JP5539310B2

JP5539310B2 - オキシトシン類似体

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Publication number: JP5539310B2
Application number: JP2011502454A
Authority: JP
Inventors: アラガーサミー，スーダー; ガリアン，ロバート; ウィスニウスキー，カジミェシュ; シュテインガルト，クラウディオ
Original assignee: フェリングベスローテンフェンノートシャップ
Priority date: 2008-03-31
Filing date: 2009-03-30
Publication date: 2014-07-02
Anticipated expiration: 2029-03-30
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Description

本発明は、新規化合物、同化合物を含む医薬組成物、特に損なわれた乳汁分泌状態（ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄｌａｃｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）の治療用薬剤を製造するための前記化合物の使用、ならびに前記化合物を投与する前記状態の治療方法に関する。

ペプチド性オキシトシン受容体アゴニストには、天然のホルモンであるオキシトシンおよびカルベトシンが含まれる。

オキシトシンは、分娩を誘発するために臨床的に使用される強力な子宮収縮剤であり、乳汁分泌の開始および維持を増強することが分かってきている（Ｇｉｍｐｌ，Ｇ．ら、Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．８１（２００１）６２９〜６８３およびＲｕｉｓＨ．ら、ＢｒｉｔｉｓｈＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ２８３（１９８１）３４０〜３４２）。カルベトシン（１−デアミノ−１−カルバ−２−チロシン（Ｏ−メチル）−オキシトシン）もまた、子宮弛緩および出血過多を制御するために臨床的に使用される強力な子宮収縮剤である。さらなる研究により、オキシトシンアゴニストは、腹痛および背部痛を含む炎症および疼痛、男性および女性の両方の性機能障害、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、便秘および胃腸管閉塞、自閉症、ストレス、不安（不安障害を含む）およびうつ病（ＰｉｔｍａｎＲ．ら、ＰｓｙｃｈｉａｔｒｙＲｅｓｅａｒｃｈ、４８：１０７〜１１７；ＫｉｒｓｃｈＰら、ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、２５（４９）：１１４８９〜１１４９３）、外科失血、分娩後出血の制御、創傷治癒および感染症、乳腺炎および胎盤娩出、ならびに骨粗しょう症の治療に有用であることが示されている。さらに、オキシトシンアゴニストは、癌および胎盤機能不全の両方の診断に有用となりうる。

オキシトシンおよびカルベトシンの両方の短所は、バソプレシン受容体、特にＶ_２受容体に対する選択性が欠如していることである。この短所は、オキシトシンの投与中に、抗利尿および低ナトリウム血症のような副作用によって観察される。

オキシトシンの薬理学的特性を改善するため、オキシトシンの類似体が合成されてきた。このような類似体は、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２６（１９８３）５５５〜５５９およびＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２６（１９８３）１７８６〜１７８７においてＧｒｏｚｏｎｋａＺ．ら、ならびにＥ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３５５（１９９８）２０３〜２１０においてＥｎｇｓｔｒｏｍＴ．らによって説明されている。さらに、オキシトシン受容体にアンタゴニスト活性をもつオキシトシン類似体が、Ｅ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００７）７９９〜８０６においてＦｒａｇｉａｄａｋｉＭ．らによって説明されている。

本発明は、例えば損なわれた乳汁分泌状態の治療において、代替および／または改善を実行可能にする、選択的で効果的な化合物を提供しうる。

本発明は、一般式（Ｉ）によって表される化合物、ならびにその溶媒和物および薬学的に許容される塩に関する：

（式中、ｎは、０、１および２から選択され、ｐは、０、１、２、３、４、５および６から選択され、Ｒ_１は、少なくとも１つのＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、アルキルまたはＯ−アルキル置換基で置換されていてもよいアリールから選択され、Ｒ_２は、Ｒ_４、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリールならびに５員および６員のヘテロ芳香環系から選択され、Ｒ_３は、Ｈ、およびＲ_２がＲ_４の場合に、環構造を形成するためのＲ_２の共有結合から選択され、Ｒ_４は、少なくとも１つのＯ−アルキル、Ｓ−アルキルまたはＯＨ置換基で置換されたＣ_１〜６アルキレン部分であり、ＷおよびＸは、それぞれ独立にＣＨ_２およびＳから選択されるが、両方がＣＨ_２ではないこともあり、アルキルは、Ｃ_１〜６直鎖アルキルおよびＣ_４〜８分岐鎖アルキルから選択され、少なくとも１つのヒドロキシル置換基を有してもよく、アリールは、フェニルおよびモノまたはポリ置換フェニルから選択され、但し、Ｒ_２がＨ、ｐが１、Ｒ_３がＨ、ｎが１であってＷおよびＸが両方ともＳであるとき、Ｒ_１は４−ヒドロキシフェニルではなく、シクロアルキルは、Ｃ_３〜６シクロアルキルから選択され、少なくとも１つのヒドロキシル置換基を有してもよい）。

