MX2011006023A - Nucleotidos uracil ciclopropilicos. - Google Patents

Abstract

Compuestos de fórmula I: (Ver fórmula (I)) que incluyen cualquier estereoisómero posible de los mismos, donde: R1 es hidrógeno o halo; R4 es un éster de monofosfato, difosfato o trifosfato; o R4 es un grupo de fórmula (Ver fórmula) R7 e fenilo opcionalmente sustituido; naftilo, indolilo o N-alquiloxi C1-C6-carbonilindolilo ; R8 es hidrógeno, alquilo C1-C6, bencilo; R8' es hidrógeno, alquilo C1-C6, bencilo; o R8 y R8' conjuntamente con el átomo de carbono al cual están unidos forman cicloalquilo C3-C7; R9 es alquilo C1-C10, bencilo, o fenilo opcionalmente sustituido; o una sal o solvato de los mismos; y formulaciones farmacéuticas y el uso de compuestos l como inhibidores de HCV.

Description

NUCLEÓTIDOS URACIL CICLOPROPÍLICOS CAMPO TÉCNICO Esta invención se refiere a nuevos nucleótidos, los cuales son inhibidores de la polimerasa del virus de hepatitis C (HCV) y a su uso en el tratamiento o profilaxis de HCV.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN HCV es un virus de ARN de sentido positivo, de un solo filamento que pertenece a la familia de virus Flaviviridae en el género hepacivirus. La región NS5B del poligen de ARN codifica una polimerasa de ARN dependiente de ARN (RdRp), la cual es esencial para la replicación viral. A continuación de la infección inicial aguda, una gran mayoría de individuos infectados desarrolla hepatitis crónica debido a que HCV se replica preferiblemente en los hepatocitos pero no es directamente citopática. En particular, la falta de una respuesta vigorosa de los linfocitos T y la gran propensión del virus a mutar parece promover un régimen alto de infección crónica. La hepatitis crónica puede progresar hasta fibrosis hepática, lo cual conduce a cirrosis, una enfermedad hepática de etapa final, y a HCC (carcinoma hepatocelular), convirtiéndolos en la causa principal de transplantes de hígado.

Existen seis genotipos de HCV principales y más de 50 subtipos, los cuales están diferentemente distribuidos geográficamente. El genotipo 1 de HCV es el genotipo predominante en Europa y en los Estados Unidos. La extensa heterogeneidad genética de HCV tiene importantes implicaciones clínicas y de diagnóstico, lo cual explica quizás las dificultades en el desarrollo de vacunas y la falta de respuesta a la terapia corriente.

La transmisión de HCV puede ocurrir a través de contacto con sangre o con productos de sangre contaminados, por ejemplo, después de transfusión de sangre o uso de drogas intravenosas. La introducción de pruebas de diagnóstico que se usan en el rastreo de sangre ha conducido a una tendencia descendente de incidencia de HCV en la post-transfusión. Sin embargo, dado el lento progreso hasta llegar a la enfermedad hepática de etapa final, las infecciones existentes continuarán presentando serios problemas médicos y económicos durante décadas.

Las terapias corrientes con HCV se basan en interferon-alfa pegilado (IFN-a) en combinación con ribavirina. Esta terapia de combinación conduce a una respuesta virológica sostenida en más de 40% de los pacientes infectados por el fenotipo 1 HCV y aproximadamente 80% de los pacientes infectados con los genotipos 2 y 3. Además de la eficacia limitada sobre el genotipo 1 de HCV, esta terapia de combinación tiene efectos secundarios significativos y es muy poco tolerada en muchos pacientes. Los efectos secundarios principales incluyen síntomas de tipo gripal, anormalidades hematológicas y síntomas neuropsiquiátricos. Por lo tanto, surge la necesidad de disponer de tratamientos más eficaces convenientes y mejor tolerados.

La experiencia con las drogas de HIV, en particular con los inhibidores de proteasa de HIV, nos ha enseñado que los esquemas de dosificación farmacocinéticamente sub-óptimos y complejos dan rápidamente como resultado fallas de cumplimiento inadvertidas. Esto, a su vez, significa que la concentración mínima de 24 horas (concentración mínima en el plasma) para las drogas respectivas en un régimen de HIV cae frecuentemente por debajo del umbral de Clgo o DEgo durante largos períodos del día. Se considera que una concentración mínima de por lo menos la Cl50, y más realísticamente, la de Cl90 o DE90, es esencial para hacer más lento el desarrollo de mutantes que evitan la droga. El logro de la farmacocinética y metabolismo de droga necesarios para obtener dichas concentraciones mínimas plantea un desafío riguroso para el diseño de drogas.

La RdRp de NS5B es esencial para la replicación del genoma de ARN HCV de sentido positivo, de un solo filamento. Esta enzima ha creado un interés significativo entre los químicos en medicina. Ambos inhibidores de nucleósidos y de no nucleósidos de NS5B son conocidos. Los inhibidores de nucleósidos pueden actuar también como terminador de cadena o como inhibidor competitivo, lo cual interfiere con la adhesión de nucleótidos a la polimerasa. Para que funcione como un terminador de cadena el análogo de nucleósido debe ser recogido por la célula y convertido in vivo a un trifosfato. Esta conversión al trifosfato es comúnmente intermediada por quinasas celulares, las cuales imparten requisitos estructurales adicionales a un potencial inhibidor de nucleósido polimerasa. Además, esto limita la evaluación directa de nucleósidos como inhibidores de replicación de HCV para ensayos a base de células capaces de fosforilación in situ.

Se llevaron a cabo varios intentos para desarrollar nucleósidos como inhibidores de RdRp de HCV, pero aunque un puñado de compuestos ha entrado dentro del desarrollo clínico, ninguno ha proseguido hasta el final del registro. Entre los problemas que han encontrado actualmente los nucleósidos involucrados en HCV son la toxicidad, la mutagenicidad, la falta de selectividad, la baja eficacia, la baja biodisponibilidad, regímenes de dosificación sub-óptimos y consiguiente carga elevada de pastillas y costo de materiales.

Varias patentes y solicitudes de patente así como también publicaciones científicas describen análogos de nucleósidos que tienen actividad inhibidora de HCV. La WO 2004/002999 describe pro-drogas 2' y 3'-nucleosídicas modificadas para tratar infecciones de flaviridae. La WO 2008/043704 describe 4-amino-1-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-hidroxi-5-hidroximetil— 3— metil— tetrahidrofuran— 2— il)— 1 H-pirimidin-2-ona y derivados éster como inhibidores de polimerasa HCV.

Existe la necesidad de disponer de inhibidores de HCV que pueden superar las desventajas de la terapia con HCV corriente tales como efectos secundarios, eficacia limitada, surgimiento de resistencia y fallas de cumplimiento, así como también para mejorar la respuesta viral sostenida.

La presente invención se refiere a un grupo de derivados 1-(7-hidroxi-6-hidrox¡metil-5-oxa-esp¡ro[2.4]hept^ diona inhibidores de HCV con propiedades útiles con respecto a uno o más de los parámetros siguientes: eficacia anti-viral, desarrollo favorable del perfil de resistencia, falta de toxicidad y genotoxicidad, farmacocinética y farmacodinámica favorable y facilidad de formulación y administración. El compuesto 1-((4R,6R,7S)-7-hidroxi-6-hidroximetil-5-oxa-espiro[2.4]hept-4-il)-1H,3H-pirimidin-2,4-diona, denominado también 2'-deoxi-2'-espirociclopropiluridina ha sido descrito en J. Am, Chem. Soc, 1992, 114, 4007-4008.

Los compuestos de la invención pueden ser también atractivos debido al hecho de que carecen de actividad contra otros virus, en particular contra HIV. Los pacientes infectados con HIV sufren a menudo de coinfecciones tales como HCV. El tratamiento de dichos pacientes con un inhibidor de HCV que inhibe también HIV puede conducir al surgimiento de cepas de HIV resistentes.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En un aspecto la presente invención provee compuestos que pueden representarse por la fórmula I: Incluyendo cualquier este reo isómero posible de los mismos, donde: R1 es hidrógeno o halo; R4 es un éster de monofosfato, difosfato o trifosfato, o R4 es un grupo de fórmula R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 , 2, o con 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente entre halo, alquilo C-I-C6, alquenilo C3-C6, alcoxi C^Ce, alcoxicarbonilo C1-C6, hidroxi, y amino; o R7 es naftilo; o R7 es indolilo o W-alquiloxi- Ci-C6 carbonilindolilo; R8 es hidrógeno, alquilo Ci-C6, bencilo; R8 es hidrógeno, alquilo bencilo; o R8 y R8 conjuntamente con el átomo de carbono al cual están unidos forman cicloalquilo C3-C7; R9 es alquilo C1-C10, cicloalquilo C3-C7, alquenilo C3-C6, bencilo, o fenilo, dicho fenilo puede estar opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes cada uno independientemente seleccionado entre hidroxi, alcoxi C1-C6, amino, mono- y dialquilamino C1-C6; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En otro aspecto, la invención se refiere al uso de compuestos de fórmula I tal como se especifica aquí para inhibir HCV. Alternativamente se provee el uso para la manufactura de un medicamento, de un compuesto de fórmula I tal como el que se especifica aquí. La invención se refiere también al procedimiento para compuestos de manufactura de fórmula I a partir de un intermediario que tiene la estructura descrita anteriormente pero donde R4 es hidrógeno.

El grupo -NH-C(R8)(R8)-C(=0)- forma un residuo amino ácido, que incluye residuos amino ácido naturales y no naturales. Son de interés particular aquellos residuos amino ácido donde R8 es hidrógeno. Cuando en el último caso R8 es distinto de hidrógeno, la configuración en el átomo de carbono asimétrico portador puede ser la de un L-amino ácido. Ejemplos de los mismos son residuos alanina (Ala), valina (Val), isoleucina (lie) y fenil-alanina (Phe), en particular L-Ala, L-Val, L— He, y L-Phe. Ejemplos de residuos amino ácidos donde R8 y R8 conjuntamente con el átomo de carbono al cual están unidos forman cicloalquilo C3-C7, ácido ciclopropilamino 1 ,1 o ácido 1 ,1-ciclobutilamino.

Subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I o subgrupos de compuestos de fórmula I, definidos aquí, donde R1 es hidrógeno; o donde R es yodo.

Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I o subgrupos de compuestos de fórmula I definidos aquí donde R4 es un grupo de fórmula Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I o subgrupos de compuestos de fórmula I definidos aquí donde: (a) R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente de halo, alquilo Ci-C6> alquenilo C3-C6, alcoxi Ci-C6, hidroxi, y amino; o R7 es naftilo; o R7 es indolilo; o R7 es N-t-butiloxicarbonilindolilo. (b) R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente de halo, alquilo C-i- C6, alquenilo C3-C6, y alcoxi C^-Ce, o R7 es naftilo; (c) R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con halo o alquilo d-Ce, o R7 es naftilo; (d) R7 es fenilo, sustituido con alquiloxicarbonilo C1-C4; (e) R7 es fenilo, sustituido con alquiloxicarbonilo C-\-C2 (f) R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con cloro o alquilo C!-C6; o R7 es naftilo; (g) R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente de halo y alquilo C1-C6', (h) R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente de halo, alquilo Ci- C6, alquenilo C3-C5, alcoxi Ci-C6, hidroxi, y amino; o R7 es naftilo; o R7 es indolilo; o R7 es N-t.butiloxicarbonilindolilo; (i) R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado entre halo, alquilo C1-C6, alquenilo C3-C6, alcoxi C1-C6, hidroxi, y amino; o R7 es naftilo; o R7 es indolilo; o R7 es N-t.butiloxicarbonilindolilo; (j) R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado entre halo, alquilo C1-C6, alquenilo C3-C6, y alcoxi C1-C6, (k) R7 es naftilo; (I) R7 es 5— indolilo o A/-t.butiloxicarbonilo-5-indolilo.

