MX2011000134A - Vacuna contra el intermediario de plegamiento amiloide. - Google Patents

Abstract

La invención concierne a una vacuna mejorada para tratar la enfermedad de Alzheimer.

Description

VACUNA CONTRA EL INTERMEDIARIO DE PLEGAMIENTO AMILOIDE CAMPO DE LA INVENCION La invención concierne a una vacuna mejorada que puede ser usada para tratar la enfermedad de Alzheimer.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION La Organización Mundial de la Salud estimó que 18 millones de personas sufren de la enfermedad de Alzheimer mundialmente (Vas y colaboradores 20019. En los Países Bajos, aproximadamente 250,000 personas tienen la enfermedad de Alzheimer. El problema está en expansión con la edad promedio creciente de la población. El costo del cuidado para un paciente en una hogar para ancianos se estimó en € 30,000 -60,000 por año (Me Donnell y colaboradores, 2001). La vacunación sería efectiva en costo.

La enfermedad de Alzheimer es un trastorno neurodegenerativo conformacional (Sadowsky & Wisniewski 2004, Blennow y colaboradores, 2006, Editorials Nature Med. 2006) . Una característica de la enfermedad es la formación de placas en el cerebro o en los vasos sanguíneos cerebrales. Estas placas se originan de una proteína enlazada a la membrana neuronal, la proteína precursora de amiloide. Un fragmento a-helicoidal de 38-43 (típicamente 42) residuos de aminoácidos es fragmentada enzimáticamente a partir de la proteína, formando así un péptido denominado "?ß soluble", igualmente ß adopta primero una conformación extendida y está presente en todos los fluidos corporales. Si ?ß alcanza' una alta concentración, sufrirá cambios conformacionales y formará aglutinados. Una plétora de aglutinados se ha encontrado in vitro o in vivo, incluyendo conformadores de monómeros múltiples, diferentes tipos de oligómeros, ligandos difundibles derivados de ?ß, protofibrilos , fibrilos, y esferoides (adoptado de Klein y colaboradores, 2004). ?ß fibrilar tiene una estructura vertebral beta-transversal (Sawaya y colaboradores, 2007) y eventualmente es depositada en el cerebro para formar las placas neurodegenerativas.

La inmunización de ratones transgénicos (Schenk y colaboradores, 1999) y de pacientes humanos en un ensayo clínico en fase 1 (Hock y colaboradores, 2002,) con una suspensión de "pre-aglutinados" ?ß1-42 sembrados benéficamente. Los anticuerpos en suero humano inmune reconocieron placas, depósitos de ?ß y ß-amiloidé en vasos sanguíneos cerebrales. Los anticuerpos no reconocieron a la proteína precursora de amiloide o ?ß soluble.

Una desventaja de la suspensión de ?ß1-42 "pre-aglutinada" es que las propiedades físicas de este material son mal definidas. No obstante, un problema serio más distante fue la inducción de meningoencefalitis como un efecto secundario relacionado con la vacuna en 6 % de los pacientes durante el ensayo clínico en la fase 2 (Check 2002, Gilman y colaboradores 2005) . Este efecto secundario es causado por una reacción inflamatoria celular, atribuida a una respuesta celular de Thl a epítopes localizados en las partes central y C-terminal de ?ß1-42 (McLaurin y colaboradores, 2002, Gelinas y colaboradores, 2004).

Se ha demostrado que anticuerpos benéficos inducidos por ?ß1-42 son dirigidos contra el N-terminus (McLaurin y colaboradores, 2002), (Lee y colaboradores, 2005). Por consiguiente, se propuso usar péptidos de ?ß truncados C-terminalmente como inmunógenos (Sirgurdson y colaboradores, 2004, Lemere y colaboradores, 2006, Geovorkian y colaboradores, 2004, Lemere y colaboradores, 2007) . Dichos péptidos cortos son pobremente inmunogénicos . A fin de incrementar la inmunogenicidad, múltiples copias del péptido podrán ser acopladas a portadores no inmunogénicos (con el objetivo de inducir IgM) o a portadores que proporcionen epítopes de células T heterólogas (Agadjanyan y colaboradores, 2005, Ghochikyan y colaboradores, 2006, Maier y colaboradores, 2006, (Movsesyan y colaboradores, 2008)) . En ninguno de estos conjugados se esperó que el péptido adoptara la conformación de los residuos 4-10 como se expuso en los oligómeros de amiloide ß o pre-fibrilos . Por consiguiente, se espera que anticuerpos inducidos con conjugados de péptidos truncados sean débilmente específicos para el oligómero o pre-fibrilos .

Por consiguiente, hay aún una necesidad por un medicamento eficiente, preferiblemente una vacuna contra la enfermedad de Alzheimer. La presente invención proporciona una vacuna mejorada, la cual no tiene todos los inconvenientes de las vacunas existentes: menos toxicidad y aún capaz de inducir una respuesta de anticuerpo efectiva para inmunización. La vacuna propuesta en la presente invención es un nuevo análogo del péptido ß-amiloide.

SUMARIO DE LA INVENCION Péptidos de la invención En un primer aspecto de la invención, se proporciona un péptido que comprende la siguiente secuencia X1X2X3VGSN-Z, X2X3VGSN -Z o X3VGSNKG-Z , en donde Xx es A o G, X2 es E, G, Q o K, X3 es D o N, y Z es un agente estabilizante del pliegue presente en la secuencia peptídica X1X2X3VGSN-Z , X2X3VGSNK-Z o X3VGSNKG-Z. Los péptidos de la invención son péptidos modificados que se entenderán en la presente como péptidos que no son un ?ß1-42 como se encuentra de manera natural. Z puede también ser definido como un agente estabilizante de la conformación de X1X2X3VGSN (SEC ID NO: 1), X2X3VGSNK (SEC ID NO: 2) o X3VGSNKG (SEC ID NO: 3) que igualmente adoptaron en ?ß1-42, preferiblemente como adoptó en ?ß1-42. La secuencias peptidicas XiX2X3VGSN, X2X3VGSNK y X3VGSNKG como se identificaron anteriormente corresponden respectivamente a los aminoácidos 22-28 y 23-39 de ?ß 1-42. Una secuencia peptidica preferida es X2X3VGSN la cual corresponde a los aminoácidos 22-28 de ?ß 1-42. Las diferentes identidades posibles para ??, X2 y X3 como se indican en la presente se originan de la presencia de varias mutaciones conocidas en la población humana en la secuencia de ?ß 1- 42: X2 es el aminoácido 22 y es predominantemente E en la población. No obstante, las mutaciones Ártica (E22G) , Alemana (E22Q) , e Italiana (E22K) son también conocidas, se ha identificado otra mutación (?22?) (Tomiyama y colaboradores, 2008) . X3 es el aminoácido 23 y es predominantemente D. No obstante, ha sido ya identificada la mutación Iowa (D23N) . Por consiguiente, es obvio para el experto que si cualquier otra mutación fuera identificada posteriormente se identificaría en una porción específica de ?ß 1-42 como se identificó en la presente; es decir, aminoácidos 21-27, 22-28 o 23-29, la secuencia del péptido de la invención puede adaptarse posiblemente a considerar estas últimas mutaciones identificadas.

