MX2012006018A - Composiciones y metodos para el cuidado oral. - Google Patents

Abstract

En la presente se describen composiciones que comprenden un inhibidor de la MMP-13 así como métodos para el uso de las mismas.

Description

COMPOSICIONES Y METODOS PARA EL CUIDADO ORAL Antecedentes de la Invención Las metaloproteinasas de la matriz, a las que se hace referencia como MMP, son una familia de endopeptidasas dependientes del calcio y zinc producidas en forma natural que se encuentran en la mayor parte de los mamíferos. Se ha sugerido que la sobre-expresión así como la activación de las MMP o un desequilibrio entre las MMP y los inhibidores de las MMP son factores en la patogénesis de las enfermedades caracterizadas por la ruptura de la matriz extracelular o de los tejidos conjuntivos.

El principal componente del periodonto (tejido gingival, cemento, ligamento periodontal y hueso alveolar) es la matriz orgánica. Las metaloproteinasas de la matriz (MMP, por sus siglas en inglés) están involucradas en la remodelación de la matriz periodontal. Las destructivas MMP degradan varios componentes de la matriz extracelular tanto en afecciones fisiológicas así como patológicas. La sobreproducción patológica de las destructivas MMP conduce a una degradación inapropiada y excesiva de la matriz. La sobreproducción de las destructivas MMP facilita la resorción ósea al degradar primero el osteoide (la matriz ósea no mineralizada y recientemente sintetizada) y luego degrada la matriz, resultando en las manifestaciones clínicas de la Ref. 230677 periodontitis que incluyen recesión gingival, formación de surcos, pérdida de acoplamiento, movilidad dental así como pérdida de los dientes.

La MMP-13 es una de las MMP más destructiva que juega un papel en la degradación de la matriz extracelular . El nivel de expresión de la MMP-13 se correlaciona con los índices de periodontitis clínica. La MMP-13 se detecta en el tejido periodontal enfermo y en el fluido crevicular gingival; no obstante, la MMP-13 no se detectó en la mucosa oral saludable. Uitto y otros, American Journal of Pathophysiology, 152(6), 1489 (1998).

La metaloproteinasa de la matriz-13 se conoce como una enzima responsable de la resorción ósea y la destrucción del cartílago en la artritis reumatoide y la osteoartritis . Se sabe que los elevados niveles de la MMP-13 existen también en el fluido crevicular gingival de pacientes con periodontitis crónica. En adición, la MMP-13 es conocida por contribuir tanto con la destrucción del tejido conjuntivo como óseo en pacientes con enfermedades periodontales . Ilgenli, T. y otros, Oral Diseases, 12, 573 (2006) .

Actualmente, se utilizan antimicrobianos, agentes antinflamatorios no esteroideos (NSAID, por sus siglas en inglés) , bifosfonatos y tetraciclinas en el tratamiento de la enfermedad periodontal . A menudo estos agentes no proveen un adecuado alivio sintomático y no se cree que alteren el avance natural de la enfermedad. Asimismo, se encuentran poderosos efectos secundarios con la mayor parte de estas terapias. Por lo tanto, existe una gran necesidad de terapias efectivas y seguras para estos trastornos.

Aunque existen muchos tratamientos para varios aspectos de la enfermedad periodontal, permanece una necesidad para desarrollar una composición oral mejorada que comprenda ingredientes activos que fijen como objetivo las destructivas MMP que facilitan la resorción ósea y pueden producir rupturas en el tejido. En particular existe una necesidad por composiciones orales mejoradas que establezcan como objetivo la MMP- 13, la que contribuye tanto a la resorción ósea como a la destrucción del tejido conjuntivo.

Breve Descripción de la Invención En un primer aspecto, un método para la inhibición de la metaloproteinasa de la matriz MMP- 13 comprende la administración a un paciente de una cantidad terapéutica efectiva de un inhibidor de la metaloproteinasa de la matriz MMP- 13, en donde el inhibidor de la metaloproteinasa de la matriz MMP- 13 se selecciona del grupo que consiste de NDM de extracto de arándano rojo, ácido acetil ceto ß-boswélico, resveratrol, 2 -hidroxifenilcarbamato de 2-isopropil-5-metilciclohexilo, 2-isopropil-5-metilciclohexil carbonato de 4 -acetamidofenilo, así como combinaciones de los mismos.

