71.3 mmol)於甲醇(150 mL)中之溶液中添加硼氫化鈉(3.51 g，93.7 mmol)。在0℃下攪拌所得混合物2小時且接著升溫至室溫。添加氯化銨飽和水溶液(200 mL)且混合物用乙酸乙酯萃取3次。合併之萃取物用鹽水洗滌且經硫酸鎂乾燥。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液得到粗產物混合物，藉由矽膠管柱層析用庚烷-乙酸乙酯(3：2-1：1)溶離純化得到呈淡黃色油狀之第一溶離產物(3,4-反)-3-氟-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(化合物C ，流程4)(3.81 g，24%)，其在靜置時固化為白色固體。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 4.35(ddd,0.5H),4.18(ddd,0.5H),4.15(br s,1H),3.89-3.74(m,2H),2.97(br s,1H),2.93(ddd,1H),2.47(s,1H),2.05-1.92(m,1H),1.58-1.46(m,1H),1.44(s,9H)。
接著第二溶離化合物(3,4-順)-3-氟-4-羥基-哌啶-1-甲酸第三丁酯(化合物B ，流程4)(10.57 g，68%)分離為白色固體。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 4.69-4.65(m,0.5H),4.53-4.49(m,0.5H),3.92-3.86(m,2H),3.69(brs,1H),3.39(br s,1H),3.16(br s,1H),2.13(s,1H),1.88-1.73(m,2H),1.44(s,9H)。
或者，步驟C可如下以水合3-氟-4,4-二羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(步驟2)為起始物質進行。
在-35℃下經30分鐘向經攪拌之3-氟-4,4-二羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(20.0 g，85 mmol)於四氫呋喃(500 mL)中之溶液中逐滴添加L-Selectride®於四氫呋喃中之溶液(170 mL，1 M，170 mmol)。反應混合物經1.5小時升溫至0℃。反應混合物用氯化銨飽和水溶液(150 mL)淬滅且劇烈攪拌15分鐘。向此0℃混合物中添加pH 7磷酸鹽緩衝液(150 mL)，接著逐滴添加35%過氧化氫水溶液(150 mL)。攪拌所得混合物30分鐘且用乙酸乙酯稀釋。分離有機層且相繼用水、硫代硫酸鈉飽和水溶液及鹽水洗滌。接著有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液得到粗產物混合物，藉由矽膠管柱層析[combiflash ISCO 330 g管柱]用庚烷-乙酸乙酯(10%至60%梯度)溶離純化得到(3,4-順)-3-氟-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(13.9 g)。
步驟D)(3,4-順)-3-氟-4-羥基-哌啶-1-甲酸第三丁酯之對映異構體
利用Chiralpak AD-H管柱(10×250 mm)經由製備型高壓液相層析分別用90：10二氧化碳及乙醇之移動相以10毫升/分鐘之流動速率將1公克外消旋(3,4-順)-3-氟-4-羥基-哌啶-1-甲酸第三丁酯樣品純化為其對映異構體。用於監測分離之波長為210 nM。分別以90：10二氧化碳及乙醇之等濃度移動相在2.5毫升/分鐘流動速率下使用Chiralpak AD-H(4.6 mm×25 cm)管柱，使用用分析型高壓層析測定各對映異構體之分析純度。用於監測峰之波長為210 nm。獲得以下兩種異構體：
化合物E ，流程4)(3S,4R)-3-氟-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯，對映異構體1 (363毫克)：R t =2.67分鐘(100% ee)(二氯甲烷中之旋光度=+21.2度)，及
化合物D ，流程4)(3R,4S)-3-氟-4-羥基哌啶-2-甲酸第三丁酯，對映異構體2 (403 mg)：R t =2.99分鐘(88% ee)。
藉由製備使用以上對映異構體1製備之5-(6-((3S,4R)-3-氟哌啶-4-基氧基)-5-甲基嘧啶-4-基)-1-甲基-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑之(1S)-(+)-樟腦磺酸鹽(參見例如以下外消旋形式之製備)來測定(3,4-順)-3-氟-4-羥基-哌啶-1-甲酸第三丁酯異構體之絕對立體化學。
製備5-(6-{[(3,4-順)-3-氟哌啶-4-基]氧基}-5-甲基嘧啶-4-基)-1-甲基-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑(外消旋)
A.製備5-(6-氯-5-甲基嘧啶-4-基)-1-甲基-1,4,5,6-四氫吡 咯并[3,4-c]吡唑
1-甲基-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑雙鹽酸鹽(2.00 g，10.2 mmol)及4,6-二氯-5-甲基嘧啶(1.66 g，10.2 mmol)在室溫下懸浮於四氫呋喃(51 mL)中。向其中添加三乙胺(4.41 mL，31.6 mmol)，其使混合物混濁且產生黏著至燒瓶壁之褐色固體。在室溫下攪拌此混合物4小時且接著在50℃下再加熱19小時。反應混合物冷卻至室溫且用水(100 mL)稀釋。此混合物用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取。收集有機萃取物，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且過濾。濾液在真空下縮減至乾燥得到呈淺褐色固體狀之標題化合物(1.95 g，78%)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。
1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ 2.54(s,3H)3.88(s,3H)4.90(明顯二重峰，J =3.66 Hz,4H)7.28(s,1H)8.29(s,1H)。
B.製備(3,4-順)-3-氟-4-{[5-甲基-6-(1-甲基-4,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-甲酸第三丁酯(外消旋)
(3,4-順)-3-氟-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(1.67 g，7.62 mmol)與以上製備之5-(6-氯-5-甲基嘧啶-4-基)-1-甲基-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑(900 mg，3.60 mmol)之混合物溶解於1,4-二噁烷(20 mL)中且加熱至105℃。加熱10分鐘後，所有物質溶解，且向混合物中快速添加雙(三甲基矽烷基)胺基鈉(4.3 mL，4.3 mmol，1 M於甲苯中)，產生混濁黃色混合物，接著在105℃下攪拌2小時。接著反應物冷卻至室溫且藉由添加水與碳酸氫鈉飽和水溶液之等體積混合物淬滅。混合物用乙酸乙酯(3×15 mL)萃取。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且過濾。在真空下濃縮濾液得到黃色殘餘物，藉由矽膠管柱層析用含60%至100%乙酸乙酯之庚烷溶離純化。標題化合物與起始物質5-(6-氯-5-甲基嘧啶-4-基)-1-甲基-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑之混合物分離為白色固體(1.20 g)且未經進一步純化即用於後續反應中。
藉由HPLC純化來自在相同條件下進行之獨立反應之一批粗(3,4-順)-3-氟-4-{[5-甲基-6-(1-甲基-4,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-甲酸第三丁酯。粗樣品(9.5 mg)溶解於二甲亞碸(1 mL)中且用Waters XBridge C18 19×100 mm，0.005 mm管柱藉由製備型逆相HPLC用8.5分鐘內80%水/乙腈(0.03%氫氧化銨改質劑)至0%水/乙腈之線性梯度，隨後1.5分鐘時期0%水/乙腈溶離進行純化；流動速率：25毫升/分鐘。由此獲得標題化合物(5 mg)。分析型LCMS：滯留時間2.81分鐘(Waters XBridge C18 4.6×50 mm，0.005 mm管柱；4.0分鐘內90%水/乙腈線性梯度至5%水/乙腈，接著1分鐘時期5%水/乙腈；0.03%氫氧化銨改質劑；流動速率：2.0毫升/分鐘)；LCMS(ES+)433.2(M+1)。
C.製備5-(6-{[(3,4-順)-3-氟哌啶-4-基]氧基}-5-甲基嘧啶-4-基)-1-甲基-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑(外消旋)
以上製備之粗(3,4-順)-3-氟-4-{[5-甲基-6-(1-甲基-4,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-基)嘧啶-4-基]氧基}哌啶-1-甲酸第三丁酯(1.20 g)溶解於二氯甲烷(12 mL)中且向此溶液中添加三氟乙酸(5 mL)。在室溫下攪拌反應物1小時。在真空下移除溶劑且殘餘物溶解於水(50 mL)及1 N鹽酸水溶液(10 mL)中。混合物用二氯甲烷(10×30 mL)萃取。接著藉由添加1 N氫氧化鈉水溶液(20 mL)使水層達到pH 12且用二氯甲烷(40 mL)萃取3次。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液得到呈白色固體狀之5-(6-{[(3,4-順)-3-氟哌啶-4-基]氧基}-5-甲基嘧啶-4-基)-1-甲基-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑(0.72 g，經2個步驟60%)，其未經附加純化即使用。
1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ 1.84-2.08(m,2H)2.33(s,3H)2.69-2.84(m,1H)2.83-3.01(m,1H)3.16(d, J=13.66 Hz,1H)3.27-3.44(m,1H)3.86(s,3H)4.78-4.91(m,1H)4.86(d,J=1.95 Hz,2H)4.88(d,J=1.95 Hz,2H)5.21-5.32(m,1H)7.26(s,1H)8.18(s,1H)；LCMS(ES+)333.4(M+1)。
請注意：實例編號始於11。
實例11：4-{5-氰基-4-[(2,4-二氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯
4-(5-氰基-4-((甲基磺醯基氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(製備10)(166.5 mg，0.449 mmol)、2,4-二氟苯酚(0.052 mL，0.539 mmol)及碳酸銫(293 mg，0.898 mmol)置放於微波小瓶中，溶解於乙腈(3 mL)中且於微波反應器中在110℃下加熱20分鐘。混合物冷卻至室溫且在真空下濃縮，用1 N氫氧化鈉溶液稀釋且用二氯甲烷萃取3次。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮濾液。用Waters Atlantis C18 管柱(4.6×50 mm，0.005 mm)藉由製備型逆相HPLC用含水之乙腈(0.05%三氟乙酸改質劑)之梯度溶離純化粗物質得到4-{5-氰基-4-[(2,4-二氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯。分析型LCMS：滯留時間：3.62分鐘(Waters Atlantis C18 4.6×50 mm，0.005 mm；4.0分鐘內95%水/乙腈線性梯度至5%水/乙腈；0.05%三氟乙酸改質劑；流動速率2.0毫 升/分鐘)；LCMS(ES+)：405.18(M+H)。
實例12：4-{5-氰基-4-[(2-甲基苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯
向經攪拌之鄰甲酚(21 mg，0.19 mmol)及4-(5-氰基-4-((甲基磺醯基氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(製備10)(60 mg，0.16 mmol)於乙腈(1.6 mL)中之溶液中添加碳酸銫(106 mg，0.32 mmol)。在回流下加熱混合物15小時。冷卻至室溫後，在真空中濃縮粗物質至乾燥且殘餘物溶解於水中且用乙酸乙酯萃取3次(每次萃取20 mL)。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮濾液至乾燥得到棕褐色殘餘物(0.065 g，100%)。粗樣品溶解於二甲亞碸(1 mL)中且用Waters Sunfire C18 19×100 mm，0.005 mm管柱藉由製備型逆相HPLC用8.5分鐘內80%水/乙腈至0%水/乙腈之線性梯度，接著1.5分鐘時期0%水/乙腈(0.05%三氟乙酸改質劑)溶離進行純化；流動速率：25毫升/分鐘。分析型LCMS：滯留時間3.82分鐘(Waters Atlantis C18 4.6×50 mm，0.005 mm管柱；4.0分鐘內95%水/乙腈線性梯度至5%水/乙腈，接著1分鐘時期5%水/乙腈；0.05%三氟乙酸改質劑；流動速率：2.0毫升/分鐘)；LCMS(ES+)383.2(M+1)。
實例13：4-{5-氰基-4-[(2,5-二氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
A)4-(5-氰基-4-((2,5-二氟苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯
向經攪拌之2,5-二氟苯酚(54 mg，0.39 mmol)及4-(5-氰基-4-((甲基磺醯基氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(製備16)(126 mg，0.33 mmol)於3 mL乙腈中之溶液中添加碳酸飽(214 mg，0.66 mmol)。在回流下加熱混合物15小時。混合物冷卻至室溫且用乙酸乙酯及水稀釋。分離各層且水相用乙酸乙酯萃取。合併之有機相用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液得到4-(5-氰基-4-((2,5-二氟苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯，其未經純化即用於下一步驟中。