本発明はさらに、上記式（Ｉ）によって表され、但し、Ｒ_２がＨ、ｐが０、Ｒ_３がＨ、ｎが１であってＷおよびＸが両方ともＳであるとき、Ｒ_１が４−ヒドロキシフェニルではない化合物に関しうる。したがって、本発明は、上記式（Ｉ）の化合物であるが、但し、［１−β−Ｍｐａ、７−Ｓａｒ］ＯＴではなく、および／または｛デアミノ〔７−グリシン〕オキシトシン｝ではない化合物に関しうる。

本発明の目的のために、以下の用語が使用される。

Ｃ_１〜６直鎖アルキルは、その間の任意の数を含む１〜６の炭素原子を有することを示す。

Ｃ_４〜８分岐鎖アルキルは、ｉｓｏ、ｓｅｃおよびｔｅｒｔ立体配置を含む、４〜８の炭素原子を含むすべての分岐アルキル基を示すが、これは前記表現は問題となるアルキル鎖の結合部位と関係しないからである。

Ｃ_３〜６シクロアルキルは、その間の任意の数を含む３〜６の炭素原子を含む炭素環系を示す。この環系は、炭素原子の間に不飽和結合を含んでもよい。

５員へテロ芳香環系は、５つの環原子を有する単環芳香環系であって、１、２、３または４つの環原子は独立にＮ、ＯおよびＳから選択される。好ましい環系は、チエニル、フリル、イミダゾリル、チアゾリル、チアジアゾリルおよびテトラゾリルからなる群から選択される。

６員へテロ芳香環系は、６つの環原子を有する単環芳香環系であって、１、２、３または４つの環原子は独立にＮ、ＯおよびＳから選択される。好ましい環系は、ピリジルからなる群から選択される。

アリールは、フェニルおよびモノまたはポリ置換フェニルから選択される芳香族基を示す。

置換基部分は、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）および臭素（Ｂｒ）原子ならびにアルキル、ヒドロキシ（−ＯＨ）、アルコキシ（−Ｏ−アルキル）およびアルキルチオ（−Ｓ−アルキル）から選択されてもよい。

薬学的に許容される塩の例には、酸付加塩、例えば、塩酸などのヒドロハロゲン酸と、硫酸、リン酸および硝酸などの鉱酸、同様に蟻酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、パモ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、ハロベンゼンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トルエンスルホン酸およびナフタレンスルホン酸などの脂肪族、脂環式、芳香族またはヘテロ環式のスルホン酸またはカルボン酸との反応によって形成される塩が含まれる。

好ましい実施形態において、ｎは１である。

好ましい実施形態において、ｐは１、２、３、４および５から選択される。

好ましい実施形態において、Ｒ_１はフェニル、４−ヒドロキシフェニル、４−メトキシフェニルおよび４−エチルフェニルから選択される。

好ましい実施形態において、Ｒ_２はエチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、シクロプロピル、２−ヒドロキシエチル、２−メトキシエチル、２−フェニルエチル、フェニル、ベンジル、２−メチルフェニル、３−メチルフェニル、４−メチルフェニル、４−メトキシフェニル、４−フルオロフェニル、３，４−ジフルオロフェニル、２−チエニル、２−テトラヒドロフリル、２−フリル、２−ピリジルおよび４−ピリジルから選択される。

好ましい実施形態において、Ｒ_３はＨである。

好ましい実施形態において、前記環構造は（Ｒ）−４−メトキシピロリジニル、（Ｒ）−４−メチルチオピロリジニルおよび（Ｓ）−４−ヒドロキシピロリジニルから選択される。

好ましい実施形態において、ＷはＣＨ_２であり、ＸはＳである。

好ましい実施形態において、ＷはＳであり、ＸはＣＨ_２である。

好ましい実施形態において、ＷおよびＸは両方ともＳである。

最も好ましい実施形態において、本発明は、以下の式からなる群から選択される化合物である。

さらに、本発明は、医薬品として使用するための、上に説明された化合物に関する。

したがって、本発明はまた、薬学的に許容される補助剤、希釈液または担体を伴った有効成分として、上に説明された化合物を含む医薬組成物に関する。

本医薬組成物は、経口、静脈内、局所、腹腔内、経鼻、口腔（ｂｕｃｃａｌ）、眼内、耳内、舌下もしくは皮下投与、または例えば、エアロゾルもしくは空気懸濁した微粉末の形状での呼吸器を経由する投与に適合しうる。したがって、本組成物は、例えば、錠剤、カプセル、粉末、微粒子、顆粒、シロップ剤、懸濁液、溶液、経皮貼付剤または坐薬の形状とすることができる。

本発明による組成物は、上記概説した化合物を２種以上、任意選択的に含んでもよいことに留意すべきである。

本医薬組成物は、例えば、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、香味剤、保存剤、着色剤およびそれらの任意の混合物から選択される少なくとも１種のさらなる添加剤を任意選択的に含んでもよい。このようなおよび他の添加剤の例は、「ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」；Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ編、第３版、ＡｍｅｒｉｃａｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、ＵＳＡおよびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰｒｅｓｓＵＫ、２０００中に見られる。