En una modalidad, donde el grupo R7 es indolilo en los compuestos de fórmula I o cualquiera de los subgrupos de los mismos es 5-indolilo el grupo R7 es A/-alquiloxicarbonilo C1-C6 indolilo es N-t. butiloxicarbonil— 5— indolilo, en particular N—t.butiloxicarbonil— 5— indolilo. El grupo indolilo cuando está ligado en su posición 5 puede representarse de la manera siguiente: donde R es hidrógeno o alquiloxi Ci-C6-carbonilo, o en particular R es hidrógeno o t.butiloxicarbonilo.

Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I o subgrupos de compuestos de fórmula I definidos aquí donde R8 es hidrógeno y R8 es metilo o alquilo tales como isopropilo o isobutilo. Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I o subgrupos de compuestos de fórmula I definidos aquí donde El resto es glicilo, alanilo, o valilo (Gly, Ala, o Val; en particular Gly, L-Ala, o L-Val).

Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I, o subgrupos de compuestos de fórmula I, definidos aquí, donde -| g e eli donde R8 es hidrógeno y R8' es hidrógeno, alquilo C^Ce, bencilo; o R8 es hidrógeno y R8 es hidrógeno o alquilo C^Ce; 20 R6 es hidrógeno y R8 es alquilo Ci-C2; R8 es hidrógeno y R8 es metilo.

En una modalidad R8 y R8 conjuntamente con el átomo de carbono al cual están unidos forman cicloalquilo C3-C7; o en particular forman cicloalquilo C3-C4; o en particular forman ciclopropilo.

Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I, o subgrupos de compuestos de fórmula I, definidos aquí, donde (a) R9 es alquilo C1-C10, cicloalquilo C3-C7, alquenilo C3-C6, o bencilo; (b) R9 es alquilo Ci-C8, o bencilo; (c) R9 es alquilo d-C6 o bencilo; (d) R9 es alquilo C -C6; (e) R9 es alquilo C1-C4; o (f) R9 es metilo, etilo, isopropilo, 1-metil-propilo, isobutilo, butilo, o t-butilo; (g) R9 es bencilo; (h) R9 es ciclopentilo; 5-hexenilo; 2,2-dimetil— butilo; octilo; 2-propil— pentilo.

Son de interés los compuestos mencionados en la parte experimental y las sales o solvatos de los mismos farmacéuticamente aceptables. Son de interés particular los compuestos números 1 , 3, 5, 9, 10, , 12, 13, 14, 15 enumerados en la parte experimental.

Los compuestos de fórmula I tienen varios centros de quilaridad, en particular, en los átomos de carbono 1', 3', y 4'. Aunque la estereoquímica en estos átomos de carbono es fija, los compuestos pueden exhibir por lo menos 75%, preferiblemente por lo menos 90%, tal como en exceso de 95%, de pureza enantiomérica en cada uno de los centros quirales.

La quiralidad puede estar también presente en los sustituyentes tales como cuando R4 es , que tiene quiralidad en el carbono portador de R (donde R8 y R8 son diferentes) y en el átomo fosforoso. El centro fosforoso puede estar presente como Rp o Sp, o como una mezcla de dichos estereoisómeros, incluyendo racematos. Pueden existir también diaestereómeros resultantes del centro fosforoso quiral y un átomo de carbono quiral.

En otro aspecto, la invención provee un compuesto de fórmula I o una sal, hidrato o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, para ser usado en el tratamiento o profilaxis (o la manufactura de un medicamento para el tratamiento o profilaxis) de infección de HCV. Genotipos de HCV representantitos en el contexto del tratamiento o profilaxis de acuerdo con la invención incluyen el genotipo 1b (prevaleciente en Europa) o 1a (prevaleciente en Norte America). La invención provee también un método para el tratamiento o profilaxis de la infección de HCV en particular del genotipo 1a o 1b.

Los compuestos de fórmula I están representados como un estereoisómero definido. La configuración absoluta de dichos compuestos puede determinarse usando métodos conocidos en la materia como tales, por ejemplo, difracción por rayos X o RMN y/o implicación desde los materiales de partida de estereoquímica conocida. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención comprenderán preferiblemente preparaciones sustancialmente estereoisoméricamente puras del estereoisómero indicado.

Las formas estereoisoméricas puras de los compuestos e intermediarios mencionados aquí se definen como isómeros sustancialmente libres de otras formas enantioméricas o diaestereoméricas de la misma estructura molecular básica de dichos compuestos o intermediarios. En particular el término "estereoisoméricamente puro" se refiere a compuestos o intermediarios que tienen un exceso estereoisomérico de por lo menos 80% (es decir, como mínimo 90% de un isómero y como máximo 10% de otros isómeros posibles) hasta un exceso estereoisomérico de 100% (es decir, 100% de un isómero y nada del otro) más en particular, los compuestos o intermediarios que tienen un exceso estereoisomérico del 90% hasta 100%, aún más particularmente que tienen un exceso estereoisomérico del 94% hasta el 100% y más particularmente que tienen un exceso estereoisomérico de 97% hasta 100%. Los términos "enantioméricamente puro" y "diastereoméricamente puro" se entenderán de manera similar, pero luego se tendrá en cuenta el exceso enantiomérico y el exceso diaestereomérico, respectivamente, de la mezcla en cuestión.

Las formas estereoisoméricas puras de los compuestos e intermediarios de esta invención pueden obtenerse mediante la aplicación de procedimientos conocidos en la materia. Por ejemplo, los enantiómeros pueden separarse el uno del otro por cristalización selectiva de sus sales diaestereoméricas con ácidos o bases ópticamente activas. Ejemplos de los mismos son ácido tartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido ditoluoiltartárico y ácido alcanforsulfónico. Alternativamente, los enantiómeros pueden separarse por técnicas cromatográficas usando fases estacionarias quirales. Dichas formas isoméricas estereoquímicamente puras pueden derivar también de las formas estereoquímicamente isoméricas puras correspondientes de los materiales de partida apropiados, con la condición de que la reacción ocurra estereoespecíficamente. Preferiblemente, si se desea un estereoisómero específico, dicho compuesto es sintetizado por métodos estereoespecíficos de preparación. Estos métodos emplearán ventajosamente materiales de partida enantioméricamente puros.

Las cantidades diaestereoméricas de los compuestos de fórmula I pueden obtenerse por separado por métodos convencionales. Métodos de separación física apropiados que pueden emplearse ventajosamente son por ejemplo, cristalización selectiva y cromatografía, por ejemplo, cromatografía en columna.

Las sales de adición farmacéuticamente aceptables comprenden las formas de sal de adición de base y ácido no tóxicas terapéuticamente activas de los compuestos de fórmula (I). Son de interés las formas libres, es decir, no salinas de los compuestos de fórmula (I) o cualquier subgrupo de compuestos de fórmula (I) especificados aquí.

Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables pueden obtenerse convenientemente mediante tratamiento de la forma de base con dicho ácido apropiado. Los ácidos apropiados comprenden, por ejemplo, ácidos inorgánicos, tales como ácidos halohídricos, por ejemplo, ácido clorhídrico o bromhídrico, ácido sulfúrico, nítrico, fosfórico y similares; o ácidos orgánicos tales como por ejemplo, ácido acético, propiónico, hidroxiacético, láctico, piruvico, oxálico (es decir, etandioniónico), malónico, succínico (es decir, butandioico), maleico, fumárico, málico (es decir, ácido hidroxilbutandioico), tartárico, cítrico, metansulfónico, etansulfónico, bencensulfónico, p-toluensulfónico, ciclámico, salicílico, p-aminosalicílico, pamoico y ácidos similares. A la inversa dichas formas salinas pueden convertirse por tratamiento con una base apropiada a la forma de base libre.

Los compuestos de fórmula (I) que contienen un protón ácido pueden convertirse también a sus formas de sal de adición de amina o metales no tóxicos mediante tratamiento con bases orgánicas e inorgánicas apropiadas. Las formas de sales de base apropiadas comprenden por ejemplo, las sales de amonio, las sales de metales alcalinos y metales alcalino térreos, por ejemplo, sales de litio, sodio, potasio, magnesio, calcio y similares, sales con bases orgánicas, por ejemplo, las sales de benzatina, N-metil-D-glucamina, hidrabamina, y sales con amino ácidos tales como por ejemplo, arginina, lisina y similares.

El término "solvatos" cubre cualquier solvato farmacéuticamente aceptable que los compuestos de fórmula I asi como también sus sales sean capaces de formar. Dichos solvatos son por ejemplo, hidratos, alcoholatos, por ejemplo, etanolatos, propanolatos, y similares.

Algunos de los compuestos de fórmula (I) pueden existir también en su forma tautomérica. Por ejemplo, las formas tautoméricas de los grupos amida (-C(=0)-NH-) son iminoalcoholes (-C(OH)=N-), que pueden quedar estabilizados en anillos con carácter aromático. La base de uridina es un ejemplo de dicha forma. Dichas formas, aunque no se indica explícitamente en las fórmulas estructurales representadas aquí, se incluirán dentro del alcance de la presente invención..

Tal como se usa aquí, "alquilo C1-C4" como un grupo o parte de un grupo define radicales hidrocarbonados saturados de cadena recta o ramificada que tienen 1 a 4 átomos de carbono tales como por ejemplo, metilo, etilo, 1— propilo, 2-propilo, 1— butilo, 2— butilo, 2-metil-1-propilo, 2-metil-2-propilo. "alquilo C1-C6" que comprende radicales alquilo C1-C4 y los homólogos principales del mismo que tienen 5 o 6 átomos de carbono tales como por ejemplo, -pentilo, 2-pentilo, 3-pentilo, 2,2-dimetilpropilo, -hexilo, 2-hexilo; 2-metil-1 -butilo, 2-metil-1-pentilo, 2— etil— 1 -butilo, 3-metil-2-pentilo, y similares. Es de interés dentro del alquilo C1-C6, el alquilo C-1-C4. "Alquilo C1-C10" comprende radicales alquilo C1-C6 y los homólogos principales del mismo que tienen 7, 8, 9 o 10 átomos de carbono tales como por ejemplo, heptilo, 2-heptilo, 3— heptilo, 2-metilhexilo, octilo, 2-octilo, 3-octilo, nonilo, 2-nonilo, 3-nonilo, 2-butilpentilo, decilo, 2-decilo, y similares. Es de interés dentro del alquilo Ci-C10 el alquilo C -C5.

'Alcoxi C1-C6' significa un radical -O-alquilo C-i-C6 donde alquilo Ci-C6 es tal como se ha definido anteriormente. Los Ejemplos de alcoxi C^-Ce son metoxi, etoxi, n-propox¡, o ¡sopropoxi.

"Cicloalquilo C3-C7" incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, y cicloheptilo. Son de interés ciclopropilo, ciclopentilo y ciclohexilo.