B)4-((2,5-二氟苯氧基)甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲腈
向4-(5-氰基-4-((2,5-二氟苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(137 mg，0.33 mmol)於5 mL二氯甲烷中之溶液中添加0.82 mL鹽酸(4 M於1,4-二噁烷中)。在室溫下攪拌混合物2小時，隨後在真空中濃縮混合物得到4-((2,5-二氟苯氧基)甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲腈，其未經純化即用於下一步驟中。
C)4-{5-氰基-4-[(2,5-二氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
在室溫下向經攪拌之4-((2,5-二氟苯氧基)甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲腈(104 mg，0.33 mmol)於3.3 mL二氯甲烷中之溶液中相繼添加三乙胺(0.18 mL，1.3 mmol)及碳酸1-甲基環丙酯4-硝基苯酯(參見製備26及WO 09105717)(171 mg，0.72 mmol)。在氮氣氛圍下攪拌所得亮黃色混合物15小時。反應混合物用二氯甲烷及水稀釋。分離各層且水相用二氯甲烷萃取。合併之有機相用碳酸氫鈉飽和水溶液、鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液得到225 mg粗物質。部分(45 mg)此物質溶解於二甲亞碸(0.9 mL)中且用Waters XBridge C18 管柱19×100 mm，0.005管柱藉由製備型逆相HPLC用含水之乙腈(0.03%氫氧化銨改質劑)之梯度溶離純化。分析型LCMS：滯留時間3.60分鐘(Atlantis C18 4.6×50 mm，5微米管柱；4分鐘內95%水/乙腈線性梯度至5%水/乙腈；0.05%三氟乙酸改質劑；流動速率：2.0毫升/分鐘)；LCMS(ES+)：417.1(M+H)。
實例14：4-{5-氰基-4-[(2,3-二氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用市售2,3-二氟苯酚根據與實例13類似之程序製備標 題化合物。粗物質(49 mg)溶解於二甲亞碸(0.9 mL)中且用Waters XBridge C18 管柱19×100 mm，0.005管柱藉由製備型逆相HPLC用含水之乙腈(0.03%氫氧化銨改質劑)之梯度溶離純化。分析型LCMS：滯留時間3.62分鐘(Atlantis C18 4.6×50 mm，5微米管柱；4分鐘內95%水/乙腈線性梯度至5%水/乙腈；0.05%三氟乙酸改質劑；流動速率：2.0毫升/分鐘)；LCMS(ES+)：417.2(M+H)。
實例15：4-{4-[(4-胺甲醯基-2-氟苯氧基)甲基]-5-氰基-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
A)4-(4-((4-胺甲醯基-2-氟苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯
向經攪拌之4-(5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(製備15)(200 mg，0.65 mmol)、3-氟-4-羥基苯甲醯胺(製備23)(100 mg，0.64 mmol)及三苯基膦(188 mg，0.72 mmol)於3 mL 1,4-二噁烷中之溶液中逐滴添加偶氮二甲酸二乙酯(0.11 mL，0.69 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜，隨後在真空中濃縮混合物。藉由急驟層析用含30%至70%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化殘餘物得到呈白色固體狀之4-(4-((4-胺甲醯基-2-氟苯氧基)甲 基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(215 mg)。
B)4-((5-氰基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)甲氧基)-3-氟苯甲醯胺
在室溫下向經攪拌之4-(4-((4-胺甲醯基-2-氟苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(215 mg，0.48 mmol)於2 mL二氯甲烷中之溶液中添加1 mL三氟乙酸。1小時後，在真空中濃縮溶液。藉由急驟層析用含1%至15%甲醇之二氯甲烷梯度混合物(含有2%氨水)溶離純化殘餘物得到呈白色固體狀之4-((5-氰基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)甲氧基)-3-氟苯甲醯胺(150 mg)。
C)4-{4-[(4-胺甲醯基-2-氟苯氧基)甲基]-5-氰基-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
在室溫下向經攪拌之4-((5-氰基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)甲氧基)-3-氟苯甲醯胺(40 mg，0.12 mmol)於1 mL二氯甲烷中之溶液中相繼添加三乙胺(0.036 mL，0.26 mmol)及碳酸1-甲基環丙酯4-硝基苯酯(製備26及WO 09105717)(60 mg，0.26 mmol)。在65℃下氮氣氛圍下攪拌所得亮黃色混合物2小時。反應物冷卻至室溫，用水稀釋且用二氯甲烷萃取2次。合併之有機萃取物用飽和碳酸氫鈉洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液。藉由急驟層析用含40%至90%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化殘餘物得到呈白色固體狀之4-{4-[(4-胺甲醯基-2-氟苯氧基)甲基]-5-氰基-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯(34 mg)。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 0.59-0.67(m,2H),0.83-0.92 (m,2H),1.54(s,3H),2.02(d,J =4.10 Hz,2H),2.04-2.22(m,2H),2.91(br.s.,2H),4.11-4.43(m,2H),4.44-4.55(m,1H),5.15(s,2H),7.03-7.10(m,1H),7.52-7.62(m,2H),7.68(s,1H)。1 H NMR表明存在少於10%咸信為相應胺基甲酸異丙酯衍生物之物質(因碳酸異丙酯4-硝基苯酯污染碳酸1-甲基環丙酯4-硝基苯酯導致)。LCMS(ES) 442.4(M+1)。
實例16：4-{4-[(4-胺甲醯基苯氧基)甲基]-5-氰基-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用市售4-羥基苯甲醯胺根據與實例15類似之程序製備標題化合物。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 0.57-0.67(m,2H),0.84-0.91(m,2H),1.56(s,3H),1.93-2.05(m,2H),2.05-2.19(m,2H),2.91(t,J =15.62 Hz,2H),4.26(br.s.,2H),4.44-4.55(m,1H),5.09(s,2H),6.96-7.04(m,2H),7.66(s,1H),7.75-7.82(m,2H)。1 H NMR表明存在少於10%咸信為相應胺基甲酸異丙酯衍生物之物質(因碳酸異丙酯4-硝基苯酯污染碳酸1-甲基環丙酯4-硝基苯酯導致)。LCMS(ES)424.4(M+1)。
實例17：4-(5-氰基-4-((4-氰基苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基) 哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用市售4-羥基苯甲腈根據與實例15類似之程序製備標題化合物。藉由急驟層析用含乙酸乙酯之庚烷之梯度混合物(0至100%乙酸乙酯)溶離進行粗反應混合物之純化。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ 0.60-0.70(m,2H),0.84-0.94(m,2H),1.23-1.31(m,1H),1.56(s,3H),2.01-2.15(m,4H),2.93(m,2H),4.11-4.37(m,1H),4.49-4.55(m,1H),5.10(s,2H),7.03(d,J=8.78 Hz,2H),7.63(d,J=8.78 Hz,2H),7.67(s,1H)。
實例18：4-(4-((4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
使用4-(1H-吡唑-1-基)苯酚(WO 2003072547)根據與實例12類似之程序製備標題化合物。藉由急驟層析用含乙酸乙 酯之庚烷之梯度混合物(0至100%乙酸乙酯)溶離進行粗反應混合物之純化。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ 1.28(d,J =6.34 Hz,6H),2.01-2.09(m,2H),2.17(m,2H),2.91-2.99(m,2H),4.37(m,2H),4.50-4.58(m,1H),4.93-4.98(m,1H),5.11(s,2H),6.47(t,J =2.07 Hz,1H),7.07(d,J =9.03 Hz,2H),7.64(d,J =9.03 Hz,2H),7.70(s,1H),7.72(d,J =1.71 Hz,1H),7.86(d,J =2.44 Hz,1H)。LCMS(ES)435.4(M+1)。
實例19：4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯及4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
A)4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯及4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
向經攪拌之4-(5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(94 mg，0.322 mmol)、2-氟-4-(1-((2-(三甲 基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-四唑-5-基)苯酚及2-氟-4-(2-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)苯酚(製備17)(100 mg，0.322 mmol)以及三苯基膦(110 mg，0.42 mmol)於5 mL 1,4-二噁烷中之溶液中逐滴添加偶氮二甲酸二乙酯(0.060 mL，0.39 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜，隨後在真空中濃縮混合物。藉由急驟層析用含10%至40%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化殘餘物得到4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯及4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(140 mg，產率74%)。
4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ -0.05-0.01(m,9H),0.90-1.00(m,2H),1.18-1.27(m,6H),2.02(br.s.,2H),2.13(m,2H)2.93(br.s.,2H),3.65-3.78(m,2H),4.30(d,J =7.22 Hz,2H),4.46-4.58(m,1H),4.86-4.98(m,1H),5.16(s,2H),5.89(s,2H),7.09-7.18(m,1H),7.69(s,1H),7.88-7.96(m,2H)。LCMS(ES)585.1(M+1)。
B)4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯及4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲 基)-1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯及4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(220 mg，0.38 mmol)溶解於乙醇(3 mL)中且逐滴添加2 M鹽酸水溶液(3 mL)。在50℃下攪拌所得混合物4小時，隨後冷卻至室溫且過濾。所得白色固體用乙酸乙酯及庚烷(1/1體積)洗滌且在減壓下乾燥得到標題化合物(80 mg，產率47%)。1 H NMR(400 MHz，氘代二甲亞碸)δ 1.16(d,J =6.25 Hz,6H),1.76-1.90(m,2H),1.98(dd,J =14.45,3.12 Hz,2H),2.99(br.s.,2H),4.04(d,J =15.81 Hz,2H),4.59-4.71(m,1H),4.70-4.82(m,1H),5.27(s,2H),7.47-7.57(m,1H),7.80-7.83(m,1H),7.83-7.87(m,1H),7.90(s,1H)。LCMS(ES)455.0(M+1)。
實例20：4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯及實例21：4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-甲基-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