Se probaron varias secuencias peptidicas sobrepuestas (véase el ejemplo) . Hasta donde se tiene conocimiento, dos de las secuencias peptidicas probadas (aa 22-28 o 23-29) se encontraron capaces de inducir una respuesta de anticuerpo en ratones, dicho anticuerpo fue específicamente capaz de reconocer un epítope conformacional de ?ß 1-42 como se expresa en monómero, oligómero soluble (Haass y Selkoe 2007, Lambert y colaboradores, 2007, y Wash y Selkoe, 2007) fibrilos, o placas neurodegenerativas. Parece que el reconocimiento de Ab oligomérico es aún más crucial que el reconocimiento de fibrilo o placa, ya que el Ab es más tóxico para las neuronas. Le eliminación de oligómeros solubles mejora rápidamente el conocimiento aunque las placas estén aún presentes. La funcionalidad de un péptido de la invención es probada preferiblemente como se expone en el Ejemplo 2: ELISA. El uso de conjugados péptido-BSA como recubrimiento de antígenos en ELISA permite la determinación del título anti-péptido, mientras que el recubrimiento de ?ß 1-42 oligomérica o fibrilar permite la detección de reactividad cruzada específica. El experto entenderá que cualquier otra secuencia peptídica derivada de ?ß 1-42, e incorporada en un péptido de conformidad con la invención y que sea capaz de adoptarla conformación de XiX2X3VGSN, X2X3VGSNK o X3VGSNKG como igualmente se adoptó en ?ß 1-42 es también abarcada por la presente invención.

En una modalidad, el péptido de la invención consiste de la fórmula X^XaVGSN-Z , X2X3VGSNK-Z o X3VGSNKG-Z, en donde Xi es A o G, X2 es E, G, Q o K, X3 es D o N, y Z es un agente estabilizante del pliegue presente en la secuencia peptidica XiX2X3VGSN, X2X3VGSNK o X3VGSNKG.

En un péptido de la invención, es critico que el pliegue presente en XiX2X3VGSN, X2X3VGSNK o XiX2X3VGSNKG sea estabilizado ya que intentamos diseñar un péptido que imite un epitope conformacional presente en ?ß 1-42 plegado como se expresa en monómero, oligómero soluble, fibrilos, o placas neurodegenerativas. Cualquier manera de lograr esta estabilización es abarcada por la presente invención. El experto, después de haber sintetizado un péptido de la invención puede probar su conformación por medio de un método conocido en el arte, por ejemplo por medio de NMR según se refiere en el Ejemplo 1.

En una modalidad preferida, una primera manera de lograr esta estabilización es ciclizar un péptido de la invención. Por consiguiente, un péptido preferido de la invención es un péptido cíclico. El experto sabe como ciclizar un péptido. La reacción de ciclización actual puede ser efectuada entre cualquiera de las posiciones sucesivas, incluyendo Z, en la secuencia. Además, la reacción de ciclización actual puede ser efectuada sobre una secuencia precursora que no contenga aún Z, pero que produzca Z como un resultado de la ciclización. La ciclización puede ser llevada a cabo por ligadura, preferiblemente por ligadura covalente, el aminoácido N-terminal de la secuencia peptidica, preferiblemente Xi, X2 o X3 en X1X2X3VGSN-Z , X2X3VGSNK-Z o X3VGSNKG-Z, respectivamente, a Z. De esta manera el aminoácido C-terminal de las secuencias peptidicas X1X2X3VGSN, X2X3VGSNK o X3VGSNKG no está involucrado en la ciclización. De manera conveniente, la ciclización es efectuada en fase sólida. Por ejemplo, D23, enlazado en cadena lateral en la fase sólida, puede ser ciclizado a E22, el cual sobre un enlazador de ácido carbónico produce ciclo-E22-D23. En otra opción D27, enlazado en cadena lateral a la fase sólida, puede ser ciclizado a K28, el cual sobre un enlazador amida produce ciclo-N27-K28. Preferiblemente la ciclización es efectuada entre aminoácidos en el contra-bucle Z, tal como, por ejemplo D a G (convertido en N-G) o a partir de G a K*, si Z es YNGK. Es también posible ciclizar en solución, por ejemplo desde G25 a S26 o desde G a K*, si Z es YNGK. Se piensa que la ciclización es importante para estabilizar el pliegue presente en XiX2X3VGSN, X2X3VGSNK o X3VGSNKG.

Otra manera preferida de ciclización de un péptido es añadir una cisteína a los N- y C-terminus de la secuencia peptídica, o por adición de una cisteína al N-terrainus de la secuencia peptidica y otra a Z. La presencia de dos cisteínas permitirá llevar a cabo una ciclización disulfuro, como es bien sabido por el experto.

En otra modalidad preferida, una segunda manera de lograr esta estabilización es usar Z. Como se indicó anteriormente en la presente, Z es un agente estabilizante del pliegue presente en XiX2X3VGSN, X2X3VGSNK o X3VGSNKG en un péptido de la invención. En una modalidad preferida, Z estabiliza el pliegue presente en XiX2X3VGSN, X2X3VGSNK o X3VGSNKG para asegurar que el péptido adoptará igualmente la conformación de ?ß 1-42 plegado. En una modalidad más preferida, Z estabiliza el pliegue presente en X^XBVGSN, X2X3VGSNK o X3VGSNKG para asegurar que estos péptidos adoptarán la conformación de ?ß 1-42 plegado. A partir de estudios, se cree que hay un pliegue en la conformación de ?ß 1-42 plegado, dicho pliegue es predicho en una posición correspondiente a la posición entre el S y el N en X! 2 3VGSN, X2X3VGSNK o X3VGSNKG.

