MX2010011921A - Compuestos para el tratamiento de la hepatitis c. - Google Patents

Compuestos para el tratamiento de la hepatitis c.

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Abstract

La invención comprende compuestos de fórmula I así como composiciones y procedimientos de uso de los compuestos. Los compuestos tienen actividad contra el virus de la hepatitis C (VHC) y son útiles en el tratamiento de aquellos infectados por VHC.

Description

COMPUESTOS PARA EL TRATAMIENTO DE LA HEPATITIS C CAMPO DE LA INVENCIÓN La descripción generalmente se refiere a los compuestos novedosos de formula I, incluyendo sus sales, que tienen actividad contra virus de la hepatitis C (VHC) y son útiles en tratar esas infecciones con el VHC. La discusión también se refiere a composiciones y procedimientos de usar estos compuestos .
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El virus de la hepatitis C (VHC) es un patógeno humano principal, que infecta a 170 millones de personas estimadas alrededor del mundo - aproximadamente cinco veces el número de infectados por el virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1. Una fracción sustancial de estos individuos infectados por el VHC desarrollan enfermedad del hígado progresiva grave, incluyendo cirrosis y carcinoma hepatocelular (Lauer, G. M.; Walker, B. D. N. Engl . J. Med. 2001, 345, 41-52).
El VHC es un virus ARN de cadena positiva. En base a una comparación de la secuencia de aminoácidos deducida y de la similitud extensa en la región no traducida 51 , el VHC se ha clasificado en un género separado en la familia Flaviviridae . Todos los miembros de la familia Flaviviridae tienen viriones con envoltura que contienen un genoma de ARN de cadena REF.214791 positiva que codifica todas las proteínas específicas del virus conocidas por medio de traducción de una fase de lectura abierta simple, ininterrumpida.
Se encuentra heterogenicidad considerable dentro del nucleótido y de la secuencia de aminoácidos codificada por todo el genoma del VHC . Se han caracterizado al menos seis genotipos principales, y se han descrito más de 50 subtipos. Los genotipos principales del VHC difieren en su distribución a lo largo del mundo, y la importancia clínica de la heterogenicidad genética del VHC permanece evasiva a pesar de numerosos estudios del efecto posible de genotipos en patogénesis y terapia.
El genoma del AR del VHC de cadena simple es de aproximadamente 9500 nucleótidos de longitud y tiene una fase de lectura abierta simple (ORF) que codifica una poliproteína grande única de aproximadamente 3000 aminoácidos. En células infectadas, esta poliproteína se escinde en múltiples sitios mediante proteasas víricas y celulares para producir las proteínas estructurales y no estructurales (NS) . En el caso del VHC, la generación de proteínas no estructurales maduras (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, y NS5B) se lleva a cabo mediante dos proteasas virales . La primera se cree que es una metaloproteasa y se escinde en la unión NS2-NS3; la segunda es una serina proteasa contenida dentro de la región N-terminal de NS3 (también referida como proteasa NS3) y media todas las escisiones subsiguientes más adelante en la cadena de NS3, tanto en cis, en el sitio de escisión NS3-NS4A, como en trans, para los sitios restantes NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B. La proteína NS4A parece atender funciones múltiples, actuando como un cofactor para la proteasa NS3 y posiblemente ayudando en la localización de membrana de NS3 y otros componentes de replicasa viral. La formación compleja de la proteína NS3 con NS4A parece necesaria para los eventos de procesamiento, potenciando la eficiencia proteolítica en todos los sitios. La proteína NS3 también presenta actividades de trifosfatasa de nucleósido y de helicasa del ARN. La NS5B (también referida como polimerasa del VHC) es una ARN polimerasa dependiente del ARN que está implicada en la replicación del VHC. La proteína NS5B del VHC se describe en "Structural Analysis of the Hepatitis C Virus RNA Polymerase in Complex with Ribonucleotides" (Bressanelli S. y col., Journal of Virology 2002, 3482-3492; y Defrancesco y Rice, Clinics in Liver Disease 2003, 7, 211-242).
Actualmente, la terapia del VHC más efectiva emplea una combinación de interferón alfa y ribavirina, conduciendo a eficacia sostenida en el 40% de los pacientes (Poynard, T. y col. Lancet 1998, 352, 1426-1432). Los resultados clínicos demostraron que el interferón alfa pegilado es superior al interferón alfa no modificado como monoterapia (Zeuzem, S. y col. N. Engl. J. Med. 2000, 343, 1666-1672) . Sin embargo, incluso con regímenes terapéuticos experimentales que implican combinaciones de interferón-alfa pegilado y ribavirina, una fracción sustancial de pacientes no tienen una reducción mantenida en la carga viral. Así, hay una necesidad clara e importante para desarrollar procedimientos terapéuticos efectivos para tratamiento de infección por VHC.
La invención proporciona ventajas técnicas, por ejemplo, los compuestos son novedosos y son efectivos contra hepatitis C. Adicionalmente, los compuestos proporcionan ventajas para usos farmacéuticos, por ejemplo, con respecto a uno o más de sus mecanismos de acción, unión, eficacia de inhibición, selectividad de objetivo, solubilidad, perfiles de seguridad, o biodisponibilidad.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Un aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I en la que : R1 es C02R5 o CONRsR7; es furanilo, pirrolilo, tienilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, imidazolilo, oxazolilo, tiazolilo, oxadiazolilo, triazolilo, o tetrazolilo; y R2 está sustituido con 1 sustituyente seleccionado del grupo constituido por cicloalquilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, fenilo, piperidinilo, pirazinilo, piridolinilo, bencimidazolilo, piperidinilo sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo, y piridinilo sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo; y R2 está sustituido con 1 sustituyente seleccionado de C02R5, CON(R12)2, y COR13; y R2 está sustituido con 0-1 sustituyentes seleccionados de oxo, amino, alquilo, y haloalquilo; R3 es hidrógeno, halo, alquilo, alquenilo, hidroxi, benciloxi, o alcoxi; R4 es cicloalquilo; R5 es hidrógeno o alquilo; R6 es hidrógeno, alquilo, alquil-S02, cicloalquil-S02 , haloalquil-S02/ (R9) (R10)NSO2, o (R11)S02; R7 es hidrógeno o alquilo; R8 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, (cicloalquil) alquilo, alquilcarbonilo , cicloalquilcarbonilo, haloalquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquil-S02, cicloalquil-S02, haloalquil-S02, aminocarbonilo, (alquilamino) carbonilo, (dialquilamino) carbonilo, bencilo, benciloxicarbonilo, o piridinilo; R9 es hidrógeno o alquilo; R10 es hidrógeno o alquilo; R11 es azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, horaopiperidinilo, homopiperazinilo, u homomorfolinilo, y está sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo; R12 es hidrógeno, alquilo, alcoxialquilo, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) alquilo, o (R11) alquilo; R13 es azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homopiperidinilo, homopiperazinilo, u homomorfolinilo, y está sustituido con 0-3 sustituyentes seleccionados de alquilo, alcoxialquilo, amino, alquilamino, dialquilamino, R11, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) lquilo, (R11) lquilo, o C02R5 ; o R13 es una [4.3.0] diamina bicíclica o una [3.3.0] diamina bicíclica unida al carbonilo a través de un nitrógeno, y está sustituida con 0-2 R8 sustituyentes ; R14 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, (cicloalquil) alquilo, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) alquilo, o bencilo; R15 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, (cicloalquil) alquilo, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) alquilo, o bencilo; o R14R15 tomado conjuntamente es azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, N- (alquil) piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homopiperidinilo, u homomorfolinilo R16 es hidrógeno o alquilo; R17 es hidrógeno, alquilo, o cicloalquilo; y X es metileno, un enlace, o está ausente,- o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I en la que : R1 es C02R5 O CONR6R7; R2 is pirazolilo, isoxazolilo, o imidazolilo, y está sustituido con 1 sustituyente seleccionado del grupo constituido por cicloalquilo, tetrahidropiranilo, fenilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridinonilo, bencimidazolilo, piperidinilo sustituido con 1 sustituyente alquilo, y piridinilo sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo; y R2 está sustituido con 1 sustituyente seleccionado de C02R5, CON(R12)2, y COR13; y R2 está sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo; R3 es alcoxi; R4 es cicloalquilo; R5 es hidrógeno o alquilo; R6 es alquil-S02, cicloalquil-S02 , o (R9) (R10)NSO2; R7 es hidrógeno; R es hidrógeno, alquilo, o (cicloalquil) alquilo; R12 es alquilo o alcoxialquilo; R13 es azetidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, homopiperazinilo, u homomorfolinilo, y está sustituido con 0-3 sustituyentes seleccionados de halo, alquilo, cicloalquilo, o alcoxialquilo; R es hidrógeno; R1 es alquilo; y X es un enlace; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I en la que: R1 es C02R5 O CONR6R7; R2 is pirazolilo, isoxazolilo, o imidazolilo, y está sustituido con 1 sustituyente seleccionado del grupo constituido por ciclopropilo, ciclobutilo, tetrahidropiranilo, fenilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridinonilo, bencimidazolilo, N-metilpiperidinilo, piridinilo o metilpiridinilo; y R2 está sustituido con 1 sustituyente seleccionado de C02R5, CON(R12)2, y COR13; y R2 está sustituido con 0-1 sustituyentes metilo; R3 es metoxi; R4 es ciclohexilo; R5 es hidrógeno o alquilo; R6 es isopropil-S02/ isobutil-S02, ciclopropil-S02( o e2NS02; R7 es hidrógeno; R8 es hidrógeno, metilo, etilo, o (ciclopropil) metilo; R12 is isopropilo o metoxietilo; R13 es difluoroazetidinilo, difluoropiperidinilo, metilpiperazinilo, ciclopentilpiperazinilo, trimetilopiperazinilo, morfolinilo, dimetilmorfolinilo, (metoximetil) morfolinilo, N-metilhomopiperazinilo, u homomorfolinilo; X es un enlace; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I en la que : R1 es C02R5 o CONR6R7; R2 es furanilo, pirrolilo, tienilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, imidazolilo, oxazolilo, tiazolilo, oxadiazolilo, triazolilo, o tetrazolilo; y R2 está sustituido con 1 sustituyente seleccionado de cicloalquilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, piperidinilo sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo, y piridinilo sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo; y R2 está sustituido con 1 sustituyente seleccionado de C02R5, CON(R12)2, y COR13; y R2 está sustituido con 0-1 sustituyentes seleccionados de oxo, amino, alquilo, y haloalquilo; R3 es hidrógeno, halo, alquilo, alquenilo, hidroxi, benciloxi, o alcoxi; R4 es cicloalquilo; R5 es hidrógeno o alquilo; R6 es hidrógeno, alquilo, alquil-S02, cicloalquil-S02> haloalquil-S02, (R9) (R10)NSO2, o (R11)S02; R7 es hidrógeno o alquilo; R8 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, (cicloalquil) alquilo, alquilcarbonilo, cicloalquilcarbonilo, haloalquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquil-S02, cicloalquil-S02, haloalquil-S02 , aminocarbonilo, (alquilamino) carbonilo, (dialquilamino) carbonilo, bencilo, benciloxicarbonilo, o piridinilo; R9 es hidrógeno o alquilo; R10 es hidrógeno o alquilo; R11 es azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homopiperidinilo, homopiperazinilo, u homomorfolinilo, y está sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo; R12 es hidrógeno, alquilo, alcoxialquilo, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) alquilo, o (R11) alquilo; R13 es azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homopiperidinilo, homopiperazinilo, u homomorfolinilo, y está sustituido con 0-3 sustituyentes seleccionados de alquilo, alcoxialquilo, amino, alquilamino, dialquilamino, R11, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) alquilo, (R11) alquilo, o C02R5 ; o R13 es una [4.3.0] diamina bicíclica o una [3.3.0] diamina bicíclica unida al carbonilo a través de un nitrógeno, y está sustituida con 0-2 R8 sustituyentes ; R14 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, (cicloalquil) alquilo, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) alquilo, o bencilo; R15 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, (cicloalquil) alquilo, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) alquilo, o bencilo; o NR14R15 tomado conjuntamente es azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, N- (alquil ) piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homopiperidinilo, u homomorfolinilo ; R16 es hidrógeno o alquilo; R17 es hidrógeno, alquilo, o cicloalquilo; y X es metileno, un enlace, o está ausente; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I en la que R1 es CONR6R7; R6 es alquil-S02, cicloalquil-S02, haloalquil-S02, (R9)2NS02, o (R10)SO2; y R7 es hidrógeno.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I en la que R2 es pirazolilo sustituido con 1 sustituyente seleccionado de ciclopropilo, ciclobutilo, N-alquilpiperidin-4-ilo, 3-alquilpiridin-4-ilo, y tetrahidropiran-4-ilo, 1 sustituyente seleccionado de CON(R12)2 y COR13, y 1 sustituyente alquilo.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I en la que R3 es hidrógeno.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I en la que R3 es metoxi .
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I en la que R4 es ciclohexilo.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I en la que R6 es (R9) (R10)NSO2 o (R11)S02.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I en la que X es metileno.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I en la que X es un enlace.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I en la que X está ausente.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I de acuerdo con la siguiente estereoquímica.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I de acuerdo con la siguiente estereoquímica.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I de acuerdo con la siguiente estereoquímica.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I de acuerdo con la siguiente estereoquímica.
R2 Para un compuesto de fórmula I, el alcance de cualquier ejemplo de un sustituyente variable > incluyendo R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 , R8, R9 , R10, R11, R12 , R13 , R14 , R15 , R16 , R17, y X, se puede usar independientemente con el alcance de cualquier otro caso de un sustituyente variable. Como tal, la invención, incluye combinaciones de los diferentes aspectos.
A menos que se especifique lo contrario, estos términos tienen los siguientes significados. "Alquilo" quiere decir un grupo alquilo lineal o ramificado compuesto de 1 a 6 carbonos. "Alquenilo" quiere decir un grupo alquilo lineal o ramificado compuesto de 2 a 6 carbonos con al menos un enlace doble. "Alquinilo" quiere decir un grupo alquilo lineal o ramificado compuesto de 2 a 6 carbonos con al menos un enlace triple. "Cicloalquilo" quiere decir un sistema de anillo monocíclico compuesto de 3 a 7 carbonos. "Haloalquilo" y "haloalcoxi" incluye todos los isómeros halogenados de monohalo a perhalo. Los términos con un resto de hidrocarburo (por ejemplo alcoxi) incluyen isómeros lineales y ramificados para la parte de hidrocarburo. Se pretende que los términos parentéticos y multiparentéticos aclaren las relaciones de unión a los expertos en la técnica. Por ejemplo, un término tal como ( (R) alquilo) quiere decir un sustituyente alquilo sustituido adicionaltnente con el sustituyente R.
La invención incluye todas las formas de sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos. Las sales farmacéuticamente aceptables son aquellas en las que los contraiones no contribuyen significativamente a la actividad fisiológica o a la toxicidad de los compuestos y como tales funcionan como equivalentes farmacológicos. Estas sales se pueden preparar de acuerdo con técnicas orgánicas comunes empleando reactivos disponibles comercialmente . Algunas formas salinas aniónicas incluyen acetato, acistrato, besilato, bromuro, cloruro, citrato, fumarato, glucuronato, bromhidrato, clorhidrato, yodhidrato, yoduro, lactato, maleato, mesilato, nitrato, pamoato, fosfato, succinato, sulfato, tartrato, tosilato, y xinofoato. Algunas formas de sales catiónicas incluyen amonio, aluminio, benzatina, bismuto, calcio, colina, dietilamina, dietanolamina, litio, magnesio, meglumina, 4-fenilciclohexilamina, piperazina, potasio, sodio, trometamina, y cinc.
Algunos de los compuestos de la invención poseen átomos de carbono asimétricos (véase, por ejemplo, el compuesto más adelante) . La invención incluye todas las formas estereoméricas , incluyendo enantiómeros y diastereómeros así como mezclas de estereoisómeros tales como racematos . Algunos estereoisómeros se pueden preparar usando procedimientos conocidos en la técnica. Las mezclas estereoméricas de los compuestos e intermedios relacionados se pueden separar en isómeros individuales de acuerdo con los procedimientos conocidos comúnmente en la técnica.
Procedimientos de Síntesis Los compuestos se pueden preparar mediante procedimientos conocidos en la técnica que incluyen aquellos descritos más adelante e incluyen variaciones dentro de la habilidad en la técnica. Algunos reactivos e intermedios se conocen en la técnica. Otros reactivos e intermedios se pueden preparar por procedimientos conocidos en la técnica usando materiales disponibles. Las variables (por ejemplo sustituyentes "R" numerados) usadas para describir la síntesis de los compuestos pretenden sólo ilustrar como preparar los compuestos y no están para confundirse con variables usadas en las reivindicaciones o en otra sección de la memoria descriptiva. Los siguientes procedimientos son para propósitos ilustrativos y no se desean para limitar el alcance de la invención.
Las abreviaturas usadas en los esquemas siguen generalmente convenciones usadas en la técnica. Las abreviaturas químicas usadas en la memoria descriptiva y en los ejemplos se definen como sigue: "NaHMDS" para bis (trimetilsilil) amida de sodio; "DMF" para ?,?-dimetillformamida; "MeOH" para metanol; " BS" para N-bromosuccinimida; "Ar" para arilo; "TFA" para ácido trifluoroacético; "LAH" para hidruro de litio aluminio; "BOC" , "DMSO" para dimetilsulfóxido; "h" para horas; "rt" para temperatura ambiente o para tiempo de retención (el contexto dictará) ; "min" para minutos; "EtOAc" para acetato de etilo; "THF" para tetrahidrofurano; "EDTA" para ácido etilenodiaminatetraacético; "Et20" para éter dietílico; "D AP" para 4-dimetilaminopiridina; "DCE" para 1, 2-dicloroetano; "AC " para acetonitrilo; "DME" para 1 , 2-dimetoxietano; "HOBt" para hidrato de 1-hidroxibenzotriazol; "DIEA" para diisopropiletilamina, "Nf" para CF3 (CF2) 3S02- ; y "TMOF" para trimetilortoformiato .
Las abreviaturas como se usan en el presente documento, se definen como sigue: "1 x" para una vez, "2 x" para dos veces, "3 x" para tres veces, "°C" para grados Celsius, "eq" para equivalente o equivalentes, "g" para gramo o gramos, "mg" para miligramo o miligramos, "L" para litro o litros, "mi" para mililitro o mililitros, "µ?" para microlitro o microlitros, "N" para normal, "M" para molar, "mmol" para milimol o milimoles, "min" para minuto o minutos, "h" para hora u horas, "rt" para temperatura ambiente, "RT" para tiempo de retención, "atm" para atmósfera, "psi" para libras por pulgada cuadrada, "conc." para concentrado, "sat" o "satd " para saturado, "M " para peso molecular, "mp" para punto de fusión, "ee" para exceso enantiomérico, "EM" o "Mass Spec" para espectrometría de masas, "ESI" para espectroscopia de masas de ionización por electropulverización, "HR" para alta resolución, "HREM" para espectroscopia de masas de alta resolución, "CLEM" para espectrometría de masas de cromatografía líquida, "HPLC" para cromatrografía líquida de alta presión, "RP HPLC" para HPLC de fase reversa, "TLC" o "tic" para cromatografía en capa fina, "RMN" para espectroscopia de resonancia magnética nuclear, h1H" para protón, "d" para delta, "s" para singlete, "d" para doblete, "t" para triplete, "q" para cuartete, "m" para multiplete, "br" para ancho, "Hz" para hertzio (s), y "a", "ß", "R" , "S" , "E" , y "Z" son designaciones estereoquímicas familiares para alguien experto en la técnica. 13-Ciclohexil-6- ( (2E,Z) -3- (dimetilamino) -2- (etoxicarbonil) -2 -propenoil) -3-metoxi-7H-indolo [2,1- a] [2] benzacepin-10-carboxilato de terc-butilo Se disuelve 13-ciclohexil-6- (3-etoxi-3-oxopropanoil) -3- metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxilato de terc- butilo (1,63 g, 2,92 mmol) en dimetilacetal N,N- dimetilformamida (7,0 ml , 52,7 mmol) en un matraz de fondo redondo de 5.0 ml . Se coloca la reacción en una atmósfera de nitrógeno y se calienta en baño de aceite sometiendo a reflujo (110°C) durante 2,75 horas. Enfriar la reacción en una atmósfera de nitrógeno después eliminar volátiles a vacío' usando un evaporador rotatorio obteniendo una espuma naranja. El análisis de TLC (placa de Si02, elución - éter dietílico al 50% en hexanos) confirmó que la reacción está completa. Se secó la muestra a vacío a temperatura ambiente durante toda una noche produciendo 1,87 g del intermedio enamina una espuma ambarina naranja que se usa en la siguiente etapa sin cualquier purificación adicional.
LC-EM de enamina intermedia: Tiempo de retención de LC-EM 2,81 min; 613 m/z (MH+) . Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 2 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 3 min donde el disolvente A fue 10% de MeOH /90% de H20 /0,1% de ácido trifluoroacético y el disolvente B fue 10% de H20 /90% de MeOH/0,1% de ácido trifluoroacético . Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización .
Ester 1, l-dimetiletílico del ácido 13-ciclohexil-6- [4- (etoxicarbonil) -1- (l-metil-4-piperidinil) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico En un recipiente de microondas de 5 mi se suspendió lohexil-6- ( (2E, Z) -3- (dimetilamino) -2- (etoxicarbonil) -2- propenoil) -3-metoxi-7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-10-carboxilato de terc-butilo (500 mg, 0,816 mmol) en etanol (2,5 mi) y 1 , 4-dioxano (0,65 ml) . Se añadió a la reacción diclorhidrato de 4-hidrazinil-l-metilpiperidina (173,6 mg, 0,859 mmol) y trietilamina (0,341 ml , 2,448 mmol). El recipiente de microondas se cubrió con una atmósfera inerte de nitrógeno y la reacción se calentó a 160 °C durante 40 minutos. La reacción se combinó con experimentos previos funcionó bajo condiciones experimentales idénticas. La mezcla se diluyó con acetato de etilo y se lavó con ácido clorhídrico acuoso 1,0 N. Las fases acuosas ácidas se combinaron y se volvieron a extraer una vez usando acetato de etilo. Las fracciones de acetato de etilo se combinaron y lavaron secuencialmente con bicarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y el disolvente se eliminó a vacío obteniéndose una espuma naranja-ambarina. El producto en bruto se adsorbió sobre 3,1 g de gel de sílice usando diclorometano después se sometió a cromatografía en 34,7 g de suspensión de gel de sílice empaquetado en metanol al 2% en mezcla de disolvente de diclorometano. El producto se eluyó usando un gradiente de metanol al 2% en diclorometano frente a metanol al 5% en diclorometano.
Las fracciones de producto puras se combinaron y el disolvente se eliminó a vacío usando un evaporador rotatorio. El producto se secó después a vacío a temperatura ambiente obteniéndose 753 mg (62%) del compuesto del título como un sólido amorfo amarillo.
RMN de ? (500 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 1,23 - 1,30 (m, 1 _ H) 1,31 - 1,36 (m, 3 H) 1,36 - 1,53 (m, 5 H) 1,56 (s, 9 H) 1,58 - 1,74 (m, 4 H) 1,78 (d, J=10, 99 Hz , 2 H) 1,91 - 2,00 (m, 5 H) 2,00 - 2,14 (m, 4 H) 2,18 (d, J=10,99 Hz, 1 H) 2,61 (d, J=10,68 Hz, 1 H) 2,83 - 2,92 (m, 1 H) 2,97 (t, .7=11,60 Hz , 1 H) 3,90 (s, 3 H) 4,30 (d, J=5,80 Hz , 2 H) 4,68 (d, J=14,65 Hz, 1 H) 4,92 (d, J=14,95 Hz, 1 H) 6.67 (s, 1 H) 6,93 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 7,07 (dd, .7=8,55, 2,75 Hz , 1 H) 7,52 (d, J=8,55 Hz , 1 H) 7,64 (dd, J=8,55, 1,22 Hz, 1 H) 7,79 (s, 1 H) 7,82 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,92 (s, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM: 2,77 min; 679 m/z (MH+) . Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . Ácido 13-ciclohexil-6- [4- (etoxicarbonil) -1- (l-metil-4-piperidinil) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-10 -carboxilico Se añadió ácido 13-ciclohexil-6- [4- (etoxicarbonil) -1- (1-metil-4-piperidinil) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico (744 mg, 1,096 mmol) a 1,2-dicloroetano (5,5 mi), después se añadió TFA (5,50 mi) a la reacción. La reacción se agitó en una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante 2 horas. Los volátiles se eliminaron a vacío a partir de la reacción usando un evaporador rotatorio. El producto resultante como una espuma ambarina se disolvió en diclorometano y se añadió benceno. Los volátiles se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio. El procedimiento de disolución en diclorometano/benceno y la eliminación se repitió para ayudar en la eliminación de TFA libre en la reacción. El producto como una espuma ambarina se secó a vacío a temperatura ambiente durante toda una noche produciendo 920 mg del compuesto del título como un sólido amarillo amorfo.
RMN de XH (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 0,58 - 0,68 (m, 0,4 H) 0,75 (d, J=14,04 Hz, 0,6 H) 1,03 - 1,14 (m, 1,0 H) 1,16 - 1,27 (m, 0,8 H) 1,28 - 1,41 (m, 4,6 H) 1,42 - 1,54 (m, 2,4 H) 1,64 (d, J=14,04 Hz, 0,6 H) 1,73 - 1,87 (m, 2,2 H) 1,88 - 2,25 (m, 6,5 H) 2,26 - 2,39 (m, 0,6 H) 2,43 - 2,56 (m, 2,1 H) 2,69 (s, 1,2 H) 2,82 (t, J=12,36 Hz, 0,5 H) 2,94 (c, J=ll,90 Hz, 1,6 H) 3,06 (d, J=10,07 Hz, 0,6 H) 3,26 (d, .7=9,77 Hz, 0,4 H) 3,51 (d, J=10,99 Hz,. 1,1 H) 3,64 (s, 0,4 H) 3,85 - 3,98 (m, 3,2 H) 4,25 - 4,40 (m, 2,0 H) 4,73 (d, J=14,95 Hz, 0,9 H) 4,95 (d, J=15,26 Hz, 0,9 H) 5,98 TFA/H20 (s, 4,3 H) 6,67 - 6,76 (m, 1,0 H) 6,94 (d, J=2,14 Hz, 0,4 H) 6,97 (d, .7=2,44 Hz , 0,6 H) 7,06 - 7,13 (m, 1,0 H) 7,52 (dd, J=8,70, 3,20 Hz , 1,0 H) 7,75 (d, J=8,85 Hz, 0,5 H) 7,81 (d, J=8,55 Hz , 0,6 H) 7,85 (s, 0,5 H) 7,88 - 7,94 (m, 1,4 H) 7,96 (d, J=6,41 Hz, 1,2 H) 11,20 (s, 0,4 H) 11, 60 (s, 0,5 H) .
Tiempo de retención de LC-EM: l,57min,- 621 m/z (MH-). Los datos de LC se registraron en un cromatografo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna de EM 7u C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización .
Ester etílico del ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (l-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-6-il] -1- (l-metil-4 -piperidinil) -lH-pirazolo-4-carboxílico Se disuelve en un matraz de fondo redondo de 50 mi TFA del ácido 13-ciclohexil-6- [4- (etoxicarbonil ) -1- (l-metil-4-piperidinil) - lH-pirazol -5 - il] -3 -metoxi -7H- indolo [2,1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico (730 mg, 0,991 mmol) en THF (10 mi) . Se añade CDI a la reacción (406 mg, 2,507 mmol) y se agita la reacción a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante' 1 hora. Se calienta la reacción a reflujo en una atmósfera de nitrógeno durante 1 hora y se añade propano-2-sulfonamida (648 mg, 5,26 mmol) seguida por DBU (450 µ? , 2,99 mmol) . La reacción se situó de nuevo en una atmósfera de nitrógeno y se calentó a 70 °C durante toda una noche. La reacción se diluyó con acetato de etilo (aprox. 150 mi) y se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico acuoso 1,0 N (2 x 50 mi) y salmuera. La fase orgánica se secó con sulfato de magnesio seco después se filtró. Para asegurar la formación de sal clorhidrato completa, se añadieron aproximadamente 10 mi de cloruro de hidrógeno 2,0 N en éter dietílico al filtrado después se eliminaron los volátiles a vacío usando un evaporador rotatorio. Se disolvió el residuo en benceno y los volátiles se eliminaron a vacío. El producto en bruto se secó a vacío dando 1,07 g de producto como una espuma amarilla/película amorfa. El producto en bruto se usó como estaba en síntesis adicional.
Tiempo de retención de LC-EM: 1,68 min; 726 m/z (MH-) . Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . La muestra presentó un pico pequeño (-6%) a 220 nm con m/e= 744 (MH+) esto pudo ser una impureza de oxidación (Peso Molecular principal + 16 unidades de masa) , tiempo de retención= 1,50 minutos.
Caracterización del compuesto del título aislado a partir de reacción a pequeña escala realizada bajo condiciones similares a las anteriores: aislamiento por HPLC de fase inversa: purificado en un sistema de cromatografía líquida de alta presión de Shimadzu que emplea software de Discovery VP conectado con un controlador SCL-10A, un automuestreador SIL-10A y un recolector de fracciones de FRC-10A. La muestra se disolvió en acetonitrilo/DMF (1:1) (4 mi) purificado usando una columna Phenomenex Luna C18 30 x 100 mm 10 u y se sometió a seguimiento usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda del detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 40 ml/min, un gradiente de disolvente A al 80%/disolvente B al 20% a disolvente A al 0%/disolvente B al 100%, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de funcionamiento de 20 minutos usando sistema disolvente de %A= acetato de amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 95:5 % de B=acetato de amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 95:5. El compuesto del título se recogió entre 10,4 y 11,4 minutos. La fracción del producto se combinó y los volátiles se eliminaron a vacío. La sal de ácido trifluoroacético se formó disolviendo el producto en diclorometano (-12 mi) y filtrando usando filtro de 0,45 µ? autovial de Whatman, añadiendo después TFA (35 µ? , 0,454 mmol) después se eliminan los volátiles a vacío usando un evaporador rotatorio. El producto final se secó a vacío a temperatura ambiente. La RM de 1H presentó características de rotación restringida y/o formación de sal con ensanchamiento y escisión de picos de espectros.
RMN de H (500 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 0,43 - 0,65 (m, 1,4 H) 0,75 - 0,98 (m, 1,5 H) 1,02 - 1,32 (m, 6,2 H) 1,30 -1,57 (m, 12,8 H) 1,59 - 1,87 (m, 2,7 H) 1,89 - 2,19 (m, 6,3 H) 2,34 - 2,58 (m, 2,4 H) 2,68 (s, 1,7 H) 2,74 - 3,09 (m, 2,7 H) 3,23 (d, ^7=8, 55 Hz , 0,8 H) 3,53 (m, 1,8 H) 3,66 - 3,87 (m, 2,8 H) 3,88 - 3,93 (m, 3,8 H) 3,94 - 4,04 (m, 1,6 H) 4,22 - 4,41 (m, 2,0 H) 4,72 (d, J=14,95 Hz, 1,0 H) 4,94 (dd, J=14,65, 5,80 Hz, 1,0 H) 6,70 (d, J=7,63 Hz, 1,1 H) 6,88 - 7,01 (m, 1,1 H) 7,04 - 7,15 (m, 1,1 H) 7,37 (d, J=8,24 Hz, 0,6 H) 7,48 - 7,59 (m, 1,5 H) 7,73 (s, 0,6 H) 7,85 - 7,94 (m, 2,6 H) 8,87 (s, 0,5 H) 11, 13 - 12, 06 (m, 0,9 H) .
Tiempo de retención de LC-EM: 1,71 min; 726 m/z (MH-). Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4· min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . Ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] enzacepin-6-il] -1- (l-metil-4-piperidinil) -lH-pirazol-4-carboxílico Se disolvió sal clorhidrato del áster etílico del ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (l-metil-4-piperidinil) -lJí-pirazol-4-carboxílico (0,87 g, 1,138 mmol) en THF (12 mi) y se añadió metanol (12 mi) a la reacción seguido por hidróxido de sodio acuoso 1 N (12 mi, 12,00 mmol) . La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 19 horas. La mezcla se diluyó con acetato de etilo y se lavó con ácido clorhídrico acuoso 1,0 N. Las fases acuosas se combinaron y se volvieron a extraer con acetato de etilo (2 x 75 mi) . Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato de magnesio y se filtraron. Al filtrado amarillo se añadieron 10 mi de cloruro de hidrógeno 2,0 M en éter dietílico, se eliminaron después volátiles a vacío usando un evaporador rotatorio. El producto se disolvió en diclorometano y benceno, después los volátiles se eliminaron a vacío dando un aceite roj izo-naranja . El producto se disolvió de nuevo en diclorometano y el disolvente se retiró a vacío dando una espuma naranja lo que produjo 799 mg después de secar a vacío a temperatura ambiente.
Tiempo de retención de LC-EM: 1,14 min; 698 m/z ( H-). Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna [COLUMNA de LC] usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . 13 -Ciclohexil-6- [4- (3 , 7 -dioxa- 9-azabiciclo [3.3.1] non- 9-ilcarbonil) -1- (l-metil-4-piperidinil) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-W- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida Se disolvió sal HCl del ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (l-metil-4-piperidinil) -líí-pirazol-4-carboxílico, (64 mg, 0,087 mmol) en DMF (869 µ?) y se añadió HATU (111 mg, 0,292 mmol) a la reacción. La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 1,3 horas. Se añadió DMAP (55,9 mg, 0,458 mmol) a la reacción seguida por el reactivo de amina, clorhidrato de 3 , 7-dioxa-9-azabiciclo [3.3.1] nonano (37,5 mg, 0,226 mmol). La reacción se cubrió de nuevo con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche (16 horas) .
El producto se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión empleando software Discovery VP conectado con un controlador SCL-10A, un automuestreador SIL-10A y un recolector de fracciones FRC-10A. La mezcla de reacción se disolvió en mezcla acetonitrilo/DMF (volumen total= 4ml) y se purificó usando una columna Waters Sunfire Prep C18 OBD, 5 µ? 19 mm x 100 mm y se sometió a seguimiento usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 25 ml/min, un gradiente de disolvente A al 80%/disolvente B al 20% a disolvente A al 0%/disolvente B al 100%, un tiempo de gradiente de 15 minutos con un tiempo de funcionamiento de 20 minutos usando sistema disolvente de % de A=10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA % de B=90% de acetonitrilo, 10% de agua, 0,1% de TFA. Tiempo de retención del producto= 6,5 minutos. Los volátiles se eliminaron a partir de las fracciones del producto a vacío y la muestra se transfirió a un vial usando diclorometano y volátiles eliminados bajo un barrido de nitrógeno. El producto se secó a vacío a temperatura ambiente proporcionando un sólido amorfo amarillo. Los análisis de HPLC preliminares indicaron que la purificación adicional sería deseable. La muestra se purificó adicionalmente en un sistema de cromatografía líquida de alta presión de Shimadzu empleando software de Discovery VP conectado con un controlador SCL-10A, un automuestreador de SIL-10A y un recolector de fracciones FRC-10A. La muestra se disolvió en acetonitrilo / DMF (1:1) (2 mi) se purificó usando una columna Phenomenex Luna C18 30 x 100 mm lOu y se sometió a seguimiento usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 40 ml/min, un gradiente de disolvente A al 80%/disolvente B al 20% a disolvente A al 0%/disolvente B al 100%, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de funcionamiento de 20 minutos usando sistema disolvente de % de A=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 95:5 % de B=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 5:95%. El producto presentó picos rotaméricos con tiempo de retención de 8,5 minutos y un pico con forma de hombro a los 8,9 minutos. Las fracciones de producto puras se combinaron y el disolvente se eliminó a vacío usando un evaporador rotatorio. Situar el producto amarillo pálido blanquecino en una bomba de vacío y secar a vacío durante aproximadamente 1 hora, después disolver en diclorometano y transferir a un matraz con forma de pera de 25 mi, añadir TFA (30 µ? , 0,389 mmol) , después eliminar volátiles a vacío usando un evaporador rotatorio. Transferir el producto a un vial de CMDD usando diclorometano, después concentrar usando un barrido de nitrógeno y finalmente eliminar el resto del disolvente a vacío usando un evaporador rotatorio. La muestra se secó a vacío a temperatura ambiente proporcionando 32,4 mg (40%) como una película amorfa amarilla.
RMN de ?? (500 MHz, CLOROFORMO-D) 5 ppm 1,13 - 1,30 (m, 1,4 H) 1,33 - 1,47 (m, 5,9 H) 1,50 (d, «7=6,41 "Hz, 2,7 H) 1,69 - 1,86 (m, 2,4 H) 1,89 - 2,02 (m, 2,6 H) 2,02 - 2,17 (m, 2,6 H) 2,24 - 2,77 (m, 4,5 H) 2,77 - 3,04 (m, 3,8 H) 3,09 - 3,54 (m, J=110,48 Hz, 5,5 H) 3,64 (d, J=46,08 Hz, 4,7 H) 3,93 (s, 3,0 H) 3,96 - 4,21 (m, 3,3 H) 4,43 (s, 4,7 H) 4,55 - 4,73 (m, 1,9 H) 4,75 - 4,94 (m, 1,7 H) 5,05 (s, 0,8 H) 6,81 (s, 1,0 H) 6,87 - 6,96 (m, 1,1 H) 7,09 - 7,17 (m, 1,1 H) 7,50 - 7,64 (m, 2,2 H) 7,64 - 7,78 (m, 1,6 H) 7,88 - 7,99 (m, 1,1 H) 10,20 (s, 0, 8 H) 11,46 (s, 1, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM: 1,46 min; 809 m/z (MH-) . Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . 13 -Ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -6- [1- (1-metil-4 -piperidinil) -4- (4-morfolinilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida Se disolvió sal HCl del ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (l-metil-4-piperidinil) -lH-pirazol-4-carboxílico (68 mg, 0,092 mmol) en DMF (924 µ?) y se añadió HATU (72,7 mg, 0,191 mmol) a la reacción. La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió DMAP (45,9 mg, 0,376 mmol) a la reacción seguido por el reactivo de amina, morfolina (24,2 µ?, 0,277 mmol) . La reacción se cubrió de nuevo con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche (18 horas) . La reacción se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión empleando software Discovery VP conectado con un controlador de SCL-10A, un automuestreador de SIL-10A y un recolector de fracciones FRC-10A. La muestra se disolvió en acetonitrilo/DMF (1:1) (2 mi) purificado usando una columna Phenomenex Luna C18 30 x 100mm 10u y se sometió a seguimiento usando un detector de UV-Vis de SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 40 ml/min, un gradiente de disolvente A al 80%/disolvente B al 20% a disolvente A al 0%/disolvente B al 100%, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de funcionamiento de 20 minutos usando sistema disolvente de % de A=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 95:5 % de B=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 5:95. El tiempo de retención del producto es 8,8 minutos. Se combinan las fracciones de producto y se eliminan los volátiles a vacío usando evaporador rotatorio conectado a una bomba de vacío. El producto se secó a vacío a temperatura ambiente durante aproximadamente 45 min después se transfirió a un matraz con forma de pera de 25 mi usando diclorometano y se añadió TFA (60 µ?, 0,779 mmol) . Los volátiles se eliminaron después a vacío en evaporador rotatorio y se secaron a vacío a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora antes de volver a disolver en aproximadamente 3 mi de diclorometano (turbio) filtrando después a través de un filtro de jeringa de 0,45 µ? y transfiriendo dentro de un vial. La solución se concentró usando un barrido de nitrógeno y se añadió TFA (15 µ? , 0,195 mmol) después se eliminaron volátiles a vacío en evaporador rotatorio proporcionando un sólido naranja que se secó a vacío a temperatura ambiente durante toda una noche dando 34,9 mg (55%) del compuesto del título. La RMN de protones del compuesto del título presenta ensanchamiento de los picos junto con características de rotación/confirmación restringida .
RMN de XH (500 MHz , CLOROFORyMO-D) d ppm 1,11 - 1,30 (m, 2,4 H) 1,32 - 1,54 (m, 10,1 H) 1,79 (d, J=9,77 Hz, 2,4 H) 1,87 - 2,18 (m, 6,5 H) 2,78 - 2,98 (m, 5,3 H) 3,05 - 3,21 (m, 1,6 H) 3,43 (s, 2,2 H) 3,59 (s, 2,5 H) 3,90 - 3,95 (m, 4,1 H) 3,96 - 4,14 (m, 5,4 H) 4,60 (d, J=14,95 Hz , 1,0 H) 4,87 (d, J=17,09 Hz, 0,9 H) 5,02 (s, 0,2 H) 6,71 - 6,85 (m, 1,0 H) 6,90 - 6,97 (m, 1,0 H) 7,08 - 7,16 (m, 1,0 H) 7,50 - 7,63 (m, 2,2 H) 7,67 (d, .7=6,10 Hz, 1,5 H) 7,94 (d, J=8,24 Hz, 0,3 H) 10,13 (s, 1 H) 11,41 (s , 0,6 H) .
Tiempo de retención de LC-EM : 1,49 min; 767 m/z (MH-). Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . 13-Ciclohexil-3-metoxi-6- [4- [ (3-metil-3 , 8- diazabiciclo [3.2.1]oct-8-il) carbonil] -1- (l-metil-4- piperidinil) -lH-pirazol-5-il] -N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H- indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida Se disolvió sal HCl de 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -??- indolo [2,1- a] [2]benzacepin-6-il] -1- (l-metil-4-piperidinil) -lH-pirazol-4- carboxílico (71,2 mg, 0,097 mmol) en DMF (967 µ?) y se añadió HATU (82,2 mg, 0,216 mmol) a la reacción. La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió DMAP (64,5 mg, 0,528 mmol) a la reacción seguido por el reactivo de amina, diclorhidrato de 3-metil-3 , 8-diazabiciclo [3.2.1] octano (82,4 mg, 0,414 mmol) . Nota: se añadió exceso de amina a la reacción, por lo tanto se añadió una cantidad adicional de DMAP (50 mg, 0,409 mmol) para compensar por la sal diclorhidrato de la amina. La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente (17 horas) .
