MX2008014735A - Compuestos de aziridinil-epotilona. - Google Patents

Compuestos de aziridinil-epotilona.

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MX2008014735A
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Soong-Hoon Kim
Gregory D Vite
Christopher P Leamon
Iontcho R Vlahov
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Squibb Bristol Myers Co
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Abstract

La presente invención se dirige a compuestos de aziridinil epotilona como se describe adicionalmente en la presente, y/o sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos que tienen la Fórmula X: (ver fórmula I) Los compuestos pueden utilizarse en el tratamiento del cáncer para la preparación de conjugados para administrar un fármaco dirigido, especialmente folatos.

Description

COMPUESTOS DE AZIRIDINIL-EPOTILONA CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas de análogos de aziridinil-epotilona que comprenden los análogos de aziridinil-epotilona, y métodos de uso de los mismos. ANTECEDENTES DE LA INVENCION Las epotilonas A y B son compuestos que se presentan naturalmente que se descubrieron por Hofle y colaboradores, como aislados de productos de fermentación del microorganismo, Sorangium cellulosum (ver, por ejemplo, documento WO 93/10121). Hófle y colaboradores también descubrieron 37 variantes de epotilona naturales y compuestos relacionados producidos por Sorangium cellulosum, incluyendo epotilonas C, D, E, F y otros isómeros y variantes. Ver, por ejemplo, Patente Norteamericana 6,624,310. Mientras que en 1993 Hofle y colaboradores reportaron un efecto citotóxico de las Epotilonas A y B, en 1995 investigó con Merck reportando que la epotilona B ejerce efectos de estabilización de microtúbulos similar a paclitaxel (TAXOL®) (Ver D.M. Bollag, "Epothilones, a New Class of Microtubule-Stabilizing Agents with a Taxol-like Mechanism of Action, " Cáncer Research, Vol. 55 (Junio 1995) , en páginas 2325-2333) . Diversos derivados y análogos de las epotilonas que Ref.: 198045 se presentan naturalmente se han descubierto por Bristol-Myers Squibb Co. Los ejemplos de análogos de epotilona incluyen el análogo de aza-epotilona B conocido como ixabepilona, análogos 21 sustituidos de epotilona B incluyendo un análogo amino 21, análogos 2 , 3-olefinicos, análogos ciano C-3, análogos de ciclopropilo, y análogos heterociclicos incluyendo análogos de aziridinil-epotilona . Ver, por ejemplo Patente Norteamericana 6,605,599, Patente Norteamericana 6,262,094, Patente Norteamericana 6,399,638, Patente Norteamericana 6,498, 257, Patente Norteamericana 6,380,395, y Patente Norteamericana 6,800,653, cada una de las cuales se incorpora en la presente para referencia. Otros también se han reportado en el descubrimiento de otros derivados y análogos de epotilona. Ver, por ejemplo, comentos WO 99/65913, US 6,441,186, US 6,284,781, Patente Norteamericana 6,660,758; WO 98/25929, WO 00/99/07692, WO 99/67252, WO 00/00485, WO 00/37473, Patente Norteamericana 6,380,394, Patente Norteamericana 6,242,469, US 6,531,497, US 2004/0072870A1, US 2003/0023082 Al, WO 01/83800, Patente Norteamericana 6,441,186, Patente Norteamericana 6,489,314, Patente Estadounidense 6,589,968, US 2004/0053910 Al, US 2004/0152708 Al, WO 99/67253, WO 99/07692, WO 00/00485, WO 00/49021, WO 00/66589, WO 03/045324, WO 04/014919, WO 04/056832, WO 03/022844, y Patente Norteamericana 6,930,102 B2, todas las cuales se incorporan para referencia en su totalidad.
Las epotilonas que se presentan naturalmente y sus análogos, como otros agentes que estabilizan los microtubulos, pueden ser útiles para tratamiento de enfermedades proliferativas tales como cáncer, el cual generalmente trabaja al exterminar (o detener el crecimiento de) células neoplásicas, otras células patógenas, y patógenos externos. A menudo, sin embargo, los fármacos anticancerigenos atacan no solamente células neoplásicas sino también tejidos normales, llevando a efectos colaterales no deseados. Adicionalmente, los fármacos anticancerigenos generalmente presentan la salida de solubilidad de tal manera que la formulación y administración de los agentes puede presentar cambios, llevando al uso de agentes solubilizantes tales como Cremophor . La citotoxicidad de algunos fármacos anticancerigenos y/o ingredientes de formulación se han conocido para provocar neuropatía y otros efectos colaterales tales como reacciones de hipersensibilidad . Estos efectos colaterales adversos resaltan la necesidad de . terapias anticancerígenas que sean selectivas para poblaciones celulares patógenas y por lo tanto resulten en la toxicidad hospedera reducida. Sin embargo, como se discute en el documento O 2004/054622 Al los científicos han intentado durante muchos años el uso de anticuerpos monoclonales (mAbs por sus siglas en inglés) en terapias de fármaco objetivo para la administración de agentes quimioterapéuticos a pacientes, pero se han encontrado inconvenientes en términos de, ínter alia, la porción que se divide, las ligaduras, y la forma de liberación de fármaco en las células. Se ha reportado que la terapia exitosa de tumores con mAbs se limita por la penetración inadecuada del anticuerpo en el tumor y por la distribución heterogénea de antigeno asociado al tumor correspondiente en el tejido del tumor. Ver, Klar y colaboradores, documento WO 05/074901 (cedida a Schering AG) . La Publicación de Solicitud de Patente Norteamericana No. 2005/0002942 describe los conjugados de la administración de fármaco que enlaza al receptor de vitamina que son útiles para la administración de fármaco objetivo. Existe una necesidad en la técnica para identificar agentes anticancerigenos que pueden usarse para hacer conjugados tales como aquellos descritos en el documento US 2005/0002942, en el interés de proporcionar la administración de fármaco objetivo para el tratamiento cáncer. BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención se dirige a compuestos que tienen la siguiente fórmula X: o sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde: K es -O-, -S-, o -NR7-; A es - (CReRg) - (CH2)m-Z- en donde Z es -(CHR10)-, -C(=0)-, -C(=0)-C(=0)-, -OC(=0)-, -N(Rn)C(=0)-, -S02-, o -N (Rn) SO2-; Bi es hidroxilo o ciano y Ri es hidrógeno o Bi y Ri son tomados juntos para formar un enlace doble; P-2r y R5 son, independientemente, hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo o arilo sustituido; o R2 y R3 pueden ser tomados juntos con el carbono al cual se enlazan para formar un cicloalquilo opcionalmente sustituido; R4 es hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquilo sustituido, alquenilo sustituido, arilo, o arilo sustituido; R6 es hidrógeno, alquilo o alquilo sustituido; R7, Rg, R9, Rio, y R son independientemente hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo sustituido, heteroarilo, o heteroarilo sustituido; R12 es H, alquilo, alquilo sustituido, o halógeno; R13 es arilo, arilo sustituido, heteroarilo o heteroarilo sustituido; y m es 0 hasta 6. La presente invención se dirige además a métodos para tratar cáncer usando los compuestos que tienen la Fórmula X asi como composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos que tienen la Fórmula X, asi como el uso de los compuestos de Fórmula X en la preparación de composiciones farmacéuticas con portadores farmacéuticamente aceptables para tratar el cáncer. Los compuestos de Fórmula X son especialmente útiles para preparar composiciones para terapias de fármaco objetivo. BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS La FIG. 1 es las estructuras químicas, afinidades relativas, y valores de CE5o (nM) contra células neoplásicas de KB de seis conjugaciones de folato del Compuesto análogo de de epotilona AA (número conjugado AA. I a AA-VI). La FIG. 2 es las estructuras químicas, afinidades relativas, y valores de CE5o (nM) contra células neoplásicas KB de tres conjugados de folato de Compuesto análogo de epotilona BB (número conjugado BB . I a BB.III). La FIG. 3 demuestra la fracción de sobrevivencia de clones KB (fracción de supervivencia; eje y) después del tratamiento con incremento de concentraciones (Concentración (nM) ; eje x) del Compuesto G (barras) , Compuesto CC (triángulos), Compuesto AA (diamantes), o ixabepilona (cuadros) . Las FIGS. 4A-4B demuestran la eficacia antitumoral in vivo para tratar xenoinjertos de carcinoma epidermoide nasofaríngeo KB en ratones lampiños con el Compuesto J (cuadros grises, cuadros blancos, diamantes grises) a varias dosis o ixabepilona (barras negras), comparado con la ausencia de tratamiento (control; circuios negros) , como una medida de (A) peso promedio del tumor (mg; eje y) implantación del tumor después de varios días (eje x) o (B) pérdida de peso (% del cambio de peso corporal; eje y) implantación del tumor después de varios días (eje x) . La FIG. 5 demuestra los efectos antitumorales in vivo del Compuesto J (cuadros grises) o ixabepilona (cuadros blancos) , comparado con la ausencia de tratamiento (control; circuios negros), contra carcinoma pulmonar de murino FR (-) M109 como una medida del peso promedio del tumor (mg; eje y) implantación del tumor después de varios dias (x eje) . La FIG. 6 demuestra los efectos antitumorales in vivo, como una medida del peso promedio del tumor (mg; eje y) implantación del tumor después de varios dias (x eje) , ausencia de tratamiento (control, circuios negros), tratamiento con tan solo el Compuesto J (cuadros grises) , Compuesto J en presencia del análogo de folato, barras negras), o tratamiento con Compuesto G (diamantes grises). DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION DEFINICIONES DE TERMINOS Los siguientes son definiciones de los términos usados en la presente especificación. La definición inicial proporcionada para un grupo o término en la presente se aplica a tal grupo o término a través de la presente especificación individualmente o como parte de otro grupo, a menos que se indique lo contrario. El término "fracción o análogo o derivado de unión de folato del mismo" como se utiliza en la presente significa una fracción que unirá a una proteina del receptor de folato (no un anticuerpo monoclonal) que es sobreexpresado o expresado preferencialmente en células cancerígenas. Por ejemplo, se conoce que el receptor de folato (FR) está sobreexpresado en células cancerígenas ováricas y otras células cancerígenas. Los análogos ilustrativos y derivados de folato se describen en la Publicación de Solicitud de Patente Norteamericana No. 2005/0002942 para Vlahov y colaboradores, (más adelante "Vlahov"), incorporada en la presente por referencia. El término "enlazador liberable" como se utiliza en la presente significa un enlazador bivalente que incluye por lo menos un enlace divisible que puede romperse bajo condiciones fisiológicas (por ejemplo un enlace pH-lábil, reductiblemente-lábil, ácido-lábil, oxidativo-lábil, o enzima-lábil.) Debe apreciarse que tales condiciones fisiológicas dan por resultado la fractura de enlace incluyen reacciones de hidrólisis químicas estándares que ocurren, por ejemplo, a pH fisiológico, o como resultado de la compartimentalización en un organelo celular, tal como un endosoma que tiene un pH más inferior que el pH citosólico, o como resultado de la reacción con un agente reductor celular tal como glutationa. Se entiende que un enlace divisible puede conectar dos átomos adyacentes dentro del enlazador liberable y/o conectar otros grupos con el enlazador liberable tal como Q y K, como se describe en la presente, en cualquier o ambos extremos del enlazador. Los términos "alquilo" y "alq" si solos o en combinación con cierto otro grupo, se refiere a un radical alcano (hidrocarburo) de cadena lineal o ramificada unido en cualquier átomo de carbono disponible, que contiene de 1 a 10 átomos de carbono, preferiblemente 1 a 6 átomos de carbono, más preferiblemente de 1 a 4 átomos de carbono. Ejemplarmente tales grupos incluyen, pero no se limitan a metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, pentilo, hexilo, heptilo, 4 , 4-dimetilpentilo, octilo, 2,2,4-trimetolpentilo, y similares. "Alquilo inferior" o "alquileno inferior" significa un alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene un a cuatro átomos de carbono. Cuando un subscrito se utiliza con referencia a un alquilo u otro grupo, el subscrito se refiere al número de átomos de carbono que el grupo puede contener. Por ejemplo, el término "C0-4alquilo" incluye un enlace y grupos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y el término "Ci_4alquilo" significa grupos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono. El término "alquileno" se refiere a un radical de hidrocarburo bivalente, como se describe anteriormente para "alquilo" pero con dos puntos de unión. Por ejemplo, un grupo metileno es un grupo -CH2- y un grupo etileno es un grupo -CH2-CH2-. Cuando el término alquilo se utiliza con respecto a otro grupo, como en heterocicloalquilo o cicloalquilalquilo, esto significa que el otro grupo identificado (primero nombrado) está enlazado directamente a través de un grupo alquilo como se define antes (por ejemplo, que puede de cadena ramificada o lineal) . Asi, el término "alquilo" se utiliza en este caso para referirse a un alquileno, por ejemplo, un grupo alquilo bivalente, que tiene dos puntos disponibles de unión. Por ejemplo, ciclopropil-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono significa un grupo ciclopropilo enlazado a través de un alquileno de cadena lineal o ramificada que tiene uno a cuatro átomos de carbono, e hidroxialquilo significa el grupo OH enlazado a través de un alquileno de cadena lineal o ramificada que tiene una a diez átomos de carbono, preferiblemente 1 a 6 átomos de carbono, más preferiblemente 1 a 4 átomos de carbono. En el caso de sustituyentes, como en "cicloalquilalquilo sustituido", la porción alquileno del grupo, además de ser la cadena ramificada o lineal, puede sustituirse como se vuelve a citar más adelante para los grupos alquilo sustituidos y/o el primer grupo nombrado (por ejemplo, cicloalquilo) puede sustituirse como recita en la presente para el grupo nombrado (por ejemplo, cicloalquilo) . "Alquilo sustituido" se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno o más sustituyentes , preferiblemente 1 a 4 sustituyentes , en cualquier punto disponible de unión. Sin embargo, cuando un grupo alquilo es sustituido con sustituyentes halo múltiples, el alquilo puede contener como valencia permite hasta 10 sustituyentes, más preferiblemente hasta siete sustituyentes. Los sustituyentes alquilo pueden incluir uno o más de los siguientes grupos: halo (por ejemplo, un solo sustituyente halo o sustituyentes halo múltiples que forman, en último caso, grupos tal como un grupo perfluoroalquilo o un grupo alquilo que lleva Cl3 o CF3) , ciano, -ORa, -SRa, -C(=0)Ra, -C(=0)ORa, -OC(=0)Ra, -OC(=0)ORa, -NRaRb, -C(=0)NRaRb, -OC (=0) NRaRb, -S(=0)Ra, -S(0)2R3, -NHS(0)2Ra, -NHS (0) 2NHR3, -NHC (=0) NHRa, -NHC(=0)Ra, -NHC(0)2Ra, -NHC (=N-CN ) Ra, arilo, heterociclo, cicloalquilo, y/o heteroarilo, en donde los grupos R3 y Rb se seleccionan independiente de hidrógeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, y heteroarilo, y en donde cada R3 y/o Rb alternadamente se sustituye opcionalmente con un a cuatro grupos seleccionados de alquilo, alquenilo, halógeno, haloalquilo, haloalcoxi, ciano, nitro, amino, alquilamino, aminoalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, tiol, alquiltio, fenilo, bencilo, feniloxi, benciloxi, cicloalquilo de 3 a 6 átomos de carbono, heterociclo o heteroarilo de cinco o seises miembros, y/o un alquilo inferior o un alquenilo inferior sustituido con uno a cuatro grupos seleccionados de hidroxi, ciano, halógeno, halo-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, halo-alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, ciano, nitro, amino, alquilamino de 1 a 4 átomos de carbono, amino-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, hidroxi-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, tiol, y/o alquiltio de 1 a 4 átomos de carbono. Para la evasión de duda, un "alquilo inferior sustituido" significa a grupo alquilo que tiene uno a cuatro átomos de carbono y uno a cuatro sustituyentes seleccionados de los recitados inmediatamente antes para grupos alquilo sustituidos. En el caso de un alquilo inferior sustituido, preferiblemente los grupos R3 y Rb se seleccionan de hidrógeno, alquilo inferior, alquenilo inferior, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono, fenilo, y heterociclo y/o heteroarilo monociclico de cinco a seises miembros, alternadamente opcionalmente sustituidos como antes . El término "alquenilo" se refiere a un radical hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que contiene de 2 a 12 átomos de carbono y por lo menos un doble enlace carbono-carbono. Ejemplarmente tales grupos incluyen etenilo o alilo. "Alquenilo sustituido" se refiere a un grupo alquenilo sustituido con uno o más sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto disponible de unión. Los sustituyentes ejemplares incluyen alquilo, alquilo sustituido, y los grupos recitados antes como sustituyentes alquilo. Los términos "alcoxi" y "alquiltio" se refieren a un grupo alquilo como se describe anteriormente enlazado a través de un enlace