Z puede ser cualquier agente conocido por el experto como estabilizante de un pliegue, en giro o bucle, Z puede ser definido como un agente "contra-giro" con una alta probabilidad de formar un giro-ß (Hutchinson y colaboradores, 1998; oolfson y colaboradores, 1993). Z puede ser un aminoácido, un oligopéptido, un péptido, un polipéptido, una proteina, un antigeno, un mono- u oligosacárido, y/o un esteroide. En una modalidad preferida, Z es un fragmento peptidico de 8, 7, 6, 5 o 4 aminoácidos, en preferencia creciente con longitud decreciente. Preferiblemente el fragmento peptidico de 4 - 8 aminoácidos es un agente "contra-giro" con una alta propensión por una conformación de giro-ß. Un fragmento peptidico preferido es un tetrapéptido seleccionado del grupo que consiste de YNGK, TCGV, CGNT, LcGT, LkGT, GAIK, GAIC, AIIK, y AIIC. Más preferiblemente, el tetrapéptido es seleccionado del grupo que consiste de YNGK, TCGV, CGNT, LcGT " y LkGT. Más preferiblemente, el tetrapéptido es seleccionado del grupo que consiste de YNGK, TCGV, CGNT, LcGT y LkGT, en donde c = D-Cys y en donde k = D-Lys (véase por ejemplo, Oomen y colaboradores, 2003; y Oomen y colaboradores, 2005). Ejemplos de proteínas que pueden ser usadas para Z son HSA, IgG' s y otras proteínas de suero. Ejemplos de antígenos son toxinas (bacterianas) y partículas similares a virus. Z puede también ser un soporte esferoidal tal como se describe en Bode y colaboradores (2007, J. Pept . Sci . , 13: 702-708). Soportes esferoidales adecuados para uso como Z incluyen por ejemplo, ácidos biliares y derivados de éstos tal como por ejemplo, ácido cólico, ácido desoxicólico y un 7- a-acetoxi- 3a-amino- 12a- amino- 5ß- colan- 24- oato de metilo. Preferiblemente en los péptidos de la invención las secuencias peptidicas están conectadas en las posiciones C-3 y C12 del soporte esteroidal, por ejemplo como se describe en Bode y colaboradores (2007, supra) .

Z, puede ser ligada a la secuencia peptidica antes de ciclización y opcionalmente ciclizada junto con el resto de la secuencia peptidica. En esta modalidad, Z es preferiblemente una molécula relativamente corta como un oligopéptido : un aminoácido, un dipéptido, un tripéptido, un tetrapéptido, un pentapéptido . En esta modalidad preferida, el número total de aminoácidos (desde la secuencia peptidica que se origina desde ?ß 1-42 y desde Z es preferiblemente 10 u once. Aún más preferiblemente, este número es once. Z puede comprender o consistir de un aminoácido presente en la secuencia ?ß 1-42 correspondiente para alinear con la secuencia XiX2X3VGSN, X2X3VGSNK o X3VGSNKG correspondiente.

Alternativamente, Z puede ser ligada a la secuencia peptidica ciclizada. En esta modalidad, Z puede ser una molécula relativamente más grande que en la modalidad previa: un polipéptido o una proteina por ejemplo.

Se obtuvieron mejores resultados cuando se combinaron ambas maneras (ciclización y la presencia de Z) para estabilizar el péptido. Aún más preferiblemente, Z es ligado a la secuencia peptidica y subsecuentemente es ciclizado con el resto de la secuencia peptidica. Alternativamente, Z es formado como un resultado de la reacción de ciclización. En esta modalidad preferida, se obtuvieron mejores resultados con Z siendo el tetrapéptido como se definió anteriormente, tal como por ejemplo, YNGK. Más preferiblemente, el tetrapéptido comprende al menos uno de una cisteina, y una lisina para permitir la conjugación selectiva del péptido a una molécula portadora como se describe posteriormente. La lisina preferiblemente es una lisina modificada tal como N€- ( S-acetilmercaptoacetil ) lisina (Lys-SAMA) . La presencia de al menos uno de un residuo cisteina y uno Lys-SAMA en el tetrapéptido permite la conjugación selectiva del péptido de la invención a un portador reactivo-sulfhidrilo tal como una proteina portadora .

En una modalidad más preferida, se proporciona un péptido que consiste de la fórmula X2X3VGSNK-Z en donde X2 es E, G, Q o K, X3 es D o N y Z es un agente estabilizante del pliegue presente en X2X3VGSNK . Preferiblemente, Z es YNGK, en donde aún más preferiblemente, K en YNGK es una lisina modificada (Lys-SAMA) para permitir la conjugación selectiva del péptido.

En otra modalidad más preferida, se proporciona un péptido que comprende la siguiente secuencia X3VGSNKG-Z, en donde X3 es D o N y Z es un agente estabilizante del pliegue presente en X3VGSNKG. Preferiblemente, Z es YNGK en donde aún más preferiblemente K en YNGK es una lisina modificada (Lys-SAMA) para permitir la conjugación selectiva del péptido.

Se encontró que un péptido que comprende la secuencia X2X3VGSNKGAI-Z , en donde X2 es E, X3 es D, y Z es una lisina modificada (Lys-SAMA) y un péptido que comprende la secuencia VGSNKG-Z en donde Z es una lisina modificada (Lys-SAMA) , ambos generan respuestas de anticuerpo a los péptidos mismos inmunizados, no obstante, los anticuerpos asi generados fallaron en reaccionar cruzadamente con ?ß 1-42 fibrilar u oligomérico.

