MX2008008279A - Actividad inmunoestimuladora de oligonucleotidos inmunoestimuladores palindromicos que contienen diferentes longitudes de segmentos palindromicos. - Google Patents

Abstract

La invención provee un ácido nucleico inmunomodulador palindrómico; la invención provee también métodos para generar, intensificar y modificar la respuesta inmune causada por compuestos inmunomoduladores palindrómicos usados para aplicaciones en inmunoterapia.

Description

ACTIVIDAD INMUNOESTIMULADORA DE OLIGONUCLEOTIDOS INMUNOESTIMULADORES PALINDROMICOS QUE CONTIENEN DIFERENTES LONGITUDES DE SEGMENTOS PALINDROMICOS SOLICITUD RELACIONADA Esta solicitud reclama el beneficio de la solicitud provisional de E.U.A. No. de serie 60/752,336, presentada en diciembre 20 de 2005. Las enseñanzas enteras de la solicitud referida anteriormente, se incorporan en la presente como referencia.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION CAMPO DE LA INVENCION La invención se refiere a la inmunoestimulación por análogos de oligonucleótidos palindrómicos químicamente modificados.

TECNICA RELACIONADA Kuramoto et al., Jpn. J. Cáncer Res. 83: 1128-1131 (1992), enseñan que los oligonucleótidos de fosfodiéster que contienen un palíndromo que incluye un dinucleótido de CpG, pueden inducir la síntesis de interferón- alfa e ¡nterferón-gamma e intensificar la actividad de células asesinas naturales. Tokunaga et al., J. Nati. Cáncer Inst. 72 (1984) 955-96. Pisetsky et al.; Reich et al., Mol. Biol. Rep. 18 (1993) 217-221 ; Krieg et al., Yi et al., Nature 374 (1995) 546-549 y Sato et al., Science 273 (1996) 352-354, enseñan que el ADN bacteriano, los oligodesoxinucleótidos sintéticos y las vacunas de ADN que contienen dinucleótidos de CpG no metilados en contextos de secuencia específicos (ADN de CpG), activan el sistema inmune de los vertebrados. Los receptores tipo de larga distancia (TLRs) funcionan como sensores de la infección, e inducen la activación de respuestas inmunes innatas y adaptativas. Los TLRs reconocen una amplia variedad de ligandos, denominados patrones moleculares asociados con el patógeno (PAMPs). Tras el reconocimiento de productos moleculares conservados asociados con el patógeno, los TLRs activan respuestas de defensa del hospedero a través de su dominio de señalización ¡ntracelular, el dominio del receptor tipo de larga distancia/interleucina-1 (TIR), y la proteína adaptadora corriente abajo MyD88. Las células dendríticas y los macrófagos responden normalmente a los ligandos del receptor tipo de larga distancia (TLR) y citocinas (por ejemplo, interleucina-? ß; IL-6 y factor de necrosis tumoral, FNT), que también producen; las células asesinas naturales (NK) y las células T están implicadas también en el circuito proinflamatorio. Después de la estimulación de TLRs por compuestos bacterianos, las células inmunes innatas liberan una gama de citocinas y quimiocinas. Algunos ejemplos de ligandos de TLRs incluyen, pero no están limitados a, lipoproteínas; peptidoglucanos; cimosán (TLR2), ARN de doble cadena, polil:poliC (TLR3), lipopolisacáridos, proteínas de choque térmico, taxol (TLR4), flagelina (TLR5) e imidazoquinolinas- R848, resiquimod, imiquimod; ARNss (TLR7/8), linfocitos beta (TLR10), y moléculas tipo profilium y £. coli uropatogénica (TLR11 ). Krieg et al., Annu. Rev. Immunol. 20 (2002) 709-760; Dalpke et al., Biol. Chem. 383 (2002) 1491-1500 y Kandimalla et al., Curr. Opin. Mol. Ther. 4 (2002) 122-129, enseñan que moléculas de ADN de CpG inducen a las células inmunes innatas para que produzcan citocinas Th1 que promueven respuestas de linfocitos T citotóxicos (CTL) y la producción de inmunoglobulinas por células B. Las propiedades inmunoestimuladoras de las moléculas de ADN de CpG han permitido su uso como agentes terapéuticos para un amplio espectro de indicaciones de enfermedad que incluyen cánceres, infecciones virales y bacterianas, trastornos inflamatorios, y como adyuvante en inmunoterapia. Además de las modificaciones químicas, muchas modificaciones estructurales influyen sobre la actividad de las moléculas de ADN de CpG. Kandimalla et al., Nucleic Acids Res. 30 (2002) 4460-4469, enseñan que moléculas de ADN de CpG que contenían dos extremos 5' libremente accesibles a través de un enlace 3'-3', tuvieron mayor actividad que las moléculas de ADN de CpG convencionales que contenían copias múltiples de motivos de CpG y un extremo 5' individual. Kandimalla