El método provee un nuevo mecanismo para inhibir de manera efectiva la metaloproteinasa de la matriz MMP-13 y de esta manera tratar o prevenir los estados de salud causados por la expresión de la MMP-13. Los presentes inventores han encontrado sorprendentemente que el NDM de extracto de arándano rojo, ácido acetil ceto ß-boswélico (AKBBA, por sus siglas en inglés) , resveratrol, 2-hidroxifenilcarbamato de 2-isopropil-5-metilciclohexilo, 2 - isopropil- 5-metilciclohexil carbonato de 4-acetamidofenilo, así como combinaciones de los mismos, inhiben de manera efectiva la metaloproteinasa de la matriz MMP-13.

En un segundo aspecto, una composición para el cuidado oral, la composición comprende un portador oralmente aceptable y un compuesto seleccionado del grupo que consiste de material no dializable de extracto de arándano rojo, ácido acetil ceto ß-boswélico, resveratrol, 2-hidroxifenilcarbamato de 2-isopropil-5-metilciclohexilo, 2-isopropil-5-metilciclohexil carbonato de 4-acetamidofenilo, así como combinaciones de los mismos, en donde el compuesto está presente en una cantidad efectiva para inhibir la MMP-13.

En un tercer aspecto, una composición para el cuidado oral comprende un compuesto que se selecciona del grupo que consiste de material no dializable de extracto de arándano rojo, ácido acetil ceto ß-boswélico, resveratrol, 2-hidroxifenilcarbamato de 2-isopropil-5-metilciclohexilo, 2-isopropil-5-metilciclohexil carbonato de 4-acetamidofenilo, así como combinaciones de los mismos, para el tratamiento o prevención de un estado de salud causado por la expresión de la MMP-13.

También, un método para el tratamiento de la degradación de la matriz extracelular, la pérdida de acoplamiento, pérdida de los dientes, movilidad dental, formación de surcos y pérdida ósea.

Descripción Detallada de la Invención Conforme se utiliza en todo este documento, los intervalos se utilizan como una forma abreviada para describir todos y cada uno de los valores que están dentro del intervalo. Cualquier valor dentro del intervalo se puede seleccionar como el término del intervalo. En adición, todas las referencias que se citan en la presente se incorporan en la presente como referencia en su integridad. En el caso de un conflicto entre una definición de la presente descripción y aquélla de una referencia citada, prevalece la presente descripción .

A menos que se especifique lo contrario, todos los porcentajes y cantidades que se expresan en la presente y en cualquier lugar de la especificación se deben entender que se refieren a porcentajes en peso. Las cantidades dadas se basan en el peso activo del material.

Conforme se utiliza en la presente, "saborizante" se refiere a cualquier material o mezcla de materiales que mejora el sabor de una composición.

Composiciones En algunas de las modalidades, una composición comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de la MMP-13 y un portador oralmente aceptable. En algunas de las modalidades, el inhibidor de la MMP-13 se selecciona del grupo que consiste de material no dializable de extracto de arándano rojo, ácido acetil ceto ß-boswélico, resveratrol, 2 -hidroxifenilcarbamato de 2-isopropil-5-metilciclohexilo, 2-isopropil-5-metilciclohexil carbonato de 4 -acetamidofenilo, así como una combinación de dos o más de los mismos.

En algunas de las modalidades, el inhibidor de la MMP-13 se selecciona del grupo que consiste de material no dializable de extracto de arándano rojo, ácido acetil ceto ß-boswélico, resveratrol, 2 -hidroxifenilcarbamato de 2-isopropil-5-metilciclohexilo , 2-isopropil-5-metilciclohexil carbonato de 4-acetamidofenilo, así como una combinación de uno o más de los mismos.

En algunas de las modalidades, la composición comprende además un agente antiplaca, un agente de blanqueamiento, un agente antibacteriano, un agente de limpieza, un agente saborizante, un agente endulzante, un agente de adhesión, un agente tensioactivo , un modulador de espuma, un abrasivo, un agente que modifica el pH, un humectante, un agente de sensación en boca, un colorante, un agente para el control del sarro (anticálculo) , una fuente de ión fluoruro, un agente que estimula la salivación, un nutriente, o una combinación de dos o más de los mismos.

Algunas de las modalidades comprenden adicionalmente un agente endulzante, alcohol, glicerina, sorbitol, propilenglicol , polietilenglicol , un polímero, poliglucósido de alquilo (APG, por sus siglas en inglés) , polisorbato, aceite de ricino, o mentol .