de oxigeno (-0-) o un enlace de sulfuro (-S-), respectivamente. Los términos "alcoxi sustituido" y "alquiltio sustituido" se refieren a un grupo alquilo sustituido como se describe anteriormente enlazados a través de un enlace de oxigeno o sulfuro, respectivamente. Un "alcoxi inferior" o un alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono es un grupo OR, en donde R es alquilo inferior (alquilo de 1 a 4 átomos de carbono) . "Amino" es NH2. Un alquilamino es -NRcRd en donde por lo menos uno de Rc y Rd es un alquilo o alquilo sustituido, y el otro de Rc y Rd se selecciona de hidrógeno, alquilo, y alquilo sustituido. Un "aminoalquilo" significa un grupo amino enlazado a través de un grupo alquileno ( -alquileno-NH2 ) , y un alquilaminoalquilo significa un alquilamino como se define antes enlazado a través de un grupo alquileno ( -alquileno-NRcRd) . El término "arilo" se refiere a grupos hidrocarburo cíclico, aromático que tienen 1 a 3 anillos aromáticos, grupos especialmente monocíclicos o bicíclicos tal como fenilo o naftilo. Los grupos arilo que son bicíclicos o tricíclicos tienen que incluir por lo menos un anillo carbocíclico completamente aromático pero el otro anillo o anillos fusionados pueden ser aromáticos o no aromáticos y pueden opcionalmente contener heteroátomos , a condición de que en tales casos el punto de unión sea al anillo carbocíclico aromático. Adicionalmente , cuando un grupo arilo se ha fusionado al mismo un anillo heterocí clico o c i el oa 1 qui 1 o , el anillo heterocí clico y/o cicloalquilo puede tener uno o más átomos de carbono de carbonilo, es decir, unido vía un doble enlace a un átomo de oxígeno para definir un grupo carbonilo. Así, los ejemplos de "arilo" pueden incluir sin limitación: El término "arileno" se refiere a un radical arilo bivalente, es decir, un grupo arilo como se define antes que tiene dos puntos de unión a dos otros grupos, en cualquiera de los puntos de unión disponible del anillo arilo. Los anillos de arileno pueden también sustituirse con cualquiera de los grupos adecuados para sustitución en los grupos arilo definidos en la presente. "Arilo sustituido" se refiere a un grupo arilo o arileno como se define antes sustituido por uno o más sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de unión. Los sustituyentes incluyen alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, asi como los grupos recitados antes como sustituyentes alquilo. El término "carbociclico" significa un anillo monociclico, biciclico, o triciclico saturado o insaturado (preferiblemente mono o biciclico) en el cual todos los átomos de todos los anillos son carbono. Asi, el término incluye anillos de cicloalquilo y arilo. El anillo carbociclico puede sustituirse en cuyo caso los sust ituyentes se seleccionan de los recitados antes para los grupos cicloalquilo y arilo. El término "cicloalquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo cíclico completamente saturado o parcialmente saturado que contiene de 1 a 3 anillos y 3 a 7 átomos de carbono por anillo. Los grupos cicloalquilo completamente saturados ejemplares incluyen ciclopropilo , ciclobutilo, c i el opent i 1 o , y ciclohexilo. Los grupos cicloalquilo parcialmente saturados ejemplares incluyen ciclobutenilo, ciclopentenilo, y ciclohexenilo . El término "cicloalquilo" incluye tales grupos que tienen un puente de tres a cuatro átomos de carbono. Además, los grupos cicloalquilo que son bicíclicos o tricíclicos deben incluir por lo menos un anillo hidrocarburo completamente saturado o parcialmente saturado pero el otro anillo o anillos fusionados pueden ser aromáticos o no aromáticos y pueden contener het eroátomos , a condición de que en tales casos el punto de unión deba ser el grupo hidrocarburo cíclico, no aromático. Adicionalmente, uno o más átomos de carbono del grupo cicloalquilo pueden formar un doble enlace carbono-a-oxígeno para definir un grupo carbonilo. Así, los ejemplos de grupos cicloalquilo" pueden incluir, sin limitación: El término "cicloalquileno" se refiere a un radical cicloalquilo bivalente, es decir, un grupo cicloalquilo como se define antes que tiene dos puntos de unión a dos otros grupos, en cualquiera de los dos puntos de unión disponibles del anillo cicloalquilo. "Cicloalquilo sustituido" se refiere a un grupo cicloalquilo como se define antes sustituido en cualquier punto de unión disponible con uno o más sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes . Los sustituyentes de cicloalquilo incluyen alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, y a los grupos recitados antes como sustituyentes alquilo. El término "guanidinilo" significa el grupo _ Asi, un guanidinilalquilo significa un grupo alquilo enlazado al guanidinilo tal como un grupo que tiene la fórmula, El término "halógeno" o "halo" se refiere a flúor, cloro, bromo e yodo. El término "heteroátomos" incluye oxigeno, azufre y nitrógeno . El término "haloalquilo" significa un alquilo que tiene uno o más sustituyentes halo, incluyendo sin limitación grupos tal como -CH2F, -CHF2 y -CF3. El término "haloalcoxi" significa un grupo alcoxi que tiene uno o más sustituyentes halo. Por ejemplo, "haloalcoxi" incluye -OCF3. Cuando el término "insaturado" se utiliza en la presente para referirse a un anillo o grupo, el anillo o grupo puede ser completamente insaturado o parcialmente insaturado. El término heteroarilo se refiere a un grupo aromático que es un monociclico de 4 a 7 miembros, biciclicos de 7 a 11 miembros, o sistema del anillo triciclico de 10 a 15 miembros, que tiene por lo menos un anillo que contiene por lo menos un heteroátomo. Cada anillo del grupo heteroarilo que contiene un heteroátomo puede contener uno o dos átomos de oxigeno o azufre y/o de un a cuatro átomos de nitrógeno, a condición de que el número total de heteroátomos en cada anillo sea cuatro o menos y cada anillo tiene por lo menos un átomo de carbono. Los anillos fusionados que terminan los grupos biciclicos y tricíclicos pueden contener solamente átomos de carbono y pueden ser saturados, parcialmente saturados, o insaturados. Los átomos de nitrógeno y azufre pueden opcionalmente oxidarse y los átomos de nitrógeno pueden opcionalmente cuaternizarse . Los grupos heteroarilo que son biciclicos o tricíclicos deben incluir por lo menos un anillo completamente aromático pero el otro anillo o anillos fusionados puede ser aromáticos o no aromáticos y pueden ser carbocíclicos , a condición de que en tales casos el punto de unión pueda estar en cualquier átomo de nitrógeno o carbono disponible de un anillo que contiene el heteroátomo aromático. Adicionalmente, la definición de grupos heteroarilo por sí mismos incluye anillos en donde uno o más de los átomos de carbono se unen vía un doble enlace a un átomo de oxígeno para definir un grupo carbonilo (proporcionado el grupo heteroarilo es aromático) y también cuando un grupo del heteroarilo tiene fusionado el mismo un anillo heterocíclico o cicloalquilo, el anillo heterocíclico y/o cicloalquilo puede tener uno o más grupos carbonilo . Los grupos heteroarilo monocíclicos ejemplares incluyen pirrolilo, pirazolilo, pirazolinilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo (es decir, ) isotiazolilo, furanilo, tienilo, oxadiazolilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, triazinilo y similares. Adicionalmente, puesto que la definición de los grupos heteroarilo por si mismo incluyen anillos en donde uno o más de los átomos de carbono definen un grupo carbonilo, anillos tal como 2 , 4-dihidro- [ 1 , 2 , 4 ] triazol-3-ona (es decir, -^"~f° ) Y similares se incluyen. N'N Los grupos heteroarilo biciclicos ejemplares incluyen indolilo, benzotiazolilo, benzodioxolilo, benzoxaxolilo, benzotienilo, quinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, isoquinolinilo, bencimidazolilo, benzopiranilo, indolizinilo, benzofuranilo, cromonilo, coumarinilo, benzopiranilo, cinnolinilo, quinoxalinilo, indazolilo, pirrolopiridilo, furopiridinilo, dihidroisoindolilo, tetrahidroquinolinilo y similares. Los grupos heteroarilo triciclicos ejemplares incluyen carbazolilo, benzidolilo, fenantrolinilo, acridinilo, fenantridinilo, xantenilo y similares. El término "heteroalquileno" se refiere a un radical heteroarilo bivalente, es decir, un grupo heteroarilo como se define antes que tiene dos puntos de unión a dos otros grupos, en cualquiera de los dos puntos de unión disponible del anillo heteroarilo . Los grupos "heteroarilo sustituido" son grupos heteroarilo como se define antes sustituidos con uno o más sustituyentes , preferiblemente 1 a 4 sustituyentes , en cualquier punto de unión disponible. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero no se limitan a alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, asi como los grupos recitados antes como sustituyentes alquilo. Los términos "heterociclo" y "heterocíclico" se utilizan intercambiablemente y cada uno se refiere a un grupo cíclico no aromático completamente saturado o parcialmente insaturado, que puede ser sustituido o insustituido, por ejemplo, que es el sistema del anillo monocíclicos de 4 a 7 miembros, bicíclico de 7 a 11 miembros, o tricíclico de 10 a 15 miembros, que tiene por lo menos un heteroátomo en por lo menos un anillo que contiene el átomo de carbono. Cada anillo del grupo heterocíclico que contiene un heteroátomo puede tener 1, 2 ó 3 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno, y átomos de azufre, donde los heteroátomos de nitrógeno y azufre también pueden opcionalmente oxidarse y los heteroátomos de nitrógeno también pueden opcionalmente cuaternizarse . Preferiblemente dos heteroátomos adyacentes no se seleccionan simultáneamente de oxígeno y nitrógeno. Los grupos heterocí clicos que son bicíclicos o tricíclicos deben incluir por lo menos un anillo no- ca rboc í c 1 i co no aromático, pero el otro anillo o anillos fusionados pueden ser aromáticos o no aromáticos y pueden ser carbocí clicos , a condición de que en tales casos el punto de unión está en cualquier átomo de nitrógeno o carbono disponible de un anillo que contiene el heteroátomo no aromático. Adicionalmente, la definición de grupos heterociclicos por si mismos incluyen anillos en donde uno o más de los átomos de carbono se unen vía un doble enlace a un átomo de oxigeno para definir un grupo de carbonilo (proporcionado el grupo he t e r oci c 1 i co es no aromático) y también cuando un grupo heterociclico tiene fusionado en el mismo otro anillo, tal anillo adicional puede tener uno o más grupos carbonilo. Los grupos heterociclicos monociclicos ejemplares incluyen p i r r o 1 i di n i 1 o , imida z o 1 idi n i 1 o , tetrahidrofurilo, p ipe r i di n i 1 o , pipe ra z i ni 1 o , p i ra z o 1 i di ni 1 o , imida z o 1 i ni 1 o , pirrolinilo, tetrahidropiranilo, morfolinilo, t iamorfolinilo , y s imi lares . "Heterociclo sustituido," "heterociclico sustituido," y "heterociclo sustituido" se refieren a grupos heterociclo o heterociclico o como se define antes sustituidos con uno o más sustituyeates, preferiblemente 1 a 4 sust ituyentes , en cualquier punto de unión disponible. Los sust ituyentes ejemplares incluyen alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, asi como los grupos recitados antes como sust ituyentes alquilo ejemplares. "Hidroxi" se refiere a -OH.
"Tiol" significa un grupo -SH. El término "nitrógeno cuaternario" se refiere a un átomo de nitrógeno cargado positivamente tetravalente que incluye, por ejemplo, nitrógeno cargado positivamente en un grupo tetraalquilamonio (por ejemplo, tetrametilamonio o N-metilpiridinio), el nitrógeno cargado positivamente en la especie amonio protonado (por ejemplo, trimetilhidramonio o N-hidropiridino ) , nitrógeno cargado positivamente en N-óxidos de amina (por ejemplo, N-met il-mor f olina-N-óxido o piridina-N-óxido ) , y nitrógeno cargado positivamente en un grupo N-amino-amonio (por ejemplo, N-aminopiridinio ) . Cuando un grupo funcional es llamado "protegido", éste significa que el grupo está en la forma modificada a atenuar, imposibilita especialmente, las reacciones secundarias indeseadas en el sitio protegido. Los grupos de protección adecuados para los métodos y compuestos descritos en la presente incluyen, sin limitación, los descritos en libros de textos estándares, incluyendo Greene, T.W. y colaboradores, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, N.Y. (1991), incorporados en la presente por referencia . La presente invención comprende compuestos que tienen la siguiente fórmula, como se indica en la Breve Descripción de la Invención. La presente invención comprende compuestos que tienen la forma esteroespecifica de acuerdo a la Fórmula X' incluyendo sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde, K es -O-, -S-, o -NR7- ; A es - (CR8R9) - (CH2) m-Z- en donde Z es -(CHRio)-, -C(=0)-, -C (=0) -C (=0) -, -OC(=0)-, -N(Rn)C(=0)-, -S02-, o -N(Rn) S02-; Bi es hidroxilo o ciano y Ri es hidrógeno o Bi y Ri se toman juntos para formar un doble enlace; R2, R3/ y R5 son, independientemente, hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo o arilo sustituido; o R2 y R3 pueden tomarse juntos con el carbono al cual se unen para formar un cicloalquilo opcionalmente sustituido; R4 es hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquilo sustituido, alquenilo sustituido, arilo, o arilo sustituido; R6 es hidrógeno, alquilo o alquilo sustituido; R7, R8, Rg, Rio, y n son independientemente hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo sustituido, heteroarilo, o heteroarilo sustituido; R12 es H, alquilo, alquilo sustituido, o halógeno; R13 es arilo, arilo sustituido, heteroarilo o heteroarilo sustituido; y m es 0 a 6. En otra modalidad, los compuestos de la invención tienen la Fórmula X X o la Fórmula X' esteroespecifica, anterior, que incluye sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde K es -0; A es alquileno de 1 a 6 .átomos de carbono; Bi es -OH; 2, R3Í R y R5 son, independientemente, hidrógeno o alquilo inferior; R6 es hidrógeno o metilo; R12 es H, alquilo, alquilo sustituido, o halógeno; y R13 es un heteroarilo de 5 ó 6 miembros opcionalmente sustituido. En otra modalidad, los compuestos de la invención tienen la Fórmula X o X' , como se define antes, incluyendo sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde K es -0; A es alquileno de 2 a 4 átomos de carbono; Bi es -OH; 2, 3, R4 y 5 son, independientemente, hidrógeno o alquilo inferior; R6 es hidrógeno; R12 es H, alquilo, alquilo sustituido, o halógeno; y R13 es un heteroarilo de 5 ó 6 miembros opcionalmente sustituido. En otra modalidad, los compuestos de la invención tienen la Fórmula X o X', como se define antes, incluyendo sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde K es -0-; A es alquileno de 2 a 4 átomos de carbono; Bi es -OH; R2, R3 R4 y 5 son, independientemente, hidrógeno o alquilo inferior; R6 es hidrógeno o metilo; R12 es H, alquilo, alquilo sustituido, o halógeno; y R13 es un tiazolilo, piridilo, u oxazolilo opcionalmente sustituido. En otra modalidad, los compuestos que son proporcionados tienen la Fórmula Xa, incluyendo sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde, K es -0-, -S-, o -NR7- ; A es - (CR8Rg) - (CH2)m-Z- en donde Z es -(CHRi0)-, -C(=0)-, -C(=0)-C(=0)-, -0C(=0)-, -N(Ru)C(=0)-, -S02-, O -N(Rn)S02-; R6 es hidrógeno o metilo; Re, R9, Rio, y R11 son independientemente hidrógeno, alquilo, o alquilo sustituido, R12 es H, alquilo, alquilo sustituido, o halógeno; y R13 es arilo, sustituido arilo, heteroarilo o sustituido heteroarilo; y m es 0 a 6. En otra modalidad de la invención, los compuestos de Fórmula Xa, incluyendo los compuestos de Fórmula Xa' que tiene la forma estereoespecifica Xa', que corresponden a la esteroquimetria mostrada por X', se proporcionan. En otra modalidad, los compuestos que son proporcionados tienen la Fórmula Xa, o Xa', inmediatamente antes, en donde K es -0- y R13 es tiazolilo, piridilo, u oxazolilo opcionalmente sustituido, y los grupos restantes son como se define antes. En otra modalidad, los compuestos que son proporcionados tienen la Fórmula Xa, o Xa', antes, en donde K es -0- ; A es alquileno de 2 a 4 átomos de carbono; R6 es hidrógeno o metilo; R12 es H, alquilo inferior, o halógeno; y Ri3 es tiazolilo, piridilo, u oxazolilo opcionalmente sustituido . Un compuesto de la invención también puede tener la Fórmula Xb incluyendo sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde R6 es hidrógeno o metilo. En otra modalidad, un compuesto de la invención tiene la Fórmula Xb, en donde R6 es hidrógeno. En otra modalidad, un compuesto de la invención puede tener la Fórmula Xb ' esteroespecifica Xb' incluyendo sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde R6 es hidrógeno o metilo. En otra modalidad, un compuesto de la invención tiene la Fórmula Xb 1 , en donde R6 es hidrógeno . De acuerdo a una modalidad de la presente invención, los métodos se proporcionan para tratar cáncer, por ejemplo, una condición asociada al receptor de folato, que comprende tratar a un paciente con una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que tiene la siguiente Fórmula X: o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: K es -O-, -S-, o -NR7-; A es - (CR8R9) - (CH2) m-Z- en donde Z es -(CHRio)-, -C(=0)-, -C(=0)- C(=0)-, -OC(=0)-, -N(Rn)C(=0)-, -S02-, o -N (Ru) S02-; Bi es hidroxilo o ciano y Ri es hidrógeno o Bi y Ri se toman juntos para formar un doble enlace; ¾, R3f y R5 son, independientemente, hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo o arilo sustituido; o R2 y R3 pueden tomarse juntos con el carbono al cual se unen para formar un cicloalquilo opcionalmente sustituido; R4 es hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquilo sustituido, alquenilo sustituido, arilo, o arilo sustituido; RÉ es hidrógeno, alquilo o alquilo sustituido; R7, R8, R9, RIO, y Ru son independientemente hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo sustituido, heteroarilo, o heteroarilo sustituido; R12 es H, alquilo, alquilo sustituido, o halógeno; R13 es arilo, arilo sustituido, heteroarilo o heteroarilo sustituido; y m es 0 a 6. En una modalidad, el método comprende tratar un paciente con una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que tiene la Fórmula X' estereoespecifica, incluyendo sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde, en donde K, A, Bi Rx, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Ri0, Rn, Ri2, R13, y rn are como se define antes para los compuestos de Fórmula X. En otra modalidad, el método comprende tratar un paciente con una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que tiene la Fórmula X, incluyendo la Fórmula X1, como se describe antes, incluyendo sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde K es -O-; A es alquileno de 2 a 4 átomos de carbono; Bi es -OH; í , R4 y R5 son, independientemente, hidrógeno o alquilo inferior; R6 es hidrógeno o metilo; R7, R8, Rg, Rio, y R11 son independientemente hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo sustituido, heteroarilo, o heteroarilo sustituido; R12 es H, alquilo, alquilo sustituido, o halógeno; y R13 es un heteroarilo de 5 ó 6 miembros opcionalmente sustituido . En otra modalidad, el método comprende tratar un paciente con una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que tiene la Fórmula X, o X1, como se describe antes, incluyendo sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde K es -0-; A es alquileno de 2 a 4 átomos de carbono; Bi es -OH; ¾, R3r R y 5 son, independientemente, hidrógeno o alquilo inferior; R6 es hidrógeno; R7, Re, R9, Rio, y Rii son independientemente hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo sustituido, heteroarilo, o heteroarilo sustituido; R12 es H, alquilo, alquilo sustituido, o halógeno; y R13 es un heteroarilo de 5 ó 6 miembros opcionalmente sustituido . En otra modalidad, el método comprende tratar un paciente con una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que tiene la Fórmula X, o X1, como se describe antes, incluyendo sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde K es -O-; A es alquileno de 2 a 4 átomos de carbono; Bi es -OH; 2, R3, y 5 son, independientemente, hidrógeno o alquilo inferior; R6 es hidrógeno o metilo; R7, R8, R9, Rio, y R11 son independientemente hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo sustituido, heteroarilo, o heteroarilo sustituido; R12 es H, alquilo, alquilo sustituido, o halógeno; y Ri3 es un tiazolilo, piridilo, u oxazolilo opcionalmente sustituido. Un método de la invención también puede comprender tratar a un paciente en necesidad de tal tratamiento con una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que tiene la Fórmula Xa, anterior, o la forma estereoespecifica Xa', incluyendo sales y solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde, K es -0-, -S-, o -NR7-; A es - (CRsRg) - (CH2) m-Z- en donde Z es -(CHR10)-, -C(=0)-, -C (=0) -C (=0) -, -0C(=0)-, -N (Rn) CC=0) -, -S02-, o -N(Rn)S02-; R6 es hidrógeno o metilo; R8 y Rg son independientemente hidrógeno, alquilo, o alquilo sustituido, R12 es H, alquilo, alquilo sustituido, o halógeno; Ri3 es arilo, arilo sustituido, heteroarilo o heteroarilo sustituido; y m es 0 a 6. Un método de la invención también puede comprender tratar a un paciente en necesidad de tal tratamiento con una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que tiene la Fórmula Xb o Xb ' , anterior, en donde R6 es hidrógeno o metilo. En aún otra modalidad, el método comprende tratar al paciente con un compuesto de Fórmula Xb o Xb', en donde R6 es hidrógeno . Otra modalidad de la invención comprende el uso de cualquiera de los compuestos descritos antes (incluyendo los compuestos de Fórmula X, Xa, Xa', Xb, y/o Xb ' , en donde los grupos K, A, Bi, Rlf R2, R3, R4, R5, R6, R?, Rs, Rg, Rio, R , R12 y R13 pueden seleccionarse como se recita antes) , en la fabricación de composiciones farmacéuticas para tratar el cáncer en pacientes, particularmente, para uso en fabricar composiciones farmacéuticas que contienen compuestos conjugados para suministrar un fármaco dirigido a tumores que sobreexpresan o preferiblemente expresan el receptor de folato . Otra modalidad de la invención comprende tratar un paciente en necesidad de tal tratamiento con una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que tiene las fórmulas X, Xa, Xa', Xb, y/o Xb ' (en donde los grupos K, A, Bi , Ri , R2 , R3, R4 , R$, Re , R7, Re , R9, Rio , R11 , R12 , y R13 pueden seleccionarse como se recitó antes) , en donde el tratamiento ocurre en el sitio del tumor, teniendo que liberarse en el sitio del tumor. En esta modalidad, un compuesto conjugado es suministrado en el sitio del tumor, y después el compuesto de fórmulas X, Xa, Xa', Xb, o Xb ' , como se define antes, es libera en el sito del tumor y tatar al paciente en el sito del tumor. Por lo tanto se entiende en la presente, en cualquier momento que el término "tratamiento" se usa con referencia para tratar a un paciente, donde este comprende tratar el sito del tumor, sin embargo suministrado, por ejemplo, vía un compuesto conjugado. El uso de un agente para sobrerregular el nivel del receptor de folato ( FR ) puede ser efectivo para incrementar la expresión de FR en ciertas células cancerígenas o tipos de tumor para mejorar las ventajas obtenidas administrando los compuestos de la invención a pacientes, y/o para mejorar las diversas enfermedades o tipos de tumor que pueden tratarse con los compuestos de unión del receptor de folato de acuerdo con la invención. La expresión del receptor de folato en ciertos cánceres puede sobrerregularse mediante la administración de un inductor del receptor de folato, que selectivamente incrementa el nivel del receptor de folato en en células cancerígenas, así para mejorar la eficacia de una terapia marcada del receptor de folato. Por ejemplo, los cánceres de mama positivos del receptor de estrógeno (ER+) expresan niveles bajos de receptores de folato. El tratamiento con un inductor del receptor de folato, como tamoxifeno, un antagonista de estrógeno, se conoce para sobrerregular la expresión del receptores de folato en cánceres de mama de ER+, incrementando la susceptibilidad de células cancerígenas de mama de ER+ para tratamiento con una terapia dirigida del receptor de' folato. Un aspecto de la invención proporciona un método para tratar el cáncer o una enfermedad proliferativa en un paciente, que comprende opcionalmente administrar a un paciente una cantidad efectiva de por lo menos un inductor del receptor de folato, y tratar al paciente con una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto de acuerdo a la fórmula X. El inductor del receptor de folato puede administrarse antes, durante, o después de que el paciente se trata con el compuesto de acuerdo con la fórmula X. En una modalidad, el inductor del receptor de folato se administra antes del tratamiento con el compuesto de fórmula X. Una cantidad efectiva de inductor del receptor de folato se refiere a una cantidad que sobrerregula el receptor de folato en las células deseadas tal que el tratamiento con el compuesto es terapéuticamente efectivo. Los ejemplos de inductores del receptor de folato para la sobrerregulación del receptor de folato a (FR ) incluyen: antagonistas del receptor de estrógeno tal como tamoxifeno; agonistas del receptor de progesterona tal como progestina; agonistas del receptor de andrógeno tal como testosterona y dihidroxitestosterona, y agonistas del receptor de glucocorticoides tal como dexametasona. Los ejemplos de inductores del receptor de folato para la sobrerregulación del receptor de folato ß (Fí^) incluyen: agonistas del receptor de ácido retinóico tal como ácido retinóico trans integral, ácido benzoico de tetrametil naftalen propenilo (TTNPB) , ácido retinóico 9-cis (9-cis RA), CD33336, LG101093, y CD2781. En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer o una enfermedad proliferativa en un paciente en necesidad del mismo, que comprende administrar una cantidad efectiva de por lo menos un inductor del receptor de folato y también tratar al paciente con por lo menos un compuesto de acuerdo con la fórmula X; en donde el inductor del receptor de folato sobrerregula el receptor de folato a. Preferiblemente, el cáncer o enfermedad proliferativa se selecciona de cáncer de mama, tal como cáncer de mama de ER+, y cáncer ovárico. En una modalidad de la presente invención, se proporciona un método para tratar el cáncer o una enfermedad proliferativa en un paciente en necesidad del mismo, que comprende administrar una cantidad efectiva de por lo menos un inductor del receptor de folato y administrar una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto de acuerdo con la fórmula X; en donde el inductor del receptor de folato sobrerregula el receptor de folato ß. Preferiblemente, el cáncer o enfermedad proliferativa se selecciona de leucemia, y preferiblemente de leucemia mielógena aguda (AML) y leucemia mielógena crónica (CML) . En una modalidad adicional, se proporciona un método para tratar el cáncer o una enfermedad proliferativa en un paciente en necesidad del mismo, que comprende administrar una cantidad efectiva de por lo menos un ¦ inductor del receptor de folato, administrar por lo menos un inhibidor de deacetilasa de histona, y tratar al paciente con una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto de acuerdo con la fórmula X. Un ejemplo de un inhibidor de deacetilasa de histona es tricostatina A (TSA) . Publicación de solicitud de patente Norteamericana No. 2003/0170299, WO 2004/082463, Kelly, K. M . , B.G. Rowan, and M. Ratnam, Cáncer Research 63, 2820-2828 (2003), Wang, Zheng, Behm, and Ratnam, Blood, 96:3529-3536 (2000) . Los compuestos de la presente invención pueden formar sales o solvatos los cuales están también dentro del alcance de esta invención. La referencia para un compuesto de la fórmula (X) en la presente se entiende para incluir la referencia para sales solvatos de los mismos, racematos, diastereómeros , y enantiómeros de los mismos, a menos que se indique de otra manera. El término "sales", como se emplea en la presente, denota sales ácidas y/o básicas formadas con ácidos y bases inorgánicas y/u orgánicas. Además, cuando un compuesto de la fórmula (X) contiene tanto una porción básica, tal como pero no limitada a un piridinil imidazolilo, amina o guanidinilo como una porción ácida tal como pero no limitada a un ácido carboxilico, zwitteriones pueden formarse y se incluyen dentro del término "sales" como se usa en la presente. Sales farmacéuticamente aceptables (esto es, fisiológicamente aceptables, no tóxicas) son preferidas, aunque otras sales también son útiles, por ejemplo, en etapas de aislamiento o purificación las cuales pueden emplearse durante la preparación. Las sales de los compuestos de la fórmula (X) pueden formarse, por ejemplo, al hacer reaccionar un compuesto de la fórmula (X) con una cantidad de ácido o base, tal como una cantidad equivalente, en un medio tal como uno en el cual los precipitados de sal o en un medio acuoso seguido por liofilización . Los compuestos de la fórmula (X) que contienen una porción básica, tal como pero no limitado a una amina, un grupo guanidinilo, o un anillo piridilo o imidazolilo, pueden formar sales con una variedad de ácidos orgánicos e inorgánicos. Las sales de adición ácida ejemplares incluyen acetatos (tales como aquellos formados con ácido acético o ácido trihaloacético, por ejemplo, ácido trifluoroacético) , adipatos, alginatos, ascorbatos, aspartatos, benzoatos, bencensulfonatos , bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, canforatos, canforsulfonatos , ciclopentanpropionatos , digluconatos , dodecilsulfatos , etansulfonatos , fumaratos, glucoheptanoatos , glicerofosfatos, hemisulfatos , heptanoatos, hexanoatos, clorohidratos , bromohidratos , yodohidratos, hidroxietansulfonatos (por ejemplo, 2-hidroxietansulfonatos ) , lactatos, maleatos, metansulfonatos, naftalensulfonatos (por ejemplo, 2-naftalensulfonatos ) , nicotinatos, nitratos, oxalatos, pectinatos, persulfatos, fenilpropionatos (por ejemplo, 3-fenilpropionatos ) , fosfatos, picratos, pivalatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos (tales como aquellos formados con ácido sulfúrico) , sulfonatos (tales como aquellos mencionados en la presente) , tartratos, tiocianatos, toluensulfonatos tales como tosilatos, undecanoatos, y los similares . Los compuestos de la fórmula (X) que contienen una porción ácida, tal como pero no limitado a un ácido carboxilico, puede formar sales con una variedad de bases orgánicas e inorgánicas. Las sales básicas ejemplares incluyen sales de amonio; sales de metal alcalino tales como sodio, litio, y sales de potasio; sales de metal alcalinotérreo tales como sales de calcio y magnesio; sales con bases orgánicas (por ejemplo, aminas orgánicas) tales como benzatinas, diciclohexilaminas , hidrabaminas (formadas con N,N-bis (deshidroabietil ) etilendiamina) , N-metil-D-glucaminas , N-metil-D-glicamidas , t-butil aminas; y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina, y los similares. Los grupos que contienen nitrógeno básico pueden cuaternizarse con agentes tales como haluros de alquilo inferior (por ejemplo cloruros, bromuros, y yoduros de metilo, etilo, propilo, y butilo), sulfatos de dialquilo (por ejemplo sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo, y diamilo) , haluros de cadena larga (por ejemplo cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo, y estearilo) , haluros de aralquilo (por ejemplo bromuros de bencilo y fenetilo), y otros. Los solvatos de los compuestos de la invención también se contemplan en la presente. Los solvatos de los compuestos de la fórmula (X) incluyen, por ejemplo, hidratos.
Todos los estereoisómeros de los compuestos presentes (por ejemplo, aquellos los cuales pueden existir debido a carbonos asimétricos en diversos sustituyentes) , incluyendo formas enantioméricas y formas diastereoméricas , se contemplan dentro del alcance de esta invención. Los estereoisómeros individuales de los compuestos de la invención pueden, por ejemplo, ser substancialmente libre de otros isómeros (por ejemplo, como un isómero óptico puro o substancialmente puro que tiene una actividad especifica) , o puede mezclarse, por ejemplo, como racematos o con todos los otros isómeros u otros isómeros seleccionados. Los centros quirales de la presente invención pueden tener la configuración S o R como se define por la IUPAC 1974 Recommendations . Las formas racémicas pueden resolverse por métodos físicos, tales como, por ejemplo, cristalización fraccional, separación o cristalización de derivados diastereoméricos , o separación por cromatografía de columna quiral. Los isómeros ópticos individuales pueden obtenerse de procesos estereoespecíficos, en donde los materiales de partida y/o intermediarios se seleccionan que tiene una estereoquímica correspondiente con aquella para los productos finales, y la estereoquímica se mantiene a lo largo de las reacciones, y/o los isómeros pueden obtenerse de racematos por cualquier método adecuado, incluyendo sin limitación, métodos convencionales, tales como, por ejemplo, formación de sal con un ácido ópticamente activo seguido por cristalización. Todos los isómeros configuracionales de los compuestos de la presente invención se contemplan, ya sea en mezcla, o en forma pura o substancialmente pura. Como puede apreciarse, la configuración preferida puede ser una función del compuesto particular y la actividad deseada. Los isómeros configuracionales pueden prepararse por los procesos descritos en la presente, el cual puede ser estereoselectivo . En otras palabras, una estereoquímica deseada para los compuestos finales pueden realizarse al usar materiales de partida que tienen la estereoquímica deseada correspondiente, y luego mantener la estereoselectividad a lo largo del proceso de preparación. Alternativamente, los compuestos pueden prepararse como racematos o diastereómeros , y luego la estereoquímica deseada puede alcanzarse por medio de separación de isómeros configuracionales los cuales pueden alcanzarse por cualquier método adecuado conocido en el campo, por ejemplo, tal como cromatografía de columna. A lo largo de las especificaciones, los grupos y sustituyentes de los mismos pueden elegirse para proporcionar porciones y compuestos estables útiles como compuestos farmacéuticamente aceptables y/o compuestos intermediarios útiles para hacer compuestos farmacéuticamente aceptables. Una persona experimentada en el campo apreciará selecciones adecuadas para variables para realizar compuestos estables.