El término "alquenilo C3-6" como grupo o parte de un grupo define radicales hidrocarbonados de cadena recta o ramificada que tienen enlaces saturados de carbono-carbono y por lo menos un doble enlace, y tienen de 3 a 6 átomos de carbono, tales como por ejemplo, 1-propenilo, 2-propenilo (o alilo), 1-butenilo, 2-butenilo, 3-butenilo, 2-metil-2-propenilo, 2-pentenilo, 3-pentenilo, 2-hexenilo, 3-hexenilo, 4-hexenilo, 2-metil-2-butenilo, 2-metil-2-pentenilo y similares. En una modalidad, el átomo de carbono unido al grupo alquenilo C3_6 con el remanente de la molécula está saturado. Es de interés dentro de alquenilo C^ el alquenilo C3--4. Son de interés entre alquenilo C3_6 o alquenilo C3_4 aquellos radicales que tienen un doble enlace.

El término "halo" es genérico a flúor, cloro, bromo o yodo.

Tal como se usa aquí, el término '(=0)' o ???' forma un resto carbonilo cuando se adhiere a un átomo de carbono. Cabe observar que un átomo puede estar únicamente sustituido con un grupo oxo cuando la valencia de ese átomo lo permite.

El término "éster de monofosfato, difosfato o trifosfato" se refiere a grupos: 0 Tal como se usan aquí, las posiciones radicales o cualquier resto molecular usado en las definiciones puede estar en cualquiera de dichos restos con la condición de que sea químicamente estable. Cuando cualquier variable que está presente ocurre más de una vez en cualquier resto, cada definición es independiente.

Siempre que se usa aquí el término "compuestos de fórmula I" o "los presentes compuestos" o términos similares, significa e incluye los compuestos de fórmula I, incluyendo las formas estereoquímicamente isoméricas posibles, y sus sales y solvatos farmacéuticamente aceptables.

La presente invención incluye también compuestos de fórmula I o cualquier subgrupo de fórmula I rotulados con isótopos, donde uno o más de los átomos es reemplazado con un isótopo que difiere de los que se encuentran típicamente en la naturaleza. Ejemplos de dichos isótopos incluyen isótopos de hidrógeno tales como 2H y 3H; carbono, tales como 11C, 13C y C; nitrógeno, tales como 13N y 15N; oxígeno, tales como 150, 170 y 8O; fósforo, tales como 31 P y 32P, azufre tales como 35S; flúor, tales como 18F¡ cloro, tales como 36CI; bromo tales como 75Br, 76Br, 77Br y 82Br; y yodo, tales como 123l, 12 l, 25l y 131l. Los compuestos rotulados con isótopos de la invención pueden prepararse mediante procedimientos análogos a los descritos aquí mediante el uso de reactivos de materiales de partida apropiados rotulados con isótopos, o por técnicas conocidas en la materia. La elección del isótopo incluido en un compuesto rotulado con isótopos depende de la aplicación específica de ese compuesto. Por ejemplo, para ensayos de distribución de tejidos, se incorpora un isótopo radioactivo tal como 3H o 1 C. Para aplicaciones de radioimagen, un isótopo emisor de positrones tales como I I Q i8 13^ 0 I5Q resu|tará út¡| i_a incorporación de deuterio puede proveer mayor estabilidad metabólica, dando como resultado por ejemplo un aumento de la vida media in vivo del compuesto o requisitos de dosis reducidas.

Métodos de Síntesis Generales El material de partida 2'-deoxi-2'-espirociclopropiluridina puede prepararse tal como se describió en J. Am, Chem. Soc, 1992, 1 14, 4007-4008. Los compuestos de la fórmula I donde R4 es un grupo pueden prepararse por reacción de este material de partida con un éster de ácido fosforamido clorhídrico 1d. Este último puede prepararse por reacción de un alcohol 1a con POCI3 en presencia de una base, obteniendo de esta manera dicloruro de fosforilo 1 b, que se hace reaccionar luego con el amino ácido 1c.

Los compuestos de fórmula I donde R1 es halo pueden prepararse primero convirtiendo el intermediario le a su forma hidroxi-protegida If, que subsiguientemente es halogenada a Ig, por ejemplo con N-halo succinimida, por ejemplo con N-yodo succinimida a Ih. Los grupos hidroxi-protegidos apropiados son grupos sililo alquilados, en particular grupos silil alquilados estéricamente inhibidos tales como t.butildimetilsililo, triisopropilsililo, o un grupo 1 ,1 ,3,3-tetraisopropil-disiloxano-1 ,3-dülo (TIPDS). Estos grupos se introducen haciendo reaccionar los alcoholes de partida con el derivado cloruro de sililo apropiado y pueden removerse luego con un compuesto fluoruro tal como fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF), dando como resultado los compuestos Ih. Estas reacciones están representados en el siguiente esquema donde Pg es un grupo hidroxi-protegido tal como los grupos sililo antes mencionados. >g ih En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I tal como se especifica aquí, y un portador farmacéuticamente aceptable. Una cantidad terapéuticamente eficaz en este contexto es una cantidad suficiente para actuar en una forma profiláctica contra infección de HCV, para estabilizado para reducir la infección de HCV en sujetos infectados o sujetos que corren el riesgo de ser infectados. En un aspecto más esta invención se refiere a un procedimiento de preparación de una composición farmacéutica tal como se especifica aquí, que comprende mezclar íntimamente un portador farmacéuticamente aceptable con una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I tal como se especifica aquí.

Por lo tanto, los compuestos de la presente invención o cualquier subgrupo de los mismos pueden formularse en varias formas farmacéuticas para propósitos de administración. Como composiciones apropiadas pueden citarse todas las composiciones empleadas usualmente para administrar drogas sistémicamente. Para preparar las composiciones farmacéuticas de esta invención, una cantidad eficaz del compuesto particular, opcionalmente en forma de sal de adición o complejo metálico, como ingrediente activo se combina en mezcla intima con un portador farmacéuticamente aceptable, donde dicho portador puede tener una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración. Estas composiciones farmacéuticas están convenientemente en una forma de dosificación unitaria apropiada, particularmente para administración oral, rectal, percutánea o por inyección parenteral. Por ejemplo, en la preparación de las composiciones en forma de dosificación oral, pueden emplearse cualquiera de los medios farmacéuticos usuales tales como por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparaciones líquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires, emulsiones y soluciones; o portadores sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares en el caso de polvos, pastillas, cápsulas y tabletas. Debido a su facilidad de administración las tabletas y cápsulas representan las formas unitarias de dosificación oral más ventajosas, en cuyo caso se emplean obviamente portadores farmacéuticos sólidos. Para composiciones parenterales, el portador usualmente comprenderá agua estéril, por lo menos en gran parte, aunque pueden incluirse otros ingredientes, por ejemplo para ayudar a la solubilidad. Pueden prepararse por ejemplo soluciones inyectables en las cuales el portador comprende solución salina, solución de glucosa o una mezcla de solución salina y de glucosa. También pueden prepararse suspensiones inyectables en cuyo caso pueden emplearse portadores líquidos apropiados, agentes de suspensión y similares. Se incluyen asimismo preparaciones en forma sólida destinadas a ser convertidas poco tiempo antes de su uso, a preparaciones en forma líquida. En las composiciones apropiadas para administración percutánea el portador comprende opcionalmente un agente mejorador de penetración y/o un agente humectante apropiado, combinados opcionalmente con aditivos apropiados de cualquier naturaleza en proporciones menores, cuyos aditivos no introducen un efecto perjudicial significativo en la piel. Los compuestos de la presente invención pueden administrarse también por inhalación oral o por insuflación en forma de una solución, una suspensión o un polvo seco usando cualquier sistema de administración conocido en la materia.

Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmacéuticas antes mencionadas en forma de dosificación unitaria para facilitar la administración y uniformidad de la dosis. Tal como se usa aquí, forma de dosificación unitaria se refiere a unidades físicamente discretas apropiadas como dosis unitarias, donde cada unidad contiene una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. Ejemplos de dichas formas de dosis unitaria son tabletas (incluyendo tabletas ranuradas o recubiertas) cápsulas, pastillas, supositorios, paquetes de polvos, sellos, soluciones o suspensiones inyectables y similares, y múltiples segregados de los mismos.

Los compuestos de fórmula I muestran actividad contra HCV y pueden usarse en el tratamiento y profilaxis de infección o enfermedades de HCV asociadas con HCV. Estas últimas incluyen fibrosis hepática progresiva, inflamación y necrosis que conduce a cirrosis, etapa final de la enfermedad hepática, y HCC. Se estima además que una cantidad de los compuestos de esta invención son activos contra cepas mutadas de HCV. Adicionalmente, muchos de los compuestos de esta invención muestran un perfil farmacocinético favorable y tienen propiedades atrayentes en términos de biodisponibilidad, incluyendo vida media aceptable, AUC (área bajo la curva) y valores pico, y carecen de fenómenos desfavorables tales como un inicio rápido insuficiente y retención de tejidos.

La actividad antiviral n vitro contra HCV de los compuestos de fórmula I puede ensayarse en un sistema replicón HCV celular basado en Lohmann et al. (1999) Science 285:1 10-113, con las modificaciones adicionales descritas por Krieger et al. (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624 (que se incorpora aquí como referencia), que está además ejemplificado en la sección de ejemplos. Este modelo, aunque no es un modelo de infección completa para HCV es ampliamente aceptado como el modelo más sólido y eficiente de la replicación autónoma de ARN de HCV corrientemente disponible. Se apreciará que es importante distinguir entre compuestos que interfieren específicamente con las funciones de aquellas que ejercen citotoxicidad o efectos citostáticos en el modelo replicón HCV, y como consecuencia causan una disminución del ARN de HCV o una concentración de enzima informante ligada. Se conocen ensayos en ese campo para la evaluación de la citotoxicidad celular en base al ejemplo sobre la actividad de las enzimas mitocondriales usando tintes redox fluorogénicos tales como resazurina. Además, existen tamices contra celulares para la evaluación de la inhibición no selectiva de la actividad génica informante ligada, tal como luciferasa de luciérnaga. Pueden equiparse tipos de células apropiadas por transfección estable con un gen informante de luciferasa cuya expresión depende de un promotor génico constitutivamente activo y donde dichas células pueden usarse como contra-tamiz para eliminar inhibidores no selectivos.

Debido a sus propiedades anti-virales, particularmente sus propiedades anti-HCV los compuestos de fórmula I, incluyendo cualquier estereoisómero posible, las sales de adición o solvatos de las mismas farmacéuticamente aceptables, son útiles en el tratamiento de animales de sangre caliente, en particular, seres humanos infectados con HCV y para la profilaxis de infecciones de HCV. La presente invención se refiere además a un método para el tratamiento de un animal de sangre caliente, particularmente un ser humano infectado con HCV o que corre el riesgo de sufrir infección de HCV donde dicho método comprende la administración de una cantidad eficaz anti-HCV de un compuesto de fórmula I tal como se especifica aquí.

Los compuestos de la presente invención pueden por lo tanto usarse como medicina, en particular, como una medicina anti-HCV. Dicho uso como medicina o método de tratamiento comprende la administración sistémica para sujetos infectados con HCV o sujetos susceptibles de infección con HCV de una cantidad eficaz para combatir las condiciones asociadas con infección de HCV.

La presente invención se refiere también al uso de los presentes compuestos en la manufactura de un medicamento para el tratamiento o la prevención de infección de HCV.