Un péptido de la invención puede estar presente como un péptido individual o incorporado en una molécula de fusión, tal como una proteina de fusión. Un péptido puede adicionalmente ser modificado por eliminación o sustitución de uno o más aminoácidos, por extensión en los terminus N-y/o C- con aminoácidos adicionales o grupos funcionales, lo cual puede mejorar la biodisponibilidad, terminando en células-T o comprender o liberar sustancias inmunomoduladoras que proporcionan funciones adyuvantes o (co) estimuladoras . El impacto de estas modificaciones es preferiblemente probado sobre la conformación del péptido sintetizado. Esto puede hacerse por NMR por ejemplo. Es importante que en un péptido asi obtenido, la conformación de X1X2X3VGSN, X2X3VGSNK o X3VGSNKG como se adoptó igualmente en ?ß 1-42, preferiblemente es adoptado en ?ß 1-42 no ha sido modificado. Los aminoácidos adicionales opcionales en el terminus N- y/o C- preferiblemente no están presentes en las posiciones correspondientes en la secuencia de aminoácidos de la proteina derivada de él, es decir la secuencia de aminoácidos ?ß- 1-42. Por consiguiente, en aún una modalidad preferida, a fin de mejorar la inmunogenicidad de un péptido de la invención, este péptido, preferiblemente un péptido cíclico como se describió anteriormente es conjugado a una molécula portadora inmunogénica , preferiblemente selectivamente -mediante la ligadura Z y la molécula portadora inmunogénica. Un péptido tal es denominado un péptido conjugado. Por consiguiente, en una modalidad preferida, un péptido de la invención es un péptido conjugado, más preferiblemente un péptido cíclico conjugado. Una molécula portadora inmunogénica preferiblemente es un portador que cuando se conjuga a un péptido de la invención induce una respuesta inmune al péptido de la invención después de la administración a un sujeto tal como un mamífero. El portador inmunogénico puede tener también actividad adyuvante como se definirá posteriormente en la presente. Numerosas moléculas portadoras inmunogénicas son conocidas por el experto (Hermanson, G. T., 1996, Bioconjugate techniques, Academic Press, San Diego; Drijfhout y Hoogerhout, 2000). Las moléculas portadoras inmunogénicas incluyen por ejemplo, toxinas o toxoides bacterianos como exotoxinas y variantes de éstas con toxicidad reducida. Moléculas portadoras inmunogénicas incluyen el toxoide de la difteria CRMi97, , una albúmina de suero (por ejemplo, albúmina de suero humano) y toxoide tetánico (Beuvery y colaboradores, 1986; Claesson y colaboradores, 2005) .

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS Las Figuras 1A-C muestran el modelo de un fibrilo ?ß1--42. La Figura 1A y la Figura IB representan una unidad ß transversal dimérica y la Figura 1C el fibrilo conjuntado. [Crédito: Olofsson y colaboradores, 2006 J. Biol . Chem. 281, 477-483] .

La Figura 2 muestra las secuencias de péptidos cíclicos derivados de amiloide (K* es un residuo lisina modificado para propósitos de conjugación) .

La Figura 3 muestra los títulos de anticuerpo-IgG de suero de ratones conjuntado contra conjugados BSA-péptido homólogos. El título es 10log de la dilución de suero reciproca al 50 % de la densidad óptica máxima a 450 nm en ELISA.

Las Figuras 4A-B muestran OD45onm de suero de ratones conjuntado como una función de la dilución con recubrimiento de ?ß 1-42 oligomérico o fibrilar.

Las Figuras 5A-B muuestran los títulos de anticuerpo IgG de suero de ratones individuales de los grupos 8 y 9 contra ?ß 1-42 oligomérico o fibrilar. El título es la dilución de suero reciproca al 50 % de la densidad óptica máxima a 450 nm en ELISA.

Las Figuras 6A-B muestran la tinción inmunohistoquímica del donador 99-30 de sección de cerebro humano (Braak 6) con un suero de ratón (1:300) inmunizado con el conjugado ciclo [?ß ( 22-28 ) -YNGK] /toxoide tetánico en la Figura 6A y el control monoclonal 6E10 (1:15,000) en la Figura 6B. Se reconocieron patrones similares de placas por el suero de ratón como control positivo. (Microscopio: Leica DMRE adaptado con una cámara DC300).

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Composición En un aspecto adicional se proporciona una composición que comprende un péptido como se definió en la presente. Una composición tal puede ser una composición farmacéutica o un medicamento.

En una modalidad adicional preferida, un péptido o una composición peptidica comprende adicionalmente un excipiente farmacéutico y/o un portador aceptable farmacéuticamente y/o un modulador inmune. Puede añadirse a una composición, cualquier portador y/o excipiente inertes, aceptables farmacéuticamente, conocidos.

La formulación de medicamentos, y el uso de excipientes aceptables farmacéuticamente son conocidos y se acostumbran en el arte y se describen por ejemplo, en Remington; The Science and Practice of Pharmacy, 21ava. Edición 2005, University of Sciences in Philadelphia .

Una composición farmacéutica puede comprender adicionalmente agentes estabilizantes, agentes osmóticos, agentes reguladores, agentes dispersantes aceptables farmacéuticamente, y los similares. La forma preferida de la composición farmacéutica depende de la modalidad de administración y de la aplicación terapéutica previstas. El portador farmacéutico puede ser cualquier sustancia no tóxica, compatible adecuada para liberar los ingredientes activos, es decir un péptido a un paciente. Portadores aceptables farmacéuticamente para liberación intranasal son ejemplificados por agua, soluciones salinas reguladas, glicerina, polisorbato 20, Cremophor EL, y una mezcla acuosa de glicérido caprílico/cáprico, y puede ser regulada para proporcionar un medio de pH neutro. Los portadores aceptables farmacéuticamente para liberación parenteral son ejemplificados por solución estéril de NaCl al 0.9 % regulada o glucosa al 5 % opcionalmente suplementada con una solución de albúmina al 20 %. Las preparaciones para administración parenteral deben ser estériles. La ruta parenteral para administración de los ingredientes activos está de acuerdo con métodos conocidos, por ejemplo, inyección o infusión por rutas subcutánea, intravenosa, intraperitoneal , intramuscular, intra-arterial o intralesiones . Una composición de la invención es administrada preferiblemente por inyección del bolus . Una composición farmacéutica típica para inyección intramuscular puede ser elaborada para contener hasta, por ejemplo, 1 - 10 mi de solución salina regulada con fosfato y 1 a 100 pg, preferiblemente 15 a 45 pg de un péptido conjugado modificado. Para administración oral, el ingrediente activo puede ser administrado en formas de dosificación líquida, como elíxires, jarabes, y suspensiones. Las formas de dosificación líquidas para administración oral, pueden contener colorantes y aromatizantes para incrementar la aceptación del paciente.

Los métodos para preparar composiciones administrables parenteral, oral o intranasalmente son bien conocidos en el arte y se describen con más detalle en varias fuentes, incluyendo, por ejemplo, Remington' s Pharmaceutical Science (15ava edición, Mack Publishing, Easton, PA, 1980) (incorporado integramente a la presente como referencia para todos los propósitos) .

