MX2010010743A - Analogos de oxitocina. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a compuestos novedosos, composiciones farmacéuticas que comprenden los mismos, el uso de los compuestos para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de condiciones comprometidas de lactancia inter alia, así como también a un método para el tratamiento de las condiciones, en donde se administran los compuestos. Los compuestos son representados por la fórmula general (I), como se define adicionalmente en la especificación.

Description

ANALOGOS DE OXITOCINA Campo de la Invención La presente invención se refiere a compuestos novedosos, composiciones farmacéuticas que comprenden los mismos, uso de los compuestos para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de condiciones comprometidas de lactancia ínter alia así como también a un método para el tratamiento de las condiciones, en donde los compuestos se administran.

Antecedentes de la Invención Los antagonistas peptídicos del receptor de oxitocina incluyen la hormona natural oxitocina, y carbetocina.

Cys— Tyr lie— Gln-Asn-Cys-Pro— Leu— Gly-NH2 (oxitocina) S S La oxitocina es un agente uterotónico potente, utilizado clínicamente para inducir el parto y se ha mostrado que mejora el comienzo y el mantenimiento de la lactancia, Gimpl, G. y colaboradores, Physiol. Rev. 81 (2001) 629-683 y Ruis H. y colaboradores, British Medical Journal 283 (1981) 340-342. La carbetocina (1-desamino-l-carba-2-tirosina (O-metil) -oxitocina) también es un agente uterotónico potente que se utiliza clínicamente para el control de la atonía uterina y sangrado excesivo. La investigación adicional indica que los agonistas de oxitocina son útiles para el tratamiento de la inflamación y el dolor, incluyendo el dolor abdominal y de espalda; disfunción sexual, tanto masculina como femenina; síndrome de intestino irritable (IBS, por sus siglas en inglés), estreñimiento y obstrucción gastrointestinal; autismo, estrés, ansiedad (incluyendo el trastorno de ansiedad) y depresión {Pitman R. y colaboradores , Psychiatry Research, 48 : 101-111; Kirsch P y colaboradores, The Journal of Neuroscience, 25 (49) : 11489-11493) ; pérdida de sangre quirúrgica, el control de la hemorragia posparto, curación de heridas e infección; mastitis y expulsión de la placenta; y osteoporosis . Adicionalmente, los agonistas de oxitocina pueden ser útiles para la diagnosis de tanto el cáncer como la insuficiencia placentaria.

Una desventaja de tanto la oxitocina como la carbetocina es su falta de selectividad sobre los receptores de vasopresina, especialmente el receptor de V2. Durante la administración de la oxitocina, esta desventaja se observa por los efectos colaterales tales como antidiuresis e hiponatremia .

A fin de mejorar las propiedades farmacológicas de la oxitocina, han sido sintetizados análogos de oxitocina. Estos análogos son descritos por Grozonka Z. y colaboradores en J. Med. Chem. 26 (1983) 555-559 y J. Med. Chem. 26 (1983) 1186-1181 y por Engstr0m T. y colaboradores en E. J. Pharmacol. 355 (1998) 203-210. Adicionalmente , los análogos de oxitocina con actividad antagonista en el receptor de oxitocina han sido descritos por Fragiadaki M. y colaboradores en E. J. Med. Che . (2007) 799-806.

La presente invención puede proporcionar compuestos eficaces, selectivos que proporcionan alternativas y/o mejoramientos factibles por ejemplo en el tratamiento de condiciones comprometidas de lactancia.

Descripción de la Invención La presente invención se refiere a los compuestos representados por la fórmula general (I) : en donde : n se selecciona de 0 , 1 y 2 ; P se selecciona de O, 1, 2, 3, 4, 5 y 6; Ri se selecciona de arilo sustituido opcionalmente con por lo menos un sustituyente de OH, F, Cl, Br, alquilo u 0-alquilo; R2 se selecciona de R4, H, alquilo, cicloalquilo, arilo y sistemas de anillos heteroaromaticos de 5 y 6 miembros; R3 se selecciona de H y un enlace covalente a R2, cuando R2 es R4, para formar una estructura de anillo; R4 es una porción de alquileno de 1 a 6 átomos de carbono sustituida con por los menos un sustituyente de O-alquilo, S-alquilo u OH; W y X se seleccionan cada uno independientemente de CH2 y S, pero ambos no pueden ser CH2; alquilo se selecciona de alquilo de cadena recta de 1 a 6 átomos de carbono y alquilo de cadena ramificada de 4 a 8 átomos de carbono y opcionalmente tiene por lo menos un sustituyente de hidroxilo; arilo se selecciona de fenilo y fenilo mono- o poli-sustituido; con la condición de que cuando R2 sea H, p sea 1, R3 sea H, n sea 1 y W y X sean ambos S, Ri no es 4-hidroxifenilo; cicloalquilo se selecciona de cicloalquilo de 3 a 6 átomos de carbono y opcionalmente tiene por lo menos un sustituyente de hidroxilo; y solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos .

La presente invención puede referirse además a los compuestos representados por la fórmula (I) anterior con la condición adicional de que cuando R2 sea H, p sea 0, R3 sea H, n sea 1 y y X sean ambos S, Ri no es 4-hidroxifenilo . De esta manera, la presente invención se puede referir a los compuestos de la fórmula (I) anterior con la condición de que el compuesto no sea [?-ß-Mpa, 7-Sar]OT y/o no sea {desamino [7-glicina] oxitocina} .

Para los propósitos de la presente invención, se utiliza la siguiente terminología.

Alquilo de cadena recta de 1 a 6 átomos de carbono significa que tiene de uno a seis átomos de carbono, incluyendo cualquier número entre los mismos.

Alquilo de cadena ramificada de 4 a 8 átomos de carbono significa que todos los grupos alquilo ramificados que contienen de cuatro a ocho átomos de carbono, incluyendo las configuraciones iso-, sec- y tere-, cuando la expresión no está relacionada con el sitio de enlace de la cadena de alquilo en cuestión.