En algunas de las modalidades, el agente endulzante es sacarina o sacarina sódica. En algunas de las modalidades, el alcohol es etanol . En algunas de las modalidades, el polímero es POLOXAMER® 407 o PLURONIC® F108 (ambos disponibles de BASF Corporation) . En algunas de las modalidades, el polietilenglicol es PEG40.

Se puede utilizar cualquier saborizante natural o sintético aceptable oralmente, tales como los aceites saborizantes , aldehidos saborizantes, ásteres, alcoholes, materiales similares, así como combinaciones de los mismos. Los saborizantes incluyen vainilla, salvia, orégano, aceite de perejil, aceite de hierbabuena, aceite de canela, aceite de gaulteria (metilsalicilato) , aceite de menta, aceite de clavo, aceite de laurel, aceite de anís, aceite de eucalipto, aceites de cítricos, aceites y esencias de frutas incluyendo aquéllos derivados del limón, naranja, lima, toronja, albaricoque, banana, uva, manzana, fresa, cereza, piña, etc., sabores derivados de granos y frutos secos tal como café, cacao, cola, maní, almendras, etc., saborizantes adsorbidos y encapsulados , así como mezclas de los mismos. También se abarca dentro de los saborizantes de la presente los ingredientes que proveen fragancia y/u otro efecto sensorial en la boca, incluyendo los efectos de enfriamiento o calentamiento. Tales ingredientes incluyen mentol , acetato de mentilo, lactato de mentilo, alcanfor, aceite de eucalipto, eucaliptol, anetol, eugenol, casia, oxanona, [alfa] -irisona, propenil guaetol, timol, linalol, benzaldehído, cinamaldehído, N-etil-p-mentan-3-carboxamina, N, 2 , 3 -trimetil-2-isopropilbutanamida, 3, 1-mentoxipropan- 1 , 2-diol, cinamaldehído glicerol acetal (CGA) , mentona glicerol acetal (MGA) , así como mezclas de los mismos. Uno o más saborizantes están opcionalmente presentes en una cantidad total de aproximadamente 0.01% hasta aproximadamente 5%, opcionalmente en varias modalidades desde aproximadamente 0.05 hasta aproximadamente 2%, desde aproximadamente 0.1% hasta aproximadamente 2.5%, y desde aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 0.5%.

Los agentes endulzantes entre aquéllos útiles en la presente incluyen dextrosa, polidextrosa, sacarosa, maltosa, dextrina, azúcar invertida seca, mañosa, xilosa, ribosa, fructosa, levulosa, galactosa, jarabe de maíz, almidón parcialmente hidrolizado, hidrolisato de almidón hidrogenado, sorbitol, manitol, xilitol, maltitol, isomalta, aspartame, neotame, sacarina, así como las sales de los mismos, sucralosa, endulzantes intensos basados en dipéptidos, ciclamatos, dihidrocalconas , así como mezclas de los mismos.

Los agentes de sensación en boca incluyen materiales que imparten una textura deseable u otra sensación durante el uso de la composición. Éstos pueden incluir partículas de sílice aglomeradas que están diseñadas para romperse con la agitación, tal como la serie SORBOSIL® BFG, (por ejemplo, BFG 10, BFG 50, BFG 100, etc.), las sílices CBT60S, CBT70, o AC33/43, comercialmente disponibles de PQ Corporation, Valley Forge, Pensilvania.

Los colorantes entre aquéllos útiles en la presente incluyen pigmentos, tintes, lacas y agentes que imparten un lustre particular o reflexión, tales como los agentes de perlado. En varias de las modalidades, los colorantes se pueden utilizar para proveer un recubrimiento blanco o de color claro sobre la superficie dental, que actúe como un indicador de las ubicaciones sobre la superficie dental que han sido contactadas efectivamente por la composición, y/o para modificar la apariencia, en particular el color y/u opacidad, de la composición para incrementar el atractivo al consumidor. Se puede utilizar cualquier colorante oralmente aceptable, incluyendo tintes y pigmentos FD&C, talco, mica, carbonato de magnesio, carbonato de calcio, silicato de magnesio, silicato de magnesio y aluminio, sílice, dióxido de titanio, óxido de zinc, óxidos de hierro rojo, amarillo, marrón y negro, ferrocianuro de amonio férrico, violeta de manganeso, ultramarino, mica titanada, oxicloruro de bismuto, así como mezclas de los mismos. Uno o más colorantes están opcionalmente presentes en una cantidad total de aproximadamente 0.001% hasta aproximadamente 20%, por ejemplo de aproximadamente 0.01% hasta aproximadamente 10%, o de aproximadamente 0.1% hasta aproximadamente 5%.