在室溫下分2份向4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯及4-(5-氰基- 4-((2-氟-4-(2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(70 mg，0.15 mmol)於四氫呋喃(2 mL)中之溶液中添加氫化鈉(14 mg，0.31 mmol)，且攪拌所得混合物5分鐘。接著添加碘甲烷(0.03 mL，0.46 mmol)且在室溫下再攪拌反應混合物16小時。藉由添加水淬滅反應物且混合物用乙酸乙酯稀釋。分離有機相且水相用乙酸乙酯萃取2次。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液。藉由急驟矽膠層析用含乙酸乙酯之庚烷之梯度混合物(30%至60%乙酸乙酯)溶離純化殘餘物得到4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(10 mg，產率14%)及4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-甲基-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(30 mg，產率42%)。
4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(實例20)。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 1.18-1.28(m,6H),1.95-2.06(m,2H),2.13(m,2H),2.85-3.02(m,2H),4.17(s,3H),4.36(d,J =10.15 Hz,2H),4.46-4.57(m,1H)4.92(spt,1H),5.19(s,2H),7.17-7.24(m,1H),7.48-7.58(m,2H),7.70(s,1H)。LCMS(ES)469.0(M+1)。
4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-甲基-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(實例21)。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 1.24(d,J =6.25 Hz,6H)1.95-2.05 (m,2H)2.13(m,2H)2.93(t,J =12.59 Hz,2H)4.31(br.s.,2H)4.37(s,3H)4.51(m,1H)4.92(m,1H)5.16(s,2H)7.09-7.16(m,1H)7.69(s,1H)7.83-7.87(m,1H)7.87-7.90(m,1H)。LCMS(ES)469.0(M+1)。
實例22：4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-(2-羥基乙基)-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
A)4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-(2-(三甲基矽烷基氧基)乙基)-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
向經攪拌之4-(5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(製備5)(78 mg，0.266 mmol)、2-氟-4-(2-(2-(三甲基矽烷基氧基)乙基)-2H-四唑-5-基)苯酚(製備19)(90 mg，0.27 mmol)及三苯基膦(77 mg，0.29 mmol)於5 mL 1,4-二噁烷中之溶液中逐滴添加偶氮二甲酸二乙酯(0.046 mL，0.28 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物15小時，隨後在真空中濃縮混合物。藉由急驟層析用含5%至40%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化殘餘物得到4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-(2-(三甲基矽烷基氧基)乙基)-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(140 mg，產率 86%)。
B)4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-(2-羥基乙基)-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-(2-(三甲基矽烷基氧基)乙基)-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(140 mg，0.228 mmol)溶解於甲醇(2 mL)中且逐滴添加4 M鹽酸(1 mL)之1,4-二噁烷溶液。在室溫下攪拌所得混合物2小時，隨後在減壓下濃縮。劃分殘餘物(160 mg)且藉由逆相HPLC純化約50 mg粗產物得到標題化合物(30 mg，26%)(管柱：Waters XBridge C18 19×100，5微米；移動相A：含0.03%氫氧化銨之水(v/v)；移動相B：含0.03%氫氧化銨之乙腈(v/v)；梯度：8.5分鐘內85%水/15%乙腈線性變化至0%水/100%乙腈，在0%水/100%乙腈下保持至10.0分鐘。流動速率：25 mL/min。偵測：215 nm。LCMS(ES+)：499.5(M+1)。
實例23：4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1-(2-羥基乙基)-1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
A)4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1-(2-(三甲基矽烷基氧基)乙基)- 1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
向經攪拌之4-(5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(43 mg，0.15 mmol)、2-氟-4-(1-(2-(三甲基矽烷基氧基)乙基)-1H-四唑-5-基)苯酚(製備20)(50 mg，0.15 mmol)及三苯基膦(43 mg，0.16 mmol)於3 mL 1,4-二噁烷中之溶液中逐滴添加偶氮二甲酸二乙酯(0.025 mL，0.16 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜，隨後在真空中濃縮混合物。藉由急驟層析用含30%至70%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化殘餘物得到4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1-(2-(三甲基矽烷基氧基)乙基)-1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(50 mg，產率55%)。
B)4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1-(2-羥基乙基)-1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1-(2-(三甲基矽烷基氧基)乙基)-1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(50 mg，0.082 mmol)溶解於甲醇(2 mL)中且逐滴添加4 M鹽酸(1 mL)之1,4-二噁烷溶液。在室溫下攪拌所得混合物2小時，隨後在減壓下濃縮。藉由逆相HPLC純化殘餘物(60 mg)得到標題化合物(20 mg，產率49%)(管柱：Waters XBridge C18 19×100，5微米；移動相A：含0.03%氫氧化銨之水(v/v)；移動相B：含0.03%氫氧化銨之乙腈(v/v)；梯度：8.5分鐘內80%水/20%乙腈線性變化至0%水/100%乙腈，在0%水/100%乙腈下保持至10.0分鐘。流動速率： 25 mL/min。偵測：215 nm。
LCMS(ES+)：499.4(M+1)。
實例24：4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用2-氟-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯酚(製備21)根據與實例15類似之程序製備標題化合物。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 0.58-0.67(m,2H),0.83-0.92(m,2H),1.57(s,3H),1.94-2.05(m,2H),2.05-2.21(m,2H),2.92(t,J =12.98 Hz,2H),4.17(s,3H),4.32(br.s.,2H),4.43-4.56(m,1H),5.19(s,2H),7.17-7.24(m,1H),7.48-7.58(m,2H),7.70(s,1H)。1 H NMR表明存在少於10%咸信為相應胺基甲酸異丙酯衍生物之物質(因碳酸異丙酯4-硝基苯酯污染碳酸1-甲基環丙酯4-硝基苯酯導致)。LCMS(ES)481.6(M+1)。
實例25：4-(5-氰基-4-{[4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯酚(製備22)根據與實例 15類似之程序製備標題化合物。
1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 0.60-0.67(m,2H),0.83-0.91(m,2H),1.58(s,3H),1.96-2.06(m,2H),2.06-2.21(m,2H),2.84-3.00(m,2H),4.16(s,3H),4.33(br.s.,2H),4.45-4.57(m,1H),5.12(s,2H),7.10-7.15(m,2H),7.68(s,1H),7.69-7.74(m,2H)。1 H NMR表明存在少於10%咸信為相應胺基甲酸異丙酯衍生物之物質(因碳酸異丙酯4-硝基苯酯污染碳酸1-甲基環丙酯4-硝基苯酯導致)。LCMS(ES)463.5(M+1)。
實例26：4-(4-((4-胺甲醯基-3-氟苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用2-氟-4-羥基苯甲醯胺(製備24)根據與實例13類似之程序製備標題化合物。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 0.57-0.65(m,2H),0.82-0.89(m,2H),1.53(s,3H),1.92-2.04(m,2H),2.10(qd,J =12.14,4.20 Hz,2H),2.90(br.s.,2H),4.32(br.s.,2H),4.49(tt,J =11.25,4.37 Hz,1H),5.02-5.09(m,2H),6.00(br.s.,1H),6.51-6.64(m,1H),6.69(dd,J =13.66,2.54 Hz,1H),6.84(dd,J =8.78,2.54 Hz,1H),7.64(s,1H),8.07(t,J =9.08 Hz,1H)。1 H NMR表明存在少於 10%咸信為相應胺基甲酸異丙酯衍生物之物質(因碳酸異丙酯4-硝基苯酯污染碳酸1-甲基環丙酯4-硝基苯酯導致)。LCMS(ES)442.4(M+1)。
實例27：4-(5-氰基-4-{1-[2-氟-4-(甲基磺醯基)苯氧基]乙基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
使用2-氟-4-(甲基磺醯基)苯酚及4-(5-氰基-4-(1-羥基乙基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(製備25)根據與實例15類似之程序製備標題化合物。藉由逆相HPLC純化樣品(管柱：Waters XBridge C18 19×100，5微米；移動相A：含0.03%氫氧化銨之水(v/v)；移動相B：含0.03%氫氧化銨之乙腈(v/v)；梯度：8.5分鐘內80%水/20%乙腈線性變化至0%水/100%乙腈，在0%水/100%乙腈下保持至10.0分鐘。流動速率：25毫升/分鐘。LCMS(ES+)：479.2(M+1)。
實例28：4-(5-氰基-4-{1-[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]乙基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
使用2-甲基吡啶-3-醇及4-(5-氰基-4-(1-羥基乙基)-1H-吡 唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(製備25)根據與實例15類似之程序製備標題化合物。藉由逆相HPLC純化樣品(管柱：Waters XBridge C18 19×100，5微米；移動相A：含0.03%氫氧化銨之水(v/v)；移動相B：含0.03%氫氧化銨之乙腈(v/v)；梯度：8.5分鐘內85%水/15%乙腈線性變化至0%水/100%乙腈，在0%水/100%乙腈下保持至10.0分鐘。流動速率：25毫升/分鐘。LCMS(ES+)：398.2(M+1)。
實例29：4-(5-氰基-4-{2-[2-氟-4-(甲基磺醯基)苯基]丙基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
A)4-(5-氰基-4-乙烯基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
在-78℃下向經攪拌之溴化(甲基)-三苯基鏻(323 mg，0.88 mmol)於四氫呋喃(5 mL)中之混合物中逐滴添加正丁基鋰(0.360 mL，0.89 mmol，2.5 M於己烷中)。在-78℃下攪拌所得黃色混合物30分鐘，且接著添加4-(5-氰基-4-甲醯基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(實例9，步驟A)(171 mg，0.59 mmol)於四氫呋喃(2.5 mL)中之溶液。移除冷浴且在室溫下攪拌反應混合物3.75小時。反應物用氯化銨飽和水溶液淬滅且混合物用乙酸乙酯萃取2次。合併之萃取物相繼用水及鹽水洗滌且接著經硫酸鈉乾燥。過濾混合物且在真空中濃縮濾液。藉由矽膠層析用含乙酸乙酯 之庚烷之梯度混合物(10%至100%)溶離純化殘餘物得到呈澄清油狀之標題化合物(116 mg，68%)。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ 0.88(d,J =6.10 Hz,6H),1.55-1.67(m,2H),1.68-1.84(m,2H),2.43-2.73(m,2H),3.95(br.s.,2H),4.04-4.21(m,1H)4.44-4.67(m,1H),5.02(d,J =11.22 Hz,1H),5.43(d,J =17.81 Hz,1H),6.20(dd,J =17.81,11.22 Hz,1H),7.27(s,1H)。