本医薬組成物は、経鼻投与に適合しうる。それは、好ましくはレシピエントの血液と等張である本発明の化合物の無菌水性製剤を含んでもよい。この水性製剤は、適当な分散剤または湿潤剤、および懸濁化剤を使用した既知の方法によって処方されうる。点鼻スプレー製剤ＳＹＮＴＯＣＩＮＯＮ（登録商標）（オキシトシン）は、本明細書に開示されている本発明の化合物にも適用可能な適当な医薬製剤の代表的なものである。水、リンガー液および等張食塩水は、代表的な許容される希釈液である。製剤はまたリン酸ナトリウム、クエン酸、塩化ナトリウム、グリセリン、ソルビトール溶液、メチルパラベン、プロピルパラベンおよびクロロブタノールなどの賦形剤を含んでもよい。

さらに、本発明は、損なわれた乳汁分泌状態、分娩誘発障害、子宮弛緩状態、出血過多、腹痛および背部痛を含む炎症および疼痛、男性および女性の両方の性機能障害、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、便秘および胃腸管閉塞、自閉症、ストレス、不安（不安障害を含む）およびうつ病、外科失血、分娩後出血、創傷治癒および感染症、乳腺炎および胎盤娩出障害、ならびに骨粗しょう症などの１つもしくは複数の病状を治療するため、癌および胎盤機能不全を診断するため、またはそれらのための薬剤を製造するための上記概説した化合物の使用に関する。本明細書中で、不安という用語は、不安障害を含む。不安障害には、個別適応症として全般性不安障害、パニック障害、広場恐怖症、恐怖症、社会不安障害、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害および分離不安が含まれる。

別の実施形態では、本発明は、損なわれた乳汁分泌状態、分娩誘発障害、子宮弛緩状態、出血過多、腹痛および背部痛を含む炎症および疼痛、男性および女性の両方の性機能障害、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、便秘および胃腸管閉塞、自閉症、ストレス、不安（不安障害を含む）およびうつ病、外科出血、分娩後出血、創傷治癒および感染症、乳腺炎および胎盤娩出障害、ならびに骨粗しょう症の治療と、癌および胎盤機能不全の診断の方法に関する。

本発明による化合物の典型的投与量は、幅広い範囲内で変化するが、各患者の個々のニーズおよび投与の経路などの種々の因子に依存することになろう。当業者である医師は、目前の状況に対して投与量を最適化することができよう。

例えば、本発明の組成物が乳汁分泌の開始と維持を増強するためのものである場合（例えば、鼻腔内投与に関して）、典型的投与量は、各搾乳期（ｂｒｅａｓｔｐｕｍｐｉｎｇｓｅｓｓｉｏｎ）に対して体重１ｋｇ当たり０．０５〜１．０μｇの範囲とすることができる。鼻腔内投与量は、例えば、１、２または３回の部分用量（例えば、パフ）に分けて、必要に応じて、例えば一方または両方の鼻孔へ送達してもよい。当業者または医師は、目前の状況に適応するために、この投与量範囲の適切な変動および実用的な実行を考慮することができる。

さらなる実施例において、本発明の組成物は、例えば分娩後出血または外科出血の治療のために、静脈内（ｉｖ）注入として投与することができる。この実施例において、組成物はより長期間にわたって投与することができる。静脈内注入による投与のための投与量の例は、１時間につき、体重１ｋｇ当たり０．５〜２００μｇである。

さらなる実施例において、本発明の組成物は、例えば不安障害またはうつ病を治療するための、皮下（ｓｃ）、鼻腔内または口腔投与のためとすることができる。皮下（ｓｃ）、鼻腔内または口腔投与のための投与量の例は、体重１ｋｇ当たり０．５〜１０００μｇである。投与量は、例えば、１日に１回または２回など、１日当たり必要なだけの回数の投与のためとすることができる。

使用される略称は、以下のとおりである。
ＡｃＯＨ酢酸
Ｂｏｃｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＢＯＰベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリスジメチルアミノホスホニウムヘキサフルオロリン酸
Ｂｕａ酪酸
Ｂｕブチル−アルキル残基はさらに、ｎ（ノルマル、すなわち、分岐していない）、ｉ（ｉｓｏ）、ｓ（ｓｅｃ）およびｔ（三級）で示されうる。
ＣＨ_３ＣＮアセトニトリル
ＤＣＣＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＭジクロロメタン
ＤＩＣＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
４−ＦＢｚｌＧｌｙＮ−（４−フルオロベンジル）グリシン
Ｆｍｏｃ９−フルオレニルメトキシカルボニル
Ｆｍｏｃ−Ｃｌ９−フルオレニルメトキシカルボニルクロリド
Ｆｍｏｃ−ＯＳｕＮ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）コハク酸イミド
ｈ時間
ＨＢＴＵＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸
Ｈｃｙホモシステイン
ＨＦフッ化水素
ＨＯＢｔ１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ高速液体クロマトグラフィー
ＩＰＡイソプロピルアルコール
ＭｅＯＨメタノール
ＭＢＨＡ４−メチルベンズヒドリルアミン
ＮＭＭ４−メチルモルホリン
４−Ｐｉｃ４−ピコリル（４−ピリジルメチル）
ＰｙＢＯＰベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリスピロリジンホスホニウムヘキサフルオロリン酸
ｔＢｕｔｅｒｔ−ブチル
ｔＢｕＯＨｔｅｒｔ−ブチルアルコール
ＴＥＡトリエチルアミン
ＴＦＡトリフルオロ酢酸
ＴＩＳトリイソプロピルシラン
Ｔｒｔトリチル〔トリフェニルメチル、（Ｃ_６Ｈ_５）_３Ｃ−〕