En ciertas modalidades, las composiciones pueden comprender adicionalmente un abrasivo opcional útil por ejemplo como agente de pulido. Se puede utilizar cualquier abrasivo aceptable oralmente, pero el tipo, finura (tamaño de partícula) y cantidad de abrasivo se deben seleccionar .de manera que el esmalte de los dientes no sea erosionado excesivamente durante el uso normal de la composición. Los abrasivos opcionales adecuados incluyen sílice, por ejemplo, en la forma de sílice precipitada o como mezclas con alúmina, fosfatos insolubles, carbonato de calcio, así como mezclas de los mismos. Entre los fosfatos insolubles útiles como abrasivos están los ortofosfatos , polimetafosfatos y pirofosfatos . Los ejemplos ilustrativos son ortofosfato dicálcico dihidratado, pirofosfato de calcio, pirofosfato cálcico, fosfato tricálcico, polimetafosfato de calcio y polimetafosfato de sodio insoluble .

En ciertas modalidades, las composiciones comprenden opcionalmente un agente para el control del sarro (anticálculo) . Los agentes para el control del sarro entre aquéllos útiles en la presente incluyen las sales de cualquiera de estos agentes, por ejemplo, sus sales de metal alcalino y de amonio: fosfatos y polifosfatos (por ejemplo, pirofosfatos) , ácido poliaminopropanosulfónico (AMPS, por sus siglas en inglés) , sulfonatos de poliolefina, fosfatos de poliolefina, difosfonatos , ' tales como azacicloalcan-2 , 2 -difosfonatos (por ejemplo, ácido azacicloheptano-2 , 2-difosfónico) , ácido N-metil azaciclopentano-2 , 3 -difosfónico, ácido etan-l-hidroxi-1 , 1-difosfónico (EHDP, por sus siglas en inglés) y etan-l-amino-1 , 1-difosfonato y ácidos fosfonoalcano carboxílicos . Las sales inorgánicas de fosfato y polifosfato útiles incluyen fosfatos de sodio monobásico, dibásico y tribásico, tetrapolifosfato, tripolifosfato de sodio, pirofosfatos mono-, di-, tri- y tetra-sódico, trimetafosfato de sodio, hexametafosfato de sodio, así como mezclas de los mismos.

En ciertas modalidades, las composiciones comprenden opcionalmente una fuente de ión fluoruro y útil, por ejemplo, como agente anticaries. Se puede utilizar cualquier fuente de ión de fluoruro particulado oralmente aceptable, incluyendo monofluorofosfatos y fluoruros de potasio, sodio y amonio, fluoruro de estaño, fluoruro de indio, fluoruros de amina, tal como olaflur ( ' -octadeciltrimetilenodiamina-N, , ' -tris (2-etanol-difluorhidrato) , así como mezclas de los mismos. Una o más fuentes de ión de fluoruro están opcionalmente presentes en una cantidad que provee una cantidad eficaz desde el punto de vista clínico de ión de fluoruro soluble a la composición oral .

En ciertas modalidades, la composición comprende opcionalmente un agente que estimula la salivación útil, por ejemplo, para el alivio de la boca seca. Se puede utilizar cualquier agente que estimule la salivación aceptable oralmente, incluyendo sin limitación ácidos alimenticios, tales como los ácidos cítrico, láctico, málico, succínico, ascórbico, adípico, fumárico y tartárico, así como mezclas de los mismos. Uno o más agentes que estimulen la salivación están opcionalmente presentes en una cantidad total efectiva para estimular la salivación.

En ciertas modalidades, las composiciones comprenden opcionalmente un nutriente. Los nutrientes adecuados incluyen vitaminas, minerales, aminoácidos, así como mezclas de los mismos. Las vitaminas incluyen vitaminas C y D, tiamina, riboflavina, pantotenato de calcio, niacina, ácido fólico, nicotinamida, piridoxina, cianocobalamina, ácido para-aminobenzoico, bioflavonoides , así como mezclas de los mismos. Los complementos nutricionales incluyen aminoácidos (tal como, L-triptófano, L-lisina, metionina, treonina, levocarnitina y L-carnitina) , lipotrópicos (tal como, colina, inositol, betaína y ácido linoleico) , así como mezclas de los mismos.