Cicloalquilo de 3 a 6 átomos de carbono significa un sistema de anillos carbocíclico que contiene de tres a seis átomos de carbono, incluyendo cualquier número entre los mismos. El sistema de anillos puede contener enlaces insaturados entre los átomos de carbono.

Un sistema de anillos heterocíclico de cinco miembros es un sistema de anillos aromático, monocíclico que tiene cinco átomos del anillo, en donde 1, 2, 3 o 4 átomos del anillo se seleccionan independientemente de N, 0 y S. Los sistemas de anillos preferidos se seleccionan de un grupo que consiste de tienilo, furilo, imidazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo y tetrazolilo.

Un sistema de anillos heteroaromático de seis miembros es un sistema de anillos aromático, monociclico que tiene seis átomos del anillo, en donde 1, 2, 3 o 4 átomos del anillo se seleccionan independientemente de N, 0 y S. Los sistemas de anillos preferidos se seleccionan de un grupo que consiste de piridilo.

Arilo significa un grupo aromático seleccionado de fenilo y fenilo mono- o polisustituido .

Las porciones sustituyentes se pueden seleccionar de átomos de flúor (F), cloro (Cl) y bromo (Br) y alquilo, hidroxi (-OH) , alcoxi (-O-alquilo) y alquiltio (-S-alquilo) .

Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables comprenden sales de adición de ácido, por ejemplo una sal formada por la reacción con ácidos de hidrohalógeno tales como ácido clorhídrico y ácidos minerales, tales como ácido sulfúrico, ácido fosfórico y ácido nítrico, así como también ácidos sulfónicos o carboxílicos alifáticos, alicíclicos, aromáticos o heterocíclicos tales como ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido succínico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido ascórbico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido pirúvico, ácido p-hidroxibenzoico, ácido embónico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido hidroxietanosulfónico, ácido halobencensulfónico, ácido trifluoroacético, ácido trifluorometanosulfónico, ácido toluensulfónico y ácido naftalensul fónico .

En modalidades preferidas, n es 1.

En modalidades preferidas, p se selecciona de 1, 2, 3, 4 y 5.

En modalidades preferidas, R1 se selecciona de fenilo, 4-hidroxifenilo, 4-metoxifenilo y 4-etilfenilo .

En modalidades preferidas, R2 se selecciona de etilo, ?-propilo, n-butilo, ciclopropilo, 2-hidroxietilo, 2-metoxietilo, 2-feniletilo, fenilo, bencilo, 2-metilfenilo, 3-metilfenilo, 4-metilfenilo, 4-metoxilfenilo, 4-fluorofenilo, 3, 4-difluorofenilo, 2-tienilo, 2-tetrahidrofurilo, 2-furilo, 2-piridilo y 4-piridilo.

En modalidades preferidas, R3 es H.

En modalidades preferidas, la estructura de anillo se selecciona de ( R) -4-metoxipirrolidinilo, (R)-4-metiltiopirrolidinilo y ( S) -4-hidroxipirrolidinilo .

En modalidades preferidas, W es CH2 y X es S.

En modalidades preferidas, W es S y X es CH2.

En modalidades preferidas, W y X son ambos S.

En la modalidad más preferida, la invención es un compuesto seleccionado de un grupo que consiste de: ?? Adicionalmente , la presente invención se refiere a un compuesto como se expusiera anteriormente para el uso como un producto farmacéutico.

Por consiguiente, la presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se expusiera anteriormente como ingrediente activo en asociación con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.

La composición farmacéutica se puede adaptar para la administración oral, intravenosa, tópica, interperitoneal, nasal, bucal, intraocular, intra-aural, sublingual o subcutánea o para la administración por vía del tracto respiratorio por ejemplo en la forma de un aerosol o un polvo fino suspendido en el aire. De esta manera, la composición puede estar por ejemplo en la forma de tabletas, cápsulas, polvos, microparticulas, gránulos, jarabes, suspensiones, soluciones, parches transdérmicos o supositorios .

Se debe observar que la composición de acuerdo con la presente invención puede incluir opcionalmente dos o más de los compuestos resumidos anteriormente.

La presente composición farmacéutica puede comprender opcionalmente por ejemplo por lo menos un aditivo adicional seleccionado de un agente de desintegración, sustancia aglutinante, lubricante, agente saborizante, conservador, colorante y cualquier mezcla de los mismos. Los ejemplos de este y otros aditivos se encuentran en ^Handbook of Pharmaceutical Excipients' ; Ed. A. H. Kibbe, 3a Ed., American Pharmaceutical Association, EUA and Pharmaceutical Press UK, 2000.

La presente composición farmacéutica se puede adaptar para la administración oral. Puede comprender una preparación acuosa, estéril de los compuestos de la invención que es preferiblemente isotónica con la sangre del receptor. Esta preparación acuosa se puede formular de acuerdo con métodos conocidos utilizando agentes de dispersión o humedecimiento y agente de suspensión adecuados. La formulación de pulverización nasal SYNTOCINONMR (oxitocinas) es ejemplar de una formulación farmacéutica adecuada que es aplicable también para los compuestos inventivos dados a conocer en este documento. El agua, la solución de Ringer y la solución isotónica de cloruro de sodio son diluyentes aceptables, ejemplares. La preparación también puede incluir excipientes tales como fosfato de sodio, ácido cítrico, cloruro de sodio, glicerina, solución de sorbitol, metilparabeno, propilparabeno y clorobutanol.