Puede añadirse a una composición cualquier inmunomodulador , en particular moduladores que provocan una respuesta Th2/Thl equilibrada, como fosfato de aluminio o hidróxido de aluminio. Preferiblemente, el inmunomodulador es un adyuvante. Más preferiblemente, la composición comprende un péptido como se definió anteriormente y al menos un adyuvante. Un adyuvante es identificado en la presente para incluir cualquier sustancia o compuesto que, cuando se usa en combinación con un péptido, para inmunizar un mamífero, preferiblemente un humano, estimula el sistema inmune, provocando así, mejorando o facilitando la respuesta inmune contra el péptido, preferiblemente sin generar una respuesta inmune específica al adyuvante mismo. Los adyuvantes preferidos mejoran la respuesta inmune contra un antígeno dado en al menos un factor de 1.5, 2, 2.5, 5, 10 o 20, en comparación con la respuesta inmune generada contra el péptido bajo las mismas condiciones pero en ausencia del adyuvante. Las pruebas para determinar el mejoramiento promedio estadístico de la respuesta inmune contra un péptido dado como producido por un adyuvante en un grupo de animales o humanos sobre un grupo control correspondiente están disponibles en el arte. Un adyuvante como se usa en la presente será usualmente un compuesto gue es extraño a un mamífero, por lo cual excluye compuestos inmunoestimuladores que sean endógenos en mamíferos, como, por ejemplo, interleuquinas , interferones y otras hormonas.

Una composición de la presente invención puede contener al menos un adyuvante. Un adyuvante usado en la presente invención será seleccionado de modo que el efecto del péptido no sea inhibido. Adyuvantes usados en la presente invención son aquellos que son aceptables fisiológicamente para humanos, éstos incluyen, pero no se limitan a hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, adyuvantes en emulsiones basadas en aceite/tensoact-ivo tal como Montanide™ en el cual diferentes surfactantes (especialmente oleato de manitilo) son combinados con un aceite mineral, emulsiones que contengan escualeno tal como MF59TM, lípido A de monofosforilo, o liposacárido mutante de Neisseriae (como se describió en PCT/NL98/0063) .

Un medicamento puede ser administrado como una administración individual. Alternativamente, la administración de un péptido como se definió anteriormente en la presente y/o adyuvante puede repetirse si es necesario y/o péptidos distintos y/o adyuvantes distintos pueden ser administrados secuencialmente . El péptido, la composición y el medicamento de la invención son preferiblemente formulados para ser adecuados para administración intravenosa o subcutánea, o intramuscular, aunque otras rutas de administración pueden ser contempladas, como administración mucósica o intradérmica y/o administración intracutánea , por ejemplo, por inyección.

Por consiguiente, en una modalidad preferida, un péptido como se describió en la presente es para uso como un medicamento. Más preferiblemente, este medicamento es una vacuna contra la enfermedad de Alzheimer. Aún más preferiblemente, el medicamento es para prevenir, retardar y/o tratar la enfermedad de Alzheimer. Una vacuna, como se definió en la presente puede - ser usada para la protección profiláctica contra la enfermedad de Alzheimer o para el tratamiento de esta enfermedad.

En el contexto de la invención, un organismo o un individuo o un sujeto puede ser un animal o un ser humano. Preferiblemente, el organismo es un ser humano. Preferiblemente, un organismo tratado es sospechoso de tener un alto riesgo de desarrollar la enfermedad de Alzheimer debido por ejemplo a predisposición genética potencial, y/o a la edad de 1 sujeto y/o al estilo de vida de un sujeto (por ejemplo, hábitos nutricionales y/o a la ausencia de actividad física) y/o a cualquier otro parámetro conocido que indique que este sujeto tiene un riesgo creciente de desarrollar la enfermedad de Alzheimer.

El término "prevención" se comprenderá que incluye la prevención completa, profilaxis, así como también abatimiento del riesgo del individuo de contraer dicha enfermedad o condición y retardar el principio de la enfermedad o condición. El término "prevención" por consiguiente, también comprende el tratamiento de personas sospechosas de estar en riesgo de contraer dicha enfermedad o condición. Se comprenderá también que el término incluye el alivio de síntomas ya desarrollados.

El término "retardar" usado en la presente significa la administración de un péptido a un organismo, es decir un paciente que está en una pre-etapa de la condición a ser tratada en la cual una pre-forma de pacientes de la condición correspondiente es diagnosticada por medio de métodos conocidos en el arte.

El término "tratamiento" o "tratar" se comprende como el manejo y cuidado de un paciente para el propósito de combatir la enfermedad, condición, o trastorno.

En el contexto de la invención, "tratar la enfermedad de Alzheimer y/o retardar su progreso" preferiblemente quiere decir que se añade una cantidad efectiva terapéuticamente de un péptido. Se refiere a una cantidad efectiva, a dosificaciones y por periodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado terapéutico deseado, es decir, tratar la enfermedad de Alzheimer y/o retardar su progreso .

La cantidad de un péptido puede variar de acuerdo a factores como el estado de la enfermedad, edad, sexo, y peso del individuo, y la habilidad del agente farmacológico para provocar una respuesta deseada en el individuo.

Un efecto terapéutico (que conduce al tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y/o retardar su progreso) es preferiblemente uno que resulta de al menos uno de: una reducción de la carga de placas beta presentes en el cerebro; • una reducción de la cantidad de pre-fibrilos u oligómeros ?ß solubles presentes en el cerebro; y una reducción de la severidad de un síntoma asociado con la enfermedad de Alzheimer.

Una reducción de la carga de placas beta presentes en el cerebro de un paciente tratado, preferiblemente quiere decir que la cantidad de un péptido añadido será capaz de prevenir la formación de novo de placas beta en al menos algún grado y/o que las placas existentes serán en alguna medida inhibidas en su habilidad de expansión. Preferiblemente, en este contexto, el depósito de placas beta no incrementará en un paciente tratado en términos de carga de placa beta según se identifican por la técnica de formación de imágenes tal como exploración por PET (Henriksen, Yousefi y colaboradores, 2008) y/o formación de imágenes por resonancia magnética (MRI, Magnetic Resonance Imaging) (O'Brien, 2007). En una exploración por PET la cantidad de carga de placas beta es proporcional a la captación de rastreador. Preferiblemente, la carga de placas beta disminuirá de al menos 2 %, 5 %, 10 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % o más. Aún más preferiblemente, no se detectará ninguna placa beta. El experto sabe que la visualización de la placa beta deberá hacerse aproximadamente al menos un día, al menos una semana, al menos un mes después de vacunación o más. (Meyer-Luchmann, Spires-Jones y colaboradores, 2008) . Si es necesario, uno puede decidir vacunar varias veces y monitorear regularmente la carga de placas beta.