En varias de las modalidades, la composición oral no se ingiere intencionalmente , sino que más bien se retiene en la cavidad oral por un tiempo suficiente para llevar a efecto la utilidad proyectada. En otras modalidades portátiles (tal como, una pastilla para chupar, pastilla de menta, cuenta, oblea, líquido formulado para aplicación oral desde un pequeño nebulizador portátil, líquido formulado para aplicación oral desde una pequeña botella de goteo portátil, o una tableta flexible blanda) , la composición oral es intencionalmente ingerida después de la retención en la cavidad oral por un tiempo suficiente para llevar a efecto la utilidad proyectada.

Las composiciones para el cuidado oral de las diversas modalidades están de manera preferible en la forma de un dentífrico. El término "dentífrico" conforme se utiliza en toda esta descripción, denota una formulación en pasta, gel o líquida. El dentífrico puede estar en cualquier forma deseada, tal como una pasta dental, (incluyendo rayas profundas, rayas superficiales, múltiples capas, que tiene un gel circundando la pasta); polvo; cuentas; lavado oral; enjuagues orales; pastilla para chupar; gel dental; un gel periodontal; un líquido adecuado para recubrir una superficie dental; una goma de mascar una película o tira soluble, parcialmente soluble o insoluble; una oblea; un paño o toallita; un implante; una espuma; una pastilla; un hilo dental; líquido formulado para la aplicación oral en un pequeño nebulizador portátil (frasco de pulverizado) ; líquido formulado para la aplicación oral en una pequeña botella de goteo portátil; una tableta flexible blanda ("pastillas masticables" ) ; o cualquier combinación de las mismos. Conforme se utiliza en la presente, un "portador aceptable oralmente" se refiere a un material o combinación de materiales que son seguros para su uso en las composiciones, en proporción con una razonable relación beneficio/riesgo.

Conforme se utiliza en la presente los términos "vehículo aceptable oralmente" o "portador aceptable oralmente" se refieren a cualquier vehículo útil para la formulación de cualquiera de los dentífricos que se describen líneas arriba. Los vehículos aceptables oralmente incluyen, por ejemplo, uno o más de los siguientes: un solvente, un agente alcalino, un humectante, un espesante, un agente tensioactivo, un abrasivo, un agente anticálculo, un colorante, un agente saborizante, un tinte, una sal que contiene potasio, un agente antibacteriano, agentes insensibilizantes, agentes que reducen las manchas, así como mezclas de los mismos.

Algunas de las modalidades también proveen una composición seleccionada del grupo que consiste de: una pastilla masticable, una pastilla de menta, una cuenta, una oblea, un pequeño nebulizador portátil conteniendo tal mezcla en un líquido formulado para la aplicación oral, tal como un pulverizador, una pequeña botella portátil conteniendo tal mezcla en un líquido formulado para la aplicación oral como una gota, y una tableta flexible blanda.

El material no dializable (NDM, por sus siglas en inglés) de extracto de arándano rojo se deriva del concentrado de jugo de arándano rojo. El jugo de arándano contiene materiales de elevado peso molecular (NDM) que inhiben la adhesión bacteriana a las células hospederas así como también la co-agregación de muchas bacterias orales. El NDM de extracto de arándano rojo se preparó de acuerdo con un método descrito por Weiss E Lev-Dor, R. Kashmamn, Y. ; Goldhar, J. ; Sharon, N. ; Ofek, Itzhak, J. Am. Dent . Assoc. 129, 1719 (1998) .

El ácido acetil ceto ß-boswélico (AKBBA) es un compuesto activo útil aislado de la planta Boswellia que exhibe actividades antibacterianas, antinflamatorias y antioxidantes. La Boswellia es un género de árboles que producen extractos que tienen propiedades antinflamatorias , incluyendo compuestos de ácido boswélico. Por ejemplo, la Boswellia sacra, B. frereana; B. serrata; y B. papyrifera así como sus sub-especies producen extractos apropiados.

El resveratrol ( 3 , 5 , 4 ' -trihidroxiestilbeno) , el compuesto original de una familia de moléculas que incluyen glucósidos y polímeros, es un potente antagonista de AhR conforme se describe en la solicitud de patente francesa No. 9805673 presentada el 5 de Mayo de 1998. Es un agente antifúngico o fitoalexina producida por las plantas clasificadas como espermatofitos de los cuales las viñas, maníes y pinos son los principales representantes (Soleas y otros, 1997, Clin Biochemistry, 30:91-113). Como antagonista de AhR, el resveratrol, cuyo nombre químico es 3,5,4'- trihidroxiestilbeno, es útil en general para prevenir los efectos tóxicos de la exposición al medio ambiente a los ligandos AhR, incluyendo, por ejemplo, hidrocarburos de arilo „ halogenados y policíclicos , hidrocarburos poliaromáticos y bifenilos policlorados . En adición, se ha demostrado que el resveratrol previene la inducción de la citocina pro- inflamatoria, IL-l Beta, por los ligandos AhR (Casper y otros, 1999, Molecular Pharmacology, 56:784-790).