Las modalidades indicadas en la presente como ejemplares o preferidas se pretenden para ilustrarse y no se limitan . Otras modalidades de la invención aparentarán para una persona experimentada en el campo tales como, por ejemplo, combinaciones consideradas de las modalidades referidas arriba, y se contemplan como cubiertas dentro del alcance de la presente invención. UTILIDAD Una de las proteínas que es sobreexpresada o preferencialmente expresada en ciertas células cancerígenas es el receptor de folato. El ácido fólico se requiere para la síntesis del ADN, y se conocen ciertas células neoplásicas humanas para sobreexpresar proteínas de unión a folato. Por ejemplo, Campbell y colaboradores, "Folate Binding Protein is a Marker for Ovarían Cáncer", Cáncer Research, Vol. 51 (1 de octubre de 1991), en las pp. 5329-38, y Coney y colaboradores, "Cloning of a Tumor-Associated Antigen: M0vl8 and M0vl9 Antibodies Recognize Folate-binding Protein, " Cáncer Research, Vol. 51 (15 de noviembre de 1991), en las pp. 6125-31, describen que las proteínas de unión a folato son marcadores para el cáncer ovárico. La sobreexpresión del receptor de folato también se conoce para otros cánceres tal como, por ejemplo, piel, renal, mama, pulmón, colon, nariz, garganta, glándula mamaria, y cánceres de cerebro, así como otros cánceres referidos en la presente. Los compuestos de la presente invención son útiles y pueden suministrarse como agentes estabilizantes de microtúbulos derivados de epotilona a tumores que expresan un receptor de folato. Son útiles en el tratamiento de una variedad de cánceres y otras enfermedades proliferativas , particularmente estos cánceres caracterizados por células cancerígenas o tumores que expresan el receptor de folato. El término "condición asociada al receptor de folato" como se utiliza en la presente comprende enfermedades o trastornos caracterizados por la expresión del receptor de folato, o en otras palabras, aquellas enfermedades o trastornos que pueden diagnosticarse o tratarse basados en el nivel de expresión del receptor de folato en tejido enfermo con respecto a tejido normal. Los compuestos de la presente invención son útiles para formar conjugados. Por ejemplo, los compuestos de la invención pueden utilizarse para formar el siguiente compuesto conjugado de Fórmula I: I en donde: V es folato, o un análogo o derivado del mismo; Q es 0, S, o NR7; M es a enlazador liberable; K es 0, S, o NR7a; A es - (CRsRg) - (CH2)m-Z- en donde Z es -(CHRio)-, -C(=0)-, -C(=0)-C(=0) , -0C(=0), -N(Rn)C(=0)-, -S02-, o -N(Rn) S02-; Bi es hidroxilo o ciano y Ri es hidrógeno o Bi y Ri se toman juntos para formar un doble enlace; R2, R3, y R5 son, independientemente, hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo o arilo sustituido; o R2 y R3 pueden tomarse juntos con el carbono al cual se unen para formar un cicloalquilo opcionalmente sustituido; R4 es hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquilo sustituido, alquenilo sustituido, arilo, o arilo sustituido; R6 es hidrógeno, alquilo o alquilo sustituido; R7a, R7, R8, Rg, Rio, y R11 son independientemente hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo sustituido, heteroarilo, o heteroarilo sustituido; R12 es H, alquilo, alquilo sustituido, o halógeno; R13 es arilo, arilo sustituido, heteroarilo o heteroarilo sustituido; es O a 6; tiene la fórmula en donde R14 cada que se presenta es, independientemente, hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloalquilalquilo, cicloalquilalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilalquilo, heteroarilalquilo sustituido, heteroarilo sustituido, heterocicloalquilo, o heterocicloalquilo sustituido; q es l a 10; y Ri5 Ri6 y Rn son independientemente hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, o cicloalquilo. Como otro ejemplo no limitante, los compuestos de la invención pueden utilizarse para formar el siguiente compuesto conjugado de fórmula la: en donde V es una porción enlazada al receptor de folato. Por ejemplo, V puede tener la siguiente fórmula: R20 es hidrógeno, amino o alquilo inferior; R21 es hidrógeno, alquilo inferior, o forma un grupo cicloalquilo con R23; R22 es hidrógeno, alquilo inferior, alquenilo inferior, o alquinilo inferior; y R23 es hidrógeno o forma un cicloalquilo con R2i. Preferiblemente, V es Los compuestos de la presente invención pueden ser conjugados para formar compuestos que tienen la siguiente Fórmula Ib: Ib en donde V es una porción enlazada al receptor de folato; Q es 0, S, o NR7; M es una ligadura que se libera que tiene guíente fórmula: 0 preferiblemente ^S^^\ ^¡~~ R1 en cada caso es, independientemente, hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloalquilalquilo, cicloalquilalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilalquilo, heteroarilalquilo sustituido, heteroarilo sustituido, heterocicloalquilo, o heterocicloalquilo sustituido; y es preferiblemente un grupo seleccionado de H, metilo, guanidinilpropilo, - (CH2) i-2"C02H, -CH2-SH, -CH2-0H, imidazolil (metil) , aminobutilo, y -CH(0H)-CH3; y es más preferiblemente un alquilo Ci hasta C3 sustituido con un -C(=0)-0H o -NH-C (=NH) -NH2; q es 1 hasta 10; preferiblemente 1 hasta 5; Ri5/ Ri6 y R17 son independientemente hidrógeno, alquilo inferior o alquilo inferior sustituido; y Ríe, R19, R31, R32, R33, R2 , R25, R26, R27, R28 y R29 son cada uno, independientemente, H, alquilo inferior, alquilo inferior sustituido, cicloalquilo, o cicloalquilo sustituido, o cualquiera de Ri8 y R19; R31 y R32; R19 y R31 R33 y I R25 y R26'' R2 y R25; o R27 y R28 pueden ser tomados juntos para formar un cicloalquilo. Los compuestos de la presente invención son especialmente útiles para formar compuestos conjugados, incluyendo sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, que tienen la siguiente fórmula: Para cualquier grupo bivalente listado en la presente, tal como - (CR8R9) - (CH2) m-Z-, que es capaz de inserción en el compuesto de Fórmula I, I la inserción debe hacerse de izquierda a derecha, Por ejemplo, en la siguiente situación donde A es definida como - (CReRg) - (CH2)m~Z-, el grupo metileno se unió a K, y el grupo Z se unió al nitrógeno del anillo de aziridinilo, como sigue : Como un ejemplo no limitativo, tales cánceres asociados con el receptor de folato incluyen cáncer de ovario y cánceres de la piel, mama, pulmón, colón, nariz, garganta, glándula mamaria, hígado, riñon, bazo, y/o cerebro; mesoteliomas , adenoma pituitaria, cáncer cervical, carcinoma de célula renal u otro cáncer renal, carcinoma de plexo coroide, y tumores epiteliales (ver, Asok, Antony, "Folate Receptors : Reflections on a Personal Odyssey and a Perspective on Unfolding Truth, " Advanced Drug Delivery Reviews 56 (2004) en 1059-66) . Adicionalmente, el uso de un antiestrógeno (tales como tamoxifen, ICI 182, 780) , puede ser efectivo para incrementar la expresión FR en ciertas células cancerígenas o tipos de tumor para aumentar las ventajas obtenidas para administrar los compuestos conjugados de la invención a paciente, y/o para aumentar las diversas enfermedades o tipos de tumor que pueden tratarse con los compuestos conjugados de acuerdo a la invención. Por ejemplo, las enfermedades que pueden tratarse con los compuestos conjugados de esta invención, y/o una terapia de combinación que comprende los compuestos conjugados de esta invención en combinación con un antiestrógeno, puede incluir además, sin limitación, lo siguiente carcinomas incluyendo aquellos enlistados arriba y/o tal como vejiga, páncreas, estómago, tiroides, y próstata; tumores hematopoyéticos de linea linfoide, incluyendo leucemias tales como leucemia linfocitica aguda y leucemia linfoblástica aguda, y linfomas, tales como linfoma de célula B, linfoma de célula T, linfoma de Hodgkin, linfoma no hodgkiniano, linfoma de célula vellosa, y linfoma de Burkitts ; tumores hematopoyéticos de línea de mieloide, incluyendo leucemias mielogenas agudas y crónicas y leucemia promielocítica ; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluyendo astrocitoma, neuroblastoma, glioma, y schwannomas ; tumores de origen mesenquimal, incluyendo fibrosarcoma, rabdomiosarcoma, y osteosarcoma ; y otros tumores, incluyendo melanoma, xeroderma pigmentoso, seminoma, queratoacantoma, cáncer folicular de la tiroide, y teratocarcinoma . Los compuestos conjugados de la presente invención son útiles para tratar pacientes como se han tratado previamente para cáncer, asi como aquellos que no se han tratado previamente para cáncer. Los métodos y composiciones de esta invención pueden usarse en tratamientos de cáncer de primera linea y segunda linea. Adicionalmente, los compuestos conjugados de la fórmula I pueden ser útiles para el tratamiento refractario o resistente de cánceres. Los compuestos conjugados de la presente invención también pueden ser útiles en el tratamiento de otras condiciones con respuesta a agentes que estabilizan los microtúbulos administrados por medio del receptor de folato, incluyendo pero no se limitan a, artritis, especialmente artritis inflamatoria y otras condiciones inflamatorias mediadas por macrófagos activados, y trastornos del sistema nervioso central tal como enfermedad de Alzheimer. Adicionalmente, los pacientes que están en tratamiento con compuestos de la presente invención pueden recibir una combinación de tratamientos, por ejemplo, con otros agentes anticancerigenos y citotóxicos y otros tratamientos útiles en el tratamiento de cáncer y otras enfermedades proliferativas . En el tratamiento de cáncer, una combinación de los compuestos de la invención actual y uno o más agentes adicionales y/u otros tratamientos pueden ser ventajosos. El segundo agente puede tener el mismo o diferente mecanismo de acción que los compuestos de la fórmula (X) . Especialmente las combinaciones de fármaco citotóxicas y anticancerigenas son útiles en donde el segundo fármaco elegido actúa en una manera diferente o fase diferente del ciclo celular que la porción de fármaco activa de los compuestos presentes de la presente invención. Los ejemplos de las clases de agentes citotóxicos y anticancerigenos incluyen, pero no se limitan a, agentes alquilantes, tales como mostazas de nitrógeno, sulfonatos de alquilo, nitrosoureas , etileniminas, y triazenos; antimetabolitos , tales como antagonistas de folato, análogos de purina, y análogos de pirimidina; antibióticos o anticuerpos, tales como anticuerpos monoclonales ; enzimas; inhibidores de transferasa de la proteina de farnesilo; agentes hormonales, tales como glucocorticoides, estrógenos/antiestrógenos , andrógenos/antiandrógenos , progestinas, y anatagonistas que liberan la hormona luteinizada ; agente de disruptor de microtúbulos, tales como ecteinascidinas o sus análogos y derivados; agentes que estabilizan los microtúbulos; productos derivados de plantas, tales como alcaloides vinca, epipodofilotoxinas, y taxanos; inhibidores de topoisomerasa ; inhibidores de transferasa de la proteina de prenilo; complejos de coordinación de platino; inhibidores de cinasa incluyendo inhibidores de cinasa múltiple y/o inhibidores de cinasa Src o Src/abl; inhibidores de transducción de señal; y otros agentes usados cornos agentes anticancerigenos y citotóxicos tales como modificadores de respuesta biológica, factores de crecimiento, y moduladores inmunes. Los compuestos de la fórmula X también pueden usarse en conjunto con terapia de radiación. Los ejemplos adicionales de agentes anticancerigenos que pueden usarse en combinación con los compuestos de la invención incluyen el inhibidor de la cinasa Src, ,N-(2-cloro-ß-metilfenil ) -2- [ [ 6- [ 4- ( 2-hidroxietil ) -1-piperazinil] -2-metil-4-pirimidinil ] amino] -5-tiazolcarboxamida, y otros compuestos descritos en la Patente de EUA No. 6, 596,746 y Solicitud de Patente de EUA No. de serie 11/051,208, presentada el 4 de febrero de 2005, incorporado en la presente para referencia; ixabepilona, un análogo de aza-epotilona B, y/u otros análogos de epotilona descritos en la patente de EUA No. 6,605,599, US 6,262,094, US 6,288,237, US 6,291,684, US 6,359,140, US 6, 365, 749, US 6, 380, 395, US 6, 399,638, US 6,498, 257, US 6,518,421, US 6,576,651, US 6,593,115, US 6,613,912, US 6,624,310, Solicitud de EUA 2003/0060623, publicada en marzo de 2003; Patente Alemana No. 4138042.8; WO 97/19086, WO 98/22461, WO 98/25929, WO 98/38192, WO 99/01124, WO 99/02224, WO 99/02514, WO 99/03848, WO 99/07692, WO 99/27890, WO 99/28324, O 99/43653, O 99/54330, O 99/54318, O 99/54319, WO 99/65913, WO 99/67252, WO 99/67253, WO 00/00485, US2004/0053910 y US2004/0152708 ; inhibidores de cinasa dependientes de ciclina encontrados en WO 99/24416 (ver también Patente de EUA No. 6,040,321); inhibidores de transferasa de la proteina de prenilo encontrados en WO 97/30992 y WO 98/54966; agentes de transferasa de la proteina de farnesilo descritos en la patente de EUA No. 6,011,029; anticuerpos CTLA-4 descritos en la publicación PCT no. WO01/14424, y/o un anticuerpo CTLA-4 descrito en la publicación PCT no. WO 00/37504 tales como, por ejemplo, el anticuerpo conocido como CP-675206 u ORENCIA (necesario para verificar); MDX-010; vinflunina ( Javlor™) , Erbitux. Otros agentes potencialmente útiles en combinación con compuestos de la presente invención pueden incluir paclitaxel (TAXOL®) , docetaxel (TAXOTERE®) agentes misceláneos tales como, hidroxiurea, procarbazina, mitotano, hexametilmelamina, cisplatina y carboplatina; Avastina; Herceptina; Los compuestos de la presente invención también pueden formularse o co-administrarse con otros agentes terapéuticos que se seleccionan para su utilidad particular en administrar terapias asociadas con las condiciones antes mencionadas. Por ejemplo, los compuestos de la invención pueden formularse con agente para prevenir náusea, hipersensibilidad e irritación gástrica, tales como antieméticos, y antihistaminicos Hi y H2. Los otros agentes terapéuticos anteriores, cuando se emplean en combinación con los compuestos de la presente invención, pueden usarse, por ejemplo, en aquellas cantidades indicadas en la Physicians' Desk Reference (PDR) o como se determina de otra manera por alguien de experiencia ordinaria en la técnica. Una modalidad de la invención comprende el uso de de la compuestos de la presente invención para preparar composiciones farmacéuticas para el tratamiento del cáncer, particularmente para uso en preparar composiciones farmacéuticas para uso en fármaco dirigido administrado en tumores que sobreexpresan o preferencialmente expresan el receptor de folato. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden administrarse por cualesquiera de los usos descritos en la presente por cualquier medio adecuado, por ejemplo, parenteralmente , tales como inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, o intrasternal o técnicas de infusión (por ejemplo, como soluciones o suspensiones acuosas o no acuosas inyectables estériles) , y/o en formulaciones de dosis unitaria que contienen vehículos o diluyentes no tóxicos, farmacéuticamente aceptables. Los compuestos actuales pueden, por ejemplo, administrarse en una forma adecuada la liberación extendida o liberación inmediata.
La liberación extendida o liberación inmediata pueden realizarse por el uso de composiciones farmacéuticas adecuadas que comprenden los compuestos presentes, o, particularmente en el caso de liberación extendida, por el uso de dispositivos tales como implantes subcutáneos o bombas osmóticas. Las composiciones ejemplares para administración parenteral incluyen soluciones o suspensiones inyectables las cuales pueden contener, por ejemplo, diluyentes o solventes parenteralmente aceptables, no tóxicos adecuados, tales como manitol, 1 , 3-butanodiol , agua, solución de Ringer, una solución de cloruro de sodio isotónico (0.9% de inyección de cloruro de sodio [solución salina normal] o 5% de inyección de dextrosa) , u otros agentes de dispersión o humectantes o de suspensión, incluyendo mono- o diglicéridos sintéticos, y ácidos grasos. Las composiciones y/o métodos farmacéuticamente aceptables de compuestos de administración de la invención pueden incluir el uso de co-solventes incluyendo, pero no limitado a etanol, N,N dimetilacetamida, propilenglicol , glicerol polietilenglicoles, por ejemplo, polietilenglicol 300 y/o polietilenglicol 400, puede comprender el uso de tensoactivos (agente activo de superficie farmacéuticamente aceptable que puede usarse para incrementar las propiedades de extensión o humectantes del compuesto al reducir su tensión de superficie) , incluyendo sin limitación, Cremophor , Solutol HS , polisorbato 80, polisorbato 20, poloxámero, pirrolidonas tales como N-alquilpirrolidona (por ejemplo, N-metilpirrolidona) y/o polivinilpirrolidona; también puede comprender el uso de uno o más "amortiguadores" (por ejemplo, un ingrediente el cual imparte una capacidad para resistir un cambio en la acidez o alcalinidad de un medio hasta la adición de incrementos de un ácido o base) , incluyendo, sin limitación, fosfato de sodio, citrato de sodio, dietanolamina, trietanolamina, L-arginina, L-lisina, L-histidina, L-alanina, glicina, carbonato de sodio, trometamina (a/k/a tris [hidroximetil ] aminometano o Tris), y/o mezclas de los mismos. La cantidad efectiva del compuesto de la presente invención puede determinarse por una persona ordinaria en la técnica, y incluyen cantidades de dosis ejemplares para un adulto humano desde alrededor de 0.01-10 mg/kg de peso corporal del compuesto activo por día, el cual puede administrarse en una dosis sencilla o en la forma de dosis divididas individuales, tales como desde 1 hasta 4 veces por día. Un intervalo preferido incluyen una dosis de alrededor de 0.02 hasta 5 mg/kg de peso corporal, con un intervalo de alrededor de 0.05-0.3, son más preferidos. Se entenderá que el nivel de dosis especifico y frecuencia de dosis para cualquier sujeto particular puede variarse y dependerá de una variedad de factores incluyendo la actividad del compuesto especifico empleado, la estabilidad metabólica y longitud de acción tal compuesto, la especie, edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del sujeto, el modo y el tiempo de administración, la relación de excreción, la combinación de fármaco, y la severidad de la condición particular. Los sujetos preferidos para el tratamiento incluyen animales, más preferiblemente especies mamiferas tales como humanos, y animales domésticos tales como perros, gatos y los similares, se someten a condiciones asociadas con la estabilización de los microtúbulos . Los compuestos de la presente invención, tales como compuestos descritos en uno o más de los siguientes ejemplos, se han probado en uno o más de los ensayos descritos a continuación y/o ensayos conocidos en el campo, y demuestran un nivel medible de actividad como agentes que estabilizan los microtúbulos . ENSAYOS Ensayo de sobrevivencia de células clonogénicas Las células cancerígenas se sembraron en 3.0E+05 células en un matraz T75 con 10 mi de medio RPMI1640, libre de ácido fólico, y que contiene 10% de suero de bovino fetal y 25 mM HEPES. Las células se hicieron crecer en un incubador a 37°C que contiene 5% de CO2 durante 2 días. En el día 2, los sobrenadantes se removieron de los matraces, y los matraces se dividieron en 2 grupos. Un grupo de células se incubaron con 5 mi de medio que contiene 100 µ? de ácido fólico (Sigma) durante 30 minutos y los otros se hicieron crecer en 5 mi de medio sin agregar ácido fólico. Luego las células se trataron con 20 nM de folato-epotilona durante una hora. Al final de la incubación, los fármacos se removieron de los matraces y las células se lavaron con solución amortiguadora de PBS 3x. Después del lavado, 5 mi de medios completos se agregaron en cada matraz, y la célula se hizo crecer en el incubador C02 durante 23 horas. La mañana siguiente, las células se removieron de los matraces por tripsinización, los números de células se determinaron, y luego las células se colocaron en una placa de 6 pozos. Diez dias después de colocarse en las placas, las colonias se tiñeron con violeta cristal y se contaron. Las fracciones sobrevivientes se determinaron. Ensayo de Proliferación/citotoxicidad de MT in vitro La citotoxicidad in vitro se determinó en células neoplásicas utilizando un ensayo colorimétrico basado en tetrazolio que toma ventaja de la conversión metabólica de MTS (3- (4, 5-dimetilotiazol-2-il ) -5- ( 3-carboximetoxifenil ) -2- (4-sulfenil) -2H-tetrazolio, sal interna) para una forma reducida que absorba la luz a 492 nm. Las células se sembraron 24 horas antes de la adición de la epotilona, análogo de epotilona, epotilona conjugada, análogo de epotilona conjugado. Seguido de 72 horas de incubación a 37°C con el compuesto diluido en serie, MTS, en combinación con el metosulfato de fenazina del agente acoplador de electrón, se agregó a las células. La incubación se continuó por 3 horas, después la absorbencia del medio a 492 nm se midió con un espectrofotómetro para obtener el número células sobrevivientes con relación a las poblaciones control. Los resultados se expresan como concentraciones citotóxicas medianas (valores de CI50) . Ensayo del receptor de folato Todos los procedimientos de preparación de muestra usados para el ensayo FR se llevaron a cabo a 4°C. Las muestras de tejido se homogeneizaron en solución amortiguadora de homogeneización (lOmM Tris, pH 8.0, 0.02 mg/ml cada una de leupeptina y aprotinina; 1 mi de solución amortiguadora/50mg de tejido) usando