Una reducción de la cantidad de pre-fibrilos u oligómeros ?ß solubles presente en el cerebro de un paciente tratado preferiblemente significa que la cantidad de un péptido añadido será capaz de prevenir la formación de novo de pre-fibrilos u oligómeros ?ß solubles en al menos algún grado y/o los pre-fibrilos u oligómeros ?ß solubles existentes serán en al menos algún grado inhibidos en su habilidad de expansión. Preferiblemente, en este contexto, la cantidad de pre-fibrilos u oligómeros ?ß solubles no incrementará en un paciente tratado en términos de una superficie según se identificó por medio de una técnica de formación de imágenes como se definió anteriormente. Preferiblemente, la cantidad de pre-fibrilos u oligómeros ?ß solubles disminuirá en al menos 2 %, 5 %, 10 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 , 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % o más. Preferiblemente, la cantidad de pre-fibrilos u oligómeros ?ß solubles no será detectable usando el mismo método.

En el contexto de la invención, un ©ligómero ?ß, -soluble, pre-fibrilo o protofibrilo es un indicador para un montaje de 2-24 monómeros de ?ß (Haas y Selkoe 2007) .

En el contexto de la invención, "una reducción en la severidad de un síntoma asociado con la enfermedad de Alzheimer", preferiblemente significa un mejoramiento en el conocimiento según se midió con una prueba psicológica para evaluar el mejoramiento del conocimiento en pacientes que sufren de la enfermedad de Alzheimer.

Uso Por consiguiente, en un aspecto adicional, se proporciona el uso de un péptido o de una composición como se definió en la presente para la fabricación de un medicamento contra la enfermedad de Alzheimer. Preferiblemente, el medicamento es una vacuna. Más preferiblemente, la vacuna es para prevenir, retardar y/o tratar la enfermedad de Alzheimer .

Por consiguiente, en otro aspecto adicional, se proporciona un método de prevenir, retardar y/o de tratar la enfermedad de Alzheimer administrando un péptido o una composición como se definió en la presente a un paciente en necesidad de éstos.

Método de sintetizar un péptido Actualmente se conocen en el arte muchas maneras de generar un péptido de la invención. La invención no se limita a cualquier manera de generar un péptido mientras que el péptido generado comprenda, consista o se sobreponga con cualquiera de las secuencias modificadas dadas como se identifican en la presente y tengan la conformación requerida como se definió anteriormente en la presente.

Por consiguiente, en un aspecto adicional se proporciona un método para producir un péptido cíclico modificado como se definió en la presente, dicho método comprende las siguientes etapas: a) sintetizar un péptido cíclico que comprenda la secuencia X^X^GSN-Z , X2X3VGSNK-Z o X3VGSNKG-Z, en donde Xx es A o G, X2 es E, G, Q o K, X3 es D o N, y Z es un agente estabilizante del pliegue presente en la secuencia peptídica X1X2X3VGSN, X2X3VGSNK o X3VGSNKG; y b) opcionalmente conjugar una molécula portadora inmunogénica al péptido cíclico obtenido en a), preferiblemente a través de la ligadura de Z a la molécula portadora inmunogénica.

Cada etapa de este método es conocida por el experto y ha sido extensivamente descrita en el ejemplo.

Anticuerpo En un aspecto adicional, se proporciona un anticuerpo dirigido contra un péptido modificado (cíclico) de la invención como se define en la presente. El experto -sabe como producir un anticuerpo tal en un animal. Los métodos para generar anticuerpos o fragmentos de anticuerpo que específicamente enlazan a un polipéptido dado se describen en, por ejemplo, Harlow y Lañe (1988, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY) y WO 91/19818; WO 91/18989; WO 92/01047; WO 92/06204; WO 92/18619; y US 6,420,113 y referencias citadas en la presente. El término "enlace específico", como se usa en la presente, incluye tanto enlace específico de alta afinidad como el de baja afinidad. El enlace especifico puede ser exhibido, por ejemplo, por un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de baja afinidad que tenga un Kd de al menos aproximadamente 10~4 M. el enlace especifico también puede ser exhibido por un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de alta afinidad, por ejemplo, un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que tenga un Kd de al menos aproximadamente 1CT7 M, al menos aproximadamente 1CT8 M, al menos aproximadamente 10~9 M, al menos aproximadamente 10~10 M, o puede tener un Kd de al menos 10"11 M o 1CT12 M o mayor.

Métodos de diagnóstico En un aspecto adicional, se proporciona un método para diagnosticar une enfermedad o condición neurodegenerativa, tal como la enfermedad de Alzheimer. El método comprende determinar la presencia o ausencia de una-placa de amiloide beta (es decir, placa neurodegenerativa) en el cerebro de un paciente usando un anticuerpo como se definió en la presente. Preferiblemente en el método, la presencia de una placa de amiloide beta en el cerebro del sujeto (o en una muestra de éste) es indicador para el sujeto que está en riesgo de desarrollar una enfermedad o condición neurodegenerativa tal como la enfermedad de Alzheimer o indicador para el diagnóstico de la enfermedad o condición neurodegenerativa, tal como la enfermedad de Alzheimer.

Preferiblemente, dicho método es usado para pronosticar o diagnosticar la enfermedad de Alzheimer en el cerebro de un paciente. En el contesto de la invención, diagnóstico significa ya sea una evaluación de riesgo predictivo de un sujeto para desarrollar después la enfermedad de Alzheimer o preferiblemente una evaluación del desarrollo de la enfermedad de Alzheimer en el sujeto. En el contexto de la invención, un sujeto puede ser un animal o un ser humano. Preferiblemente, un sujeto es un ser humano.

De conformidad con una modalidad preferida, el método es llevado a cabo in vitro o ex vivo en una muestra obtenida de un sujeto. La muestra preferiblemente comprende tejido cerebral aislado a partir de un sujeto. Más preferiblemente, el tejido es de vasos sanguíneos cerebrales.

Preferiblemente, una detección de la presencia de una placa de beta amiloide es revelada por el enlace de un anticuerpo de la invención a una muestra de cerebro como se ensayó por ELISA, como se explica en el Ejemplo. El método de diagnóstico puede ser aplicado secuencialmente a un sujeto para monitorear el desarrollo de la enfermedad.

En este documento y en sus reivindicaciones, el verbo "comprender" y sus conjugaciones es usado en su sentido no limitante para querer decir que se incluyen los artículos después de la palabra, pero artículos no mencionados específicamente no están incluidos. Además, el verbo "consistir" puede ser reemplazado por "consistir esencialmente de" que quiere decir que un péptido o una composición como se definieron en la presente pueden comprender componentes adicionales a los específicamente identificados, dichos componentes adicionales que no alteren la única característica de la invención. Además, la referencia a un elemento por medio del artículo indefinido "un, una, uno" (antes de consonante) o "un, una, uno" no excluye la posibilidad de que más de un elemento esté presente, a menos que el contexto requiera claramente1 que sea uno y solamente uno de los elementos. El artículo indefinido "un, una, uno" (antes de consonante) o "un, una, uno", por consiguiente, significa "al menos uno".