La reacción se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión empleando - software Discovery VP ^ conectado con un controlador de SCL-10A, un automuestreador SIL-10A y un recolector de fracciones FRC-10A. La muestra se disolvió en acetonitrilo/DMF (3:1) (4 mi) se purificó usando una columna Phenomenex Luna C18 30 x 100mm lOu y se sometió a seguimiento usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 40 ml/min, un gradiente de disolvente A al 80%/disolvente B al 20% a disolvente A al 0%/disolvente B al 100%, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de funcionamiento de 20 minutos usando sistema disolvente de % de A=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 95:5 % de B=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 5:95. El tiempo de retención del producto es 9,3 minutos. Combinar fracciones de producto y eliminar volátiles a vacío usando un evaporador rotatorio usando una bomba de vacío. El producto se secó brevemente a vacío a temperatura ambiente y la sal de TFA se preparó disolviendo en diclorometano y añadiendo TFA (60 µ?, 0,779 mmol) . Los volátiles se eliminaron a vacío y la muestra se volvió a disolver en diclorometano, se filtró a través de un filtro de jeringa de 0,45 µ? y la solución se concentró. Se añadió una cantidad adicional de TFA (15,0 µ?, 0,195 mmol) a la solución del producto y los volátiles se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio obteniendo un sólido naranja. El compuesto del- título se secó a vacío a temperatura ambiente durante toda una noche proporcionando 35,8 mg (34%) como un sólido naranja amorfo.
R N de XH (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 0,68 - 1,29 (m, 3.6 H) 1,28 - 1,53 (m, 9,3 H) 1,61 (s, 1,2 H) 1,79 (d, .7=11,29 Hz, 2,2 H) 1,87 - 2,35 (m, 8,4 H) 2,38 - 2,74 (m, 4,1 H) 2,75 - 3,48 (m, 9,1 H) 3,73 (d, J=54,32 Hz , 2,6 H) 3,85 - 4,03 (m, 3.7 H) 4,46 - 4,98 (m, 3,3 H) 4,97 - 5,52 (m, 3,2 H) 6,75 (s, 0,6 H) 6,89 - 6,98 (m, 1,2 H) 7,06 - 7,16 (m, 1,0 H) 7,37 -7,81 (m, 3,4 H) 7,94 (dd, J=25,48, 8,09 Hz, 1,0 H) 8,10 (s, 0,4 H) 10,16 (s, 0,7 H) 11,53 (s, 0,9 H) 11,73 (s, 0,9 H) .
Tiempo de retención de LC-E : 1,59 min; 806 m/z (MH-). Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en de electropulverización . 13-Ciclohexil-6- [4- [[(2R,6S) -2, 6-dimetil-4- morfolinil] carbonil] -1- (l-metil-4-piperidinil) -lH-pirazol il] -3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2,1- a] [2] benzacepin-10-carboxamida Se disolvió sal HC1 del ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi- 10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2, 1- a] [2] benzacepin-6-il] -1- (l-metil-4-piperidinil) -lH-pirazol-4- carboxílico (73,6 mg, 0,100 mmol) en D F (1,000 mi) y se añadió HATU (84 mg, 0,220 mmol) a la reacción. La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 1,3 horas. Se añadió DMAP (50,3 mg, 0,412 mmol) a la reacción seguida por el reactivo de amina, (2R,6S)- 2 , 6-dimetilmorfolina (37,1 µ? , 0,300 mmol). La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche (16 horas) .
La reacción se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión de Shimadzu empleando software Discovery VP conectado con un controlador SCL-10A, un automuestreador SIL-10A y un recolector de fracciones FRC-10A. La reacción se diluyó en acetonitrilo/DMF (1:1) (2 mi) se purificó usando una columna Phenomenex Luna C18 30 x 100 mm lOu y se sometió a seguimiento usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 40 ml/min, un gradiente de disolvente A al 80%/disolvente B al 20% a disolvente A al 0%/disolvente B al 100%, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de funcionamiento de 20 minutos usando sistema disolvente de % de A=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 95:5 % de B=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 5:95. Las fracciones de producto puras se combinaron y el disolvente se eliminó a vacío usando un evaporador rotatorio. El producto se secó brevemente a vacío y después se disolvió en diclorometano y se añadió TFA (30 µ?, 0,389 mmol) . Los volátiles se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio. La muestra se volvió a disolver en aproximadamente 2 mi de diclorometano y se filtró a través de un filtro de jeringa de 0,45 µ? dentro de un vial. La solución del producto se concentró bajo un barrido de nitrógeno después se añadió TFA (15 µ?, 0,195 mmol) y los volátiles se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio que da como resultado una espuma naranja. El compuesto del título se secó a vacío a temperatura ambiente dando 33,1 mg de un sólido naranja.
RMN de ¾ (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 0,47 - 1,01 (m, 4,5 H) 1,00 - 1,33 (m, 3,5 H) 1,33 - 1,63 (m, 8,0 H) 1,79 (d, J=10,68 Hz, 1,9 H) 1,85 - 2,19 (m, 5,5 H) 2,20 (s, 1,0 H) 2,38 (s, 1,1 H) 2,58 (s, 1,4 H) 2,69 - 3,02 (m, 4,8 H) 3,14 (s, 2,1 H) 3,52 (d, J=75,38 Hz, 3,8- H) 3,84 - 3,98 (m, 2,7 H) 3,98 - 4,15 (m, 1,7 H) 4,21 - 4,71 (m, 5,1 H) 4,72 - 5,19 (m, 2,0 H) 6,78 (s, 1,0 H) 6,85 - 6,97 (m, 0,9 H) 7,07 - 7,19 (m, 0,9 H) 7,49 - 7,75 (m, 3,2 H) 7,92 (d, J=8,24 Hz, 1,0 H) 10,40 (s, 0, 8 H) 11, 66 (s, 1/0 H) .
Tiempo de retención de LC-EM: 1,65 min; 795 m/z (MH-).
Los datos de LC se registraron en un cromatografo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización; 13-Ciclohexil-6- (4- ( (3-hidroxi-3-metil-8-azabiciclo [3.2.1] oct-8-il) carbonil) -1- (l-metil-4-piperidinil) -lH-pirazol-5-il) -N- (isopropilsulfonil) -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamlda Se disolvió sal HCl del ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (l-metil-4-piperidinil) - lH-pirazolo-4 -carboxilico (72 mg, 0,098 mmol) en DMF (0,5 mi) y se añadió HATU (82 mg, 0,215 mmol) a la reacción. La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió DMAP (49,7 mg, 0,407 mmol) a la reacción seguido por el reactivo de amina, 3-metil-8-azabiciclo [3.2.1] octan-3 -ol (37,7 mg, 0,267 mmol) disuelto en DMF (0,5 mi) . La reacción se cubrió de nuevo con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche (16 horas) . El producto se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión de Shimadzu empleando software Discovery VP conectado con un controlador SCL-10A, un automuestreador SIL-10A y un recolector de fracciones FRC-10A.
La mezcla de reacción se diluyó con acetonitrilo y una pequeña cantidad de agua llevando a cabo solubilización de la muestra a un volumen total de 2 mi y se purificó usando una columna aters XTerra Prep EM C18 OBD, 5 µ?, 30 mm x 100 mm y se sometió a seguimiento usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 40 ml/min, un gradiente de disolvente A al 80%/disolvente B al 20% a disolvente A al 0%/disolvente B al 100%, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de funcionamiento de 20 minutos usando sistema disolvente de % de A=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 95:5 % de B=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 5:95. El producto presentó pico similar a rotamérico escindiéndose con tiempos de retención de 9,2 y 9,4 minutos. Las fracciones de producto puras se combinaron y el disolvente se eliminó a vacío usando un evaporador rotatorio. El producto se secó a vacío durante ~1 hora después se disolvió en diclorometano (~3 mi) y se filtró a través de un filtro de jeringa de 0,45 µ? Acrodisco usando una jeringa inyectora normal que se pre-aclaró usando diclorometano en un matraz de 35 mi. Se añadió TFA (30 µ?, 0,389 mmol) a la solución y se eliminaron los volátiles a vacío usando un evaporador rotatorio. La muestra se volvió a disolver en diclorometano y se transfirió dentro de un vial . La¦ solución se concentró usando un barrido de nitrógeno y los volátiles finales se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio. El compuesto del título se secó a vacío dando 40,0 mg (rendimiento aislado 43,7%) como un sólido naranja amorfo.
RM de H (500 MHz , CL0R0F0RM0-D) d ppm -0,25 (s, 0,6 H) 0,51 (S, 0,7 H) 1,04 (s, 2,7 H) 1,11 - 1,30 (m, 2,5 H) 1,30 - 1,60 (m, 13,1 H) 1,68 - 2,04 (m, 7,5 H) 2,03 - 2,13 (m, 2,3 H) 2.41 - 2,58 (m, 1,7 H) 2,76 (d, J=21,67 Hz, 1,2 H) 2,81 - 2,89 (m, 1,3 H) 2,93 (s, 1,9 H) 3,17 - 3,31 (m, J=9,16 Hz, 0,9 H) 3.42 (d, J=10,68 Hz, 0,8 H) 3,46 - 3,56 (m, 1,1 H) 3,62 (d, J=23,19 Hz, 1,4 H) 3,87 - 3,96 (m, 3,1 H) 3,97 - 4,11 (m, 1,6 H) 4,51 - 4,75 (m, 1,2 H) 4,84 (s, 0,8 H) 4,94 (d, J=15,56 Hz , 0,8 H) 4,98 - 5,17 (m, 1,3 H) 5,18 - 5,50 (m, 3,6 H) 6,65 -6,90 (m, 1,0 H) 6,92 (d, J=2,14 Hz, 1,0 H) 7,03 - 7,16 (m, 1,0 H) 7,44 - 7,60 (m, 1,3 H) 7,61 - 7,80 (m, 2,5 H) 7,90 (d, J=8,24 Hz, 1,2 H) 10,45 (s, 0,5 H) 11,21 (s, 0,6 H) .
Tiempo de retención de LC-EM: 1,59 min; 821 m/z (MH-). Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . 13-Ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -6- [1- (1-metil-4-piperidinil) -4- (3-oxa-9-azabiciclo [3.3.1] non- 9-ilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida Se disolvió sal HCl del ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi- 10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (l-metil-4-piperidinil) -lfí-pirazolo-4 -carboxílico (71,9 mg, 0,098 mmol) en DMF (1,0 mi) y se añadió HATU (82 mg, 0,215 mmol) a la reacción. La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió DMAP (49,7 mg, 0,407 mmol) a. la reacción seguido por el reactivo amina, clorhidrato de 3-oxa-9-azabiciclo [3.3.1] nonano (35,2 mg, 0,215 mmol). La reacción se cubrió de nuevo con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche (16 horas) .
El producto se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión de Shimadzu empleando software Discovery VP conectado con un controlador SCL-10A, un automuestreador SIL-10A y un recolector de fracciones FRC-lOA. La mezcla de reacción se diluyó con acetonitrilo a 2 mi y se purificó usando una columna Waters XTerra Prep EM C18 OBD, 5 µ?, 30 mm x 100 mm y se controló usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda del detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 40 ml/min, un gradiente del disolvente A al 80%/disolvente B al 20% a disolvente A al 0%/disolvente B al 100%, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de funcionamiento de 20 minutos usando sistema disolvente de % de A=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 95:5 % de B=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 5:95. El producto presentó escisión similar a rotamérica con tiempos de retención de 10,5 y .10,8 minutos. Las fracciones de producto puras se combinaron y los volátiles se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio. El producto se transfirió a un matraz de 25 mi con diclorometano después se añadió TFA (30 µ?, 0,389 mmol) por medio de una pipeta. La solución del producto fue desde un color amarillo hasta un color rojo anaranjado más oscuro. Los volátiles se eliminaron a vacío y el producto se transfirió a un vial en diclorometano. La solución del producto se concentró usando un barrido de nitrógeno después los volátiles restantes se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio. El compuesto del título se secó a vacío a temperatura ambiente produciendo 46,7 mg (51,8%) como un sólido amorfo naranja rojizo. El análisis por HPLC indicó que fue deseable purificación adicional.
La muestra se purificó adicionalmente en un sistema de cromatografía líquida de alta presión de Shimadzu empleando software de Discovery VP conectado con un controlador SCL-10A, un automuestreador SIL-10A y un recolector de fracciones FRC-10A. La muestra se disolvió en acetonitrilo (1 mi) y se purificó una columna de aters Sunfire Prep C18 OBD, 5 µ? 19 mm x 100 mm y se controló usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda del detector de 220 nM. Estas condiciones de elución emplearon un caudal de 25 ml/min, un gradiente de disolvente A al 80%/disolvente B al 20% a disolvente A al 0%/disolvente B al 100%, un tiempo de gradiente de 15 minutos con un tiempo de funcionamiento de 20 minutos usando sistema disolvente de % de A= 10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA % de B= 90% de acetonitrilo, 10% de agua, 0,1% de TFA. El tiempo de retención del producto es 8,4 minutos. Los volátiles se eliminaron de la fracción del producto a vacío usando un evaporador rotatorio. El producto se transfirió a un vial usando diclorometano, se concentró con un barrido de nitrógeno y el resto de los disolventes volátiles se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio. El compuesto del título se secó a vacío a temperatura ambiente proporcionando 26,0 mg (29%) como un sólido amorfo amarillo pálido.
R de H (500 MHz, CLOROFOR O-D) d ppm 1,09 - 1,28 (m, 2,7 H) 1,29 - 1,40 (m, 3,2 H) 1,45 (d, J=7,02 Hz, 5,5 H) 1,47 - 1,55 (m, 3,8 H) 1,77 (d, J=9,16 Hz, 3,0 H) 1,87 (d, J=15,87 Hz, 1,0 H) 1,97 (dd, J=10,99, 8,85 Hz, 2,4 H) 2,01 - 2,14 (m, 2,7 H) 2,21 (s, 1,0 H) 2,39 (d, J=26,55 Hz, 1,6 H) 2,56 (s, 1,4 H) 2,68 - 2,98 (m, 4,7 H) 3,05 (d, J=7,32 Hz, 0,9 H) 3,18 (d, J=28,08 Hz, 1,5 H) 3,38 (dd, J=55,39, 11,14 Hz, 2,4 H) 3,58 (s, 2,6 H) 3,94 (s, 3,4 H) 3,97 - 4,13 (m, 1,9 H) 4,44 -5,19 (m, 6,5 H) 6,75 - 6,84 (m, 1,0 H) 6,86 - 6,96 (m, 1,0 H) 7,13 (d, J=8,24 Hz, 1,0 H) 7,50 - 7,78 (m, 4,0 H) 7,91 (d, J=8,24 Hz, 1,2 H) 10,50 (s, 0,6 H) 11,72 (s, 0,7 H) .
Tiempo de retención de LC-EM: 1,71 min; 807m/z (MH-) .
Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización. 13-Ciclohexil-3-metoxi-6- [4-[[(2S)-2- (metoximetil) -4-morfolinil] carbonil] -1- (l-metil-4-piperidinil) -lH-pirazol-5-il] -N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-10 -carboxamida Se disolvió sal HCl del ácido 5- [13 -ciclohexil-3 -metoxi- 10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (l-metil-4-piperidinil) -lH-pirazolo-4-carboxílico (71,9 mg, 0,098 mmol) en DMF (1,0 mi) y se añadió HATU (82 mg, 0,215 mmol) a la reacción. La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió DMAP (46,6 mg, 0,381 mmol) a la reacción seguida por el reactivo de amina, clorhidrato de (S) -2- (metoximetil) morfolina (35,4 mg, 0,211 mmol). La reacción se cubrió de nuevo con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche (16 horas) .
El producto se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión de Shimadzu empleando software Discovery VP conectado con un controlador SCL-10A, un automuestreador SIL-10A y un recolector de fracciones FRC-lOA. La mezcla de reacción se diluyó con acetonitrilo a 2 mi y se purificó usando una Waters XTerra Prep E C18 OBD, 5 µ?, columna 30 mm x 100 mm y se sometió a seguimiento usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de receptor de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 40 ml/min, un gradiente de disolvente A al 80%/disolvente B al 20% a disolvente A del 0%/disolvente B al 100%, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de f ncionamiento de 20 minutos usando sistema disolvente de % de A=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 95:5 % de B=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 5:95. El producto presentó escisión rotamérica con tiempos de retención de 9,3 y 9,6 minutos. Las fracciones de producto se combinaron y los volátiles se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio. El producto se secó a vacío durante aproximadamente 1 hora después se disolvió en diclorometano (~4 mi) y se filtró a través de un filtro de jeringa de 0,45 µ? Acrodisco usando una jeringa inyectora normal que se preaclaró usando diclorometano. Se añadió TFA (30 µ? , 0,389 mmol) a la solución y los volátiles se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio. El producto se secó a vacío a temperatura ambiente proporcionando 40,9 mg (45,2%) como un sólido naranja amorfo.
RMN de ?? (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,00 - 1,30 (m, 2,7 H) 1,30 - 1,61 (m, 8,9 H) 1,79 (d, J=9,16 Hz, 2,3 H) 1,88 - 2,16 (m, 5,8 H) 2,24 - 2,65 (m, 3,9 H) 2,66 - 2,99 (m, 6,3 H) 2,98 - 3,53 (m, 9,3 H) 3,61 (s, 3,0 H) 3,90 - 3,95 (m, 3,0 H) 3,96 - 4,14 (m, 2,1 H) 4,59 (d, J"=18,62 Hz, 2,0 H) 4,68 -5,09 (m, 6,1 H) 6,75 - 6,85 (m, 1,1 H) 6,87 - 6,99 (m, 1,2 H) 7,12 (t, J=7,02 Hz, 1,1 H) 7,46 - 7,77 (m, 3,9 H) 7,82 - 8,01 (m, 1,3 H) 10,24 (s, 0,8 H) 11,30 (s, L, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM: 1,60 min; 811 m/z (MH-).
Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 10u C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización. 13-Ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -6- [1- (1-metil-4-piperidinil) -4- [ [ (3R, 5S) -3,4, 5- trimetil-1-piperazinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida Se disolvió sal HC1 del ácido 5 - [13 -ciclohexil -3 -metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (l-metil-4-piperidinil) -lH-pirazolo-4-carboxílico (71,7 mg, 0,097 mmol) en DMF (1,0 mi) y se añadió HATU (82 mg, 0,215 mmol) a la reacción. La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas . Se añadió DMAP (64,3 mg, 0,526 mmol) a la reacción seguida por el reactivo de amina, diclorhidrato de (2R, 6S) -1 , 2 , 6-trimetilpiperazina (42 mg, 0,209 mmol) . La solución de reacción naranja transparente se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche (16 horas) .
El producto se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión de Shimadzu empleando software Discovery VP conectado con un controlador SCL-10A, un automuestreador de SIL-10A y un recolector de fracciones FRC-10A. La mezcla de reacción se diluyó con acetonitrilo a 2 mi y se purificó usando una columna Waters XTerra Prep EM C18 OBD, 5 µ?, 30 mm x 100 mm y se sometió a seguimiento usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 40 ml/min, un gradiente de disolvente A al 80%/disolvente B al 20% a disolvente A del 0%/disolvente B al 100%, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de funcionamiento de 20 minutos usando sistema disolvente de % de A=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 95:5 % de B=Acetato de Amonio 10 mM en Agua/Acetonitrilo 5:95. El producto presentó un pico asimétrico con tiempo de retención de 9,0 minutos. Las fracciones del producto se combinaron y los volátiles se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio. El producto se secó a vacío durante ~1 hora después se disolvió en diclorometano (~3 mi) y se filtró a través de un filtro de jeringa de 0,45 µ? Acrodisco usando una jeringa inyectora normal que se preaclaró usando diclorometano en un matraz de 35 mi. Se añadió TFA (60 µ? , 0,779 mmol) a la solución y se eliminaron los volátiles a vacío usando un evaporador rotatorio. El compuesto del título se secó a vacío a temperatura ambiente proporcionando 41,4 mg (41%) de sólido amarillo-naranja amorfo .
RMN de JH (500 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 0,79 - 1,19 (m, 1 H) 1,24 (s, 1 H) 1,28 - 1,73 (m, 11 H) 1,81 (s, 2 H) 1,90 - 2,18 (m, 5 H) 2,20 - 2,71 (m, 5 H) 2,78 - 2,99 (m, 3 H) 2,98 - 3,79 (m, 7 H) 3,87 - 3,97 (m, 3 H) 4,00 (s, 1 H) 4,54 - 4,73 (m, 2 H) 4,92 (s, 4 H) 5,10 (d, J=15,26 Hz , 1 H) 6,74 - 6,89 (m, 1 H) 6,94 (d, J=2,14 Hz, 1 H) 6,98 -7,17 (m, 2 H) 7,39 - 7,63 (m, 2 H) 7,69 (d, J=7,93 Hz , 1 H) 7,82 - 8,14 (m, 2 H) 11,12 (s, 1 H) 11,45 (s, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM: 1,74 min; 808 m/z (MH-) . Los datos de LC se registraron en un cr.omatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización. Éster 1, 1-dimetiletílico del ácido 13-ciclohexil-6- [4-(etoxicarbonil) -1- (3 -metil-4-piridinil) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico Se suspendió 13-ciclohexil-6- ( (2E, Z) -3- (dimetilamino) -2- (etoxicarbonil) -2 -propenoil ) -3-metoxi-7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-10-carboxilato de terc-butilo (98,5 mg, 0,161 mmol) en etanol (504 µ?) y dioxano (126 µ?) . Se añadió trietilamina (68,2 µ? , 0,489 mmol) a la reacción seguida por clorhidrato de 4-hidrazinil-3-metilpiridina, 0,4 H20 (27,6 mg, 0,165 mmol) . La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se calentó en un microondas a 140 °C durante 40 minutos. La mezcla se diluyó con acetato de etilo y se lavó con ácido clorhídrico acuoso 1,0 N. La fase acuosa se volvió a extraer una vez usando acetato de etilo. Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron secuencialmente con bicarbonato de sodio saturado y salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y el disolvente se eliminó a vacío .
El producto se transfirió a -un vial usando diclorometano y el disolvente se retiró usando un barrido de nitrógeno. El producto se secó a vacío a temperatura ambiente proporcionando 0,114 g de una película amorfa naranja.
R de XH (500 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 1,18 (d, J=ll,29 Hz, 1 H) 1,25 (t, J=7,17 Hz, 2 H) 1,39 (t, J=7,02 Hz, 5 H) 1,45 - 1,58 (m, 3 H) 1,60 (s, 9 H) 1,62 - 1,66 (m, 1 H) 1,69 -1,86 (m, 3 H) 1,86 - 2,02 (m, 3 H) 2,02 - 2,08 (m, 5 H) 2,09 (s, 1 H) 2,68 - 2,77 (m, 1 H) 3,83 (s, 3 H) 4,37 (c, .7=7,02 Hz, 2 H) 4,67 (d, J=14,95 Hz, 1 H) 5,17 (d, J=14,65 Hz , 1 H) 5,67 (d, J=4,58 Hz, 1 H) 6,29 (s, 1 H) 6,73 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 6,98 (dd, J=8,55, 2,75 Hz, 1 H) 7,41 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 7,54 (d, J=5,19 Hz, 1 H) 7,71 (dd, J=8,39, 1,37 Hz, 1 H) 7,89 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,95 (s, 1 H) 8,16 (s, 1 H) 8,30 (s, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM 2,75 min; 673 m/z (MH+) . Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 rara usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0%. de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . Ácido 13-ciclohexil-6- [4- (etoxicarbonil) -1- (3 -metil-4 -piridinil) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico Se disuelve éster 1 , 1-dimetiletílico del ácido 13-. ciclohexil-6- [4- (etoxicarbonil) -1- (3-metil-4-piridinil) -1H-pirazol-5-il] -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico (1,233 g, 1,833 mmol) en 1 , 2 -dicloroetano (10 mi) después añadir ácido trifluoroacético (10,00 mi). La reacción se situó en una atmósfera de nitrógeno inerte y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Los volátiles se eliminaron a partir de una reacción a vacío usando un evaporador rotatorio. El producto se disolvió en aproximadamente 125 mi de acetato de etilo y se lavó dos veces con 75 mi de ácido clorhídrico de ácido clorhídrico 1,0 N acuoso. Las fases acuosas se combinaron y se volvieron a extraer con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinaron y se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y el disolvente se eliminó a vacío dando un sólido naranja amorfo. Para ayudar a la eliminación de trazas de agua, el producto se disolvió en diclorometano y se añadió benceno a la solución. Los volátiles se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio. El producto se re-disolvió en diclorometano y el disolvente se retiró a vacío dando una espuma naranja amorfa (1,28 g) .
Se purificó muestra de calidad analítica mediante HPLC en fase inversa: la muestra se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión de Shimadzu empleando software Discovery VP conectado con un controlador SCL-10A, un automuestreador de SIL-10A y un recolector de fracciones FRC-10A. La muestra (40 mg) se disolvió en acetonitrilo/DMF (1:1) (2 mi) se purificó usando una columna Waters Sunfire Prep C18 OBD, 5 µ?, 19 mm x 100 mm y se sometió a seguimiento usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 25 ml/min, un gradiente de disolvente A al 80%/disolvente B al 20% a disolvente A del 0%/disolvente B al 100%, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de funcionamiento de 25 minutos usando sistema disolvente de % de A=10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA % de B=90%— de acetonitrilo, 10% de agua, 0,1% de TFA.
El tiempo de retención del producto es 11,5 minutos. Eliminar los volátiles del producto a vacío usando un evaporador rotatorio, después transferir a un vial en diclorómetaño . El diclorometano se retiró usando un barrido de nitrógeno. El sólido amorfo amarillo se secó a vacío a temperatura ambiente durante toda una noche dando 24,7 mg del compuesto del título.
RMN de ¾ (500 MHz , CL0R0F0RM0-D) d ppm 1,10 - 1,23 (m, 1 H) 1,34 - 1,48 (m, 6 H) 1,77 (d, .7=6,71 Hz, 1 H) 1,82 (d, J=13,12 Hz, 1 H) 1,88 - 2,01 (m, 2 H) 2,01 - 2,15 (m, 2 H) 2,36 (s, 3 H) 2,71 - 2,80 (m, 1 H) 3,87 (s, 3 H) 4,41 (c, J=7,12 Hz, 2 H) 4,72 (d, J=15,56 Hz, 1 H) 5,05 (d, J=15,26 Hz, 1 H) 6,14 (d, J=5,80 Hz, 1 H) 6,55 (s, 1 H) 6,84 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 7,05 (dd, J-=8,55, 2,75 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,54 (d, J=5,80 Hz, 1 H) 7,83 (dd, J=8,39, 1,37 Hz, 1 H) 7,88 (s, 1 H) 7,94 (d, J=8,54 Hz , 1 H) 8,22 (s, 1 H) 8,56 (s, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM: 1,90 min; 615 m/z (MH-). Los datos de LC se registraron en un cromatografo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización .
Ester etílico del ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-6-il] -1- (3-metil-4-piridinil) -lH-pirazolo-4-carboxílico Se disuelve en un matraz de fondo redondo de 50 mi HCl de ácido 13 -ciclohexil - 6 - [4 - ( etoxicarbonil ) - 1 - ( 3 -met il -4 -piridinil) -lH-pirazol-5-il] - 3 -metoxi - 7H- indolo [2,1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico (776 mg, 1,188 mmol) en THF (11,9 mi) . Añadir CDI a la reacción (487 mg, 3,01 mmol) después agitar la reacción en una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción se calentó después a reflujo durante 45 minutos. La reacción se enfrió en una atmósfera de nitrógeno y se añadió propano-2-sulfonamida (766 mg, 6,22 mmol) seguido por DBU (0,537 mi, 3,56 mmol) y la reacción se calentó de nuevo a 70 °C en una atmósfera de nitrógeno durante 17 horas. La reacción se enfrió y se diluyó con acetato de etilo, se lavó con ácido clorhídrico acuoso 1,0 N. Dejando repasar precipita material de la fase orgánica. Descargar la fase acuosa y decantar mayoritariamente el sólido en el embudo separador. Los intentos para solubilizar el material por completo mediante adición de diclorometano y THF no fueron exitosos. Combinar las fases orgánicas y eliminar disolventes a vacío obteniendo 1,25 g como un sólido marronáceo amarillo similar a pasta. El material se purificó mediante trituración. El residuo de reacción sólido se calentó a reflujo en 20 mi de metanol después se añadieron 7 mi de agua desionizada. El material se dejó enfriar y reposar durante 1,5 horas después de filtrado. El precipitado de color mostaza se aclaró con una cantidad pequeña de agua al 15% en metanol (% v/v) . El producto se secó a vacío a temperatura ambiente dando 445 mg de un sólido amarillo mostaza. Se obtuvo una segunda cosecha de producto a partir de las aguas madres disolviendo con la adición de metanol y la concentración subsiguiente a vacío usando un evaporador rotatorio. El precipitado amarillo mostaza formado se filtró y se aclaró con una cantidad pequeña de mezcla de metanol al 30%/agua al 70% (v/v) , después se secó a vacío a temperatura ambiente proporcionando 238 mg de una segunda cosecha de producto.
RMN de ? (500 MHz , DMSO-D6 ) d ppm 0,66 - 0,90 (m, 1 H) 0,92 - 1,18 (m, 3 H) 1,18 - 1,27 (m, 5 H) 1,27 - 1,46 (m, 10 H) 1,65 - 1,78 (m, 3 H) 1,81 - 1,91 (m, 2 H) 1,93 -2,09 (m, 6 H) 2,60 - 2,70 (m, 1 H) 3,82 (s, 3 H) 3,84 -3,91 (m, 1 H) 4,10 - 4,35 (m, 2 H) 4,50 (d, J=14,65 Hz, 1 H) 5,05 (S, 2 H) 5,22 (d, J=14 , 34 Hz , 2 H) 6,26 (s, 1 H) 6,80 (s, 1 H) 7,01 (s, 1 H) 7,14 (dd, J=8,55, 2,75 Hz, 1 H) 7,41 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,62 (d, J=8,55 Hz , 2 H) 7,89 (d, J"=8,55 Hz, 1 H) 8,18 (s, 1 H) 8,28 (s, 2 H) 11,62 (s, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM: 1,95 min; 720 m/z (MH-). Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu . LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM . Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . Ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (3-metil-4-piridinil) -lH-pirazol-4-carboxílico Se disolvió clorhidrato del éster etílico del ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (3-metil-4-piridinil) -lH-pirazol-4 -carboxílico (238 mg, 0,314 mmol) en THF (3,3 mi) luego se añadieron metanol (3,3 mi) e hidróxido sódico (3,3 mi, 3,30 mmol) a la reacción. La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 19 horas. La reacción se diluyó con acetato de etilo (125 mi) y se lavó con ácido clorhídrico acuoso 1,0N. Las fases acuosas se reunieron y se volvió a extraer 1 vez con acetato de etilo. Las fases orgánicas se reunieron y se lavaron secuencialmente con ácido clorhídrico acuoso 1,0N y salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y el disolvente se eliminó a vacío. La muestra se secó a vacío a temperatura ambiente dando 232 mg de producto como un sólido naranja/ámbar amorfo.
Se purificó una pequeña muestra de calidad analítica por HPLC-de fase inversa. Los 80 mg de producto se purificaron en un sistema de cromatografía líquida de alta presión Shimadzu empleando software Discovery VP conectado a un controlador SCL-10A, automuestreador SIL-10A y recolector de fracciones FRC-10A. La muestra se disolvió en acetonitrilo / DMF (1:1) (2 mi) y se purificó usando una columna Waters Sunfire Prep C18 OBD, 5uM 19mm x 100mm y se controló usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220n . Las condiciones de elución emplearon un caudal de 25 mi / min, un gradiente de 80% de disolvente A /20% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de ejecución de 20 minutos usando % de A= 10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA % de B= 90% de acetonitrilo, 10% de. agua, 0,1% de TFA como sistema disolvente. El pico de producto eluyó como pico ancho recogido desde 9,97min a ll,18min. Se eliminaron los volátiles de las fracciones producto a vacío usando un Speed Vac con calor a baja potencia. El compuesto del epígrafe se aisló (49,8mg) como un sólidof amarillo amorfo. El resto del producto de reacción se llevó adelante en reacciones de acoplamiento de amida sin purificación posterior. La muestra de RMN de 1H se preparó por disolución en CDC13 (l,5ml) luego se añadió CD3OD (6 gotas) para conseguir la estabilización completa.
RM de H (500 MHz , CLOROFORMO-D/CD3OD) d ppm 1,06 - 1,20 (m, 1 H) 1,27 - 1,36 (m, 2 H) 1,36 - 1,44 (m, 7 H) 1,65 - 1,77 (m, 2 H) 1,81 - 1,94 (m, 2 H) -1,95 - 2,07 (m, 5 H) 2,60 - 2,73 (m, 1 H) 3,31 - 3,48 "(m, 9 H) 3,78 (s, 3 H) 3,92 - 4,01 (m, 1 H) 4,60 (d, J=14,95 Hz, 1 H) 5,12 (d, J=14,65 Hz, 1 H) 5,74 (d, J=5,19 Hz, 1 H) 6,32 (s, 1 H) 6,71 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 6,94 (dd, Hz , 1 H) 7,41 (d, J=5,19 Hz, 1 H) 7,54 (dd, J=8,55, 1,22 Hz, 1 H) 7,83 -7,89 (m, 2 H) 8,12 (s, 1 H) 8,20 (s, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM 1,23 min; 692m/z (MH-) Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . 13-Ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -6- [1-(3-metil-4-piridinil) -4- (4 -morfolinilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida Se disolvió clorhidrato del ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (3-metil-4-piridinil) -1H-pirazol-4 -carboxílico (69flmg, 0,095 mmol) en DMF (946 µ?) y se añadió HATU (81 mg, 0,213 mmol) a la reacción. La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió a la reacción DMAP (48,5 mg, 0,397 mmol) seguido por el reactivo amina, morfolina (25,0 µ? , 0,287 mmol) . La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 36 horas. El producto se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión Shimadzu empleando software Discovery VP conectado a un controlador SCL-10A, automuestreador SIL-10A y recolector de fracciones FRC-10A. La reacción se diluyó hasta 2ml con acetonitrilo y se purificó usando una columna Waters Sunfire Prep C18 OBD, 5uM 19mm x 100mm y se controló usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 25 mi / min, un gradiente de 80% de disolvente A /20% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de ejecución de 20 minutos usando % de A= 10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA % de B= 90% de acetonitrilo, 10% de agua, 0,1% de TFA como sistema disolvente. El tiempo de retención es 10,2 minutos. Los volátiles se eliminaron de las fracciones producto a vacío usando un Speed Vac con calor a baja potencia. El compuesto del epígrafe (48,9 mg) se aisló como un sólido amarillo amorfo, sal del ácido trifluoroacético .
R de XH (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,15 - 1,29 (m, 1 H) 1,33 - 1,45 (m, 2 H) 1,50 (d, J=6,71 Hz , 3 H) 1,54 (d, J=6,71 Hz, 3 H) 1,72 - 1,87 (m, 2 H) 1,88 - 2,11 (m, 4 H) 2,77 - 2,87 (m, 1 H) 3,33 (s, 6 H) 3,53 (s, 2 H) 3,87 (s, 3 H) 3,99 - 4,07 (m, 1 H) 4,49 (d, J=15,26 Hz, 1 H) 4,80 (d, J=14,95 Hz, 1 H) 6,25 (s, 2 H, TFA/H20) 6,71 (s, 1 H) 6,83 (s, 1 H) 6,97 (d, J"=4,88 Hz, 1 H) 7,07 (dd, J=8,55, 2,75 Hz , 1 H) 7,40 -7,51 (m, 3 H) 7,84 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,87 - 7,95 (m, 2 H) 8, 55 (s, 1 H) 9, 86 (s, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM 1,19 min; 761 m/z (MH-) Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un" caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . 13-Ciclohexil-3-metoxi-6- [4- [ (8-metil-3, 8-diazabiciclo [3 , 2 , 1] oct-3 -il) carbonil] -1- (3-metil-4-piridinil) -lH-pirazol-5-il] -N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida Se disolvió ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (3-metil-4-piridinil) -lH-pirazol carboxílico*HCl (71,0 mg, 0,097 mmol) en DMF (972 µ?) y se añadió HATU (81,5 mg, 0,214 mmol) a la reacción. La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió a la reacción DMAP (62,0 mg, 0,507 mmol) seguido por el reactivo de amina, diclorhidrato de 8-metil-3 , 8-diazabiciclo [3 , 2 , 1] octano (40,lmg, 0,201 mmol) . La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 36 horas. El producto se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión Shimadzu empleando software Discovery VP conectado a un controlador SCL-10A, automuestreador SIL-10A y recolector de fracciones FRC-10A. La reacción se diluyó hasta 2 mi con acetonitrilo y se purificó usando una columna aters Sunfire Prep C18 OBD, 5uM 19mm x 100mm y se controló usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 25 mi / min, un gradiente de 80% de disolvente A /20% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de ejecución de 20 minutos usando % de A= 10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA % de B= 90% de acetonitrilo, 10% de agua, 0,1% de TFA como sistema disolvente. El pico de producto parecía ser rotómero con división y ensanchamiento, el tiempo de retención es 6,18 a 7,33 minutos. Los volátiles se eliminaron de las fracciones producto a vacío usando un Speed Vac con calor a baja potencia. El compuesto del epígrafe (61,9 mg) se aisló como un sólido amarillo amorfo sal del ácido trifluoroacético .
RMN de ? (500 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 1,07 - 1,28 (m, 2 H) 1,37 (s, 3 H) 1,44 - 1,64 (m, 6 H) 1,79 (d, J=17,40 Hz , 3 H) 1,85 - 2,23 (m, 6 H) 2,47 (s, 3 H) 2,66 - 3,16 (m, 4 H) 3,49 (s, 3 H) 3,85 (s, 3 H) 3,94 (s, 1 H) 4,39 (s, 2 H) 4,91 (s, 2 H) 6,86 (s, 2 H) 6,94 - 7,19 (m, 2 H) 7,29 - 7,49 (m, 2 H) 7,64 - 8,13 (m, 3 H) 8,29 (s, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM 1,26 min; 800m/z (MH-) Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempCT'de retención de 1 min, y un tiempo de análisis, de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización. 13-Ciclohexil-3-metoxi-6- [4- [ [ (2S) -2- (metoximetil) -4 morfolinil] carbonil] -1- (3 -metil-4 -piridinil) -lH-pirazol-5 N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-1 carboxamida Se . disolvió ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (3-metil-4-piridinil) -lH-pirazol-4-carboxilico *HC1 (65,0 mg, 0,089 mmol) en DMF (890 µ?) y se añadió a la reacción HATU (77 mg, 0,203 mmol) . La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió a la reacción DMAP (49,4 mg, 0,404 mmol) seguido por el reactivo de amina, clorhidrato de (S) -2- (metoximetil) morfolina (34,7 mg, 0,207 mmol). La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante el fin de semana (65 horas) . El producto se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión Shimadzu empleando software Discovery VP conectado a un controlador SCL-10A, automuestreador SIL-10A y recolector de fracciones FRC-10A. La reacción se diluyó hasta 2ml con acetonitrilo y se purificó usando una columna aters Sunfire Prep C18 OBD, 5uM 19mm x lOOmm y se controló usando un detector de UV-Vis SPD-IOAV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 25 mi / min, un gradiente de 80% de disolvente A /20% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de ejecución de 20 minutos usando % de A= 10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA % de B= 90% de acetonitrilo, 10% de agua, 0,1% de TFA como sistema disolvente. El tiempo de retención del producto fue 10,4 minutos. Los volátiles se eliminaron de las fracciones producto a vacío usando un Speed Vac con calor a baja potencia. El compuesto del epígrafe (56,2 mg) se aisló como un sólido amarillo amorfo sal del ácido trifluoroacético .
RMN de 1H (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,10 - 1,29 (m, 1 H) 1,32 - 1,44 (m, 2 H) 1,52 (dd, ,7=21,82, 6,87 Hz, 6 H) 1,73 - 1,87 (m, 2 H) 1,88 - 2,12 (m, 4 H) 2,32 - 2,45 (m, 3 H) 2,82 (t, J=ll,75 Hz, 2 H) 3,12 - 3,42 (m, 5 H) 3,50 (s, 1 H) 3,68 (s, 1 H) 3,86 (s, 3 H) 3,99 - 4,12 (m, 1 H) 4,48 (d, J=14,95 Hz, 1 H) 4,72 - 4,92 (m, 1 H) 5,66 (d, J=l,53 Hz , 2 H) 6,41 -6,89 (m, 2 H) 6,96 (s, 1 H) 7,05 (dd, J=8,70, 2,59 Hz , 1 H) 7,45 (d, J=8,55 Hz, 2 H) 7,53 (s, 1 H) 7,80 - 7,92 (m, 2 H) 8,56 (s, 1 H) 9,90 (s, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM l,61min; 805m/z (MH-) Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . 13-Ciclohexil-6- [4- (3 , 7 -dioxa-9-azabiciclo [3,3,1] non- 9-ilcarbonil) -1- (3 -metil-4 -piridinil) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida Se disolvió ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1- metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H- indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (3-metil-4-piridinil) -lH-pirazol-4-carboxilico *HC1 (66,9 mg, 0,092 mmol) en DMF (916 µ?) y se añadió HATU (103 mg, 0,271 mmol) a la reacción. La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió DMAP (46,1 mg, 0,377 mmol) a la reacción seguido por el reactivo de amina, clorhidrato de 3 , 7-dioxa-9-azabiciclo [3 , 3 , 1] nonano (38,0 mg, 0,229 mmol). La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante el fin de semana (65 horas) . La reacción parecía ser heterogénea y un ensayo LCEM de la reacción indicó reacción incompleta. Se añadió HATU (70 mg, 0,184 mmol) y la reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. De nuevo se ensayó la reacción usando LC-EM y se observó el aducto de hidroxiazabenzotriazol del material de partida ácido. Se añadió DMF (100 µ?) a la reacción seguido por clorhidrato de 3 , 7 -dioxa- 9-azabiciclo [3 , 3 , 1] nonano (16,4 mg, 0,099 mmol) y luego DMAP (14,6 mg, 0,120 mmol). La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 42 horas. El producto se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión Shimadzu empleando software Discovery VP conectado a un controlador SCL-10A, automuestreador SIL-10A y recolector de fracciones FRC-10A. La reacción se diluyó hasta 4 mi con acetonitrilo y se añadieron unas pocas gotas de agua para solubilizar totalmente la mezcla. La reacción se filtró a través de un filtro de jeringa de 0,45 uM y la solución de filtrado se purificó usando una columna aters Sunfire Prep C18 OBD, 5uM 19mm x 100mm y se controló usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 25 mi / min, un gradiente de 80% de disolvente A /20% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de ejecución de 20 minutos usando % de A= 10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA % de B= 90% de acetonitrilo, 10% de agua, 0,1% de TFA como sistema disolvente. Se eliminaron los volátiles del disolvente de las fracciones producto a vacío usando un Speed Vac a potencia de calentamiento media. El compuesto del epígrafe (51,6mg) se aisló como un sólido amarillo amorfo sal del ácido trifluoroacético .