un homogeneizador PowerGen 125. Los desechos grandes se removieron por centrifugación suave (3000g durante 15min) . Los granulados de membrana luego se recolectaron por centrifugación a 40,000g durante 60min y se volvieron a suspender en solución amortiguadora de solubilización (50mM de Tris, pH 7.4, 150mM de NaCl, 25m de n-octil-p-D-glucopiranósido, 5mM de EDTA, y 0.02% de azida de sodio). El material insoluble se removió por una segunda centrifugación 40,000g 60-min, y la concentración de proteina total de los sobrenadantes se determinó por el método de ácido bicinconinico (BCA) (Pierce Chemical). Cada muestra luego se diluyó a 0.25 mg/ml en solución amortiguadora de solubilización, y 100 ul se colocó dentro de cada uno de los dos microconcentradores Microcon-30 (30,000-MW corte completo, Millipore) . Las muestras luego se centrifugaron a 14,000g durante lOmin a temperatura ambiente para pasar todo el liquido a través de la membrana. Asi como para retener los FRs solubilizados en la superficie de la membrana de microconcentrador . Se nota que todas las etapas de centrifugación posteriores se llevarán a cabo usando estos mismos parámetros. Luego 55 µ? de 30mM de solución amortiguadora de acetato (pH 3.0) se agregó a cada microconcentrador, seguido por una etapa de centrifugación. Después, 55 µ? de solución amortiguadora salina de fosfato (PBS) se dosificó en cada microconcentrador, seguido por otra centrifugación. Luego 50 µ? de reactivo que enlaza el ácido [3H]fólico (120 nM ácido [3H] fólico (Amersham) en 10 mM de Na2P04, 1.8 mM de KH2P0 , pH 7.4, que contiene 500mM de NaCl, 2.7 mM de KC1, y 25 mM de n-octil-p-D-glucopiranósido ) o 50 µ? de un reactivo competente (reactivo enlazado plus 120 µ? de ácido fólico no etiquetado) se agregó a los concentradores apropiados. Después de una incubación de 20-min a temperatura ambiente, los concentradores se lavaron/centrifugaron tres veces con 75 µ? 50mM n-octil-p-D-glucopiranósido, 0.7M de NaCl en PBS, pH 7.4. Después del lavado final, los productos de retención que contienen los FRs solubilizados se recuperaron de la superficie de membrana de los microconcentradores por dos enjuagues con 100 µ? de PBS que contiene 4% de Tritón X-100. Las muestras luego se contaron en un contador de escintilación liquida (Packard Bioscience) . Los valores contados por minuto (cpm) se convirtieron a picomoles de FR con base en el cpm de un estándar conocido, y los resultados finales se normalizaron con respecto a la muestra de contenido de proteina. Animales y tumores Ratones hembra CD2F1 (Harían Sprague-Dawley Inc., 20-22 g) mantenidas en un ambiente controlado y proporcionado con agua y alimento ad libitum se usaron en estos estudios. El carcinoma de pulmón Madison 109 de murino ( arks y colaboradores, 1977) y la variante 98M109 que expresa FRa se usó para evaluar la eficacia de las epotilonas y los conjugados de folato-epotilona . Además, el crecimiento KB de carcinoma epidermoide de cabeza y cuello humano en ratones agénicos sin pelo también se usa para este propósito. Tratamiento con fármacos y evaluación de la eficacia antitumoral . Para la administración de epotilonas a ratones un excipiente que consiste de lo siguiente se usó: Cremofor®/etanol/agua (1:1:8, v/v) . Los compuestos primero se disolvieron en una mezcla de Cremofor®/etanol (50:50). La dilución final a la resistencia de dosis requerida se hizo en menos de 1 hr antes de la administración del fármaco. A los ratones se les administraron los agentes por inyección de bolo IV a través de la vena de la cola. Los conjugados de folato-epotilona se prepararon en solución amortiguadora salina de fosfato estéril y se administran a ratones por inyección de bolo IV a través de la vena de la cola a un volumen de 0.01 ml/g de ratón. El tratamiento de cada animal se basó en el peso corporal individual. El número requerido de animales necesarios para detectar una respuesta importante se agrupó al principio del experimento y a cada uno se le da una inoculación subcutánea de un tumor brei (2% p/v) . Los tumores se permitieron crecer durante 4 días. En el cuarto dia, los animales se distribuyeron igualmente a diversos tratamientos y grupos de control. Los animales tratados se verificaron diariamente para el tratamiento relacionado con la toxicidad/mortalidad. Cada grupo de animales se pesaron antes de iniciar el tratamiento (Wtl) y luego nuevamente después de la última dosis de tratamiento (Wt2) . La diferencia en peso corporal (Wt2-Wtl) proporciona una medida de toxicidad relacionada con el tratamiento . La respuesta del tumor se determinó por la medición de los tumores con un calibrador dos veces a la semana, hasta que los tumores alcanzaron un tamaño "objetivo" predeterminado de 1 gm. Los pesos del tumor (mg) se estimaron de la fórmula: Peso de tumor = (longitud x ancho2) ÷ 2 La actividad antitumor se evalúo en la dosis tolerada máxima (MTD) la cual se define como el nivel de dosis inmediatamente debajo de tal toxicidad excesiva (esto es más de una muerte) ocurrida. Cuando la muerte ocurre, el dia de la muerte se registra. Los ratones tratados que mueren previo a hacer que sus tumores alcancen su tamaño objetivo se consideraron por tener muerte de toxicidad por fármaco. Ningunos ratones de control mueren portando tumores de menor tamaño objetivo. Los grupos de tratamiento con más de una muerte provocada por toxicidad de fármaco se consideraron par tener tratamientos excesivamente tóxicos y sus datos no se incluyeron en la evaluación de una eficacia antitumoral en el compuesto . El punto final de la respuesta de tumor se expresó en términos de retardar el crecimiento del tumor (valor T-C) , definido cono la diferencia en tiempo (días) requeridos para el tratamiento de tumores (T) para alcanzar un tamaño objetivo predeterminado comparado con aquellos del grupo de control (C) . Para exterminar la célula de tumor estimada, el volumen del tumor en doble tiempo (TVDT) primero se calculó con la fórmula: TVDT = tiempo promedio (días) para tumores de control para alcanzar el tamaño objetivo - tiempo promedio (dias) para tumores de control para alcanzar la mitad del tamaño objetivo Y, exterminación de célula Log = T-C ÷ (3.32 x TVDT) Evaluaciones estadísticas de los datos se llevaron a cabo usando la prueba Wilcoxon generalizada de Gehan. ABREVIATURAS Las siguientes abreviaturas se usan en los esquemas y ejemplos en la presente para fácil referencia: CBZ-OSu = N- (Benciloxicarboniloxi ) succinimida DC = diclorometano DEA = dietilamina DIAD = diisopropilazodicarboxilato DIPEA = diisopropiletilamina DMA = dimetilamina DMF = dimetilformamida DMSO = dimetilsufóxido EDC = clorohidrato de 1- ( 3-dimetilaminopropil ) -3-etilcarbodiimida EtOH = etanol EtOAc = acetato de etilo FR = receptor de folato HOBt = n-hidroxi benzotriazol HPLC = cromatografía líquida de alta resolución iPr-OH or IPA = alcohol isopropilico LC/MS = cromatografía liquida/espectro de masas LDA = diisopropilamida de litio MeOH = metanol OTES = o-trietilsililo; OMs = mesilato; Ph = fenilo Pd/C = paladio en carbono PyBOP = hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-oxitripirrolidinofofonio Py = piridilo TA = temperatura ambiente Sat = saturado THF = tetrahidrofurano TFA = ácido trifluoroacético CCD = cromatografía de capa delgada TESCL = clorotrietilsilano UV = ultravioleta. METODOS DE PREPARACION Los compuestos de la presente invención pueden prepararse generalmente de acuerdo a los siguientes esquemas y al conocimiento de alguien experto en la técnica, y/o usando métodos establecidos en la Patente de EUA 6,605,599, Patente de EUA 6,831,090, Patente de EUA 6,800,653, Patente de EUA 6,291,684 y Organic Letters, 2001, 3, 2693-2696, Patente de EUA 6,719,540, Solicitud de Patente de EUA 2005/0002942, las descripciones de las cuales se incorporan en la presente para referencia y/o en los ejemplos como sigue. Como se muestra en el Esquema de Reacción 1, un compuesto de la fórmula X puede prepararse de un compuesto de la fórmula II. Los compuestos de fórmula II pueden obtenerse por fermentación (ver, por ejemplo Gerth y colaboradores, "Studies on the Biosynthesis of Epothilones: The Biosynthetic Origin of the Carbón Skeleton, " Journal of Antibiotics, Vol . 53, No. 12 (Dec. 2000), and Hofle y colaboradores, "Epothilone A and B- Novel 16-Membered Macrolides: Isolation, Crystal Structure, and Conformation in Solution", Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 35, NO. 13/14, 1567-1569 (1996), las descripciones de las cuales se incorporan en la presente para referencia) o por síntesis total (ver, por ejemplo Vite y colaboradores Patente de EUA 6,605,599; Patente de EUA 6,242,469; US 2006/004065; y US 6,867,333, las descripciones de las cuales se incorporan en la presente para referencia en su totalidad) . Por ejemplo un compuesto de la fórmula II donde R2, R3, R4, R5, y R12 son metilo, ?? es hidroxilo, Ri y R6 son hidrógeno, y R2 es 2-metiltiazol-4-ilo se refiere como epotilona A y puede obtenerse de fermentación de sorangium cellulosum como se hace referencia arriba. Un compuesto de la fórmula II puede convertirse a un compuesto de la fórmula III donde P es un grupo protector de sililo tales como trietilsililo, t-butildimetilsililo, t-butildifenilsililo, triisopropilsililo, y los similares (ver, por ejemplo, Greene y colaboradores, "Protective groups in Organic Synthesis", John iley and Sons, Inc.)- Por ejemplo, un compuesto de la fórmula III donde P es trietilsililo puede prepararse por el tratamiento de un compuesto de la fórmula II con clorotrietilsilano en presencia de una base Hunig. En el caso donde Bi es hidroxilo en el compuesto de la fórmula II, luego ?? deberá también convertirse al éter sililo correspondiente. Una halohidrina de la fórmula IV (Y es Cl, Br, o I) puede prepararse de un compuesto de la fórmula III por el tratamiento con una sal de haluro de metal por métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, la abertura de epóxido usando eterato de bromuro de magnesio a temperatura inferior (-20 hasta-5°C) puede proporcionar halohidrinas diastereoméricas, donde Y es bromo. Un compuesto de la fórmula V puede prepararse de un compuesto de la fórmula IV por desplazamiento del halógeno usando, por ejemplo, azida de sodio en un solvente polar tales como dimetilformamida. Si se desea, la inversión de la estereoquímica en la posición C12 puede alcanzarse siguiendo el protocolo Mitsunobu el cual bien se establece en la técnica. Por ejemplo, el tratamiento de un compuesto de la fórmula V con ácido p-nitrobenzoico, dietilazodicarboxilato, y trifenilfosfina proporciona el éster de nitrobenzoato correspondiente, el cual luego puede desdoblarse por hidrólisis de éster suave usando, por ejemplo, soluciones metabólicas de amoniaco para proporcionar un compuesto de la fórmula VI. Alternativamente, otros ácidos orgánicos, azodicarboxilatos, y organofosfinas pueden usarse para efectuar la inversión Mitsonuobu. Un compuesto de la fórmula VII donde OG es un grupo de partida tales como mesilato, tosilato, nosilato, triflato y los similares pueden prepararse de un compuesto de la fórmula VI por métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, el tratamiento de VI con cloruro de metansulfonilo y trietilamina en un solvente orgánico adecuado tal como diclorometano proporciona un compuesto de la fórmula VII donde OG es mesilato. Un compuesto de la fórmula VIII puede prepararse de un compuesto de la fórmula VII por reducción del grupo azido con un reactivo reductor tal como una organofosfina (por ejemplo, trimetilfosfina) . Alternativamente, un compuesto de la fórmula VIII puede prepararse directamente de un compuesto de la fórmula VI usando un agente reductor de organofosfina tal como trifenilfosfina. Un compuesto de la fórmula IX puede prepararse de un compuesto de la fórmula VIII por métodos conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Regueiro-Ren y colaboradores, Patente de EUA 6,800,653; and Regueiro-Ren y colaboradores, Organíc Letters, 2001, 3, 2693-2696) . Por ejemplo, un compuesto de la fórmula IX donde H-K-A- es 2-hidroxietilo puede prepararse de un compuesto de la fórmula VIII por alquilación del anillo aziridina usando, por ejemplo, exceso de 2-bromoetanol y una base tal como carbonato de potasio. Un compuesto de la fórmula X puede prepararse de un compuesto de la fórmula IX por la eliminación de los grupos protectores de éter de sililo usando métodos conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Greene y colaboradores, "Protective groups in Organic Synthesis", John iley and Sons, Inc.). Por ejemplo, cuando P es trietilsililo, el tratamiento de un compuesto de la fórmula IX con ácido trifluoroacético en diclorometano efectúa la desprotección para proporcionar un compuesto de la fórmula X.
ESQUEMA DE REACCIÓN 1 Como se muestra en el Esquema de Reacción 2 un proceso para elaborar un análogo o derivado de folato V y la ligadura bivalente T-Q que tienen la fórmula XI, que pueden usarse con compuestos de la invención para elaborar moléculas conjugadas para suministrar el fármaco dirigido, por ejemplo, como por la fórmula I, previamente descrita. Como se muestra en el Esquema de Reacción 2, un análogo de folato y enlazador bivalente pueden ensamblarse utilizando métodos conocidos en la técnica, especialmente en el caso donde V es ácido fólico o un análogo de ácido fólico, como se describe, por ejemplo, por Jackson, y colaboradores, Advanced Drug Delivery Rev. 56(2004) 1111-1125, la descripción de la cual se incorpora en la presente para referencia, y T-Q es un péptido. Por ejemplo, peptidil folato XI puede prepararse como se muestra en el Esquema de Reacción 2. El acoplamiento de péptido secuencial de una resina de poliestireno cargada con cisteina con aspartato protegido por Fmoc, arginina, aspartato, y luego glutamato puede efectuarse usando PyBOP como agente de acoplamiento y piperidina como agente de desprotección Fmoc. El ácido pteróico protegido por N10-trifluoroacetamida puede prepararse en dos etapas por conversión enzimática (carboxipeptidasa G) de ácido fólico hasta ácido pteróico, seguido por protección N10 usando anhídrido trifluoroacético. Después, el acoplamiento del ácido pteróico protegido por N10 al péptido enlazado a la resina seguido por desdoblamiento de la resina con ácido trifluoroacético y la eliminación del grupo N10-trifluoroacetilo usando hidróxido de amonio proporciona un fragmento V-T-Q donde V es ácido fólico y T-Q es -Asp-Arg-Asp-Cys-OH. Alternativamente, los análogos del ácido pteróico puede usarse en lugar del ácido pteróico y otros aminoácidos, puede usarse en lugar de aquellos ilustrados en el Esquema de Reacción 2.
Esquema de Reacción 2 H-Cys(4-metox¡tritil)-2-clorotritil-resina (cargado 0.57 mmol/g) F, , F, F, El Esquema de Reacción 3, más adelante, muestra un método para utilizar los derivados de epotilona de la presente invención para preparar una molécula conjugada de fórmula I, para uso en el suministro del fármaco dirigido. Como se muestra en el Esquema de Reacción 3, el ensamble de los compuestos de fórmula I pueden realizarse por el acoplamiento del compuesto de fórmula X para un fragmento V-T-Q por la incorporación en etapa de una ligadura libre M. A manera de ilustración, un compuesto de la fórmula X donde -A-K-H es -CH2CH2OH puede convertirse a un carbonato de disulfaniletilo XIII usando un compuesto benzotriazol activado de la fórmula XII. Un compuesto de la fórmula XII puede prepararse de mercaptoetanol, cloruro de metoxicarbonil sulfenilo, y una 2-mercaptopiridina opcionalmente sustituido para proporcionar un intermediario 2- (2-piridin-2- il)disulfanil)etanol, el cual luego puede convertirse a un compuesto de la fórmula XII por el tratamiento con difosgeno y un 1- hidroxibenzotriazol opcionalmente sustituido. El intercambio de disulfuro posterior con un peptidil folato tal como XI proporciona un compuesto de la fórmula I donde V es ácido fólico, T-Q es una -Asp-Arg- Asp-Cys-OH, M es -SCH2CH20(C=0)-, A es -CH2CH2- y K es O.
ESQUEMA DE REACCION 3 El esquema 4 ilustra un método alternativo para fabricar un compuesto de Fórmula X de un compuesto de Fórmula XIV (ver, solicitud de patente Norteamericana No. 60/940,088, presentada el 25 de mayo de 2006, incorporada en la presente en su totalidad por referencia) . Los compuestos de Fórmula XIV pueden obtener se por los métodos bien conocidos en el campo, por ejemplo, por fermentación (ver, Gerth y colaboradores, "Studies on the Biosynthesis of Epothilones: The Biosynthetic Origin of the Carbón Skeleton, " Journal of Antibiotics, Vol. 53, No. 12 (diciembre de 2000) , y Hofle y colaboradores, "Epothilone A y B- Novel 16-Membered Macrolides: Isolation, Crystal Structure, y Conformation in Solution", Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 35, No. 13/14, 1567-1569 (1996), las descripciones de las cuales se incorporan en la presente por referencia) o por síntesis total (ver, por ejemplo Vite y colaboradores Patentes Norteamericanas Nos. 6, 605, 599; 6,242,469; 6,867,333 y Pub. de Patente Norteamericana No. 2006/004065, las descripciones de las cuales se incorporan en la presente por referencia en su totalidad). Por ejemplo un compuesto de Fórmula XIV donde R2, R3, R4, R5, y Ri2 son metilo, hidroxilo, Ri es hidroxilo, Ri y R6 son hidrógeno, y R2 es 2-metilotiazol-4-ilo es refirido como epotilona C y puede obtenerse de la fermentación de Sorangium cellulosum como se referenció antes. Un compuesto de Fórmula XIV puede convertirse a un compuesto de Fórmula XV donde P es un grupo de protección de sililo tal como trietilsililo, t- butildimetilosililo , t-butildif enilsililo , triisopropilsililo , y similares (ver, por ej emplo, Greene y colaboradores , " Protective groups in Organic Synthesis " , John iley y Sons , Inc . ) - Por ej emplo , un compuesto de Fórmula XV donde P es trietilsililo puede prepararse por tratamiento de un compuesto de Fórmula XIV con clorotrietilsilano en presencia de base tal como base de Hunig . En el caso donde Bi es hidroxilo en el compuesto de Fórmula XIV, después Bi también se convierte al sililéter correspondiente . Una halohidrina de Fórmula XVI o XVI I (Y es Cl , Br, o I ) puede prepararse a partir del compuesto de Fórmula XV por tratamiento con un agente de halogenación tal como Y2. Por ej emplo , la adición electrof ilica en solventes polares tal como acetonitrilo que utiliza yodo puede estereoselectivamente proporcionar halohidrinas regioisoméricas de Fórmulas XVI y XVII, donde Y es yodo. Alternativamente las succinimidas de N-halo pueden también utilizarse para la misma transformación. Un compuesto de Fórmula XVIII puede prepararse a partir de compuestos de Fórmulas XVI y/o XVII por cierre del anillo de epóxido en presencia de bases tal como trietilamina o base de Hunig en un sistema solvente polar/acuoso tal como acetonitrilo/agua. Si se desea, el compuesto XIV puede transformarse directamente en compuestos de Fórmula XVI y/o XVII (donde P es H) , que podrá después convertirse en el epóxido XVIII (donde P es H) . Un compuesto de Fórmula XVIII puede transformarse en azido-alcoholes de Fórmulas VI y XIX por desplazamiento de azida en presencia de sales de azida inorgánicas o azidas de amonio de tetra-alquilo en solventes alcohólicos. En el caso donde P es un grupo de protección de lsililo, los compuestos de Fórmulas XX y/o XXI donde OG es un grupo saliente tal como mesilato, tosilato, nosilato, triflato y similares puede prepararse a partir de los compuestos de Fórmulas VI y/o XIX por métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, el tratamiento de VI y/o XIX con cloruro de metansulfonilo y trietilamina en un solvente orgánico adecuado tal como diclorometano proporciona compuestos de Fórmulas XX y XXI donde OG es mesilato. Un compuesto de Fórmula VIII puede prepararse a partir de compuestos de Fórmulas XX y/o XXI por reducción del grupo azido a través de métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, el compuesto VIII puede prepararse a partir de compuestos de Fórmulas XX y/o XXI a través de la reacción con un agente de reducción tal como una organofosfina (por ejemplo, trimetilfosfina) en solventes polares tal como acetonitrilo. Alternativamente, cuando P es H, el compuesto de Fórmula VIII puede prepararse directamente a partir de compuestos de Fórmulas VI y/o XIX por reducción del grupo azido con un agente de reducción tal como una organofosfina (por ejemplo, trifenilfosfina) en solventes polares tal como acetonitrilo. Un compuesto de Fórmula IX puede· prepararse a partir del compuesto de Fórmula VIII por métodos conocidos en la técnica (ver, Patente Norteamericana No. 6,800,653; y Regueiro-Ren y colaboradores, Organic Letters, 2001, 3, 2693-2696) . Por ejemplo, el compuesto de Fórmula IX donde H-K-A- es 2-hidroxietilo puede prepararse a partir del compuesto de Fórmula VIII por alquilación del anillo de aziridina, por ejemplo, exceso de 2-bromoetanol y una base tal como carbonato de potasio. En caso de que P sea un trialquilsililo, el compuesto de Fórmula X puede prepararse a partir del compuesto de Fórmula IX por eliminación de los grupos de protección de sililéter usando métodos conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Greene y colaboradores, "Protective groups in Organic Synthesis", John Wiley y Sons, Inc.). Por ejemplo, cuando P es trietilsililo, el tratamiento de un compuesto de Fórmula IX con ácido trifluoracético en diclorometano efectúa la desprotección para proporcionar un compuesto de Fórmula X.