En general, se ha contemplado que una cantidad diaria antiviral eficaz sería de desde aproximadamente 0,01 hasta aproximadamente 700 mg/kg, o aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 400 mg/kg, o aproximadamente 1 hasta aproximadamente 250 mg/kg, o aproximadamente 2 hasta aproximadamente 200 mg/kg, o aproximadamente 10 hasta aproximadamente 150 mg/kg de peso corporal. Puede ser apropiado administrar la dosis requerida en forma de dos, tres, cuatro o más subdosis a intervalos apropiados durante todo el día. Dichas subdosis pueden ser formuladas como formas de dosificación unitaria, por ejemplo, que contienen aproximadamente 1 hasta aproximadamente 6000 mg, o aproximadamente 50 hasta aproximadamente 5000 mg, o aproximadamente 100 hasta aproximadamente 2000 mg, o aproximadamente 200 hasta aproximadamente 1000 mg, o aproximadamente 100 hasta aproximadamente 600 mg, o aproximadamente 200 hasta aproximadamente 500 mg de ingrediente activo por forma de dosificación unitaria.

La invención se refiere también a una combinación de un compuesto de fórmula I, una sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo y otro compuesto antiviral, en particular otro compuesto anti-HCV. El término "combinación" puede referirse a un producto que contiene a) un compuesto de fórmula I, tal como el especificado anteriormente, y (b) opcionalmente otro compuesto anti-HCV como preparación combinada para uso simultáneo separado o consecutivo en el tratamiento de infecciones de HCV.

Los compuestos anti-HCV que pueden usarse en dichas combinaciones incluyen inhibidores de polimerasa de HCV, inhibidores de proteasa de HCV, inhibidores de otros objetivos en el ciclo de vida de HCV y en agentes inmunomoduladores y combinaciones de los mismos. Los inhibidores de polimerasa de HCV incluyen, NM283 (valopicitabina), R803, JTK-109, JTK-003, HCV-37 , HCV-086, HCV-796 y R-1479, R-7128, MK-0608, VCH-759, PF-868554, GS9190, XTL-2125, NM-107, GSK625433, R-1626, BILB-1941 , ANA-598, IDX-184, IDX-375, MK-3281 , MK-1220, ABT-333, PSI-7851 , PSI-6130, VCH-916. Inhibidores de proteasas HCV (inhibidores NS2-NS3 e inhibidores NS3-NS4A) incluyen BILN-2061 , VX-950 (telaprevir), GS-9132 (ACH-806), SCH-503034 (boceprevir), TMC435350 (se refiere también como TMC435), TMC493706, ITMN-191 , MK-7009, Bl-12202, BILN-2065, BI-201335, BMS-605339, R-7227, VX-500, BMS650032, VBY-376, VX-813, SCH-6, PHX-1766, ACH-1625, IDX-136, IDX-316. Un ejemplo de un inhibidor NS5A de HCV es BMS790052, Los A-831 , A-689, NIM-81 1 y DEBIO-025 son ejemplos de inhibidores ciclofilina NS5B.

Inhibidores de otros objetivos en el ciclo de vida de HCV incluyen NS3 helicasa; inhibidores de metaloproteasa; inhibidores de oligonucleótidos de antisentido tales como ISIS-14803 y AVI-4065; siRNA's tales como SIRPLEX-140-N; ARN de horquilla corta codificado por vector (shRNA); DNAzimas; ribozimas específicas de HCV tales como heptazima, RPI.13919; inhibidores de entrada tales como HepeX-C, HuMax-HepC; inhibidores de alfa glucosidasa tales como celgosivir, UT-231 B y similares; KPE-02003002; y BIVN 401.

Los agentes inmunomoduladores incluyen compuestos de isoforma de interferón natural y recombinante, incluyendo a-interferon, ß-interferon, ?-interferon, y ?-interferon, tales como Intron A®, Roferon-A®, Canferon-A300®, Advaferon®, Infergen®, Humoferon®, Sumiferon MP®, Alfaferone®, IFN-beta®, y Feron®; compuestos de interferón polietilen glicol derivatizados (pegilados) tales como PEG interferon-a-2a (Pegasys®), PEG interferon-a-2b (PEG-Intron®), y IFN-a-con1 pegilado; formulación de acción prolongada y derivatizaciones de compuestos de interferón tales como interferón fusionado con albúmina albuferon a; compuestos que estimulan la síntesis de interferón en células, tales como resiquimod; interleucinas; compuestos que mejoran el desarrollo de la respuesta de célula T auxiliar de tipo 1 tales como SCV-07; agonistas del receptor de tipo TOLL tales como CpG-10101 (actilon), e isatoribina; timosina a-1 ; ANA-245; ANA-246; diclorhidrato de histamina; propagermanio; tetraclorodecaóxido; ampligen; IMP-321 ; KRN-7000; anticuerpos, tales como civacir y XTL-6865; y vacunas profilácticas y terapéuticas tales como InnoVac C y HCV E1 E2/MF59.

Otros agentes antivirales incluyen ribavirina, amantadina, viramidina, nitazoxanida; telbivudina; NOV-205; taribavirina; inhibidores de entrada de ribosoma interno; inhibidores virales de amplio espectro, tales como inhibidores IMPDH, y ácido micofenólico y derivados de los mismos, que incluyen pero no están limitados a VX- 97 (merimepodib), VX-148, y/o VX- 944); o combinaciones de cualquiera de los anteriores.

Agentes particulares para ser usados en dichas combinaciones - incluyen interferon-a (IFN-a), interferon-a pegilado o ribavirina, así como - también productos terapéuticos basados en anticuerpos dirigidos contra epitopos de HCV, ARN de pequeña interferencia (ARN Si) ribozimas, DNAzimas, ARN antisentido, antagonistas de moléculas pequeñas de por ejemplo proteasa NS3, helicasa NS3 y polimerasa NS5B.

En otro aspecto se proveen combinaciones de un compuesto de fórmula I tal como se especifica aquí y un compuesto anti-HIV. Estos últimos son preferiblemente los inhibidores de HIV que tienen un efecto positivo sobre el metabolismo de las drogas y/o farmacocinética que mejoran la biodisponibilidad. Un ejemplo de dicho inhibidor de HIV es ritonavir. Como tal, esta invención provee además una combinación que comprende (a) un compuesto de fórmula I o una sal o solvato de la misma farmacéuticamente aceptables; y (b) ritonavir o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

El compuesto ritonavir, sus sales farmacéuticamente aceptables y los métodos para su preparación se describen en WO 94/14436.

La invención se refiere también a un procedimiento para preparar una combinación tal como se describe aquí que comprende la etapa de combinar un compuesto de fórmula I tal como se especifica anteriormente y otro agente, tal como un antiviral, incluyendo un agente anti-HCV o anti-HIV, en particular aquellos mencionados anteriormente.

Dichas combinaciones pueden ser útiles en la manufactura de un medicamento para tratar infección de HCV en un mamífero infectado con la misma, comprendiendo dicha combinación en particular un compuesto de fórmula I tal como el especificado anteriormente e interferón- a (IFN-a), interferon-a pegilado, o ribavirina. La invención provee un método de tratamiento de un mamífero, en particular un ser humano infectado con HCV que comprende la administración a dicho mamífero de una cantidad eficaz de una combinación tal como la que se especifica aquí. En particular, dicho tratamiento comprende la administración sistémica de dicha combinación, y una cantidad que es eficaz en el tratamiento de las alteraciones clínicas asociadas con la infección de HCV.

En una modalidad las combinaciones antes mencionadas se formulan en forma de una composición farmacéutica que incluye los ingredientes activos descritos anteriormente y un portador tal como se describió anteriormente. Cada uno de los ingredientes activos puede formularse por separado y las formulaciones pueden ser co-administradas, o una formulación que contiene ambos y si se desea pueden proveerse otros ingredientes activos. En el primer caso, las combinaciones pueden formularse también como una preparación combinada para uso simultáneo separado o consecutivo en terapia para HCV. Dicha composición puede tener cualquiera de las formas descritas anteriormente. En una modalidad ambos ingredientes se formulan en una forma de dosificación tal como una combinación de dosis fija. En una modalidad particular la presente invención provee una composición farmacéutica que comprende (a) una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, que incluye una forma esteroisomérica posible del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo y (b) una cantidad terapéuticamente eficaz de ritonavir o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y (c) un portador.

Los componentes individuales de las combinaciones de la presente invención pueden administrarse por separado en tiempos diferentes durante el curso de la terapia o concurrentemente en formas de combinación dividida o únicas. La presente invención abarca todos dichos regímenes de tratamiento simultáneo o alternativo y el término "administrar" debe interpretarse de este modo. En una modalidad preferida las formas de dosificación separada son administradas simultáneamente.

En una modalidad, las combinaciones de la presente invención contienen una cantidad de ritonavir o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo que es suficiente para mejorar clínicamente la biodisponibilidad del compuesto de fórmula I con relación a la biodisponibilidad cuando dicho compuesto de fórmula I es administrado solo. O, las combinaciones de la presente invención contienen una cantidad de ritonavir o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo que es suficiente para aumentar por lo menos una de las variables farmacocinéticas del compuesto de fórmula I seleccionadas entre t-i/2, Cmin, Cma , Css, AUC a 12 horas, o AUC a las 24 horas, con relación a dicha por lo menos una variable farmacinética cuando el compuesto de fórmula I es administrado solo.

Las combinaciones de esta invención pueden administrarse a seres humanos en dosis específicas para cada componente comprendido en dichas combinaciones, por ejemplo, el compuesto de fórmula I especificado anteriormente y ritonavir o una sal farmacéuticamente aceptable, pueden tener niveles de dosificación dentro del rango de 0,02 a 10.0 g/día.

La relación en peso del compuesto de fórmula I a ritonavir puede estar en el rango de desde aproximadamente 30:1 hasta aproximadamente 1 :15, o aproximadamente 15: 1 hasta aproximadamente 1 : 10, o aproximadamente 15: 1 hasta aproximadamente 1 : 1 , o aproximadamente 10: 1 hasta aproximadamente 1 : 1 , o aproximadamente 8: 1 hasta aproximadamente 1 : 1 , o aproximadamente 5: 1 hasta aproximadamente 1 : 1 , o aproximadamente 3: 1 hasta aproximadamente 1 :1 , o aproximadamente 2:1 a 1 : 1. El compuesto de fórmula I y ritonavir pueden coadministrarse una o dos veces por día, preferiblemente oralmente, donde la cantidad del compuesto de fórmula I por dosis es tal como la que se ha descrito anteriormente, y la cantidad de ritonavir por dosis es de desde 1 hasta aproximadamente 2500 mg, o aproximadamente 50 hasta aproximadamente 1500 mg, o aproximadamente 100 hasta aproximadamente 800 mg, o aproximadamente 100 hasta aproximadamente 400 mg, o 40 hasta aproximadamente 100 mg de ritonavir.

EJEMPLOS Los ejemplos siguientes se dan para ilustrar la invención y no deben considerarse limitación de su alcance.

En cada caso, se provee el tiempo de retención (Rt (min)) y el m/z observado. Cuando se observa separación de los dos diaestereómeros en el LC-MS, se especifican dos tiempos de retención. Cuando en un compuesto no se da ningún indicador estereoquímico para el átomo fosforoso, ese compuesto es una mezcla de 1 :1 de los dos fosforoso-diastereómeros. En algunos casos la mezcla se separó pero sin conocimiento de la configuración estereoquímica exacta. Dichos compuestos fueron designados A y B y pueden caracterizarse por sus propiedades fisicoquímicas.