Además, la presente invención se refiere al uso de un compuesto como se resumiera anteriormente para, o para la manufactura de un medicamento para, el tratamiento de una o más condiciones médicas tales como condiciones comprometidas de lactancia; deterioro de la inducción del parto; condiciones de atonía uterina; sangrado excesivo; inflamación y dolor, incluyendo dolor abdominal y de espalda; disfunción sexual, tanto masculina como femenina; síndrome de intestino irritable (IBS), estreñimiento y obstrucción gastrointestinal; autismo, estrés, ansiedad (incluyendo el trastorno de ansiedad) y depresión; pérdida de sangre quirúrgica, hemorragia posparto, curación de heridas e infección; mastitis y deterioro de expulsión de la placenta; y osteoporosis; y para la diagnosis del cáncer e insuficiencia placentaria. En este documento, el término ansiedad incluye el trastorno de ansiedad. El trastorno de ansiedad incluye sub-indicaciones generalizadas trastorno de ansiedad, trastorno de pánico, agorafobia, fobias, trastorno de ansiedad social, trastorno obsesivo-compulsivo, trastorno de estrés postraumático y ansiedad de separación.

En otra modalidad, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento de condiciones comprometidas de lactancia; deterioro de la inducción del parto; condiciones de atonía uterina; sangrado excesivo; inflamación y dolor, incluyendo dolor abdominal y de espalda; disfunción sexual, tanto masculina como femenina; síndrome de intestino irritable (IBS), estreñimiento y obstrucción gastrointestinal; autismo, estrés, ansiedad (incluyendo el trastorno de ansiedad) y depresión; pérdida de sangre quirúrgica, hemorragia posparto, curación de heridas e infección; mastitis y deterioro de expulsión de la placenta; y osteoporosis; y para la diagnosis del cáncer e insuficiencia placentaria.

La dosificación típica de los compuestos de acuerdo con la presente invención varía dentro de un amplio rango y dependerá de varios factores tales como las necesidades individuales de cada paciente y la ruta de administración. Un médico de experiencia ordinaria en el campo será capaz de optimizar la dosificación a la situación en cuestión.

Por ejemplo, si la composición de la invención es para mejorar el comienzo y mantenimiento de la lactancia (por ejemplo, para la administración intranasal), una dosis típica puede estar en el intervalo de 0.05 a 1.0 µg kg de peso corporal durante cada sesión de bombeo de la mama. Una dosis intranasal se puede dividir en, por ejemplo, 1, 2 o 3 sub-dosis (por ejemplo inhalaciones) , por ejemplo suministradas a una o ambas fosas nasales como sea necesario. La persona experta o el médico pueden considerar variaciones relevantes a este intervalo de dosificación e implementaciones prácticas para adecuarse a la situación en cuestión.

En un ejemplo adicional, la composición de la invención se puede administrar como una infusión intravenosa (iv) , por ejemplo, para el tratamiento de la hemorragia posparto o pérdida de sangre quirúrgica. En este ejemplo, se puede administrar durante un período más prolongado. Una dosificación ejemplar para la administración por medio de una infusión intravenosa es 0.5 - 200 µg/k;g de peso corporal por hora.

En un ejemplo adicional, la composición de la invención puede ser para la administración subcutánea (se), intranasal o bucal, por ejemplo para tratar el trastorno de ansiedad o la depresión. Una dosificación ejemplar para la administración subcutánea (se), intranasal o bucal es 0.5 -1000 de peso corporal. La dosificación puede ser, por ejemplo, para la administración tantas veces al dia como sea necesario, por ejemplo, una o dos veces al dia.

Las abreviaturas utilizadas son: AcOH ácido acético Boc terc-butoxicarbonilo BOP hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi- trisdimetilaminofosfonio Búa ácido butírico Bu butilo - los residuos de alquilo se pueden representar adicionalmente como n (normal, es decir no ramificado), i (iso), s (sec) y t (terciario) CH3CN Acetonitrilo DCC N, N' -diciclohexilcarbodiimida DCM diclorometano DIC N, N' -diisopropilcarbodiimida DIPEA N, N-diisopropiletilamina D F N, N-dimetilformamida -FBzlGly N- ( 4-fluorobencil ) glicina Fmoc 9-fluorenilmetoxicarbonilo Fmoc-Cl cloruro de 9-fluorenilmetoxicarbonilo Fmoc-OSu N- ( 9-fluorenilmetoxicarbonil ) succinimida h hora(s) HBTU hexafluorofosfato de O- (benzotriazol-l-il ) - N, N, N' , N' -tetrametiluronio Hcy Homocisteina HF fluoruro de hidrógeno HOBt 1-hidroxibenzotriazol HPLC cromatografía líquida de alto desempeño IPA alcohol isopropílico MeOH Metanol ???? 4-metilbenzihidrilamina NMM 4-metilmorfolina 4-Pic 4-picolilo ( 4-piridilmetilo) PyBOP hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi- trispirrolidinfosfonito; tBu tere-butilo tBuOH alcohol terc-butílico TEA trietilamina TFA ácido trifluoroacético TIS triisopropilsilano Trt tritilo [ trifenilmetilo, (C6H5)3C-] A menos que se especifique de otra manera se utilizaron L-aminoácidos y se adhiere la terminología convencional de aminoácidos.

Experimental (síntesis) Los derivados de aminoácidos y resinas se adquirieron de proveedores comerciales (Bachem, Novabiochem y Peptides International). El N-Fmoc-ZV- (R2 (CH2) p) glicina, Fmoc-Cys ( t-butoxicarbonilpropil ) -OH y Fmoc-Hcy ( t-butoxicarboniletil ) -OH se sintetizaron de acuerdo con la bibligrafía [¡Vej er y colaboradores, J. Med. Che ., 46 1918 (2003), Prochazka y colaboradores Collect. Czech. Chem. Commun., 57, 1335 (1992) y Wisniewski y colaboradores en el documento WO 03/072597]. Otros productos químicos y solventes fueron provistos de Sigma-Aldrich, Fluka y Acros Organics .