Todas las referencias a literatura y patentes citadas en la presente especificación son por consiguiente incorporadas íntegramente como referencia. Los siguientes ejemplos se ofrecen para propósitos ilustrativos solamente, y no están previstos para limitar el alcance de la presente invención en manera alguna.

Ejemplos Ejemplo 1: Estrategia de síntesis Se probaron péptidos truncados de ?ß, los cuales no comprenden el epitope de células B N-terminal inmunodominante . Nos dirigimos hacia lograr una respuesta de anticuerpo para ?ß mal plegado anteriormente.

La secuencia de ?ß1-42 es: DAEFR5HDSGY16EVHHQ15KLVFF20AEDVG25SN GA30IIGLM35VGGVV40IA (SEC ID NO: 4) La estructura de fibrilos ?ß1-42 ha sido resuelta por espectroscopia de NMR (Olofson y colaboradores, 2006) . Experimentos de intercambio de hidrógeno/deuterio con fibrilos mostraron que las regiones Glu13"-Gly25 y Lys28-Ala42 en la secuencia de ?ß son protegidas a partir de solvente, mientras que los Asp1-Tyr10 N-terminus y los dos fragmentos de residuos Ser26-Asn27 son accesibles al solvente. Los datos de NMR son consistentes: Asp1-Tyr10 y los dos fragmentos de residuo Ser26-Asn27 son accesibles al solvente. Los datos de NMr son consistentes con un modelo del fibrilo como se expone en la Figura 1C. La estructura predicha es una espina de ß-transversal retorcida. Las Figuras 1? y IB muestran una sección, la unidad ß-transversal dimérica. En el dímero, cada monómero contiene dos láminas ß antiparalelas, las cuales son conectadas por un giro compuesto de Ser26-Asn27.

Con base en el modelo de fibrilo amiloide (Figuras 1A-C) , se decidió preparar un grupo de péptidos de amiloide 10- y 11-émeros cíclicos estabilizados con YNGK* . La Figura 2 muestra los decapéptidos de amiloide objetivos. Se hipotetizó que podríamos estabilizar la conformación de péptidos de ?ß pequeños por adición a una secuencia artificial YNGK*, en el cual K* es un residuo de lisina modificado por conjugación selectiva a una proteína portadora, seguido por ciclización amida de cadena principal ("cabeza o cola") (Oomen y colaboradores (2005)). De manera similar, se preparó un pequeño panel de péptidos decaméricos y undecaméricos cíclicos espaciados seis o siete residuos de la región 21-31 de ?ß e YNGK* (véase la Tabla 1) .

Tabla 1: péptidos sintetizados Ejemplo 2: Especificidad de alguno de los péptidos ciclizados modificados por un epítope conformacional de ?ß 1- 42 Un conjugado de toxoide tetánico del péptido ciclizado [?ß (22-28) -YNGK*] . Es decir ciclo [EDVGSNKYNGK* ] o péptido definido como grupo 9 en la Tabla 1, producen anticuerpos de reacción cruzada in vitro con oligómeros ?ß (1-42) (Figuras 4A-B o 5A-B) y fibrilos ?ß(1-42) (figuras 4A-B o 5A-B) . Estos anticuerpos también reconocen depósitos de ?ß en tejido (hipocampus ) cerebral humano AD post-mórtem, véase la Figura 6A-B. El conjugado correspondiente de la amida peptidica N-acetilada lineal Ac-K*EDVGSNKYNG-NH2 indujo buenos títulos de anticuerpo antipéptido pero los anticuerpos generados no reconocieron a ?ß fibrilar u oligomérica. Por consiguiente, el péptido cíclico imita a un epítope conformacional en ?ß 1-42 plegada que normalmente no induce una respuesta de anticuerpo. En el momento de registrar la prueba de una respuesta de anticuerpo 1 conjugado con el péptido definido como grupo 10, el péptido cíclico [?ß (21-27) -YNGK* ] estaba aún en progreso.

Materiales y métodos Síntesis peptidica, purificación, y conjugación El éster a- (2, 4- dimetoxibecílico) del ácido Na-fluorenilmetoxicarbonil-L-aspártico ( Fmoc-Asp-Odmb) fue acoplado a través de su cadena lateral a un polímero para la síntesis de amidas peptídicas (para conversión posterior de Asp inicial en Asn) . La secuencia GK*EDVGSNKYD ( resina ) enlazada a resina protegida en la cadena lateral, en la cual K* es Ne- ( S-acetilmercaptoacetil ) lisilo, fue entonces conjuntada como se describió anteriormente (Brugghe y colaboradores, 1994). El péptido lineal enlazado a la resina fue convertido a ciclo [GK*EDVGSNKYD ( resina )] . Después de desprotección de la cadena lateral, excepto de Lys(SAMA), y fragmentación a partir de la resina ciclo [GK*EDVGSNKYN]= ciclo [EDVGSN YNGK*] , se obtuvo el péptido del grupo 9 (Tabla 1) . Los péptidos de los grupos 4-8 fueron preparados de manera similar. El péptido del grupo 10, ciclo [AEDVGSNYNGK* ] , fue preparado a partir del precursor lineal YNGK*AEDVGSD (resina) enlazado a la resina protegida en la cadena lateral. "Los péptidos fueron purificados por cromatografía líquida de alta resolución en fase inversa y fueron caracterizados por espectrometría de masa por nebulización iónica (MH+encontrado/calculado, véase la Tabla 1) . Los péptidos purificados fueron acoplados ya sea al toxoide tetánico bromoacetilado o bien a la albúmina de suero bovino modificada con maleimidilo (BSA) (reactivo modificador: NHS-PE02-Maleimida, Pierce) (Drijfhout JW y colaboradores, 2000) .

Desaglutinación de ?ß(1-42) Se disolvió ?ß 1-42 liofilizado (Anaspec) en ácido trifluoroacético a una concentración de 1.0 mM, se dejó reposar a temperatura ambiente por 1 hora y se secó bajo una corriente de nitrógeno y, después, en un vacío (1 mm de Hg) por 15 minutos. El péptido fue entonces redisuelto en hexafluoroisopropanol a una concentración de 1.0 mM y, después 1 hora de incubación a temperatura ambiente, se secó como se describió anteriormente (Zeng y colaboradores, 2000) . El péptido fue almacenado a -20°C por 18-20 horas.