R N de ¾ (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,13 - 1,30 (m, 1 H) 1,32 - 1,45 (m, 2 H) 1,51 (dd, J=20,91, 6,87 Hz, 6 H) 1,73 - 1,86 (m, 2 H) 1,89 - 2,09 (m, 4 H) 2,44 (s, 3 H) 2,77 - 2,86 (m, 1 H) 3,68 (s, 3 H) 3,88 (s, 3 H) 3,91 - 4,11 (m, 5 H) 4,34 (s, 1 H) 4,51 (d, J=14,95 Hz , 1 H) 4,81 (d, J=14,95 Hz., 1 H) 6,77 (s, 1 H) 6,86 - 6,99 (m, 2 H) 7,08 (dd, J=8,70, 2,59 Hz, 1 H) 7,39 - 7,49 (m, 3 H) 7,78 (s, 1 H) 7,83 (d, J=8,24 Hz , 1 H) 7,87 (s, 1 H) 8,50 (s, 1 H) 9,80 (s, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM 1,55 min; 803 m/z (MH-) Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM.. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización 13-Ciclohexil-N- (isopropilsulfonil) -3-metoxi-6- (1- (3-metil-4 -piridinil) -4- (3 -oxa- 9-azabiciclo [3,3,1] non- 9 -ilcarbonil) -lH-pirazol-5-il) -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida Se disolvió ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1- metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (3-metil-4-piridinil) -lH-pirazol-4-carboxilico *HC1 (65,6 mg, 0,090 mmol) en DMF (898 µ?) y se añadió HATU (76,4 mg, 0,201 mmol) a la reacción. La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió DMAP (51,5 mg, 0,422 mmol) a la reacción seguido por el reactivo de amina, clorhidrato de 3-oxa-9-azabiciclo [3, 3 , 1] nonano (32,8 mg, 0,200 mmol) . La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante el fin de semana (65 horas) . El producto se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión Shimadzu empleando software Discovery VP conectado a un controlador SCL-10A, automuestreador SIL-10A y recolector de fracciones FRC-10A. La reacción se diluyó hasta 2ml con acetonitrilo y se purificó usando una columna Waters Sunfire Prep C18 OBD, 5uM 19mm x lOOmm y se controló usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 25 mi / min, un gradiente de 80% de disolvente A /20% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de ejecución de 20 minutos usando % de A= 10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA % de B= 90% de acetonitrilo, 10% de agua, 0,1% de TFA como sistema disolvente. El tiempo de retención del producto fue aproximadamente 12,0 minutos. Se eliminaron los volátiles de la fracción producto a vacío usando un Speed Vac a baja potencia calorífica. El compuesto del epígrafe (58,2 mg) se aisló como un sólido amarillo amorfo, sal del ácido trifluoroacético . El espectro de RMN de 1H presentó características de rotación restringida con ensanchamiento de picos y división de picos.
RMN de XH (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,12 - 1,30 (m, 1 H) 1,29 - 1,67 (m, 11 H) 1,79 (s, 4 H) 1,86 - 2,13 (m, 5 H) 2,41 (d, ^=16, 48 Hz, 4 H) 2,77 - 2,89 (m, 1 H) 3,31 - 3,81 (m, 4 H) 3,86 (d, J"=12,82 Hz, 3 H) 3,92 (d, J=ll,90 Hz, 0,6 H) 4,01 - 4,09 (m, 1 H) 4,37 - 4,56 (m, 1 H) 4,87 (dd, J=32 , 96, 14,65 Hz, 1 H) 5,82 (s, 2 H) 6,42 - 6,78 (m, 1 H) 6,83 - 6,97 (m, 1 H) 7,02 - 7,10 (m, 1 H) 7,41 - 7,62 (m, 3 H) 7,79 - 7,90 (m, 2 H) 8,55 (d, J=30,21 Hz, 1 H) 9,95 (s, 0,3 H) 10,21 (s, 0,4 H) .
Tiempo de retención de LC-EM l,80min; 801 m/z (MH-) Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . 13-Ciclohexil-6- [4- [ [ (2R, 6S) -2 , 6 -dimetil-4 -morfolinil] carbonil] -1- (3-metil-4-piridinil) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-N- [ (l-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida Se disolvió ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (3-metil-4-piridinil) -lH-pirazol-4-carboxílico *HC1 (65,5 mg, 0,090 mmol) en DMF (897 µ?) y se añadió a la reacción HATU (77,3 mg, 0,203 mmol). La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió DMAP (43,5 mg, 0,356 mmol) a la reacción seguido por el reactivo de amina, (2R, 6S) -2 , 6 -dimetilmorfolina (33,3 µ? , 0,269 mmol).
La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante el fin de semana (65 horas) . El producto se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión Shimadzu empleando software Discovery VP conectado a un controlador SCL-10A, automuestreador SIL-10A y recolector de fracciones FRC-10A. La reacción se diluyó hasta 2 mi con acetonitrilo y se purificó usando una columna Waters Sunfire Prep C18 OBD, 5uM 19mm x lOOmm y se controló usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 25 mi / min, un gradiente de 80% de disolvente A /20% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de ejecución de 20 minutos usando % de A= 10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA % de B= 90% de acetonitrilo, 10% de agua, 0,1% de TFA como sistema disolvente. El tiempo de retención del producto fue ll,8min.
Se eliminaron los volátiles de la fracción producto a vacío usando un Speed Vac a baja potencia calorífica. El compuesto del epígrafe (56,9 mg) se aisló como un sólido amarillo amorfo, sal del ácido trifluoroacético . El espectro de RMN de ?? presentó características de rotación restringida con ensanchamiento de picos y división de picos.
RMN de ? (500 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 0,79 - 0,98 (m, 2 H) 1,07 (s, 3 H) 1,14 - 1,30 (m, 2 H) 1,32 - 1,46 (m, 2 H) 1,52 (dd, .7=21,67, 6,71 Hz, 6 H) 1,73 - 1,87 (m, 2 H) 1,88 -2,12 (m, 4 H) 2,33 (s, 1 -H) 2,50 (s, 3 H) 2,78 - 2,90 (m, 1 H) 3,39 (s, 1 H) 3,56 (s, 1 H) 3,88 (s, 3 H) 3,98 - 4,10 (m, 1 H) 4,48 (s, 1 H) 4,76 (s, 1 H) 6,40 (s, 3 H) 6,70 (s, 1 H) 6,80 (s, 1 H) 6,97 (s, 1 H) 7,08 (dd, J=8,85, 2,75 Hz , 1 H) 7,35 - 7,50 (m, 2 H) 7,53 (s, 0,5 H) 7,69 (s, 0,4 H) 7,83 (d, J=5,19 Hz, 1 H) 7,88 (s, 1 H) 8,56 (d, J=48,83 Hz , 1 H) 9, 82 (s, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM 1,75 min; 789m/z ( H-) Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverizacion. 13-Ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -6- [1- (3-metil-4-piridinil) -4- [ [ (3R,5S) -3 , 4 , 5- trimetil-1-piperazinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida Se disolvió ácido 5- [13-ciclohexil-3 -metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (3-metil-4-piridinil) - lH-pirazol -4 -carboxílico *HC1 (66,4 mg, 0,091 mmol) en DMF (909 µ?) y se añadió a la reacción HATU (78,4 mg, 0,206 mmol) . La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas . Se añadió DMAP (61,4 mg, 0,503 mmol) a la reacción seguido por el reactivo de amina, diclorhidrato de (2R, 6S) - 1 , 2 , 6-trimetilpiperazina (40,4 mg, 0,201 mmol). La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante el fin de semana (65 horas) . El producto se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión Shimadzu empleando software Discovery VP conectado a un controlador SCL-10A, automuestreador SIL-10A y recolector de fracciones FRC-10A. La reacción se diluyó hasta 4ml con acetonitrilo con la adición de ácido clorhídrico acuoso 1,0N. La reacción se filtró a través de un filtro de jeringa de 0,45 uM y se purificó usando una columna Waters Sunfire Prep C18 OBD, 5uM 19mm x 100mm y se controló usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220n . Las condiciones de elución emplearon un caudal de 25 mi / min, un gradiente de 80% de disolvente A /20% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 20 minutos con un tiempo de ejecución de 20 minutos usando % de A= 10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA % de B= 90% de acetonitrilo, 10% de agua, 0,1% de TFA como sistema disolvente.
Se realizaron dos inyecciones de 2 mi para la purificación. El tiempo de retención del producto fue 6,0min. Se eliminaron los volátiles de las fracciones de producto a vacío usando un Speed Vac a baja potencia calorífica. El compuesto del epígrafe (60,4mg) se aisló como un sólido amarillo amorfo, sal del ácido trifluoroacético . El espectro de RMN de 1H mostró características de rotación restringida/formación de sal con ensanchamiento de picos y división de picos.
RMN de XH (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,12 - 1,29 (m, 1 H) 1,29 - 1,67 (m, 9 H) 1,72 - 1,87 (m, 1 H) 1,87 - 2,10 (m, 3 H) 2,31 (s, 2 H) 2,68 - 2,85 (m, 1 H) 2,91 (s, 2 H) 3,14 (s, 1 H) 3,42 (s, 1 H) 3,86 (s, 3 H) 3,92 - 4,09 (m, 1 H) 4,47 (d, J=13,73 Hz , 1 H) 4,72 - 4,91 (m, 1 H) 6,58 -6,93 (m, 2 H) 7,03 (d, J=8,24 Hz , 1 H) 7,33 - 7,72 (m, 4 H) 7,82 (d, J=7,93 Hz, 1 H) 7,89 (s, 1 H) 8,43 (s, 1 H) 9,72 (s, 1 H) 11,69 (s, 2 H) .
Tiempo de retención de LC-EM 1,61 min; 802m/z (MH-) Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM . Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . 13-Ciclohexil-6- [4 - [ (3 -hidroxi-3 -metil- 8 -azabiciclo[3,2,l]oct-8-il) carbonil] -1- (3-metil-4-piridinil) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida Se disolvió ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (3-metil-4-piridinil) -lH-pirazol-4-carboxilico *HC1 (69,2 mg, 0,095 mmol) en DMF (474 µ?) y se añadió a la reacción HATU (90 mg, 0,237 mmol) . La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió DMAP (52,8 mg, 0,432 mmol) a la reacción seguido por el reactivo de amina, clorhidrato de 3-metil-8-azabiciclo [3 , 2 , 1] octan-3-ol (44 mg, 0,248 mmol) disuelto en DMF (474 µ?) . La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 45 horas. La reacción se volvió heterogénea. Se añadieron acetonitrilo y una pequeña cantidad de agua a la reacción para conseguir solubilidad. Se filtró la mezcla de reacción de 2 mi a través de un filtro de jeringa de 0,45 uM y la solución de filtrado producto se purificó por HPLC de fase inversa. El producto se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión Shimadzu empleando software Discovery VP conectado a un controlador SCL-10A, automuestreador SIL-10A y recolector de fracciones FRC-lOA. La purificación de producto se llevó a cabo usando una columna Waters Sunfire Prep C18 OBD, 5uM 19mm x 100mm se controló usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 25 mi / min, un gradiente de 80% de disolvente A /20% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 15 minutos con un tiempo de ejecución de 20 minutos usando % de A= 10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA % de B= 90% de acetonitrilo, 10% de agua, 0,1% de TFA como sistema disolvente. El tiempo de retención del producto fue 8,63 minutos. Se eliminaron los volátiles de disolvente de la fracción producto a vacío usando Speed Vac a media potencia calorífica. El compuesto del epígrafe (42,8mg) se aisló como un sólido amarillo amorfo sal del ácido trifluoroacético . La forma de los picos del espectro de RM de 1H es bastante ancha, presentando divisiones de picos características de rotación restringida y/o formación de sal.
RMN de ¾ (500 MHz, CL0R0F0RM0-D) d ppm 1,04 (s, 2 H) 1,08 - 1,30 (m, 3 H) 1,31 - 1,47 (m, 3 H) 1,45 - 1,66 (m, 7 H) 1,77 (d, J=10,68 Hz, 4 H) 1,87 - 2,15 (m, 5 H) 2,27 (s, .1 H) 2,37 (s, 2 H) 2,74 - 2,87 (m, 1 H) 3,77 - 3,91 (m, 3 H) 3,98 -4,19 (m, 2 H) 4,41 - 4,83 (m, 3 H) 4,95 (s, 2 H) 6,22 - 6,85 (m, 3 H) 6,99 - 7,10 (m, 1 H) 7,40 - 7,49 (m, 1 H) 7,52 - 7,73 (m, 2 H) 7,77 - 7,91 (m, 1 H) 7,92 - 8,01 (m, 1 H) 8,39 - 8,78 (m, 2 H) 9,82 (s, 1 H) 10,55 (s, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM 1,68 min; 815 m/z (MH-) Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un . caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de retención de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10' mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . Éster 1, 1 -dimetiletílico del ácido 13-ciclohexil-6- [4-(etoxícarbonil) -1- (tetrahidro-2H-piran-4 -il) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi - 7H-indolo [2,1 -a] [2]benzacepin-10 -carboxílico Se añadieron secuencialmente TEA (0,136 mi, 0,979 mmol) y ( tetrahidro-2H-piran-4 - il ) hidrazina , HCl (49,8 mg, 0,326 mmol) a una mezcla del compuesto de partida (200 mg, 0,326 mmol) en EtOH (1 mi) y 1,4-dioxano (0,25 mi) en un tubo de proceso de microondas. La suspensión resultante se calentó a 160 °C durante 60 min. La reacción se controló por LC/EM. El producto bruto se diluyó con EtOAc y se lavó con H20. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (20 mi x2 ) y la fase orgánica, reunida se lavó con salmuera y se secó sobre Na2S04. Se concentró y el residuo se purificó por Biotage (Hex/EtOAc 4:1; columna 25+M) proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido amarillo claro (0,56g, 86%). EM-ESI m/e 666 (MH+) . RMN (500 MHz , CLOROFOR O-D) d ppm 1,20 - 1,86 (m, 24 H) 1,91 - 2,15 (m, 2 H) 2,75 - 2,94 (m, 2 H) 3,14 - 3,25 (m, 1 H) 3,28 - 3,39 (m, 1 H) 3,70 - 3,80 (m, 1 H) 3,88 - 3,94 (m, 3 H) 4,12 (c, J"=7,02 Hz, 1 H) 4,31 (d, J=4,58 Hz, 2 H) 4,70 (d, J=14,65 Hz, 1 H) 4,93 (d, J"=14,65 Hz , 1 H) 6,69 (s, 1 H) 6,94 (d, J"=2,75 Hz, 1 H) 7,08 (dd, J=8,70, 2,59 Hz, 1 H) 7,53 (d, J"=8,54 Hz, 1 H) 7,63 (dd, J"=8,39, 1,37 Hz, 1 H) 7,77 - 7,86 (m, 2 H) 7, 94 (s, 1 H) .
Acido 13-ciclohexil-6- [4- (etoxicarbonil) -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -lH-pirazol -5-il] -3 -metoxi - 7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10-carboxilico A la solución en CH2C2 (10 mi) de éster 1,1-dimetiletílico del ácido 13-ciclohexil-6- [4- (etoxicarbonil) -1- (tetrahidro-2H-piran-4 - il ) -lH-pirazol-5-il] -3 -metoxi - 7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin- 10 -carboxílico (1,12 g, 1,682 mmol) se añadió TFA (8 mi, 104 mmol) y se dejó agitando a temperatura ambiente durante 2 h. La reacción se controló por LC/EM. El disolvente se eliminó a vacío proporcionando el compuesto del epígrafe como polvo amarillo claro. EM-ESI m/e 610 (MH+) . RMN de XH (500 MHz, DMS0-D6) d ppm 1,12 - 1,59 (m, 9 H) 1,68 - 2,15 (m, 8 H) 2,64 (d, J=l,83 Hz, 1 H) 2,78 - 2,88 (m, 1 H) 2,99 - 3,13 (m, 2 H) 3,14 - 3,24 (m, 1 H) 3,62 - 3,70 (m, 1 H) 3,88 (s, 3 H) 4,51 (d, J=14,65 Hz, 1 H) 5,22 (d, J=15,56 Hz, 1 H) 6,96 (s, 1 H) 7,13 (d, J=2 , 44 Hz , 1 H) 7,22 (dd, J=8,55, 2,44 Hz, 1 H) 7,54 - 7,62 (m, 2 H) 7,90 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,96 (s, 1 H) 8,01 (s, 1 H) .
Ester etílico del ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10-[[[ (l-metiletil) sulfonil]amino] carbonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-6-il] -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -IH-pirazol-4 -carboxílico A la solución en THF (8 mi) de ácido 13-ciclohexil-6- [4-(etoxicarbonil ) -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -lH-pirazol-5-il] -3 -metoxi-7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico (450 mg, 0,738 mmol) se añadió CDI (239 mg, 1,476 mmol) y se dejó agitando 60 °C durante 1 h. Se enfrió hasta temperatura ambiente y se añadieron propano-2-sulfonamida (273 mg, 2,214 mmol) y DBU (0,222 mi, 1,476 mmol). Se dejó calentar a 60 °C durante 3h. La reacción se controló por LC/EM. Se eliminó el disolvente y el residuo se volvió a disolver en EtOAc . La fase orgánica se lavó con HCl (1N) (20 mi x3) , salmuera (20 mi x3) y se secó sobre Na2S04. El disolvente se eliminó a vacío y el producto bruto se purificó usando HPLC preparativa Shimadzu empleando ACN/agua y tampón TFA al 0,1 % con una columna Xterra, 30 mm x 100 mm, gradiente durante 15 min; Concentración inicial: 10% de B; Concentración final: 100% de B. El disolvente se eliminó por Speed Vac proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido amarillo claro (350 mg, 66%) . EM-ESI m/e 715 (MH+) RMN de XH (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,19 - 1,89 (m, 15 H) 1,25 (t, J=7,02 Hz, 3 H) 1,44 (d, J=7,02 Hz, 6 H) 1,93 - 2,25 (ra, 2 H) 2,83 - 2,95 (m, 2 H) 3,21 - 3,55 (m, 2 H) 3,76 - 3,85 (m, 1 H) 3,98 - 4,17 (m, 4 H) 4,66 - 4,75 (m, 1 H) 4,96 (d, J=14,95 Hz, 1 H) 6,72 (s, 1 H) 6,96 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 7,09 (dd, J=8,55, 2,75 Hz, 1 H) 7,39 -7,44 (m, 1 H) 7,52 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,79 (s, 1 H) 7,90 (d, .7=8,54 Hz, 1 H) 7,99 (s, 1 H) 8,47 - 8,61 (m, 1 H) . Ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] ea????] carbonil] - 7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-6-il] -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -??-pirazol-4 -carboxxlico A la solución en EtOH/THF de éster etílico del ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -lH-pirazol-4-carboxílico (350 mg, 0,490 mmol) se añadió NaOH (1N, 5 mi) y se dejó agitando a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se controló por LC/EM. Se añadió HC1 (1N, 4 mi) y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se volvió a disolver en EtOAc y se lavó con salmuera (20 mi x3) y se secó sobre Na2S04. El disolvente se eliminó a vacío proporcionando el producto del epígrafe como sólido amarillo (175 mg, 52%) . EM-ESI m/e 687 (MH+) RMN de H (500 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 1,21 - 1,87 (m, 12 H) 1,45 (d, J=6,71 Hz, 6 H) 1,91 - 2,17 (m, 2 H) 2,82 - 2,95 (m, 2 H) 3,18 - 3,28 (m, 1 H) 3,34 (d, J=10,68 Hz, 1 H) 3,80 (d, J=12,21 Hz, 1 H) 3,92 (s, 3 H) 3,97 - 4,07 (m, 1 H) 4,32 (d, J=6,71 Hz , 1 H) 4,73 (d, J=14,65 Hz , 1 H) 4,95 (d, J==14,34 Hz, 1 H) 6,71 (s, 1 H) 6,96 (d, J=2,75 Hz, 1 H) 7,10 (dd, J=8,70, 2,59 Hz, 1 H) 7,38 (dd, J=8,55, 1,22 Hz, 1 H) 7,53 (d, J=8,55 HZ, 1 H) 7,76 (d, J=l,22 Hz , 1 H) 7,90 (d, J==8,55 Hz, 1 H) 7,96 (s, 1 H) 8,32 (s, 1 H) .
Ester etílico del ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metilpropil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -lH-pirazol-4 -carboxílico A la solución en THF (10 mi)/ EtOH (10,00 mi) de ácido 13-ciclohexil-6- [4- (etoxicarbonil ) -1- (tetrahidro-2H-piran-4 - il) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin- 10-carboxílico (700 mg, 1,148 mmol) se añadió CDI (372 mg, 2,296 mmol) y se dejó agitar a 60 °C durante 1 h. Se enfrió hasta temperatura ambiente y se añadieron 2-metilpropano-l- sulfonamida (473 mg, 3,44 mmol) y DBU (0,346 ral, 2,296 mmol) . Se dejó calentar a 60 °C durante la noche. La reacción se controló que se había completado por LC/EM. El disolvente se eliminó y se volvió a disolver en EtOAc . La fase orgánica se lavó con HC1 (1N) (20 mi x3) , salmuera (20 mi x3) y se secó sobre Na2S0 . El disolvente se eliminó a vacío y el producto bruto se purificó usando HPLC preparativa Shimadzu empleando ACN/agua y tampón TFA al 0,1 % con una columna Xterra,30 mm x 100 mm, gradiente durante 20 min; Concentración inicial: 20 % de B; Concentración final: 100% de B. El disolvente se eliminó por Speed Vac proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido amarillo claro (750 mg, 90%) . EM-ESI m/e 729 (MH+) , RMN de XH (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,12 (d, .7=6,71 Hz , 6 H) 1,24 (t, J=7,02 Hz, 3 H) 1,33 - 1,86 (ra, 11 H) 1,93 - 2,15 (m, 2 H) 2,33 - 2,40 (m, 1 H) 2,85 - 2,93 (m, 2 H) 3,19 - 3,36 (m, 2 H) 3,51 (d, J=6,41 Hz, 2 H) 3,73 (c, J=7,02 Hz, 2 H) 3,76 -3,83 (m, 1 H) 3,92 (s, 3 H) 4,32 (d, J=7,63 Hz , 2 H) 4,74 (d, J=14,65 Hz, 1 H) 4,94 (d, J=14,34 Hz, 1 H) 6,70 (s, 1 H) 6,96 (d, J=2,75 Hz, 1 H) 7,10 (dd, J=8,70, 2,59 Hz , 1 H) 7,32 -7,37 (m, 1 H) 7,53 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,75 (s, 1 H) 7,90 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,95 (s, 1 H) 8,30 - 8,38 (m, 1 H) . Ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (2-metilpropil) sulfonil] amino] carbonil] - 7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin- 6-il] -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -lH-pirazol-4 -carboxílico A la solución en EtOH/THF éster etílico del ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metilpropil ) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2]benzacepin-6-il] -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -lH-pirazol- 4-carboxílico (750 mg, 1,029 mmol) se añadió NaOH (1N, 5 mi) y se dejó remover a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se controló por LC/EM. Se añadió HCl (1N, 5 mi) y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se volvió a disolver en EtOAc y se lavó con HCl, salmuera y se secó sobre Na2S04. El disolvente se eliminó a vacío proporcionando el producto del epígrafe como sólido amarillo (670 mg, 93%) . EM-ESI m/e 701 (MH+) . RMN de ¾ (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,10 (d, J=6,71 Hz, 6 H) 1,19 - 1,87 (m, 12 H) 1,92 - 2,18 (m, 2 H) 2,29 - 2,40 (m, 1 H) 2,82 - 2,94 (m, 2 H) 3,18 - 3,42 (m, 2 H) 3,50 (dd, J=6,71, 2,44 Hz, 2 H) 3,75 - 3,85 (m, 2H) 3,91 (s, 3 H) 4,71 (d, J=14,95 Hz, 1 H) 4,96 (d, J=14,04 Hz, 1 H) 6,72 (s, 1 H) 6,96 (d, .7=2,44 Hz, 1 H) 7,09 (dd, J=8,55, 2,44 Hz, 1 H) 7,42 (dd, J=8,55, 1,53 Hz, 1 H) 7,52 (d, J=8,55 Hz , 1 H) 7,78 (s, 1 H) 7,90 (d, J=8,54 Hz, 1 H) 8,00 (s, 1 H) 8,74 (s, 1 H) . 13-Ciclohexil-6- [4- [ [ (2R,6S) -2, 6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-N- [ (1 -metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se añadió la solución en DMF de 74809-037 (50 mg, 0,073 mmol) a TBTU (46,7 mg, 0,146 mmol) , DIPEA (0,038 mi, 0,218 mmol) y (2S, 6R) -2 , 6-dimetilmorfolina (16,77 mg, 0,146 mmol). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción se controló por LC/E . El producto bruto se purificó por HPLC Prep Shimadzu empleando ACN/agua y tampón TFA al 0,1 % con una columna Xterra,30 mm x 100 mm, gradiente durante 15 min Concentración inicial: 10% de B; Concentración final: 90% de B. El disolvente se eliminó por Speed Vac proporcionando el producto del epígrafe como un sólido amarillo claro (37 mg, 62 %) . EM-ESI m/e 784 (MH+) RM de XH (300 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 0,81 - 1,66 (m, 16 H) 1,68 - 2,54 (m, 16 H) 2,86 (dd, J-=ll,71, 7,32 Hz, 1 H) 3,09 - 3,61 (m, 3 H) 3,85 - 3,91 (m, 1 H) 3,92 (s, 3 H) 3,96 - 4,14 (m, 2 H) 4,60 (d, J=15,37 Hz, 1 H) 4,91 (d, J=16,10 Hz, 1 H) 6,73 (s, 1 H) 6,89 (d, J=2,20 Hz, 1 H) 7,07 - 7,15 (m, 1 H) 7,51 - 7,62 (m, 2 H) 7,66 (s, 1 H) 7,72 (s, 1 H) 7,90 (d, J=8,42 Hz, 1 H) . 13 -Ciclohexil-3 -metoxi-N- [ (1 -me iletil) sulfonil] -6- [4- (4-morfolinilcarbonil) -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -lH-pirazol-5-il] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida EM-ESI m/e 756 (MH+) RM de H (300 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,11 - 2,38 (m, 20 H) 2,42 - 3,51 (m, 12 H) 3,80 - 4,12 (m, 3 H) 3,92 (s, 3 H) 4,54 - 4,68 (m, 1 H) 4,86 - 5,00 (m, 1 H) 6,75 (s, 1 H) 6,89 (s, 1 H) 7,10 (d, J=7,68 Hz , 1 H) 7,55 (d, J=8,05 Hz, 2 H) 7,67 (s, 1 H) 7,73 (s, 1 H) 7,91 (d, J=8,42 Hz, 1 H) . 13 -Ciclohexil-3 -metoxi- 6- [4- 1 (3-metil-3 , 8-diazabiciclo [3, 2, 1] oct-8-il) carbonil] -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -lH-pirazol-5-il] -N- [ (1 -metíletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10 -carboxamida EM-ESI m/e 796 (MH+) . RMN de XH (300 MHz, CLOROFORMO-D) d pm 1,12 - 1,62 (m, 8 H) 1,46 (d, J"=6,95 Hz, 6 H) 1,62 - 2,28 (m, 11 H) 2,57 - 2,76 (m, 4 H) 2,78 - 3,00 (m, 3 H) 3,34 - 3,64 (m, 4 H) 3,71 - 3,88 (m, 3 H) 3,91 (s, 3 H) 3,94 - 4,09 (m, 1 H) 4,54 - 5,01 (m, 2 H) 6,77 (s, 1 H) 6,87 - 6,93 (m, 1 H) 7,10 (dd, J=8,42, 2,20 Hz, 1 H) 7,46 - 7,61 (m, 2 H) 7,63 -7,74 (m, 2 H) 7,90 (d, J-=8,42 Hz, 1H) . 13-Ciclohexil -3 -metoxi -N- [ (l- etiletil) sulfonil] -6- [1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -4- [ [ (3R,5S) -3,4, 5-trimetil-l-piperazinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10 -carboxamida EM-ESI m/e 798 (MH+) . RM de lH (300 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,13 - 1,66 (m, 18 H) 1,69 - 2,17 (m, 8 H) 2,54 - 2,66 (m, 1 H) 2,69 - 3,08 (m, 6 H) 3,32 - 3,65 (m, 3 H) 3,78 - 4,30 (m, 6 H) 3,89 (s, 3 H) 4,51 - 4,72 (m, 1 H) 4,84 - 5,06 (m, 1 H) 6,76 (s, 1 H) 6,94 (d, J=2,56 Hz , 1 H) 7,07 (dd, J=8,42, 2,56 Hz, 1 H) 7,50 (d, J"=8,78 Hz, 2 H) 7,55 - 7,64 (m, 1 H) 7,83 (s, 1 H) 7,90 (d, .7=8,42 Hz, 1 H) . 13-Ciclohexil-6- [4- [ [ (1S,4S) -5-etil-2,5-diazabiciclo [2,2, 1]hept-2-il] carbonil] -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -lH-pirazol-5-il] -3 -metoxi-N- [ (1-metiletil) eulfonil] -7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida EM-ESI m/e 796 (MH+) . RM de XH (300 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,09 - 1,49 (m, 16 H) 1,51 - 2,28 (m, 9 H) 2,80 - 3,49 (m, 14 H) 3,89 (s, 3 H) 3,91 - 4,04 (m, 1 H) 4,25 - 4,40 (m, 1 H) 4,65 - 4,87 (m, 1 H) 6,68 (d, ,7=2,20 Hz, 1 H) 6,96 (s, 1 H) 7,06 (dd, J=8,42, 2,20 Hz, 1 H) 7,48 - 7,61 (m, 2 H) 7,62 -7, 93 (ra, 3 H) . 13-Ciclohexil-3-metoxi-6- [4- [ (8-metil-3, 8-diazabiciclo [3, 2, 1] oct-3-il) carbonil] -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -lH-pirazol-5-il] -N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida EM-ESI m/e 796 (MH+) . RMN de ¾ (300 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 1,02 - 1,57 (m, 15 H) 1,64 - 2,17 (m, 9 H) 2,48 - 3,10 (m, 7 H) 3,14 - 3,94 (m, 6 H) 3,87 - 3,93 (m, 3 H) 3,94 - 4,11 (m, 2 H) 4,52 - 4,72 (m, 2 H) 4,80 - 5,01 (m, 1 H) 6,69 - 6,85 (m, 1 H) 6,89 (d, J=2,56 Hz, 1 H) 7,10 (dd, J=8,60, 2,01 Hz, 1 H) 7,46 - 7,61 (m, 2 H) 7,62 - 7,82 (m, 2 H) 7,91 (d, J=8,78 Hz, 1 H) . 13-Ciclohexil-6- [4- [ [ (2R,6S) -2, 6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi -N- [ (2 -metilpropil) eulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10 -carboxamida EM-ESI m/e 799 (MH+) . RMN de XH (300 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 0,45 - 1,44 (m, 12 H) 1,45 (d, J=6,95 Hz, 6 H) 1,59 - 2,24 (m, 9 H) 2,51 - 3,02 (m, 6 H) 3,39 - 3,88 (m, 5 H) 3,91 (s, 3 H) 3,94 - 4,07 (m, 1 H) 4,35 - 5,08 (m, 4 H) 6,78 (s, 1 H) 6,90 (d, J=2,20 Hz, 1 H) 7,10 (dd, J=8,78, 2,56 Hz, 1 H) 7,54 (t, J=8,78 Hz, 2 H) 7,69 (s, 2 H) 7,90 (d, J 8,42 Hz, 1 H) . 13-Ciclohexil-3-metoxi-N- [ (2 -metilpropil) eulfonil] -6- [4- (4-morfolinilcarbonil) -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -1H-pirazol-5-il] - 7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10 -carboxamida EM-ESI m/e 770 (MH+) . RMN de XH (300 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,13 (d, .7=6,59 Hz, 6 H) 1,17 - 1,68 (m, 6 H) 1,69 - 2,29 (m, 9 H) 2,31 - 2,47 (m, 1 H) 2,48 - 2,73 (m, 6 H) 2,80 - 2,97 (m, 1 H) 2,95 - 3,36 (m, 3 H) 3,50 (d, J=6,59 Hz , 2 H) 3,82 -4,07 (m, 3 H) 3,92 (s, 3 H) 4,52 - 4,73 (m, 1 H) 4,83 - 5,02 (m, 1 H) 6,75 (s, 1 H) 6,89 (t, J=3,ll Hz , 1 H) 7,10 (dd, J=8,42, 2,56 Hz, 1 H) 7,54 (t, J=8,78 Hz, 2 H) 7,66 (s, 1 H) 7,72 (S, 1 H) 7,91 (d, J=8,42 Hz , 1 H) . 13-Ciclohexil-3-metoxi-6- [4- [ (3-metil-3, 8-diazabiciclo [3, 2, 1] oct-8-il) carbonil] -1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -lH-pirazol-5-il] -N- [ (2-metilpropil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida E -ESI m/e 810 (MH+) . RM de XH (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 0,85 - 1,19 (m, 8 H) 1,19 - 1,51 (m, 4 H) 1,51 - 1,62 (m, 1 H) 1,63 - 2,38 (m, 12 H) 2,39 - 2,80 (m, 2 H) 2,81 - 3,37 (m, 6 H) 3,37 -3,65 (m, 4 H) 3,64 - 3,85 (m, 1 H) 3,86 - 4,00 (m, 3 H) 4,02 - 4,79 (m, 2 H) 4,80 - 5,73 (m, 4 H) 6,63 - 6,81 (m, 1 H) 6,85 - 6,98 (m, 1 H) 7,05 - 7,20 (m, 1 H) 7,48 - 7,63 (m, 2 H) 7,65 (d, J-=8,55 Hz, 1 H) 7,74 - 7,91 (m, 1 H) 7,94 (d, J=8,55 Hz, 1 H) . 13 -Ciclohexil-3 -metoxi-N- [ (2-metilpropil) sulfonil] -6- [1- (tetrahidro-2H-piran-4-il) -4- [ [(3R,5S) -3 , 4 , 5-trimetil-l-piperazinil] carboni1] -lH-pirazol-5-il] - 7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10 -carboxamida EM-ESI m/e 812 (MH+) . RMN de XH (500 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 1,03 - 1,17 (m, 7 H) 1,17 - 1,62 (ra, 11 H) 1,65 - 2,14 (m, 8 H) 2,35 (d, J"=7,02 Hz, 1 H) 2,75 - 3,05 (m, 4 H) 3,15 - 3,66 (m, 6 H) 3,70 - 3,94 (m, 2 H) 3,87 - 3,93 (m, 3 H) 3,98 - 4,44 (m, 2 H) 4,61 (d, J=14,04 Hz, 1 H) 5,03 - 5,68 (m, 4 H) 6,77 (s, 1 H) 6,88 - 7,16 (m, 2 H) 7,40 - 7,53 (m, 1 H) 7,55 - 7,80 (m, 2 H) 7,91 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,97 - 8,18 (m, 1 H) 9,50 -9, 76 (m, 1 H) . 13-Ciclohexil-6- [4- [ [ (1S,4S) -5-etil-2, 5-diazabiciclo [2, 2, 1] hept-2-il] carbonil] -1- (tetrahidro-2H-piran- 4-il) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-N- [ (2-metilpropil) sulfonil] - 7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10 -carboxamida EM-ESI m/e 810- (MH+) . RMN de H (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,10 (d, J=6,10 Hz, 7 H) 1,19 - 1,64 (m, 8 H) 1,65 - 2,14 (m, 8 H) 2,15 - 2,51 (m, 3 H) 2,80 - 3,68 (m, 8 H) 3,69 - 3,85 (m, 1 H) 3,90 (s, 3 H) 4,22 - 4,76 (m, 8 H) 4,88 - 4,98 (m, 1 H) 6,59 - 6,74 (m, 1 H) 6,90 - 7,18 (m, 2 H) 7,41 - 7,97 (m, 5 H) . 13 -Ciclohexil -3 -metoxi - 6- [4- [ (8-metil-3, 8-diazabiciclo [3, 2, 1] oct-3 -il) carbonil] -1- (tetrahidro-2H-pi 4-il) -lH-pirazol-5-il] -N- [ (2 -metilpropil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida EM-ESI m/e 810 (MH+) RMN de XK (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,05 - 1,20 (m, 7 H) 1,20 - 1,63 (m, 6 H) 1,65 - 2,13 (m, 9 H) 2,28 - 2,68 (m, 3 H) 2,81 - 2,97 (m, 2 H) 3,02 - 3,31 (m, 4 H) 3,36 - 3,64 (m, , 4 H) 3,69 - 4,31 (m, 10 H) 4,57 - 4,75 (m, 1 H) 4,79 - 5,10 (m, 1 H) 6,61 - 6,80 (m, 1 H) 6,92 (s, 1 H) 7,06 - 7,18 (m, 1 H) 7,49 - 7,71 (m, 3 H) 7,77 - 7,88 (m, 1 H) 7,94 (d, J-=8, 85 Hz, 1 H) .
Se calentó a reflujo durante 2 horas una mezcla de reacción de ciclobutanona (7,01 g, 100 mmol) e hidrazinacarboxilato de tere-butilo (13,22 g, 100 mmol) en hexano (100 mi) . Después de enfriar, se formó un precipitado y se recogió. Éste se trituró con isopropanol (5 mi) y hexano (50 mi) dando un sólido blanco como 2-ciclobutilidenohidrazinacarboxilato de tere-butilo producto final (13,5 g, 73,3 mmol, 73,3 % de rendimiento).
RM de ¾ (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,50 (s, 9 H) 1,96 - 2,08 (m, 2 H) 2,75 - 2,84 (m, 2 H) 2,93 - 3,05 (m, 2 H) .
EM m/z 207 (M+Na+) , Tiempo de retención: 1,420 min. (ácido) Ester 1, 1-dimetiletílico del ácido 6- [l-ciclobutil-4- (etoxicarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxíllco Se añadió una solución 2M de BH3.DMS (6,92 mi, 13,84 mmol) en tetrahidrofurano a 2-ciclobutilidenohidrazinacarboxilato de tere-butilo (1,5 g, 8,14 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 1 hora. Luego ésta se evaporó y se obtuvo un sólido espumoso blanco como ciclobutilhidrazina (0,45 g, 5,22 mmol, 64,2 % de rendimiento). Éste se usó en la etapa siguiente sin purificación posterior.
En un tubo de microondas, se disolvió 13-ciclohexil-6- ( (2E, Z) -3- (dimetilamino) -2- (etoxicarbonil) -2-propenoil) -3-metoxi-7H- indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxilato de terc- butilo (1900 mg, 3,10 mmol) en etanol (20 ml) . Se añadieron ciclobutilhidrazina (267 mg, 3,10 mmol) y trietilamina (1,426 ml, 10,23 mmol) . La mezcla de reacción se calentó entonces a 160°C en condiciones de microondas durante 2 horas. Se evaporaron todos los volátiles y el residuo se trituró con acetonitrilo y unas pocas gotas de DMSO. Como compuesto del epígrafe se recogió un sólido amarillo claro (1,127 g, 1,773 mmol, 57,2 % de rendimiento) que era puro.
EM m/z 636 (MH+) , Tiempo de retención: 2,961 min. (básico) . RMN de H (500 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 1,11 - 2,20 (m, 27 H) 2,48 (s ancho, 1 H) 2,79 - 2,94 (m, 1 H) 3,90 (s, 3 H) 3,92 -4,03 (m ancho, 1 H) 4,18 - 4,41 (m ancho, 2 H) 4,61 - 4,75 (m ancho, 1 H) 4,89 - 5,04 (m ancho, 1 H) 6,68 (s, 1 H) 6,93 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 7,06 (dd, J=8,70, 2,59 Hz, 1 H) 7,52 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,64 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,79 (s, 1 H) 7,82 (d, J=8,54 Hz, 1 H) 7, 95 (s, 1 H) . Ácido 6- [l-ciclobutil-4- (etoxicarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13 -ciclohexil-3 -metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico una solución de éster 1 , 1-dimetiletílico del ácido [l-ciclobutil-4- (etoxicarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxilico (0,94 g, 1,478 mmol) en ClCH2CH2Cl (10 ml) , se añadió TFA (5 ml, 64,9 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a TA durante la noche. Se evaporaron disolvente y TFA y al residuo se añadió benceno (20 ml) . Se evaporaron todos los volátiles de nuevo y el residuo se secó en Speed Vac dando un sólido parduzco como compuesto del epígrafe (0,97 g, 1,673 mmol, 113 % de rendimiento). Esta contenía todavía algo de TFA. Éste se usó en la etapa siguiente sin purificación posterior .
EM m/z 580 (MH+) , Tiempo de retención: 3,263 min. (ácido) RM de XH (500 MHz, MeOD) d ppm 1,07 - 2,23 (m, 18 H) 2,39 (s ancho, 1 H) 2,84 - 2,97 (m, 1 H) 3,79 - 3,93 (m, 4 H) 4,15 - 4,38 (m ancho, 2 H) 4,58 - 4,67 (m, 1 H) 4,94 - 5,03 (m, 1 H) 6,80 (s, 1 H) 7,07 (d, J"=2,75 Hz, 1 H) 7,15 (dd, J-8,54, 2,75 Hz, 1 H) 7,57 (d, J=8,55 Hz , 1 H) 7,67 (dd, .7=8,55, 1,22 Hz, 1 H) 7,83 (s, 1 H) 7,88 (d, J=8,55 Hz , 1 H) 7,93 (s, 1 H) .