Los compuestos en este documento se sintetizaron por medio de métodos estándar en una química de péptidos de fase sólida utilizando la metodología tanto de Fmoc como de Boc. Todo el acoplamiento de los aminoácidos protegidos con Fmoc fue mediado con DIC/HOBt/DMF y todo el acoplamiento de los aminoácidos protegidos con Boc fue mediado con DIC o DCC en DCM. La remoción del grupo Fmoc se realizó con piperidina al 20% en DMF y la remoción del grupo Boc se realizó en TFA al 50%/DCM con m-cresol al 1% durante 5 y 25 minutos. Los lavados de resina necesarios se realizaron con DCM, IPA, DMF, y MeOH . La neutralización, como fue necesario, se realizó con 2 lavados de resina de TEA al 10%/DCM durante 5 minutos.

A menos que se proporcione de otra manera, todas las reacciones se realizaron a temperatura ambiente. Además de las referencias citadas supra, la siguiente bibliografía de referencia estándar proporciona una guía adicional sobre la configuración experimental general, así como también sobre la disponibilidad del material de inicio y reactivos requeridos : Kates, S. A., Albericio, F. , Eds., Solid Phase Synthesis : A Practical Guide, Marcel Dekker, Nueva York, Basel, 2000; Stewart, J. ., Young, J. D., Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Company, 1984; Bisello y colaboradores, J. Biol. Chem. 1998, 273, 22498- 22505; y Merrifield, J. Ara. Chem. Soc. 1963, 85, 2149- 2154.

La pureza del péptido sintetizado se puede determinar por medio de la HPLC de fase inversa analítica. La integridad estructural de los péptidos se puede confirmar utilizando el análisis de aminoácidos y la espectrometría de masas de electropulverización .

Las metodologías de Fmoc y Boc se utilizaron para sintetizar el dipéptido de la posición 8 (Leu) y posición 9 (Gly) enlazado a la resina.

El derivado de aminoácido en la posición 7 del residuo de aminoácido se introdujo por via de una de dos rutas: ya sea el ácido bromoacético se acopló al dipéptido enlazado a la resina bajo condiciones de DIC/HOBt/DMF y el átomo de bromo se desplazó con (R2 (CH2) p) NH2 proporcionando una N- (R2 (CH2) p) glicina enlazada a la resina; o N-Fmoc-N-(R (CH2) p) glicina o un derivado de Fmoc-pro-OH se acopló al dipéptido enlazado a la resina de acuerdo con la metodología de Fmoc. Todos los acoplamientos de aminoácidos subsecuentes siguieron la metodología de Fmoc a menos que se especifique de otra manera.

El derivado de aminoácido introducido en la posición 6 fue uno de: Fmoc-Cys (Trt) -OH; Fmoc-Hcy(t-butoxicarboniletil) -OH o Fmoc-Cys ( t-butoxicarbonilpropil ) -OH. Los análogos peptídicos donde la posición 6 era Fmoc-Cys (Trt) -OH requirieron el acoplamiento de Mpa (Trt ) -OH a la terminación N del residuo nonapeptídico enlazado a la resina .

Los péptidos sintetizados utilizando un soporte de resina de amida de Rink se escindieron de la resina, junto con cualquier grupo protector lábil al ácido tal como Boc, trifilo y t-butilo, con una solución de TFA/TIS/H20 95/2.5/2.5 (v/v/v) . Los péptidos se sometieron a la ciclización después de la escisión del péptido de la resina. Los péptidos sintetizados utilizando un soporte de resina de MBHA se escindieron de la resina con una solución de HF/anisol 14/1 (v/v) . Los péptidos se sometieron a la ciclización antes de la escisión del péptido de la resina.

La ciclización del nonapéptido lineal a través de la formación de disulfuro (anillos) se logró por medio de la oxidación de péptidos lineales disueltos en TFA al 10% (ac.) con yodo. La ciclización del nonapéptido lineal a través de la formación de enlaces de amida se logró por medio de la mediación con HBTU/DIPEA/DMF o PyBOP/DI PEA/DMF en una dilución alta.

Los péptidos se purificaron por medio de la HPLC preparativa en amortiguadores de fosfato de trietilamonio (ac.) y se desalinizaron con un sistema amortiguador de ácido acético (ac . ) /acetonitrilo . Las fracciones con una pureza que excedían 97% se acumularon y se liofilizaron .

La Tabla 1 lista los compuestos preparados por medio del procedimiento anterior. Un asterisco ?*' marca las modalidades más preferidas.