La invención ahora se describirá adicionalmente con referencia a los siguientes ejemplos ilustrativos. EJEMPLOS EJEMPLO 1: Análogos del epotilona conjugada de folato Como se describe en la descripción detallada anterior, los análogos y derivados de folato se describen en Vlahov. En la búsqueda y desarrollo dirigido hacia el receptor de folato que dirige a células neoplásicas de epotilona conjugada y compuestos análogos de epotilona, varios compuestos se conjugaron al folato. Por ejemplo, el compuesto BB y compuesto AA se consideran como candidatos para la conjugación a ácido fólico: Compuesto AA Compuesto BB El compuesto AA tiene actividad en los ensayos clínicos de Fase II, y seis conjugados de folato del Compuesto AA (Compuestos AA.I a AA.VI; ver FIG. 1) se preparó y opcionalmente probó para estabilidad química, unión de FR, y actividad mediada de FR en cultivo celular. La unión de estos conjugados de folato del Compuesto AA a FR se determinó en un ensayo que mide el desplazamiento del ácido fólico radiomarcado de FR expresado en las células neoplásicas de KB crecidas a confluencia. Encontrando los conjugados de folato de los Compuestos AA.I y AA.II a FR se consideraron aceptables [afinidad relativa (RA) >0.25; RA del ácido fólico = 1.0]. Sin embargo, sorpresivamente, ningunos de los seis conjugados del Compuesto AA mostradas en la Fig. 1 exhibió citotoxicidad apreciable contra células neoplásicas de KB en ensayos de antiproliferación que miden la incorporación de timidina 3H- (datos no mostrados). Puesto que los conjugados del Compuesto AA demostraron citotoxicidad decepcionante contra células neoplásicas, los estudios se condujeron usando tres conjugados del Compuesto BB (Compuestos BB.I a BB.III). El Compuesto BB es también conocido como epotilona F, y es un análogo del Compuesto AA, donde el grupo 21-amino es sustituido por un grupo 21-hidroxilo . Mientras que el Compuesto BB.II (Fig. 2) exhibió citotoxicidad a concentraciones altas, la actividad no se atenuó en estudios de competición usando exceso de ácido fólico. Por lo tanto, la citotoxicidad observada se atribuyó a liberación no especifica del Compuesto BB.II. Otros análogos de epotilona, por ejemplo, epotilonas de aziridinilo, se conocen en la técnica (ver, por ejemplo, Patente Norteamericana No. 6,399,638; Regueiro-Ren, A, y colaboradores (2001) Org. Letters. 3:2693-96) y mostraron citotoxicidad antitumoral potente. Por ejemplo, un ensayo de MTS que comparó la potencia citotóxica relativa de un número de análogos de epotilona contra un par de lineas celulares de cáncer resistentes a taxano (HCTVM46 y A2790Tax) se condujeron (ver Tabla 1) . HCTVM46 es una linea celular de carcinoma del clon humano derivada de la linea madre HCT116, y es resistente a taxanos debido a sobreexpresión del transportador de afluencia del fármaco de p-gliproteina 170kD. A2780Tax es una linea celular del carcinoma ovárico humano derivado de la linea A2780 madre, y es resistente a paclitaxel como resultado de una mutación en la secuencia del aminoácido de tubulina que deteriora la capacidad del paclitaxel a unión. Como es muestra en la Tabla 1, varios análogos de epotilona de aziridinilo (Compuestos CC-EE) muestran actividad antitumoral potente contra las líneas celulares del carcinoma de colon HCT116 y ovárico A2780 y, comparada con otros agente antitumorales conocidos, por ejemplo, paclitaxel, Compuesto AA, y epotilona B. Tabla 1. Actividad in vitro de epotilonas de 12,13- aziridinilo promedio 1 SD calculado de cuatro experimentos separados . 2 Proporción de R/S = HCT116 CI50/HCT116VM46CI50 3 Proporción de R/S = A2780CI50/A2780Tax CI50 A pesar de las actividades antitumorales de los compuestos CC-EE de epotilona de aziridinilo, los únicos grupos hidroxilo en estas moléculas disponibles para conjugación a folato son las encontradas en los átomos de carbono C3 y C7. Por lo tanto, investigando un número de compuestos y análogos de epotilona, sigue siendo un desafio a descubrir un compuesto que esté fácilmente disponible para la conjugación a folato, y que demuestre actividad vía la liberación especifica de la porción de epotilona activa en las células neoplásicas. El compuesto G de epotilona de aziridinilo se descubrió, que tiene la Fórmula, Compuesto G El Compuesto G (ver Ejemplos 2 y 3) probaron sorpresivamente fácil conjugar al ácido fólico para formar el Compuesto J (ver Ejemplo 2) con afinidad relativa de 0.77 para el receptor de folato, cuando se comparó un ácido fólico. Inesperadamente, el grupo hidroxilo polar en la cadena lateral de aziridina no afectó adversamente la actividad antitumoral de los análogos de epotilona de aziridina. Este es importante debido a que él es el análogo de epotilona de aziridina, por ejemplo, Compuesto G, que media los efectos antitumoralesales sobre la liberación del ácido fólico. La potencia del Compuesto G, y otros tres análogos de epotilona altamente potentes ( ixabepilona, Compuesto AA, y Compuesto BB) se evaluó por el ensayo de formación de colonia que es describió antes. La concentración necesitó una eliminación del 90% de células cancerígenas clonogénicas KB (CI90) se determinó después de una duración de exposición a fármaco de 17 horas. Como se muestra en la Fig. 3, el Compuesto G exhibió un CI90 de 4.3 nM y fue ~2, 4, y 6-veces más potente que el Compuesto CC, Compuesto AA, e ixabepilona, respectivamente . La conjugación del compuesto G para formar el Compuesto J no afectó la actividad antitumoral del Compuesto G. El Compuesto J demostrada actividad citotóxica sustancial contra células neoplásicas in vivo. En el modelo de tumor KB in vivo FRa ( + ) , el Compuesto J demostró actividad de ambos en dosis tolerada máxima (MTD) y a dos niveles de dosis inferiores que produjeron toxicidad mínima (ver Figs . 4A-4B) . En cambio, la ixabepilona fue activa solamente en su MTD (5 mol/kg) . Cuando se comparó en los MTDs, el Compuesto J produjo efectos ant i tumoralesales superiores que la ixabepilona (Figs. 4B) .
Compuesto J En cambio, con el modelo de tumor madre FRa(-) M109J, el compuesto tiene actividad pobre en todos los niveles de dosis probados, incluyendo en su MTD (2.4 µ?t???/kg) , mientras que la ixabepilona fue activa en su MTD de 5 (Fig. 5). Estos resultados indican que el FR (-) M109 es sensible a ixabepilona y la inactividad del Compuesto J es probablemente en gran parte una consecuencia de la ausencia de expresión de FRa por este tumor. Estos resultados también proporcionan evidencia que la actividad antitumoral del Compuesto J puede mediarse a través de los receptores de FRa. La evidencia adicional del mecanismo de liberación de fármaco mediado por FRa del Compuesto J es proporcionada por la observación que la co-administración de un análogo de folato a exceso de 20 veces de la dosis del Compuesto J podrá sustancialmente competir con el Compuesto J para el receptor de unión y protege los tumores FRa(+)98M109 contra los efectos antitumoralesales del Compuesto J. (Fig. 6) . Puesto que el Compuesto G y el conjugado (Compuesto J) tiene sorpresivamente efectos antitumoralesales ambos in vitro e in vivo, y puesto que las actividades antitumorales del Compuesto J pueden atribuirse a efectos mediados por FR (+), también descrito en la presente está la conjugación de la epotilona de aziridinilo análoga al Compuesto G (ver Ejemplos 2 y 3) para formar el Compuesto J. (ver Ejemplo 2).
EJEMPLO 2: PREPARACION DEL COMPUESTO J Ácido (S) -2- (4- ( (2-amino-4-oxo-3, 4-dihidropteridin- 6-il ) metilamino) benzamido) -5- ( ( S ) -3-carboxi-l- ((S)-l-((S)-3-carboxi-1- ( (R) -l-carboxi-2- ( 2- (2- ( (2- ( (1S, 3S, 7S, 10R, 11S, 12S, 16R) -7 , ll-dihidroxi-8 , 8 , 10 , 12-tetrametil-3- ( (E) -1- (2-metiltiazol-4-il) prop-l-en-2-il ) -5, 9-dioxo-4-oxa-17-aza-biciclo [14.1.0] heptadecan-17-il) etoxi) carboniloxi) etil) disulfanil) etilamino) -l-oxopropan-2-ilamino) -5-guanidino-l-oxopentan-2-ilamino) -l-oxopropan-2-ilamino) -5-oxopentanoico A. [1S- [IR* , 3R* (E) , 7R* , IOS* , 11R* , 12R* , 16S*] ] -8 , 8 , 10 , 12-Tetrametil-3- [l-metil-2- (2-metil-4-tiazolil) etenil] -7 , 11-bis [ (trietilsili) oxi] -4 , 17-dioxabiciclo [14.1.0] heptadecan-5 , 9-diona A una solución agitada de epotilona A (5.0 g, 10.1 mmol), imidazol (3.40 g, 49.9 mmol) y DIPEA (28.5 mi, 163.6 mmol) en DMF anhidro (100 mi) bajo atmósfera N2 se agregó cloruro de trietilsililo (15.0 mi, 89.4 mmol). Después la adición se completó, la solución de reacción se calentó a 55°C (temperatura en baño de aceite) durante 12 hr para dar una mancha sencilla (tic) del producto deseado. La reacción anterior se repitió dos veces más. El DMF de la solución combinada se destiló bajo alto vacio. El residuo espumoso se purificó por cromatografía de columna (gel de sílice, E. Merck, malla 230-400, 600 g; 5: 95, 10:90 y 15:85 EtOAc/hexanos ) para dar 19.4 g (88.6%) del compuesto A como un sólido blanco. HPLC: ES Industries FluoroSep RP fenilo, 4.6 x 250mm, isocrático, 30 min, 100%B, (B = 90% de MeOH/H20 + 0.2% de H3PO4) , relación de flujo a 1.0 ml/min, UV 254, t = 23.15 min. LC/MS (ES+) 722 (M+H) .
B. Preparación de [4S- [4R* , 7S* , 8R* , 9R* , 13S* , 14S* , 16R* (E) ] ] - 14-bromo-13-hidroxi-5 ,5,7, 9-tetrametil-16- [l-metil-2- (2-metil- 4-tiazolil) etenil] -4 , 8-bis [ (trietilsilil) oxi] -1- oxaciclohexadecan-2 , 6-diona [IR*, 3R* (E) , 7R* , IOS*, 11R*, 12R* , 16S* ] ] -8, 8, 10, 12-Tetrametil-3- [ l-metil-2- (2-metil-4-tiazolil) etenil] -7,11- bis [ (trietilsili) oxi] -4 , 17-dioxabiciclo [14.1.0] heptadecan-5, 9- diona (5.0 g, 6.92 mmol) en diclorometano anhidro (140 mi) a - 20°C bajo atmósfera de N2 se agregó MgBr2-Et20 (3 x 2.13 g, 24.78 mmol) en tres porciones cada dos horas mientras mantiene una temperatura interna debajo de -5°C. Después de alrededor de 7 hr, la mezcla de reacción se diluyó con diclorometano y se lava con NaHC03 saturado (2 x) , se seca sobre Na2S04 anhidro y se evapora en vacio para dar una espuma. El residuo se purificó por cromatografía de columna (gel de sílice, E. Merck, malla 230-400, 180 g ; 5: 95, 7.5:92.5 y 12.5:87.5 EtOAc/hexanos ) para dar el compuesto B (2.5 g, 45% de rendimiento) como una espuma blanca junto con el material de partida recuperado (0.9 g, 18%). HPLC: ES Industries FluoroSep RP fenilo, 4.6 x 250 mm, isocrático, 30 min, 100%B, (B = 90% de MeOH/H20 + 0.2% de H3PO4) , relación de flujo a 1.0 ml/min, UV 254, t =14.37 min. (100% puro) LC/ S (ES+) : 802 (M+H) C. Preparación de [4S- [4R* , 7S* , 8R* , 9R* , 13S* , 14R* , 16R* (E) ] ] - 14-Azido-13-hidroxi-5 ,5,7, 9-tetrametil-16- [l-metil-2- (2-metil- 4-tiazolil) etenil] -4 , 8-bis [ (trietilsilil) oxi] -1- oxaciclohexadecan-2 , 6-diona A una solución de [4S- [4R*, 7S*, 8R*, 9R*, 13S*, 14S*, 16R* (E) ] ] -14-bromo-13-hidroxi- 5,5,7, 9-tetrametil-16- [l-metil-2- (2-metil-4-tiazolil) etenil] - 4 , 8-bis [ (trietilsilil) oxi] -l-oxaciclohexadecan-2 , 6-diona (9.9 g, 12.3 mmol) en 1.2 L de DMF se agregaron azida de sodio (8.01 g, 123.3 mmol) y 18-corona-6 (3.26 g, 12.3 mmol) a temperatura ambiente bajo atmósfera de N2. La solución transparente se agitó mecánicamente a temperatura ambiente durante 7 días. La solución se diluyó con EtOAc (4 1), y se lava con H20 (6 x 3 1). La capa orgánica se secó (Na2S04) , y luego se evapora para dar 9.2 g del producto crudo. La cromatografía de columna (gel de sílice 450 g, 5-15% EtOAc/hexano) proporciona 6.7 g (71% de rendimiento) del compuesto C como una espuma blanca.