Ester etílico del ácido l-ciclobutil-5- [13 -ciclohexil-3 -metoxi-10- [ [ [ (2 -metilpropil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico A una solución de ácido 6- [l-ciclobutil-4- (etoxicarbonil) -lfí-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico (480 mg, 0,828 mmol) en tetrahidrofurano (20 mi), se añadió CDI (201 mg, 1,242 mmol) . La mezcla de reacción se calentó a 60 °C durante una hora. Luego se enfrió. Se añadieron 2 -metilpropano-1-sulfonamida (341 mg, 2,484 mmol) y DBU (0,250 mi, 1,656 mmol). La mezcla de reacción se calentó entonces a 60 °C durante 44 horas. La mezcla de reacción se inactivo con solución 1N de HCl y se extrajo con acetato de etilo (2X50 mi) . Las fases orgánicas se reunieron, se lavaron con solución 1N de HCl, salmuera y se secaron (MgSO^) . La evaporación de los disolventes dio un aceite denso naranja como producto bruto. Éste se trituró con acetonitrilo y hexanos . Se recogió un sólido amarillo claro que era casi puro (390 mg) . El filtrado anterior se concentró y el residuo se purificó por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H2O-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y concentraron proporcionando como compuesto del epígrafe un sólido amarillo (11,5 mg) . El peso total del compuesto fue 401,5 mg (69,4% de rendimiento).
EM m/z 699 ( H+) , Tiempo de retención: 3,250 min. (básico) .
RM de XH (500 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 1,03 - 2,18 (m, 24 H) 2,28 - 2,42 (m, 1 H) 2,51 (s ancho, 1 H) 2,81 - 2,95 (m, 1 H) 3,51 (d, J=5,80 Hz, 2 H) 3,91 (s, 3 H) 3,93 - 4,04 (m ancho, 1 H) 4,16 - 4,40 (m ancho, 2 H) 4,62 - 4,78 (m ancho, 1 H) 4,88 - 5,02 (m ancho, 1 H) 6,69 (s, 1 H) 6,94 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 7,08 (dd, J=8,55, 2,44 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=8,55, 1,22 Hz, 1 H) 7,52 (d, ^=8,85 Hz, 1 H) 7,72 (s, 1 H) 7,89 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,94 (s, 1 H) 8,46 (s, 1 H) .
Ester etílico del ácido l-ciclobutil-5- [13 -ciclohexil-3 -metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] - ??-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico A una solución de ácido 6- [l-ciclobutil-4- (etoxicarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-7H- indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin- 10 -carboxílico (480 rag, 0,828 mmol) en tetrahidrofurano (20 ml) , se añadió CDI (201 mg, 1,242 mmol) . La mezcla de reacción se calentó a 60°C durante una hora. Luego se enfrió. Se añadieron propano-2-sulfonamida (306 mg, 2,484 mmol) y DBU (0,250 ml , 1,656 mmol). La mezcla de reacción se calentó entonces a 60 °C durante 44 horas. La mezcla de reacción se inactivo con solución 1N de HC1 y se extrajo con acetato de etilo (2X50 ml) . Las fases orgánicas se reunieron, se lavaron con solución 1N de HCl, salmuera y se secaron (MgS04) . La evaporación de los disolventes dio un aceite denso naranja como producto bruto. Éste se trituró entonces con acetonitrilo y hexanos . Se recogió un sólido amarillo claro que era bastante puro (350 mg) . El filtrado anterior se concentró y el residuo se purificó por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H20-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y concentraron proporcionando un sólido amarillo (10 mg) . El peso total de compuesto del epígrafe fue 360 mg (63,5% de rendimiento).
EM m/z 685 (MH+), Tiempo de retención: 2,162 min. (básico) .
RMN de XH (500 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 1,16 - 2,16 (m, 25 H) 2,52 (s ancho, 1 H) 2,82 - 2,94 (m, 1 H) 3,91 (s, 3 H) 3,93 - 4,09 (m, 2 H) 4,19 - 4,37 (m ancho, 2 H) 4,65 - 4,77 (m, 1 H) 4,87 - 5,02 (m, 1 H) 6,70 (s, 1 H) 6,94 (d, J=2,75 Hz, 1 H) 7,08 (dd, J=8,55, 2,75 Hz, 1 H) 7,37 (dd, ^=8,55, 1,53 Hz, 1 H) 7,53 (d, J=8,55 Hz , 1 H) 7,71 (d, J=l,53 Hz, 1 H) 7,90 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,95 (s, 1 H) . Ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10-metilpropil) sulfonil] amino] carbonil] -7ff-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico A una solución de éster etílico del ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (2-metilpropil ) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lfí-pirazol-4-carboxílico (385 mg, 0,551 mmol) en tetrahidrofurano (10,00 mi) y etanol (10 mi), se añadió solución de hidróxido sódico 1N (4,41 mi, 4,41 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a TA durante 4 días. La mezcla de reacción se concentró a TA y el residuo se acidificó con solución 1N de HCl . Como compuesto del epígrafe se recogió un sólido amarillo claro (360 mg, 0,537 mmol , 97 % de rendimiento) .
EM m/z 671(MH+), Tiempo de retención: 1,535 min. (básico) .
RMN de XH (500 MHz, MeOD) d ppm 1,12 (t, J=6,71 Hz, 6 H) 1,17 - 2,22 (m, 15 H) 2,22 - 2,33 (m, 1 H) 2,36 - 2,52 (m, 1 H) 2,87 - 3,01 (m, 1 H) 3,45 (dd, . J=6,41, 1,22 Hz, 2 H) 3,82 -3,99 (m, 4 H) 4,58 - 4,73 (m, 1 H) 5,02 - 5,17 (m, 1 H) 6,85 (s, 1 H) 7,12 (d, .7=2,75 Hz, 1 H) 7,18 (dd, J=8,70, 2,59 Hz, 1 H) 7,58 - 7,64 (m, 2 H) 7,90 (d, J=l,22 Hz , 1 H) 7,94 - 7,99 (m, 2 H) .
Acido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H- indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico A una solución de éster etílico del ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4 -carboxílico (350 mg, 0,511 mmol) en tetrahidrofurano (10,00 mi) y etanol (10 ml) , se añadió solución 1N de hidróxido sódico (4,09 ml, 4,09 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a TA durante 3 días. La mezcla de reacción se concentró a TA y el residuo se acidificó con solución 1N de HC1. Como compuesto del epígrafe se recogió un sólido amarillo claro (330 ' mg, 0,502 mmol, 98 % de rendimiento) .
EM m/z 657 (MH+) , Tiempo de retención: 1,467 min. (básico) .
RMN de ? (500 MHz, MeOD) d ppm 1,14 - 2,25 (m, 21 H) 2,36 - 2,53 (m, 1 H) 2,85 - 3,03 (m, 1 H) 3,89 - 3,96 (m, 5 H) 4,67 (d, J=14,34 Hz, 1 H) 5,07 (d, J=14,95 Hz , 1 H) 6,86 (s, 1 H) 7,12 (d, J=2,75 Hz , 1 H) 7,18 (dd, J=8,54, 2,75 Hz, 1 H) 7,58 - 7,65 (m, 2 H) 7,90 (s, 1 H) 7,94 - 7,99 (m, 2 H) . 6- [l-Ciclobutil-4- [ (3-metil-3 , 8-diazabiciclo [3,2,1] oct-8-il) carbonil] -lJT-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-iV- [ (2-metilpropil) sulfonil] -7ff-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida A una solución de ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil - 3 -metoxi - 10 - [ [ [ (2-metilpropil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6 - il] - lH-pirazol -4 -carboxí1 ico (30 mg, 0,045 mmol) en DMSO (1 mi), se añadieron TBTU (21,54 mg, 0,067 mmol) y DIPEA (0,039 mi, 0,224 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. Luego se añadió 3-metil-3 , 8-diazabiciclo [3 , 2 , 1] octano, 2HC1 (13,36 mg, 0,067 mmol) . La solución se agitó a TA durante la noche. La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H20-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante la noche. Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo como sal TFA (28,3 mg, 0,032 mmol, 70,9 % de rendimiento) .
EM m/z 777 (M-H"), Tiempo de retención: 2,177 min. (básico) .
RMN de H (500 MHz , MeOD) d ppm 1,15 (d, J=6,71 Hz, 6 H) 1,21 - 2,39 (m, 20 H) 2,54 (s ancho, 1 H) 2,75 - 3,02 (m, 5 H) 3,15 - 3,59 (m, 7 H) 3,95 (s, 3 H) 4,56 - 4,66 (m, 2 H) 4,94 - 5,04 (m, 1 H) 7,00 (s, 1 H) 7,12 (s, 1 H) 7,21 (dd, J=8,55, 2,44 Hz, 1 H) 7,57 - 7,63 (m, 2 H) 7,81 (s, 1 H) 7,90 (s, 1 H) 7,97 (d, J"=8,55 Hz, 1 H) . 6- [l-Ciclobutil-4- (3 , 7 -dioxa-9 -azabiciclo [3,3, l]non-9-ilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-iV- [ (2-metilpropil) sulfonil] -7H- indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida A una solución de ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (2-metilpropil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (30 mg, 0,045 mmol) en DMSO (1 mi), se añadieron TBTU (21,54 mg, 0,067 mmol) y DIPEA (0,039 mi, 0,224 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. A continuación se añadió 3 , 7-dioxa-9-azabiciclo [3 , 3 , 1] nonano (8,66 mg, 0,067 mmol) . La solución se agitó a TA durante la noche. La LC/EM mostró que la reacción no se había completado. Se añadieron un equivalente más de TBTU y DIPEA. La mezcla de reacción se continuó agitando a TA durante 2 días. La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H2O-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante el fin de semana. Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo (27,4 mg, 0,032 mmol, 78 % de rendimiento) .
EM m/z 780 (M-H"), Tiempo de retención: 1,990 min. (básico) . R N de a? (500 ???, MeOD) d ppm 1,14 (d, J=6,71 Hz, 6 H) 1,20 - 2,68 (m, 17 H) 2,87 - 3,00 (m, 1 H) 3,22 - 3,99 (m, 16 H) 4,64 (d, J=14,95 Hz , 1 H) 5,00 (d, J=14,04 Hz, 1 H) 7,02 (s, 1 H) 7,13 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 7,21 (dd, J=8,70, 2,59 Hz, 1 H) 7,55 - 7,65 (m, 2 H) 7,78 (s, 1 H) 7,86 (s, 1 H) 7,97 (d, J=8, 24 Hz, 1 H) . 6- [l-Ciclobutil-4- [ [3 , 5-cis-3 , 4, 5-trimetil-1-piperazinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ (2-metilpropil) sulfonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida A una solución de ácido l-ciclobutil-5- [13 -ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (2-metilpropil) sulfonil] amino] carbonil] -??-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6 - il] -lH-pirazol -4 -carboxílico (30 mg, 0,045 mmol) en DMSO (1 mi), se añadieron TBTU (21,54 mg, 0,067 mmol) y DIPEA (0,039 mi, 0,224 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. Luego se añadió (2R, 6S) -1, 2, 6-trimetilpiperazina, 2 HCl (13,49 mg, 0,067 mmol) . La solución se agitó a TA durante la noche. La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H20-TFA-.corno sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante la noche. Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo como sal TFA (32,7 mg, 0,037 mmol, 82 % de rendimiento) .
EM m/z 779 (M-H~), Tiempo de retención: 2,080 min. (básico) .
RM de XH (500 MHz, MeOD) d ppm 1,14 (d, J=6,71 Hz, 6 H) 1,19 - 2,38 (m, 22 H) 2,54 (s ancho, 1 H) 2,70 - 3,19 (m, 8 H) 3,48 (d, J"=6,41 Hz, 2 H) 3,95 (s, 3 H) 4,36 (s ancho, 3 H) 4,53 - 4,66 (m, 1 H) 4,97 - 5,08 (m, 1 H) 6,97 (s, 1 H) 7,11 (d, J=2,75 Hz, 1 H) 7,20 (dd, J=8,55, 2,75 Hz , 1 H) 7,54 - 7,64 (m, 2 H) 7,79 (s, 1 H) 7,86 (s, 1 H) 7,98 (d, J"=8,24 Hz, 1 H) . 6- [l-Ciclobutil-4- [ [ (1S, 4S) -5-etil-2,5-diazabiciclo [2 , 2 , 1] hept-2-il] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-.NV [ (2-metilpropil) sulfonil] -7fT-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida A una solución de ácido l-ciclobutil-5- [13 -ciclohexil -3 -metoxi - 10 - [ [ [ ( 2 -metilpropil ) sulfonil ] amino] carbonil] - 7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (30 mg, 0,045 mmol) en DMSO (1 mi), se añadieron TBTU (21,54 mg, 0,067 mmol) y DIPEA (0,039 mi, 0,224 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. A continuación se añadió ( 1S , 4S) -2 -etil-2 , 5-diazabiciclo [2 , 2 , 1] heptano, TFA (23,76 mg, 0,067 mmol). La solución se agitó a TA durante la noche. La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H20-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante la noche. Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo (22,1 mg, 0,025 mmol, 55,3 % de rendimiento) como sal TFA.
EM m/z 777(M-H"), Tiempo de retención: 1,960 min. (básico) .
RMN de XH (500 MHz, MeOD) d ppm 1,13 (d, J=6,71 Hz, 6 H) 1,19 - 2,61 (m, 22 H) 2,87 - 3,03 (m, 1 H) 3,08 - 4,55 (m, 14 H) 4,57 - 4,69 (m, 1 H) 5,03 - 5,13 (m, 1 H) .6,85 (s, 1 H) 7,04 - 7,15 (m, 1 H) 7,20 (dd, .7=8,55, 2,44 Hz, 1 H) 7,61 (d, J=8,85 Hz, 2 H) 7,75 - 7,91 (m, 2 H) 7,97 (d, J=8, 55 Hz, 1 H) . 6- [l-Ciclobutil-4- (4-morfolinilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-W- [ (2 -metilpropil) sulfonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida — A una solución de ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (2-metilpropil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (30 mg, 0,045 mraol) en DMSO (1 mi), se añadieron TBTU (21,54 mg, 0,067 mmol) y DIPEA (0,039 mi, 0,224 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. A continuación se añadió morfolina (5,84 mg, 0,067 mmol) . La solución se agitó a TA durante la noche. La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H2O-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante la noche. Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo (26,8 mg, 0,036 mmol, 81 % de rendimiento) .
EM m/z 738(M-H"), Tiempo de retención: 2,015 min. (básico) .
RMN de H (500 MHz, MeOD) d ppm 1,14 (d, J=6,71 Hz , 6 H) 1,19 - 2,69 (ra, 17 H) 2,88 - 3,57 (m, 11 H) 3,95 (s, 3 H) 4,46 - 4,60 (m ancho, 1 H) 4,65 (d, «J=14,95 Hz, 1 H) 5,03 (d, J=14,95 Hz, 1 H) 6,98 (s, 1 H) 7,13 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 7,20 (dd, J=8,55, 2,75 Hz, 1 H) 7,58 - 7,64 (m, 2 H) 7,72 (s, 1 H) 7,86 (d, J=l,22 Hz, 1 H) 7,98 (d, J=8,55 Hz, 1 H) . 6- [l-Ciclobutil-4- [ [cis-2 , 6-dimetil-4-xnorfolinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ (2-metilpropil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida A una solución de ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (2-metilpropil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6 - il] -lH-pirazol-4-carboxílico (30 mg, 0,045 mmol) en DMSO (1 mi), TBTU (21,54 mg, 0,067 mmol) y DIPEA (0,039 mi, 0,224 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. Luego se añadió cis-2 , 6 -dimetilmorfolina (7,73 mg, 0,067 mmol) . La solución se agitó a TA durante la noche. La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H2O-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante la noche. Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo (26,9 mg, 0,035 mmol , 78 % de rendimiento) .
EM m/z 766(M-H~), Tiempo de retención: 2,270 min. (básico) .
RMN de H (500 MHz, MeOD) d ppm 0,51 - 2,76 (m, 29 H) 2,88 - 3,02 (m, 1 H) 3,22 - 3,67 (m, 9 H) 3,96 (s, 3 H) 4,63 (d, J=1 , 96 Hz, 1 H) 5,00 (d, J=15,26 Hz, 1 H) 7,03 (s, 1 H) 7,14 (d, J=l,83 Hz, 1 H) 7,20 (dd, 1 H) 7,57 - 7,63 (m, J=8,55, 1,53 Hz, 2 H) 7,70 (s, 1 H) 7,87 (d, J=l,22 Hz , 1 H) 7, 97 (d, J=8, 55 Hz, 1 H) . 6- [l-Ciclobutil-4- [ (8-metil-3 , 8-diazabiciclo [3, 2, 1] oct-3-il) carbonil] -lff-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-lV- [ (2-metilpropil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida A una solución de ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (2 -metilpropil) sulfonil] amino] carbonil] -7H- indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6 - il] -lH-pirazol-4 -carboxílico (30 mg, 0,045 mmol) en DMSO (1 mi), se añadieron TBTU (21,54 mg, 0,067 mmol) y DIPEA (0,039 mi, 0,224 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. A continuación se añadió 8-metil-3 , 8 -diazabiciclo [3 , 2 , 1] octano, 2HC1 (13,36 mg, 0,067 mmol) . La solución se agitó a TA durante la noche. La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H20-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante la noche. Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo (31,5 mg, 0,035 mmol, 79 % de rendimiento) como sal TFA.
EM m/z 779(MH+), Tiempo de retención: 2,778 min. (ácido) RIVLN de ¾ (500 MHz , eOD) d ppm 1,15 (d, J=6,71 Hz, 6 H) 1,20 - 2,41 (m, 20 H) 2,55 (s ancho, 1 H) 2,71 - 3,05 (m, 5 H) 3,11 - 3,59 (m, 7 H) 3,96 (s, 3 H) 4,54 - 4,70 (m, 2 H) 4,95 -5,04 (m, 1 H) 7,00 (s, 1 H) 7,12 (s, 1 H) 7,21 (dd, J=8,55, 2,44 Hz, 1 H) 7,57 - 7,64 (m, 2 H) 7,81 (s, 1 H) 7,90 (s, 1 H) 7, 97 (d, J=8, 54 Hz, 1 H) . 6- [l-Ciclobutil-4- [ (3-hidroxi-3-metil-8-azabiciclo [3,2,1] oct-8-il) carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-iV- [ (2 -metilpropil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida A una solución de ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil - 3 -metoxi - 10 - [ [ [ (2-metilpropil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2 ] benzacepin- 6 - i 1 ] - lfí-pirazol -4 - carboxí1 ico (30 mg, 0,045 mmol) en DMSO (1 mi), se añadieron TBTU (28,7 mg, 0,089 mmol) y DIPEA (0,039 mi, 0,224 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. Luego se añadió 3-metil-8-azabiciclo [3 , 2 , 1] octan-3-ol, HC1 (11,92 mg, 0,067 mmol) . La solución se agitó a TA durante la noche. La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H20-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante la noche. Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo (20,5 mg, 0,025 mmol, 56,6 % de rendimiento) .
EM m/z 792 (M-H~), Tiempo de retención: 2,152 min. (básico) .
RMN de XH (500 MHz , MeOD) d ppm 0,95 - 2,72 (m, 34 H) 2,88 - 3,03 (m, 1 H) 3,43 - 3,65 (m, 3 H) 3,96 (s, 3 H) 4,12 (s ancho, 1 H) 4,51 - 4,70 (m, 2 H) 4,95 - 5,03 (m, 1 H) 6,87 - 7,15 (m, 2 H) 7,19 (d,' J=7,93 Hz, 1 H) 7,58 -7,66 (m, 2 H) 7,78 (s, 1 H) 7,86 (m, 1 H) 7,96 (d, J"=8,54 Hz, 1 H.) 6 - [l-Ciclobutil-4 - [ (3 -metil-3 , 8 -diazabiciclo [3,2,l]oct-8-il) carbonil] -líT-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-W- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida A una solución de ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (30 mg, 0,046 mmol) en DMSO (1 mi), se añadieron TBTU (22,00 mg, 0,069 mmol) y DIPEA (0,040 mi, 0,228 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. Luego se añadió 3-metil-3,8-diazabiciclo[3,2,l]octano, 2HC1 (13,64 mg, 0,069 mmol). La solución se agitó a TA durante la noche . La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H2O-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante la noche. Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo (34,6 mg, 0,039 mmol, 86 % de rendimiento) como sal TFA.
EM m/z 763(M-H~), Tiempo de retención: 2,125min. (básico) .
RM de XH (500 MHz , MeOD) d ppm 1,16 - 2,36 (m, 25 H) 2,41 - 2,65 (m ancho, 1H) 2,70 - 3,65 (m, 10 H) 3,90 - 4,02 (m, 5 H) 4,60 (d, J-=14,65 Hz, 1 H) 4,97 (d, J=15,26 Hz , 1 H) 7,00 (s ancho, 1 H) 7,12 (s, 1 H) 7,20 (dd, J-=8,70, 2,59 Hz, 1 H) 7,60 (d, J=8,85 Hz, 2 H) 7,80 (s, 1 H) 7,89 (s, 1 H) 7,97 (d, J=8, 55 Hz, 1 H) . 6- [l-Ciclobutil-4 - (3 , 7 -dioxa-9-azabiciclo [3,3,1] non- 9-ilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi--V- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida A una solución de ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] - ??-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (30 mg, 0,046 mmol) en DMSO (1 mi), se añadieron TBTU (22,00 mg, 0,069 mmol) y DIPEA (0,040 mi, 0,228 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. Luego se añadió 3,7-dioxa-9-azabiciclo [3 , 3 , 1] nonano (8,85 mg, 0,069 mmol). La solución se agitó a TA durante la noche. La LC/EM mostró que la reacción no se había completado. Se añadieron un equivalente más de TBTU y DIPEA. La mezcla de reacción se continuó agitando a TA durante la noche. La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H2O-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante el fin de semana. Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo (29,9 mg, 0,039 mmol, 85 % de rendimiento).
EM m/z 766(M-H"), Tiempo de retención: 1,868 min. (básico) .
RMN de H (500 MHz, MeOD) d ppm 1,18 - 2,66 (m, 22 H) 2,90 - 3,05 (m, 1 H) 3,21 - 4,05 (m, 15 H) 4,60 - 4,71 (m, 1 H) 4,98 - 5,08 (m, 1 H) 7,03 (s, 1 H) 7,13 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 7,22 (dd, J=8,55, 2,75 Hz, 1 H) 7,56 - 7,71 (m, 2 H) 7,78 (s, 1 H) 7,88 (s, 1 H) 7,98 (d, J"=8,24 Hz, 1 H) . 6- [l-Ciclobutil-4- [ [3 , 5-cis-3> 4, 5- trimetil-1-piperazinil] carbonil] -lff-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-iV- [ (1-metiletil) sulfonil] -7ff-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida A una solución de ácido 1 -ciclobuti 1 - 5 - [13 -ciclohexi 1 - 3 -metoxi - 10 - [ [ [ (1-metiletil ) sulfonil] amino] carbonil] - ??- indolo [2,1-a] [2 ] benzacepin- 6 - il ] - lH-pirazol -4 - carboxí1 ico (30 mg, 0,046 mmol) en DIVISO (1 mi), se añadieron TBTU (22,00 mg, 0,069 mmol) y DIPEA (0,040 mi, 0,228 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. Luego se añadió cis-1, 2, 6-trimetilpiperazina, 2 HCl (13,78 mg, 0,069 mmol) . La solución se agitó a TA durante 3 horas. La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H20-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante la noche. Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo (34,5 mg, 0,039 mmol, 86 % de rendimiento) como sal TFA.
EM m/z 765 (M-H"), Tiempo de retención: 1,970 min. (básico) .
RMN de 1H (500 MHz , MeOD) d ppm 1,14 - 2,34 (m, 27 H) 2,54 (s ancho, 1 H) 2,69 - 3,24 (m, 8 H) 3,87 - 3,99 (m, 4 H) 4,36 (s ancho, 3 H) 4,51 - 4,66 (m, 1 H) 4,97 - 5,06 (m ancho, 1 H) 6,96 (s, 1 H) 7,11 (d, J=2,75 Hz , 1 H) 7,19 (dd, J"=8,55, 2,75 Hz, 1 H) 7,53 - 7,65 (m, J=10,68, 8,55 Hz,' 2 H) 7,78 (s, 1 H) 7,82 - 7,87 (m, 1 H) 7,98 (d, J=8, 55 Hz, 1 H) . 6- [l-Ciclobutil-4- [ [(1S,4S) -5-etil-2,5- diazabiciclo [2,2,1] hept-2-il] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13- ciclohexil-3-metoxi-iV- [ (1-metiletil) sulfonil] -7ff-indolo [2 , 1- a] [2] benzacepin-10-carboxamida A una solución de ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3 - metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] - ??- indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (30 mg, 0,046 mmol) en DMSO (1 mi), se añadieron TBTU (22,00 mg, 0,069 mmol) y DIPEA (0,040 mi, 0,228 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. Luego se añadió (1S,4S)- 2-etil-2,5-diazabiciclo[2,2,l]heptano, TFA (24,27 mg, 0,069 mmol) . La solución se agitó a TA durante 3 horas. La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3C -H20-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante la noche . Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo (33,9 mg, 0,039 mmol, 84 % de rendimiento) como sal TFA.
EM m/z 763 (M-H~) , Tiempo de retención: 1,883 min. (básico) .
RM de XK (500 ???, MeOD) d ppm 1,15 - 2,62 (m, 27 ?) 2,84 - 3,02 (m, 1 ?) 3,07 - 4,69 (m, 14 ?) 5,01 - 5,11 (m, 1 ?) 6,84 (s, 1 ?) 7,03 - 7,11 (m, 1 ?) 7,19 (dd, - J=8 , 55 , 2,44 ??, 1 ?) 7,59 (d, J=8,55 ?? , 2 ?) 7,72 - 7,92 (t?, 2 ?) 7,97 6- [l-Ciclobutil-4 - (4-morfolinilcarbonil) -lH-pirazol-5- il] -13-ciclohexil-3-metoxi-lV- [ ( 1-metiletil) sulfonil] -7H- indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida A una solución de ácido l-ciclobutil-5- [13 -ciclohexil -3 - metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H- indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6 - il] -lH-pirazol-4-carboxílico (30 mg, 0,046 mmol) en DMSO (1 mi), se añadieron TBTU (22,00 mg, 0,069 mmol) y DIPEA (0,040 mi, 0,228 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. Luego se añadió morfolina (5,97 mg, 0,069 mmol) . La solución se agitó a TA durante 3 horas. La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H2O-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante la noche. Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo (27,4 mg, 0,038 mmol, 83 % de rendimiento) .
EM m/z 724 (M-H~) , Tiempo de retención: 1,937 min. (básico) .
RM de XH (500 MHz, MeOD) d ppm 1,21 - 2,70 (m, 22 H) 2,90 - 3,38 (m, 9 H) 3,91 - 4,01 (m, 4 H) 4,49 - 4,61 (m ancho, 1 H) 4,64 (d, J=15,26 Hz, 1 H) 5,02 (d, ,7=14,65 Hz , 1 H) 6,98 (s, 1 H) 7,13 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 7,20 (dd, J=8,70, 2,59 Hz, 1 H) 7,58 - 7,63 (m, 2 H) 7,71 (s, 1 H) 7,87 (d, J=l,22 Hz, 1 H) 7,98 (d, .7=8,55 Hz , 1 H) . 6- [l-Ciclobutil-4- [ [cis-2, 6-dimetil- 4-morfolinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida A una solución de ácido l-ciclobutil-5- [13 -ciclohexil -3 -metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] - ??- indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] - lH-pirazol -4 -carboxílico (30 mg, 0,046 mmol) en DMSO (1 mi), se añadieron TBTU (22,00 mg, 0,069 mmol) y DIPEA (0,040 mi, 0,228 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. Luego se añadió cis-2 , 6-dimetilmorfolina (7,89 mg, 0,069 mmol) . La solución se agitó a TA durante 3 horas. La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H2O-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante la noche. Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo (30,7 mg, 0,041 mmol, 89 % de rendimiento) .
EM m/z 752(M-H~), Tiempo de retención: 2,125 min. (básico) .
RMN de ¾ (500 MHz, MeOD) d ppm 0,47 - 2,77 (m, 29 H) 2,89 -3,02 (m, 1 H) 3,19 - 3,72 (m, 5 H) 3,91 - 4,04. (m, 5 H) 4,63 (d, J=14,34 Hz, 1 H) 5,00 (d, J=15,26 Hz, 1 H) 7,03 (s, 1 H) 7,14 (d, J=l,83 Hz, 1 H) 7,21 (dd, J"=8,55, 2,44 Hz, 1 H) 7,58 - 7,64 (m, 2 H) 7,69 (s, 1 H) 7,88 (s, 1 H) 7,97 (d, J=8,55 Hz , 1 H) . 6- [l-Ciclobutil-4- [ (8-metil-3 , 8-diazabiciclo [3 , 2 , 1] oct-3 -il) carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13 -ciclohexil-3 -metoxi-iV- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida A una solución de ácido 1 -ciclobutil - 5 - [13 -ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2 ] benzacepin- 6 - il ] - lH-pirazol -4 -carboxílico (30 mg, 0,046 mmol) en DMSO (1 mi), se añadieron TBTU (22,00 mg, 0,069 mmol) y DIPEA (0,040 mi, 0,228 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. A continuación se añadió 8-metil-3 , 8-diazabiciclo [3 , 2 , 1] octano, 2HC1 (13,64 mg, 0,069 mmol) . La solución se agitó a TA durante 3 horas. La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H20-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante la noche. Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo (31,7 mg, 0,036 mmol, 79 % de rendimiento) como sal TFA.
EM m/z 763 (M-H~) , Tiempo de retención: 2,083 min. (básico) .
RMN de XH (500 MHz, MeOD) d ppm 1,18 - 2,33 (m, 25 H) 2,54 (s ancho, 1 H) 2,71 - 3,58 (m, 10 H) 3,84 - 4,05 (m, 5 H) 4,63 (d, J"=14,35 Hz, 1 H) 4,94 - 5,02 (m, 1 H) 6,93 -7,06 (s ancho, 1 H) 7,12 (s, 1 H) 7,21 (dd, J=8,55, 2,44 Hz, 1 H) 7,53 - 7,64 (m, 2 H) 7,81 (s, 1 H) 7,90 (s, 1 H) 7, 97 (d, J=8, 24 Hz, 1 H) . 6- [l-Ciclobutil-4- [ (3-hidroxi-3-metil-8-azabiciclo [3,2,1] oct-8-il) carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-jV- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida A una solución de ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] - ??-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lfí-pirazol-4-carboxílico (30 mg, 0,046 mmol) en DMSO (1 mi), se añadieron TBTU (29,3 mg, 0,091 mmol) y DIPEA (0,040 mi, 0,228 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. A continuación se añadió 3-metil-8-azabiciclo [3 , 2 , 1] octan-3-ol, HC1 (12,17 mg, 0,069 mmol) . La solución se agitó a TA durante la noche. La mezcla de reacción se purificó entonces por columna de HPLC Preparativa usando CH3CN-H2O-TFA como sistema disolvente. Las fracciones se recogieron y se concentraron en Speed Vac durante la noche. Como compuesto del epígrafe se obtuvo un sólido amarillo (22,5 mg, 0,027 mmol, 60,0 % de rendimiento).
EM m/z 778 (M-H~), Tiempo de retención: . 2,073min. (básico) .
RM de XH (500 ??? , MeOD) d ppm 0,94 - 2,68 (m, 34 2,89 - 3,03 (m, 1 ?) 3,88 - 4,04 (m, 5 ?) 4,15 (s ancho, 1 4,53 - 4,71 (m, 2 H) 4,96 - 5,04 (m, 1 H) 6,85 - 7,16 (m, 2 7,19 (d, J=7,63 Hz, 1 H) 7,59 - 7,63 (m, 2 H) 7,78 (s, 1 7,87 (s, 1 H) 7,97 (d, J=8,55 Hz, 1 H) .
Ester 1, 1-dimetiletílico del ácido 13-ciclohexil-6- [1-ciclopropil-4- (etoxicarbonil) -lH-pirazol-3-il] -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico Se disolvió 13-ciclohexil-6- ( (2E, Z) -3- (dimetilamino) -2-(etoxicarbonil) -2 -propenoil ) -3 -metoxi-7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-10-carboxilato de tere-butilo (0,800 g, 1,31 mmol) en etanol absoluto (13 mi) y trietilamina (0,264 mg, 2,61 mmol). Se añadió clorhidrato de ciclopropilhidrazina (0,283 mg, 2,61 mmol) a la reacción y la reacción se colocó en una atmósfera de nitrógeno. La reacción se calentó hasta 160 °C durante 2 horas en un microondas. La solución resultante se diluyó con cloroformo (50 mi) y se extrajo con solución acuosa 1M de HCl (50 mi) . La solución orgánica se concentró a vacío usando un evaporador rotatorio proporcionando 0,810 mg de un amorfo amarillo. El análisis por LC-EM indicó dos posibles productos isoméricos. Este producto bruto se purificó por HPLC preparativa de fase inversa proporcionando 400 mg y 192 mg de los productos isoméricos de la siguiente forma: La muestra se purificó en un sistema de cromatografía de alta presión Shimadzu que emplea software Discovery VP asociado con un controlador SCL-10A, automuestreador SIL-10A y recolector de fracciones FRC-10A. La muestra se disolvió en acetonitrilo / DMF (1:1) (4 mi) se purificó usando una columna Waters Sunfire Prep C18 OBD, 5uM 19mm x lOOmm y se controló usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 25 mi / min, un gradiente de 25% de disolvente A / 75% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 10 minutos con un tiempo de ejecución de 20 minutos usando % de A= 10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA % de B= 90% de acetonitrilo, 10% de agua, 0,1% de TFA como sistema disolvente . , El producto que eluye primero es éster 1 , 1-dimetiletílico del ácido , 13-ciclohexil-6- [l-ciclopropil-4- (etoxicarbonil) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico con tiempo de retención de 12,5 minutos, siendo el componente minoritario éster 1 , 1-dimetiletílico del ácido 13-ciclohexil-6- [l-ciclopropil-4- (etoxicarbonil) -lH-pirazol-3- il] -3-metoxi-7H-indolo [2 , l-a] [2] benzacepin-10-carboxílico con una retención de 15,6 minutos.
Ester 1, 1-dimetiletílico del ácido 13 -ciclohexil- 6 - [1-ciclopropil-4 - (etoxicarbonil) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-7H-indolo [2 , l-a] [2] benzacepin-10-carboxílico RM de XH (500 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 0,00 (m, 1H) 0,19 (m, 1H) 0,70 (m, 1H) 0,98 (m, 1H)1,13 - 1,27 (m, 1 H) 1,30 (t, J=7,02 Hz, 3 H) 1,34 - 1,55 (m, 3 H) 1,58 (s, 9 H) 1,61 - 1,84 (m, 3 H) 1,85 - 2,00 (m, 1 H) 1,99 - 2,18 (m, 3 H) 2,86 (t, J=ll,75 Hz, 1 H) 3,09 (m, 1H) 3,90 (s, 3 H) 4,27 (d, J=4,27 Hz, 2 H) 4,71 (s, 1 H) 5,02 (s, 1 H) 6,77 (s, 1 H) 6,93 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 7,07 (dd, J=8,55, 2,44 Hz, 1 H) 7,65 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,79 - 7,88 (m, 2 H) 7,97 (s, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM 3,99min; 622 m/z (MH+) . Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 70% de disolvente A / 30% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 5 min, un tiempo de mantenimiento de 1 min, y un tiempo de análisis de 6 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización .
Ester 1, 1-dimetiletílico del ácido 13-ciclohexil-6- [1-ciclopropil-4- (etoxicarbonil) -lH-pirazol-3 -il] -3 -metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carbox£lico RMN de 1H (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,13 - 1,26 (m, 2 H) 1,30 (t, J-7,17 Hz, 3 H) 1,33 - 1,60 (m, 4 H) 1,61 (s, 9 H) 1,64 - 1,91 (m, 5 H) 1,98 - 2,16 (m, 3 H) 2,82 - 2,91 (m, 1 H) 3,75 (m, 1 H) 3,94 (s, 3 H) 4,20 - 4,30 (m, 2 H) 4,41 (d, J=14,04 Hz, 1 H) 5,76 (d, ,7=14,04 Hz, 1 H) 6,96 - 7,03 (m, 2 H) 7,49 - 7,54 (m, 1 H) 7,64 (dd, J=8,39, 1,37 Hz, 1 H) 7,79 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,84 (s, 1 H) 7,90 (s, 1 H) 8,26 (s, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM 4,38min; 622 m/z (MH+) . Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 70% de disolvente A / 30% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 5min, un tiempo de mantenimiento de 1 min, y un tiempo de análisis de 6 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización. Ácido 13-ciclohexil-6- [l-ciclopropil-4 - (etoxicarbonil) - lH-pirazol-5-il] -3 -metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10- carboxílico Se disolvió éster 1 , 1-dimetiletílico del ácido 13- ciclohexil-6- [l-ciclopropil-4- (etoxicarbonil) -lH-pirazol-5- il] -3 -metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin- 10 -carboxílico (400 mg, 0,643 mmol) en 1 , 2-dicloroetano (3,2 mi), se colocó la reacción en una atmósfera de nitrógeno, luego se añadió ácido trifluoroacético (3,2 mi, 26,0 mmol) . La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. Los volátiles se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio y se disolvió el producto de reacción en benceno y se eliminó a vacío para ayudar a eliminar las trazas de TFA. Se repitió la disolución en benceno y la eliminación a vacío. Se secó la muestra a temperatura ambiente obteniendo 364 mg del compuesto del epígrafe como un sólido amarillo.
RM de XH (500 MHz, CLOROFORMO-D) 8 ppm -0,09 (m, 1H) 0,19 (m, 1H) 0,69 (m, 1H) 0,99 (m, 1H)1,12 - 1,26 (m, 1 H) 1,31 (t, J=7,02 Hz, 3 H) 1,40 (s, 2 H) 1,51 - 1,89 (m, 3 H) 1,87 - 2,23 (m, 4 H) 2,87 (t, .7=11,29 Hz, 1 H) 3,10 (m, 1H) 3,91 (s, 3 H) 4,27 (s ancho, 2 H) 4,73 (s ancho, 1 H) 4,97 (s ancho, 1 H) 6,78 (s, 1 H) 6,94 (d, J=2,14 Hz, 1 H) 7,08 (dd, J=8,55, 2,44 Hz, 1 H) 7,54 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 7,77 (d, J=8,24 Hz, 1 H) 7,86 - 7,95 (m, 2 H) 7,98 (s, 1 H) . LC-EM 566 m/z (MH+) .
Ester etílico del ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1- a] [2] benzacepin-6-il] -l-ciclopropil-lH-pirazol-4-carboxílico Se disolvió ácido 13-ciclohexil-6- [l-ciclopropil-4- (etoxicarbonil ) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1- a] [2] benzacepin-10-carboxílico (120 mg, 0,212 mmol) en THF (0,700 ral). Se añadió a la reacción carbonildiimidazol (130 mg, 0,636 mmol) . La reacción se colocó en una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos luego se calentó hasta reflujo durante 1 hora. La reacción se enfrió en una atmósfera de nitrógeno y se añadió a la reacción propano-2 -sulfonamida (105 mg, 0,636 mmol) seguido por DBU (0,096 mi, 0,636 mmol) . La reacción se sumergió en baño de aceite y se calentó a reflujo en atmósfera de nitrógeno durante la noche. La reacción se diluyó con acetato de etilo (50 mi) y la fase orgánica se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico acuoso 1,0N (50 mi) y NaH2P040,1 M acuoso (50 mi) . La fase orgánica se secó a vacío proporcionando 124 mg del producto del epígrafe como una espuma amarilla.
RMN de XH (500 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm -0,10 (m, 1H) 0,18 (m, 1H) 0,69 (m, 1H) 1,00 (m, 1 H) 1,20 - 1,27 (m, 2 H) 1,32 - 1,52 (m, 4 H) 1,46 (d, J=7,02 Hz , 6 H) 1,63 - 1,80 (m, 3 H) 1,85 - 2,13 (m, 4 H) 2,81 - 2,91 (m, 1 H) 3,12 (m, 1 H) 3,90 (s, 3 H) 4,00 - 4,10 (m, 2 H) 4,55 (m, 1H) 4,62 (d ancho, 1 H) 5,02 (d ancho, 1 H) 6,91 (s, 1 H) 6,94 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 7,08 (dd, J=8,55, 2,75 Hz, 1 H) 7,44 (d, J-=8,85 Hz , 1 H) 7,48 (d, J=l,22 Hz, 1 H) 7,86 - 7,92 (m, 3 H) 8,26 (s ancho, 1 H) . LC-EM 671 m/z (MH) . Ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6 -il] -l-ciclopropil-lH-pirazol-4-carboxílico Se disolvió éster etílico del ácido 5- [13 -ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H- indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -l-ciclopropil-lH-pirazol-4-carboxílico (0,120 g, 0,179 mmol) en THF (0,500 mi) y se añadió a la reacción metanol (0,500 mi) seguido por hidróxido sódico acuoso 1N (1,80 mi) . La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se diluyó con acetato de etilo (50,0 mi) y se lavó con ácido clorhídrico acuoso 1,0N (2 x 50ml) . La fase orgánica se concentró a vacío usando un evaporador rotatorio proporcionando 113 mg del compuesto del epígrafe como un sólido amarillo.
Tiempo de retención de LC-EM 1,55 min; 643 m/z (MH) . Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de mantenimiento de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización. 13-Ciclohexil-6- [l-ciclopropil-4 - (4-morfolinilcarbonil) - lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H- indolo [2, 1-a] [2] benzacepin- 10 -carboxamida Se disolvió ácido 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1- metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1- a] [2] benzacepin-6-il] -l-ciclopropil-lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,11 mmol) en DMF (1,0 ml) , se añadieron a la reacción TBTU (70 mg, 0,22 mmol) y DIPEA (56 mg, 0,44 mmol). La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y luego se añadió morfolina (38 µ? , 0,44 mmol) . La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico acuoso 1,0N (25 ml) , NaH2P04 acuoso 0,1 (25 ml) . La fase orgánica se concentró durante la noche a vacío a temperatura ambiente proporcionando 78 mg de un sólido amarillo amorfo. El compuesto del epígrafe se purificó adicionalmente en un sistema de cromatografía líquida de alta presión Shimadzu que emplea Software Discovery VP conectado con un controlador SCL- 10A, automuestreador SIL-10A y recolector de fracciones FRC-10A. La muestra se disolvió en acetonitrilo / DMF (1:1) (volumen total 2ml) , se purificó usando una columna Waters Sunfire Prep C18 OBD, 5uM 19mm x lOOmm y se controló usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 25 mi / min, un gradiente de 60% de disolvente A / 40% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 12 minutos con un tiempo de ejecución de 25 minutos usando % de A= 10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA, % de B= 90% de acetonitrilo, 10% de agua, 0,1% de TFA como sistema disolvente. La muestra se desarrolló como dos inyecciones de 1 mi. El tiempo de ejecución de la segunda operación de HPLC Prep se acortó a 15 en base a los datos de la primera operación.