Tabla 1: Compuestos preparados con la fórmula (I) SEQ W X Ri n R2 P R3 ID No. 1 CH2 s 4-metoxifenilo 1 CH2-(/?j-CH(OCH3)-CH2 - enlace 2 CH2 s 4-metoxifenilo 1 CH2-(f?>CH(SCH3)-CH2 enlace 3 CH2 s 4-etilfenilo 1 CH2-(7?j-CH(OCH3)-CH2 - enlace 4 S CH2 4-etilfenilo 1 CH2-(S)-CH(OH)-CH2 - enlace CH2 S 4-metoxifenilo 1 H 0 H CH2 S 4-etilfenilo 1 CH2-(S)-CH(OH)-CH2 . enlace S S 4-hidroxifenilo 1 H 4 H S S 4-hidroxifenilo 1 fenilo 2 H S S 4- idroxifenilo 1 2-furilo 1 H * S S 4-hidroxifenilo 1 4-piridilo 1 H S S 4-hidroxifenilo 1 3,4-difluorofenilo 1 H S S 4-hidroxifenilo 1 3-metilfenilo 1 H S S 4-hidroxifenilo 1 2-metilfenilo • 1 H S s 4- idroxifenilo 1 H 5 H S s 4-hidroxifenilo 1 4-metilfenilo 2 H S s 4-hidroxifenilo 1 2-tienilo 1 H S s 4-hidroxifenilo 1 4-piridilo 2 H * S s 4-hidroxifenilo 1 2-piridilo 2 H S s 4-hidroxifenilo 1 4-fluorofenilo 1 H S s 4-hidroxifenilo metoxi 2 H S s 4- idroxifenilo 1 ciclopropilo 1 H S s 4-hidroxifenilo 1 4-metoxifenilo 1 H S s 4-hidroxifenilo 1 4-metilfenilo 1 H S s 4- idroxifenilo 1 2-tienilo 2 H S s 4-hidroxifenilo 1 fenilo 3 H S s 4-hidroxifenilo 1 2-tetra idrofurilo 1 H S s 4-hidroxifenilo 1 2-tetrahidrofurilo 1 H S CH2 fenilo 1 metoxi 2 H CH2 s fenilo 1 metoxi 2 H CH2 S 4-hidroxifenilo 1 metoxi 2 H S CH2 fenilo 1 2-tienilo 1 H S CH2 4-hidroxifenilo 1 fenilo 1 H S CH2 4-hidroxifenilo 1 fenilo 2 H * S CH2 fenilo 1 fenilo 1 H CH2 S 4-hidroxifenilo 1 H 4 H S CH2 fenilo 1 OH 3 H CH2 S fenilo 1 H 3 H S CH2 fenilo 1 H 3 H CH2 S fenilo H 5 H S CH2 fenilo i H 5 H CH2 S fenilo 1 H 4 H S CH2 fenilo 1 H 4 H CH2 S 4-hidroxifenilo 1 3,4-difluorofenilo 1 H S CH2 4-hidroxifenilo i 3-metilfenilo 1 H S CH2 4-hidroxifenilo 1 4-fluorofenilo 1 H CH2 S 4-hidroxifenilo 1 fenilo 1 H * S CH2 fenilo 1 4-fluorofenilo 1 H CH2 S 4-hidroxifenilo 1 2-tienilo 1 H * CH2 S 4-hidroxifenilo 1 4-fluorofenilo 1 H CH2 S 4-hidroxifenilo 1 3-metilfenilo 1 H * CH2 S 4-hidroxifenilo fenilo 2 H * S CH2 fenilo 1 fenilo 2 H S CH2 fenilo 1 3-metilfenilo 1 H CH2 S 4-hidroxifenilo 1 OH 3 H Los siguientes ejemplos detallados se proporcionan para ilustrar adicionalmente la síntesis: En todas las síntesis la HPLC analítica se realizó en una Cromatografía Líquida waters d??"11 utilizando una columna Vidac^ C18, 5 µp?, 4.6 x 250 mm a una velocidad de flujo de 2 ml/minuto. La HPLC preparativa se realizó en una Cromatografía Líquida Waters 2000™* utilizando un cartucho PrePak" 47 x 300 mm a una velocidad de flujo de 100 ml/minuto. El análisis final del compuesto se realizó en una Cromatografía Líquida 1100 Agilent"11 utilizando una columna Vydac" C18, 5 µ?a, 2.1 x 250 mm a una velocidad de flujo de 0.3 ml/minuto. Los espectros de masas se ¦ ' MR registraron en un espectrómetro Fmnigan MAT .

Compuesto 49; carba-1- [4-FBzlGly7] dOT: Los derivados de aminoácidos utilizados fueron Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Cys ( t-butoxicarbonilpropil) -OH, Fmoc-Asn (Trt) -OH, Fmoc-Gln (Trt ) -OH, Fmoc-Ile-OH y Boc-Tyr(tBu)-OH (Peptides International) . El Fmoc-Cys(t-butoxicarbonilpropil) -OH se sintetizó como se definiera anteriormente .

La resina de péptido protegida completamente se sintetizó manualmente, iniciando a partir de 1.45 g (0.87 mmol) de la resina AM de Amida de Rink (malla 200-400, Novabiochem) . Se realizaron acoplamientos individuales mediados por DIC/HOBt/DMF con un exceso de 3 veces de los derivados de aminoácidos Gly y Leu. El residuo de N-(4-fluorobencil ) glicina se introdujo con un exceso de 4 veces de BrCH2C02H/DIC/HOBt en DMF y la sustitución de bromo subsecuente con un exceso de 10 veces de amina de 4-fluorobencilo en DMF. Se realizó un acoplamiento mediado por DIC/DCM con un exceso de 4 veces de Fmoc-Cys ( t-butoxicarbonilpropil) -OH. Se realizaron acoplamientos individuales, subsecuentes mediados por DIC/HOBt/DMF con un exceso de 3 veces de los derivados de aminoácidos Asn, Gln, lie y Tyr. Los grupos Fmoc se retiraron con piperidina al 20% en DMF. Con la terminación de la síntesis de fase sólida, la resina se trató con una solución de TFA/TIS/H2O 96/2.5/1.5 (v/v/v) (50 mi) durante 1.5 horas y filtró el producto filtrado se concentró ín vacuo y el péptido lineal crudo se precipitó con éter dietilico. El producto precipitado en DMF (300 mi) se agregó en 3 porciones (3 x 100 mi) a una solución agitada vigorosamente de DIPEA (1 mi) en DMF (100 mi) . HBTU (150 mg) en DMF (5 mi) se agregó a la mezcla de reacción después de la adición de cada porción de 100 mi de solución de péptido; el pH de la solución de reacción se mantuvo a pH 9 por medio de la adición de DIPEA puro, como se requirió. La reacción se supervisó por medio de la HPLC analítica. La solución de reacción se concentró in vacuo y el residuo se disolvió en AcOH/CH3CN/H20. La mezcla se cargó en una columna de HPLC y se purificó utilizando un amortiguador de fosfato de trietilamonio con pH 5.2. El compuesto se eluyó con un gradiente de acetonitrilo . Las fracciones con una pureza que excedía 97% se acumularon, se diluyeron con agua (2 volúmenes) y se cargaron en una columna pre-equilibrada con AcOH al 2% (ac). El compuesto deseado se eluyó con un gradiente rápido (3%/minuto) de CH3CN. Las fracciones que contenían el producto deseado se acumularon .y se liofilizaron. Se obtuvieron 4.34 mg (rendimiento de ~40%, con base en la carga de la resina de inicio y asumiendo un contenido de péptido de 85%) del polvo amorfo color blanco. HPLC: Rt = 19.4 minutos, gradiente: 5% de B durante 0.5 minutos, 5->30% de B en 0.5 minutos, 30?50% de B durante 20 minutos y 100% de B durante 5 minutos, t = 40°C, solvente A TFA al 0.01% (ac), solvente B CH3CN al 70%, TFA al 0.01% (ac); Pureza: 99.3%; S (M+H+) : esperado 1042.4, observado 1042.5.