EJEMPLO 1 Síntesis del compuesto (1) A 1-naftol (1.0 eq., 69.4 mmol, 10.0 g) en éter dietílico (250 mi) se agregó oxicloruro fosforoso (1.0 eq., 69.4 mmol, 6.5 mi) y la solución se enfrió a -78°C. Se agregó A/,/\/-diisopropiletilamina seca (DIPEA; 1.0 eq., 69.4 mmol, 12.1 mi) y la solución resultante se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche. La suspensión blanca se filtró bajo atmósfera inerte y se removieron todos los volátiles para proporcionar A en forma de un líquido incoloro que se usó sin purificación adicional en la etapa siguiente.

Una solución de A (1.0 eq., 4.6 mmol, 1.0 g) y clorhidrato de éster bencílico de ácido 2-amíno-propiónico (1.0 eq., 4.6 mmol, 1.2 g) en CH2CI2 (40 mi) se enfrió hasta-80°C. Se agregó por goteo DIPEA seco (2.0 eq., 9.3 mmol, 1.6 mi). Después de 1 hora la reacción se calentó hasta temperatura ambiente. Se continuó la agitación durante 1 hora más y el solvente se removió bajo presión reducida. Se agregó éter dietilico seco y el precipitado se filtró y se lavó dos veces con éter dietilico seco bajo atmósfera de argón. El filtrado se evaporó hasta sequedad para proporcionar B el cual se almacenó en forma de una solución 0,97 M en tetrahidrofurano (THF) a -18°C.

A una solución de C (1.0 eq., 0.59 mmol, 150 mg) en THF seco (6 mi) se agregó í-ButilMgCI (1.5 eq., 0.89 mmol, 521 µ?, solución 1.7 M en THF) a temperatura ambiente. Se agregó por goteo una solución de B (1.4 eq., 0.83 mmol, 852 µ?, solución 0.97 M en THF) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas. Se agregaron 30 gotas de NH4CI acuoso saturado y la mezcla de reacción se evaporó sobre sílice, y luego se purificó por cromatografía en columna (0-5% de metanol en CH2CI2) para proporcionar 1 (74 mg, rendimiento = 19%, pureza = 96%) en forma de una mezcla de diaestereómeros. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.39-0.61 (m, 3 H) 1 .01-1.12 (m, 1 H) 1.18-1.33 (m, 3 H) 3.88-4.09 (m, 3 H) 4.16-4.31 (m, 1 H) 4.31-4.42 (m, 1 H) 4.96-5.16 (m, 2 H) 5.35-5.49 (m, 2 H) 5.95 (s, 1 H) 6.25-6.37 (m, 1 H) 7.26-7.35 (m, 5 H) 7.36-7.62 (m, 5 H) 7.74 (d, J = 8.02 Hz, 1 H) 7.95 (d, J = 7.82 Hz, 1 H) 8.1 1 (t, J = 7.92 Hz, 1 H) 1 1.31 (br, s, 1 H), LC-MS: R, = 2.21 min, m/z = 620 (M-H)-.

Los compuestos enumerados a continuación se prepararon usando un procedimiento similar al del ejemplo 1. Los compuestos se aislaron en forma de una mezcla de diaesteroisómeros. Para el compuesto (7), los diastereoisómeros se aislaron y ensayaron por separado.

Compuesto (2) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.47-0.62 (m, 3 H) 1.04-1.17 (m, 7 H) 1.24-1.34 (m, 3 H) 2.20 (s, 3 H) 3.12-3.25 (m, 1 H) 3.86-3.98 (m, 2 H) 3.99-4.07 (m, 1 H) 4.09-4.23 (m, 1 H) 4.24-4.35 (m, 1 H) 5.02-5.17 (m, 2 H) 5.36-5.46 (m, 1 H) 5.48-5.57 (m, 1 H) 5.92-5.99 (m, 1 H) 6.16-6.30 (m, 1 H) 7.23-7.39 (m, 7 H) 7.51-7.60 (m, 1 H) 1 1.31 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.64 min, m/z = 660 (M-H)~.

Compuesto (3) H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.47-0.62 (m, 3 H) 1.01- 1.09 (m, 1 H) 1.14 (d, 6 H) 1.17-1.24 (m, 3 H) 3.67-3.84 (m, 1 H) 3.85-3.96 (m, 1 H) 3.99-4.07 (m, 1 H) 4.09-4.23 (m, 1 H) 4.23-4.35 (m, 1 H) 4.78-4.89 (m, 1 H) 5.34-5.44 (m, 1 H) 5.51-5.59 (m, 1 H) 5.90-5.96 (m, 1 H) 5.96-6.07 (m, 1 H) 7.1 1-7.25 (m, 3 H) 7.31-7.40 (m, 2 H) 7.52-7.63 (m, 1 H) 11.31 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.24 min & 2.36 min, m/z = 522 (M-H)~.

Compuesto (4) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) d ppm 0.43-0.63 (m, 3 H) 1.00- 1.1 1 (m, 1 H) 1.31-1.46 (m, 6 H) 3.84-3.92 (m, 1 H) 3.96-4.06 (m, 1 H) 4.09- 4.20 (m, 1 H) 4.22-4.32 (m, 1 H) 5.06 (s, 2 H) 5.33-5.43 (m, 1 H) 5.47-5.56 (m, 1 H) 5.88-6.01 (m, 2 H) 7.10-7.23 (m, 3 H) 7.24-7.40 (m, 7 H) 7.46-7.60 (m, 1 H) 1 1.30 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.07 min, m/z = 584 (M-H)".

Compuesto (5) H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.44-0.67 (m, 3 H) 0.99-1.33 (m, 7 H) 3.74-3.97 (m, 2 H) 3.97-4.10 (m, 3 H) 4.10-4.24 (m, 1 H) 4.24-4.39 (m, 1 H) 5.32-5.45 (m, 1 H) 5.51-5.62 (m, 1 H) 5.88-5.98 (m, 1 H) 5.98-6.12 (m, 1 H) 7.1 1-7.27 (m, 3 H) 7.30-7.44 (m, 2 H) 7.52-7.66 (m, 1 H) 1 1.31 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.10 min & 2.23, m/z = 508 (M-H)-.

Compuesto (6) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.38-0.61 (m, 3 H) 1.01-1.12 (m, 1 H) 3.73-3.86 (m, 2 H) 3.90-3.98 (m, 1 H) 4.00-4.11 (m, 1 H) 4.23-4.33 (m, 1 H) 4.33-4.43 (m, 1 H) 5.09 (s, 2 H) 5.35-5.49 (m, 2 H) 5.96 (s, 1 H) 6.08-6.27 (m, 1 H) 7.22-7.61 (m, 9 H) 7.74 (d, J = 7.69 Hz, 1 H) 7.95 (d, J = 7.10 Hz, 1 H) 8.12 (d, J = 7.72 Hz, 1 H) 11.30 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.12 min, m/z = 606 (M-H)~ Compuesto (7) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.46-0.63 (m, 3 H) 1.01-1.13 (m, 1 H) 1.20-1.31 (m, 3 H) 3.84-3.98 (m, 2 H) 3.99-4.06 (m, 1 H) 4.10- .23 (m, 1 H) 4.24-4.34 (m, 1 H) 5.02-5.14 (m, 2 H) 5.35-5.44 (m, 1 H) 5.53- .61 (m, 1 H) 5.90-5.98 (m, 1 H) 6.11-6.24 (m, 1 H) 7.14-7.24 (m, 2 H) 7.28- .42 (m, 7 H) 7.52-7.61 (m, 1 H) 1 1.31 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.98 min & .07 min, m/z = 604 (M-H)".

Compuesto (7a) (isómero A) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.45-0.61 (m, 3 H); 1.01-1.15 (m, 1 H); 1.24 (d, J = 6.46 Hz, 3 H)¡ 3.82- 3.95 (m, 2 H); 3.96-4.07 (m, 1 H); 4.13-4.24 (m, 1 H); 4.24-4.34 (m, 1 H); 5.09 (s, 2 H)¡ 5.36-5.48 (m, 1 H); 5.58 (d, J = 7.63 Hz, 1 H); 5.95 (s, 1 H); 6.20 (t, J = 1 1.35 Hz, 1 H); 7.17 (d, J = 7.82 Hz, 2 H)¡ 7.29-7.43 (m, 7 H); 7.55 (d, J = 7.63 Hz, 1 H); 1 1.33 (br. s. , 1 H).

LC-MS: R, = 4.02 min, m/z = 604 (M-H)~.

Compuesto (7b) (isómero B) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) d ppm 1H RMN (400 MHz, DMSO- efe) d ppm 0.48-0.61 (m, 3 H); 1.02-1.13 (m, 1 H); 1.26 (d, J = 7.04 Hz, 3 H); 3.86-3.98 (m, 2 H); 3.99-4.05 (m, 1 H); 4.09-4.20 (m, 1 H); 4.24-4.32 (m, 1 H); 5.03-5.13 (m, 2 H); 5.34-5.44 (m, 1 H); 5.57 (d, J = 8.02 Hz, 1 H); 5.94 (s, 1 H); 6.18 (dd, J = 12.91 , 10.17 Hz, 1 H); 7.21 (d, J = 8.61 Hz, 2 H); 7.30-7.41 (m, 7 H); 7.57 (d, J = 8.22 Hz, 1 H); 1 1.32 (br. s., 1 H). LC-MS: Rt = 4.07 min, m/z = 604 (M-H)".

Compuesto (8) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.46-0.65 (m, 3 H) 1.02- 1.11 (m, 1 H) 1.14 (t, J = 7.05 Hz, 3 H) 1.18-1.32 (m, 3 H) 3.73-3.962 (m, 2 H) 3.97-4.09 (m, 3 H) 4.1 1-4.24 (m, 1 H) 4.24-4.36 (m, 1 H) 5.34-5.46 (m, 1 H) 5.53-5.62 (m, 1 H) 5.90-5.98 (m, 1 H) 6.05-6.18 (m, 1 H) 7.17-7.28 (m, 2 H) 7.43 (d, J = 8.80 Hz, 2 H) 7.54-7.62 (m, 1 H) 11.33 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.41 min & 2.51 min, m/z = 542 (M-H)~ Compuesto (9) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.41-0.64 (m, 3 H) 0.99-1.14 (m, 1 H) 1.16-1.33 (m, 3 H) 3.82-3.97 (m, 2 H) 4.02 (d, J = 5.28 Hz, 1 H) 4.08-4.23 (m, 1 H) 4.23-4.34 (m, 1 H) 5.01-5.15 (m, 2 H) 5.34-5.45 (m, 1 H) 5.56 (d, J = 8.02 Hz, 1 H) 5.95 (s, 1 H) 6.04-6.17 (m, 1 H) 7.19 (d, J = 7.43 Hz, 3 H) 7.26-7.41 (m, 7 H) 7.51-7.62 (m, 1 H) 11.31 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 1.98 min., m/z = 570 (M-H)-.