特に指定のない限り、Ｌ−アミノ酸を使用し、従来のアミノ酸用語を順守する。

実験（合成）
アミノ酸誘導体および樹脂は、商業的供給者（Ｂａｃｈｅｍ、ＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍおよびＰｅｐｔｉｄｅｓＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）から購入した。Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｎ−（Ｒ_２（ＣＨ_２）_ｐ）グリシン、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔ−ブトキシカルボニルプロピル）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｈｃｙ（ｔ−ブトキシカルボニルエチル）−ＯＨは、文献〔Ｗｅｂｅｒら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、４６１９１８（２００３）、Ｐｒｏｃｈａｚｋａら、Ｃｏｌｌｅｃｔ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．、５７、１３３５（１９９２）およびＷＯ０３／０７２５９７において、Ｗｉｓｎｉｅｗｓｋｉら〕に従って合成した。他の化学物質および溶媒は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＦｌｕｋａおよびＡｃｒｏｓＯｒｇａｎｉｃｓから提供された。

本明細書の化合物は、Ｆｍｏｃ法およびＢｏｃ法の両法を利用した固相ペプチド化学の標準的方法によって合成した。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸の全カップリングは、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ／ＤＭＦで媒介し、Ｂｏｃ保護アミノ酸の全カップリングは、ＤＣＭ中ＤＩＣまたはＤＣＣで媒介した。Ｆｍｏｃ基の除去は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンによって行い、Ｂｏｃ基の除去は、５および２５分間、１％ｍ−クレゾールによって５０％ＴＦＡ／ＤＣＭ中で行った。必要な樹脂洗浄は、ＤＣＭ、ＩＰＡ、ＤＭＦおよびＭｅＯＨによって行った。必要に応じて、２度の５分間の１０％ＴＥＡ／ＤＣＭの樹脂洗浄によって中和を行った。

特に指示がない限り、全反応は室温で行った。上で引用した参照文献に加えて、以下の標準的な参照文献が、一般的な実験セットアップならびに必要とされる出発物質および試薬の入手可能性の手引きをさらに提供する。

Ｋａｔｅｓ，Ｓ．Ａ．、Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ，Ｆ．編、ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＧｕｉｄｅ、ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ、ＮｅｗＹｏｒｋ、Ｂａｓｅｌ、２０００
Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｊ．Ｍ．、Ｙｏｕｎｇ，Ｊ．Ｄ．、ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ、ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙ、１９８４
Ｂｉｓｅｌｌｏら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９８、２７３、２２４９８〜２２５０５および
Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６３、８５、２１４９〜２１５４。

合成したペプチドの純度は、分析的逆相ＨＰＬＣによって測定することができる。ペプチドの構造的完全性は、アミノ酸分析およびエレクトロスプレー質量分析を使用して確認することができる。

樹脂結合８位（Ｌｅｕ）および９位（Ｇｌｙ）ジペプチドを合成するために、Ｆｍｏｃ法およびＢｏｃ法を使用した。

アミノ酸残基の７位にあるアミノ酸誘導体は、２つの経路のうちの１つを経由して導入した。その経路とは、ブロモ酢酸がＤＩＣ／ＨＯＢｔ／ＤＭＦ条件下で樹脂結合ジペプチドに結合し、臭素原子が（Ｒ_２（ＣＨ_２）_ｐ）ＮＨ_２によって置換され、樹脂結合Ｎ−（Ｒ_２（ＣＨ_２）_ｐ）グリシンを与えるというものであるか、あるいはＮ−Ｆｍｏｃ−Ｎ−（Ｒ_２（ＣＨ_２）_ｐ）グリシンまたはＦｍｏｃ−ｐｒｏ−ＯＨ誘導体が、Ｆｍｏｃ法に従って樹脂結合ジペプチドと結合するというものであるかのいずれかであった。特に指定のない限り、すべてのその後のアミノ酸カップリングは、Ｆｍｏｃ法に従った。

６位に導入されたアミノ酸誘導体は、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｃｙ（ｔ−ブトキシカルボニルエチル）−ＯＨまたはＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔ−ブトキシカルボニルプロピル）−ＯＨのうちの１つであった。６位がＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨであるペプチド類似体は、樹脂結合ノナペプチド残基のＮ末端へのＭｐａ（Ｔｒｔ）−ＯＨのカップリングを必要とした。