Preparación de ?ß(1-42) oligomérico o fibrilar El desaglutinado de ?ß 1-42 fue disuelto en dimetil sulfoxida a una concentración de 5.0 mM, fue diluido 50 veces ya sea con solución salina regulada con fosfato (PBS), pH de 7.2, o bien con 10 mM de ácido clorhídrico. La solución en PBS fue incubada a 4°C por 24 horas (para dar oligómeros), mientras que la solución en 10 mM de ácido clorhídrico fue incubada a 37°C por 24 horas (para dar fibrilos) (Stine y colaboradores) .

Inmunización de ratones Se inmunizaron subcutáneamente grupos de ocho ratones hembras Balb/c de 6-8 semanas de edad en los días 0 y 28 ya sea con 25 pg de ?ß 1-42 en PBS sin adyuvante o bien con 50 pg de conjugado péptido-TTd y 75 pg de A1P04 en PBS. Se colectaron pequeñas muestras de suero en el día 0. Los ratones fueron sangrados en el día 42.

ELISA Se recubrieron placas de microtítulo (Greiner 655092) con ?ß 1-42 o conjugados péptido-BSA. Se diluyeron oligómero o fibrilos ?ß 1-42 a una concentración final de 2.5 µ? (11.3 pg/ml) en regulador de carbonato/bicarbonato de sodio 0.04 M, pH de 9.7. Los conjugados péptido-BSA en solución salina regulada con fosfato, pH de 7.2 (PBS), tuvieron una concentración total de proteina de 0.5 µg/ml. Alícuotas (100 µ?) de estas soluciones fueron transferidas en los pocilios de las placas. Las placas fueron incubadas por 90 minutos a 37 °C. Las placas fueron procesadas adicionalmente como se describió anteriormente (Westdijk, van den Ijssel y colaboradores, 1997).

Tinción inmunohistoquímica Se usaron secciones de cerebro humano del hipocampus de varios donadores con la enfermedad de Alzheimer (Braak 5 o 6) (Netherlands Brain Bank) . Se cortaron criosecciones (10 ym) a partir de tejido congelado directamente sin fijar, se descongelaron, secaron por 1 hora y se almacenaron en una caja sellada a -20°C. Para inmunotinción, las secciones fueron fijadas en solución de PFA al 4 % en PBS por 10 minutos, se lavaron en regulador de fosfato 0.05 M (PB) por 10 minutos con dos intercambios y se bloquearon con suero de asno normal al 10 % (NDS) + TritonXlOO al 0.4 % en PB 0.05 M por 1 hora a temperatura ambiente. La solución bloqueadora fue descartada y se añadió suero de ratón diluido (1:300; primer anticuerpo) en NDS al 3 % + TritonXlOO al 0.4 % en PB 0.05 M y se incubaron O/N a temperatura ambiente en una caja con tejidos húmedos. Las secciones fueron lavadas con PB 0.05 M; al menos 30 minutos con uno o mas intercambios. Las secciones fueron incubadas con ~ Cy3 Asno-anti-Ratón 1:1400 en PB 0.05 M por 2 horas. Las secciones fueron lavadas con PB 0.05 M; al menos 30 minutos con uno o más intercambios. Las secciones fueron selladas en Vectashield con Dapi (Vector) . Se usó como control positivo (1:15,000) 6E10 monoclonal de ratón a beta amiloide 1-17 (Abcam, Cambridge, UK) .

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Claims (14)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito la presente invención, se considera como novedad y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES

1. - Un péptido cíclico caracterizado porque consiste de la fórmula XiX2X3VGSN-Z , X2X3VGSNK-Z o X3VGSNKG-Z, en donde Xi es A o G, X2 es E, G, Q o K, X3 es D o N, y Z es un agente que estabiliza el pliegue presente en la secuencia del péptido X^XaVGS , X2X3VGSNK o X3VGSNKG.

2. - Un péptido de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque Z es un fragmento peptidico de 4 - 8 residuos de aminoácidos o un soporte esteroidal.

3. - Un péptido de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el fragmento peptidico es seleccionado del grupo que consiste de YNGK, TCGV, CGNT, LCGT, LKGT, GAIK, GAIC, AIIK, AIIC, TcGV, CGNT, LcGT y LkGT, en donde c = D-Cys y en donde k = D-Lys; o, en donde el soporte esteroidal es un ácido biliar o un derivado de éste, preferiblemente seleccionado del grupo que consiste de ácido cólico, ácido desoxicólico y 7-OÍ- acetoxi- 3a- amino- 12a- amino- 5ß- colan- 24 oato de metilo.

4.- Un péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 3 caracterizado porque el péptido está conjugado a una molécula portadora inmunogénica .

5. - Un péptido de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el péptido está conjugado a la molécula portadora inmunogénica a través de una ligadura covalente selectiva de Z a la molécula portadora inmunogénica .

6. - Un péptido de conformidad con la reivindicación 4 o 5, caracterizado porque la molécula portadora inmunogénica es toxoide tetánico.

7. - Un péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 6, caracterizado porque es para uso como un medicamen-to .

8. - Un péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizado porque es para uso en el tratamiento o prevención de la enfermedad de Alzheimer.

9. - Uso de un péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 6, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de la enfermedad de Alzheimer.

10. - Un método para la prevención, retardo del principio y/o el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, el método está caracterizado porque comprende la etapa de administrar una cantidad efectiva de un péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 6 a un paciente en necesidad de éste.

11. - Un método para producir un péptido cíclico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 6, caracterizado porque el método comprende las etapas de: a) sintetizar un péptido cíclico que consiste de la secuencia XiXzXa GSN-Z , X2X3VGSNK-Z o X3VGSNKG-Z, en donde Xx es A o G, X2 es E, G, Q o K, X3 es D o N, y Z es un agente que estabiliza el pliegue presente en la secuencia del péptido XiX2X3VGSN, X2X3VGSNK o X3VGSNKG; y b) opcionalmente , conjugar una molécula portadora inmunogénica al péptido cíclico obtenido en a) , preferiblemente - mediante la ligadura de Z a la molécula portadora inmunogénica.

12. - Anticuerpo dirigido contra el péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6.

13. - Un método in vitro para diagnosticar una enfermedad o condición neurodegenerativa, caracterizado porque el método comprende la etapa de determinar en una muestra de un paciente, la presencia o ausencia de una placa beta amiloide, usando un anticuerpo de conformidad con la reivindicación 12.

14.- Un método in Mitro de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque es para diagnosticar la enfermedad de Alzheimer.