Lo siguiente es una síntesis a gran escala ejemplar (es decir una prueba a mayor escala) del Compuesto 49; carba-1- [4-FBzlGly7] dOT: Los derivados de aminoácidos utilizados fueron Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-4-FBzlGly-OH, Fmoc-Cys(t-butoxicarbonilpropil) -OH, Fmoc-Asn (Trt) -OH, Fmoc-Gln (Trt) -OH, Fmoc-Ile-OH y Boc-Tyr ( tBu) -OH (Peptides International).

El Fmoc-4-FBzlGly-OH y el Fmoc-Cys ( t-butoxicarbonilpropil) -OH se sintetizaron como se definiera anteriormente. El péptido se sintetizó por medio de acoplamientos individuales mediados por DIC/HOBt/DMF con un exceso de 3 veces de derivado de aminoácido. La síntesis restante y la caracterización del compuesto 49 fue seguida como se proporcionó anteriormente. Se obtuvieron 434 mg (rendimiento del ~40%, con base en la carga de la resina de inicio y asumiendo un contenido de péptido del 85%) de polvo amorfo color blanco.

Compuesto 10; [4-PicGly7] dOT : Los derivados de aminoácidos utilizados fueron Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Cys (Trt ) -OH, Fmoc-Asn (Trt ) -OH, Fmoc-Gln (Trt) -OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr ( tBu) -OH y Mpa(Trt)-OH (Peptides International). La resina de péptido completamente protegida se sintetizó manualmente, iniciando a partir de 1.33 g (0.65 mmol) de resina AM de Rink (malla 200-400, Novabiochem) . Se realizaron acoplamientos individuales mediados por DIC/HOBt/DMF con un exceso de 3 veces de derivados de aminoácidos Gly y Leu. El residuo de N- (4-picolil) glicina se introdujo con un exceso de 4 veces de BrCH2C02H/DIC/HOBt en DMF y la sustitución de bromo subsecuente con un exceso de 10 veces de 4-picolil-amina en DMF. El acoplamiento mediado por DIC/DCM con un exceso de 4 veces de Fmoc-Cys (Trt ) -OH y los acoplamientos individuales mediados por DIC/HOBt/DMF con un exceso de 3 veces de derivados de aminoácidos Asn, Gln, lie, Tyr y Mpa. Los grupos Fmoc se retiraron con piperidina al 20% en DMF. Con la terminación de la síntesis de fase sólida, la resina se trató con una solución de TFA/TIS/H20 96/2/2 (v/v/v) (50 mi) durante 1.5 horas y se filtró. El producto filtrado se concentró in vacuo y el péptido lineal crudo se precipitó con éter dietílico. El producto precipitado se disolvió en TFA puro (50 mi) , se vertió en una solución de acetonitrilo acuoso al 5% (600 mi) agitada magnéticamente y el péptido se oxido por medio de la adición de I2 0.1 M en metanol hasta que persistió un color amarillo. El exceso de yodo se redujo con ácido ascórbico sólido (Sigma-Aldrich) y el pH de la solución se ajustó a aproximadamente 4 por medio de la adición de amoníaco concentrado (ac). La mezcla se cargó en una columna de HPLC y se purificó utilizando un amortiguador de fosfato de trietilamonio con pH 5.2. El compuesto se eluyó con un gradiente de acetonitrilo. Las fracciones con una pureza que excedía 97% se acumularon, se diluyeron con agua (2 volúmenes) y se cargaron en una columna pre-equilibrada con AcOH al 2% (ac). El compuesto deseado se eluyó con un gradiente rápido (3%/minuto) de acetonitrilo. Las fracciones que contenían el producto deseado se acumularon y se liofilizaron . Se obtuvo 348.7 mg (rendimiento del ~44%, con base en la carga de la resina de inicio y asumiendo un contenido de péptido del 85%) de un polvo amorfo color blanco. HPLC: Rt = 21.7 minutos, gradiente: 5% de B durante 0.5 minutos, 5—>10% de B en 0.5 minutos, 10?30% de B durante 20 minutos y 100% de B durante 5 minutos, t = 40°C, solvente A TFA al 0.01% (ac), solvente B CH3CN al 70%, TFA al 0.01% (ac); Pureza: 99.9%; MS (M+H+) : esperado 1043.4, observado 1043.4.

Compuesto 29; carba-6- [ Phe2, MeOEtGly7] dO : Los derivados de aminoácidos utilizados fueron Boc-Gly-OH y Boc-Leu-OH (Bachem) , Fmoc-Hcy(t-butoxicarboniletil) -OH, Fmoc-Asn (Trt ) -OH, Fmoc-Gln (Trt ) -OH, Fmoc-Ile-OH y Boc-Phe-OH (Peptides International) . El Fmoc-Hcy ( t-butoxicarboniletil ) -OH se sintetizó como se definiera anteriormente .