リンクアミド樹脂支持体を使用して合成したペプチドは、ＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ_２Ｏ９５／２．５／２．５（ｖ／ｖ／ｖ）溶液を用いて、Ｂｏｃ、トリチルおよびｔ−ブチルなどの任意の酸に不安定な保護基と一緒に、樹脂から開裂した。前記ペプチドは、樹脂からのペプチドの開裂後に、環化した。ＭＢＨＡ樹脂支持体を使用して合成したペプチドは、ＨＦ／アニソール１４／１（ｖ／ｖ）溶液を用いて樹脂から開裂した。前記ペプチドは、樹脂からのペプチドの開裂前に、環化した。

ジスルフィド（環）形成を通じた直鎖状ノナペプチドの環化は、１０％ＴＦＡ水溶液中に溶解した直鎖状ペプチドをヨウ素によって酸化することによって行った。アミド結合形成を通じた直鎖状ノナペプチドの環化は、高希釈のＨＢＴＵ／ＤＩＰＥＡ／ＤＭＦまたはＰｙＢＯＰ／ＤＩＰＥＡ／ＤＭＦによる媒介によって行った。

ペプチドは、リン酸トリエチルアンモニウム緩衝液水溶液中で分取ＨＰＬＣによって精製し、酢酸水溶液／アセトニトリル緩衝液系によって脱塩した。９７％を超える純度を有する画分をプールし、凍結乾燥した。

表１は、上記手順によって調製した化合物を一覧表にしている。アステリスク「＊」は、最も好ましい実施形態を示している。

合成をさらに説明するために、以下の詳細な実施例が与えられる。

すべての合成において、流速２ｍｌ／分でＶｙｄａｃＣ１８、５μｍ、４．６×２５０ｍｍカラムを使用したＷａｔｅｒｓ６００液体クロマトグラフで分析用ＨＰＬＣを行った。分取ＨＰＬＣは、流速１００ｍｌ／分でＰｒｅＰａｋ４７×３００ｍｍカートリッジを使用したＷａｔｅｒｓ２０００液体クロマトグラフで行った。最終的な化合物分析は、流速０．３ｍｌ／分で、ＶｙｄａｃＣ１８、５μｍ、２．１×２５０ｍｍカラムを使用した１１００Ａｇｉｌｅｎｔ液体クロマトグラフで行った。マススペクトルは、ＦｉｎｎｉｇａｎＭＡＴ分析計で記録した。

化合物４９；カルバ−１−〔４−ＦＢｚｌＧｌｙ^７〕ｄＯＴ：
使用したアミノ酸誘導体は、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔ−ブトキシカルボニルプロピル）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨおよびＢｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（ＰｅｐｔｉｄｅｓＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）であった。Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔ−ブトキシカルボニルプロピル）−ＯＨは上記のように合成した。

リンクアミドＡＭ樹脂（２００〜４００メッシュ、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）１．４５ｇ（０．８７ｍｍｏｌ）から出発して、完全に保護されたペプチド樹脂を手動で合成した。ＤＩＣ／ＨＯＢｔ／ＤＭＦによって媒介される、３倍過剰のアミノ酸ＧｌｙおよびＬｅｕ誘導体とのシングルカップリングを行った。Ｎ−（４−フルオロベンジル）グリシン残基を、ＤＭＦ中４倍過剰のＢｒＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ／ＤＩＣ／ＨＯＢｔによって導入し、引き続いて、ＤＭＦ中１０倍過剰の４−フルオロベンジルアミンで臭素置換を行った。ＤＩＣ／ＤＣＭによって媒介される、４倍過剰のＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔ−ブトキシカルボニルプロピル）−ＯＨとのカップリングを行った。引き続いて、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ／ＤＭＦによって媒介される、３倍過剰のアミノ酸Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＩｌｅおよびＴｙｒ誘導体とのシングルカップリングを行った。Ｆｍｏｃ基は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンで除去した。固相合成の完了時、樹脂をＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ_２Ｏ９６／２．５／１．５（ｖ／ｖ／ｖ）溶液（５０ｍｌ）で１．５時間処理し、濾過した。濾液を真空で濃縮し、ジエチルエーテルで未精製の直鎖状ペプチドを沈殿させた。ＤＭＦ（３００ｍｌ）中沈殿物を３部（３×１００ｍｌ）に分けて、激しく攪拌したＤＭＦ（１００ｍｌ）中ＤＩＰＥＡ（１ｍｌ）に加えた。ペプチド溶液の各１００ｍｌ部の添加後、ＤＭＦ（５ｍｌ）中ＨＢＴＵ（１５０ｍｇ）を反応混合物に加えた。反応溶液のｐＨは、必要に応じて、非希釈ＤＩＰＥＡの添加によってｐＨ９に維持した。反応は、分析用ＨＰＬＣによって監視した。反応溶液を真空で濃縮し、残渣をＡｃＯＨ／ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏに溶解させた。混合物をＨＰＬＣカラムに添加し、ｐＨ５．２のリン酸トリエチルアンモニウム緩衝液を使用して精製した。化合物は、アセトニトリル勾配によって溶出した。９７％を超える純度を有する画分をプールし、水（２容量）で希釈し、２％ＡｃＯＨ水溶液で予め平衡化したカラムに添加した。所望の化合物は、速い（３％／分）ＣＨ_３ＣＮ勾配によって溶出した。所望の生成物を含む画分をプールし、凍結乾燥した。白色非晶質粉末４３４ｍｇ（収率約４０％、出発樹脂の添加量に基づき、８５％のペプチド含量を仮定する）が得られた。ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１９．４分、勾配：０．５分間５％Ｂ、０．５分かけて５→３０％Ｂ、２０分にわたって３０→５０％Ｂ、および１００％Ｂ、ｔ＝４０℃、溶媒Ａ０．０１％ＴＦＡ水溶液、溶媒Ｂ７０％ＣＨ_３ＣＮ、０．０１％ＴＦＡ水溶液；純度：９９．３％；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ^＋）：予測値１０４２．４、実測値１０４２．５。