HPLC: YMC ODS-A S5, 4.6 x 50mm, isocrático, 30 min 100%B. (B = 90% de MeOH/H20 + 0.2% de H3P04) , relación de fluj a 4.0 ml/min, UV 254 nm, t =2.00 min. LC/ S (ES+) 765 (M+H) . D. Preparación de [4S- [4R* , 7S* , 8R* , 9R* , 13R* , 14R* , 16R* (E) ] ] 1 -Azido-5,5, 7 , 9-tetrametil-16- [l-metil-2- (2-metil-4- tiazolil) etenil] -13- [ (4-nitrobenzoil) oxi] -4 , 8- bis [ ( rietilsilil) oxi] -l-oxaciclohexadecan-2 , 6-diona Azido-13-hidroxi-5, 5,7, 9-tetrametil-16- [l-metil-2- (2-metil-4- tiazolil) etenil] -4, 8 -bis [ (trietilsilil) oxi] -1- oxaciclohexadecan-2 , 6-diona (7.0g, 9.15 mmol) , ácido 4- nitrobenzoico (3.82g, 22.9 mmol), y trifenilfosfina (6.0g, 22.9 mmol) se disolvieron en THF (100 mi). El dietilazodicarboxilato (9.0 mi de 40% de solución en tolueno, 22.9 mmol) se agregaron durante un periodo de 5 minutos. La mezcla de reacción se mantuvo a temperatura ambiente durante 4 hr, se concentra y se purifica por cromatografía en gel de sílice (gradiente en etapas desde 5% de etilacetato/hexanos hasta 15% de etilacetato/hexanos) para aislar el éster nitrobenzoato como una espuma blanca (7.3g, 87%). LC-MS: Phenomenex C18, 4.6 x 50mm, isocrático, 15 min, 100%B. (B = 90% de MeOH/H20 + 0.1% de TFA) , relación de flujo a 4.0 ml/min, UV 220 nm. Tiempo de retención =8.9 min. EM (ESI) M+H = 886.7 E. Preparación de [4S- [4R* , 7S* , 8R* , 9R* , 13R* , 14R* , 16R* (E) ] ] -14-Azido-13-hidroxi-5 ,5,7, 9-tetrametil-16- [l-metil-2- (2-metil-4-tiazolil) etenil] -4 , 8-bis [ (trietilsilil) oxi] -1-oxaciclohexadecan-2 , 6-diona El éster de nitrobenzoato, el compuesto D (7.3g, 7.98 mmol) , se disolvió en acetato de etilo (35 mi) y se enfria hasta 0°C. El amoniaco en metanol (350 mi de 2M de solución en metanol) se agregó, y la mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 4 hr, se concentra y purifica por cromatografía en gel de sílice (gradiente en etapas desde 10% de etilacetato/hexanos hasta 30% de etilacetato/hexanos ) para aislar [4S- [4R*, 7S*, 8R*, 9R*, 13R*, 14R*, 16R* (E) ] ] -14-Azido-13-hidroxi-5,5,7, 9-tetrametil-16- [l-metil-2- (2-metil-4-tiazolil) etenil] - 4 , 8-bis [ (trietilsilil)oxi] -l-oxaciclohexadecan-2 , 6-diona como un sólido blanco vidrioso (5.97g, 98%) . LC- S: Phenomenex C18, 4.6 x 50mm, isocrático, 5 min, 100%B. (B = 90% eOH/H20 + 0.1% TFA) , relación de flujo a 4.0 ml/min, UV 220 nm. Tiempo de retención = 2.25 min. E (ESI) +H = 765.66 F. Preparación de [1S- [IR* , 3R* (E) , 7R* , IOS* , 11R* , 12R* , 16S*] ] -8,8,10, 12-Tetrametil-3- [l-metil-2- (2-metil-4-tiazolil) etenil] -7 , 11-bis [ (trietilsilil) oxi] -4-oxa-17-azabiciclo [14.1.0] heptadecan-5 , 9-diona [ 4 S- [ 4R* , 7S*, 8R* , 9R* , 13R* , 14R* , 16R* (E) ] ] -14-Azido-13-hidroxi-5 , 5,7, 9-tetrametil-16- t l-metil-2- ( 2 -metí 1-4-tiazolil) etenil] -4, 8-bis [ (trietilsilil) oxi] -1-oxaciclohexadecan-2 , 6-diona (5.97g, 7.8 mmol) y trietilamina (4.34 mi, 31.2 mmol) se disolvieron en diclorometano (85 mi) y se enfria hasta 0°C. El metansulfonilcloruro (1.8 mi, 23.4 mmol) se agregó gota a gota durante un periodo de 5 min. Después 10 min, la mezcla de reacción se removió del baño de hielo, y se agita a temperatura ambiente. Después de 3 hr, la mezcla de reacción se tomó en NaHC03 saturado (300 mi), se extrae con diclorometano (3 X 100 mi), se seca sobre Na2S04, se concentra y se toma para la siguiente etapa sin purificación adicional . El éster de metansulfonato crudo se disolvió en THF/H20 (12:1, 130 mi). La trietilamina (2.2 mi, 16 mmol) y trimetilfosfina (16 mmol, 16 mi de 1.0 M de solución en THF) se agregaron, y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente. Después de 3 hr, la reacción se calentó a 45°C durante 7 hr, se concentra y se purifica por cromatografía en gel de sílice (gradiente en etapas desde 2% de metanol/cloroformo hasta 5% de metanol/cloroformo) para aislar el compuesto F como un sólido blanco (5.08g, 88% durante dos etapas) . LC-MS: Phenomenex C18, 4.6 x 50mm, isocrático, 5 min, 100%B. (B = 90% de MeOH/H20 + 0.1% de TFA), relación de flujo a 4.0 ml/min, UV 220 nm. Tiempo de retención = 0.298 min. EM (ESI) M+H = 721.58 G. Preparación de [1S- [IR* , 3R* (E) , 7R* , IOS* , 11R* , 12R* , 16S*] ] -7 , ll-Dihidroxi-17- [2-hidroxietil] -8,8,10, 12-tetrametil-3- [1-metil-2- (2-metil-4-tiazolil) etenil] -4-oxa-17-azabiciclo [14.1.0] heptadecan-5 , 9-diona El K2C03 (1.4g, 10.2 mmol) y 2-bromoetanol (0.52 mi, mmol) se agregaron a [1S- [IR*, 3R* (E) , 7R*, IOS*, 11R*, 12R*, 16S*] ] -8 , 8 , 10 , 12-Tetrametil-3-[l-metil-2- (2-metil-4-tiazolil) etenil] -7 , 11-bis [ (trietilsilil)oxi] -4 -oxa-17-azabiciclo [14.1.0] heptadecan-5,9-diona (1.05g, 1.46 mmol) en acetonitrilo (20 mi) y se calienta hasta 82°C. Después de 4 hr, 2-bromoetanol adicional (0.52 mi, 7.3 mmol) y K2C03 (1.4g, 10.2 mmol) se agregaron. Después de 5 hr, 2-bromoetanol adicional (0.21 mi, 2.92 mmol) se agregó. Después de 3 hr, la mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtra a través de Celite, se lava con acetonitrilo (5 X 5 mi), diclorometano (2 X 5 mi), se concentra y se toma para la siguiente etapa sin purificación adicional . El producto de reacción crudo se disolvió en diclorometano (40 mi), se enfrió hasta 0°C, y ácido trifluoroacético (8.0 mi) se agregó. Después de 1 hr, la mezcla de reacción se concentró, se toma en NaHC03 saturado (200 mi), se extrae con diclorometano (3 X 100 mi), se seca sobre Na2S04, se concentra, y purifica por cromatografía en gel de sílice (10% metanol/diclorometano) para aislar [1S- [IR*, 3R* (E) , 7R*, IOS*, 11R*, 12R*, 16S*] ] - , ll-Dihidroxi-17- [2-hidroxietil] -8, 8, 10, 12-tetrametil-3- [l-metil-2- (2-metil-4-tiazolil) etenil] - -oxa-17-azabiciclo [14.1.0] heptadecan-5, 9-diona, como una película transparente (0.62g, 79% durante dos etapas) . LC- S: Waters Sunfire C18, 4.6 x 50mm, gradiente, 0 hasta 100%B durante 4 min. (A= 10% de MeOH/H20 + 0.1% de TFA; B = 90% de eOH/H20 + 0.1% de TFA), relación de flujo a 4.0 ml/min, UV 220, nm. Tiempo de retención = 2.12 min. E (ESI) +H = 537.52. H. Preparación de ácido (S) -2- (4- ( (2-amino-4-oxo-3 , 4-dihidropteridin-6-il) metilamino) benzamido) -5- ( (S) -3-carboxi-l- ( (S) -1- ( (S) -3-carboxi-l- ( (S) -l-carboxi-2-mercaptoetilamino) -1-oxopropan-2-ilamino) -5-guanidino-l-oxopentan-2-ilamino) -1-oxopropan-2-ilamino) -5-oxopentanoico El ácido (S) -2- (4- ( ( 2 - ami no - 4 - oxo- 3 , 4-dihidropteridin-6-il)metilamino) benzamido) -5- ( (S) -3-carboxi-l-( (S)-l-( (S) -3-carboxi-l- ( (S)-l-carboxi-2-mercaptoet i lamino) -l-oxopropan-2- i lamino) -5-guanidino-l-oxopentan-2-ilamino) -l-oxopropan-2-ilamino) -5-oxopent ano i co se sintetizó por síntesis de péptido de fase sólida en cinco etapas iniciando a partir de H -Cys ( 4 -metoxitrit il ) - 2 - el or ot r i t i 1 - r e s i na . La tabla 2 muestra la cantidad de reactivos usados en la síntesis.
TABLA 2 Los siguientes procedimientos se usaron: Etapas de acoplamiento: A la resina en un recipiente de síntesis de péptido se agregaron a la solución de aminoácido, DIPEA, y PyBOP. La mezcla se burbujeó durante lhr y se lava 3X con DMF y alcohol isopropílico . La desprotección FMOC se efectúo por el tratamiento con 20% de piperidina en DMF, 2X (lOmin), antes de cada acoplamiento de aminoácido. Esta secuencia se repitió para cada esta de acoplamiento de aminoácido. Síntesis de ácido pteroico protegido por N10-TFA: A 10 L de 0.1 M de solución base tris (121.1 g base tris en 10 L de agua) en un matraz de fondo redondo agitado mecánicamente de 22 L, equipado con una manta caliente, se agregó 200 g (0.453 moles) de ácido fólico. La mezcla se agitó para disolver el ácido fólico, y luego 500 mg (3.67 mmol) cloruro de zinc se agregó. La carboxipeptidasa G (13 x 20 viales de unidad disponibles de Sigma) se agregó y el pH se ajustó hasta 7.3 con HC1 1N y se mantiene a lo largo de la reacción. La mezcla se protegió de la luz y se calienta a 30°C durante 8-10 días (el uso de un auto-titulador para mantener el pH constante reducido por el tiempo de conversión por 4-5 días) . La reacción se monitoreó por HPLC analítica hasta 80% de la conversión se alcanzó (la conversión adicional es deseable pero no se ha optimizado) . El producto se precipitó de la mezcla de reacción al ajustar la solución hasta pH=3.0 usando HC1 6N . La mezcla espesa se transfirió a un vial centrífugo y se centrifuga a 4000 rpm durante 10 min. El sobrenadante se decantó. El sólido húmedo luego se purificó directamente como sigue (el sólido húmedo puede congelarse para almacenaje o primero secado por congelación; sin embargo, el almacenaje de los sólidos húmedos en el congelador hasta que la disolución fue más eficiente) A 40 g del ácido pteróico crudo en 700 mi de agua se agregó 1.0 M NaOH hasta que el pH=11.5. La mezcla se filtró (Whatman tipo 1) y luego se cromatografía (columna: 10 x 120 era; fase estacionaria: 8 kg celulosa DEAE; fase móvil: 1.0 M NaCl/0.01 M NaOH, pH=11.5; relación de flujo: 17 ml/min) . Las fracciones de color amarillas de 1 litro se recolectaron y se analizan por HPLC.
El ácido pteroico puro que contiene fracciones se ajustó hasta pH=3 con 6 M HCl hasta ácido pteroico precipitado. La mezcla se centrifugó a 3000 rpm durante 20 min. El sobrenadante se decantó y se lava con agua (3x) . El sólido se secó por congelación durante al menos 72 hr. El impacto de agua residual en la siguiente reacción no se conoce. El ácido pteroico se secó además sobre ?205 bajo alto vacio durante 24 hr (se nota que los resultados similares en la etapa de protección se obtuvieron sin esta etapa de secado adicional). Después, lOOg (0.32 mol) de ácido pteroico se agregó a un matraz de fondo redondo de 5 L, equipado con un agitador mecánico y una entrada de argón, y se almacena bajo alto vacio durante la noche. El gas de argón se agregó seguido por 3500 g (2316 mi) de anhídrido trifluoroacético . El matraz se selló con un tapón de goma o adaptador de entrada de argón, y luego se agita vigorosamente. El matraz se protegió de la luz y se agita a temperatura ambiente bajo atmósfera de argón durante 7 días (la reacción se monitoreó por HPLC de alícuotas diluidas 20x cada una con agua y DMSO) . La mezcla se evaporó rotatoriamente hasta secado y se trata con 2.5 L de 3% de ácido trifluoroacético en agua. La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente hasta subproductos anhídridos hidrolizados . La evaporación rotatoria da un sólido seco. El sólido se suspendió en 2 L de agua y luego se centrifuga en botellas centrífugas de 250-mL a 3000 rpm durante 20 min. El sobrenadante se removió y el sólido se lavó con agua y se centrifuga (4 veces) . El sólido se secó por congelación durante 3 dias, se transfiere a botellas ámbar, y se seca bajo alto vacio en presencia de P2Os durante 2 dias (Pureza >95%; evaluación TFA residual por análisis elemental) . Etapa de desdoblamiento: El intermediario protegido se liberó de la resina usando el reactivo desdoblado preparado de 92.5% (50 mi) TFA, 2.5% (1.34 mi) H20, 2.5% (1.34 mi) Triisopropilsilano, y 2.5% (1.34 mi) etanditiol. El reactivo desdoblado se agregó al recipiente de reacción (25 mi) . El argón se burbujeó a través de la mezcla durante 1.5 hr. El liquido se drenó del recipiente, y la resina se lavó con el reactivo restante (3 X 8 mi). Los volátiles se concentraron por evaporación rotatoria hasta un volumen de 10 mi. El dietiléter (35.0 mi) se agregó para efectuar la precipitación. El sólido se recolectó por centrifugación y se seca para dar 1.25 g del producto desdoblado .
Etapa de desprotección: El grupo protector N10-trifluoroacetilo en la porción de ácido pteróico se removió bajo condiciones básicas. Iniciando con 250mg del intermediario protegido en lOmL de agua, el pH se ajustó hasta 9.3 y se mantiene durante lhr usando 4:1 H20 : hidróxido de amonio (1-2 mi). Después de lhr, el pH se ajustó hasta 5 con HC1 1N (~1 mi) y el producto se purificó en HPLC preparativa para proporcionar 125 mg del compuesto H.
Condiciones de purificación HPLC: Columna: aters NovaPak Ci8 300x19mm Solvente A: solución amortiguadora de acetato de amonio 10 mM, pH=5 Solvente B: Acetonitrilo Elución: 1%B hasta 20%B en 40min a 15 ml/min Rendimiento total de las reacciones combinadas: 625 mg I. Preparación de carbonato de 2- ( (1S , 3S , 7S , 10R, US , 12S , 16R) -7 , ll-dihidroxi-8 ,8,10,12-tetrametil-3- ( (E) -1- (2-metiltiazol-4-il) prop-l-en-2-il) -5 , 9-dioxo-4-oxa-17-aza-biciclo [14.1.0] heptadecan-17-il) etil 2- (2-(piridin-2-il) disulfañil) etilo 1. Preparación de 2- ( 2- ( Piridin-2-il) disulfanil) etanol A una solución de cloruro de metoxicarbonil sulfenilo (10 mi, 110 mmol) , en diclorometano (100 mi), se enfrió hasta 0°C, se agregó mercaptoetanol (7.6 mi, 110 mmol), gota a gota. La mezcla de reacción se permitió agitar hasta 0°C durante 30 min. En este punto, una solución de 2-mercaptopiridina (12.2 g, 110 mmol) en diclorometano (160 mi) se agregó. La solución se permitió reaccionar a 0°C durante 1 hr y luego se permitió calentar hasta temperatura ambiente durante otra 1 hr. El producto sólido se observó que abandonó la solución. La CCD (1:1 Pet éter/EtOAc) muestra que el producto importante se ha formado. La mezcla de reacción se concentró hasta un volumen de 125 mi. La mezcla se filtró a través de un embudo Buchner. La torta filtro se lavó con diclorometano y luego se seca bajo vacio durante la noche para proporcionar 2- ( 2- ( Piridin-2-il ) disulfañil ) etanol (23.6 g) , como la sal HC1. TLC: Rf = 0.45 Placas - EMD Gel de sílice 60 F254, 5 X 10 cm, 250 µ? 2. Preparación de carbonato de Benzo[d] [1, 2, 3] triazol-l-il 2- (2- (piridin-2-il) disulfanil) etilo Una solución de difósgeno (2.28 g, 11.5 mmol) en 15 mi de diclorometano anhidro se agitó bajo argón en un matraz de fondo redondo y se enfría por un baño de hielo/sal. Un embudo de adición con una mezcla de 2- (piridin-2- ildisulfanil ) etanol (5.01 g, 22.4 mmol) y trietilamina (2.25 g, 22.2 mmol) en 65 mi de diclorometano anhidro se colocó en el matraz de fondo redondo. La mezcla se agregó gota a gota durante un periodo de 20 min. La mezcla de reacción se permitió calentar hasta temperatura ambiente y se agita durante 1 hr adicional. El análisis CCD de la mezcla de reacción muestra que el material de partida se consumió y se formó de un producto de clorof ormiato polar inferior "rayado", CCD (6:4 EtOAc : Hexano s ) : RF de material de partida 0.4; RF del producto de cloroformiato : 0.8. La mezcla de reacción se agitó en un matraz de fondo redondo bajo argón y se enfria por un baño de hielo/sal. Una mezcla de 3.02 g, 22.4 mmol HOBt y 2.23 g, 22.0 mmol de trietilamina en 10 mi de diclorometano anhidro se agregó a un embudo de gotas fijado al matraz de fondo redondo. La mezcla se agregó lentamente al matraz de fondo redondo manteniendo la temperatura de reacción a 2°C. La mezcla de reacción se permitió calentar hasta temperatura ambiente y se agita durante la noche. Aproximadamente 27 mi de diclorometano luego se destiló de la mezcla de reacción a presión atmosférica. La mezcla luego se permitió enfriar hasta temperatura ambiente y se agita durante 2 hr. Los sólidos se recolectaron por filtración, y la torta filtro se lavó con 20 mi de dicloromet ano . Los sólidos luego se sacaron bajo vacio a 40°C en un evaporador rotatorio para proporcionar 7.81 g de sólidos blanco opaco. Este producto se analizó por """H-RMN y se determina para ser el producto deseado. 3. Preparación de carbonato de 2- ( (1S, 3S, 7S, 10R, US, 12S, 16R) -7 , ll-dihidroxi-8 , 8 , 10 , 12-tetrametil-3- ( (E) -1- ( 2-metiltiazol-4-il ) prop-l-en-2-i1 ) -5,9-dioxo-4-oxa-17-aza-biciclo [14.1.0] heptadecan-17-il ) etil 2- (2- (piridin-2-il ) disulfanil) etilo A una solución de [1S- [1R*,3R*(E) ,7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-Dihidroxi-17-[2-hidroxietil]-8,8,10, 12 - 1 e t rame t i 1 - 3 - [ 1 -me ti 1-2- (2-metil-4-tiazolil) etenil] -4-oxa-17-azabiciclo [14.1.0] heptadecan-5, 9-diona en dicloromet ano anhidro a 0°C se agregó DMAP (1.2 eq.) y carbonato de ben z o [ d ] [ 1 , 2 , 3 ] t r i a z o 1 - 1 - i 1 2-(2- ( pir idin-2 -i 1 ) disul fañil ) et i lo (1.0 eq.) en tándem. La mezcla de reacción se agitó a 0°C bajo argón y se monitorea por CCD cada 10 min. El DMAP adicional (1.2 eq.) y el compuesto I (2) (1.0 eq.) se agregaron como es necesario hasta que todo el compuesto G se consumió. La reacción se apagó con MeOH (1 mi) a 0°C, el solvente se removió bajo vacio, y el residuo se purificó por cromatografía (gel de sílice, 2.5-5% MeOH en DCM) para proporcionar el compuesto del título como un sólido beige. Las cantidades del compuesto y las recuperaciones se enlistan en la Tabla 3 a continuación. Rendimiento total de 2.95 g del compuesto G fue 2.80 g (67.9%) del compuesto I.
Cada purificación cromatográf ica típicamente da un producto puro junto con algún producto impuro (80-90% de pureza) . El producto impuro se combinó con el producto crudo del siguiente baño para purificación cromatográf ica . Para los baños # 2 y 4, dos purificaciones cromatográf icas se llevaron a cabo.