Compuesto (10) H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.43-0.66 (m, 3 H) 0.83 (d, J = 5.09 Hz, 6 H) 1.03-1.12 (m, 1 H) 1.12-1.34 (m, 1 1 H) 1.53-1.66 (m, 1 H) 3.76-4.09 (m, 5 H) 4.10-4.24 (m, 1 H) 4.24-4.36 (m, 1 H) 5.34-5.50 (m, 1 H) 5.56 (d, J = 7.63 Hz, 1 H) 5.92-5.98 (m, 1 H) 5.99-6.12 (m, 1 H) 7.14-7.24 (m, 3 H) 7.36 (t, J = 7.53 Hz, 2 H) 7.52-7.63 (m, 1 H) 1 .32 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.53 min, m/z = 594 (M+H)+.

Compuesto (11) H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.43-0.63 (m, 3 H) 0.86 (s, 9 H) 0.99-1.12 (m, 1 H) 1.19-1.32 (m, 3 H) 3.62-3.71 (m, 1 H) 3.72-3.80 (m, 1 H) 3.80-3.97 (m, 2 H) 4.02 (br. s., 1 H) 4.08-4.24 (m, 1 H) 4.24-4.37 (m, 1 H) 5.29-5.46 (m, 1 H) 5.55 (d, J = 7.43 Hz, 1 H) 5.94 (d, J = 7.24 Hz, 1 H) 6.00-6.13 (m, 1 H) 7.07-7.25 (m, 3 H) 7.35 (t, J = 7.73 Hz, 2 H) 7.49-7.66 (m, 1 H) 1 1.31 (br. s., 1 H). LC-MS: Rt = 2.08 min, m/z = 552 (M+H)+.

Compuesto (12) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) d ppm 0.46-0.63 (m, 3 H) 0.81- 0.90 (m, 3 H) 1.04-1.12 (m, 1 H) 1.17 -1.36 (m, 5 H) 1.45-1.56 (m, 2 H) 3.73-4.09 (m, 5 H) 4.10-4.24 (m, J = 1 1.32, 1 1.32, 5.66, 5.46 Hz, 1 H) 4.24- 4.36 (m, 1 H) 5.33-5.46 (m, 1 H) 5.52-5.60 (m, 1 H) 5.91-5.98 (m, 1 H) 5.98-6.09 (m, 1 H) 7.10-7.28 (m, 3 H) 7.29-7.43 (m, 2 H) 7.51-7.65 (m, 1 H) 1 1.29 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.63 min & 2.74, m/z = 538 (M+H)+.

Compuesto (13) 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 0.54-0.78 (m, 3 .85-0.98 (m, 6 H) 1.20-1.33 (m, 1 H) 1.33-1.48 (m, 3 H) 1.84-2.01 (m, J = 5, 6.68, 3.34, 3.34 Hz, 1 H) 3.64-4.52 (m, 9 H) 5.52-5.78 (m, 1 H) 5.99- (m, 1 H) 7.14-7.59 (m, 6 H) 8.64 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.57 min & min, m/z = 536 (M-H)~.

Compuesto (14) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 1 1.25-11.38 (1 H, m) 7.54- (1 H, m) 7.32-7.42 (2 H, m) 7.14-7.25 (3 H, m) 5.97-6.06 (1 H, m) 5.92- (1 H, m) 5.53-5.60 (1 H, m) 5.36-5.44 (1 H, m) 4.98-5.07 (1 H, m) 4.25- (1 H, m) 4.09-4.25 (1 H, m) 4.00-4.09 (1 H, m) 3.87-3.98 (1 H, m) 3.67- (1 H, m) 1.70-1.88 (2 H, m) 1.44-1.69 (6 H, m) 1.16-1.27 (3 H, m) 1.02- (1 H, m) 0.46-0.64 (3 H, m). LC-MS: R, = 2.65 min & 2.76 min, m/z = (M-H)-.

Compuesto (15) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.42-0.62 (m, 3 H) 0.74- 0.86 (m, 3 H) 1.02-1.10 (m, 1 H) 1.1 1-1.32 (m, 5 H) 1 .34-1.52 (m, 2 H) 3.80- .01 (m, 4 H) 4.06 (t, J = 6.36 Hz, 1 H) 4.16-4.32 (m, 1 H) 4.32-4.42 (m, 1 H) 5.38 (d, J = 5.48 Hz, 1 H) 5.40-5.51 (m, 1 H) 5.95 (s, 1 H) 6.14-6.35 (m, 1 H) 7.40-7.63 (m, 5 H) 7.74 (d, J = 5.67 Hz, 1 H) 7.95 (d, J = 6.06 Hz, 1 H) 8.05- 8.18 (m, 1 H) 1 1.30 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.19 min, m/z = 588 ( +H)+.

Compuesto (16) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.43-0.64 (m, 3 H) 1 .02- 1.1 1 (m, 1 H) 1.19-1.30 (m, 3 H) 1.62 (s,9 H) 3.86-3.99 (m, 2 H) 4.03 (t, J = 6.05 Hz, 1 H) 4.1 1-4.24 (m, 1 H) 4.25-4.35 (m, 1 H) 5.04-5.13 (m, 2H) 5.33- 5.42 (m, 1 H) 5.48-5.56 (m, 1 H) 5.93-5.99 (m, 1 H) 6.00-6.13 (m, 1 H) 6.66 (d, J = 2.93 Hz, 1 H) 7.09-7.21 (m, 1 H) 7.23-7.36 (m, 5 H) 7.40-7.47 (m, 1 H) 1 H) 7.69 (d, J = 2.93 Hz, 1 H) 7.97 (d, J = 8.20 Hz, 1 H) 1 1.28 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 3.54 n, m/z = 71 1 (M+H)+.

Compuesto ( 7) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.42-0.66 (m, 3 H) 0.95- 2.76-2.87 (m, 1 H) 2.87 -3.01 (m, 1 H) 3.76-4.14 (m, 7 H) 5.32- 5.50-5.57 (m, 1 H) 5.91-6.01 (m, 1 H) 6.09-6.27 (m,1 H) 7.00-7.1 1-7.35 (m, 8 H) 7.46-7.56 (m, 1 H) 1 1.30 (br. s., 1 H). LC-MS: & 2.78 min, m/z = 586 (M+H)+.

Compuesto (18) H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.46-0.63 (m, 3 H) 1.02- 1.17-1.28 (m, 3 H) 1.30 -1.43 (m, 2 H) 1.47-1.60 (m, 2 H) 1.94- 2.07 (m, 2 H) 3.75 (s, 3 H) 3.79-4.09 (m, 5 H) 4.09-4.24 (m, 1 H) 4.25-4.37 (m, 1 H) 4.88-5.14 (m, 4 H) 5.33-5.44 (m, 1 H) 5.55 (d, J = 8.00 Hz, 1 H) 5.67-5.80 (m, 1 H) 5.80-5.90 (m, 1 H) 5.89-6.03 (m, 2 H) 6.64-6.74 (m, 1 H) 6.84-6.94 (m, 1 H) 7.13-7.23 (m, 1 H) 7.54 -7.65 (m, 1 H) 1 1.31 (br. s., 1 H) . LC-MS: R, = 3.44 min & 3.51 min, m/z = 634 (M+H)+.

Compuesto (19) H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.41-0.62 (m, 3 H) 1 .00- 1.1 1 (m, 1 H) 1.23 (s, 12 H) 3.81-3.96 (m, 2 H) 3.96-4.05 (m, 1 H) 4.06-4.20 (m, 1 H) 4.20-4.31 (m, 1 H) 5.00-5.12 (m, 2 H) 5.31-5.42 (m, 1 H) 5.52 (d, J = 8.02 Hz, 1 H) 5.93 (s, 1 H) 5.98-6.11 (m, 1 H) 7.00-7.12 (m, 2 H) 7.25-7.38 (m, 7 H) 7.46-7.61 (m, 1 H) 1 1.29 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.44 min, m/z = 628 (M+H)+.

Compuesto (20) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.40-0.62 (m, 3 H) 1.01-1.10 (m, 1 H) 1.19-1.30 (m, 3 H) 3.84-3.96 (m, 2 H) 3.99-4.06 (m, 1 H) 4.08-4.22 (m, 1 H) 4.22-4.33 (m, 1 H) 5.00-5.12 (m, 2 H) 5.39 (br. s., 1 H) 5.45-5.52 (m, 1 H) 5.91 -6.02 (m, 2 H) 6.37 (s, 1 H) 6.92 (t, J = 10.37 Hz, 1 H) 7.27-7.41 (m, 8 H) 7.44-7.61 (m, 1 H) 1 1.12 (br. s., 1 H) 1 1.29 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 1.89 min, m/z = 61 1 (M+H)+.

Compuesto (21 ) H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.43-0.63 (m, 3 H) 0.71-0.85 (m, 3 H) 1.01-1.14 (m, 1 H) 1.48 -1.73 (m, 2 H) 3.64-3.80 (m, 1 H) 3.85-3.97 (m, 1 H) 3.97-4.07 (m, 1 H) 4.07-4.23 (m, 1 H) 4.24-4.34 (m,1 H) 5.01-5.16 (m, 2 H) 5.32-5.46 (m, 1 H) 5.50-5.60 (m, 1 H) 5.93-5.98 (m, 1 H) 6.00-6.1 1 (m, 1 H) 7.08-7.24 (m, 3 H) 7.26-7.43 (m, 7 H) 7.50-7.62 (m, 1 H) 11 .30 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.83 min & 2.94 min, m/z = 586 (M+H)+.

Compuesto (22) H RMN (400 Hz, DMSO-d6) d ppm 0.45-0.63 (m, 3 H) 1.02-1.18 (m, 7 H) 1.29 (d, J = 6.06 Hz, 3 H) 2.20 (s, 3 H) 3.12-3.28 (m, 1 H) 3.85-3.98 (m, 2 H) 3.99-4.09 (m, 1 H) 4.09-4.23 (m, 1 H) 4.23-4.34 (m, 1 H) 5.02-5.16 (m, 2 H) 5.35-5.45 (m, 1 H) 5.45-5.55 (m, 1 H) 5.92-6.02 (m, 1 H) 6.08-6.24 (m, 1 H) 6.93 (d, J = 7.63 Hz, 1 H) 7.10-7.21 (m, 2 H) 7.34 (br. s. , 5 H) 7.50-7.63 (m, 1 H) 11.32 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.40 min, m/z = 628 (M+H)+.

Compuesto (23) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.46-0.63 (m, 3 H) 0.85 (t, J = 6.65 Hz, 3 H) 1.04-1.12 (m, 1 H) 1.15-1.32 (m, 13 H) 1.44-1.56 (m, 2 H) 3.73-4.08 (m, 5 H) 4.10-4.24 (m, 1 H) 4.24-4.36 (m, 1 H) 5.35-5.45 (m, 1 H) 5.55-5.63 (m, 1 H) 5.92-5.98 (m, 1 H) 6.05-6.20 (m, 1 H) 7.17-7.27 (m, 2 H) 7.43 (d, J = 8.80 Hz, 2 H) 7.55-7.62 (m, 1 H) 11.32 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 3.72 min, m/z = 626 (M-H)+~.

Compuesto (24) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.46-0.65 (m, 3 H) 0.81 (t, J = 7.40 Hz, 3 H) 1.02-1.17 (m, 4 H) 1.17- 1.31 (m, 3 H) 1.49 (dq, J = 7.28, 7.1 1 Hz, 2 H) 3.67-3.87 (m, 1 H) 3.87-3.99 (m, 1 H) 3.99-4.10 (m, 1 H)4.10-4.24 (m, 1 H) 4.24-4.37 (m, 1 H) 4.63-4.81 (m, 1 H) 5.32-5.44 (m, 1 H) 5.50-5.62 (m, 1 H) 5.90 -5.97 (m, 1 H) 5.97-6.07 (m, 1 H) 7.12-7.25 (m, 3 H) 7.32-7.41 (m, 2 H) 7.54-7.62 (m, 1 H) 1 1.30 (s, 1 H). LC-MS: R, = 2.58 min & 2.69 min, m/z = 536 (M-H)-.