B)(E,Z )-4-(5-氰基-4-(2-(2-氟-4-(甲基磺醯基)苯基)丙-1-烯基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
向4-(5-氰基-4-乙烯基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(116 mg，0.4 mmol)及2-氟-4-(甲基磺醯基)-1-(丙-1-烯-2-基)苯(製備29)(43 mg，0.20 mmol)於無水二氯甲烷(2 mL)中之溶液中添加第二代荷維達-古露比斯催化劑(Hoveyda-Grubbs catalyst；自Aldrich購得)(12.5 mg，0.020 mmol)。在40℃下加熱綠色溶液72小時同時定期添加二氯甲烷。在減壓下濃縮物質且藉由矽膠層析(含10%至100%乙酸乙酯之庚烷)純化殘餘物得到呈不純油狀之產物(8 mg，8%)。此物質按原樣使用。LCMS(APCI)：473.2(M-1)。
C)4-(5-氰基-4-{2-[2-氟-4-(甲基磺醯基)苯基]丙基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
在H-CubeTM 上在「全氫」設定下使用10%披鈀碳濾筒在1毫升/分鐘流動速率下氫化4-(5-氰基-4-(2-(2-氟-4-(甲基磺醯基)苯基)丙-1-烯基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸(E,Z)-異丙酯(8 mg，0.02 mmol)於乙酸乙酯(3 mL)中之溶液。在真 空中濃縮物質且藉由逆相HPLC(管柱：Waters XBridge C18 19×100，5微米；移動相A：含0.03%氫氧化銨之水(v/v)；移動相B：含0.03%氫氧化銨之乙腈(v/v)；梯度：8.5分鐘內80%水/20%乙腈線性變化為0%水/100%乙腈，在0%水/100%乙腈下保持至10.0分鐘；流動速率：25毫升/分鐘)純化殘餘物(4 mg)得到標題化合物(1.9 mg，23%)：LCMS(ES+)：477.2(M+1)。
實例30：4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用2-甲基吡啶-3-醇根據與實例13類似之程序製備標題化合物。藉由急驟層析用含乙酸乙酯之庚烷之梯度混合物(60%至100%乙酸乙酯)溶離純化粗物質得到77 mg呈白色固體狀之標題化合物。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ 0.60-0.66(m,2H),0.83-0.90(m,2H),1.55(s,3H),1.96-2.05(m,2H),2.05-2.20(m,2H),2.49(s,3H),2.84-2.98(m,2H),4.11-4.42(m,2H),4.46-4.55(m,1H),5.04(s,2H),7.06-7.16(m,2H),7.65(s,1H),8.12(dd,J =4.49,1.56 Hz,1H)。
實例31：4-{5-氰基-4-[(2,3,6-三氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
A)4-(5-氰基-4-((2,3,6-三氟苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯
4-(5-氰基-4-((甲基磺醯基氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(製備16)(87.8 mg，0.228 mmol)、2,3,6-三氟苯酚(51.7 mg，0.342 mmol)及碳酸銫(149 mg，0.456 mmol)置放於微波小瓶中且溶解於乙腈(3 mL)中。小瓶於微波反應器中在110℃下加熱20分鐘。在減壓下濃縮混合物且殘餘物溶解於1 N氫氧化鈉溶液(5 mL)中且用二氯甲烷萃取3次。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液。藉由層析用含0至30%乙酸乙酯之庚烷梯度溶離純化粗物質得到36.2 mg呈澄清油狀之4-(5-氰基-4-((2,3,6-三氟苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯。
B)4-{5-氰基-4-[(2,3,6-三氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用市售2,3,6-三氟苯酚根據與實例13(B及C)類似之程序製備4-{5-氰基-4-[(2,3,6-三氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯。用Sepax2-Ethyl Pyridine管柱250×21.2 mm，0.005藉由製備型逆相HPLC用含乙醇之庚烷之梯度溶離純化粗物質(17.1 mg)。分析型LCMS：滯 留時間11.769分鐘(Phenomenex Luna(2)C18 150×3.0 mm，5微米管柱；12.5分鐘內95%水/甲醇線性梯度至100%甲醇；0.1%甲酸改質劑；流動速率0.75毫升/分鐘；LCMS(ES+)：456.9(M+Na)。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ 0.64-0.66(m,2H),0.88-0.91(m,2H),1.57(s,3H),2.00(d,J =10.49 Hz,2H),2.07-2.18(m,2H),2.91-2.95(m,2H),4.18(br.s.,1H),4.36(br.s.,1H),4.50(tt,J =11.34,4.15 Hz,1H),5.19(s,2H),6.83-6.90(m,2H),7.67(s,1H)。
實例32：4-{5-氰基-4-[(2,3,6-三氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯
使用市售2,3,6-三氟苯酚根據與實例11類似之程序製備標題化合物。藉由管柱層析用含0至25%乙酸乙酯之庚烷梯度溶離純化粗物質得到呈澄清油狀之4-{5-氰基-4-[(2,3,6-三氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ 1.26(d,J =6.10 Hz,6H),2.01(d,J =11.22 Hz,2H)2.13(qd,J =12.28,4.64 Hz,2H),2.88-3.01(m,2H),4.32(br.s.,2H)4.51(tt,J =11.34,4.15 Hz,1H),4.90-4.98(m,1H),5.18(s,2H),6.82-6.92(m,2H),7.67(s,1H)；LCMS(ES+)：423.4(M+H)。
實例33：4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
根據與實例11類似之程序自2-氟-4-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)苯酚(製備28)及4-(5-氰基-4-((甲基磺醯基氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(製備10)製備標題化合物。用Sepax Silica 250×21.2 mm，0.005 mm藉由製備型逆相HPLC用含乙醇之庚烷之梯度溶離純化粗物質。分析型LCMS：滯留時間8.598分鐘(Phenomenex LuH(2)C18 150×3.0 mm，5微米管柱；12.5分鐘內95%水/甲醇線性梯度至100%甲醇；0.1%甲酸改質劑；流動速率0.75毫升/分鐘；LCMS(ES+)：467.0(M+H)。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ 1.27(d,J =6.10 Hz,6H),1.97-2.09(m,2H),2.16(m,2H),2.93-2.98(m,2H),3.76(s,3H)4.25-4.43(m,2H),4.50-4.57(m,1H),4.91-4.99(m,1H),5.17(s,2H),6.97(s,1H),7.11(s,1H),7.12-7.15(m,1H),7.42(dd,J =11.71,1.95 Hz,1H),7.38-7.44(m,1H),7.72(s,1H)。
實例34：4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
根據與實例11類似之程序自2-氟-4-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)苯酚(製備27)及4-(5-氰基-4-((甲基磺醯基氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(製備10)製備標題化合物。用Sepax Silica 250×21.2mm，0.005藉由製備型逆相HPLC用含乙醇之庚烷之梯度溶離純化粗物質。分析型LCMS：滯留時間8.797分鐘(Phenomenex Luna(2)C18 150×3.0 mm，5微米管柱；12.5分鐘內95%水/甲醇線性梯度至100%甲醇；0.1%甲酸改質劑；流動速率0.75毫升/分鐘；LCMS(ES+)：467.0(M+H)。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ 1.27(d,J =6.34 Hz,6H),2.03(d,J =11.22 Hz,2H),2.11-2.20(m,2H),2.95(br.s.,2H),3.66(s,3H),4.34(br.s.,2H),4.50-4.57(m,1H),4.94(dt,J =12.44,6.22 Hz,1H),5.15(s,2H),7.07(s,1H),7.10-7.17(m,3H),7.51(s,1H),7.71(s,1H)。
實例35：4-[5-氰基-4-({[2-甲基-6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基]氧基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸異丙酯
使用2-甲基-6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-醇根據與實例12類似之程序製備標題化合物。藉由逆相HPLC純化樣品(管柱：Waters XBridge C18 19×100，5微米；移動相A：含0.03%氫氧化銨之水(v/v)；移動相B：含0.03%氫氧化銨之乙腈(v/v)；梯度：8.0分鐘內80%水/20%乙腈線性變化至0%水/100%乙腈，在0%水/100%乙腈下保持至9.5分鐘。流動速率：25毫升/分鐘。LCMS(MS ES+：451.1)。
實例36：4-[5-氰基-4-({[2-甲基-6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基]胺基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸異丙酯
向經攪拌之4-(5-氰基-4-((甲基磺醯基氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯(製備10)(44 mg，0.12 mmol)於0.75 mL四氫呋喃中之溶液中相繼添加N,N -二異丙基乙胺(0.042 mL，0.24 mmol)及2-甲基-6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-胺(21 mg，0.12 mmol)。在60℃下加熱反應混合物16小時，隨後冷卻至室溫且用水及鹽水稀釋。接著混合物用15 mL乙酸乙酯萃取3次。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液得到52 mg黃色泡沫體。藉由逆相HPLC純化樣品(管柱：Waters Sunfire C18 19×100，5微米；移動相A：含0.05%三氟乙酸之水 (v/v)；移動相B：含0.05%三氟乙酸之乙腈(v/v))；梯度：8.5分鐘內90%水/10%乙腈線性變化至0%水/100%乙腈，在0%水/100%乙腈下保持至10.0分鐘。流動速率：25毫升/分鐘。LCMS(MS ES+：450.1)。
實例37：4-[5-氰基-4-({[2-甲基-6-(甲基磺醯基)吡啶-3-基]胺基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸異丙酯
使用2-甲基-6-(甲基磺醯基)吡啶-3-胺根據與實例36類似之程序製備標題化合物。藉由逆相HPLC純化樣品(管柱：Waters XBridge C18 19×100，5微米；移動相A：含0.03%氫氧化銨之水(v/v)；移動相B：含0.03%氫氧化銨之乙腈(v/v)；梯度：8.5分鐘內85%水/15%乙腈線性變化至0%水/100%乙腈，在0%水/100%乙腈下保持至10.0分鐘。流動速率：25毫升/分鐘。LCMS(ES+)：461.0(M+1)。
實例38：4-(5-氰基-4-{[4-(1H-四唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用市售4-四唑-1-基-苯酚根據與實例15類似之程序製備標題化合物。藉由急驟層析用含0%至75%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗物質。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ ppm 0.60-0.66(m,2H)0.84-0.90(m,2H)1.19(t,J=7.03 Hz,1H)1.55(s,3H)2.03(br.s.,2H)2.06-2.19(m,2H)2.92(br.s.,2H)3.46(q,J=7.09 Hz,1H)4.46-4.56(m,1H)5.11(s,2H)7.11-7.16(m,2H)7.60-7.65(m,2H)7.68(s,1H)8.90(s,1H)。