Métodos de Uso Algunas de las modalidades proveen métodos para el tratamiento de los estados de salud asociados con la expresión de MMP-13 aberrante, que comprende la administración a un animal, que necesita de la misma, de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de la MMP-13. En algunas de las modalidades, la composición es apropiada para la administración o aplicación a la cavidad oral de un animal .

En algunas de las modalidades, se provee el uso de un inhibidor de la MMP- 13 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de los estados de salud asociados con la expresión de MMP- 13 aberrante.

En otras de las modalidades, el inhibidor de la MMP- 13 se selecciona del grupo que consiste de NDM de extracto de arándano rojo, ácido acetil ceto ß-boswélico, resveratrol, 2 -hidroxifenilcarbamato de 2-isopropil-5-metilciclohexilo, 2-isopropil-5-metilciclohexil carbonato de 4-acetamidofenilo, o una combinación de dos o más de los mismos. En algunas de las modalidades, el estado de salud asociado con la expresión de la MMP- 13 se selecciona de enfermedad periodontal, degradación de la matriz extracelular , movilidad dental, caries dental, pérdida de acoplamiento, pérdida dental, formación de surcos o pérdida ósea .

EJEMPLOS La hormona paratiroidea (PTH, por sus siglas en inglés) estimula la transcripción de la MMP-13. El método experimental utiliza la PTH para estimular la transcripción de la MMP-13 en células UMR 106-01, que son células que se derivan de una línea celular osteoblástica de rata. La línea de células UNIR 106-01 provee un sistema de modelo útil para el estudio de los efectos de la PTH sobre los osteoblastos in vitro. Ver, por ejemplo, Qin, L. y otros, Journal of Biological Chemistry, 278(22), 19723 (2003).

Material La hormona paratiroidea (PTH 1-34 de rata) se adquirió de Sigma.

Cultivo de Células Las células UMR 106-01 se cultivaron en medio esencial mínimo de Eagle (EMEM) complementado con 25 mM de Hepes con un pH de 7.4 , 1% de aminoácidos no esenciales, 100 unidades/ml de penicilina, 100 yg/ml de estreptomicina y 5% de suero fetal de bovino.

RT-PCR Cuantitativa en Tiempo Real Las células UMR 106-01 se germinaron en placas de 12 cavidades y se cultivaron por 2 a 3 días en el medio de cultivo celular. Cuando las células tuvieron desarrollo confluente, se cambió a medio de cultivo celular a 1% de suero fetal de bovino (no 5% de suero fetal de bovino) para la regulación celular durante la noche. Las células fueron pre- incubadas con el ingrediente activo por 15 minutos y luego se incubaron con PTH (10~8 M) por 4 horas.

Se aisló el ARN total de las células UMR 106-01 estimuladas con o sin PTH con el reactivo TRIzol . Se llevó a cabo la transcripción inversa del ARN total (0.1 .a ADNc con el kit Invitrogen Superscript de acuerdo con las instrucciones del fabricante. La PCR se llevó a cabo en el ADNc utilizando cebadores, y las secuencias utilizadas se listan a continuación. Todas fueron amplificadas mediante la adición de 2.5 µ? de ADNc a la mezcla de PCR (22.5 µ?) conteniendo cada cebador (0.2 µ?) y 12.5 µ? de Platinum SYBR Green qPCR SuperMix UDG (Invitrogen) . Las reacciones se pre-incubaron a 50°C por 2 minutos para la descontaminación del ADN conteniendo dU mediante UDG, luego a 95 °C por 2 minutos para desactivar la UDG y activar Taq. El programa PCR continuó por 49 ciclos de desnaturalización a 95 °C por 15 segundos, alineamiento y elongación de los cebadores a 60 °C por 30 segundos. Se determinó la cuantificación relativa de la expresión del gen utilizando el método 2 -delta delta CT en donde el nivel de los cambios en la expresión del gen es relativo a las muestras de control . Todas las muestras se normalizaron con ß-actina.