Compuesto (25) H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.45-0.63 (m, 3 H) 1.04-1.09 (m, 1 H) 1.10-1.17 (m, 6 H) 1.22-1.33 (m, 3 H) 2.09-2.21 (m, 3 H) 2.78 (spt, J = 6.91 Hz, 1 H) 3.84-3.97 (m, 2 H) 3.98-4.07 (m, 1 H) 4.09-4.24 (m, 1 H) 4.24-4.34 (m, 1 H) 5.03-5.16 (m, 2 H) 5.34-5.45 (m, 1 H) 5.48-5.57 (m, 1 H) 5.92-6.00 (m, 1 H) 6.07-6.17 (m, 1 H) 6.93 (d, J = 7.82 Hz, 1 H) 7.12 (d, J = 7.82 Hz, 1 H) 7.15 (s, 1 H) 7.27-7.39 (m, 5 H) 7.58 (d, J = 8.02 Hz, 1 H) 11 .30 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.44 min, m/z = 628 ( +H)+.

Compuesto (26) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) d ppm 1 1.27-1 1.35 (1 H, m) 7.51-7.64 (1 H, m) 7.39-7.48 (2 H, m) 7.17-7.28 (1 H, m) 6.27-6.38 (1 H, m) 5.90-5.97 (1 H, m) 5.53-5.60 (1 H, m) 5.34-5.42 (1 H, m) 4.26-4.38 (1 H, m) 4.14-4.26 (1 H, m) 3.97 -4.12 (3 H, m) 3.85-3.96 (1 H, m) 2.34-2.44 (2 H, m) 2.17-2.28 (1 H, m) 2.05-2.17 (1 H, m) 1.67-1.88 (2 H, m) 1.11-1.19 (3 H, m) 1.04- 0.46-0.64 (3 H, m). LC-MS: R, = 2.57 min, m/z = 568 (M-H)".

Compuesto (27) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 1 1.27-1 1.36 (1 H, m) 7.50- 7.30-7.43 (2 H, m) 7.12-7.25 (3 H, m) 5.86-5.98 (2 H, m) 5.50- 5.36-5.45 (1 H, m) 4.24-4.36 (1 H, m) 4.14-4.24 (1 H, m) 3.98- 3.87-3.97 (1 H, m) 3.52-3.60 (3 H, m) 1.28-1.42 (6 H, m) 1 .02-0.45-0.64 (3 H, m). LC-MS: R, = 1.57 min, m/z = 510 (M+H)+.

Compuesto (28) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) d ppm 1 1.17-11.41 (1 H, m) 7.48-) 7.30-7.41 (2 H, m) 7.12-7.26 (3 H, m) 5.91-5.96 (1 H, m) 5.74-) 5.49-5.57 (1 H, m) 5.32-5.41 (1 H, m) 4.77-4.90 (1 H, m) 4.26-) 4.14-4.25 (1 H, m) 3.99-4.10 (1 H, m) 3.87-3.95 (1 H, m) 1.28-) 1.1 1 -1.20 (6 H, m) 1.04-1.10 (1 H, m) 0.45-0.63 (3 H, m). LC- MS: R, = 2.41 min, m/z = 536 (M-H)~.

Compuesto (29) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 1 1.24-1 1 .38 (1 H, m) 7.49-7.65 (1 H, m) 7.29-7.41 (2 H, m) 7.11-7.23 (3 H, m) 6.41-6.56 (1 H, m) 5.90-5.97 (1 H, m) 5.51-5.60 (1 H, m) 5.34-5.44 (1 H, m) 4.26-4.38 (1 H, m) 4.15-4.26 (1 H, m) 3.95-4.08 (3 H, m) 3.87-3.95 (1 H, m) 1.19-1.33 (2 H, m) 1.02-1 .17 (5 H, m) 0.92-1.02 (1 H, m) 0.45-0.63 (3 H, m). LC-MS: R, = 1.59 min, m/z = 522 (M+H)+.

Compuesto (30) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 1 1.23-1 1.38 (1 H, m) 7.53- 7.64 (1 H, m) 7.29-7.43 (2 H, m) 7.11-7.26 (3 H, m) 5.85-6.01 (2 H, m) 5.50-5.62 (1 H, m) 5.34-5.46 (1 H, m) 4.25-4.38 (1 H, m) 4.09-4.25 (1 H, m) 3.99-4.09 (1 H, m) 3.86-3.98 (1 H, m) 3.59-3.77 (1 H, m) 1.30-1.43 (9 H, m) 1.14-1.28 (3 H, m) 1.00-1.13 (1 H, m) 0.44-0.64 (3 H, m). LC-MS: R, m/z = 538 (M+H)+.

Compuesto (31) H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 11.19- 1.38 (1 H, m) 7.52-7.63 (1 H, m) 7.30-7.41 (2 H, m) 7.12-7.24 (3 H, m) 5.90-6.01 (2 H, m) 5.52-5.60 (1 H, m) 5.33-5.43 (1 H, m) 4.79-4.92 (1 H, m) 4.24-4.35 (1 H, m) 4.09-4.24 (1 H, m) 3.99-4.08 (1 H, m) 3.85-3.97 (1 H, m) 3.51-3.67 (1 H, m) 1.45-1.71 (2 H, m) 1.10-1.19 (6 H, m) 1.03-1.10 (1 H, m) 0.75-0.84 (3 H, m) 0.47-0.62 (3 H, m). LC-MS: R, = 2.36 min & 2.46 min, m/z = 536 (M-H)~.

Compuesto (32) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 1 1.21-1 1.40 (1 H, m) 7.49-7.66 (1 H, m) 7.30-7.43 (2 H, m) 7.12-7.25 (3 H, m) 6.21-6.31 (1 H, m) 5.90-5.98 (1 H, m) 5.50-5.59 (1 H, m) 5.36-5.44 (1 H, m) 4.26-4.37 (1 H, m) 4.15- .26 (1 H, m) 3.98-4.11 (3 H, m) 3.88-3.97 (1 H, m) 2.32-2.45 (2 H, m) 2.17- .29 (1 H, m) 2.04-2.18 (1 H, m) 1.67-1.88 (2 H, m) 1.1 1-1.21 (3 H, m) 1.01- 1.1 (1 H, m) 0.45-0.65 (3 H, m). LC-MS: Rt = 1.76 min, m/z = 536 (M+H)+.

Compuesto (33) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.45-0.65 (m, 3 H) 0.93- 1.04 (m, 1 H) 1.04-1.17 (m, 5 H) 1.21 -1.35 (m, 2 H) 3.86-3.95 (m, 1 H) 3.95- 4.09 (m, 3 H) 4.16-4.26 (m, 1 H) 4.27-4.38 (m, 1 H) 5.35-5.43 (m,1 H) 5.54- 5.62 (m, 1 H) 5.94 (s, 1 H) 6.50-6.64 (m, 1 H) 7.17-7.26 (m, 2 H) 7.38-7.47 (m, 2 H) 7.50 -7.63 (m, 1 H) 11.31 (s, 1 H). LC-MS: R, = 2.29 min, m/z = 554 (M- H)~. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) d ppm 0.44-0.65 (m, 3 H) 1.01- 1.13 (m, 1 H) 1.18-1.33 (m, 6 H) 3.84 -4.08 (m, 3 H) 4.12-4.37 (m, 4 H) 4.99-5.16 (m, 2 H) 5.31-5.43 (m, 1 H) 5.50-5.61 (m, 1 H) 5.91-6.00 (m,1 H) 6.00- 6.17 (m, 1 H) 7.21-7.40 (m, 6 H) 7.40-7.50 (m, 1 H) 7.50-7.63 (m, 2 H) 7.69-7.83 (m, 1 H)11.29 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 2.96 min, m/z = 644 ( +H)+.

EJEMPLO 2 Se preparó el Compuesto (F), el análogo yodado de (C) usando el procedimiento siguiente.

A una solución de (D) (1.44 g, 2.9 mmol) en DMF seco (30 mL) se agregó a temperatura ambiente N-yodosuccinimida (1.63 g, 7.25 mmol, 2.5 eq). La mezcla de reacción se calentó a 110°C y se agitó a esa temperatura durante la noche. Después de enfriar a temperatura ambiente, la reacción se apagó mediante adición de una solución de 7,5% p/v de NaHS03 en una solución saturada de NaHC03. La mezcla fue diluida adicionalmente con una solución saturada de NaHC03 (250 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 200 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtraron y se concentraron para proporcionar un aceite de color amarillo. La purificación por cromatografía en columna (heptano/acetato de etilo gradiente de 10 a 30%) proporcionó (E) en forma de un sólido blanco (1.44 g, 80%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.54 (dt, J = 10.05, 5.12 Hz, 1 H) 0.62-0.70 (m, 1 H) 0.76 (dt, J = 10.05, 5.12 Hz, 1 H) 0.87-1.14 (m, 29 H) 3.74-3.82 (m, 1 H) 3.96 (dd, J = 12.88, 2.34 Hz, 1 H) 4.09 (dd, J = 12.88, 3.90 Hz, 1 H) 4.53 (d, J = 7.80 Hz, 1 H) 5.73 (s, 1 H) 7.89 (s, 1 H) 1 1.73 (s, 1 H) LC-MS: R, = 8.94 min, m/z = 645 (M+Na)+.

A una suspensión de (E) (1.24 g, 1.99 mmol) en metanol (20 mL) se agregó a temperatura ambiente fluoruro de amonio (369 mg, 5 eq). La mezcla de reacción se calentó a 50°C bajo argón y se agitó durante 7 horas. Después de concentración de la mezcla el residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/rnetanol) gradiente 2,5 a 10%). Esto proporcionó (F) en forma de un sólido blanco (711 mg, 92%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cf6) d ppm 0.50-0.65 (m, 3 H) .05 (t, J = 5.95 Hz, 1 H) 3.56-3.67 (m, 1 H) 3.70-3.80 (m, 2 H) 4.05-4.15 (m, 1 H) 5.13-5.27 (m, 2 H) 5.85 (s, 1 H) 8.44 (s, 1 H) 1 1.65 (br. s., 1 H) LC-MS: R, = 1.32 min, m/z = 403 (M+Na)+.

EJEMPLO 3 Síntesis de fosforamidatos (35-38) (35) R =Me. R^Bn Bn = bencilo (36) R =£t. R2=Bn (37) R 1=Me. R^Et (38) R 1=Me, R^iPr (F) (120 mg, 0.316 mmol), pre-secado por co-evaporación con piridina se disolvió en N-metilimidazol (0.3 mL, 3.79 mmol, 12 eq) y diclorometano seco (3,2 mL) se agregó bajo argón una solución ~1 M del fosforamidoclorhidrato apropiado (1.2 eq). La reacción se agitó durante 3 horas. Si se requiere se agrega reactivo extra. Después de consumo completo del material de partida, la mezcla de reacción se diluyó con diclorometano y se lavó con una solución acuosa de HCI 0,5M. La capa acuosa se extrajo con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se secaron ( a2SO4), se filtraron y concentraron. El residuo se purificó por cromatografía en columna (diclorometano/metanol gradiente de 1 a 10%) para proporcionar los productos 36-39 en forma de sólidos blancos (rendimiento 68-77%).