以下は、化合物４９；カルバ−１−〔４−ＦＢｚｌＧｌｙ^７〕ｄＯＴの代表的な大規模（すなわち、スケールアップ）合成である。

使用したアミノ酸誘導体は、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−４−ＦＢｚｌＧｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔ−ブトキシカルボニルプロピル）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨおよびＢｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（ＰｅｐｔｉｄｅｓＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）であった。Ｆｍｏｃ−４−ＦＢｚｌＧｌｙ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔ−ブトキシカルボニルプロピル）−ＯＨは上記のように合成した。ペプチドは、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ／ＤＭＦによって媒介される、３倍過剰のアミノ酸誘導体とのシングルカップリングによって合成した。残りの合成および化合物４９の特性決定は上記に従った。白色非晶質粉末４３４ｍｇ（収率約４０％、出発樹脂の添加量に基づき、８５％のペプチド含量を仮定する）が得られた。

化合物１０；〔４−ＰｉｃＧｌｙ^７〕ｄＯＴ：
使用したアミノ酸誘導体は、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨおよびＭｐａ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（ＰｅｐｔｉｄｅｓＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）であった。リンクＡＭ樹脂（２００〜４００メッシュ、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）１．３３ｇ（０．６５ｍｍｏｌ）から出発して、完全に保護されたペプチド樹脂を手動で合成した。ＤＩＣ／ＨＯＢｔ／ＤＭＦによって媒介される、３倍過剰のアミノ酸ＧｌｙおよびＬｅｕ誘導体とのシングルカップリングを行った。Ｎ−（４−ピコリル）グリシン残基を、ＤＭＦ中４倍過剰のＢｒＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ／ＤＩＣ／ＨＯＢｔによって導入し、引き続いて、ＤＭＦ中１０倍過剰の４−ピコリルアミンで臭素置換を行った。ＤＩＣ／ＤＣＭによって媒介される、４倍過剰のＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨとのカップリングおよび、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ／ＤＭＦによって媒介される、３倍過剰のアミノ酸Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、ＴｙｒおよびＭｐａ誘導体とのシングルカップリングを行った。Ｆｍｏｃ基は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンで除去した。固相合成の完了時、樹脂をＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ_２Ｏ９６／２／２（ｖ／ｖ／ｖ）溶液（５０ｍｌ）で１．５時間処理し、濾過した。濾液を真空で濃縮し、ジエチルエーテルで未精製の直鎖状ペプチドを沈殿させた。沈殿物を非希釈ＴＦＡ（５０ｍｌ）に溶解し、磁力的に攪拌した５％水性アセトニトリル（６００ｍｌ）溶液に注ぎ、ペプチドを、黄色が持続するまでメタノール中０．１ＭのＩ_２を添加することによって酸化した。過剰量のヨウ素は、固体アスコルビン酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）によって還元し、溶液のｐＨは濃アンモニア水溶液を添加することによって約４に調整した。混合物をＨＰＬＣカラムに添加し、ｐＨ５．２のリン酸トリエチルアンモニウム緩衝液を使用して精製した。化合物は、アセトニトリル勾配によって溶出した。９７％を超える純度を有する画分をプールし、水（２容量）で希釈し、２％ＡｃＯＨ水溶液で予め平衡化したカラムに添加した。所望の化合物は、速い（３％／分）アセトニトリル勾配によって溶出した。所望の生成物を含む画分をプールし、凍結乾燥した。白色非晶質粉末３４８．７ｍｇ（収率約４４％、出発樹脂の添加量に基づき、８５％のペプチド含量を仮定する）が得られた。ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝２１．７分、勾配：０．５分間５％Ｂ、０．５分かけて５→１０％Ｂ、２０分にわたって１０→３０％Ｂ、および５分間１００％Ｂ、ｔ＝４０℃、溶媒Ａ０．０１％ＴＦＡ水溶液、溶媒Ｂ７０％ＣＨ_３ＣＮ、０．０１％ＴＦＡ水溶液；純度：９９．９％；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ^＋）：予測値１０４３．４、実測値１０４３．４。