Las fracciones de producto (tiempo de retención= 9,20 minutos) se reunieron y el disolvente se eliminó a vacío. El compuesto se secó a temperatura ambiente a vacío proporcionando 67mg del compuesto del epígrafe como un sólido amarillo amorfo.
RMN de H (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 1,02 (m, 3 H) 1,23 (c, J=12,21 Hz, 1 H) 1,30 - 1,56 (m, 7 H) 1,77 (d, J=10,38 Hz, 2 H) 1,90 - 2,14 (m, 4 H) 2,40 - 3,23 (m, 12 H) 3,60 (m, 1H) 3,97 (s, 3 H) 4,05 (m, 1H) 4,61 (d, J=14,65 Hz, 1 H) 5,00 (d, .7=14,65 Hz , 1 H) 6,95 (d, J=2,75 Hz, 1 H) 6,97 (s, 1 H) 7,04 (dd, J=8,70, 2,59 Hz, 1 H) 7,46 (dd, J=8,55, 1,53 Hz, 1 H) 7,52 (d, J=8,55 Hz , 1 H) 7,55 (s, 1 H) 7,89 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,94 (d, J=l,22 Hz, 1 H) 9,75 (s ancho, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM 1,94 min; 712 m/z (MH) . Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de mantenimiento de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización.
El compuesto siguiente se sintetizó por un procedimiento análogo al descrito antes para 13-ciclohexil-6- [1-ciclopropil-4- (4-morfolinilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin- 10 -carboxamida : 13-Ciclohexil-6- [l-ciclopropil-4 - [ [ (3R,5S) -3,4,5-trimetil-l-piperazinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -3 -metoxi-N-[ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida LC/EM: m/e 753 (M+H) , tiempo de retención 1,89 min. Ácido 13-ciclohexil-6- [l-ciclopropil-4- (etoxicarbonil) lH-pirazol-3-il] -3 -metoxi-7H- indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico Se disolvieron éster 1 , 1-dimetiletílico del ácido 13-ciclohexil-6- [l-ciclopropil-4- (etoxicarbonil) -lH-pirazol-3-il] -3 -metoxi-7H- indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin- 10-carboxílico (400 mg, 0,643 mmol) en 1 , 2 -dicloroetano (3,2 mi), se colocó la reacción en una atmósfera de nitrógeno, luego se añadió ácido trifluoroacético (3,2 mi, 26,0 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. Los volátiles se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio y el producto de reacción se disolvió en benceno y se eliminó a vacío para ayudar en la eliminación de trazas de TFA. Se repitió la disolución en benceno y la eliminación a vacío. La muestra se secó a temperatura ambiente a vacío obteniendo 364 mg del compuesto del epígrafe como un sólido amarillo.
RMN de H (500 MHz , CL0R0F0RM0-D) d ppm 1,12 - 1,26 (m, 3 H) 1,31 (t, J"=7,02 Hz, 3 H) 1,40 (s, 2 H) 1,51 - 1,89 (m, 5 H) 1,87 - 2,23 (m, 4 H) 2,87 (t, J=ll,29 Hz, 1 H) 3,58 (m, 1 H) 3,91 (s, 3 H) 4,27 (s ancho, 2 H) 4,73 (s ancho, 1 H) 4,97 (s ancho, 1 H) 6,78 (s, 1 H) 6,94 (d, J=2,14 Hz, 1 H) 7,08 (dd, J=8,55, 2,44 Hz, 1 H) 7,54 (d, J-=8,85 Hz, 1 H) 7,77 (d, J=8,24 Hz, 1 H) 7,86 - 7,95 (m, 2 H) 7,98 (s, 1 H) . LC-EM 566 m/z (MH+) .
Ester etílico del ácido 3- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -l-ciclopropil-lH-pirazol-4-carboxílico Se disolvió ácido 13-ciclohexil-6- [l-ciclopropil-4-(etoxicarbonil) -lH-pirazol-3 -il] -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2]benzacepin-10-carboxílico (32 mg, 0,06 mmol) en THF (0,30 mi). Se añadió a la reacción carbonildiimidazol (28 mg, 0,17 mmol) . La reacción se colocó en una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos, luego se calentó hasta reflujo durante 1 hora. La reacción se enfrió en una atmósfera de nitrógeno y se añadió a la reacción propano-2 -sulfonamida (28 mg, 0,23 mmol) seguido por DBU (0,26 mi, 0,17 mmol) . La reacción se sumergió en baño de aceite y se calentó a reflujo en atmósfera de nitrógeno durante la noche. La reacción se diluyó con acetato de etilo (50 mi) y la fase orgánica se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico acuoso 1,0N (50 mi) y NaH2P04 acuoso 0 , 1M (50 mi). La fase orgánica se secó a vacío proporcionando 31 mg del producto del epígrafe como una espuma amarilla.
RMN de ¾ (500 Hz , CLOROFORMO-D) d ppm 1,12 - 1,27 (m, 3 H) 1,30 (t, J=7,02 Hz, 3 H) 1,32 - 1,45 (m, 3 H) 1,46 (d, J=9,77 Hz, 6 H) 1,53 - 1,81 (m, 3 H) 1,88 - 2,13 (m, 5 H) 2,81 - 2,91 (m, 1 H) 3,29 (m, 1H) 3,90 (s, 3 H) 4,00 - 4,10 (m, 1 H) 4,24 (s, 2 H) 4,71 (d, J=12,21 Hz , 1 H) 4,99 (d, J=16,48 Hz, 1 H) 6,77 (s, 1 H) 6,94 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 7,08 (dd, J=8,55, 2,75 Hz, 1 H) 7,38 (dd, J=8,55, 1,22 Hz , 1 H) 7,52 (d, J=8,85 Hz, 1 H) 7,76 (d, J=l,22 Hz, 1 H) 7,86 - 7,92 (m, 2 H) 8,26 (s ancho, 1 H) . LC-EM 671 m/z (MH) . Ácido 3- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -l-ciclopropil-lH-pirazol-4-carboxílico Se disolvió éster etílico del ácido 3- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -l-ciclopropil-lH-pirazol-4-carboxílico ácido (0,31 g, 0,050 mmol) en THF (0,20 mi) y se añadió metanol (0,20 mi) a la reacción seguido por hidróxido sódico acuoso 1N (0,50 mi) . La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se diluyó con acetato de etilo (50 mi) y se lavó con ácido clorhídrico acuoso 1,0N (2 x 50ml) . La fase orgánica se concentró a vacío usando un evaporador rotatorio proporcionando 30 mg del compuesto del epígrafe como un sólido amarillo.
Tiempo de retención de LC-EM 1,78 min; 643 m/z (MH) . Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de mantenimiento de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Mieromass para LC en modo de electropulverización. 13-Ciclohexil-6- [l-ciclopropil-4 - (4 -morfolinilcarbonil) -lH-pirazol-3 -il] -3-metoxi-N- [ ( 1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se disolvió ácido 3- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -l-ciclopropil-lH-pirazol-4-carboxílico (30 mg, 0,050 mmol) en DMF (0,50 mi), se añadieron a la reacción TBTU (35 mg, 0,11 mmol) y DIPEA (19 mg, 0,22 mmol). La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora luego se añadió morfolina (19 µ?, 0,22 mmol) . La reacción se cubrió con una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se diluyó con acetato de etilo (50 mi) y se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico acuoso 1,0N (25 mi), NaH2P04 acuoso 0,1M (25 mi). La fase orgánica se concentró durante la noche a vacío a temperatura ambiente proporcionando 33 mg de un sólido amarillo amorfo. El compuesto del epígrafe se purificó adicionalmente en un sistema de cromatografía líquida de alta presión Shimadzu que emplea Software Discovery VP conectado con un controlador SCL-10A, automuestreador SIL-10A y recolector de fracciones FRC-10A. La muestra se disolvió en acetonitrilo / D F (1:1) (volumen total 2ml) , se purificó usando una columna Waters Sunfire Prep C18 OBD, 5uM 19mm x 100mm y se controló usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 25 mi / min, un gradiente de 60% de disolvente A / 40% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 12 minutos con un tiempo de ejecución de 25 minutos usando % de A= 10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA, % de B= 90% de acetonitrilo, 10% de agua, 0,1% de TFA como sistema disolvente. La muestra se desarrolló como dos inyecciones de 1 mi. El tiempo de ejecución de la segunda operación de HPLC Prep se acortó hasta 15 minutos en base a los datos de la primera operación. Las fracciones de producto (tiempo de retención= 9,10min.) se reunieron y el disolvente se eliminó a vacío. El compuesto se secó a temperatura ambiente a vacío proporcionando 25 mg del compuesto del epígrafe como un sólido amarillo amorfo.
RMN de XH (500 MHz, CL0R0F0RM0-D) d ppm 1,23 (m, 1 H) 1,30 - 1,56 (m, 9 H) 1,77 (m, 2 H) 1,90 - 2,14 (m, 5 H) 2,54 -3,39 (m, 12 H) 3,67 (m, 1H) 3,97 (s, 3 H) 4,10 (m, 1H) 4,48 (d, J=14,65 Hz, 1 H) 5,45 (d, J=14,65 Hz, 1 H) 6,95 (d, J=2,75 Hz, 1 H) 6,97 (s, 1 H) 7,04 (dd, J=8,70, 2,59 Hz, 1 H) 7,46 (dd, J-=8,55, 1,53 Hz, 1 H) 7,52 (d, J=8,55 Hz, 1 H) 7,55 (s, 1 H) 7,89 (d, .7=8,55 Hz, 1 H) 7,94 (d, J=l,22 Hz, 1 H) 9,13 (s ancho, 1 H) .
Tiempo de retención de LC-EM 1,91 min; 712 m/z (MH) . Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de mantenimiento de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización .
Ester 1, 1-dimetiletílico del ácido, 13-ciclohexil-6- [3- [ (2R, 6S) -2, 6-dimetil-4-morfolinil] -1, 3 -dioxopropil] -3 -metoxi -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxílico En un matraz de fondo redondo de 250 mi se disuelve 13-ciclohexil-6- (3-etoxi-3-oxopropanoil) -3 -metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxilato de tere-butilo (3,13g, 5,61 mmol) en tolueno (56 mi) y se añade cis-2 , 6 -dimetilmorfolina (2,6 mi, 20,99 mmol) a la reacción. Se coloca la reacción en una atmósfera de nitrógeno y se calienta hasta reflujo -durante 9 horas. La reacción se repartió entre acetato de etilo y ácido cítrico acuoso 1,0M. La fase orgánica se lavó secuencialmente con ácido cítrico acuoso 1,0M, NaH2P04 0 , 1M y salmuera. La fase orgánica se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se elimina el disolvente a vacío dando 3,01g de producto bruto como una espuma de color naranja-ámbar. Se disuelve el producto bruto en diclorometano y se adsorbe sobre 8,2g de gel de sílice. Se sometió el producto bruto a cromatografía en 90g de suspensión de gel de sílice rellena en 5% de acetato de etilo en diclorometano, se eluye con gradiente de con gradiente de 5% de acetato de etilo en diclorometano hasta 10% de acetato de etilo en diclorometano. Las fracciones de producto puro se reunieron y el disolvente se eliminó a vacío usando un evaporador rotatorio proporcionando un sólido amorfo amarillo que seguidamente se secó a vacío a temperatura ambiente proporcionando l,28g del compuesto del epígrafe. Las fracciones menos puras proporcionaron otros 0,48 g de producto. El análisis de LC-EM dio dos picos de. masa equivalente a la del producto deseado. La resolución de los dos picos por HPLC Prep en las siguientes condiciones proporcionó picos que se interconvirtieron cuando se analizó después del aislamiento: Sistema de cromatografía líquida de alta presión de Shimadzu que emplea software de Discovery VP conectado con un controlador SCL-10A, un automuestreador SIL-10A y un recolector de fracciones de FRC-10A. La muestra 76816-035-a (63mg) se disolvió en mezcla de acetonitrilo / DMF (2:1, 2ml) se purificó usando una columna Phenomenex Luna C18 30 x 100 mm 10 u y se sometió a seguimiento usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda del detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 40ml/ min, un gradiente de 60% de disolvente A / 40% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 15 minutos con un tiempo de funcionamiento de 25 minutos usando % de A= acetato amónico 10 mM en agua/acetonitrilo 95:5 % de B= acetato amónico 10 mM en agua/acetonitrilo 5:95 como sistema disolvente. Se aislaron dos picos de la muestra: Primer pico a TR= 16,3 minutos. Ambas muestras presentaron idénticos espectro de HPLC después de aislar indicando interconversión .
RMN de ¾ (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 0,89 (s, 2,0 H) 1,01 (s, 3,3 H) 1,19 (d, 7=26,25 Hz, 3,5 H) 1,30 - 1,47 (m, 4,5 H) 1,55 (s, 4,2 H) 1,60 (s, 3,6 H) 1,63 (s, 9,0 H) 1,76 (d, .7=8,24 Hz, 3,1 H) 1,93 (d, J=9,46 Hz, 1,9 H) 1,98 - 2,15 (m, 4,2 H) 2,23 (s, 1,2 H) 2,39 (s, 0,4 H) 2,56 - 2,72 (m, 1,6 H) 2,74 -2,86 (m, 1,6 H) 2,91 (s, 0,8 H) 3,47 - 3,65 (m, 2,8 H) 3,74 -3,85 (m, 1,6 H) 3,90 (s, 1,4 H) 3,91 (s, 3,1 H) 3,93 - 4,04 (m, 1,8 H) 4,19 (d, J=12,82 Hz, 0,5 H) 4,26 (d, 7=14,65 Hz,0,5 H) 4,39 (s, 0,5 H) 4,47 (d, 7=11,29 Hz, 0,4 H) 5,18 (s, 0,3 H) 5,71 - 5,92 (m, 1,1 H) 7,01 (d, J"=2,75 Hz, 0,4 H) 7,03 - 7,06 (m, 1,4 H) 7,11 (dd, 7=8,70, 2,59 Hz, 1,0 H) 7,47 - 7,51 (m, 0,9 H) 7,52 (s, 0,5 H) 7,57 (s, 0,4 H) 7,65 (d, 7=1,53 Hz, 0,2 H) 7,68 (dd, 7=8,55, 1,22 Hz, 1,2 H) 7,80 (s, 0,6 H) 7,80 - 7,82 (m, 0,7 H) 7,84 (s, 0,2 H) 7,91 (s, 0,4 H) 8,04 (s, 0,5 H) 8,19 (s, 0,3 H) 8,21 (d, J"=l,22 Hz, 1,0 H) 15,15 (d, ,7=23,80 Hz, 0,4 H) .
Tiempo de retención LC-EM 4,21min (88%); 625m/z (MH-) y 5,23min (12%); 625m/z (MH-). Los datos de LC se registraron en un cromatografo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 10u C18 4,6 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 70% de disolvente A / 30% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 5min, un tiempo de mantenimiento de 2 min, y un tiempo de análisis de 7 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización .
Ester 1, 1-dimetiletílico del ácido 13 -ciclohexil- 6- l(2E,Z) -3- (dimetilamino) -2- [[(2R, 6S) -2, 6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] -l-oxo-2-propenil] -3 -metoxi -7H-indolo [2,1-aj [2]benzacepin-10-carboxílico Se disolvió éster 1 , 1-dimetiletílico del ácido 13-ciclohexil-6- [3- [ (2R, 6S) -2, 6-dimetil-4-morfolinil] -1,3-dioxopropil] -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico en N, -dimetilformamida dimetil acetal (10 mi,). Se equipó la reacción con un condensador y se colocó en una atmósfera de nitrógeno. La reacción se calentó hasta reflujo durante 3 horas, se enfrió y luego se eliminaron los volátiles a vacío usando un evaporador rotatorio, luego se secó a vacío a temperatura ambiente obteniendo el producto como un sólido naranja amorfo (517mg, 86%) .
Tiempo de retención LC-EM 4,60min; 682 m/z (MH+) . Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 4,6 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 4 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 5min, un tiempo de mantenimiento de 2 min, y un tiempo de análisis de 7 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverizacion. El intermedio se usó sin purificación posterior. Ácido 13 -ciclohexil- 6- [ (2E,Z) -3- (dimetilamino) -2- [ [ (2R, 6S) -2, 6-dimetil -4 -morfolinil] carbonil] -l-oxo-2 -propeni1] -3 -metoxi - 7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxílico Se disolvió éster 1 , 1-dimetiletílico del ácido 13-ciclohexil-6- [ (2E, Z) -3- (dimetilamino) -2- [ [ (2R, 6S) -2, 6-dimetil-4 -morfolinil] carbonil] -l-oxo-2-propenil] -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2 ] benzacepin- 10 -carboxílico en 1 , 2 -dicloroetano (5ml) y se añadió TFA (5 mi) a la reacción. La reacción se colocó en una atmósfera de nitrógeno y se agitó durante 2,5 horas. Los volátiles se eliminaron a vacío de la reacción usando un evaporador rotatorio dando un aceite rojizo. El producto se disolvió en benceno/diclorometano y los volátiles se eliminaron de nuevo a vacío dando una espuma roja. El producto se disolvió en acetato de etilo y se lavó con ácido clorhídrico acuoso 1,0N. La fase acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se reunieron, se lavaron con salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio. La solución orgánica se filtró y los volátiles se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio dando una espuma ámbar-naranja. El producto se secó a vacío a temperatura ambiente dando 388mg de sólido ámbar-naranja amorfo.
Tiempo de retención LC-EM 2,83 min; 624 m/z (MH-) . Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 4,6 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 4 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 5min, un tiempo de mantenimiento de 2 min, y un tiempo de análisis de 7 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización. 7H13-Ciclohexil-6- [(2E,Z) -3- (dimetilamino) -2-[[(2R, 6S) -2, 6-dimetil-4-morfolinil]carbonil] -l-oxo-2-propenil] -3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] - -indolo[2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida En un matraz de fondo redondo de 25 mi, se disuelve ácido 13-ciclohexil-6- [ (2E, Z) -3- (dimetilamino) -2- [ [ (2R, 6S) -2,6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] -l-oxo-2-propenil] -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico (385mg, 0,616 mmol) en diclorometano (6,2 mi), se añade propano-2-sulfonamida (233 mg, 1,892 mmol) y DMAP (230 mg, 1,880 mmol) a la reacción seguido por EDC (177 mg, 0,924 mmol) . La reacción se colocó en una atmósfera de nitrógeno y se agita a temperatura ambiente durante 18,5 horas. La reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con ácido clorhídrico acuoso 1,0N. Las fases acuosas se reunieron y se volvieron a extraer con acetato de etilo. Las fases orgánicas se reunieron y se lavaron secuencialmente con ácido clorhídrico acuoso 1,0N y salmuera. La solución orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y el disolvente se eliminó a vacío usando un evaporador rotatorio dando sólido/espuma naranja amorfo que se secó a vacío dando 415mg de producto bruto.
Tiempo de retención LC-EM 3,00 min; 729m/z (MH-). Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 4,6 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 5min, un tiempo de mantenimiento de 2 min, y un tiempo de análisis de 7 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización .
El producto bruto se usó sin ninguna purificación adicional en la posterior síntesis de pirazol.
El análogo siguiente se puede preparar usando la metodología general descrita a continuación. 13-ciclohexil-6- [ (2E, Z) -3- (dimetilamino) -2- [ [ {2R, 6S) -2,6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] -l-oxo-2-propenil] -3-metoxi- - [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxamida, (100 mg, 0,137 mmol) en etanol (547 µ?) y dioxano (137 µ?) . Se añade el reactivo de hidrazina (0,146 mmol) seguido por TEA (58,2 µ?, 0,417 mmol) a la reacción en un recipiente de reacción de microondas de 0,5-20 mi. Se cubrió el recipiente en una atmósfera de nitrógeno y se calentó a 160 °C durante 45 minutos. La reacción se diluyó en DMF/Acetonitrilo y el compuesto producto se purificó por HPLC de fase inversa. 13-Ciclohexil-6- [l-ciclopentil-4- [ [ (2R, 6S) -2, 6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -3 -metoxi -N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Este compuesto se aisló usando HPLC de fase inversa con la instrumentación indicada más adelante usando el procedimiento de gradiente B en n° 16. Software de LC Dionex APS-3000: Chromeleon 6,70 spl; Software de EM Thermo-Finnigan Xcalibur; Bomba binaria Dionex P680 para el análisis; Bomba binaria prep Dionex PP150; Espectrómetro UV Dionex UVD340U; detector Polymer Labs PL-ELS 1000 ELS; espectrómetro de masas Thermo-Finnigen MSQ Surveyor Plus. Condiciones de LC : Col mna: Waters Xbridge 19x200 5 um C18; Columna de protección; Waters Xbridge 19xl0mm 5 um C18; Fase móvil; A = agua, NH4OH 20 mM; B = Acetonitrilo . Tiempo de retención LC-EM 6,05 min; 768,86m/z (MH+) . Los datos de LC se registraron usando Masslynx 4.0 SP4 con un sistema equipado con: Automuestreador CTC-Leap HTS-PAL con módulo de inyección de 4 orificios Harney, Bomba binaria Waters 1525, detector UV Waters 2488 a 220 nm, detector Polymer Lab 1000 ELS (Temp eva.=90°C, Temp Neb.= 80°C) y un espectrómetro de masas Waters LCT con fuente MUX de 4 vías. La muestra se analizó usando una columna Ascentis 4,6 x 50 mm 5 uM C18. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 2 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 8min, un tiempo de mantenimiento de 1 min, y un tiempo de análisis de 9 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Ionización de EM usando un espectrómetro de masas Waters LCT en modo positivo de ESI.
Los siguientes compuestos se sintetizaron por el ejemplo del procedimiento general anterior.
Tiempo de Ión másico Procedimiento Procedimiento Estructura retención observado de analítico (min) (MH+) purificación Procedimiento 4,53 777,83 BinlO A Procedimiento 4,61 791, 85 BinlO A Procedimiento 4, 65 777, 84 BinlO A Procedimiento ° ° S /" 4,78 816,88 Binl4 A 0 1 Procedimiento 4,80 778,84 Binl2 A Procedimiento de HPLC analítica A: Los datos de LC se registraron usando Masslynx 4.0 SP4 con un sistema equipado con: Automues treador CTC-Leap HTS-PAL con módulo de inyección de 4 orificios Harney, Bomba binaria aters - 165 - un tiempo de gradiente de 8min, un tiempo de mantenimiento de 1 min, y un tiempo de análisis de 9 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Ionización de EM usando un espectrómetro de masas Waters LCT en modo positivo de ESI.
Los siguientes compuestos se sintetizaron por el ejemplo del procedimiento general anterior. - 166- Procedimiento de HPLC analítica A: Los datos de LC se registraron usando Masslynx 4.0 SP4 con un sistema equipado con: Automuest reador CTC-Leap HTS-PAL con módulo de inyección de 4 orificios Harney, Bomba binaria Waters - 167- 1525, detector UV Waters 2488 a 220 nm, detector Polymer Lab 1000 ELS (Temp eva.=90°C, Temp Neb . = 80°C) y un espectrómetro de masas Waters LCT con fuente MUX de 4 vías. La muestra se analizó usando una columna Ascentis 4,6 x 50 mm 5 uM C18. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 2 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 8min, un tiempo de mantenimiento de 1 min, y un tiempo de análisis de 9 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Ionización de EM usando un espectrómetro de masas Waters LCT en modo positivo de ESI. 13 -Ciclohexil -N- (ciclopropilsulfonil) -6- [4- [[(2R, 6S) -2, 6-dimetil-4-morfolinil]carbonil] -1- (3 -metil-4-piridinil) -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida En un recipiente de reacción de microondas de 0,5-2,0 mi, se suspendió éster 1 , 1-dimetiletílico del ácido 13-ciclohexil- - 168- 6- [ (2E, Z) -3- (dimetilamino) -2- [ [ (2R,6S) -2, 6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] -l-oxo-2-propenil] -3-metoxi-7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico (106 mg, 0,155 mmol) en etanol (504 µ?) y dioxano (126 µ?) . Se añadió trietilamina (65,9 µ? , 0,473 mmol) a la reacción seguido por clorhidrato de 4-hidrazinil-3-metilpiridina, 0,4 H20 (26,7 mg, 0,160 mmol) . La reacción se cubrió en una atmósfera de nitrógeno y se calentó en un microondas hasta 140 °C durante 40 minutos.
El análisis por HPLC indica reacción incompleta con presencia de material de partida. Se vuelve a cubrir la reacción en una atmósfera de nitrógeno y se calienta la reacción a 140 °C durante otros 40 minutos. La reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico acuoso 1,0N. La fase acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo y se reunieron las fases orgánicas. La fase orgánica se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico acuoso 1,0N, NaH2P04 acuoso 0,1M y salmuera. La fase orgánica se secó sobre Na2S04, se filtró y el disolvente se eliminó a vacío obteniendo una película fina. El producto bruto se secó a vacío a temperatura ambiente proporcionando 83mg de producto como una película-espuma amarillo amorfa.
Intermedio como éster t-butílico: Tiempo de retención LC-EM 4,71 min; 742 m/z (MH+) . Los datos de LC se registraron en un cromatografo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 4,6 x 50 mm usando un detector - 169- de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 4 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A- / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 5min, un tiempo de mantenimiento de 2 min, y un tiempo de análisis de 7 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización El producto bruto se usó sin purificación posterior. El intermedio éster t-butílico (81mg) se disolvió en 1,2-dicloroetano (lml) y se añadió TFA (lml) . La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 2,5 horas. Los volátiles de la reacción se eliminaron a vacío usando un evaporador rotatorio. El residuo se disolvió entonces en mezcla de benceno-diclorometano y se eliminaron los volátiles a vacío. El producto ácido bruto resultante se secó a vacío a temperatura ambiente durante la noche proporcionando 88 mg de un sólido naranja. LC-EM del intermedio carboxílico ácido: Tiempo de retención LC-EM 2,61 min; 684 m/z (MH-) . Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 4,6 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 - 170 - nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 4 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 5min, un tiempo de mantenimiento de 2 min, y un tiempo de análisis de 7 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización. El ácido carboxílico intermedio se usó sin purificación posterior: En un vial de 2 dram, el ácido carboxílico anterior en forma de sal TFA (85,4mg, 0,107 mmol) se disolvió en THF (lml) . Se añadió a la reacción carbonildiimidazol (43,5 mg, 0,268 mmol) y luego se cubrió la reacción se cubrió en una atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora luego se calentó hasta 70 °C durante 2 horas seguido por enfriamiento hasta temperatura ambiente. Se añadió a la reacción ciclopropanosulfonamida (64,3 mg, 0,531 mmol) seguido por 2 , 3 , 4 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10-octahidropirimido [1 , 2-a] azepina (DBU) (40 µ? , 0,268 mmol) . La reacción se cubrió en una atmósfera de nitrógeno y se sumergió en un baño de aceite a 70 °C durante 18 horas.
El producto se purificó en un sistema de cromatografía líquida de alta presión de Shimadzu que emplea software de - 171 - Discovery VP conectado con un controlador SCL-10A, un automuestreador SIL-10A y un recolector de fracciones de FRC-10A. La reacción se diluyó hasta 2ml con acetonitrilo con la adición de unas pocas gotas de TFA y se purificó usando una columna Waters Sunfire Prep C18 OBD, 5uM 19mm x 150mm y se controló usando un detector de UV-Vis SPD-10AV UV-Vis a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 25 mi / min, un gradiente de 70% de disolvente A / 30% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 30 minutos con un tiempo de funcionamiento de 40 minutos usando % de A= 10% de acetonitrilo, 90% de agua, 0,1% de TFA % de B= 90% de acetonitrilo, 10% de agua, 0,1% de TFA como sistema disolvente. El tiempo de retención del producto fue 23,24 minutos. Los volátiles se eliminaron de la fracción de producto a vacío proporcionando 39,0mg del compuesto del epígrafe .
RMN de XH (500 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 0,87 (s, 2 H) 1,05 (s, 3 H) 1,10 - 1,31 (m, 4 H) 1,31 - 1,60 (m, 5 H) 1,80 (s, 2 H) 1,88 - 2,12 (m, 4 H) 2,13 - 2,37 (m, 1 H) 2,45 (s, 3 H) 2,71 (s, 0,5 H) 2,78 - 2,88 (m, 1 H) 3,17 - 3,25 (m, 1 H) 3,-37 (s, 1 H) 3,54 (s, 1 H) 3,87 (s, 3 H) 3,97 - 4,64 (m, 6 H) 4,79 (s, 1 H) 6,57 - 6,84 (m, 1 H) 6,94 (s, 1 H) 7,02 - 7,15 (m, 1 H) 7,35 - 7,51 (m, 2 H) 7,51 - 7,72 (m, 1 H) 7,78 - 7,95 (m, 2 H) 8,03 (s, 0,5 H) 8,53 (d, J=45,17 Hz, 1 H) 10,18 (s, - 172 - 0, 6 H) .
Tiempo de retención LC-EM 1,54 min; 787 m/z (MH-). Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0 x 50 mm usando un detector de UV-Vis SPD-IOAV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de mantenimiento de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización.
Los siguientes procedimientos se analizaron usando las siguientes condiciones que se indican: Los datos de HPLC se registraron en un cromatógrafo de líquidos LC-10AS equipado con una columna Phenomenex lOu C18 3,0xl60mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 1 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 30 min, donde el disolvente fue 10% de acetonitrilo / 90% de H20 / TFA 10 mM y el disolvente B - 173 - fue 10% de H20 / 90% de acetonitrilo / TFA 10 mM.
Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos LC Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna lOu C18 3,0x50mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 min, un tiempo de mantenimiento de 1 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de acetonitrilo / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de acetonitrilo / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización. 6- [l-Ciclobutil-4- [ [ (2R, 6S) -2, 6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3 -metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10 -carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1- - 174- metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (400 mg, 0,609 mmol) , DMF (4 mi), 4-metilmorfolina (0,134 mi, 1,218 mmol) , cis-2 , 6 -dimetilmorfolina (0,090 mi, 0,731 mmol) . y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-?,?,?1 ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (215 mg, 0,670 mmol). La reacción se agitó durante 1 hora. La LC-EM indica que la reacción se ha completado, 754,19 a 4,05 minutos. Se diluyó con éter, se lavó con cloruro amónico saturado, se secó (MgS04) y se evaporó dando una espuma amarilla. La espuma se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y eluyó con acetato de etilo/metanol (0% hasta 5%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando una espuma amarillo claro. La espuma se disolvió en éter y se formaron cristales tras estabilizarse. La mezcla se filtró dando el producto (341 mg, 0,452 mmol, 74,2 % de rendimiento) como polvo ligeramente amarillo. HPLC: 99,9% de pureza, 23,32 minutos. LC-EM: 754,19 a 4,05 minutos, p.f.: 217-219°C. EM AR: calculado - 754,3633, encontrado - 754,3633. RM de (400Mz, CD3OD) d 1,23 - 1,29 (m, 3 H) , 1,37 - 1,43 (m, 3 H) , 1,46 -1,47 (d, J = 7 Hz, 3 H) , 1,53 - 1,54 (d, J = 7 Hz, 3 H) , 1,63 (s, 1 H), 1,77 - 1, 80 (d, J = 11 Hz, 3 H), 1,84 (s ancho, 1 H) , 1,96 (s ancho, 4 H) , 2,03 (s, 1 H) , 2,09 - 2,13 (m, 3 h) , 2,21 (s ancho, 1 H) , 2,29 (s ancho, 2 H) , 2,45 (s, 1 H) , 2,71 - 2,75 (t, J = 12 Hz, 1 H) , 2,81 (s ancho, 1 H) , 2,85 - 2,90 (t, J = - 175- 12 Hz, 1 H) , 3,20 (s ancho, 2 H) , 3,96 (s, 3 H) , 4,04 - 4,13 (spt, J- = 7 Hz, 1 H) , 4,55 - 4,58 (d, J = 16 Hz , 1 H) , 4,79 (s ancho, 1 H) , 4,84 - 4,87 (d, J = 16 Hz, 1 H) , 6,71 (s, 1 H) , 6, 94 (s, 1 H) , 7, 11 - 7, 13 (d, J = 7 Hz, 1 H) , 7, 58 - 7, 63 (dd, J = 8 Hz y 13,5 Hz, 2 H) , 7,68 - 7,71 (d, J = 13,5 Hz, 2 H) , 7,90 - 7,92 (d, J = 8 Hz, 1 H) y 10,6 (s ancho, 1 H) . 6- [1-Ciclobutil 4- [ [ (2S) -2- (metoximetil) -4- morfolinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13 -ciclohexil-3 -metoxi- N- [ (l-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10- carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13- ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1- metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2, 1- a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,107 mmol) , DMF (1 mi), (R) -2- (metoximetil) morfolina, HCl (35,7 mg, 0,213 mmol), 4 -metilmorfolina (0,035 mi, 0,320 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' - tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol). La reacción se agitó durante 1 hora. Se diluyó con éter, se lavó con cloruro - 176- amónico saturado, se secó (MgS04) y se evaporó dando una espuma amarilla. La espuma se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y eluyó con acetato de etilo/metanol (0% hasta 10%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando una película amarillo claro. La película se disolvió en DCM, se volvió a evaporar, el residuo se trituró en hexano/éter (5%) y se filtró dando el producto (66 mg, 0,084 mmol , 79 % de rendimiento) como un polvo amarillo claro. HPLC : 98,0% de pureza, 22,52 minutos. LC-EM: 770,32 a 3,96 minutos, p.f.: 176-178°C. EM AR: calculado - 770,3582, encontrado 770,3583. RM de ¾: (400Mz, CD3OD) d 1,23 - 1,26 (td, J = 7 Hz y 3,5 Hz, 2 H) , 1,35 - 1,44 (m, 4 H) , 1,46 - 1,48 (d, J = 6 Hz , 2 H) , 1,52 - 1,53 (d, J = 6 Hz, 3 H) , 1,68 (s ancho, 1 H) , 1,77 -1,80 (d, J = 10 Hz, 3 H) , 1,84 (s ancho, 1 H) , 1,92 - 2,01 (m, 3 H) , 2,03 (s, 1 H) , 2,08 - 2,16 (m ancho, 3 h) , 2,28 (s ancho, 1 H) , 2,28 (s ancho, 2 H) , 2,44 (s ancho, 1 H) , 2,70 -2,74 (t, J = 10 Hz, 2 H) , 2,79 (s, 1 H) , 2,84 - 2,89 (m, 2 H) , 2,97 (s ancho, 2 H) , 3,04 (s ancho, 1 H) , 3,19 (s ancho, 2 H) , 3,24 (s, 2 H) , 3,38 (s ancho, 1 H) , 3,95 (s, 3 H) , 4,06 - 4,13 (m, 1 H) , 4,55 - 4,59 (dd, J = 15 Hz y 5 Hz, 1 H) , 4,77 (s ancho, 1 H) , 4,83 - 4,90 (t, J = 15 Hz, 1 H) , 6,73 - 6,75 (d, J = 8 Hz, 1 H) , 6, 94 (s, 1 H) , 7, 11 - 7, 12 (d, J = 8 Hz, 1 H) , 7,56 - 7,66 (m, 3 H) , 7,71 (s, 1 H) , 7,88 - 7,92 (t, J = 8 Hz, 1 H) y 10,5 (s ancho, 1 H) . - 177 - 6- [1 -Ciclobutil -4- (8-oxa-3-azabiciclo [3, 2, 1] octan-3- il) carbonil -lH-pirazol -5-il] -13-ciclohexil -3 -metoxi -N- [ (1- metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10- carboxamida ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1- metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2, 1- a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,107 mmol) , DMF (1 ml) , 4 -metilmorfolina (0,035 ml , 0,320 mmol) , 8- oxa-3 -azabiciclo [3 , 2 , 1] octano, HC1 (31,9 mg, 0,213 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' - tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol) . La reacción se agitó durante 1 hora. Se diluyó con éter, se lavó con cloruro amónico saturado, se secó (MgS04) y se evaporó dando una espuma amarilla. La espuma se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y eluyó con acetato de etilo/metanol (0% hasta 10%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando una película amarillo claro. La película se disolvió en DCM, se volvió a evaporar, el residuo se trituró en hexano/éter (5%) y se - 178 - filtró dando el producto (59 mg, 0,075 mmol, 70,7 % de rendimiento) como un polvo amarillo claro. HPLC: 96,1% de pureza, 22,80 minutos. LC-EM: 752,29 a 3,98 minutos, p.f.: 188-190°C. EM AR: calculado - 752,3476, encontrado - 752,3478. RMN de (400Mz, CD3OD) d 1,23 - 1,29 (m, 3 H) , 1,37 - 1,43 (m, 3 H) , 1,46 - 1,47 (d, J = 7 Hz, 3 H) , 1,53 - 1,54 (d, J = 7 Hz, 3 H) , 1,63 (s, 1 H) , 1,77 - 1,80 (d, J = 11 Hz, 3 H) , 1,84 (s ancho, 1 H) , 1,96 (s ancho, 4 H) , 2,03 (s, 1 H) , 2,09 - 2,13 (m ancho, 3 h) , 2,21 (s ancho, 1 H) , 2,29 (s ancho, 2 H) , 2,45 (s, 1 H) , 2,71 - 2,75 (t, J = 12 Hz, 1 H) , 2,81 (s ancho, 1 H) , 2,85 - 2,90 (t, J = 12 Hz, 1 H) , 3,20 (s ancho, 2 H) , 3,96 (s, 3 H) , 4,04 - 4,13 (spt, J" = 7 Hz, 1 H) , 4,55 - 4,58 (d, J = 16 Hz, 1 H) , 4,79 (s ancho, 1 H) , 4,84 - 4,87 (d, J = 16 Hz, 1 H) , 6,71 (s, 1 H) , 6,94 (s, 1 H) , 7,11 - 7,13 (d, J" = 7 Hz, 1 H) , 7,58 - 7,63 (dd, J = 8 Hz y 13,5 Hz, 2 H) , 7,68 - 7,71 (d, J = 13,5 Hz, 2 H) , 7,90 - 7,92 (d, J = 8 Hz, 1 H) y 10,6 (s ancho, 1 H) . 6- [1-Ciclobutil -4 - (1-metilpiperazin-4-il)carbonil-lH-pirazol -5-il] -13-ciclohexi1-3-metoxi-N-[(l -metiletiDsulfoni1]-7H-indolo[2,1 -a] [2]benzacepin-10-carboxamida - 179 - Se cargó un vial de 2 dram con ácido 1-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ ( 1 -metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -??- indo lo [2,1-a] [ 2 ] benzacepin- 6 - i 1 ] - 1H -pirazol - 4 - carboxí lico (70 mg, 0,107 mmol) , DMF (1 mi) , 1 -metilpiperazina , HC1 (0,032 mi, 0,213 mmol) , 4 - me t i lmor f ol ina (0, 035 mi, 0,320 mmol) y tetrafluoroborato de o - benzo t r iazol - 1 - i 1 -N, , ' , N' - tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg , 0,117 mmol) . La reacción se agitó durante 1 hora. Se diluyó con éter, se lavó con agua y luego salmuera, se secó (MgS0 ) y se evaporó dando una espuma amarilla. La espuma se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y eluyó con acetato de etilo/metanol (5% hasta 30%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando una película amarillo claro. La película se disolvió en DCM, se volvió a evaporar, el residuo se trituró en hexano/éter (5%) y se filtró dando el producto (44 mg, 0, 059 mmol, 55,3 % de rendimiento) como un polvo amarillo claro. HPLC: 99,1% de pureza, 24, 07 minutos. LC-EM: 739,31 a 3,70 minutos, p.f. : 224-226°C. EM AR : calculado - 739,3636, encontrado - 739,3630. - 180- 6- [1-Ciclobutil -4-( (1S,4S) -2-OXSL-5-azabiciclo [2, 2, 1]heptan-5-il) carbonil -lH-pirazol -5-il] -13-ciclohexil -3 -metoxi -N- [ (1 -metiletil) sulfonil] - 7H-indolo [2, 1 -a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil ) sulfonil] amino] carbonil] -7H- indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4 -carboxílico . (70 mg, 0,107 mmol) , DMF (1. mi) , (1S, 4S) -2-oxa-5-azabiciclo [2 , 2 , 1] heptano, HC1 (28,9 mg, 0,213 mmol), 4 -metilmorfolina (0,035 mi, 0,320 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol). La reacción se agitó durante 1 hora. Se diluyó con éter, se lavó con cloruro amónico saturado, se secó (MgS04) y se evaporó dando una espuma amarilla. La espuma se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y eluyó con acetato de etilo/metanol (0% hasta 10%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando una película amarillo claro. La película se disolvió en DCM, se volvió a evaporar, el residuo se trituró en hexano/éter (5%) y se - 181 - filtró dando el producto (58 mg, 0,078 mmol, 73,0 % de rendimiento) como un polvo amarillo claro. HPLC: 99,9% de pureza, 22,39 minutos. LC-EM: 738,26 a 3,96 minutos, p.f.: 164-166°C. EM AR: calculado - 738,3820, encontrado - 738,382. 6- [1-Ciclobutil -4- [ [(1S,4S) -5-ciclopropilmetil-2, 5-diazabiciclo [2,2, 1] hept-2 -il] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil -3 -metoxi -N- [ (1-metiletil) sulfonil] - 7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10 -carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sul fonil ] amino] carbonil ] -??- indolo [2,1-a] [2 ] benzacepin- 6 - il ] - lH-pirazol - 4 - carboxí 1 ico (70 mg, 0,107 mmol) , DMF (1 mi) , ( 1S , 4 S ) - 2 - ( c iclopropi lmet i 1 ) - 2 , 5 -diazabiciclo [2 , 2 , 1] heptano, HCl (40,2 mg, 0,213 mmol) , 4-metilmorfolina (0,035 mi, 0,320 mmol) y tet raf luoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' - tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol) . La reacción se agitó durante una hora. Se diluyó con éter, se lavó con agua y luego - 182 - salmuera, se secó (MgS0 ) y se evaporó dando una espuma amarilla. La espuma se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y eluyó con acetato de etilo/metanol (5% hasta 30%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando una película amarillo claro. La película se disolvió en DCM, se volvió a evaporar, el residuo se trituró en hexano/éter (5%) y se filtró dando el producto (57 mg, 0,071 mmol, 66,9 % de rendimiento) como un polvo amarillo claro. HPLC : 99,9% de pureza, 23,89 minutos. LC-EM: 791,36 a 3,74 minutos, p.f.: 216-218°C. EM AR : calculado 791,3949, encontrado 791,3945. RMN de XH : (400Mz, CD3OD) d 0,02 -0,05 (m, 2 H) , 0,83 (s ancho, 2 H) , 1,23 - 1,26 (m, 3 H) , 1,38 - 1,45 (m, 9 H) , 1,76 (s ancho, 3 H) , 1,94 (s ancho, 2 H) , 2,03 - 2,04 (m, 5 H) , 2,16 - 2,28 (m, 2 H) , 2,53 (s ancho, 1 H) , 2,70 (s ancho, 2 H) , 2,83 - 2,86 (m, 2 h) , 3,06 (s ancho, 1 H) , 3,19 (s ancho, 1 H) , 3,78 (s ancho, 1 H) , 3,93 - 3,95 (m, 4 H) , 4,08 - 4,13 (m, 1 H) , 4,56 (s ancho, 1 H) , 4,86 - 4,88 (m, 2 H) , 6,69 - 6,80 (m, 1 H) , 6,92 - 6,95 (d, J" = 13 Hz, 1 H) , 7,08 (s ancho, 1 H) , 7,52 (s ancho, 1 H) , 7,64 - 7,84 (m, 4 H) . - 183 - 6- [l-Ciclobutil -4- ( ( (S) -octahidropirrolo [1 pirazin-4-il) carbonil) -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,107 mmol) , DMF (1 mi), 4 -metilmorfolina (0,035 mi, 0,320 mmol) , (S) -octahidropirrolo [1, 2-a] pirazina (13,45 mg, 0,107 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N, N, N' , N' -tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol). La reacción se agitó durante una hora. Se diluyó con éter, se lavó con agua y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando una espuma amarilla. La espuma se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y eluyó con acetato de etilo/metanol (5% hasta 30%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando una película amarillo claro. La película se disolvió en DCM, se volvió a evaporar, el residuo se trituró en hexano/éter (5%) y se filtró dando el producto (58 mg, 0,075 mmol, 70,4 % de rendimiento) como un - 184- polvo amarillo claro. HPLC: 99,9% de pureza, 24,23 minutos. LC-EM : 765,34 a 3,72 minutos, p.f.: 199-201°C. EM AR: calculado 765,3793, encontrado 765,3788. 6- [1-Ciclobutil -4- ((1R,5S) -1, 3, 5- trimetil -3, 7-diazabiciclo [3,3, 1] onan-7-ilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi -N- [ (1-metiletil) sulfonil] - 7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10 - carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,107 mmol) , DMF (1 mi), 4 -metilmorfolina (0,035 mi, 0,320 mmol) , (IR, 5S) -1 , 3 , 5 -trimetil-3 , 7-diazabiciclo [3,3,1] nonano (17,9 mg, 0,107 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-?,?,?' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol). La reacción se agitó durante 1 hora. Se diluyó con éter, se lavó con cloruro amónico saturado, se secó (MgS04) y se evaporó dando una espuma amarilla. La espuma se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y eluyó con acetato de etilo/metanol (5% hasta 30%) . Las - 185 - fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando una película amarillo claro. La película se disolvió en DCM, se volvió a evaporar, el residuo se trituró en hexano/éter (5%) y se filtró dando el producto (64 mg, 0,079 mmol , 73,7 % de rendimiento) como un polvo amarillo claro. HPLC: 99,9% de pureza, 26,31 minutos. LC-EM: 807,43 a 3,76 minutos, p.f.: 210-212°C. EM AR: calculado 807,4262, encontrado 807,4260. 6- [1-Ciclobutil -4-(l, 4-oxazepan-4-ilcarbonil) -1H- pirazol-5-il] -13 -ciclohexil-3 -metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] - 7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13- ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1- metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1- a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol -4 -carboxílico (70 mg, 0,107 mmol), DMF (1 mi), 4 -metilmorfolina (0,035 mi, 0,320 mmol), 1, 4-oxazepan (14,67 mg, 0,107 mmol) y tetrafluoroborato de o- benzotriazol-l-il-N, N, N' , N' -tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol) . La reacción se agitó durante 1 hora. La LC-EM indica que la reacción se completó después de 10 minutos, 740,30 a 3,96 minutos. Se diluyó con éter, se lavó con cloruro - 186- amónico saturado, se secó (MgS04) y se evaporó dando una espuma amarilla. La espuma se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice. Thompson y eluyó con acetato de etilo/metanol (0% hasta 10%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando una película amarillo claro. La película se disolvió en DCM, se volvió a evaporar, el residuo se trituró en hexano/éter (5%) y se filtró dando el producto (51 mg, 0,068 mmol , 64,0 % de rendimiento)] como un polvo amarillo claro. HPLC : 99,9% de pureza, 22,69 minutos. LC-EM: 740,30 a 3,98 minutos, p.f.: 153-155°C. EM AR: calculado 740,3476, encontrado 740,3480. 6- [1-Ciclobutil -4- [ (3-metil-3, 8-diazabiciclo [3, 2, l]oct-8-il) carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13 -ciclohex.il -3 -metoxi -N- [ (1-metiletil) sulfonil] - 7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido 1-ciclobutil - 5 - [13 -ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4 -carboxílico (70 mg, 0,107 mmol), DMF (1 mi), 4 -metilmorfolina (0,035 mi, 0,320 mmol), 3-metil-3 , 8-diazabiciclo [3 , 2 , 1] octano (14 mg, 0,107 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N, N, N' , N' - - 187- tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol) . La reacción se agitó durante 1 hora. La LC-EM indica que la reacción se había completado, 765,37 a 3,76 minutos . Se diluyó con éter.,, se -lavó con cloruro amónico saturado, se secó (MgS04) y se evaporó dando una película amarilla. El sólido se disolvió en DCM, la solución se añadió a una columna de gel de sílice Thompson y la columna se eluyó con acetato de etilo/metanol (10% hasta 60%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un sólido, amarillo claro. El sólido se trituró en éter/hexano dando el producto (60 mg, 0,078 mmol, 73,5 % de rendimiento) como un polvo amarillo. HPLC : 99,99%. LC-EM: 765,41 a 3,77 minutos. . RM de H : (400Mz, CD3OD) 5 1,16 - 1,26 (m, 5 H) , 1,34 (s ancho, 7 H) , 1,60 (s ancho, 4 H) , 1,74 - 1,77 (m, 3 H) , 1,90 (s ancho, 3 H) , 2,03 (s ancho, 4 H) , 2,20 (s ancho, 2 H) , 2,64 (s ancho, 2 H) , 2,79 (s ancho, 1 H) , 3,92 (s, 3 H) , 6,67 (s, 1 H) , 6,87 (s, 1 H) , 7,04 - 7,05 (m, 1 H) , 7,45 (s ancho, 1 H) , 7,71 (m, 3 H) . 6- [1-Cíclobutil - 4- (3-oxa-9-azabiciclo [3,3, 1]non-9-ilcarbonil) -lH-pírazol-5-il] -13 -ciclohexil -3 -metoxi -N- 1(1-metiletil) sulfonil] - 7H-indolo 12,1 -a] [2]benzacepin-10 -carboxamida - 188 - Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,107 mmol) , DMF (1 mi), 4 -metilmorfolina (0,035 mi, 0,320 mmol) , 3-oxa-9-azabiciclo [3 , 3 , 1] nonano (13,56 mg, 0,107 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol). La reacción se agitó durante 1 hora. La LC-EM indica que la reacción se había completado, 766,36 a 4,11 minutos. Se diluyó con éter, se lavó con cloruro amónico saturado, se secó (MgS04) y se evaporó dando un sólido amarillo. El sólido se .. disolvió en DCM, la solución se añadió a una columna de gel de sílice Thompson y la columna se eluyó con hexano/acetato de etilo (30% hasta 100%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un sólido amarillo claro. El sólido se trituró en éter/hexano dando el producto (54 mg, 0,070 mmol, 66,1 % de rendimiento)] como un polvo amarillo claro. HPLC: 99,99%. LC-EM: 766,36 a 4,11 minutos. RMN de XH: (400Mz, CD3OD) d 1,18 - 1,26 (m, 3 H) , 1,37 - 1,42 (m, 3 H) , 1,44 -1,45 (d, J = 6 Hz, 6 H) , 1,53 - 1,54 (d, J" = 7 Hz, 3 H) , 1,57 (s, 3 H) , 1,76 - 1,78 (m, 3 H) , 1,96 - 1,99 (m, 2 H) , 2,03 (s, 1 H) , 2,10 - 2,11 (m, 2 h) , 2,27 (s ancho, 1 H) , 2,68 - 2,76 (m, 1 H) , 2,85 - 2,88 (m, 1 H) , 3,21 (s ancho, 1 H) , 3,32 -3,34 (m, 1 H) , 3,95 (s, 3 H) , 4,03 - 4,13 (spt, J = 13 Hz, 1 - 189 - H) , 4,56 - 4,59 (d, J = 16 Hz, 1 H) , 4,82 (s ancho, 1 H) , 4,87 - 4,95 (d, J = 16 Hz, 1 H) , 6,72 - 6,75 (m, 1 H) , 6,93 (s, 1 H) , 7, 12 - 7, 13 (m, 1 H) ,.7, 58 - 7, 64 (dd, J = 8 Hz y 19 Hz, 2 H) , 7,71 (s, 1 H) , 7,76 (s, 1 H) , 7,90 - 7,91 (d, J = 8 Hz , 1 H) y 10,78 (s ancho, 1 H) . 6- [1-Ciclobutil -4- (1-metil-l, 4-diazepan-4-ilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13 -ciclohexil-3 -metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] - 7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,107 mmol) , DMF (1 mi), 4 -metilmorfolina (0,035 mi, 0,320 mmol) , 1-metil - 1 , 4 -diazepan (0,013 mi, 0,107 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N, N, N' , N' -tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol) . La reacción se agitó durante 1 hora. La LC-EM indica que la reacción se había completado, 766,36 a 4,11 minutos. Se diluyó con éter, se lavó con cloruro amónico saturado, se secó (MgS04) y se evaporó dando un sólido - 190 - amarillo. El sólido se disolvió en DCM, la solución se añadió a una columna de gel de sílice Thompson y la columna se eluyó con hexano/acetato de etilo (30% hasta 100%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un sólido amarillo claro. El sólido se trituró en éter/hexano dando el producto (34 mg, 0,042 mmol , 39,8 % de rendimiento) como un polvo amarillo claro. HPLC: 93% con una impureza del 7%. LC-E : 753,44 a 3,72 minutos. 6- [l-Ciclob til -4- (l-ciclopentilpiperazin-4-ilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13 -ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4 -carboxílico (60 mg, 0,091 mmol), DMF (1 mi), 4 -metilmorfolina (0,030 mi, 0,274 mmol), 1-ciclopentilpiperazina (15,50 mg, 0,100 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-1- il -N, , N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (32,3 mg, 0,100 mmol). La reacción se - 191 - agitó durante 1 hora. La LC-EM indica que la reacción se había completado, 766,36 a 4,11 minutos. Se diluyó con éter, se lavó con cloruro amónico saturado, se secó (MgS04) y se evaporó dando un sólido amarillo. El sólido se disolvió en DC , la solución se añadió a una columna de gel de sílice Thompson y la columna se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 5%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un sólido amarillo claro. El sólido se trituró en éter/hexano dando el producto (52 mg, 0,065 mmol, 71,5 % de rendimiento) como un polvo amarillo claro. HPLC: 99,6%. LC-EM: 793,43 a 3,77 minutos. 6- [1-Ciclobutil -4- [ [ (2R, 6S) -2, 6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] ) -lH-pirazol-5-il] -13 -ciclohexil -3 -metoxi -N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13 -ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (N,N-dimetilamino) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4 -carboxílico (70 mg, 0,106 mmol), DMF (1 mi), 4 -metilmorfolina (0,023 mi, 0,213 mmol), - 192 - cis-2 , 6-dimetilmorfolina (0,016 ml, 0,128 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol) . La reacción se agitó durante la noche. La LC-EM indica que la reacción se ha completado, 753,2/755,2 a 3,08 minutos. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con HC1 0,1 N (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con hexano/acetato de etilo (30% hasta 100%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un sólido blanco cremoso. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (39 mg, 0,051 mmol, 48% de rendimiento) como un polvo blanco. HPLC: 99,9% puro a 22,94 minutos. LC-EM pos/neg: 753,2/755,1 a 2,98 minutos. RM de XH: (400Mz, CD3OD) d 1,20 - 1,29 (m, 5 H) , 1,37 - 1,43 (m, 4 H) , 1,58 - 1,60 (d, J = 13 Hz , 2 H) , 1,67 (s, 3 H) , 1,77 - 1,79 (d, J = 11 Hz , 3 H) , 1,91 - 1,97 (m, 4 H) , 2,03 - 2,14 (m, 3 H) , 2,28 -2,30 (d, J = 7 Hz , 6 H) , 2,50-2,52 (m, 1 H) , 2,72 - 2,76 (m, 1 H) , 2,80 (s, 3 H) , 2,87 (s, 3 H) , 2,94 (s, 3 H) , 3,95 (s, 2 H) , 4,08 (s, 2 H) , 4,38 - 4,41 y 4,52 - 4,55 (m, 1 H) , 4,76 (s ancho, 1 H) , 6,47 y 6,68 (s, 1 H) , 6,93 (s, 1 H) , 7,11 - 7,12 (m, 1 H) , 7,31 - 7,33 (m, 1 H) , 7,57 (s, 1 H) , 7,65 (s, 1 H) , 7,73 - 7,75 (d, J = 7 Hz, 2 H) , 8,01 (s, 1 H) , 8,27 - 8,29 (d, J = 7 Hz , 1 H) , 9,26 y 10,85 (m, 1 H) . - 193 - 6- [l-Ciclobutil -4- [ [(2R,6S) -2, 6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] -3 -metil -lH-pirazol -5-il] -13 -ciclohexil-3 -metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10 -carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil-l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (N,N-dimetilamino) sulfonil] amino] carbonil] - 7H- indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lfí-pirazoÍ-4-carboxílico (70 mg, 0,104 mmol) , DMF (1, mi), 4 -metilmorfolina (0,023 mi, 0,208 mmol) , cis-2 , 6-dimetilmorfolina (0,015 mi, 0,125 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (36,8 mg, 0,115 mmol). La reacción se agitó durante la noche. La LC-EM indica que la reacción se ha completado, 767,3/767,2 a 3,10 minutos. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con HC1 0,1 N (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con hexano/acetato de etilo (30% hasta 100%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un sólido blanco cremoso. El sólido se - 194- trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (59 mg, 0,076 mmol , 72,9 % de rendimiento) como un polvo blanco cremoso. HPLC: 99,9% de pureza, 23,13 minutos. LC-EM: 769,18 a 4.05 minutos. R de ¾: (400Mz, CD3OD) d 1,20 - 1,26 (m, 3 H) , 1,37 - 1,43 (m, 3 H) , 1,45 - 1,48 (m, 4 H) , 1,53 - 1,54 (d, J = 7 Hz, 2 H) , 1,67 (s, 4 H) , 1,77 - 1,80 (d, J = 11 Hz, 2 H) , 1,82 - 1,86 (m, 1 H) , 1,90 - 1,99 (m, 3 H) , 2,03 (s, 3 H) , 2.06 - 2,12 (m, 2 H) , 2,28 -2,31 (d, J = 14 Hz , 4 H) , 2,50-2,52 (m, 1 H) , 2,72 - 2,76 (m, 1 H) , 2,85 - 2,90 (m, 2 H) , 3.07 (s ancho, 1 H) , 3,20 - 3,22 (m, 1 H) , 3,96 (s, 2 H) , 4,08 (s, 2 H) , 4,40 - 4,43 y 4,52 - 4,55 (m, 1 H) , 4,75 - 4,83 (m ancho, 1 H) , 6,37 y 6,67 (s, 1 H)., 6,93 (s, 1 H) , 7,11 - 7,13 (m, 1 H) , 7,28 - 7,33 (m, 2 H) , 7,58 - 7,68 y 7,74 - 7,75 (m, 3 H) , 7,88 - 7,90 (d, J" = 8 Hz, 1 H) , 8,27 - 8,28 y 8,95 -8,97 (d, J = 8 Hz, 1 H) , 9,27 y 10,84 (m, 1 H) . 6- [l-Ciclobutil -4-IK2R, 6S) -2, 6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] -3-metil-lH-pirazol-5-il] -13 -ciclohexil-3 -metoxi -N- [ (1-metiletil) sulfonil] - 7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida - 195 - Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil- 1-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,104 mmol) , DMF (1 mi), 4 -metilmorfolina (0,023 mi, 0,209 mmol) , cis-2 , 6-dimetilmorfolina (0,015 mi, 0,125 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (36,9 mg, 0,115 mmol). La reacción se agitó durante la noche. La LC-EM indica que la reacción se ha completado, 766,2/768,2 a 2,83 minutos. La reacción se diluyó con DC , se lavó con HC1 0,1 N (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con hexano/acetato de etilo (30% hasta 100%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un solido blanco cremoso. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (50 mg, 0,064 mmol, 61,8 % de rendimiento) como un polvo blanco. HPLC : 99,99% de pureza, 26,43 minutos. LC-EM: 768,19 a 4,09 minutos. RM de XH: (400Mz, CD30D) d 1,26 - 1,30 (m, 5 H) , 1,41 - 1,45 (m, 2 H) , 1,58 (s, 6 H) , 1,78 - 1,80 (d, J = 10 Hz, 1 H) , 1,87 - 1,98 (m, 3 H) , 2,03 - 2,14 (m, 2 H) , 2,28 (s ancho, 1 H) , 2,49-2,51 (m, 1 H) , 2,62 - 2,66 (t, J = 10 Hz, 1 H) , 2,73 (s ancho, 1 H) , 2,85 - 2,90 (m, 2 H) , 3,07 y 3,08 (2 s, 6 H) , 3,95 (s, 2 H) , 4,07 (s, 2 H) , 4,43 - 4,46 y 4,56 - 4,59 (m, 1 - 196- H) , 4,80 - 4,88 (m ancho, 1 H) , 6,44 - 6,47 y 6,70 - 6,73 (ra, 1 H) , 6,94 (m, 1 H) , 7,11 - 7,13 (m, 1 H) , 7,21 - 7,22 (m, 1 H) , 7,31 - 7,33 (m, 1 H) , 7,56 -.7,66 (m, 2 H) , ..7,-71 - 7,73 (m, 1 H) , 7, 90 - 7, 92 y 8, 27 - 8, 28 (d, J = 8 Hz, 1 H) , 8, 97 -8,99 (d, J" = 8 Hz, 1 H), 9,37 y 12,56 (s ancho, 1 H) . 6- [1-Ciclobutil -4- [ [ (1S,4S) -5-etil-2, 5-diazabiciclo [2, 2, 1] hept-2-il] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil -3 -metoxi -N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10 -carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (N,N-dimet ilamino) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2 ] benzacepin-6 - il] - lH-pirazol- 4 -carboxílico (70 mg, 0,106 mmol) , DMF (1 mi) , ( 1S , 4S ) - 2 - et i 1 - 2 , 5 -diazabiciclo [2 , 2 , 1] heptano, 2 TFA (49,0 mg, 0,138 mmol) , [Reactivos] y tetrafluoroborato de o-benzotriazol - 1 - il -?,?,?' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol) . La reacción se agitó durante la noche. La LC-EM indica que la reacción se ha completado, 764,2/766,2 a 2,67 minutos. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con HC1 0,1 N (acuoso) - 197- y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 5%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un solido blanco cremoso. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (52 mg, 0,067 mmol , 63,2 % de rendimiento) como un polvo amarillo. HPLC : 99,99% de pureza, 23,71 minutos. LC-EM: 766,16 a 3,92 minutos. RMN de -1H: (400Mz, CD30D) d 1,18 - 1,30 (m, 6 H) , 1,36 - 1,46 (m, 5 H) , 1,52 (m, 4 H) , 1,59 (s ancho, 5 H) , 1,76 - 1,78 (d, J = 10 Hz, 3 H) , 1,92 - 1,94 (d, J = 10 Hz, 2 H) , 2,01 - 2,09 (m, 4 H) , 2,15 - 2,17 (d, J = 12 Hz, 1 h) , 2,29 - 2,32 (11, 1 H) , 2,43 - 2,49 (t, J = 11 Hz , 1 H) , 2,79 (s, 1 H) , 2,82 - 2,85 (m, 1 H) , 2,87 (s, 1 H) , 2,91 (s, 1 H) , 2,99 (s, 4 H) , 3,05 (s, 1 H) , 3,08 (s ancho, 1 H) , 3,25 (s ancho, 1 H) , 3,89 (s, 3 H) , 3,96 - 3,98 (d, J = 9 Hz , 1 H) , 4,06 -4,12 (m, 1 H) , 4,35 (s ancho, 1 H) , 4,56 - 4,60 (m, 1 H) , 4,69 - 4,71 (d, J = 9 Hz , 1 H) , 4,77 (s ancho, 1 H) , 6,66 (s, 1 H) , 6,99 (s, 1 H) , 7,04 - 7,05 (m, 1 H) , 7,52 - 7,53 (d, J = 8 Hz, 1 H) , 7,60 (s, 1 H) , 7,64 - 7,66 (d, J = 8 Hz, 1 H) , 7,78 - 7,79 (d, J = 8 Hz, 1 H) y 11,27 (s ancho, 1 H) . - 198 - 6- [l-Ciclobutil-3-metil-4- [ [ (1S,4S) -5-etil-2,5-diazabiciclo [2,2, 1]hept-2-il] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13 -ciclohexil -3-metoxi -N- [ (l-metiletil)sulfonil] - 7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil-l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (N,N-dimetilamino) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,104 mmol) , DMF (1 mi), 4 -metilmorfolina (0,037 mi, 0,333 mmol) , (1S , 4S) -2-etil-2 , 5 -diazabiciclo [2 , 2 , 1] heptano, 2 TFA (48,0 mg, 0,135 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-?,?,?' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (36,8 mg, 0,115 mmol). La reacción se agitó durante la noche. La LC-EM indica que la reacción se ha completado, 778,3/780,2 a 2,67 minutos. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con HC1 0,1 N (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 5%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un solido blanco cremoso. El - 199 - sólido se trituró en hexano/éter y se filtró dando el producto (53 mg, 0,-067 mtnol, 64,6 % de rendimiento) como un polvo amarillo. HPLC: 99,99% de pureza, 22,85 minutos. LC-EM: 780,19 a 3,63 minutos. R de XH: (400Mz, CD30D) d 1,25 - 1,29 (m, 7 H) , 1,36 - 1,45 (m, 3 H) , 1,49 - 1,50 (m, 2 H) , 1,58 (s ancho, 5 H) , 1,79 - 1,81 (d, J = 9 Hz, 4 H) , 1,95 - 1,97 (m, 3 H) , 2,03 - 2,07 (m, 4 H) , 2,16 (s ancho, 1 H) , 2,29 (s ancho, 2 H) , 2,32 (s ancho, 3 H) , 2,35 (s ancho, 1 H) , 2,76 (s ancho, 1 H) , 2,87 (s ancho, 1 H) , 2,96 (s, 1 H) , 3,00 (s ancho, 2 H) , 3,05 (s, 1 H) , 3,08 (s ancho, 6 H) , 3,89 (s ancho, 2 H) , 3,96 (s ancho, 3 H) , 4,06 - 4,12 (m, 1 H) , 4,54 - 5,58 (m, 1 H) , 4,77 - 4,79 (m, 1 H) , 6,79 - 6,85 (m, 1 H) , 6,97 (s, 1 H) , 7,12 - 7,13 (m, l'H), 7,50 - 7,59 (m, 3 H) , 7,90 - 7,91 (d, J = 8 Hz, 1 H) y 11,28 (s ancho, 1 H) . 6- [1-Ciclobutil -3-metil-4- [ [ (1S,4S) -5-etil-2,5-diazabiciclo [2, 2, 1]hept-2-il] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil -3 -metoxi -N- [ (1 -metiletil) eulfonil] - 7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil-l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1- -200- metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,104 mmol) , DMF (1 ml) , 4 -metilmorfolina (0,037 ml, 0,334 mmol) , (1S, 4S) -2-etil-2 , 5 -diazabiciclo [2 , 2 , 1] heptano, 2 TFA (48,1 mg, 0,136 mmol) . y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il- ?,?,?' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (36,9 mg, 0,115 mmol) . La reacción se agitó durante la noche. La LC-E indica que la reacción se ha completado, 777,2/779,2 a 2,42 minutos. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con HC1 0,1 N (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 5%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un solido blanco cremoso. El sólido se trituró en hexano/éter y se filtró dando el producto (44 mg, 0,056 mmol, 53,6 % de rendimiento) como un polvo amarillo. HPLC: 99,99% de pureza, 23,10 minutos. LC-EM: 779,21 a 3,64 minutos. RMN de (400Mz, CD3OD) 1,25 - 1,29 (m, 8 H) , 1,42 - 1,43 (d, J = 7 Hz, 6 H) , 1,46 - 1,48 (d, J = 7 Hz, 6 H) , 1,52 - 1,53 (d, J = 6 Hz, 8 H) , 1,58 (s ancho, 9 H) , 1,75 - 1,82 (m, 4 H) , 1,94 - 1,97 (s ancho, 4 H) , 2,01 - 2,08 (m, 6 H) , 2,15 - 2,16 (m, 1 h) , 2,29 (s, 3 H) , 2,32 (s ancho, 4 H) , 2,35 (s ancho, 1 H) , 2,46 (m, 1 H) , 2,50 - 2,54 (n, 2 H) , 2,76 - 2,87 (m, 3 H) , 2,95 - 2,97 (m, 1 H) , 3,89 (s, 3 H) , 3,96 (s, 4 H) , 4,00 - 4,12 (m, 4 H) , 4,44 - 4,46 (m, 1 H) , 4,53 - 4,58 - 201 - (m, 3 H) , 4,78 (s ancho, 1 H) , 4,92 (m, 1 H) , 6,67 y 6,86 (m, 1 H) , 6,97 (s, 1 H) , 7,13 - 7,14 (d, J = 9 Hz, 1 H) , 7,50 - 7,52 (d, J = 9 Hz, 1 H) , 7, 54 - 7, 55 (d, J = 8 Hz , 1 H) , 7, 58. - 7,60-- -(d, J = 9 Hz, 1 H) , 7,79 - 7,79 (d, J = 8 Hz, 1 H) , 7,90 - 7,92 (d, J = 8 Hz, 1 H) y 11,39 (s ancho, 1 H) . 6- [1-Ciclobutil -4- [ (3-metil-3, 8-diazabiciclo [3, 2, 1]oct-8-il) carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3- etoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (N,N-dimetilamino) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,106 mmol) , DMF (1 mi), 3-metil-3 , 8-diazabiciclo [3 , 2 , 1] octano, HC1 (22,50 mg, 0,138 mmol), 3-metil-3 , 8-diazabiciclo [3 , 2 , 1] octano, HC1 (22,50 mg, 0,138 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-?,?,?' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol). La reacción se agitó durante la noche. La LC-EM indica que la reacción se ha completado, 764,2/766,2 a 3,03 minutos. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con HCl 0,1 N (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El -202- jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 5%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un solido blanco cremoso. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (51 mg, 0,066 mmol, 61,9 % de rendimiento) como un polvo amarillo claro. HPLC: 99,9% de pureza, 23,67 minutos. LC-EM: 766,16 a 3,68 minutos. RMN de ¾: (400Mz, CD3OD) 1,25 - 1,29 (m, 4 H) , 1,37 - 1,46 (m, 4 H) , 1,59 (s ancho, 3 H) , 1,75 - 1,83 (m, 4 H) , 1,95 - 1,98 (m, 2 H) , 2,00 - 2,08 (m, 6 H) , 2,26 (s, 3 H) , 2,51 - 2,54 (m, 1 H) , 2,79 (s, 1 H) , 2,87 (m, 2 H) , 2,94 - 2,96 (m, 1 H) , 3,07 (s, 6 H) , 3,14 (s, 1 H) , 3,95 (s, 3 H) , 4,07 (s, 1 H) , 4,55 - 4,58 (m, 1 H) , 4,55 - 4,58 (m, 1 H) , 4,77 - 4,87 (m, 2 H) , 6,79 (s ancho, 1 H) , 6,94 - 6,95 (m, 1 H) , 7,10 - 7,11 (d, J" = 8 Hz, 1 H) , 7,56 - 7,57 (d, J" = 9 Hz, 1 H) , 7,64 (s ancho, 1 H) , 7,82 (s ancho, 1 H) , 7,89 - 7,90 (d, J" = 8 Hz, 1 H) y 9,28 (s ancho, 1 H) . 6- [1-Ciclobutil -3-metil-4- [ (3-metíl -3, 8-diazabiciclo [3 , 2, 1] oct-8-il) carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil -3 -metoxi -N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida -203- Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil-l-ciclobutil -5 - [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (N,N-dimetilaraino) sulfonilLamino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,104 mmol), DMF (1 mi), 4 -metilmorfolina (0,037 mi, 0,333 mmol) , 3-metil-3 , 8-diazabiciclo [3 , 2 , 1] octano, 2 HCl (27,0 mg, 0,135 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (36,8 mg, 0,115 mmol). La reacción se agitó durante la noche. La LC-EM indica que la reacción se ha completado, 778,2/780,2 a 3,15 minutos. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con HCl 0,1 N (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM> la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 5%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un solido blanco cremoso. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (50 mg, 0,063 mmol, 60,9 % de rendimiento) como un polvo blanco cremoso. HPLC: 99,8% de pureza, 23,11 minutos. LC-EM de un subproducto que eluyó antes que el producto: 686,17 a 4,18 minutos. LC-EM: 780,19 a 3,64 minutos. RMN de (400Mz, CD30D) 1,25 - 1,30 (m, 4 H) , 1,36 - 1,45 (m, 3 H) , 1,60 (s ancho, 3 H) , 1,77 -1,79 (d, J = 11 Hz, 3 H) , 1,94 - 1,97 (d, J = 14 Hz , 3 H) , 2,00 - 2,06 (m, 3 H) , 2,24 (s ancho, 2 H) , 2,34 - 2,35 (m, 3 H) , 2,49 (m, 1 H) , 2,69 - 2,73 (m, 1 H) ,2,79 (s, 1 H) , 2,85 - -204- 2,91 (m, 2 H) , 3,95 (s, 3 H) , 4,03 - 4,06 (m, 1 H) , 4,53 -4, 56 (d, J" =.15 Hz, 1 H) , 4, 80 (s ancho, 1 H) , 6, 77 (s, 1 H) , 6, 94 (s, JL-H) , 7, 10 - 7, 12 (d, J = 8 Hz , 1 H) , 7, 55 - 7, 57 (d, J = 9 Hz, 1 H) , 7,64 - 7,66 (d, J = 8 Hz , 1 H) , 7,89 - 7,90 (d, J" = 8 Hz, 1 H) y 9,42 (s ancho, 1 H) . 6- [1-Ciclobutil -3-metil-4- [ (3 -metil-3, 8-diazabiciclo [3,2,1] oct-8-il) carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3 -metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10 -carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil-l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-ca^oxílico (70 mg, 0,104 mmol) , DMF (1 mi), 4-metilmorfolina (0,037 mi, 0,334 mmol), 3-metil-3,8-diazabiciclo [3, 2, 1] octano, 2 HC1 (27,0 mg, 0,136 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (36,9 mg, 0,115 mmol) . La reacción se agitó durante la noche. La LC-EM indica que la reacción se ha completado, 777,2/779,2 a 2,88 minutos. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con HCl 0,1 N (acuoso) y luego salmuera, se secó -205- (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 5%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un solido blanco cremoso. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (28 mg, 0,036 mmol, 34,1 % de rendimiento) como un polvo blanco cremoso. HPLC: 99,99% de pureza, 23,29 minutos. LC-EM: 779,21 a 3,68 minutos. RM de XH: (400Mz, CD30D) 1,22 - 1,30 (m, 3 H) , 1,34 - 1,41 (m, 4 H) , 1,46 - 1,47 (d, <J = 7 Hz, 4 H) , 1,52 - 1,54 (d, J = 7 Hz, 4 H) , 1,77 - 1,79 (m, 4 H) , 1,94 - 1,97 (d, J = 13 Hz, 3 H) , 2,00 (s, 1 H) , 2,02 - 2,05 (d, J = 13 Hz, 3 H),.2,25 (s ancho, 2 h) , 2,35 (s, 4 H) , 2,49 (s ancho, 1 H) , 2,69 - 2,75 (m, 2 H) , 2,79 (s, 1 H) , 2,87 (m, 3 H) , 3,96 (s, 3 H) , 4,03 - 4,09 (m, 2 H) , 4,52 - 4,56 (d, J = 16 Hz, 1 H) , 4,80 (s ancho, 1 H) , 6,78 (s ancho, 1 H) , 6,94 (s, 1 H) , 7,10 - 7,12 (dd, J = 2 Hz y J = 9 Hz, 1 H) , 7,56 - 7,57 (d, J = 8 Hz, 1 H) , 7,66 - 7,67 (d, J = 8 Hz, 1 H) , 7,89 - 7,91 (d, J = 8 Hz, 1 H) y 9, 39 (s ancho, 1 H) . 6- [1-Ciclob til -3-metil-4- (4-morfolinilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida -206- Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil-l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,104 mmol) , DMF (1 mi), 4 -metilmorfolina (0,023 mi, 0,209 mmol) , morfolina (10,91 mg, 0,125 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol- 1- il-N, N, N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (36,9 mg, 0,115 mmol) . La reacción se agitó durante la noche. LC-EM pos/neg: 738,2 y 740,1 a 2,48 minutos, sin trazas de material de partida. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con HCl 0,1 N (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 4%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un sólido amarillo claro. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (46 mg, 0,061 mmol, 58,1 % de rendimiento) como un polvo blanco cremoso. HPLC: 97,6% de pureza, 23,26 minutos. LC-EM pos/neg: 738,2/740,1 a 2,44 minutos. RMN de ¾: (400Mz, CD3OD) d 1,19 - 1,25 (m, 2 H) , 1,41 (m, 2 H) , 1,48 - 1,52 (m, 9 H) , 1,63 (s, 7 h) , 1,78 - 1,79 (m, 3 H) , 1,92 - 1,98 (m, 3 H) , 2,03 - 2,09 (m, 4 H) , 2,29 (s, 3 H) , 2,35 (s, 1 h) , 2,48 - 2,55 (m, 2 H) , 2,66 (m, 1 H) , 2,73 -2,87 (m, 6 h) , 3,05 - 3,09 (m, 2 H) , 3,66 (s ancho, 1 H) , 3,84 (s ancho, 1 H) , 3,95 (s, 3 H) , 4,04 - 4,08 (m, 3 H) , 4,40 - -207- 4,43 y 4, 53 - 4, 56 (d, J = 16 Hz, 1 H) , 4, 79 - 4, 82 (d, J = 16 Hz, 2 H) , 6,72 (s, 1 H) , 6,94 (s, 1 H) , 7,11 - 7,12 (d, J = 8 Hz, 1 H) , 7,56 -- 7,58 (d, J = 8 HZ, 1 H) , 7,64 (s, 1 H) , 7,90 - 7,92 (d, J = 8 Hz, 1 H) , y 10,72 (s ancho, 1 H) . 6- [l-Ciclobutil-4- [ [ (2S) -2- (metoximetil) -4-morfolinil] carbonil -3 -metil] -lH-pirazol-5-il] -13 -ciclohexil-3 -metoxi -N- [ (l-metiletil) sulfonil] - 7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil-l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,104 mmol) , DMF (1 mi), 4 -metilmorfolina (0,023 mi, 0,209 mmol) , (S) -2 - (metoximetil ) morfolina (16,43 mg, 0,125 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (36,9 mg, 0,115 mmol) . La reacción se agitó durante la noche. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con HCl 0,1 N (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice -208- Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 4%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un sólido amarillo claro. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto. (37 mg, 0,046 mmol, 44,3 % de rendimiento) como un polvo blanco cremoso. HPLC: 97,9% de pureza, 22,34 minutos. LC-EM: 784,19 a 3,98 minutos. RM de (400MZ, CD3OD) d 1,20 - 1,24 (m, 3 H) , 1,34 - 1,42 (m, 2 H) , 1,47 - 1,48. (m, 6 H) , 1,53 - 1,54 (m, 3 h) , 1,77 - 1,79 (m, 6 H) , 1,93 - 1,98 (m, 3 H) , 2,08 (s, 3 H) , 2,29 (s, 3 H) , 2,33 - 2,35 (m, 2 h) , 2,48 (s ancho, 1 H) , 2,74 (s ancho, 1 H) , 2,80 (s, 3 h) , 2,87 (s, 3H) , 2,94 (s, 2 H) , 3,03 (s, 1 H) , 3,17 (s ancho, 1 H) , 3,23 (s, 2 H) , 3,34 - 3,38 (m, 2 H) , 3,46 - 3,47 (d, J = 7 Hz, 1 H) , 3, 84 (s ancho, 1 H) , 3, 95 (s, 3 H) , 4,08 - 4,09 (m, 2 H) , 4,52 - 4,55 (m, 1 H) , 4,76 - 4,86 (m, 2 H) , 6,71 - 6,74 (m, 1 H) , 6,93 (s, 1 H) , 7,11 - 7,12 (d, J = 7 Hz, 1 H) , 7,58 - 7,66 (m, 2 H) , 7,71 - 7,73 (m, 1 H) , 7,89 -7,90 (m, 1 H) , y 10,78 (s ancho, 1 H) . 6- [1-Ciclobutil -3-metil-4- ( -oxa-3-azabiciclo [3,2, 1] octan-3 -ilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil -3 -metoxi -N- [ (1-metiletil) sulfonil] - 7H-indolo [2, 1 -a] [2]benzacepin-10-carboxamida -209- Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil-l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,104 mmol) , DMF (1 mi), 4 -metilmorfolina (0,023 mi, 0,209 mmol) , 8-oxa-3-azabiciclo [3 , 2 , 1] octano, HC1 (18,74 mg, 0,125 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (36,9 mg, 0,115 mmol) . La reacción se agitó durante la noche. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con HC1 0,1 N (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS0 ) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 4%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un sólido amarillo claro. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (54 mg, 0,069 mmol, 66,3 % de rendimiento) como un polvo blanco cremoso. HPLC : 98,2% de pureza, 22,41 minutos. LC-EM neg/pos : 764,2/766,1 a 2,53 minutos. RMN de (400Mz, CD3OD) d 1,19 - 1,24 (m, 4 H) , 1,46 - 1,53 (m, 9 H) , 1,58 - 1,64 (m, 3 h) , 1,79 (m, 4 H) , 1,90 -1,95 (m, 5 H) , 2,08 - 2,10 (m, 3 H) , 2,31 (s, 6 H) , 2,47 (s ancho, 1 h) , 2,74 - 2,76 (m, 1 h) , 2,80 - 2,87 (m, 6 H) , 2,94 (s, 2 H) , 3,07 (s ancho, 1 H) , 3,35 - 3,47 (m, 1 H) , 3,79 -3,84 (m, 2 H) , 3,95 (s, 3 H) , 4,03 - 4,10 (m, 2 H) , 4,50 -4,54 (d, J = 16 Hz, 1 H) , 4,72 - 4,80 (m, 2 H) , 6,72 (s, 1 H) , - 210 - 6,94 (s, 1 H) , 7,09 - 7,11 (d, J = 8 Hz, 1 H) , 7,53 - 7,60 (m, 3 H) , 7, 92 - 7, 93 (d, J = 8 Hz, 1 H) , y 10, 74 (s ancho, 1 H) . 6- [1-Ciclobutil -3-metil-4- ( (1S,4S) -2-oxa-5-azabiciclo [2, 2, 1]heptan-5-ilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil-l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,104 mmol) , DMF (1 mi), 4 -metilmorfolina (0,023 mi, 0,209 mmol) , (1S, 4S) -2-oxa-5-azabiciclo [2 , 2 , 1] heptano, HC1 (16,98 mg, 0,125 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (36,9 mg, 0,115 mmol). La reacción se agitó durante la noche. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con HCl 0,1 N (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 4%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un' - 21 1 - sólido amarillo claro. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (53 mg, 0,068 mmol, 64,8 % de rendimiento) como un polvo blanco cremoso. HPLC: 96,0% de pureza, 24,07 minutos. LC-EM: 752,20 a 3,83 minutos. LC-EM neg/pos: 750, 2/752 , 1.a 2,51 minutos. RM de XH : (400Mz, CD3OD) d 1,18 - 1,24 (m, 2 H) , 1,41 (m, 5 H) , 1,53 (s, 2 H) , 1,78 -1,80 (m, 3 H) , 1,95 (s ancho, 3 H) , 2,05 (m, 3 H) , 2,31 (s, 3 H) , 2,47 - 2,50 (m, 1 H) , 2,67 - 2,76 (m, 1 H) , ,2,81 (s, 3 h) , 2,87 (s, 3 H) , 2,94 (s, 2 H) , 3,31 - 3,38 (m, 1 H) , 3,84 -3,89 (m, 1 H) , 3,95 (m, 3 H) , 4,03 - 4,12 (m, 2 H) , 4,55 -4,58 (d, J = 14 Hz, 1 H) , 4,82 - 4,85 (d, J" = 14 Hz , 2 H) , 6,71 - 6,83 (m, 1 H) , 6,93 - 6,96 (m, 1 H) , 7,11 - 7,12 (d, J = 8 Hz, 1 H) , 7,54 - 7,72 (m, 3 H) , 7,86 - 7,95 (m, 1 H) y 10, 99 (s ancho, 1 H) . 6- [l-Ciclobutil -3-metil-4- [ [ (1R,4R) -5-metil-2, 5-diazabiciclo [2, 2, 1]hept-2-il] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil-l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil).sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1- - 212 - a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,104 mmol) , DMF (1 ml) , 4 -metilmorfolina (0,023 ml , 0,209 mmol) , (1S, 4S) -2 -metil-2 , 5-diazabiciclo [2 , 2 , 1] heptano, 2 bromhidrato (34,3 mg, 0,125 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-1-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (36,9 mg, 0,115 mmol) . La reacción se agitó durante la noche. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con NaHC03 (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 4%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un solido blanco cremoso. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (52 mg, 0,067 mmol, 64,5 % de rendimiento) como un polvo amarillo. HPLC : 99,9% de pureza, 23,06 minutos. LC-EM: 765,24 a 3,64 minutos. RMN de XK: (400Mz, CD3OD) d 1,18 - 1,25 (ta, 3 H) , 1,36 - 1,41 (m, 2 H) , 1,46 - 1,47 (d, J = 5 Hz , 5 H) , 1,52 - 1,54 (d, J = 5 Hz, 4 H) , 1,77 - 1,79 (m, 4 H) , 1,94 - 2,06 (m, 6 H) , 2,25 (s ancho, 2 H) , 2,35 (S. 4 H) , 2,49 (s ancho, 1 H) , 2,69 - 2,73 (m, 2 H) , 2,79 (S, 1 h) , 2,83 - 2,89 (m, 2 H) , 3,11 (s ancho, 1 H) , 3,45 - 3,49 (m, 1 H) , 3,96 (s, 3 H) , 4,03 - 4,08 (m, 2 H) , 4,53 - 4,56 (d, J = 15 Hz, 1 H) , 4,80 (s ancho, 2 H) , 6,78 (s, 1 H) , 6, 94 (s, 1 H) , 7, 10 - 7, 12 (m, 1 H) , 7, 55 - 7, 57 (d, J = 8 HZ, 1 H) , 7,66 - 7,67 (m, 1 H) , 7,89 - 7,90 (d, J = 8 Hz , 1 H) y 11,14 (s ancho, 1 H) . - 213 - 6- [l-Ciclobutil-4- [ [(2R) -2- (metoximetil) -4-morfolinil] carbo il] - -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil -3 -metoxi -N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol -4 -carboxílico (70 mg, 0,107 mmol), DMF (1 mi), (R) -2 - (metoximetil ) morfolina, HCl (21,44 mg, 0,128 mmol), 4-metilmorfolina (0,023 mi, 0,213 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol). La reacción se agitó durante la noche. LC-EM: 679,29 a 4,00 minutos. LC-EM pos/neg: 768,2/770,2 a 2,48 minutos. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con NaHC03 saturado (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando una película amarilla. La película se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 10%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un sólido amarillo claro. El sólido se -214- trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (57 mg, 0,073 mmol, 68,8 % de rendimiento) como un polvo blanco cremoso. HPLC : 99,5% de pureza, 22,26 minutos. LC-EM neg/pos: 768,2/769,9 a 2,48 minutos. RMN de XH: (400Mz, CD30D) 1,24 -1,32 (m, 2 H) , 1,36 - 1,46 (m, 2 H) , 1,49 - 1,48 (d, J = 6 Hz , 6 H) , 1,54 - 1,56 (d, J = 7 Hz , 5 H) , 1,60 (s, 4 H) , 1,80 -1,83 (d, J = 9 Hz, 4 H) , 1,92 - 2,04 (m, 4 H) , 2,07 - 2,15 (m, 4 H) , 2,30 -2,32 (m, 3 H) , 2,73 - 2,80 (m, 3 H) , 2,82 (s, 5 H) , 2,89 - 2,91 (m, 3 H) , 2,97 (s, 2 H) , 2,99 - 3,02 (m, 2 H) , 3,05 - 3,09 (m, 1 H) , 3,26 (s, 6 H) , 3,98 (s, 3 H) , 4,06 -4,13 (m, 1 H) , 4,58 - 4,61 (m, 1 H) , 4,78 (s ancho, 1 H) , 4,84 - 4, 92 (m, 1 H), 6, 77 (s, 1 H), 6, 96 (d, J = 3 Hz, 1 H), 7, 13 - 7,15 (dd, J = 9 Hz y J = 3 Hz, 1 H) , 7,59 - 7,68 (m, 3 H) , 7,74 (s, 1 H) , 7,91 - 7,94 (t, J = ? Hz , 1 H) y 10,47 (s ancho, 1 H) . 6- [l-Ciclobutil-3-metil-4- (3-oxa-9-azabiciclo [3,3, l]non-9-ilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil -3-metoxi -N- [ (1-metiletil) sulfonil] - 7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil-l- - 215 - ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,104 mmol) , DMF (1 ml) , 4 -metilmorfolina (0,023 ml , 0,209 mmol) , 3-oxa-9-azabiciclo [3 , 3 , 1] nonano, HC1 (20,49 mg, 0,125 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (36,9 mg, 0,115 mmol). La reacción se agitó durante la noche. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con HCl 0,1 N (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 4%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un sólido amarillo claro. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (53 mg, 0,068 mmol, 64,7 % de rendimiento) como un polvo blanco cremoso. HPLC: 99,4% de pureza, 24,20 minutos. LC-EM: 780,26 a 4,14 minutos. 6- [l-Ciclobutil-3-metil-4- (l-metilpiperazin-4-ilcarbonil) -1H-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2,1-a] 12]benzacepin-10-carboxamida - 216 - Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil-l-ciclobutil- 5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1- a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4 -carboxílico (70 mg, 0,104 -mmol)/ DMF (1 mi), 4-metilmorfolina (0,023 mi, 0,209 mmol) , 1-metilpiperazina (12,5 mg, 0,104 mmol) y tetrafluoroborato de o- benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (36,9 mg, 0,115 mmol). La reacción se agitó durante la noche. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con NaHC03 saturado (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 4%). Las fracciones apropiadas (TLC), se reunieron y evaporaron dando un sólido amarillo claro. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (54 mg, 0,071 mmol, 68,0 % de rendimiento) como un polvo amarillo. HPLC: 99,9% de pureza, 23,28 minutos. LC-EM: 753,24 a 3,68 minutos. 6- [l-Ciclobutil-3-metil-4- ( (2S,6R) -1, 2, 6-trimetilpiperazin-4- ilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi -N- [(1- metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamlda Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil-l-ciclobutil-5- - 217 - [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,104 mmol) , DMF (1 mi), 4-metilmorfolina (0,023 mi, 0,209 mmol), (2S, 6R) -1, 2 , 6-trimetilpiperazina, HC1 (20,62 mg, 0,125 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-?,?,?' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (36,9 mg, 0,115 mmol) . La reacción se agitó durante la noche. La reacción se diluyó con DC , se lavó con NaHC03 (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 4%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un sólido amarillo claro. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (40 mg, 0,051 mmol, 48,6 % de rendimiento) como un polvo amarillo claro. HPLC: 99,9% de pureza, 22,78 minutos. LC-EM: 781,24 a 3,55 minutos. LC-EM pos/neg: 779,2/781,2 a 2,44 minutos. 6- [1-Ciclobutil -4- [ [(1S,4S) -5-ciclopropilmetil-2, 5-diazabiciclo [2, 2, 1]hept-2-il] carbonil] -3 -metil -lH-pirazol -5- il] -13 -ciclohexíl-3 -metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H- indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida - 218 - Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil-l-ciclobutil - 5 - [ 13 - ciclohexil - 3 -metoxi - 10 - [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2,1-a] [2 ] benzacepin- 6 - i 1 ] - IH-pirazol -4 - carboxí1 ico (70 mg, 0,104 mmol) , DMF (1 mi), ( 1S , 4S ) - 2 - ( ciclopropilmeti 1 ) - 2 , 5 -diazabiciclo [2 , 2 , 1] heptano, 2 TFA (47,6 mg, 0,125 mmol), -metilmorfolina (0,011 mi, 0,104 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol - 1 - il -N , , ' ,?' -tetramet iluronio (TBTU) (36,9 mg, 0,115 mmol) . La reacción se agitó durante la noche. LC-EM a 15 minutos: 805 a 3,66 minutos, sin trazas de material de partida. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con NaHC03 (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando un jarabe amarillo. El jarabe se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 4%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un solido blanco cremoso. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (56 mg, 0,069 mmol, 66,0 % de rendimiento) como un polvo amarillo. HPLC : 99,9% de pureza, 23,00 minutos. LC-EM: 805,23 a 3,66 minutos. -219- 6- [l-Etil-4- [ [ (IR, 4R) -5-ciclopropilmetil-2, 5-diazabiciclo [2, 2, 1]hept-2 -il] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3 -metoxi -N- [ (1-metiletil) sulfonil] - 7H-indolo [2,1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,107 mmol) , DMF (1 mi), (IR, 4R) -2-etil-2 , 5-diazabiciclo [2 , 2 , 1] heptano, 2 HC1 (23,34 mg, 0,117 mmol), 4-metilmorfolina (0,012 mi, 0,107 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N, , N' , N' -tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol) . La reacción se agitó durante la noche. LC-EM a 30 minutos: 765,24 a 3,78 minutos, trazas de material de partida. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con NaHC03 (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS0 ) y se evaporó dando una película amarilla. La película se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 10%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un sólido -220- amarillo claro. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando 15-A [42 mg] como un polvo amarillo. HPLC: 93,3% de pureza, 23,99 minutos, una impureza mayoritaria r material de partida. El producto se volvió a someter a cromatografía como antes dando el producto (24 mg, 0,031 mmol, 28,8 % de rendimiento) como un polvo amarillo. HPLC: 97,9% puro. LC-EM: 765,24 a 3,77 minutos. 6- [1-Metil -4- [ [ (1S,4S) -5-ciclopropilmetil-2, 5-diazabiciclo [2, 2, 1] hept-2-il] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil -3 -metoxi -N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10 -carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (70 mg, 0,107 mmol), DMF (1 mi), (1S, 4S) -2-metil-2 , 5-diazabiciclo [2 , 2 , 1] heptano, sal 2 bromhidrato (34,8 mg, 0,128 mmol), 4 -metilmorfolina (0,023 mi, 0,213 mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (37,6 mg, 0,117 mmol). La reacción se - 221 - agitó durante la noche. LC-EM: 751,28 a 4,00 minutos. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con NaHC03 saturado (acuoso) , luego salmuera, se secó (MgS04) y se evaporó dando una película amarilla. La película se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 10%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un sólido amarillo claro. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (46 mg, 0,061 mmol, 56,9 % de rendimiento) como un polvo amarillo. HPLC : 99,9% de pureza, 22,07 minutos. LC-EM: 751,21 a 3 , 74 minutos. 6-[l-H -4- [ [(1S,4S) -5-Ciclopropilmetil-2,5-diazabiciclo [2,2, 1] hept-2-il] carbonil] -3 -metil -IH-pirazol -5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2,1 -a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se cargó un vial de 2 dram con ácido 5-metil-l-ciclobutil-5- [13-ciclohexil-3-metoxi-10- [ [ [ (1-metiletil) sulfonil] amino] carbonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-6-il] -lH-pirazol-4-carboxílico (140 mg, 0,209 mmol), DMF (4 mi), ( 1S , 4S) -2 , 5 -diazabiciclo [2 , 2 , 1] heptano, 2 HC1 (35,7 mg, 0,209 mmol), 4 -metilmorfolina (0,046 mi, 0,417 -222- mmol) y tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) (73,7 mg, 0,230 mmol) . LC-EM a 1 hora: 751,21 a 3,68 minutos. La reacción se diluyó con DCM, se lavó con NaHC03 saturado (acuoso) y luego salmuera, se secó (MgS0 ) y se evaporó dando una película amarilla. La película se disolvió en DCM, la solución se añadió a un cartucho de gel de sílice Thompson y se eluyó con DCM/metanol (0% hasta 10%) . Las fracciones apropiadas (TLC) se reunieron y evaporaron dando un sólido amarillo claro. El sólido se trituró en éter/hexano y se filtró dando el producto (66 mg, 0,087 mmol, 41,7 % de rendimiento) como un polvo amarillo. HPLC: 99,1% puro a 20,77 minutos. LC-EM: 751,21 a 3,55 minutos.