Compuesto (35) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.50-0.62 (m, 3 H) 1.01-1.1 1 (m, 1 H) 1.19-1.31 (m, 3 H) 3.84-4.00 (m, 2 H) 4.01-4.09 (m, 1 H) 4.1 1-4.33 (m, 2 H) 5.02-5.14 (m, 2 H) 5.29-5.41 (m, 1 H) 5.83-5.95 (m, 1 H) 6.00-6.14 (m, 1 H) 7.1 -7.23 (m, 3 H) 7.26-7.40 (m, 7 H) 7.93 (s, 1 H) 11.69 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 5.27 min, m/z = 698 (M+H)+.

Compuesto (36) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.44-0.64 (m, 3 H) 0.70-0.86 (m, 3 H) 1.00-1.12 (m, 1 H) 1.46-1.73 (m, 2 H) 3.67-3.82 (m, 1 H) 3.84-3.98 (m, 1 H) 4.00-4.10 (m, 1 H) 4.10-4.36 (m, 2 H) 4.98-5.15 (m, 2 H) 5.27-5.40 (m, 1 H) 5.83-5.94 (m, 1 H) 5.94-6.07 (m, 1 H) 7.09-7.24 (m, 3 H) 7.26-7.43 (m, 7 H) 7.87-7.99 (m, 1 H) 11.69 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 5.58 min, m/z = 712 (M+H)+.

Compuesto (37) H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) d ppm 0.48-0.64 (m, 3 H) 1 .02-1.1 1 (m, 1 H) 1.14 (t, J = 6.93 Hz, 3 H) 1.18-1.30 (m, 3 H) 3.74-3.86 (m, 1 H) 3.86-3.97 (m, 1 H) 3.98-4.10 (m, 3 H) 4.1 1-4.37 (m, 2 H) 5.27-5.42 (m, 1 H) 5.84-5.92 (m, 1 H) 5.93-6.06 (m, 1 H) 7.1 1-7.27 (m, 3 H) 7.31-7.42 (m, 2 H) 7.93 (s, 1 H) 11.70 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 4.24 min, m/z = 653 (M+ NH4)+.

Compuesto (38) 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) d ppm 0.49-0.63 (m, 3 H) 1.02-1.10 (m, 1 H) 1.15 (d, J = 5.07 Hz, 6 H) 1.18-1.25 (m, 3 H) 3.70-3.84 (m, 1 H) 3.86-3.97 (m, 1 H) 4.02-4.10 (m, 1 H) 4.12-4.34 (m, 2 H) 4.78-4.90 (m, 1 H) 5.29-5.40 (m, 1 H) 5.85-5.91 (m, 1 H) 5.91-5.99 (m, 1 H) 7.12-7.24 (m, 3 H) 7.31-7.40 (m, 2 H) 7.93 (s, 1 H) 11.70 (br. s., 1 H). LC-MS: R, = 4.74 min, m/z = 667 (M+NH4)+.

EJEMPLOS BIOLÓGICOS Ensayo de Replicón Los compuestos de fórmula I se examinaron para determinar la actividad en la inhibición de la replicación de ARN de HCV en un ensayo celular destinado a identificar compuestos que inhiben una línea de células replicantes celulares funcionales de HCV, que se conoce también como replicones HCV. El ensayo celular se basó en una construcción de expresión bicistrónica tal como ha sido descrita por Lohmann et al. (1999), Science vol. 285 pp. 1 10-113 con modificaciones descritas por Krieger et al. (2001), Journal of Virology 75: 4614-4624, en una estrategia de rastreo de multi-objetivo.

El ensayo utilizó la línea celular establemente transfectada Huh-7 luc/neo (a la que nos referiremos a continuación como Huh-Luc). Esta línea de células contiene un ARN que codifica una construcción de expresión bicistrónica que comprende las regiones NS3-NS5B de tipo salvaje de HCV de tipo 1 b traducidas a partir de un Sitio Internal Ribosome Entry Site (IRES) de virus de encafalomiocarditis (EMCV), precedido por una porción informante (FfL-luciferasa), y una porción marcadora seleccionare (neoR, neomicina fosfotransferasa). La construcción está limitada por NTRs 5' y 3' (regiones no traducidas) de HCV de tipo 1b. El cultivo continuado de células replicón en presencia de G418 (neoR) depende de la replicación del ARN de HCV. La células replicón transfectadas establemente que expresan ARN de HCV, que se replican autonómicamente y hasta niveles elevados, codifican entre otras cosas luciferasa que se usa para el rastreo de compuestos antivirales..

Las células replicón fueron depositadas en placas de 384 receptáculos en presencia de los compuestos de ensayo y de control, los cuales se agregaron en varias concentraciones. Después de una incubación de 3 días, se midió la replicación de HCV ensayando la actividad de luciferasa (usando sustratos y reactivos de ensayo de luciferasa standard) y un formador de imágenes de microplacas Perkin Elmer ViewLux™ ultraHTS). Las células replicón en los cultivos de control tienen elevada expresión de luciferasa en ausencia de cualquier inhibidor. La actividad inhibidora del compuesto en la actividad de luciferasa fue monitoreada en las células Huh-Luc, lo cual permitió una curva de respuesta a la dosis para cada compuesto de ensayo. Luego se calcularon los valores de CE50, que son valores que representan la cantidad de compuesto requerida para disminuir el nivel de actividad de luciferasa detectada en un 50%, o más específicamente, la capacidad de replicarse del ARN replicón de HCV genéticamente ligado.

Toxicidad Celular Se determinó la toxicidad celular en el ensayo de replicón Huh7-CMV-Luc. Las células replicón (2500 células/receptáculo), transformadas establemente con un gen informante de luciferasa bajo el control del promotor constitutivo de citomegalovirus (CMV), se cultivaron en presencia o en ausencia de las concentraciones de compuesto de ensayo. Después de tres días de incubación a 37°C en una atmósfera de CO2 humidificada al 5%, se cuantificó la proliferación de células midiendo la actividad Luc, y se expresó como valores CC50 (citotoxicidad, concentración inhibidora del crecimiento de células de 50%). Los ensayos se llevaron a cabo en placas de 384 receptáculos.

Ensayo de HIV Los compuestos de la invención se ensayaron para determinar su potencia contra el virus de inmunodeficiencia humana de tipo salvaje (HIV). Se evaluó la actividad antiviral usando un ensayo celular llevado a cabo de acuerdo con el procedimiento siguiente. La línea de célula T humana MT4 fue manipulada por ingeniería genética con Green Fluorescent Protein (GFP) y un promotor específico de HIV, una repetición terminal larga de HIV-1 (LTR). Esta línea de célula, designada MT4 LTR-EGFP, puede usarse para la evaluación in vitro de la actividad anti-HIV de los compuestos investigados.

En las células infectadas con HIV-1 , se produjo la proteína Tat, la cual hiperregula al promotor LTR y eventualmente conduce a la estimulación de la producción informante GFP, lo cual permite medir fluorometricamente la infección de HIV que se está produciendo. Los valores de concentración eficaz tales como concentración eficaz 50% (EC50) pueden determinarse y usualmente se expresan en µ?. Un valor EC50 se define como la concentración del compuesto de ensayo que reduce la fluorescencia de células infectadas con HIV en un 50%. El monitoreo de la infección HIV-1 se efectuó usando un microscopio escaneador. El análisis de imágenes permite una detección muy sensible de la infección viral. Las mediciones se llevaron a cabo antes de la necrosis de células que usualmente ocurre aproximadamente 5 días después de la infección. En particular, las mediciones se llevaron a cabo tres días después de la infección. La columna IIIB en el cuadro enumera los valores EC5o contra la cepa IIIB de tipo salvaje.

Los resultados en la tabla siguiente ¡lustran que los compuestos de la presente invención muestran actividad contra HCV, al mismo tiempo que carecen de actividad contra HIV. Muestran resultados favorables en términos de toxicidad y tienen un índice de selectividad aceptable (relación entre ECso y CC50).

Resultados El cuadro 1 muestra los resultados de replicón (CE50, replicón) y los resultados de citotoxicidad (CC50 (µ?) (Huh-7) obtenidos para los compuestos de los ejemplos proporcionados anteriormente. Se da también la actividad de HIV (EC50 HIV (µ?)) y la toxicidad celular en la línea de célula HIV (CC50 (µ?)) (MT-4)).

CUADRO 1 "-"significa que el resultado de ensayo no está disponible.

Claims (15)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto de fórmula I: que incluye cualquier estereoisómero posible del mismo, donde: R es hidrógeno o halo; R4 es un éster de monofosfato, difosfato o trifosfato, o R4 es un grupo de fórmula R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 , 2, o con 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente entre halo, alquilo C-i-C6, alquenilo C3-C6, alcoxi C^Ce, alcoxicarbonilo C1-C6, hidroxi, y amino; o R7 es naftilo; o R7 es indolilo o ?— alquiloxt— C-1-C6 carbonilindolilo; R8 es hidrógeno, alquilo C-i-C6, bencilo; R8 es hidrógeno, alquilo C1-C6, bencilo; o R8 y R8 conjuntamente con el átomo de carbono al cual están unidos forman cicloalquilo C3-C7; R9 es alquilo C1-C10, cicloalquilo C3-C7, bencilo, o fenilo, donde el fenilo puede estar opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes cada uno independientemente seleccionado entre hidroxi, alcoxi Ci-C6, amino, mono- y dialquilamino Ci-C6; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R4 es un grupo de fórmula

3. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-2, caracterizado además porque R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente entre halo, alquilo C1-C6, alquenilo C3-C6, y alcoxi C -C6; ó R7 es naftilo.

4 - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-2, caracterizado además porque R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente entre halo y alquilo C1-C6.

5. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-2, caracterizado además porque R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con halo, o alquilo Ci-C6, o R7 es naftilo.

6. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado además porque R8 es hidrógeno y R8 es hidrógeno o alquilo C1-C6.

7. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado además porque donde R8 es hidrógeno y R8 es hidrógeno, alquilo C--Cs, bencilo.

8. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque R8 es hidrógeno y R8 es alquilo Ci-C2.

9. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque R8 es hidrógeno y R8 es metilo.

10. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -9, caracterizado además porque R9 es alquilo C -I-C-IO, cicloalquilo C3-C7, alquenilo C3-C6, o bencilo.

1 1 . - El compuesto de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque R9 es alquilo Ci-C8, o bencilo.

12. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque R9 es metilo, etilo, isopropilo, 1-metil-propilo, isobutilo, butilo, t-butilo, bencilo, ciclopentilo, 5-hexenilo, 2,2-dimetil-butilo, octilo o 2— propil— pentilo.

13.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque R9 es etilo, isobutilo, butilo, bencilo, ciclopentilo, 5-hexenilo, 2,2-dimetil-butilo, o 2— propil— pentilo.

14.- Una composición farmacéutica que comprende una cantidad anti-viralmente eficaz de un compuesto de fórmula I tal como se definió en cualquiera de las reivindicaciones 1-13 y un portador farmacéuticamente aceptable.

15 - El uso de un compuesto como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en la preparación de un medicamento para inhibir HCV.