Secuencia del Cebador Gen MMP-13 de rata 5 ' -GCCCTATCCCTTGATGCCATT-3 ' ( sentido) 5 ' -ACAGTTCAGGCTCAACCTGCTG-3 ' (antisentido) ß-actina de rata 5 ' -AGCCATGTACGTAGCCATCC-3 ' (sentido) 5 ' -ACCCTCATAGATGGGCACAG-3 ' (antisentido) Ejemplo 1 Se probó el efecto inhibidor del material no dializable de extracto de arándano rojo (NDM de extracto de arándano rojo) sobre la expresión de la MMP-13 estimulada con PTH.

El NDM de extracto de arándano rojo se preparó de acuerdo con un método descrito por Weiss, y otros, J. Am. Dent. Assoc. 129(12), 1719 (1998). El NDM de extracto de arándano rojo se obtuvo al dializar el jugo de arándano rojo a través de una bolsa de diálisis con corte de elevado peso molecular. La substancia que queda en la bolsa que no se dializa es el material no dializable (NDM) .

El NDM de extracto de arándano rojo a 10 ppm, 4 ppm y 1 ppm en solución simple mostró actividad de inhibición de la MMP-13. El nivel de los cambios en la expresión del gen MMP-13 con relación a la muestra de control se presenta en la Tabla 1.

Tabla 1 Los resultados que se muestran en la Tabla 1 demuestran que el ND de extracto de arándano rojo disminuye la expresión del gen MMP-13 estimulado con PTH. Esto sugiere que el NDM de extracto de arándano rojo previene la degradación de la matriz al reducir la expresión de la MMP-13.

Ejemplo 2 Se probó el efecto inhibidor de AKBBA sobre la expresión de la MMP-13 estimulada con PTH. El AKBBA se adquirió de Sabinsa Corporation.

El AKBBA a 10 ppm en solución simple mostró actividad de inhibición de la MMP-13, Tabla 2.. El nivel de cambio en la expresión del gen MMP-13 con relación a la muestra de control se muestra en la Tabla 2.

Tabla 2 Los resultados que se muestran en la Tabla 2 demuestran que el AKBBA disminuye la expresión del gen MMP-13 estimulado con PTH. Esto sugiere que AKBBA previene la degradación de la matriz al reducir la expresión de la MMP-13.

Ejemplo 3 El resveratrol (3 , 5 , 4 ' -trihidroxiestilbeno) es un compuesto polifenólico que se encuentra en las uvas, especialmente en la piel y las semillas de la uva. El resveratrol se adquirió de Sabinsa Corporation.

El resveratrol a 100 ppm, 50 ppm, 10 ppm, 1 ppm y 0.1 ppm en solución simple mostró la actividad de inhibición de la MMP-13 (Tabla 3) . El nivel de cambio en la expresión del gen MMP-13 con relación a la muestra de control se muestra en la Tabla 3.

Tabla 3 Los resultados que se muestran en la Tabla 3 demuestran que el resveratrol disminuye la expresión del gen MMP-13 estimulado con PTH. Esto sugiere que el resveratrol previene la degradación de la matriz al reducir la expresión de la MMP-13.

Ejemplo 4 El Compuesto A (2 -hidroxifenilcarbamato de 2- isopropil-5-metilciclohexilo) tiene una estructura representativa de Compuesto A que es: El Compuesto A, a 7 ppm en solución simple mostró actividad de inhibición de la MMP-13 (Tabla 4) . El nivel de cambio en la expresión del gen MMP-13 con relación a la muestra de control se muestra en la Tabla 4.

Tabla 4 Los resultados que se muestran en la Tabla 4 demuestran que el Compuesto A disminuye la expresión del gen MMP-13 estimulado con PTH. Esto sugiere que el Compuesto A previene la degradación de la matriz al reducir la expresión de la MMP-13.

Ejemplo 5 El Compuesto B (2-isopropil-5-metilciclohexil carbonato de 4-acetamidofenilo) tiene una estructura representativa de Compuesto B que es: El Compuesto B, a 10 ppm en solución simple mostró actividad de inhibición de la MMP-13 (Tabla 5) . El nivel de cambio en la expresión del gen MMP-13 con relación a la muestra de control se muestra en la Tabla 5.