實例39：1-[1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-4-{[4-(1H-四唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-5-甲腈
A)4-(5-氰基-4-{[4-(1H-四唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯
向經攪拌之三苯基膦(283 mg，1.08 mmol)於四氫呋喃(2 mL)中之冷(0℃)溶液中逐滴添加偶氮二甲酸二乙酯(0.17 mL，1.1 mmol)。攪拌冷反應混合物20分鐘，隨後添加4-四唑-1-基-苯酚(165.5 mg，1.021 mmol)於四氫呋喃中之溶液。35分鐘後，添加4-(5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(製備15)(300 mg，0.979 mmol)於四氫呋喃中之溶液且反應物緩慢升溫至室溫隔夜。在減壓 下濃縮反應物且藉由急驟層析用含0%至80%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化殘餘物得到呈白色蓬鬆固體狀之標題化合物(304 mg，68%)。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ ppm 1.46(s,9H)2.03(s,2H)2.06-2.20(m,2H)2.90(br.s.,2H)4.28(br.s.,2H)4.46-4.56(m,1H)5.12(s,2H)7.10-7.18(m,2H)7.59-7.66(m,2H)8.90(s,1H)；LCMS(ES)451.1(M+1)。
B)1-哌啶-4-基-4-{[4-(1H-四唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-5-甲腈
4-(5-氰基-4-{[4-(1H-四唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(298 mg，0.663 mmol)溶解於二氯甲烷(1.6 mL)中。添加三氟乙酸(0.15 mL)且在室溫下在氮氣下攪拌反應物1.5小時。濃縮反應物且未經進一步純化即按原樣用於後續步驟中。LCMS(ES+)351.1(M+1)。
C)4-(5-氰基-4-{[4-(1H-四唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
1-哌啶-4-基-4-{[4-(1H-四唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-5-甲腈(30 mg，0.086 mmol)及二異丙基乙胺(0.12 ml，0.688 mmol)溶解於密封管中之乙腈(2 mL)中。添加2-氯-5-乙基嘧啶(0.020 mL，0.2 mmol)且反應物在120℃下加熱18小時且在室溫下加熱36小時。在減壓下濃縮反應混合物且藉由急驟層析用含0%至70%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗物質得到褐色固體。用最小量乙醚濕磨固體得到呈淺 褐色固體狀之標題化合物(3 mg，8%)。LCMS(ES+)457.1(M+1)。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ ppm 1.16-1.22(m,3H)2.10(br.s.,2H)2.13-2.25(m,2H)2.43-2.50(m,2H)3.00-3.10(m,2H)3.43-3.50(m,1H)4.88-4.96(m,2H)5.12(s,2H)7.10-7.16(m,2H)7.60-7.64(m,2H)7.66(s,1H)8.12-8.24(m,2H)8.90(s,1H)。
實例40：4-{5-氰基-4-[(3-氰基苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯
使用市售3-氰基苯酚根據與實例12類似之程序製備標題化合物。藉由急驟層析用含0%至40%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗物質得到16.4 mg(62%)呈澄清無色殘餘物狀之標題化合物。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ ppm 1.28(d,J=6.25 Hz,6H)1.99-2.09(m,2H)2.10-2.24(m,2H)2.88-3.06(m,2H)4.35(br.s.,2H)4.48-4.60(m,1H)4.90-5.01(m,1H)5.08(s,2H)7.19-7.25(m,2H)7.32(d,J=7.82 Hz,1H)7.39-7.47(m,1H)7.68(s,1H)。
實例41：4-{5-氰基-4-[(4-氰基-3-甲基苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯
使用4-羥基-2-甲基苯甲腈根據與實例12類似之程序製備標題化合物。藉由急驟層析用含0%至40%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗物質得到18.8 mg(69%)呈澄清殘餘物狀之標題化合物。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ ppm 1.27(d,J=6.25 Hz,6H)1.96-2.08(m,2H)2.09-2.23(m,2H)2.54(s,3H)2.96(t,J=12.51 Hz,2H)4.35(br.s.,2H)4.54(tt,J=11.29,4.15 Hz,1H)4.95(spt,J=6.25 Hz,1H)5.09(s,2H)6.85(dd,J=8.60,2.35 Hz,1H)6.90(s,1H)7.57(d,J=8.60 Hz,1H)7.67(s,1H)。
實例42：4-{5-氰基-4-[(4-氰基苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯
使用市售4-氰基苯酚根據與實例12類似之程序製備標題化合物。藉由急驟層析用含0%至40%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗物質得到14.7 mg(56%)呈黏性白色固體狀之 標題化合物。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ ppm 1.27(d,J=6.25 Hz,6H)1.95-2.08(m,2H)2.16(m,2H)2.85-3.08(m,2H)4.35(br.s.,2H)4.54(tt,J=11.29,4.15 Hz,1H)4.95(dt,J=12.51,6.25 Hz,1H)5.11(s,2H)7.04(d,J=8.99 Hz,2H)7.64(d,J=8.99 Hz,2H)7.68(s,1H)。
實例43：4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1-[1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑-5-甲腈
使用4-氰基-氟苯酚根據與實例39類似之程序製備標題化合物。藉由急驟層析用含0%至1.5%甲醇之二氯甲烷之梯度溶離純化粗物質。經由自10%甲醇/乙酸乙酯中再結晶來進一步純化所得固體得到3.67 g(60%)呈近乎白色固體狀之潔淨產物。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ ppm 1.22(t,J =7.56 Hz,3H)2.07-2.15(m,2H)2.15-2.28(m,2H)2.50(q,J =7.56 Hz,2H)3.03-3.13(m,2H)4.66(tt,J =11.44,4.18 Hz,1H)4.95(d,J =13.66 Hz,2H)5.19(s,2H)7.13(t,J =8.17 Hz,1H)7.42(dd,J =10.37,1.83 Hz,1H)7.47(d,J =8.29 Hz,1H)7.70(s,1H)8.21(s,2H)。
實例44：4-{5-氰基-4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1H-吡 唑-1-基}哌啶-1-甲酸第三丁酯
使用4-氰基-氟苯酚根據與實例15類似之程序製備標題化合物。藉由急驟層析用含10%至40%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗物質得到標題化合物(21 g，100%)。1 H NMR(氘代氯仿)δ ppm 7.71(s,1H),7.44-7.48(m,1H),7.40-7.43(m,1H),7.09-7.15(m,1H),5.18(s,2H),4.48-4.56(m,1H),4.22-4.38(m,2H),2.84-3.01(m,2H),2.09-2.19(m,2H),1.99-2.06(m,2H),1.49(s,9H)。
實例45：4-{5-氰基-4-[(2-氰基-4-氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯
使用市售2-氰基-4-氟苯酚根據與實例15類似之程序製備標題化合物。藉由HPLC(管柱：Waters Atlantis dC18 4.6×50 mm，5微米；改質劑：0.05%三氟乙酸；梯度：95%水/5%乙腈經4.0分鐘線性變化至5%水/95%乙腈，在 5%水/95%乙腈下保持至5.0分鐘；流動速率：2.0 mL/min)純化粗物質得到35.8 mg(73%)標題化合物。LCMS(ES+)：412.0(M+1)
實例46：4-(5-氰基-4-{[4-(二甲基胺甲醯基)-2-氟苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯
使用3-氟-4-羥基-N,N-二甲基苯甲醯胺(製備31B)根據與實例15類似之程序製備標題化合物。藉由HPLC(管柱：Waters Atlantis dC18 4.6×50 mm，5微米；改質劑：0.05%三氟乙酸；梯度：95%水/5%乙腈經4.0分鐘線性變化至5%水/95%乙腈，在5%水/95%乙腈下保持至5.0分鐘；流動速率：2.0 mL/min)純化粗物質得到6.8 mg(12%)標題化合物。LC/MS(ES+)：458.0(M+1)。
實例47：4-(5-氰基-4-{[4-(二甲基胺甲醯基)-2-氟苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用3-氟-4-羥基-N,N-二甲基苯甲醯胺(製備31B)根據與實例15類似之程序製備標題化合物。藉由HPLC(管柱：Waters Atlantis dC18 4.6×50 mm，5微米；改質劑：0.05%三氟乙酸；梯度：95%水/5%乙腈經4.0分鐘線性變化至5%水/95%乙腈，在5%水/95%乙腈下保持至5.0分鐘；流動速率：2.0 mL/min)純化粗物質得到28.7 mg(51%)標題化合物。LC/MS(ES+)：470.1(M+1)。
實例48：4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用3-氟-4-羥基-N-甲基苯甲醯胺(製備31A)根據與實例15類似之程序製備標題化合物。藉由HPLC(管柱：Waters Atlantis dC18 4.6×50 mm，5微米；改質劑：0.05%三氟乙酸；梯度：95%水/5%乙腈經4.0分鐘線性變化至5%水/95%乙腈，在5%水/95%乙腈下保持至5.0分鐘；流動速率：2.0 mL/min)純化粗物質得到35.6 mg(65%)標題產物。LC/MS(ES+)：456.0(M+1)。
實例49：4-({5-氰基-1-[1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑-4-基}甲氧基)-3-氟-N,N-二甲基苯甲醯胺
使用3-氟-4-羥基-N,N-二甲基苯甲醯胺(製備31B)根據與實例39類似之程序製備標題化合物。藉由HPLC(管柱：Waters Atlantis dC18 4.6×50 mm，5微米；改質劑：0.05%三氟乙酸；梯度：95%水/5%乙腈經4.0分鐘線性變化至5%水/95%乙腈，在5%水/95%乙腈下保持至5.0分鐘；流動速率：2.0 mL/min)純化粗物質得到26.7 mg標題產物。LC/MS(ES+)：478.0(M+1)。
實例50：4-{5-氰基-4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
合成方法概述於以下流程5中。
A)4-[5-氰基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯
5-氰基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(Jubilant Chemsys Ltd.D-12,Sector-59,201 301,Noida,U.P.India)(50 g，300 mmol)、4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(67 g，333 mmol)及三苯基膦(111 g，420 mmol)溶解於2-甲基四氫呋喃(200 mL)中且冷卻至0℃。逐滴添加40%偶氮二甲酸二乙酯之甲 苯溶液(76.5 mL，420 mmol)。一旦添加完成，即使反應物經1小時升溫至室溫且接著在室溫下攪拌18小時。在劇烈攪拌下小心添加庚烷(1400 mL)且1小時後形成懸浮液。濾出固體且濾液用庚烷(400 mL)與乙酸乙酯(200 mL)之混合物洗滌。接著濃縮濾液且藉由急驟層析用含25%乙酸乙酯之庚烷溶離純化殘餘物且接著自乙酸乙酯-庚烷中再結晶得到所需產物(35.2 g，33%)。1 H NMR(氘代氯仿)δ ppm 7.97(s,1H),4.49-4.59(m,1H),4.36(q,J=7.1 Hz,2H),4.22-4.30(m,2H),2.80-2.99(m,2H),2.06-2.19(m,2H),1.93-2.02(m,2H),1.46(s,9H),1.37(t,J=7.1 Hz,3H)。
B)：4-[5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯
4-[5-氰基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(45.5 g，131 mmol)溶解於四氫呋喃(350 mL)中且冷卻至-78℃。經75分鐘逐滴添加1.5 M氫化二異丁基鋁之甲苯溶液(50 g，350 mmol)同時保持內部溫度介於-65℃與-60℃之間。一旦添加完成，即使反應混合物升溫至-10℃保持90分鐘。溫度維持為-10℃的同時小心逐滴添加4 M氫氧化鉀水溶液(350毫升，10.7當量)。一旦添加完成，即使反應混合物在劇烈攪拌下緩慢升溫至室溫且接著在室溫下攪拌20小時。添加甲基第三丁基醚(200 mL)及庚 烷(400 mL)且分離有機相。有機相用1 M硫酸氫鉀水溶液、鹽水洗滌，且經硫酸鎂與30 g矽膠之混合物乾燥。濾出固體且在減壓下濃縮濾液。濃縮時開始形成沈澱物。所得濕潤殘餘物在60℃下用500 mL含10%甲基第三丁基醚之庚烷濕磨1小時且懸浮液在攪拌下緩慢冷卻至室溫。濾出所得固體且在真空烘箱中在40℃下乾燥得到4-[5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(31.2 g，78%)。1 H NMR(氘代氯仿)δ ppm 7.59(s,1H),4.70(d,J=5.5 Hz,2H),4.41-4.51(m,1H),4.17-4.32(m,2H),2.81-2.96(m,2H),2.01-2.16(m,3H),1.94-2.00(m,2H),1.45(s,9H)。
C)4-{5-氰基-4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸第三丁酯
向4 L瓶中裝入4-[5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(336 g，1.10 mol)、三苯基膦(359.58 g，1.37 mol)、4-氰基-2-氟苯酚(157.89 g，1.15 mol)及2-甲基四氫呋喃(2.02 L，20.10 mol)。混合物攪拌至溶液中且在室溫下保持在氮氣下。向另一4 L瓶中裝入二氮烯二甲酸二乙酯於甲苯(564.33 mL，620.76 g，1.43 mol)及2- 甲基四氫呋喃(2.12 L，21.11 mol)中之溶液。攪拌混合物以確保完全溶解且在室溫下保持在氮氣下。使用單一蠕動泵(兩條進料管)將兩個物流泵送至T形件(不鏽鋼)，接著進入100 mL體積盤管(1/8"接著1/4" ID PTE管道)中，其中組合流動速率為20 mL/min。流動8小時後，清空進料瓶且使用2×25 mL甲基四氫呋喃沖洗瓶子且經管道抽出。產物流按原樣用於後續反應中。
D)4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1-哌啶-4-基-1H-吡唑-5-甲腈甲苯磺酸鹽
步驟C中收集之4-{5-氰基-4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸第三丁酯流分兩份裝入兩個5 L單頸燒瓶中。單水合對甲苯磺酸(344.22 g，1.81 mol)分兩份添加至混合物中且使用保持在75℃下之旋轉蒸發器浴槽加熱燒瓶8小時。反應物冷卻至室溫且粒化隔夜。過濾混合物且在真空下乾燥3小時得到呈甲苯磺酸鹽形式之目標產物(480 g，經2個步驟88%)。
E)4-{5-氰基-4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1-哌啶-4-基-1H-吡唑-5-甲腈之甲苯磺酸鹽(478 g，960.71 mmol)溶解於4 L瓶中之2-甲基四氫呋喃(2.39 L，23.83 mol)及水(478.00 mL)中。添加三乙胺(200.86 mL，1.44 mol)及碳酸1-甲基環丙酯4-硝基苯酯(製備26)(229.83 g，960.71 mmol)且攪拌48小時。反應混合物用1 N氫氧化鈉水溶液(1 L)洗滌。攪拌混合物且分離各層。有機層用1 N氫氧化鈉水溶液(1 L)洗滌若干次，經硫酸鎂乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液得到亮黃色固體。該等固體在室溫下於乙酸乙酯中製成漿液隔夜。過濾固體且所得淡黃色固體於乙酸乙酯(3體積)中再製成漿液，過濾且在真空中乾燥得到呈灰白色固體狀之目標化合物(313 g，2個批次，77%)。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ ppm 0.60-0.66(m,2H)0.84-0.90(m,2H)1.55(s,3H)1.96-2.04(m,2H)2.11(qd,J =12.10,4.68 Hz,2H)2.92(br.s.,2H)4.07-4.41(m,2H)4.50(tt,J =11.27,4.15 Hz,1H)5.16(s,2H)7.09(t,J =8.20 Hz,1H)7.36-7.46(m,2H)7.68(s,1H)。
熔點=144.6℃燃燒分析(Quantitative Technologies Inc.(QTI)) 291 Route 22 East Salem Ind.Park-Bldg 5 Whitehouse NJ 08888-0470 C22H22FN5O3C(理論值=62.40%) 62.28% 62.29%H(理論值=5.24%) 5.17% 5.13%N(理論值=16.54%) 16.42% 16.50%
實例51：(3S,4S)-4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯
A)(3S,4S)-4-[5-氰基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯
以與關於製備4-[5-氰基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(實例50，步驟A)所描述類似之方式 自5-氰基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯及(3S,4R)-3-氟-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(製備43B)製備(3S,4S)-4-[5-氰基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯。藉由急驟層析用含0%至30%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗物質得到呈濃稠澄清油狀之所需產物(149.4 mg，32%)。
B)(3S,4S)-4-[5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯
以與關於製備4-[5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(實例50，步驟B)所描述類似之方式自(3S,4S)-4-[5-氰基-4-(乙氧基羰基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯製備(3S,4S)-4-[5-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡唑-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯。藉由急驟層析用含5%至50%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗產物得到呈濃稠澄清油狀之所需產物(74 mg，56%)，其在靜置時固化。
C)(3S,4S)-4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯
使用3-氟-4-羥基-N-甲基苯甲醯胺(製備31A)根據與實例50類似之程序製備標題化合物。藉由HPLC(管柱：Waters Xbridge C12 4.6×50 mm，5微米；改質劑：0.05%氫氧化銨；梯度：95%水/5%乙腈經4.0分鐘線性變化至5%水/95%乙腈，在5%水/95%乙腈下保持至5.0分鐘；流動速率：2.0 mL/min)純化粗物質得到所需產物。LC/MS(ES+)：476.4(M+1)。
實例52：(3R,4S)-4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯
使用3-氟-4-羥基-N-甲基苯甲醯胺(製備31A)根據與實例51類似之程序製備標題化合物。藉由HPLC(管柱：Waters Xbridge C12 4.6×50 mm，5微米；改質劑：0.05%氫氧化銨；梯度：95%水/5%乙腈經4.0分鐘線性變化至5%水/95%乙腈，在5%水/95%乙腈下保持至5.0分鐘；流動速率：2.0 mL/min)純化粗物質得到所需產物。LC/MS(ES+)：476.4(M+1)。
實例53：(3S,4S)-4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用3-氟-4-羥基-N-甲基苯甲醯胺(製備31A)根據與實例50及51類似之程序製備標題化合物。經HPLC(管柱：Princeton 2-乙基吡啶250×21.2 mm，5微米；梯度：95%庚 烷/5%乙醇維持1.5分鐘，經10分鐘線性變化至0%庚烷/100%乙醇，在0%庚烷/100%乙醇下保持至5.0分鐘維持1分鐘且線性變化至95%庚烷/5%乙醇；流動速率：28 mL/min)純化粗物質得到所需產物。LC/MS(ES+)：473.9(M+1)。
實例54：(3R,4R)-4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用3-氟-4-羥基-N-甲基苯甲醯胺(製備31A)根據與實例50及51類似之程序製備標題化合物。經HPLC(管柱：Princeton 2-乙基吡啶250×21.2 mm，5微米；梯度：95%庚烷/5%乙醇維持1.5分鐘，經10分鐘線性變化至0%庚烷/100%乙醇，在0%庚烷/100%乙醇下保持1分鐘且線性變化至95%庚烷/5%乙醇；流動速率：28 mL/min)純化粗物質得到所需產物。
LC/MS(ES+)：473.9(M+1)
實例55：(3S,4S)-4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯
4-(5-氰基-4-{[(甲基磺醯基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯(製備42)(33 mg，0.082 mmol)溶解於乙腈(3 mL)中且添加碳酸銫(53 mg，0.164 mmol)及3-羥基-2-甲基吡啶(9 mg，0.082 mmol)。加熱反應混合物至80℃保持1.5小時。冷卻反應物至室溫且在減壓下濃縮。粗殘餘物用水稀釋且用乙酸乙酯(3×)萃取。合併之有機萃取物用0.5 N氫氧化鈉水溶液、水及鹽水洗滌且經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液。藉由急驟層析用含30%至100%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗殘餘物得到呈琥珀色油狀之外消旋產物(30 mg，70%)。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ ppm 1.50(s,9H)2.11(m,1H)2.25-2.39(m,1H)2.53(s,3H)2.93(br.s.,2H)4.30(br.s.,1H)4.43-4.71(m,2H)4.72-4.91(m,1H)5.09(s,2H)7.09-7.20(m,2H)7.75(s,1H)8.16(d,J=3.90 Hz,1H)。
實例56：(3S,4R)-4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯
使用市售3-羥基-2-甲基吡啶根據與實例55類似之程序製備標題化合物。藉由急驟層析用含30%至100%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗物質得到呈琥珀色油狀之所需產物。1 H NMR(500 MHz，氘代氯仿)δ ppm 1.50(s,9H), 2.01-2.08(m,1H)2.52(s,3H)2.74-2.88(m,1H)2.94-3.14(m,1H)3.14-3.34(m,1H)4.27-4.57(m,2H)4.61-4.75(m,1H)4.80-5.01(m,1H)5.09(s,2H)7.10-7.18(m,2H)7.73(s,1H)8.15(d,J=3.66 Hz,1H)。
實例57：(3S,4R)-4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用市售3-羥基-2-甲基吡啶根據與實例55類似之程序製備標題化合物。藉由急驟層析用含40%至100%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗物質得到呈白色固體狀之所需外消旋產物。1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)δ ppm 0.66(br.s.,2H)0.91(br.s.,2H)1.57(s,3H)2.05(d,J=12.10 Hz,1H)2.52(s,3H)2.82(br.d,J=9.00 Hz,1H)3.05(br.d,J=9.00 Hz,1H)3.15-3.40(m,1H)4.20-4.60(m,2H)4.60-4.77(m,1H)4.77-5.03(m,1H)5.09(s,2H)7.06-7.21(m,2H)7.73(s,1H)8.16(d,J=4.29 Hz,1H)。
實例58：(3S,4R)-4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用市售3-羥基-2-甲基吡啶根據與實例55類似之程序製備標題化合物。藉由急驟層析用含40%至100%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗物質得到外消旋產物，藉由對掌性HPLC在以下條件下進一步純化得到標題化合物：管柱：chiralcel OJ-H 4.6 mm×25 cm；移動相：85/15二氧化碳/甲醇，改質劑：0.2%異丙胺；流動速率：2.5毫升/分鐘。LC/MS(ES+)：414.1(M+1)。
實例59：(3R,4S)-4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
使用市售3-羥基-2-甲基吡啶根據與實例55類似之程序製備標題化合物。藉由急驟層析用含40%至100%乙酸乙酯之庚烷之梯度溶離純化粗物質得到外消旋產物，藉由對掌性HPLC在以下條件下進一步純化得到標題化合物：管柱：chiralcel OJ-H 4.6 mm×25 cm；移動相：85/15二氧化碳/甲醇，改質劑：0.2%異丙胺；流動速率：2.5毫升/分鐘。LC/MS(ES+)：414.1(M+1)。
實例60：4-(5-氰基-4-{[4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯
使用4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯酚(美國專利申請案第PCT/US2009/038315號，公開案第WO 2009/129036 A1號)根據與實例15類似之程序製備標題化合物。藉由HPLC(管柱：Phenomenex Gemini C18 250×21.2 mm，8微米；移動相：含50%乙腈(氨pH 10)之水(氨pH 10)至含55%乙腈(氨pH 10)之水(氨pH 10)；流動速率：25毫升/分鐘；波長：220nm)純化粗物質得到標題化合物。LC/MS(ES+)：450.1(M+1)。
實例61：4-(5-氰基-4-{[4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯
使用4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯酚(美國專利申請案第PCT/US2009/038315號，公開案第WO 2009/129036 A1號)根據與實例15類似之程序製備標題化合物。藉由HPLC(管柱：Phenomenex Gemini C18 250×21.2 mm，8微米；移動 相：含63%乙腈(氨pH 10)之水(氨pH 10)；流動速率：25毫升/分鐘；波長：220 nm)純化粗物質得到標題化合物。LC/MS(ES+)：450.1(M+1)。
實例62：4-(4-((4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
以實例60為起始物質以與實例60類似之方式製備標題化合物。藉由逆相HPLC純化粗物質：管柱：Kromasil Eternity-5-C18 150×30毫米×5微米移動相：含38%乙腈(0.225%甲酸)之水(0.225%甲酸)至含58%乙腈(0.225%甲酸)之水(0.225%甲酸)流動速率：30 mL/min波長：220 nm1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)：δ ppm 7.92(s,1H),7.84(s,1H),7.68(d,3H),7.11(t,2H),5.11(s,2H),4.53(m,1H),4.26(m,2H),2.93(s,2H),2.12(t,2H),2.03(d,2H)1.56(s,3H),0.88(t,2H),0.64(t,2H)。
實例63：4-(4-((4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
以實例61為起始物質以與實例61類似之方式製備標題化合物。藉由製備型HPLC純化粗殘餘物得到50 mg(39%)呈白色固體狀之標題化合物：管柱：Boston Symmetrix ODS-H 150×30毫米×5微米移動相：含50%乙腈(0.225%甲酸)之水(0.225%甲酸)至含70%乙腈(0.225%甲酸)之水(0.225%甲酸)流動速率：30 mL/min波長：220 nm1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)：δ ppm 8.01(d,2H),7.78(s,2H),7.69(s,1H),7.07(d,2H),5.10(s,2H),4.51(m,1H),4.33(m,2H),2.93(s,2H),2.11(t,2H),2.03(d,2H)1.56(s,3H),0.80(s,2H),0.65(d,2H)。
實例64：4-[5-氰基-4-({[1-(甲基磺醯基)哌啶-4-基]氧基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯
以與實例13類似之方式製備標題化合物。使用石油醚與乙酸乙酯之1：4混合物藉由矽膠層析純化粗化合物。
1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)：δ ppm 7.54(s,1H),4.53(s,2H),4.48(m,1H),4.28(br,2H),3.69(m,1H),3.31(m,4H),2.90(m,2H),2.79(s,3H),2.11(m,2H),1.88-2.00(m,6H),1.47(s,9H)。
實例65：4-[5-氰基-4-({2-氟-4-[(2-羥基乙基)(甲基)胺甲醯基]苯氧基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯
以與實例46類似之方式製備標題化合物。藉由逆相HPLC純化粗物質： 管柱：Phenomenex Gemini C18 250×21.2毫米×8微米移動相：含40%乙腈(氨pH 10)之水(氨pH 10)至含60%乙腈(氨pH 10)之水(氨pH 10)流動速率：25 mL/min波長：220 nm1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)：δ ppm 7.69(s,1H),7.28(d,1H),7.24(s,1H),7.05(d,1H),5.18(s,2H),4.50(q,1H),4.29(d,2H)，3.90(s,2H),3.71(s,2H),3.10(s,3H),2.91(s,2H),2.14(q,2H),1.99(s,2H),1.48(s,9H)。
實例66：4-[5-氰基-4-({2-氟-4-[(3-羥基吡咯啶-1-基)羰基]苯氧基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯
以與實例46類似之方式製備標題化合物。藉由逆相HPLC純化粗物質：管柱：Phenomenex Gemini C18 250×21.2毫米×8微米移動相：含40%乙腈(氨pH 10)之水(氨pH 10)至含60%乙腈(氨pH 10)之水(氨pH 10) 流動速率：25 mL/min波長：220 nm1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)：δ ppm 7.69(s,1H),7.32(d,2H),7.05(t,1H),5.14(s,2H),4.52(q,2H),4.29(s,2H)，3.78(d,2H),3.64(d,1H),3.45(d,1H),2.90(s,2H),2.14(q,2H),2.00(d,4H),1.47(s,9H)。
實例67：4-(4-{[4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)-2-氟苯氧基]甲基}-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯
以與實例46類似之方式製備標題化合物。藉由逆相HPLC純化粗物質：管柱：Phenomenex Gemini C18 250×21.2毫米×8微米移動相：含40%乙腈(氨pH 10)之水(氨pH 10)至含60%乙腈(氨pH 10)之水(氨pH 10)流動速率：25 mL/min波長：220 nm1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)：δ ppm 7.69(s,1H),7.43 (d,1H),7.41(s,1H),7.04(t,1H),5.14(s,2H),4.50(q,1H),4.31(d,6H)，2.90(d,2H),2.38(q,2H),2.15(q,2H),2.08(d,2H),1.47(s,9H)。
實例68：4-[5-氰基-4-({[1-(甲基磺醯基)哌啶-4-基]氧基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯
以與實例64類似之方式製備標題化合物。藉由逆相HPLC純化粗物質：管柱：Phenomenex Synergi C18 150×30毫米×4微米移動相：含43%乙腈(0.225%甲酸)之水(0.225%甲酸)至含53%乙腈(0.225%甲酸)之水(0.225%甲酸)流動速率：30 mL/min1 H NMR(400 MHz，氘代氯仿)：δ ppm 7.54(s,1H),4.53(s,2H),4.48(m,1H),4.35(d,2H),3.69(m,1H),3.31(m,4H),2.91(m,2H),2.78(s,3H),2.12(m,2H),1.87-1.98(m,6H),1.56(s,3H),0.88(t,2H),0.66(t,2H)。
本申請案中參考多個公開案。該等公開案之揭示內容在 此均以全文引用的方式併入本申請案中以用於所有目的。
熟習此項技術者將顯而易知可在不偏離本發明之範疇或精神下對本發明做出各種修改及變化。熟習此項技術者將由參閱本說明書及實踐本文中揭示之本發明而顯而易知本發明之其他實施例。意欲說明書及實例僅視為例示性且本發明之真實範疇及精神由以下申請專利範圍指示。

Claims (12)

  1. 一種化合物，其係選自由以下組成之群：4-{5-氰基-4-[(2,4-二氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯；4-{5-氰基-4-[(2-甲基苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯；4-{5-氰基-4-[(2,5-二氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-{5-氰基-4-[(2,3-二氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-{4-[(4-胺甲醯基-2-氟苯氧基)甲基]-5-氰基-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-{4-[(4-胺甲醯基苯氧基)甲基]-5-氰基-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-((4-氰基苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(4-((4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯及4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-甲基-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲 基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2-(2-羥基乙基)-2H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1-(2-羥基乙基)-1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-{[4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(4-((4-胺甲醯基-3-氟苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-{1-[2-氟-4-(甲基磺醯基)苯氧基]乙基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{1-[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]乙基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{2-[2-氟-4-(甲基磺醯基)苯基]丙基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-{5-氰基-4-[(2,3,6-三氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-{5-氰基-4-[(2,3,6-三氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)苯氧基]甲 基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-[5-氰基-4-({[2-甲基-6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基]氧基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸異丙酯；4-[5-氰基-4-({[2-甲基-6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基]胺基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸異丙酯；4-[5-氰基-4-({[2-甲基-6-(甲基磺醯基)吡啶-3-基]胺基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{[4-(1H-四唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；1-[1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-4-{[4-(1H-四唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-5-甲腈；4-{5-氰基-4-[(3-氰基苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯；4-{5-氰基-4-[(4-氰基-3-甲基苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯；4-{5-氰基-4-[(4-氰基苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸異丙酯；4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1-[1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑-5-甲腈；4-{5-氰基-4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸第三丁酯；4-{5-氰基-4-[(2-氰基-4-氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1- 