化合物２９；カルバ−６−〔Ｐｈｅ^２、ＭｅＯＥｔＧｌｙ^７〕ｄＯＴ：
使用したアミノ酸誘導体は、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨおよびＢｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（Ｂａｃｈｅｍ）、Ｆｍｏｃ−Ｈｃｙ（ｔ−ブトキシカルボニルエチル）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨおよびＢｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ（ＰｅｐｔｉｄｅｓＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）であった。Ｆｍｏｃ−Ｈｃｙ（ｔ−ブトキシカルボニルエチル）−ＯＨは上記のように合成した。

ＭＢＨＡ樹脂１．３３ｇ（０．９４ｍｍｏｌ、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）から出発して、完全に保護されたペプチド樹脂を手動で合成した。樹脂は、ＤＣＭ中１０％ＴＥＡで中和した。ＤＩＣ／ＤＣＭによって媒介される、１．７倍過剰のアミノ酸Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨおよびＢｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨとのシングルカップリングを行った。Ｎ−（２−メトキシエチル）グリシン残基を、ＤＭＦ中３．６倍過剰のＢｒＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ／ＤＩＣ／ＨＯＢｔによって導入し、引き続いて、ＤＭＦ中（１０ｍｌ）中７倍過剰の２−メトキシエチルアミンおよび４倍過剰のＤＩＰＥＡで臭素置換を行った。反応物は５時間攪拌した。ＤＩＣ／ＤＣＭによって媒介される、４倍過剰のＦｍｏｃ−Ｈｃｙ（ｔ−ブトキシカルボニルエチル）−ＯＨとのシングルカップリング、およびＤＩＣ／ＨＯＢｔ／ＤＭＦによって媒介される、３倍過剰のアミノ酸ＡｓｎおよびＧｌｎ誘導体とのシングルカップリングを行った。Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨおよびＢｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨとの２つの最終的なシングルカップリングを、ＤＩＣ／ＤＣＭによって行い、所望の保護された樹脂結合直鎖状ペプチドを得た。Ｆｍｏｃ基は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンで除去した。樹脂をＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ／ＴＩＳ９５／３／２（ｖ／ｖ／ｖ）で２時間処理し、トリチル、Ｂｏｃおよびｔ−ブチル基を除去した。ＢＯＰ（４等量）およびＤＩＰＥＡ（１０等量）を攪拌した樹脂のＤＭＦ（１０ｍＬ）懸濁液に加え、２時間後、ＰｙＢＯＰ（２等量）およびＤＩＰＥＡ（５等量）を加えた。０℃で９０分間、アニソール５ｍｌを含む無水ＨＦ７０ｍｌを使用することによって、樹脂からペプチドを開裂した。ＨＦを真空で除去し、未精製の直鎖状ペプチドをジエチルエーテル（３００ｍｌ）で洗った。ペプチドをＡｃＯＨ／ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ１／２／７（ｖ／ｖ／ｖ）（４００ｍｌ）に溶解した。結果として生じる混合物をＨＰＬＣカラムに直接添加し、ｐＨ２．３のリン酸トリエチルアンモニウム緩衝液を使用して精製した。化合物は、アセトニトリル勾配によって溶出した。９７％を超える純度を有する画分をプールし、水（２容量）で希釈し、２％酢酸水溶液で予め平衡化したカラムに添加した。所望の化合物は、１％ＡｃＯＨ／ＣＨ_３ＣＮ勾配によって溶出した。所望の生成物を含む画分をプールし、凍結乾燥した。

白色非晶質粉末２９２．７ｍｇ（収率約２７％、出発樹脂の添加量に基づき、８５％のペプチド含量を仮定する）が得られた。ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１６．７分、勾配：０．５分間５％Ｂ、０．５分かけて５→３０％Ｂ、２０分にわたって３０→５０％Ｂ、および５分間１００％Ｂ、ｔ＝４０℃、溶媒Ａ０．０１％ＴＦＡ水溶液、溶媒Ｂ７０％ＣＨ_３ＣＮ、０．０１％ＴＦＡ水溶液；純度：１００．０％；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ^＋）：予測値９７６．５、実測値９７６．３。

他の化合物は、これらの合成手順と類似の変法によって調製した。

実験（生物学的試験）
インビトロ受容体アッセイ：
ｈＯＴ受容体に対する化合物のアゴニスト活性は、ホタルルシフェラーゼの発現を調節する細胞内カルシウム応答性プロモーター要素を含むレポーターＤＮＡと共同して、ｈＯＴ受容体発現ＤＮＡをチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株へ一過性に形質移入することによる、レポーター遺伝子転写アッセイで決定した。このアッセイのさらなる手引きについては、Ｂｏｓｓ，Ｖ．、Ｔａｌｐａｄｅ，Ｄ．Ｊ．、Ｍｕｒｐｈｙ，Ｔ．Ｊ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９６、Ｍａｙ３；２７１（１８）、１０４２９〜１０４３２を参照されたい。細胞は、５時間、用量当たり１０倍に希釈した化合物の連続希釈液に曝露され、その後細胞を溶解し、ルシフェラーゼ活性を決定し、非線形回帰により化合物の有効性およびＥＣ_５０値を決定した。各々の実験において、オキシトシン（ＯＴ）を内部標準として使用し、化合物は少なくとも３度の独立した実験で試験した。選択性を決定するため、化合物を、ヒトバソプレシン（ｈＶ_２）受容体を発現する、ルシフェラーゼベースのレポーター遺伝子転写アッセイでさらに試験した。