Intermedio KP1 : Preparación de 13-ciclohexil-6- ( (2Z) -2- (etoxicarbonil) -4 -meti1 -2 -pentenoi1 ) -3 -metoxi - 7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepin-10-carboxilato de terc-butilo Se añadió piperidina (17 µ?, 0,18 mmol) se añadió a una solución agitada de 13-ciclohexil-6- (3-etoxi-3-oxopropanoil) - 3 -metoxi-7H- indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxilato de terc-butilo (1,0 g, 1,79 mmol) e isobutiraldehído (16,4 mi, 179 -223- mmol) en EtOH (9 mi) a temperatura ambiente. Después de 3 horas de agitación se añadió una cantidad adicional de piperidina (38 µ?, 0,40 mmol) y se dejó agitando la reacción durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla se concentró y se purificó sobre gel de sílice (Biotage, gradiente de EtOAc/hexanos , recogida de fracciones a ? = 254 nm) dando el compuesto del epígrafe (950 mg, 1,55 mmol, 87 % de rendimiento) consistente por LC-EM y RMN como un sólido pegajoso y espumoso amarillo.
RMN de XH (500 MHz , CLOROFORMO-D) d ppm 8,21 (1 H, s) , 7,83. (1 H, d, J=8,55 Hz) , 7,71 (1 H, dd, J=8,55, 1,53 Hz), 7, 55 (1 H, d, J=8,55 Hz) , 7,45 (1 H, s) , 7,12 (1 H, dd, J=8,55, 2,75 Hz) , 6,85 - 6,94 (2 H, m) , 5,77 - 5,89 (1 H, m) , 4,08 - 4,17 (1 H, m) , 3,88 - 3,96 (6 H, m) , 2,77 - 2,86 (1 H, m) , 2,20 - 2,29 (1 H, m) , 2,01 - 2,14 (3 H, m) , 1,73 - 1,81 (2 H, m) , 1,65 (9 H, s) , 1,34 - 1,43 (2 H, m) , 1,16 - 1,31 (3 H, m) , 0,86 - 1,03 (5 H, m) , 0,69 - 0,81 (3 H, m) .
Tiempo de retención LC-EM: 2,74 min; m/z (MH+) : 612. Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos LC Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Waters SunFire 5u C18 4,6x50mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 2 min, un - 224 - tiempo de mantenimiento de 2 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 10% de MeOH / 90% de H20 / 0,1% de ácido trifluoroacético y el disolvente B fue 10% de H20_./. 90% de MeOH / 0,1% de ácido trifluoroacético . Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización.
Intermedio KP2 : Preparación de 13-ciclohexil-6- (1-ciclopropil-4- (etoxicarbonil) -3-isopropil-lH-pirazol-5-il) -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxilato de tere-butilo Se añadió DIEA (204 µ? , 1,17 mmol) a una suspensión agitada de 13 -ciclohexil-6- ( (2Z) -2- (etoxicarbonil) -4-metil-2-pentenoil) -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxilato de tere-butilo (550 mg, 0,899 mmol) y clorhidrato de ciclopropilhidrazina (117 mg, 1,08 mmol) (preparada de acuerdo con el documento WO 2005/040169, PCT/US2004/030190) en etanol (9 mi) a temperatura ambiente. Se dejó agitar la suspensión durante la noche a temperatura ambiente. Se añadió una cantidad adicional de clorhidrato de ciclopropilhidrazina -225- (117 mg, 1,08 mmol) y DIEA (204 µ? , 1,17 mmol) . Después de 1 hora la suspensión se convirtió en una solución. La reacción se calentó hasta 75°C y se dejó agitando durante 3 días. La mezcla se sometió entonces a irradiación por M 160 °C durante 7 min. La reacción se concentró y se purificó sobre gel de sílice (Biotage, gradiente de EtOAc/hexanos , recogida de fracciones a ? = 254 nm) dando el compuesto del epígrafe (350 mg, 0,475 mmol, 53 % de rendimiento) consistente por LC-EM y RMN.
RM de XH (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 7,90 (1 H, s) , 7,84 (1 H, d, J=8,24 Hz), 7,67 (1 H, dd, J=8,39, 1,37 Hz) , 7,53 (1 H, d, J=8,55 Hz) , 7,06 (1 H, dd, J=8,55, 2,75 Hz) , 6,95 (1 H, d, J=2,75 Hz) , 6,86 (1 H, s) , 4,97 - 5,06 (1 H, m) , 4,63 - 4,72 (1 H, m) , 4,21 - 4,34 (1 H, m) , 3,91 (4 H, s) , 3,48 - 3,58 (1 H, m) , 2,95 - 3,04 (1 H, m) , 2,84 - 2,93 (1 H, m) , 2,04 - 2,15 (3 H, m) , 1,92 - 2,00 (1 H, m) , 1,74 - 1,84 (2 H, m) , 1,60 (9 H, s) , 1,43 - 1,49 (1 H, m) , 1,21 - 1,38 (10 H, m) , 0,89 (4 H, s) , 0,51 - 0,64 (1 H, m) , -0,04 - 0,09 (1 H, m) .
Tiempo de retención LC-EM: 3,14 min; m/z (MH+) : 664. Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos LC Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Waters SunFire 5u C18 4,6x50mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A -226- / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 2 min, un tiempo de mantenimiento de 2 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 10% de MeOH / 90% de H20 / 0,1% de ácido trifluoroacético y el disolvente B fue 10% de H20 / 90% de MeOH / 0,1% de ácido trifluoroacético . Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización .
Intermedio KP3: Preparación de ácido 5- (13-ciclohexil-10- ( (isopropilsulfonil) carbamoil) -3-metoxi-7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-6-il) -1-ciclopropil-3-isopropil-lH-pirazol-4-carboxílico Etapa 1: Preparación de ácido 13-ciclohexil-6- (1-ciclopropil-4- (etoxicarbonil) -3-isopropil-lH-pirazol-5-il) -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10-carboxílico -227- Se añadió TFA (2,8 mi, 37 mmol) a una solución agitada de 13 -ciclohexil - 6 - ( 1 - ciclopropil -4 - (etoxicarbonil) -3-isopropil-lH-pirazol-5-.il) - 3 -metoxi - 7H-indolo [2 , 1 -a] [2] benzacepin-10-carboxilato de tere-butilo (350 mg, 0,527 mmol) en dicloroetano (5 mi) a temperatura ambiente. La reacción se dejó agitando durante 2,5 horas y luego se concentró hasta sequedad dando el producto esperado (320 mg, 0,526 mmol, cuant) consistente por LC-EM.
Tiempo de retención LC-EM: 2,44 min; m/z (MH+): 608. Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos LC Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Waters SunFire 5u C18 4,6x50mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 2 min, un tiempo de mantenimiento de 2 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 10% de MeOH / 90% de H20 / 0,1% de ácido trifluoroacético y el disolvente B fue 10% de H20 / 90% de MeOH / 0,1% de ácido trifluoroacét ico . Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . -228- Etapa 2: Preparación de 5- (13-ciclohexil-10- ( ( isopropilsulfonil ) carbamoil) -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1- a] [2] benzacepi-n-6-il) -l-ciclopropil-3 -isopropil— lH-pirazol-4- carboxilato de etilo Se añadió EDC (151 mg, 0,790 mmol) a una solución agitada de ácido 13-ciclohexil-6- ( l-ciclopropil-4 - (etoxicarbonil ) -3- isopropil-lH-pirazol-5-il)-3-metoxi-7H-indolo [2,1- a] [2] benzacepin- 10 -carboxílico (320 mg, 0,527 mmol), propano- 2-sulfonamida (227 mg, 1,843 mmol), DMAP (193 mg, 1,58 mmol) en dicloroetano (5 mi) a temperatura ambiente. La reacción se dejó agitando durante la noche. La mezcla se diluyó con EtOAc y se lavó con HCl 1M, NaHC03 saturado y salmuera. La fase orgánica se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró dando el producto esperado (375 mg, 0,526 mmol, cuant) como un residuo marrón claro consistente por LC-EM.
Tiempo de retención LC-EM: 2,19 min; m/z (MH+) : 713. Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos LC Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Waters XBridge 5u -229- C18 4,6x50mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 2 min, un tiempo de mantenimiento de 2 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 5% de MeOH / 95% de H20 / acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue 5% de H20 / 95% de MeOH / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización .
Etapa 3 : Preparación del compuesto del epígrafe Se añadió LiOH (4 mi, 16,0 mmol, 4M ac) a una solución agitada de 5- (13-ciclohexil-10- ( ( isopropilsulfonil ) carbamoil) -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il) - 1-ciclopropil -3 -isopropil-lH-pirazol-4 -carboxilato de etilo (375 mg, 0,526 mmol) en THF (12 mi) a ta. La reacción se dejó agitando durante la noche. La mezcla bifásica se diluyó en etanol (6 mi) y H20 (3 mi) . La reacción se dejó agitando durante 6 horas y luego se concentró y se diluyó con THF (6 mi) , EtOH (6 mi) , y NaOH (6 mi, 6,00 mmol, 1M ac . ) . La reacción se dejó agitando durante la noche. Se añadió una cantidad adicional de NaOH (6 mi, 6,00 mmol, 1M ac . ) y se dejó agitando la reacción durante 3 días a ta. Se añadió una cantidad adicional de NaOH (6 mi, 6,00 mmol, 1M ac) y se dejó agitando la reacción durante la -230- noche . La reacción se calentó entonces hasta 60°C durante 7 horas luego se dejó enfriar y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se trató con NaOH (6 mi, 6,00 mmol , 1M ac) y se dejó agitando la reacción durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se calentó hasta 50°C y se dejó agitando durante 7 horas. La reacción se diluyó entonces con EtOAc y se lavó con 1M HC1 y NaCl sat . La fase orgánica se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró dando el compuesto del epígrafe (370 mg, 0,330 mmol, 63 % de rendimiento) consistente por LC-EM.
Tiempo de retención LC-EM: 2,18 min; m/z (MH+) : 685. Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos LC Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3u C18 2,0x30mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolventé B, un tiempo de gradiente de 2 min, un tiempo de mantenimiento de 2 min, y un tiempo de análisis de 4 min donde el disolvente A fue 10% de acetonitrilo / 90% de H20 / 0,1% de ácido trifluoroacético y el disolvente B fue 10% de H20 / 90% de acetonitrilo / 0,1% de ácido trifluoroacético . Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización . - 231 - Ejemplo KP1 : Preparación de 13 -ciclohexil -6 ciclopropil-4- ( ( (2R, 6S) -2, <5-dimetil-4-morfolinil) carbonil ) isopropil-lH-pirazol-5-il) -N- (isopropilsulfonil) -3-metoxi- indolo [2 , 1-a] [2]benzacepin- 10-carboxamida Se añadió HATU (65,0 mg, 0,171 mmol) a una solución agitada de ácido 5- (13-ciclohexil-10- ( (isopropilsulfonil) carbamoil) -3 -metoxi-7H- indolo [2, 1- a] [2] benzacepin-6-il) -l-ciclopropil-3-isopropil-lH-pirazol-4- carboxílico (78 mg, 0,114 mmol), cis-2 , 6-dimetilmorfolina (28 µ?, 0,23 mmol), DIEA (80 µ?, 0,456- mmol) en DMF (1 mi) a temperatura ambiente. La reacción se dejó agitando durante 2 horas. La reacción se purificó por HPLC de fase inversa preparativa en una columna C18 usando un gradiente de H20/CH3CN tamponado con TFA y se concentró dando el compuesto del epígrafe (28 mg, 0,035 mmol, 31 % de rendimiento) consistente por LC-EM y RMN, con pureza suficiente por HPLC.
RMN de ¾ (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 10,47 (0,75 H, s -232- ancho) , 10,15 (0,25 H, s ancho), 7,98 (0,25 H, d) , 7,93 (0,75 H, d, J=8,55 Hz) , 7,84 (0,75 H, s) , 7,77 (0,25 H, s) , 7,64 -7,71 (1 H, m) , 7,54 - 7,63 (1 H, m) , 7,10 - 7,18.. (1 H, m) , 6,94 - 7,00 (1 H, m) , 6,90 - .6,94 (2 H, m) , 4,98 (0,75 H, d, J=15,87 Hz) , 4,90 (0,25 H, d) , 4,56 - 4,65 (1 H, m) , 4,02 - 4,13 (1 H, m) , 3,89 - 3,98 (4 H, m) , 3,54 - 3,65 (1 H, m) , 2,98 - 3,33 (9 H, m) , 2,85 - 2,96 (2 H, m) , 2,07 - 2,17 (2 H, m) , 1,93 - 2,04 (2 H, m) , 1,76 - 1,85 (2 H, m) , 1,46 - 1,57 (5 H, m) , 1,38 - 1,46 (2 H, m) , 1,22 - 1,33 (3 H, m) , 1,12 - 1,21 (2 H, m) , 0,98 - 1,09 (2 H, m) , 0,80 - 0,87 (2 H, m) , 0,75 (2 H, d, J=6,10 Hz) , 0,68 (2 H, d, J=6,10 Hz) , 0,04 - 0,21 (1 H, m) .
• Tiempo de retención LC-EM: 2,36 min; m/z (MH+) : 782. Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos LC Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3u C18 2,0x30mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 2 min, un tiempo de mantenimiento de 1 min, y un tiempo de análisis de 3 min donde el disolvente A fue 10% de acetonitrilo / 90% de H20 / 0,1% de ácido trifluoroacético y el disolvente B fue 10% de H20 / 90% de acetonitrilo / 0,1% de ácido trifluoroacético . Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma -233- Micromass para LC en modo de electropulverización .
Procedimiento HPLC adicional: Disolvente A = 5% de CH3CN/95% de H2O/0,l% de. TFA, Disolvente B = 95% de. CH3CN/5% de H2O/0,l% de TFA, % de B de partida = 10, % de B final = 100, Tiempo de gradiente = 15 min, Tiempo de parada = 18 min, Caudal = 1 ml/min. Columna: Waters Sunfire C-18, 4,6 x 150 mm, 3,5 mm, Tr = 17,45 min, pureza = 99 % ; Columna: Waters Xbridge Fenilo 4,6 x 150 mm, 3,5 mm, Tr = 14,56 min, pureza = 98%.
Ejemplo KP2 : Preparación de 13-ciclohexil-6- (1-ciclopropil -3 - isopropil -4 - ( ( (3R, 5S) -3, 4, 5-trimetil-l-piperazinil) carbonil) -lH-pirazol-5-il) -N- (isopropilsulfon.il) -3 -metoxi - 7H-indolo [2 , 1 -a] [2] benzacepin- 10- carboxamida Se añadió HATU (65,0 mg, 0,171 mmol) a una solución agitada de ácido 5- (13-ciclohexil-10- ( ( isopropilsulfonil) carbamoil) -3 -metoxi-7H- indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-6 -il) - 1-ciclopropil-3 -isopropil-lH-pirazol-4-carboxílico (78 mg, 0,114 mmol), diclorhidrato de (2S,6R)-1, 2, 6-trimetilpiperazina (46 mg, 0,23 mmol), DIEA (80 µ?, -234- 0,456 mmol) en DMF (1 mi) a temperatura ambiente. La reacción se dejó agitando durante 2 horas. La reacción se purificó por HPLC de fase inversa preparativa en una columna C18 usando un gradiente de H20/CH3CN tamponado con TFA y se concentró dando el compuesto del epígrafe (31 mg, 0,033 mmol, 29 % de rendimiento) consistente por LC-EM y RM , con pureza suficiente por HPLC.
RMN de XH (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 10,37 (1 H, s ancho), 7,93 - 7,90 (2 H, m) , 7,76 - 7,83 (1 H, m) , 7,53 -7,64 (1 H, m) , 7,10 - 7,19 (1 H, m) , 6,93 - 7,02 (2 H, m) , 4,99 (1 H, d) , 4,63 (1 H, d) , 4,03 - 4,12 (1 H, m) , 3,92 -3,99 (3 H, m) , 3,81 - 3,91 (1 H, m), 3,54 - 3,61 (1 H, m) , 3,37 - 3,47 (1 H, m) , 3,19 - 3,32 (1 H, m) , 2,87 - 3,05 (2 H, m) , 2,24 - 2,33 (2 H, m) , 1,76 - 2,11 (19 H, m) , 1,47 - 1,59 (5 H, m) , 1,23 - 1,31 (4 H, m) , 1,16 - 1,23 (3 H, m) , 1,03 -1,09 (2 H, m) , 0,95 - 1,01 (2 H, m) , 0,21 - 0,33 (1 H, m) .
Tiempo de retención LC-EM: 1,75 min; m/z (MH+) : 795. Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos LC Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3u C18 2,0x30mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 2 min, un tiempo de mantenimiento de 1 min, y un tiempo de análisis de 3 -235- min donde el disolvente A fue 10% de acétonitrilo / 90% de H20 / 0,1% de ácido trifluoroacético y el disolvente B fue 10% de H20 / 90% de acétonitrilo / 0,1% de ácido trifluoroacético . Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización .
Procedimiento HPLC adicional: Disolvente A = 5% de CH3CN/95% de H2O/0,l% de TFA, Disolvente B = 95% de CH3CN/5% de H2O/0,l% de TFA, % de B de partida = 10, % de B final = 100, Tiempo de gradiente = 15 min, Tiempo de parada = 18 min, Caudal = 1 ml/min. Columna: Waters Sunfire C-18, 4,6 x 150 mm, 3,5 mm, Tr = 10,61 min, pureza = 96%; Columna: Waters Xbridge Fenilo 4,6 x 150 mm, 3,5 mm, Tr = 11,4.7 min, pureza = 96%.
Ejemplo KP3 : Preparación . de 13-ciclohexil-6- (1-ciclopropil-3-isopropil-4- ( (3-metil-3 , 8-diazabiciclo [3 , 2, 1] oct-8 -il) carbonil) -lH-pirazol-5-il) -N- (isopropilsulfonil ) -3 -metoxi- 7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10 -carboxamida Se añadió HATU (65,0 mg, 0,171 mol) a una solución agitada de ácido 5- (13-ciclohexil-10- ( (isopropilsulfonil) carbamoil) -3-metoxi-7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-6-il) -l-ciclopropil-3- -236- isopropil-lH-pirazol-4-carboxílico (78 mg, 0,114 mmol) , diclorhidrato de 3-metil-3 , 8-diazabiciclo [3 , 2 , 1] octano (45 mg, 0,23 mmol), DIEA (80 µ?, 0,456 mmol) en DMF (1 mi) a temperatura ambiente. La reacción se dejó agitando- durante 2 horas. La reacción se purificó por HPLC de fase inversa preparativa en una columna C18 usando un gradiente de H20/CH3CN tamponado adecuadamente y se concentró dando el compuesto del epígrafe (37 mg, 0,041 mmol, 36 % de rendimiento) consistente por LC-EM y RMN, con pureza suficiente por HPLC.
RMN de ¾ (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 10 ,54 (0,25 H, S ancho) , 10, 39 ( ,75 H, s ancho) , 7,86 - 8, 01 (1 H, m) , 7,65 - 7,76 (1 H, m) , 7,55 - 7,65 (2 H, m) , 7,11 - 7, 18 -U H, m) , 7,01 - 7,08 (1 H, m) , 6,90 - 7,00 (1 H, m) , 4,75 - 4, 92 (1 H, m) , 4,52 - 4,72 (1 H, m) , 3, 99 - 4,17 (1 H, m) , 3,90 - 4, 00 (3 H, m) , 3,81 - 3,90 (1 H, m) , 3,51 - 3,64 (1 H, m) , 3,37 - 3,49 (1 H, m) , 3,10 - 3,28 (2 H, m) , 2,80 - 2,99 (2 H, m) , 2,53 - 2,67 (2 H, m) , 2,37 - 2,50 (1 H, m) , 1, 94 (19 H, m) , 1,38 -¦ 1,46 (2 H, m) , 1, ,35 - 1,38 (2 H, m) , 1,32 (3 H, m) , 1,16 - 1,24 (2 H, m) , 0, 99 - 1,10 (2 H, m) , 0,72 - o. 93 (i : H, m) , 0,09 -- 0,28 (1 H, m) .
Tiempo de retención LC-EM : 1,78 min; m/z (MH+) : 793 Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos LC Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3u C18 2,0x30mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 mi/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de -237- disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 2 min, un tiempo de mantenimiento de 1 min, y un tiempo de análisis- de 3 min donde el disolvente A fue 10% de acetonitrilo / 90% de H20 / 0,1%- de ácido trifluoroacético y el disolvente B fue 10% de H20 / 90% de acetonitrilo / 0,1% de ácido trifluoroacético. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización.
Procedimiento HPLC adicional: Disolvente A = 5% de CH3C /95% de H2O/0,l% de TFA, Disolvente B = 95% de CH3CN/5% de H20/0,1% de TFA, % de B de partida = 10, % de B final = 100, Tiempo de gradiente = 15 min, Tiempo de parada = 18 min, Caudal = 1 ml/min. Columna: Waters Sunfire C-18, 4,6 x 150 mm, 3', 5 mm, Tr = 10,97 min, pureza = 98%; Columna: Waters -Xbridge Fenilo 4,6 x 150 mm, 3,5 mm, Tr = 11,80 min, pureza = 98%.
Ejemplo KP4 : Preparación de 13-ciclohexil-6- (l-ciclopropil-3-isopropi1-4- (3-oxa-8-azabiciclo [3 , 2, 1] oct-8-ilcarboni1) -1H-pirazol-5-il) -N- (isopropilsulfonil) -3-metoxi-7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida añadió HATU (65,0 mg, 0,171 mmol) a una solución -238- agitada de ácido 5- (13-ciclohexil-10- ( (isopropilsulfonil) carbamoil) -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-6-il) -l-cie-lopropil-3-isopropil-lH-pirazol-4-carboxílico (78 mg, 0,114 mmol) , clorhidrato de 3-oxa-8-azabiciclo [3, 2,,1] octano (34 mg, 0,23 mmol), DIEA (80 µ?, 0,456 mmol) en DMF (1 mi) a temperatura ambiente. La reacción se dejó agitando durante 2 horas. La reacción se purificó por HPLC de fase inversa preparativa en una columna C18 usando un gradiente de H20/MeOH tamponado con TFA y se concentró dando el compuesto del epígrafe (30 mg, 0,038 mmol, 34 % de rendimiento) consistente por LC-EM y RMN, con pureza suficiente por HPLC.
RMN de ? (500 Hz, CLOROFORMO-D) d ppm 10,98 (1 H, s ancho), 7,89 - 7,97 (1 H, m) , 7,81 - 7,86 (1 H, m) , 7,64 -7,77 (1 H, m) , 7,55 - 7,63 (1 H, m) , 7,10 - 7,16 (1 H, m) , 6,92 - 7,02 (2 H, m) , 4,84 - 4,99 (1 H, m) , 4,57 - 4,68 (1 H, m) , 4,00 - 4,11 (1 H, m) , 3,95 (3 H, s) , 3,49 - 3,57 (2 H, m) , 3,32 - 3,39 (1 H, m) , 3,21 - 3,29 (1 H, m) , 3,12 - 3,19 (1 H, m) , 2,96 - 3,07 (1 H, m) , 2,81 - 2,96 (1 H, m) , 2,66 - 2,79 (1 H, m) , 2,05 - 2,16 (2 H, m) , 1,95 - 2,04 (1 H, m) , 1,74 - 1,86 (2 H, m) , 1,53 - 1,57 (4 H, m) , 1,43 - 1,51 (5 H, m) , 1,36 -1,42 (4 H, m) , 1,31 - 1,36 (2 H, m) , 1,24 - 1,29 (3 H, m) , 1,17 - 1,24 (3 H, m) , 1,05 - 1,15 (1 H, m) , 0,93 - 1,02 (2 H, m) , 0,82 - 0,91 (1 H, m) , 0,51 - 0,68 (1 H, m) .
Tiempo de retención LC-EM: 2,36 min; m/z (MH+) : 780. Los -239- datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos LC Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3u C18 2,0x30mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detector de 220nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 5 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 2 min, un tiempo de mantenimiento de 1 min, y un tiempo de análisis de 3 min donde el disolvente A fue 10% de acetonitrilo / 90% de H20 / 0,1% de ácido trifluoroacético y el disolvente B fue 10% de H20 / 90% de acetonitrilo / 0,1% de ácido trifluoroacético . Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma Micromass para LC en modo de electropulverización .
Procedimiento de HPLC adicional: Disolvente A = 5% de MeOH/95% de H20/bicarbonato amónico 10 mM, Disolvente B = 95% de MeOH/5% de H20/bicarbonato amónico 10 mM, % de B de partida = 10, % de B final = 100, Tiempo de gradiente = 15 min, Tiempo de parada = 18 min, Caudal = 1 ml/min. Columna: Phenomenex Gemini Cl C-18, 4,6 x 150 mm, 3 mm, Tr = 15,84 min, pureza = 100%; Columna: Waters Xbridge Fenilo 4,6 x 150 mm, 3,5 mm, Tr = 15,96 min, pureza = 100%.
Para todos los compuestos descritos a continuación_ las purificaciones por HPLC Prep se realizaron en las condiciones siguientes salvo que se citen en procedimientos particulares.
Disolvente A: 10% de MeOH-90% de H2O-0,l% de TFA; -240- Disolvente B: 90% de MeOH-10% de H20-0,1% de TFA; Columna: Phenomenex-LUNA AXIA 5 u 21x100 mm S5.
Procedimientos de LC-EM: Todas condiciones de análisis por LC-EM usaron el procedimiento 1 salvo que se citen en el procedimiento particular.
Procedimiento 1 : % B inicial: 0 % B final: 100 Tiempo de gradiente : 4 min Tiempo de parada : 5 min Caudal: 4 ml/min Longitud de onda: 220 Disolvente A: 10% de MeOH / 90% de H20 / 0,1% de ácido trifluoroacético Disolvente B: 10% de H20 / 90% de MeOH / 0,1% de ácido trifluoroacético Columna: Phenomenex-luna 3,0 x 50 mm S10 13 - Ciclohexil - 6- (l-ciclopropil-5- (4-morfolinilcarbonil) -lH-imidazol-4-il) -N- (isopropilsulfonil) -3-metoxi-7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepin-10 -carboxamida - 241 - Esquema de reacción que representa la síntesis del compuesto 9. compuesto 9-1 compuesto 9-2 compuesto 9-3 Etapa 1: Preparación del compuesto 9-1 A una solución de ciclopropanamina (0,8 g, 14,01 mmol) y TEA (1,673 mi, 12,00 mmol) en éter (20 mi) se añadió 2-bromoacetato de etilo (1,109 mi, 10 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante la noche. El disolvente se concentró y el residuo se diluyó con hexano. El sólido se -242- separó por filtración y el filtrado se concentró proporcionando un aceite como compuesto 9-1 (1,432 g, 100%). El producto bruto se usó en la etapa siguiente.
Etapa 2: Preparación del compuesto 9-2 Al compuesto 9-1 (1,3 g, 9,08 mmol) en éter (5 mi) se añadió gota a gota N-cianoformimidato de etilo (0,891 g, 9,08 mmol) en éter (5 mi) . La mezcla de reacción se agitó a ta durante lh. Se eliminó el disolvente. Al residuo graso se añadió EtOH (5 mi) y terc-butóxido potásico (1,223 g, 10,90 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante la noche. La mezcla de reacción se concentró, luego se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHC03 sat . , NaCl sat . , se secó sobre Na2S04 anhidro, se filtró y se concentró proporcionando un sólido amarillo como compuesto 9-2 (0,79 g, 4,05 mmol, 44,6 % de rendimiento). El producto bruto se usó en la etapa siguiente. LC/MS m/z 195 (M+H) + 196, TR = 1,027 min; RM de ?? (400 MHz , MeOD) d ppm 7,35 - 7,45 (1 H, m) , 4,25 - 4,35 (2 H, m) , 3,48 (?-?-r ddd, J=7,30, 3,53, 3,27 Hz) , 1,32 - 1,38 (3 H, m) , 0,96 - 1,02 (2 H, m) , 0,92 - 0,96 (2 H, m) .
Etapa 3: Preparación del compuesto 9-3 A una solución de compuesto 9-2 (0,820 g, 4,20 mmol) y I2 (4,58 g, 18,06 mmol) en acetonitrilo (8 mi) a 45 °C se añadió gota a gota isopentil nitrito (0,677 mi, 5,04 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 45 °C durante 3 h, luego se enfrió hasta temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó -243- con EtOAc, se lavó con Na2S03 saturado, NaCl sat . , se secó sobre Na2S04 anhidro, se filtró y se concentró proporcionando un aceite amarillo. El producto bruto se disolvió en una pequeña cantidad de cloruro de metileno y se cargó en un cartucho de gel de sílice de 80 g que se eluyó con un gradiente de 20 min de EtOAc de 0-100% en hexano. Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron proporcionando un aceite amarillo como compuesto 9-3 (0,31 g, 1,013 mmol, 24,11 % de rendimiento) . LC/MS m/z 306 (M+H)+ 307, TR = 1,92 min; RMN de H (400 MHz , CL0R0F0RM0-D) d ppm 7,51 (1 H, s) , 4,31 - 4,43 (2 H, m) , 3,61 (1 H, ddd, J=7,49, 3,59, 3,27 Hz) , 1,37 - 1,47 (3 H, m) , 1,04 - 1,13 (2 H, m) , 0,87 -0, 97 (2 H, m) .
Etapa 4: Preparación del compuesto 9-4 En un recipiente de microondas de 5 mi se añadió compuesto 1-3 (0,694 g, 0,947 mmol), compuesto 9-3 (0,290 g, 0,947 mmol) y yoduro de cobre (I) (0,018 g, 0,095 mmol) . La mezcla se desgasificó con N2, luego se añadió Tetrakis (0,109 g, 0,095 mmol) . La mezcla de reacción se calentó en baño de aceite a 120 °C durante 5 h. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se concentró para eliminar la mayor parte del disolvente. El residuo se disolvió en una pequeña cantidad de cloruro de metileno y se cargó en un cartucho de gel de sílice de 40 g que se eluyó con un gradiente de 25 min de EtOAc al 0-80% en hexano. Las -244- fracciones que contenían el producto deseado se concentraron proporcionando un sólido amarillo como compuesto 9-4 (0,22 g, 0,351 mmol, 37,0 % de rendimiento). LC/MS m/z 621 (M+H) + 622, 5, TR = 4,31 min.