Tabla 5 Los resultados que se muestran en la Tabla 5 demuestran que, el Compuesto B disminuye la expresión del gen MMP-13 estimulado con PTH. Ya que el nivel de la MMP-13 se correlaciona con los índices clínicos periodontales , esto sugiere que el Compuesto B previene la degradación de la matriz al reducir la MMP-13 con la estimulación de la hormona paratiroidea (PTH) .

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (19)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Un método para tratar una afección asociada con la expresión aberrante de MMP-13 caracterizado porque comprende administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de 2-isopropil-5-metilciclohexil carbonato de 4-acetamidofenilo.

2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende además administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente activa de uno o más de un material no dializable de extracto de arándano, ácido acetil ceto ß-boswélico, resveratrol y 2-hidroxifenilcarbamato de 2-isopropil-5-metilciclohexilo.

3. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque comprende administrar al sujeto un material no dializable de extracto de arándano.

4. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque comprende administrar al sujeto ácido acetil ceto ß-boswélico.

5. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque comprende administrar al sujeto resveratrol .

6. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque comprende administrar al sujeto 2-hidroxifenilcarbamato de 2-isopropil-5-metilciclohexilo.

7. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la afección asociada con la expresión aberrante de MMP-13 se selecciona del grupo que consiste en degradación de la matriz extracelular, pérdida de fijación de uno o más dientes, caída de dientes, movilidad dental, formación de huecos, debilitamiento de huesos y combinaciones de dos o más de los mismos .

8. Una composición caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de MMP-13 y un portador oralmente aceptable, donde el inhibidor de MMP-13 es 2-isopropil-5-metilciclohexil carbonato de 4 -acetamidofenilo .

9. La composición de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque comprende además un inhibidor de MMP-13 que se selecciona del grupo que consiste en material no dializable de extracto de arándano, ácido acetil ceto ß-boswélico, resveratrol y 2-hidroxifenilcarbamato de 2-isopropil-5-metilciclohexilo y combinaciones de los mismos.

10. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el inhibidor de MMP-13 comprende un material no dializable de extracto de arándano.

11. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el inhibidor de MMP-13 comprende ácido acetil ceto ß-boswélico.

12. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el inhibidor de MMP-13 comprende resveratrol .

13. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el inhibidor de MMP-13 comprende 2-hidroxifenilcarbamato de 2-isopropil-5-metilciclohexilo .

14. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13, caracterizada porque es un dentífrico .

15. La composición de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada porque el dentífrico se selecciona del grupo que consiste en: pasta dental; pasta dental con rayas profundas; pasta dental con rayas superficiales; pasta dental de múltiples capas; una pasta dental que rodea un gel; polvo; perlas; lavado bucal; enjuagues bucales pastilla; gel dental; un gel periodontal; un líquido adecuado para pintar una superficie dental; una goma de mascar; una película o tira soluble, parcialmente soluble o no soluble; una oblea; una toalla o toalla húmeda; un implante; una espuma; una cápsula; un hilo dental, líquido formulado para aplicación oral en una pequeña botella portátil; líquido formulado para aplicación oral en una pequeña botella portátil generadora de gotas; un comprimido flexible suave; o una combinación de dos o más de los mismos.

16. Un método para tratar una afección asociada con la expresión aberrante de MMP-13 caracterizado porque comprende administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de ácido acetil ceto ß-boswélico, donde el ácido acetil ceto ß-boswélico se administra en forma de una composición de dentífrico.

17. Un método para tratar una afección asociada con la expresión aberrante de MMP-13 caracterizado porque comprende administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de 2 -hidroxifenilcarbamato de 2-isopropil-5-metilciclohexilo, donde la afección asociada con la expresión aberrante de MMP-13 se selecciona del grupo que consiste en degradación de la matriz extracelular, pérdida de fijación de uno o más dientes, caída de dientes, movilidad dental, formación de huecos y combinaciones de dos o más de los mismos y donde el 2 -hidroxifenilcarbamato de 2-isopropil-5 -metilciclohexilo se administra en forma de una composición de dentífrico.

18. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque comprende además administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente activa de uno o más de material no dializable de extracto de arándano, resveratrol, 2 -hidroxifenilcarbamato de 2-isopropil-5-metilciclohexilo y 2-isopropil-5-metilciclohexil carbonato de 4 -acetamidofenilo .

19. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque comprende además administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente activa de uno o más de material no dializable de extracto de arándano, resveratrol, ácido acetil ceto ß-boswélico, y 2-isopropil-5-metilciclohexil carbonato de 4 -acetamidofenilo .