基}哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{[4-(二甲基胺甲醯基)-2-氟苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-{[4-(二甲基胺甲醯基)-2-氟苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-({5-氰基-1-[1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑-4-基}甲氧基)-3-氟-N,N-二甲基苯甲醯胺；4-{5-氰基-4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；(3S,4S)-4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯；(3R,4S)-4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯；(3S,4S)-4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；(3R,4R)-4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(甲基胺甲醯基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；(3S,4S)-4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯；(3S,4R)-4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸第三丁酯；(3S,4R)-4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}- 1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；(3S,4R)-4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；(3R,4S)-4-(5-氰基-4-{[(2-甲基吡啶-3-基)氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-{[4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯；4-(5-氰基-4-{[4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯；4-(4-((4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(4-((4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-[5-氰基-4-({[1-(甲基磺醯基)哌啶-4-基]氧基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯；4-[5-氰基-4-({2-氟-4-[(2-羥基乙基)(甲基)胺甲醯基]苯氧基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯；4-[5-氰基-4-({2-氟-4-[(3-羥基吡咯啶-1-基)羰基]苯氧基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯；4-(4-{[4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)-2-氟苯氧基]甲基}-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯；4-[5-氰基-4-({[1-(甲基磺醯基)哌啶-4-基]氧基}甲基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯氧基)甲 基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-((2-氟-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-5-甲腈；4-(4-((4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-((4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯氧基)甲基)-1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲腈；4-(4-((4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-((4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基)甲基)-1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲腈；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-((2-氟-4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-((2-氟-4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-5-甲腈；4-(4-((5-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-2-基氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(4-((5-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-2-基氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-((3-氟-4-(1H-四唑-1-基)苯氧基)甲基)-1H- 吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-((3-氟-4-(1H-四唑-1-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-((3-氟-4-(1H-四唑-1-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-5-甲腈；4-((5-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-2-基氧基)甲基)-1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲腈；1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-((2-甲基-6-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-3-基氧基)甲基)-1H-吡唑-5-甲腈；4-(5-氰基-4-((2-甲基-6-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-3-基氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；4-(5-氰基-4-((2-甲基-6-(1H-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-3-基氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-((2-氟-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯氧基)甲基)-1H-吡唑-5-甲腈；4-(4-((4-(氮雜環丁烷-1-羰基)-2-氟苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(4-((4-(氮雜環丁烷-1-羰基)-2-氟苯氧基)甲基)-5-氰基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸異丙酯；及4-((4-(氮雜環丁烷-1-羰基)-2-氟苯氧基)甲基)-1-(1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲腈；或其醫藥學上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之化合物，其係選自由以下組成之群：4-(5-氰基-4-{[2-氟-4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯氧基]甲 基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；4-(5-氰基-4-{[4-(1H-四唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；1-[1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-4-{[4-(1H-四唑-1-基)苯氧基]甲基}-1H-吡唑-5-甲腈；4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1-[1-(5-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑-5-甲腈；及4-{5-氰基-4-[(4-氰基-2-氟苯氧基)甲基]-1H-吡唑-1-基}哌啶-1-甲酸1-甲基環丙酯；或其醫藥學上可接受之鹽。
  3. 一種醫藥組合物，其包含以治療有效量存在之如請求項1至2中任一項之化合物與至少一種醫藥學上可接受之賦形劑混合。
  4. 如請求項3之組合物，其進一步包含至少一種選自由抗肥胖劑及抗糖尿病劑組成之群的其他醫藥劑。
  5. 如請求項4之組合物，其中該抗肥胖劑係選自由以下組成之群：迪羅哌德(dirlotapide)、米瑞他匹(mitratapide)、英普他派(implitapide)、R56918(CAS編號403987)、CAS編號913541-47-6、氯卡色林(lorcaserin)、賽利司他(cetilistat)、PYY3-36 、納曲酮(naltrexone)、油醯基-雌酮、奧尼匹肽(obinepitide)、普蘭林肽(pramlintide)、特索芬辛(tesofensine)、瘦素(leptin)、利拉魯肽(liraglutide)、溴隱亭(bromocriptine)、羅氏鮮(orlistat)、艾塞那肽(exenatide)、AOD-9604(CAS編號221231-10-3)及諾美婷 (sibutramine)。
  6. 如請求項4之組合物，其中該抗糖尿病劑係選自由以下組成之群：二甲雙胍(metformin)、乙醯苯磺醯環己脲(acetohexamide)、氯磺丙脲(chlorpropamide)、特泌胰(diabinese)、格列本脲(glibenclamide)、格列吡嗪(glipizide)、格列本脲(glyburide)、格列美脲(glimepiride)、格列齊特(gliclazide)、格列太特(glipentide)、格列喹酮(gliquidone)、格列索脲(glisolamide)、妥拉磺脲(tolazamide)、甲苯磺丁脲(tolbutamide)、澱粉酶抑肽(tendamistat)、萃他汀(trestatin)、醣祿(acarbose)、脂解素(adiposine)、卡格列波糖(camiglibose)、乙格列酯(emiglitate)、米格列醇(miglitol)、伏格列波糖(voglibose)、普拉米星-Q(pradimicin-Q)、沙波他汀(salbostatin)、巴格列酮(balaglitazone)、環格列酮(ciglitazone)、達格列酮(darglitazone)、恩格列酮(englitazone)、伊薩列酮(isaglitazone)、吡格列酮(pioglitazone)、羅格列酮(rosiglitazone)、曲格列酮(troglitazone)、腸促胰島素類似物-3(exendin-3)、腸促胰島素類似物-4(exendin-4)、特羅杜明(trodusquemine)、白藜蘆醇(reservatrol)、西替歐醛萃取物(hyrtiosal extract)、西他列汀(sitagliptin)、維格列汀(vildagliptin)、阿格列汀(alogliptin)及沙格列汀(saxagliptin)。
  7. 一種如請求項1或2之化合物之用途，其係製造用於治療 糖尿病之藥劑。
  8. 一種如請求項1或2之化合物之用途，其係製造用於治療代謝或代謝相關性疾病、病狀或病症之藥劑。
  9. 一種如請求項1或2之化合物之用途，其係製造用於治療病狀之藥劑，該病狀選自由以下組成之群：高脂血症、I型糖尿病、II型糖尿病、特發性I型糖尿病(Ib型)、潛伏性成人自體免疫性糖尿病(latent autoimmune diabetes in adults)、早發性2型糖尿病(early-onset Type 2 diabetes)、青少年發作型非典型糖尿病(youth-onset atypical diabetes)、青年人成年發作型糖尿病(maturity onset diabetes of the young)、與營養不良有關之糖尿病、妊娠期糖尿病、冠心病、缺血性中風、血管成形術後再狹窄、周邊血管疾病、間歇性玻行、心肌梗塞、血脂異常、餐後脂血症、葡萄糖耐受性異常病狀、空腹血漿葡萄糖異常病狀、代謝性酸中毒、酮病、關節炎、肥胖症、骨質疏鬆症、高血壓、充血性心臟衰竭、左心室肥大、周邊動脈疾病、糖尿病性視網膜病變、黃斑變性、白內障、糖尿病性腎病變、腎小球硬化症、慢性腎衰竭、糖尿病性神經病變、代謝症候群、症候群X、經前症候群、冠心病、心絞痛、血栓症、動脈粥樣硬化、心肌梗塞、短暫性缺血性發作、中風、血管再狹窄、高血糖症、高胰島素血症、高脂血症、高三酸甘油酯血症、胰島素抗性、葡萄糖代謝異常、葡萄糖耐受性異常病狀、空腹血漿葡萄糖異常病狀、肥胖症、勃起困難、 皮膚及結締組織病症、足部潰瘍及潰瘍性結腸炎、內皮功能障礙及血管順應性異常、高載脂蛋白B脂蛋白血症、阿茲海默症(Alzheimer's disease)、精神分裂症、認知功能障礙、發炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)及大腸急躁症。
  10. 一種如請求項3之組合物之用途，其係製造用於治療代謝或代謝相關性疾病、病狀或病症之藥劑，其中該藥劑包含額外組合物，該額外組合物包含至少一種選自由抗肥胖劑及抗糖尿病劑組成之群的其他醫藥劑及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑。
  11. 如請求項10之用途，其中該藥劑及該額外組合物係同時投與。
  12. 如請求項10之用途，其中該藥劑及該額外組合物係依序且以任何次序投與。
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