La resina de péptido completamente protegida se sintetizó manualmente iniciando a partir de 1.33 g de resina de MBHA (0.94 mmol, Novabiochem) . La resina se neutralizó con TEA al 10% en DCM. Se realizaron acoplamientos individuales mediados por DIC/DCM con un exceso de 1.7 veces de los aminoácidos Boc-Gly-OH y Boc-Leu-OH. El residuo de N- (2-metoxietil) glicina se introdujo con un exceso de 3.6 veces de BrCH2C02H/DIC/HOBt en DMF y la sustitución subsecuente del bromo con un exceso de 7 veces de la amina de 2-metoxietilo y un exceso de 4 veces de DIPEA en DMF (10 mi); la reacción se agitó durante 5 horas. Se realizó el acoplamiento individual mediado por DIC/DCM con un exceso de 4 veces de Fmoc-Hcy ( t-butoxicarboniletil ) -OH y acoplamientos individuales mediados por DIC/HOBt/DMF con un exceso de 3 veces de derivados de aminoácidos Asn y Gln. Los dos acoplamientos individuales, finales con Fmoc-Ile-OH y Boc-Phe-OH se realizaron con DIC/DCM para proporcionar el péptido lineal enlazado a la resina, protegido, deseado. Los grupos Fmoc se retiraron con piperidina al 20% en DMF. La resina se trató con TFA/H20/TIS 95/3/2 (v/v/v) durante 2 horas para retirar los grupos tritilo, Boc y t-butilo. BOP (4 eq.) y DIPEA (10 eq. ) se agregaron a una suspensión agitada de la resina en DMF (10 mL) ; después de 2 horas se agregó PyBOP (2 eq. ) y DIPEA (5 eq. ) . El péptido se escindió de la resina por medio del uso de 70 mi de HF anhidro que contenia 5 mi de anisol a 0°C durante 90 minutos. El HF se retiró in vacuo y el péptido lineal crudo se lavó con éter dietilico (300 mi) . El péptido se disolvió en AcOH/CH3CN/H20 1/2/7 (v/v/v) (400 mi). La mezcla resultante se cargó directamente en una columna de HPLC y se purificó utilizando un amortiguador de fosfato de trietilamonio en pH 2.3. El compuesto se eluyó con un gradiente de acetonitrilo . Las fracciones con una pureza que excedía 97% se acumularon, se diluyeron con agua (2 volúmenes) y se cargaron sobre una columna pre-equilibrada con ácido acético al 2% (ac). El compuesto deseado se eluyó con un gradiente de AcOH al 1%/CH3CN. Las fracciones que contenían el producto deseado se acumularon y se liofilizaron . Se obtuvo 292.7 mg (rendimiento del ~27%, con base en la carga de la resina de inicio y asumiendo un contenido de péptido del 85%) de un polvo amorfo color blanco. HPLC: Rt = 16.7 minutos, gradiente: 5% de B durante 0.5 minutos, 5?30% de B en 0.5 minutos, 30?50% de B durante 20 minutos y 100% de B durante 5 minutos, t = 40°C, solvente A TFA al 0.01% (ac), solvente B CH3CN al 70%, TFA al 0.01% (ac); Pureza: 100.0%; MS (M+H+) : esperado 976.5, observado 976.3.

Los otros compuestos se prepararon por medio de la variación análoga de estos procedimientos sintéticos.

Experimental (prueba biológica) Ensayos de receptores in vitro La actividad agonista de los compuestos sobre el receptor de hOT se determinó en un ensayo de genes reporteros transcripcionales por medio de la transfección de manera transitoria de un ADN de expresión del receptor de hOT enana línea de células de Ovario de Hámster Chino (CHO por sus siglas en inglés) conjuntamente con un ADN reportero que contenía elementos promotores sensibles al calcio intracelular que regulaba la expresión de luciferasa de luciérnaga. Véase Boss, V., Talpade, D.J., Murphy, T.J. J. Biol. Chem. 1996, 3 de Mayo; 271(18), 10429-10432 para una guia adicional sobre este ensayo. Las células se expusieron a diluciones en serie de los compuestos diluidos 10 veces por dosis durante 5 horas, seguido por la lisis de células, determinación de la actividad de luciferasa y determinación de las eficacias del compuesto y valores EC50 a través de la regresión no lineal. La oxitocina (OT) se utilizó como un control interno en cada experimento y los compuestos se sometieron a prueba en por lo menos tres experimentos independientes, Para determinar la selectividad, los compuestos se sometieron a prueba además en ensayos de genes reporteros transcripcionales basados en luciferasa que expresaban el receptor de vasopresina humana (hV2) .

Para propósitos comparativos adicionales, la carbetocina también se utilizó como un compuesto de referencia .

Los resultados de los ensayos in vivo se representan en la tabla 2 infra. El valor EC50 proporcionado es el promedio geométrico expresado en nanomol/1 (nM) . Los valores de selectividad se proporcionan como relaciones de EC50.

Tabla 2: Resultados de la prueba biológica Compuesto Selectividad de receptor de hOT EC50 receptor de hV2 EC50 Sometido a Prueba hV2/hOT 1 0.980 688.22 702 2 0.817 671.12 822 3 0.207 446.76 2158 4 0.033 17.70 544 5 0.370 448.67 121 1 6 0.064 39.95 629 7 0.062 34.78 558 8 0.1 16 65.55 565 9 0.114 61.79 544 10 0.464 384.04 828 11 0.026 58.54 2217 12 0.01 1 29.78 2607 13 0.121 67.81 562 14 0.005 77.1 1 15124 15 0.040 101.77 2533 16 0.009 57.29 6067 17 0.023 47.27 2014 18 0.115 180.32 1561 19 0.012 82.03 6607 20 0.030 80.29 2659 21 0.006 9.87 1729 22 0.063 77.83 1245 23 0.148 83.55 565 24 0.016 86.10 5469 25 0.058 159.44 2736 26 0.072 226.14 3160 27 0.189 238.02 1259 28 0.847 1264.33 1493 29 0.957 1 100.45 1 149 30 0.109 69.68 639 31 0.297 760.80 2564 32 0.051 35.83 705 33 0.046 100.71 2203 34 0.405 718.38 1774 35 0.122 72.66 597 36 0.859 2551.62 2970 37 0.228 441.72 1941 38 0.271 227.03 839 39 0.254 2058.97 81 15 40 0.069 1024.67 14945 41 0.227 1999.84 8793 42 0.086 1192.93 13901 43 0.104 123.61 1187 44 0.023 55.14 2404 45 0.036 140.24 3914 46 0.039 140.36 3632 47 0.228 1415.28 6221 48 0.089 253.03 2854 49 0.08 328.57 4293 50 0.077 212.57 2761 51 0.045 161.91 3614 52 0.779 3005.36 3860 53 0.562 1613.76 2870 54 0.013 496.61 37735 oxitocina 2.34 7.33 3 carbetocina 0.70 171.98 244 Los resultados anteriores indican que los compuestos de los Ejemplos están dentro del alcance de la invención y pueden ser útiles por ejemplo en el tratamiento seguro y eficaz de seres humanos a fin de inducir el parto, controlar la atonía uterina, promover y mantener la lactancia, etcétera.