J. Preparación de ácido (S) -2- (4- ( (2-amino-4-oxo-3 , 4- dihidropteridin-6-il)metilamino)benzamido) -5- ( (S) -3-carboxi-l- ( (S) -1- ( (S) -3-carboxi-l- ( (R) -l-carboxi-2- (2- (2- ( (2- ( (1S,3S,7S,10R,11S,12S,16R) -7 , ll-dihidroxi-8 , 8 , 10 , 12- tetrametil-3- ( (E) -1- (2-metiltiazol-4-il)prop-l-en-2-il) -5,9- dioxo-4-oxa-17-aza-biciclo [14.1.0] heptadecan-17- il) etoxi) carboniloxi) etil) disulfanil) etilamino) -l-oxopropan-2- ilamino) -5-guanidino-l-oxopentan-2-ilamino) -l-oxopropan-2- ilamino) -5-oxopentanoico A 15 mi de H20 (burbujeada con argón durante 10 min antes de usarse) se agregó ácido (S) -2- (4- ( (2-amino-4-oxo-3, 4- dihidropteridin-6-il ) metilamino) benzamido) -5- ( ( S ) -3-carboxi-l- ( (S) -1- ( (S) -3-carboxi-l- ( (S) -l-carboxi-2-mercaptoetilamino) -1- oxopropan-2-ilamino) -5-guanidino-l-oxopentan-2-ilamino) -1- oxopropan-2-ilamino ) -5-oxopentanoico (498 mg, 0.534 mmol) en un tubo centrifugo pequeño de 50 mi. A esta suspensión, mientras se burbujea con argón, se agregó gota a gota solución de NaHC03 saturado (burbujeado con argón durante 10 min antes de usarse) hasta que el pH de la solución resultante alcanza 6.9. El carbonato de 2- ( ( 1S, 3S, 7S, 10R, US, 12S, 16R) -7 , 11-dihidroxi-8, 8, 10, 12-tetrametil-3- ( (E) -1- (2-metiltiazol-4-il) prop-l-en-2-il ) -5, 9-dioxo-4-oxa-17-aza-biciclo[14.1.0] heptadecan-17-il) etil 2- (2- (piridin-2-il) disulfanil) etilo (400 mg, 0.534 mmol) en THF se agregó rápidamente y la solución homogénea resultante se agitó bajo argón durante 30 min. El progreso de la reacción se verificó por HPLC analítica en 15 min. El pico del producto comienza a ~6.4 min bajo condiciones HPLC analíticas. La mezcla se diluyó con ~15 mi de solución amortiguadora de fosfato y el THF se removió bajo vacío. La solución turbia se centrifugó y se filtró. El filtrado amarillo se dividió en dos porciones y se purifica por HPLC preparativa. Las fracciones puras (>98% puro) se agruparon y se secaron por congelación. Las fracciones de cola (<98% puro) se recolectaron y se volvieron a purificar durante cada 3-6 corridas de cromatografía para proporcionar 700 mg del compuesto del título, como un polvo blanco (que contiene 11.8% en peso de agua y 8.7% en peso de sodio y sales de fosfato de sodio, como se determina por Karl Fischer y análisis elemental).
Parámetros de HPLC preparativa: Columna: Waters Nova-Pak HR C18 ßµ?? 30x300 mm Fase móvil A: 7.0 mM de solución amortiguadora de sodio, pH=7.2 Fase móvil B: acetonitrilo Método: 10%B-50%B en 30 min, relación de flujo: 40 ml/min Parámetros de HPLC analítica: Column: Waters Symmetry C18 3.5µp? 4.6x75 mm Fase móvil A: 10 mM de solución amortiguadora de acetato de trietilamonio (TEAOAc) , pH=7.5 Fase móvil B: Acetonitrilo Método: 20%B-40%B en 10 min, relación de flujo: 1.0 ml/min Masa exacta m/z ( C 67H92N16O22 S3 ) : Calculado: 1570.58907 (M+2H) , 785.29454 (M+2H)2+, 523.86563 (M+3H)3+, 393.15118 (M+4H)4+ Encontrado: (M+2H)2+ at 785.29100 (4.5 ppm) , (M+3H) 3+ at 523.86431 (2.5 ppm), (M+4H) + at 393.14996 (3.1 ppm). EJEMPLO 3: PREPARACIÓN ALTERNATIVA DEL COMPUESTO J Acido (S) -2- (4- ( (2-amino-4-oxo-3, 4-dihidropteridin- 6-il) metílamino) benzamido) -5- ( (S) -3-carboxi-l- ((S)-l-((S)-3- carboxi-1- ( (R) -l-carboxi-2- (2- (2- ( (2- ( (1S, 3S, 7S, 10R, US, 12S, 16R) -7 , ll-dihidroxi-8 , 8 , 10 , 12- tetrametil-3- ( (E) -1- (2-metiltiazol-4-il) prop-l-en-2-il ) -5,9- dioxo-4 -oxa-17-aza-biciclo [14.1.0] heptadecan-17- il) etoxi) carboniloxi) etil) disulfanil) etilamino) -l-oxopropan-2- ilamino) -5-guanidino-l-oxopentan-2-ilamino) -l-oxopropan-2- ilamino) -5-oxopentanoico 3A. Preparación de [4S , 7R, 8S , 10R, 9S , 13R, 16S] -4 , 8 , 13- trihidroxi-14-yodo-5 ,5,7, 9-tetrametil-16- [ (E) -1- [2- metiltiazol-4-il]prop-l-en-2-il] oxaciclohexadecano-2 , 6-diona .
Epotilona C (54.3 g, 113.7 mmol) se disolvió en acetonitrilo (480 mi) y agua (50 mi) . La solución se enfrió de -5°C a -10°C. Yodo (144.3 g, 568.4 mmol) se agregó a la reacción y la reacción se mantuvo a por lo menos 15 horas. La reacción se enfrió rápidamente con 15% de solución de metabisulfito de sodio (900 mi). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 x 1.1 1). Las fases orgánicas se recolectaron y lavaron sucesivamente con solución saturada de bicarbonato de sodio (675 mi) y la solución saturada de cloruro sódico (675 mi). Los solventes se evaporaron bajo presión reducida para dar el Compuesto A crudo como un aceite de color amarillo (85.6 g) . El Compuesto A se utilizó en la siguiente reacción sin purificación adicional. HPLC: Phenomex Luna C8 (2) 3 µp?, 4.6 x 150 mm, isocrático, 18 minuto, 36% B, 17 minuto, 56% B, (Fase móvil A = 0.01M NH40AC en ACN : Agua (5:95), Fase móvil B = 0.01M NH40Ac en ACNrAgua (95:5)), velocidad de flujo a 1.0 ml/min, UV 245, Rt = 22.4 min. 3B. Preparación de [IR, 3S , 7S , 10R, HS , 12S , 16S] -7 , 11-dihidroxi-8 , 8 , 10 , 12-tetrametil-3- [ (E) -1- [2-metiltiazol-4-il] prop-l-en-2-il] - , 17-dioxabiciclo [14.1.0] heptadecano-5 , 9-diona .
L b, /K,«b,iuK,ys,iJK,ibSj-4,8, i ¿-trmiciroxi-ii-yodo-5,5,7, 9-tetrametil-16- [ (E) -1- [2-metiltiazol-4-il] prop-l-en-2-il ] oxaciclohexadecano-2 , 6-diona (85.6 g) se disolvió en acetonitrilo (670 mi) y agua (130 mi). La trietilamina (135 mi, 968.5 mmol) se agregó a la solución. La reacción se calentó de 50°C a 60°C por lo menos 8 horas. Después se enfrió a TA, la solución se concentró bajo presión reducida. El residuo se diluyó con EtOAc (1.2 1) y lavó con solución de cloruro sódico saturado (3 X 500 mi) . Los solventes se evaporaron bajo presión reducida para dar el producto crudo como un aceite de color amarillo. Purificación mediante filtración de almohadilla de gel de sílice (gel de sílice 700 g, 66% de EtOAc en heptano, 2 x 4 1, y 1 x 3 1) produjo el Compuesto B como una espuma (50.3 g, 90% de rendimiento) con HPLC AP 80. HPLC: Phenomex Luna C8 (2) 3 µp?, 4.6 x 150 mm, isocrático, 18 min, 36% B, 17 min, 56% B, (Fase móvil A = 0.01M NH4OAc en ACN : Agua (5:95), Fase móvil B = 0.01M NH4OAc en AC : Agua (95:5)), velocidad de flujo a 10 ml/min, UV 245, Rt = 15.0 min. 3C/3D. Preparación de (4S , 7R, 8S , 9S , 13R, 14R, 16S) -13-azido-4,8, 14-trihidroxi-5 ,5,7, 9-tetrametil-16- ( (E) -1- (2-metiltiazol-4-il) prop-l-en-2-il) oxaciclohexadecano-2 , 6-diona y (4S,7R,8S,9S,13S,14S,16S) -14-azido-4 , 8 , 13-trihidroxi-5 , 5 , 7 , 9-tetrametil-16- ( (E) -1- (2-metiltiazol-4-il)prop-l-en-2-il) oxaciclohexadecano-2 , 6-diona .
A una solución agitada de epi-Epotilona-A (14.35 g, 29.07 mmol) en etanol (240 mi) y agua (48 mi) se agregó azida de sodio (11.45 g, 174.41 mmol) y cloruro de amonio (3.14g, 58.14 mmol) . La mezcla se agitó a 60°C durante 17-20 h. Los volátiles se evaporaron en el evaporador giratorio bajo presión reducida por debajo de 50°C. El residuo se disolvió en mezcla de acetato de etilo (287 mi) y agua (50 mi) . Las fases se separaron y la fase acuosa inferior se extrajo con acetato de etilo (115 mi) . Las fases orgánicas combinadas se lavaron con 25% de solución de cloruro sódico acuoso (salmuera) . El solvente se evaporó bajo presión reducida y el residuo se pasó a través de una almohadilla de gel de sílice eluída con mezcla de acetato de etilo/n-heptano (2:1). La evaporación del solvente bajo presión reducida proporcionó la mezcla regioisomérica de azido-alcoholes , (4S, 7R, 8S, 9S, 13R, 14R, 16S ) -13-azido-4 , 8 , 14-trihidroxi-5, 5, 7 , 9-tetrametil-16- ( (E) -1- (2-metiltiazol-4-il) prop-l-en-2-il) oxaciclohexadecano-2, ß-diona y (4S, 7R, 8S, 9S, 13S, 14S, 16S) -1 -azido-4, 8, 13-trihidroxi-5 , 5, 7, 9- tetrametil-16- ((E) -1- (2-metiltiazol-4-il ) prop-l-en-2-il ) oxaciclohexadecano-2 , 6-diona en proporción ~6:1 (12.8 g, 82%) como una espuma de color blanco . LC-MS: Phenomenex Luna C8 (2) columna: 3 µ??, 4.6 x 50 mm. Gradiente: 15 minuto, 0% B a 100% B en 10 min, después 100% B durante 5 min. Fases móviles: A = 0.01 M NH4OAc en CH3CN/H20 5:95; B = 0.01 M NH4OAc en CH3CN/H20 95:5. Velocidad de flujo: 3.0 ml/min. Longitud de onda: UV 250 nm. Tiempo de retención = 5.52 min. E (ESI) (M+H)+ = Esta reacción también se trabaja en otros solventes como, acetona, acetonitrilo, tetrahidrofurano, 2-propanol, dimetilformamida, metilsulfóxido y N-metil-pirrolidinona. El reactivo de azida de tertrabutilamonio también puede utilizarse en vez de azida de sodio/cloruro de amonio. 3E. Preparación de (1S , 3S , 7S , 10R, 11S , 12S16R) -7 , 11-dihidroxi- 8,8,10,12-tetrametil-3- ( (E) -1- (2-metiltiazol-4-il) prop-l-en-2- il) -4-oxa-17-azabiciclo (14.1.0) heptadecano-5 , 9-diona. (4S, 7R, 8S, 9S, 13R, 14R, 16S ) -13-azido-4 , 8 , 14 -trihidroxi-5 , 5 , 7 , 9- tetrametil-16- ( (E) -1- (2-metiltiazol-4-il) prop-l-en-2- il) oxaciclohexadecano-2 , ß-diona y (4S, 7R, 8S, 9S, 13S, 14S, 16S) - 14-azido-4, 8, 13-trihidroxi-5 , 5 , 7 , 9-tetrametil-l 6- ( (E) -1- (2- metiltiazol-4-il) prop-l-en-2-il ) oxaciclohexadecano-2, 6-diona (12.8 g, 23.85 mmol) en acetonitrilo anhidro (90 mi) se agregó trifenilfosfina (9.48 g, 35.77 mmol) bajo atmósfera de nitrógeno. La solución clara se agitó a 20-40°C durante 19-40 h. La mezcla de reacción se enfrió a 0-5°C durante 3-4 h y se filtró el producto. La torta se lavó con heptano (64 mi) y secó a 40 °C bajo presión reducida durante 15-18 h para dar (1S, 3S, 7S, 10R, US, 12S16R) -7, ll-dihidroxi-8 , 8 , 10, 12-tetrametil-3- ( (E) -1- (2-metiltiazol-4-il) prop-l-en-2-il) -4-oxa-17-azabiciclo ( 14.1.0 ) heptadecano-5 , 9-diona como un sólido de color blanco (5.41 g, 46%). LC-MS: Phenomenex Luna C8 (2) columna: 3 µp?, 4.6 x 50 mm. Gradiente: 15 minuto, 0% B a 100% B en 10 min, después 100% B durante 5 min. Fases móviles: A = 0.01 M NHOAc en CH3CN/H20 5:95; B = 0.01 M NH OAc en CH3CN/H20 95:5. Velocidad de flujo: 3.0 ml/min. Longitud de onda: UV 250 nm. Tiempo de retención = 4.43 min. E (ESI ) (M+H)+ = 493.68 Esta reacción también trabaja con otras fosfinas como, triciclohexilfosfina, trimetilfosfina , tributilfosfina tris (4-metoxifenil) -fosfina y otro tetrahidrofurano solvente. 3G. Preparación de [1S- [IR* , 3R* (E) , 7R* , IOS* , 11R* , 12R* , 16S*] ] 7 , ll-dihidroxi-17- [2-hidroxietil] -8 , 8 , 10 , 12-tetrametil-3- [1-met.il-2- (2-metil-4-tiazolil) etenil] -4-oxa-17-azabiciclo [14.1.0] heptadecano-5 , 9-diona Fórmula Química: C26H40N2O5S Fórmula Química: C28H44N2O6S Masa Exacta: 492.27 Masa Exacta: 536.29 Peso Molecular: 492.67 Peso Molecular: 536.72 Et3N (4.95 mi, 35.52 mmol) y 2-bromoethanol (3.02 mi, 42.62 mmol) se agregaron a ( 1S, 3S, 7S, 10R, US, 12S, 16R) - 7, ll-dihidroxi-8, 8, 10, 12-tetrametil-3- ( (E) -1- (2-metiltiazol-4-il) prop-l-en-2-il) -4-oxa-17-azabiciclo [14.1.0] heptadecano-5, 9-diona (3.50 g, 7.10 mmol) en acetonitrilo (35 mi) y se calentaron a 72.5°C. Después de 20 horas, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se concentró hasta sequedad a través de destilación al vacío giratoria. El crudo se disolvió en acetato de etilo (50 mi) y mezcló con agua desionizada (35 mi) . La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 35 mi), secó sobre Na2S04, filtró, concentró, cristalizó en acetonitrilo (35 mi) , lavó con acetonitrilo (2 x 5 mi), y secó en horno al vacío a 45.5°C durante la noche para aislar ( 1S, 3S, 7S, 10R, HS, 12S, 16R) -7 , ll-dihidroxi-17- (2-hidroxietil) -8,8, 10, 12-tetrametil-3- ( (E) -1- (2-metiltiazol-4-il) prop-l-en-2-il) -4-oxa-17-azabiciclo [14.1.0] heptadecano-5, 9-diona como un polvo cristalino de color blanco (2.60 g, HPLC AP 97.1, 68.2% rendimiento). LC-MS: Phenomenex C8, 3 pm, 4.6 x 150 mm, gradiente, 10 a 50% B durante 10 min, y detenido a 20 min. (A = 5% de MeCN/H20 + 0.01 M NH4OAc; B = 95% de MeOH/H20 + 0.01 M NH4OAc) , velocidad de flujo a 1.0 ml/min, UV 254 nm. Tiempo de retención = 9.43 min. (ESI) +H = 537.21. Un experto reconocerá que el Compuesto 3G como se preparó por este Ejemplo 3 es idéntico al Compuesto G como se preparó por el Ejemplo 2, y así, el Compuesto 3G puede utilizarse para preparar los Compuestos H, I, y J, los métodos de preparación y compuestos que se describen en el Ejemplo 2. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por el solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (11)

  1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un compuesto que tiene la Fórmula X: o sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo, caracterizado porque: K es -0-, -S-, o -NR7- ; A es - (CR8R9) - (CH2)m-Z- en donde Z es -(CHRio)-, -C(=0)-, -C(=0)-C(=0)-, -0C(=0)-, -N(Ru)C(=0)-, -S02-, o -N(Rn)S02-; Bi es hidroxilo o ciano y Ri es hidrógeno o ?? y Ri son tomados juntos para formar un enlace doble; 2t F~3r y R5 son, independientemente, hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo o arilo sustituido; o R2 y R3 pueden ser tomados juntos con el carbono al cual se enlazan para formar un cicloalquilo opcionalmente sustituido; R4 es hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquilo sustituido, alquenilo sustituido, arilo, o arilo sustituido;
  2. R6 es hidrógeno, alquilo o alquilo sustituido; R7, Rg, Rg, Rio, y Rn son independientemente hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo sustituido, heteroarilo, o heteroarilo sustituido; R12 es H, alquilo, alquilo sustituido, o halógeno; R13 es arilo, arilo sustituido, heteroarilo o heteroarilo sustituido; y m es 0 hasta 6. 2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque: K es -0-; A es alquileno de 2 a 4 átomos de carbono; Bi es -OH; R2, 3, R4 y R5 son, independientemente, hidrógeno o alquilo inferior; R6 es hidrógeno o metilo; y R13 es un heteroarilo de 5 ó 6 miembros opcionalmente sustituido.
  3. 3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque Ri3 es un tiazolilo, piridilo u oxazolilo opcionalmente sustituido.
  4. 4. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, 2 ó 3, caracterizado porque tiene la fórmula X' . ?'; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  5. 5. Un compuesto de conformidad con reivindicación 2, caracterizado porque tiene la Fórmula Xb, Xb
  6. 6. Un compuesto de conformidad con reivindicación 5, caracterizado porque tiene la Fórmula Xb ' Xb'.
  7. 7. Un compuesto de conformidad con cualquiera las reivindicaciones 1, 2, 5 ó 6, caracterizado porque R6 es hidrógeno .
  8. 8. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 5 ó 6, caracterizado porque R6 es metilo .
  9. 9. Uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, u 8, en la preparación de un medicamento para tratar el cáncer en un paciente .
  10. 10. Un proceso para fabricar una composición farmacéutica para administrar un fármaco dirigido, caracterizado porque comprende conjugar un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, u 8, a un enlazador liberable para formar un compuesto conjugado.
  11. 11. El proceso de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el compuesto conjugado comprende una porción de enlace de folato.
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