さらなる比較目的のために、基準化合物としてカルベトシンも使用した。

インビボアッセイの結果を以下の表２に示す。与えられたＥＣ_５０値は、ナノモル／ｌ（ｎＭ）で表される相乗平均である。選択性値は、ＥＣ_５０比として与えられる。

上記結果は、実施例の化合物が、本発明の範囲内にあり、例えば、分娩を誘発し、子宮弛緩を制御し、乳汁分泌を促進および維持するなどのための、ヒトの安全で有効な治療に有用となりうることを示している。

本発明の範囲は、以下の特許請求の範囲においてさらに定義される。

Claims

式（Ｉ）：

（Ｉ）
（式中、ｎは、１および２から選択され、
ｐは、１、２、３、４、５および６から選択され、
Ｒ₁は、１つのＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、アルキルまたはＯ−アルキル置換基で置換されていてもよいアリールから選択され、
Ｒ₂は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシル、フェニル、３−メチルフェニル、４−メチルフェニル、４−フルオロフェニルおよび２−チエニルから選択され、
ＷおよびＸは、それぞれ独立にＣＨ₂およびＳから選択されるが、両方がＣＨ₂ではなく、アルキルは、Ｃ_3~6直鎖アルキルおよびＣ_4~8分岐鎖アルキルから選択され、少なくとも１つのヒドロキシル置換基を有してもよい
（但し、Ｒ₂がＨ、Ｒ₁が４−ヒドロキシフェニル、ｎが１であるとき、ｐは５または６であり；
Ｒ₂がＨ、Ｒ₁がフェニルであるとき、ｐは４、５または６であり；
Ｒ₂が４−メチルフェニルであるとき、ｐ＞１であり；
Ｒ₂がフェニルであるとき、Ｒ₁がフェニルおよび４−ヒドロキシフェニルから選択され；Ｒ₁およびＲ₂が両方ともフェニルである場合、ｐ＞１であり；
Ｒ₁が４−ヒドロキシフェニル、Ｒ₂がフェニル、ｐ＜３である場合、ＷがＣＨ₂であり；Ｒ₁が４−ヒドロキシフェニル、Ｒ₂がフェニル、ｐ＝３である場合、ＷおよびＸが両方ともＳである）、
化合物、ならびにその溶媒和物および薬学的に許容される塩。
アリール、フェニル、３−メチルフェニル、４−メチルフェニル、４−フルオロフェニル、２−チエニル、および４−ヒドロキシフェニルが、少なくとも１つのアルキル、Ｏ−アルキル、ＯＨ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒ置換基で置換されていてもよい、請求項１に記載の化合物。
ｎが１である、請求項１または２に記載の化合物。
ｐが１、２、３、４および５から選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ₁がフェニルおよび４−ヒドロキシフェニルから選択される、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ₂がｎ−ブチル、２−ヒドロキシエチル、２−フェニルエチル、フェニル、３−メチルフェニル、４−メチルフェニル、４−フルオロフェニルおよび２−チエニルのいずれか１つから選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
ＷがＣＨ₂であり、ＸがＳである、または
ＷがＳであり、ＸがＣＨ₂である、または
ＷおよびＸが両方ともＳである、請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
化合物が以下からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物：

化合物11

化合物12

化合物14

化合物15

化合物16

化合物19

化合物20

化合物24

化合物25

化合物26

化合物31

化合物36

化合物39

化合物40

化合物41

化合物42

化合物44

化合物45

化合物46

化合物47

化合物48

化合物49

化合物50

化合物51

化合物52

化合物53

化合物54
化合物が、以下からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物：
化合物が、
である、請求項１に記載の化合物。
有効成分として、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物を含む、医薬品。
有効成分として、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物を含む医薬組成物。
損なわれた乳汁分泌状態、分娩誘発障害、子宮弛緩状態、出血過多、炎症、疼痛、腹痛、背部痛、男性および女性の性機能障害、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、便秘、胃腸管閉塞、自閉症、ストレス、不安、うつ病、不安障害、外科失血、分娩後出血、創傷治癒、感染症、乳腺炎、胎盤娩出障害、骨粗しょう症のうちの１つまたは複数の治療をするための、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物を含む、医薬品。
癌または胎盤機能不全を診断するための、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物を含む医薬品。
損なわれた乳汁分泌状態、分娩誘発障害、子宮弛緩状態、出血過多、炎症、疼痛、腹痛、背部痛、男性および女性の性機能障害、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、便秘、胃腸管閉塞、自閉症、ストレス、不安、うつ病、不安障害、外科失血、分娩後出血、創傷治癒、感染症、乳腺炎、胎盤娩出障害、骨粗しょう症を治療するための薬剤の製造のための、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物の使用。
癌または胎盤機能不全を診断するための薬剤の製造のための、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物の使用。