El alcance de la presente invención se define adicionalmente en las siguientes reivindicaciones.

Claims (18)

REIVINDICACIONES

1. compuesto, caracterizado porque tiene fórmula (I) : (I) 10 en donde: n se selecciona de 0, 1 y 2 ; p se selecciona de 0, 1, 2, 3, 4, 5 y 6; RL se selecciona de arilo sustituido opcionalmente con por lo menos un sustituyente de OH, F, Cl, Br, alquilo u O-alquilo; 2 se selecciona de R4, H, alquilo, cicloalquilo, arilo y sistemas de anillos 15 fieteroaromáticos de 5 y 6 miembros; R3 se selecciona de H y ¦5 un enlace covalente para R2 , cuando R2 es R4 , para formar una estructura de anillo; R4 es una porción de alquileno de 1 a 6 átomos de carbono sustituida con por los menos un sustituyente de O-alquilo, S-alquilo u OH; y X se 20 seleccionan cada uno independientemente de CH2 y S, pero ambos no pueden ser CH2; alquilo se selecciona de alquilo de cadena recta de 1 a 6 átomos de carbono y alquilo de cadena ramificada de 4 a 8 átomos de carbono y opcionalmente tiene por lo menos un sustituyente de hidroxilo; arilo se selecciona de fenilo y fenilo mono- o poli-sustituido; con la condición de que cuando R2 sea H, p sea 0 o 1 , R3 sea H o CH3 , n sea 1 y W y X sean ambos S , entonces Ri no es -hidroxifenilo; y solvatos y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque los sistemas aromáticos son sustituidos opcionalmente con por lo menos un sustituyente de alquilo, O-alquilo, OH, F, Cl o Br.

3. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-2, caracterizado porque n es 1.

4. . Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque p se selecciona de O, 1, 2, 3, 4 y 5.

5. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque Ri se selecciona de cualquiera de fenilo, 4 -hidroxifenilo, 4-metoxifenilo y 4-etilfenilo.

6. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque R2 se selecciona de cualquiera de etilo, n-propilo, rz-butilo, ciclopropilo, 2-hidroxietilo, 2 -metoxietilo, 2- feniletilo, fenilo, bencilo, 2-metilfenilo, 3-metilfenilo, 4-metilfenilo, 4 -metoxilfenilo, 4 -fluorofenilo, 3,4-difluorofenilo, 2-tienilo, 2-tetrahidrofurilo, 2-furilo, 2-piridilo y 4-piridilo.

7. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizado porque R3 es H. o

8. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizado porque R3 es un enlace covalente y la estructura de anillo se selecciona de (R) -4-metoxipirrolidinilo, (R) -4-metiltiopirrolidinilo y (S) -4 -hidroxipirrolidinilo .

9. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, caracterizado porque W es CH2 y X es S.

10. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, caracterizado porque W es S y X es CH2.

11. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, caracterizado porque W y X son ambos S .

12. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 (o 2) , caracterizado porque R2 se selecciona de cicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo y sistemas de anillos heteroaromáticos de 5 y 6 miembros .

13. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto se selecciona de un grupo que consiste de: ??

14. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-13 para el uso como una composición farmacéutica.

15. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-13 como ingrediente activo en asociación con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.

16. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-13, caracterizado porque es para el tratamiento de una o más de las condiciones comprometidas de lactancia, deterioro de la inducción del parto, condiciones de atonía uterina, sangrado excesivo, inflamación, dolor, dolor abdominal, dolor de espalda, disfunción sexual masculina y femenina, síndrome de intestino irritable (IBS) , estreñimiento, obstrucción gastrointestinal, autismo, estrés, ansiedad, depresión, trastorno de ansiedad, pérdida de sangre quirúrgica, hemorragia posparto, curación de heridas, infección, mastitis, deterioro de expulsión de la placenta, osteoporosis y/o para la diagnosis del cáncer e insuficiencia placentaria.

17. El uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-13 para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de las condiciones comprometidas de lactancia, deterioro de la inducción del parto, condiciones de atonía uterina, sangrado excesivo, inflamación, dolor, dolor abdominal,, dolor de espalda, disfunción sexual masculina y femenina, síndrome de intestino irritable (IBS) , estreñimiento, obstrucción gastrointestinal, autismo, estrés, ansiedad, depresión, trastorno de ansiedad, pérdida de sangre quirúrgica, hemorragia posparto, curación de heridas, infección, mastitis, deterioro de expulsión de la placenta, osteoporosis y para la diagnosis del cáncer e insuficiencia placentaria .

18. Un método para el tratamiento de las condiciones comprometidas de lactancia, deterioro de la inducción del parto, condiciones de atonía uterina, sangrado excesivo, inflamación, dolor, dolor abdominal, dolor de espalda, disfunción sexual masculina y femenina, síndrome de intestino irritable (IBS) , estreñimiento, obstrucción gastrointestinal, autismo, estrés, ansiedad, depresión, trastorno de ansiedad, pérdida de sangre quirúrgica, hemorragia posparto, curación de heridas, infección, mastitis, deterioro de expulsión de la placenta, osteoporosis y para la diagnosis del cáncer e insuficiencia placentaria, caracterizado porque el método comprende la administración a un paciente animal, incluyendo un paciente humano, de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-13.