Etapa 5: Preparación del compuesto 9-5 A una solución de compuesto 9-4 (0,22 g, 0,354 mmol) en DCM (2 mi) se añadió TFA (1 mi, 12,98 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a ta. La mezcla de reacción se concentró para eliminar la mayor parte del disolvente. El residuo se diluyó con EtOAc, se lavó con HCl 1N, NaCl sat . , se secó sobre Na2S0 anhidro, se filtró y se concentró proporcionando un sólido amarillo como compuesto 9-5 (0,20 g, 0,354 mmol, 100 % de rendimiento). LC/MS m/z 565 (M+H) + 566, TR = 3,91 min.
Etapa 6: Preparación del compuesto 9-6 A una mezcla de compuesto 9-5 (0,20 g, 0,354 mmol) en THF (3 mi) se añadió CDI (0,126 g, 0,778 mmol). La mezcla se calentó a 50 °C durante 0,5 h, luego se enfrió. Se añadieron propano-2-sulfonamida (0,13 g, 1,055 mmol) y DBU (0,176 mi, 1,167 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a ta durante la noche. La mezcla de reacción se concentró y el producto bruto se disolvió en una pequeña cantidad de cloruro de metileno y se cargó en un cartucho de gel de sílice de 80 g que se eluyó con un gradiente de 20 min de MeOH al 0-15% en CH2C12. Las fracciones que contenían producto se reunieron y se concentraron proporcionando un sólido amarillo como compuesto -245- 9-6 (0,156 g, 0,233 mmol , 59,8 % de rendimiento) . LC/ S m/z 670 (M+H)+ 671, TR = 3,713 min.
Etapa 7: Preparación del compuesto 9-7 A una solución de compuesto 9-6 (0,12 g, 0,179 mmol) en THF (2 mi) y MeOH (0,500 mi) se añadió NaOH 1 N (1 mi, 1,000 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a ta durante 5 h. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad. Entonces el residuo se diluyó con EtOAc, se lavó con HCl 1 N, NaCl sat . , se secó sobre Na2S04 anhidro, se filtró y se concentró proporcionando un sólido amarillo como compuesto 9-7 (0,11 g, 0,171 mmol, 96 % de rendimiento).
LC/MS m/z 642 (M+H)+ 643,. TR = 3,48 min.
Etapa 8: Preparación del compuesto 9 A una solución de compuesto 9-7 (0,025 g, 0,039 mmol) en - DCM (1 mi) se añadió TEA (0,1 mi, 0,717 mmol), morfolina (0,03 mi, 0,039 mmol), seguido por tetrafluoroborato de 0- (benzotriazol-l-il) -?,?,?' ,?' -tetrametiluronio (0,025 g, 0,078 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a ta durante la noche. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad y el residuo se volvió a disolver en MeOH, se filtró y se purificó por HPLC prep de fase inversa. Las fracciones del pico principal se evaporaron durante la noche en el SpeedVac proporcionando compuesto 9 mono sal TFA (0,020 g, 0,023 mmol, 59,1 % de rendimiento) as un sólido amarillo. LC/MS m/z 711 (M+H)+ 712,48, TR = 3,65 min. RMN de XH (400 MHz, CLOROFORMO- -246- D) d ppm 8,59 (1 H, s) , 8,19 (1 H, s ancho), 7,89 (1 H, d, J=8,81 Hz) , 7,65 (1 H, d, J=8,06 Hz) , 7,51 (1 H, d, .7=8,31 Hz) , 7,04 - 7,14 -(2 H,-m),- 6,94 (1 H, s ancho), 5,40 (1 H, s ancho) , 4,52 (1 H, d, J=14,60 Hz) , 4,01 (1 ?,-d, J=6,80 Hz) , 3,96 (3 H, s) , 3,89 (6 H, s ancho), 2,86 (2 H, s ancho), 2,68 (2 H, s ancho), 2,36 (1 H, s ancho), 2,22 (1 H, s ancho), 2,01 (6 H, s ancho), 1,77 (3 H, d, .7=9,82 Hz) , 1,36 - 1,54 (6 H, m) , 1,19 - 1,28 (3 H, m) , 0,89 (1 H, s ancho).
Preparación de compuesto 10: 6- (l-ciclobutil-5- (4-morfolinilcarbonil) -lH-imidazol-4-il) -13-ciclohexil-N- (isopropilsulfon.il) -3 -metoxi - 7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10 -carboxamida .
Se preparó como se describe en la Preparación del compuesto 9. LC/MS m/z 725 (M+H) + 726,4, TR = 3,64 min. RM de ?? (400 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 8,61 (1 H, s ancho), 8,25 (1 H, s ancho), 7,89 (1 H, d, J=8,56 Hz) , 7,67 (1 H, d, J=8,06 Hz), 7,52 (1 H, d, J=8,81 Hz) , 7,10 (1 H, dd, J=8,81, 2,52 Hz) , 7,03 (1 H, s ancho), 6,93 (1 H, s ancho), 5,47 (1 H, d, J=15,ll Hz) , 4,80 (1 H, t, J=8,18 Hz) , 4,53 (1 H, d, J=14,35 -247- Hz) , 3,96 (3 H, s) , 3,89 (1 H, s) , 3,82 (1 H, s ancho), 3,51 (2 H, s) , 3,21 (1 H, s ancho), 2,86 (2 H, s ancho), 2,62 (3 H, s ancho), 2,57 (2 H, s ancho), 2,34 (4 H, s ancho), 2,00 (6 H, d, .7=11,58 Hz) , 1,76 (3 H, s ancho), 1,18 - 1,57 (7 H, m) , 1, 18 - 1, 26 (1 H, m) . 6- (l-Ciclobutil-5- ( (5-etil-2, 5-diazabiciclo[2,2, 1]hept-2- il) carbonil) -lH-imidazol-4-il) -13-ciclohexil-N- (isopropilsulfonil) - 3-metoxi-7H-indolo [2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida Se preparó como se describe en la Preparación del compuesto 9. LC/MS m/z 764 (M+H) + 765,49, TR = 3,33 min. 6- (l-Ciclobutil-5- ( ( (2R, 6S) -2, 6-dimetil-4-morfolinil) carbonil) - lH-imidazol-4-il) -13-ciclohexil-N- (isopropilsulfonil) -3-metoxi-7H- indolo[2, 1-a] [2]benzacepin-10-carboxamida -248- Se preparó como se describe en la Preparación del compuesto 9. LC/MS m/z 753 (M+H) + 754,5, TR = 3,798 min. 13-Ciclohexil-6- (1 -ciclopropil - 5 - ( (5-etil-2 , 5-diazabiciclo [2 , 2, 1] hept-2-il) carbonil) -IH-imidazol -4-il) -N-(isopropilsulfonil) -3 -metoxi- 7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin-10 -carboxamida Se preparó como se describe en la Preparación del compuesto 9. LC/MS m/z 750 (M+H)+ 751,39, TR = 3,303 min. 13-Ciclohexil-6- (l-ciclopropil-5- ( ( (2R, 6S) -2, 6-dimetil-4-morfolinil) carbonil) - 1H-imidazol -4 -il ) -N- (isopropilsulfonil) -3 -metoxi - 7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepin- 10 - carboxamida preparó como se describe en la Preparación del -249- compuesto 9. LC/MS m/z 739 (M+H)+ 740,47, TR = 3,81 min. RM de XH (500 MHz, CLOROFORMO-D) d ppm 8,56 (1 H, d, J=9,16 Hz) , 7,89 (2 H, t, J=8,09 Hz) , 7,67 (1 H, dd, J=13,58, 8,39 Hz) , -7,49 - 7,54 (2 H, m) , 7,10 (1 H, dd, J=8,55, 2,14 Hz) , 6,93 (1 H, d, J=2,44 Hz) , 5,43 (1 H, d, J=14,95 Hz) , 4,50 (1 H, d, J=14,34 Hz) , 4,02 - 4,09 (1 H, m) , 3,97 (3 H, s) , 3,89 (4 H, d, ^7=3, 36 Hz) , 3,51 (1 H, s) 3,40 (1 H, s) , 2,83 - 2,93 (2 H, m) , 1,99 - 2,11 (5 H, m) , 1,79 (3 H, s ancho), 1,46 (4 H, s ancho), 1,44 (7 H, dd, J=7,02, 3,36 Hz) , 1,20 - 1,28 (3 H, m) , 1,09 (2 H, d, J=5,80 Hz) , 1,06 (1 H, d, J=5,80 Hz) , 0,89 (1 H, s ancho), 0,72 (1 H, s ancho) .
Procedimientos Biológicos Los compuestos demostraron actividad contra NS5B del VHC como se determinó en los siguientes ensayos de RdRp del VHC.
Clonación, expresión, y purificación de RdRp NS5B del VHC. El ADNc que codifica la proteína NS5B del VHC , genotipo Ib, se clonó dentro del vector de expresión pET21a. La proteína se expresó con un truncamiento C-terminal de 18 aminoácidos potenciando la solubilidad. La línea celular BL21(DE3) competente de E. coli se usó para expresión de la proteína. Los cultivos se cultivaron a 37°C durante ~ 4 horas hasta que los cultivos alcanzaron una densidad óptica de 2,0 a 600 nm. Los cultivos se enfriaron a 20°C y se indujeron con IPTG 1 mM. Se añadió ampicilina recién preparada a una concentración final de 50 g/ml y las células se cultivaron -250- durante toda una noche a 20°C.
Los sedimentos celulares (3 1) se lisaron para purificación proporcionando 15-24 mgs de NS5B purificado. El tampón de lisis consiste en Tris-HCl 20 mM, pH 7,4, NaCl. 500 mM, tritón X-100 al 0,5%, DTT 1 mM, EDTA 1 mM, glicerol al 20%, lisozima a 0,5 mg/ml, MgCl2 10 mM, desoxirribonucleasa I a 15 µg/ml, y comprimidos inhibidores de proteasa Complete™ (Roche) . Después de adición del tampón de lisis, se resuspendieron los sedimentos celulares congelados usando un homogenizador de tejidos. Para reducir la viscosidad de la muestra, se sonicaron las alícuotas del lisado en hielo usando una micropunta unida a un sonicador Branson. El lisado sonicado se centrifugó a 100.000 x g durante 1 hora a 4°C y se filtró a través de una unidad de filtro de 0,2 µt? (Corning) .
La proteína se purificó usando tres etapas de cromatografía secuenciales : sefarosa de heparina CL-6B, sefarosa de poliu 4B, y sefarosa de Hitrap SP (Pharmacia) . Los tampones de cromatografía fueron idénticos al tampón de lisis pero no contenían nada de lisozima, desoxirribonucleasa I, MgCl2 o inhibidor de proteasas y la concentración de NaCl del tampón se ajustó de acuerdo con los requerimientos para cargar la proteína en la columna. Cada columna se eluyó con un gradiente de NaCl que varió en longitud de 5-50 volúmenes de columna dependiendo del tipo de columna. Después de la etapa de cromatografía final, la ^pureza resultante de la enzima es - 251 - >90% en base a análisis con SDS-PAGE. La enzima se dividió en partes alícuotas y se almacenó a -80°C.
Ensayo de enzima RdRp NS5B del VHC estánda . Los ensayos de genotipo Ib de RdRp del VHC se realizaron en un volumen final de 60 µ? en placas de 96 pocilios (Costar 3912) . El tampón de ensayo se compone de Hepes 20 mM, pH 7,5, KC1 2,5 mM, MgCl2 2,5 mM, DTT 1 mM, inhibidor de la ARNsa 1,6 U (Promega N2515) , BSA a 0,1 mg/ml (Promega R3961) , y glicerol al 2%. Todos los compuestos se diluyeron en serie (3-veces) en DMSO y se diluyeron adicionalmente en agua de tal forma que la concentración final de DMSO en el ensayo fue del 2%. La enzima de genotipo Ib de RdRp del VHC se usó a una concentración final de 28 nM. Se usó una plantilla de poliA a 6 nM, y se usó un cebador oligo-dT12 biotinilado a concentración final de 180 nM. La plantilla se obtuvo comercialmente (Amersham 27-4110) . El cebador biotinilado se preparó mediante Sigma Genosys . Se usó 3H-UTP a 0,6 (UTP total a 0,29 µ?) . Se iniciaron las reacciones mediante la adición de enzima, incubada a 30°C durante 60 min, y se detuvieron añadiendo 25 µ? de EDTA 50 mM conteniendo perlas de SPA (4 µg/µl, Amersham RPNQ 0007) . Se leyeron placas en un Packard Top Count NXT después de incubación de >1 hora a temperatura ambiente.
Ensayo de enzima RdRp NS5B del VHC modificado. Un ensayo de enzima modificado se llevó a cabo esencialmente como se ha descrito para el ensayo de enzima estándar excepto por lo -252- siguiente: se precapturó el cebador oligo biotinilado dT12 sobre perlas de SPA recubiertas de estreptavidina mezclando cebador y perlas en tampón de ensayo e incubando a temperatura ambiente durante una hora. Se retiró cebador no unido después de la centrifugación. Las perlas unidas a cebador se resuspendieron en tampón de Hepes 20 mM, pH 7,5 y se usaron en el ensayo a concentraciones finales de cebador 20 nM y perlas 0,67 g/ l . Orden de adición en el ensayo: se añadió enzima (14 nM) al compuesto diluido seguido por la adición de una mezcla de plantilla (0,2 nM) , 3H-UTP (0,6 µ??, 0,29 µ?) , y perlas unidas a cebador, iniciando la reacción; las concentraciones dadas son finales. Las reacciones se dejaron continuar durante 4 horas a 30°C.
Los valores de CI50 para compuestos se determinaron usando siete [I] diferentes. Los valores de CI50 se calcularon a partir de la inhibición usando la fórmula y = A+ ( (B-A)/(l+( (C/x) AD) ) ) .
Preparación de Ensayo de FRET. Para llevar a cabo el ensayo de rastreo del VHC FRET, se usaron placas de cultivo celular de 96 pocilios. El péptido de FRET (Anaspec, Inc.) (Taliani y col., Anal. Biochem. 1996, 240, 60-67) contiene un donante de fluorescencia, EDANS , cerca de un extremo del péptido y de un aceptor, DABCYL, cerca del otro extremo. La fluorescencia del péptido se desactiva mediante transferencia de energía de resonancia intermolecular (RET) entre el donante -253- y el aceptor, pero a medida que la proteasa NS3 escinde el péptido los productos se liberan desde desactivación de RET y la fluorescencia del donante llega a ser patente. El reactivo de ensayo se fabricó como sigue: se diluyó reactivo de lisis de cultivo celular de Luciferasa celular 5X de Promega (#E153A) a IX con dH20, se añadió NaCl a 150 mM finales, el péptido de FRET se diluyó a 20 UM finales a partir de una reserva 2 mM.
Para preparar placas, las células de replicón del VHC, con o sin un gen indicador de luciferasa Renilla, se tripsinizaron y se situaron dentro de cada pocilio de una placa de 96 pocilios con compuestos de prueba valorados añadidos en las columnas de 3 a 12; las columnas 1 y 2 contenían un compuesto de control (inhibidor de proteasa del VHC) , y la fila de abajo contenía células sin compuesto. Las placas se situaron después en un incubador de C02 a 37°C.
Ensayos. La placa se retiró de forma subsiguiente a la adición de los compuestos de prueba anteriormente descritos (Preparación de Ensayo FRET) , a diversos tiempos se retiró la placa y se añadió solución de azul de Alamar (Trek Diagnostics, n.°: 00-100) por pocilio como una medida de toxicidad celular. Después de leer en un instrumento de Cytoflour 4000 (PE Biosystems) , las placas se aclararon con PBS y se usaron después para ensayo FRET mediante la adición de 30 µ? del reactivo de ensayo de péptido FRET anteriormente -254- descrito (Preparación de Ensayo FRET) por pocilio. La placa se situó después dentro del instrumento Cytoflour 4000 que se había puesto para excitar a 340/emisión a 490, de modo automático durante 20 ciclos y la placa se leyó en un modo cinético. Típicamente, la señal para ruido que usa un análisis de punto final después de las lecturas fue de al menos tres veces. Alternativamente, después de la lectura de azul de Alamar, las placas se aclararon con PBS, se añadieron 50 µ? de DMEM (glucosa alta) sin rojo fenol y las placas se usaron después para ensayo de luciferasa usando el Sistema de Ensayo de Luciferasa Dual-Glo de Promega.
El análisis de compuesto se determinó mediante cuantificación de la inhibición de replicón del VHC relativa y de los valores de citotoxicidad relativa. Para calcular los valores de citotoxicidad, las señales de fluorescencia de Azul de Alamar de los pocilios de control se pusieron como no tóxicas al 100%. Las señales individuales en cada uno de los pocilios de compuesto de prueba se dividieron después por la señal de control promedio y se multiplicaron al 100% determinando citotoxicidad porcentual. Para calcular los valores de inhibición de replicón del VHC, se obtuvo un valor antecedente promedio a partir de las dos células que contienen la cantidad más alta de inhibidor de proteasa del VHC al final del periodo de ensayo. Estos números fueron similares a aquellos obtenidos a partir de células Huh-7 no modificadas. - 255 - Los números precedentes se sustrajeron después de la señal promedio obtenida a partir de los pocilios de control y este número se usó como actividad del 100%. Las .. señales individuales en cada uno de los pocilios de prueba de compuestos se dividieron después por los valores de control promedio después de sustracción del fondo y se multiplicaron por 100% determinando la actividad en porcentaje. Los valores de CE50 para una valoración de inhibidor de proteasa se calcularon como la concentración que causó una reducción del 50% en FRET o actividad de luciferasa. Los dos números generados para la placa del compuesto, citotoxicidad porcentual y actividad porcentual se usaron para determinar ¦ compuestos de interés para análisis adicional.
Ensayo del Indicador de Luciferasa de Replicón del VHC El ensayo de luciferasa de replicón del VHC se desarrolló para someter a seguimiento los efectos inhibidores de compuestos descritos en la descripción en la replicación viral del VHC. El uso de un ensayo de indicador de luciferasa de replicón del VHC se describió primero por Krieger y col. (Krieger N, Lohmann V, y Bartenschlager R, J. Virol . 75 (10): 4614-4624 (2001)). Las células HUH-7, que expresan constitutivamente el replicón del VCH, se cultivaron en Medios Eagle Modificados de Dulbecco (DMEM) (Gibco-BRL) que contenían suero de ternero fetal (FCS) (Sigma) al 10% y 1 mg/ml de G418 (Gibco-BRL) . Los compuestos se diluyeron en serie 3 veces en -256- DMSO para una valoración de veinte puntos y se transfirieron subsiguientemente a placas tratadas de cultivo de tejidos de 384 pocilios estériles (número de catálogo de Corning 3571) . Las placas se sembraron después con 50 µ? de células a una densidad de 3,0 x 103 células/pocilio en- DMEM que contenía FCS al 4% (concentración de DMSO final al 0,5 %) . Después de incubación de tres días a 37 °C, las células se analizaron en busca de actividad de luciferasa Renilla usando el EnduRen como sustrato (número de catálogo de Promega E6485) . El sustrato EnduRen se diluyó en DMEM y después se añadió a las placas a una concentración final de 7,5 µ?. Las placas se incubaron durante 2 horas a 37 °C y después se leyeron inmediatamente durante 30 - segundos con Viewlux Imager (PerkinElmer) usando un programa de luminiscencia. Para valorar la citotoxicidad de los compuestos, se generaron valores de CC50 multiplexando las placas que contenían EnduRen con Cell Titer-Blue (Promega, número de catálogo G8082) . Se añadieron 3 µ? de Cell-Titer Blue a cada pocilio y se incubaron durante 8 horas a 37 °C. Se leyó la señal de fluorescencia de cada pocilio, con una longitud de onda de excitación a 525/10 nm y una longitud de onda de emisión de 598/10 nm, usando el Reproductor de Imágenes de Viewlux.
Los datos representativos para los compuestos se muestran en la tabla 1. - -257- Tabla 1. -258- -259- -260- -261 - -262- -263- -264- 25 -265- Estructura CI50 [µ?] CE50 (µ?) B B 0,0054 µ? 0,0055 µ? B B B B -266- -267- -268- -269- -270- Estructura CI50 [µ?] CE50 (µ?) 0 B B B B -271 - 25 -272- -273- -274- -275- -276- - 277 -' -278- -279- -280- -281 - -282- -283- -284- -285- -286- - 287 - -289- -290- -291 - -293- - 294 - s A>0,5 µ?; B 0,0017 µ? - 0,5 µ?; C <0,02 µ? pero no se determinó un valor exacto; D>0,04 µ pero no se determinó un valor exacto; E<0,07 µ? pero no se determinó un valor exacto; F>1,0 µ?; G<0,0017 µ? pero no se determinó un valor exacto; * Estos valores se determinaron de forma similar pero con un replicón la. Se determinaron los valores de CI50 usando el protocolo de preincubación. Los valores de CE50 se -295- determinaron usando uno de los métodos descritos en los procedimientos.
Composiciones Farmacéuticas y Procedimientos de Tratamiento Los compuestos mostraron actividad contra NS5B del VHC y pueden ser útiles en tratar VHC e infección por VHC. Por lo tanto, otro aspecto de la invención es una composición que comprende un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Otro aspecto de la invención es el uso de un compuesto de fórmula I en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de la hepatitis C.
Otro aspecto de la invención es una composición que comprende adicionalmente un compuesto que tiene actividad anti-VHC.
Otro aspecto de la invención es una composición en la que el compuesto que tiene una actividad anti-VHC es un interferón. Otro aspecto de la invención es aquel en que el interferón se selecciona de interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón consenso, interferón alfa 2A, e interferón tau linfoblastoide .
Otro aspecto de la invención es una composición en la que el compuesto que tiene actividad anti-VHC es una ciclosporina . Otro aspecto de la invención es aquel en que la ciclosporina -296- es ciclosporina A.
Otro aspecto de la invención es una composición en la que el compuesto que- tiene actividad anti-VHC se selecciona del grupo constituido por interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de una respuesta de linfocitos T cooperadores de tipo 1, ARN interferidor, ARN antisentido, Imiqimod, ribavirina, un inhibidor de 51 -monofosfatodeshidrogenasa de inosina, amantadina, y rimantadina.
Otro aspecto de la invención es una composición en la que el compuesto que tiene actividad anti-VHC es efectivo inhibiendo la función de un objetivo seleccionado de metaloproteasa del VHC, serina proteasa del VHC, polimerasa del VHC, helicasa del VHC, proteína NS4B del VHC, entrada del VHC, ensamblaje del VHC, salida del VHC, proteína NS5A del VHC, IMPDH, y un análogo de nucleósido para el tratamiento de una infección del VHC.
Otro aspecto de la invención es una composición que comprende un compuesto . de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, un vehículo farmacéuticamente aceptable, y un interferón y ribavirina.
Otro aspecto de la invención es un procedimiento para inhibir la función del replicón del VHC que comprende poner en contacto el replicón del VHC con un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. -297- Otro aspecto de la invención es un procedimiento para inhibir la función de una proteína NS5B del VHC que comprende poner en contacto la proteína NS5B del VHC -con un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otro aspecto de la invención es un procedimiento para tratar una infección por VHC en un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra modalidad el compuesto es efectivo inhibiendo la función del replicón del VHC. En otra modalidad el compuesto es efectivo inhibiendo la función de la proteína NS5B del VHC . . ..
Otro aspecto de la invención es un procedimiento para tratar una infección por VHC en un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en conjunción con (previamente a, después, o concurrentemente) otro compuesto que tiene actividad anti-VHC.
Otro aspecto de la invención es el procedimiento en el que el otro compuesto que tiene actividad anti-VHC es un interferón .
Otro aspecto de la invención es el procedimiento en el que el interferón se selecciona de interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón consenso, interferón alfa -298- 2A, e interferón tau linfoblastoide .
Otro aspecto de la invención es el procedimiento en el que el otro compuesto que tiene actividad anti-VHC es una ciclosporina .
Otro aspecto de la invención es el procedimiento en el que la ciclosporina es ciclosporina A.
Otro aspecto de la invención es el procedimiento en el que el otro compuesto que tiene actividad anti-VHC se selecciona de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de una respuesta de linfocitos T cooperadores de tipo 1, ARN interfiriente , ARN antisentido, Imiqimod, ribavirina, un inhibidor de 5'-monofosfato deshidrogenasa de inosina, amantadina, y rimantadina .
Otro aspecto de la invención es el procedimiento en el que el otro compuesto que tiene actividad anti-VHC es efectivo inhibiendo la función de un objetivo seleccionado del grupo constituido por metaloproteasa del VHC, serina proteasa del VHC, polimerasa del VHC, helicasa del VHC, proteína NS4B del VHC, entrada del VHC, ensamblaje del VHC, salida del VHC, proteína NS5A del VHC, IMPDH, y un análogo de nucleósido para el tratamiento de una infección por VHC.
Otro aspecto de la invención es el procedimiento en el que el otro compuesto que tiene actividad anti-VHC es efectivo inhibiendo la función del objetivo en el ciclo de vida del VHC -299- distinto de la proteína NS5B del VHC.
"Terapéuticamente efectivo" quiere decir la cantidad de agente requerido para proporcionar un beneficio del paciente significativo como se entiende por los médicos generales en el campo de la hepatitis y de la infección por VHC. Una cantidad terapéuticamente efectiva es aquella que se necesita para proporcionar un beneficio del paciente significativo .
"Paciente" quiere decir una persona infectada con el virus VHC y adecuada para terapia como se entiende por médicos generales en el campo de la hepatitis y la infección por VHC.
"Tratamiento," "terapia," "régimen," "infección por VHC" , y términos relacionados se usan como se entiende por médicos generales en el campo de la hepatitis y de la infección por VHC.
Los compuestos de esta invención se dan generalmente como composiciones farmacéuticas que constan de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto o su sal farmacéuticamente aceptable y un vehículo farmacéuticamente aceptable y pueden contener excipientes convencionales. Los vehículos farmacéuticamente aceptables son aquellos vehículos convencionalmente conocidos que tienen perfiles de seguridad aceptables .
Las composiciones abarcan todas las formas sólidas y -300- líquidas comunes incluyendo por ejemplo cápsulas, comprimidos pastillas, y polvos así como suspensiones líquidas, jarabes, elixires, y soluciones. Las composiciones se fabrican usando técnicas de formulación comunes, y se usan excipientes (tales como aglutinantes y humectantes) y vehículos (tales como agua y alcoholes) convencionales generalmente usados para composiciones. Véase, por ejemplo, Remington ' s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, 17a edición, 1985.
Las composiciones sólidas se formulan normalmente en unidades de dosificación y se prefieren composiciones que proporcionen de aproximadamente 1 a 1000 mg del ingrediente activo por dosis. Algunos ejemplos de dosificaciones son 1 mg, 10 mg, 100 mg, 250 mg, 500 mg, y 1000 mg . Generalmente, otros agentes estarán presentes en un intervalo unitario similar a agentes de esa clase usados clínicamente. Típicamente, éste es 0,25-1000 mg/unidad.
Las composiciones líquidas están usualmente en intervalos de dosificación unitarios. Generalmente, la composición líquida estará en un intervalo de dosificación unitaria de 1-100 mg/ml. Algunos ejemplos de dosificaciones son 1 mg/ml, 10 mg/ml, 25 mg/ml, 50 mg/ml, y 100 mg/ml. Generalmente, otros agentes estarán presentes en un intervalo unitario similar a agentes de esa clase usados clínicamente. Típicamente, éste es 1-100 mg/ml. - 301 - La invención comprende todos los modos convencionales de administración; se prefieren procedimientos orales y parenterales . Generalmente, el régimen de administración de dosis será similar al de otros agentes usados clínicamente. Típicamente, la dosis diaria será 1-100 mg/kg de peso corporal diariamente. Generalmente, se requiere más compuesto oralmente y menos parenteralmente . El régimen de dosificación específico, sin embargo, se determinará por un médico usando juicio médico sólido.
La invención también comprende procedimientos en los que el compuesto se da en terapia de combinación. Es decir, el compuesto se puede usar en conjunción con, pero separadamente de, otros agentes útiles en tratar hepatitis e infección por VHC . En estos procedimientos de combinación, el compuesto se dará generalmente en una dosis diaria de 1-100 mg/kg de peso corporal diariamente en conjunción con otros agentes. Los otros agentes generalmente se darán en las cantidades usadas terapéuticamente. El régimen de administración de dosis específico, sin embargo, se determinará por un médico usando juicio médico sólido.
Algunos ejemplos de compuestos adecuados para composiciones y procedimientos se enumeran en la tabla 2. -302- Tabla 2. -303- -304- -305- -306- Será evidente para alguien experto en la técnica que la presente descripción no está limitada a los precedentes ejemplos ilustrativos, y que puede realizarse en otras formas específicas sin apartarse de los atributos esenciales de la misma. Se desea por lo tanto que los ejemplos se consideren en todos los aspectos como ilustrativos y no restrictivos, haciéndose referencia a las reivindicaciones adjuntas, más que a los ejemplos precedentes, y se desea por lo tanto que todos los cambios que vengan dentro del significado y del intervalo de equivalencia de las reivindicaciones estén abarcados en éstas.
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descricpión de la invención.

Claims (15)

-307- REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención antecede, se reclama como propiedad lo contenido las siguientes reivindicaciones:
1. Un compuesto de fórmula I caracterizado porque: R1 es C02R5 o CONR6R7; R2 es furanilo, pirrolilo, tienilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, imidazolilo, oxazolilo, tiazolilo, oxadiazolilo, triazolilo, o tetrazolilo; y R2 está sustituido con 1 sustituyente seleccionado del grupo constituido por cicloalquilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, fenilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridinonilo, bencimidazolilo, piperidinilo sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo, y piridinilo sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo; y R2 está sustituido con 1 sustituyente seleccionado de C02R5, CON(R12)2, y COR13; y R2 está sustituido con 0-1 sustituyentes seleccionados de oxo, amino, alquilo, y haloalquilo; R3 es hidrógeno, halo, alquilo, alquenilo, hidroxi, benciloxi, o alcoxi; -308- R4 es cicloalquilo; R5 es hidrógeno o alquilo; R6 es hidrógeno, alquilo, alquil-S02, cicloalquil -S02 , haloalquil-S02, (R9) (R10)NSO2, o (R11)S02; R7 es hidrógeno o alquilo; R8 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, (cicloalquil) alquilo, alquilcarbonilo, cicloalquilcarbonilo, haloalquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquil-S02, cicloalquil-S02, haloalquil-S02 , aminocarbonilo, (alquilamino) carbonilo, (dialquilamino) carbonilo, bencilo, benciloxicarbonilo, o piridinilo; R9 es hidrógeno o alquilo; R10 es hidrógeno o alquilo; R11 es azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homopiperidinilo, homopiperazinilo, u homomorfolinilo, y está sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo; R12 es hidrógeno, alquilo, alcoxialquilo, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) alquilo, o (R11) alquilo ; R13 es azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homopiperidinilo, homopiperazinilo, u homomorfolinilo, y está sustituido con 0-3 sustituyentes seleccionados de halo, alquilo, cicloalquilo, alcoxialquilo, amino, alquilamino, dialquilamino, R11, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) alquilo, alquilo, o C02R5; o R es una [4.3.0] diamina bicíclica o una [3.3.0] diamina bicíclica unida al carbonilo a través de un nitrógeno, - 310 - y está sustituida con 0-2 R sustituyentes ; R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, (cicloalquil) alquilo, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) alquilo, o bencilo; R15 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, (cicloalquil ) alquilo, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) alquilo, o bencilo; o NR14R15 tomado conjuntamente es azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, N- (alquil) piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homopiperidinilo, u homomorfolinilo ; R16 es hidrógeno o alquilo; R17 es hidrógeno, alquilo, o cicloalquilo; y X es metileno, un enlace, o está ausente; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque: R1 es C02R5 o CONR6R7; R2 is pirazolilo, isoxazolilo, o imidazolilo, y está sustituido con 1 sustituyente seleccionado del grupo constituido por cicloalquilo, tetrahidropiranilo, fenilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridinonilo, bencimidazolilo, -311 - piperidinilo sustituido con 1 sustituyente alquilo, y piridinilo sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo; y R2 está sustituido con 1 sustituyente seleccionado de C02R5, CON(R12)2, y COR13; y R2 está sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo; R3 es alcoxi; R4 es cicloalquilo; R5 es hidrógeno o alquilo; R6 es alquil-S02, cicloalquil-S02 , o (R9) (R10)NSO2; R7 es hidrógeno; R8 es hidrógeno, alquilo, o (cicloalquil) alquilo; R12 es alquilo o alcoxialquilo; R13 es azetidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, homopiperazinilo, u homomorfolinilo, y está sustituido con 0-3 sustituyentes seleccionados de halo, alquilo, cicloalquilo, o alcoxialquilo; -312- R es hidrógeno; R17 es alquilo; y X es un enlace ,- o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque: R1 es C02R5 o CONR6R7; R2 is pirazolilo, isoxazolilo, o imidazolilo, y está sustituido con 1 sustituyente seleccionado de ciclopropilo, ciclobutilo, tetrahidropiranilo, fenilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridinonilo, bencimidazolilo, N- metilpiperidinilo, piridinilo o metilpiridinilo; y R2 está sustituido con 1 sustituyente seleccionado de C02R5, CON(R12)2/ y COR13; y R2 está sustituido con 0-1 sustituyentes metilo; R3 es metoxi ; R4 es ciclohexilo; R5 es hidrógeno o alquilo; -313- R6 es isopropil-S02, isobutil -S02 , ciclopropil-S02 , o Me2NS02 ; R7 es hidrógeno; R8 es hidrógeno, metilo, etilo, o (ciclopropil) metilo; R12 is isopropilo o metoxietilo; R13 es difluoroazetidinilo, difluoropiperidinilo, metilpiperazinilo, ciclopentilpiperazinilo, trimetilopiperazinilo, morfolinilo, dimetilmorfolinilo, (metoximetil)morfolinilo, N-metilhomopiperazinilo, u homomorfolinilo; -314- X es un enlace; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
4. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque: R1 es C02R5 o CONR6R7; R2 es furanilo, pirrolilo, tienilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, imidazolilo, oxazolilo, tiazolilo, oxadiazolilo, triazolilo, o tetrazolilo; y R2 está sustituido con 1 sustituyente seleccionado de cicloalquilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, piperidinilo sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo, y piridinilo sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo;. y R2 está sustituido con 1 sustituyente seleccionado de C02R5, CON(R12)2, y COR13; y R2 está sustituido con 0-1 sustituyentes seleccionados de oxo, amino, alquilo, y haloalquilo; R3 es hidrógeno, halo, alquilo, alquenilo, hidroxi, benciloxi, o alcoxi; R4 es cicloalquilo; R5 es hidrógeno o alquilo; R6 es hidrógeno, alquilo, alquil-S02, cicloalquil-S02 , haloalquil-S02, (R9) (R10)NSO2, o (R11)S02; R7 es hidrógeno o alquilo; R8 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, (cicloalquil) alquilo, alquilcarbonilo, ' cicloalquilcarbonilo, haloalquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquil-S02, cicloalquil- - 315 - S02, haloalquil-S02 , aminocarbonilo, (alquilamino) carbonilo, (dialquilamino) carbonilo, bencilo, benciloxicarbonilo, o piridinilo; R9 es hidrógeno o alquilo; R10 es hidrógeno o alquilo; R11 es azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homopiperidinilo, homopiperazinilo, u homomorfolinilo, y está sustituido con 0-1 sustituyentes alquilo; R12 es hidrógeno, alquilo, alcoxialquilo, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) alquilo, o (R11) alquilo; R13 es azetidinilo, pirrolidinilo, piperidijilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homopiperidinilo, homopiperazinilo, u homomorfolinilo, y está sustituido con 0-3 sustituyentes seleccionados de alquilo, alcoxialquilo, amino, alquilamino, dialquilamino,' R11, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) alquilo, (R11) alquilo, o C02R5; - 316 - o R es una [4.3.0] diamina bicíclica o una [3.3.0] diamina bicíclica unida al carbonilo a través de un nitrógeno, y está sustituida con 0-2 R8 sustituyentes ; R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, (cicloalquil ) alquilo, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) alquilo, o bencilo; R15 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, - 317 - (cicloalquil) alquilo, aminoalquilo, (alquilamino) alquilo, (dialquilamino) alquilo, o bencilo; o NR14R15 tomado conjuntamente es azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, N- (alquil) iperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homopiperidinilo, u homomorfolinilo; R16 es hidrógeno o alquilo; R17 es hidrógeno, alquilo, o cicloalquilo; y X es metileno, un enlace, o está ausente; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
5. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 es CONR6R7; R6 es alquil-S02, cicloalquil-S02, haloalquil-S02 , (R9)2NS02, o (R10)SO2; y R7 es hidrógeno .
6. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R2 es pirazolilo sustituido con 1 sustituyente seleccionado de ciclopropilo, ciclobutilo, N-alquilpiperidin-4-ilo, 3 -alquilpiridin-4 - ilo, y tetrahidropiran-4-ilo, 1 sustituyente seleccionado de CON(R12)2 y COR13, y 0-1 sustituyentes alquilo.
7. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R3 es hidrógeno.
8. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R3 es metoxi .
9. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, -318- caracterizado porque R4 es ciclohexilo.
10. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque X es un enlace.
11. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se selecciona del grupo constituido por 6- [l-ciclobutil-4- [ [ (2R, 6S) -2 , 6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepina- 10-carboxamida; 6- [l-ciclobutil-4- [ [ (2R, 6S) -2 , 6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi- N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepina- 10-carboxamida; 6- [l-ciclobutil-4- [ [ (2R,6S) -2 , 6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi- N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepina- 10-carboxamida ; 6- [l-ciclobutil-4- [ [ (2S) -2- (metoximetil ) -4-morfolinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepina-10-carboxamida; 6- [l-ciclobutil-4- (8-oxa-3-azabiciclo [3.2.1]oct-3-ilcarbonil) -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepina-10-carboxamida ; - 319 - 6- [l-ciclobutil-4- [ [(2R,6S) -2 , 6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-N- [ (dimetilamino) sulfonil] -3-metoxi-7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepina-10-carboxamida; 6- [l-ciclobutil-4- [ [(2R,6S) -2 , 6-dimetil-4-morfolinil] carbonil] -3-metil-lH-pirazol-5-il] - 13 -ciclohexil -N- [ (dimetilatnino) sulfonil] -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepina-10-carboxamida; 6- [l-ciclobutil-3-metil-4- (4 -morfolinilcarbonil ) -1H-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepina-10-carboxamida ; 13-ciclohexil-6- [l-ciclopropil-3 - (1-metiletil) -4- [ [ (3R, 5S) -3,4, 5-trimetil-l-piperazinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepina-10-carboxamida; 6- [l-ciclobutil-4- [ [ (2R) -2- (metoximetil ) -4-morfolinil] carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2, 1-a] [2] benzacepina-10-carboxamida; 6- [l-ciclobutil-4- [ [ (1S,4S) -5-etil-2, 5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2-il] carbonil] - lH-pirazol -5 - il] -13-ciclohexil-N- [ (dimetilamino) sulfonil] -3 -metoxi-7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepina-10-carboxamida; 6- [l-ciclobutil-4- [[(lS,4S)-5-etil-2,5- -320- diazabiciclo [2.2.1] hept-2-il] carbonil] -3-metil-lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-N- [ (dimetilamino) sulfonil] -3-metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepina-10-carboxamida; 6- [l-ciclobutil-4- [ [ (1S, 4S) -5-etil-2 , 5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2-il] carbonil] -3-metil-lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ ( 1-metiletil ) sulfonil] -7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepina-10-carboxamida; 6- [l-ciclobu il-4- [ (3-metil-3 , 8 -diazabiciclo [3.2.1] oct-8 il) carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13 -ciclohexil-N- [ (dimetilamino) sulfonil] -3 -metoxi-7H- indolo [2,1-a] [2] benzacepina-10 -carboxamida ; 6- [l-ciclobutil-3-metil-4- [ (3-metil-3 , 8-diazabiciclo [3.2.1] oct-8-il) carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-N- [ (dimetilamino) sulfonil] -3 -metoxi-7H-indolo [2 , 1-a] [2] benzacepina-10-carboxamida; 6- [l-ciclobutil-3-metil-4- [ (3-metil-3 , 8-diazabiciclo [3.2.1] oct-8-il) carbonil] -lH-pirazol-5-il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepina-10-carboxamida; y 6- [l-ciclobutil-3-metil-4- [ [ (1S, 4S) -5-metil-2, 5-diazabiciclo[2.2.1] hept-2-il] carbonil] - lH-pirazol -5 - il] -13-ciclohexil-3-metoxi-N- [ (1-metiletil) sulfonil] -7H-indolo [2,1-a] [2] benzacepina-10 -carboxamida ; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. - 321 -
12. Una composición caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
13. La composición de conformidad con la reivindicación 1 o 2, caracterizada porque comprende adicionalmente al menos un compuesto adicional que tiene beneficios terapéuticos para VHC en la que el compuesto está seleccionado del grupo constituido por interferones , ciclosporinas , interleucinas , inhibidores de metaloproteasa del VHC, inhibidores de serina proteasa del VHC, inhibidores de polimerasa del VHC, inhibidores de helicasa del VHC, inhibidores de proteína NS4B del VHC, inhibidores de entrada del VHC, inhibidores de ensamblaje del VHC, inhibidores de salida del VHC, inhibidores de proteína NS5A del VHC, inhibidores de proteína NS5B del VHC, e inhibidores de replicón del VHC.
14. Uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, para la manufactura de un medicamento, para tratar infección por hepatitis C que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva al paciente.
15. Uso de al menos un compuesto adicional que tiene beneficios terapéuticos para VHC, de conformidad con la reivindicaión 14, el cual se selecciona del compuesto del grupo constituido por interferones , ciclosporinas, interleucinas, inhibidores de metaloproteasa del VHC, -322- inhibidores de serina proteasa del VHC, inhibidores de polimerasa del VHC, inhibidores de helicasa del VHC, inhibidores de proteína NS4B del VHC, inhibidores de entrada del VHC, inhibidores de ensamblaje del VHC, inhibidores de salida del VHC, inhibidores de proteína NS5A del VHC, inhibidores de proteína NS5B del VHC, e inhibidores de replicón del VHC. -323- RESUMEN DE LA INVENCIÓN La invención comprende compuestos de fórmula I así como composiciones y procedimientos de uso de los compuestos. Los compuestos tienen actividad contra el virus de la hepatitis C (VHC) y son útiles en el tratamiento de aquellos infectados por VHC.
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