et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 306 (2003) 948-953, enseñan que la presencia de una estructura secundaria en moléculas de ADN de CpG afectó significativamente su actividad, dependiendo de la posición y la naturaleza de la estructura secundaria, que la presencia de una estructura de pasador en el extremo 5' suprimió la actividad estimuladora, y que la misma estructura en el extremo 3' tuvo un efecto significativo sobre la actividad estimuladora, pero causó menor secreción de IL-6 y contribuyó a mayor estabilidad contra las nucleasas. El experto en la técnica reconocería que la incorporación de un palíndromo en un oligonucleotido estimulador, podría resultar en una molécula con características no deseadas de unión a proteína. Por ejemplo, Liang et al., Mol. Cell. Biol. 16(7): 3773-3780 (1996), muestran que para GAL4, los tripletes de CGG palindromicos en los extremos del sitio de reconocimiento de ADN de 17 pb son esenciales para la unión firme, y que PPR1 , un allegado de GAL4, reconoce también tripletes de CGG palindromicos en los extremos de su secuencia de reconocimiento de ADN de 12 pb. Además, Nguyen et al., J Biol Chem. 275: 15466-15473 (2000), muestran que una secuencia palindrómica dentro del motivo de reconocimiento de ADN hNQO-\ ARE/EpRE es necesaria para la unión del heterodímero Nrf2/MafK, y no puede ser competida por la secuencia ARE/EpRE de rGSTA2 que no contenga la secuencia palindrómica. Esta unión de proteínas a oligonucleótidos se reconoce como un factor limitativo en el uso de aquellos oligonucleótidos para composiciones de inmunoestimulación. Sin embargo, la incorporación de un palíndromo químicamente modificado en un oligonucleotido inmunomodulador y/o el enlace 3 -3' de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos químicamente modificados, podrían producir una molécula con las características inmunomoduladoras deseadas sin las limitaciones de un palíndromo lineal natural. De esta manera, existe la necesidad de desarrollar compuestos que contengan palíndromos que modulen una respuesta inmune a través de TLRs, pero que no estén plagados con los problemas de oligonucleótidos lineales que contienen segmentos palindrómicos no modificados.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION En un primer aspecto, la invención provee un oligonucleótido inmunomodulador que tiene una estructura seleccionada del grupo de 5'-TCG!TCdTTCTC-Y-G!CTTGiCAAGiCT-5' (SEQ ID NOS. 1 y 12), 5'-TCG i TCG i TTCTC- Y-G AG - CTTG 1 CAAG CTCT-5' (SEQ ID NOS. 2 y 13), 5'-TCG i TCG i TTCTC-Y-G AG AG 1 CTTG 1 CAAG 1 CTCTCT-5' (SEQ ID NOS. 3 y 14), S'-TCGiTCG^CTC-Y-GCCGCGCGGC-S' (SEQ ID NOS. 4 y 15), 5'-TCGiTCGiTTAGA-Y-TGiCTGiCT-5' (SEQ ID NOS. 5 y 16) o 5'-TCG i TCG i TTC-Y-G 1 CTTG 1 CAAG CT-5' (SEQ ID NOS. 10 y 17); en donde X es un enlazador de glicerol, Y es un enlazador de C3 y Gi es 7-desazaguanosina. En un segundo aspecto, la invención provee composiciones farmacéuticas. Estas composiciones comprenden cualquiera de las composiciones descritas en la invención, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En un tercer aspecto, la invención provee un método para generar una respuesta inmune en un vertebrado. Este método comprende administrar al vertebrado cualquiera de las composiciones, solas o en combinación, descritas en el primer y segundo aspectos de la invención. Las composiciones descritas en la presente pueden administrarse a través de cualquier vía de administración adecuada que incluye, pero no está limitada a, parenteral, oral, sublingual, transdérmica, tópica, vía mucosas, por inhalación, intranasal, por aerosol, infraocular, ¡ntratraqueal, intrarrectal, vaginal, cañón de genes, parche dérmico, gota ocular y enjuague bucal. En un cuarto aspecto, la invención provee un método para tratar terapéuticamente a un vertebrado que sufre de cáncer, un trastorno autoinmune, inflamación de vías respiratorias, trastornos inflamatorios, trastornos de la piel, alergia, asma o una enfermedad causada por un patógeno. Este método comprende administrar al vertebrado cualquiera de las composiciones, solas o en combinación, descritas en el primer y segundo aspectos de la invención, en una cantidad farmacológicamente efectiva. Las composiciones descritas en la presente pueden administrarse a través de cualquier vía de administración adecuada que incluye, pero no está limitada a, parenteral, oral, sublingual, transdérmica, tópica, vía mucosas, por inhalación, intranasal, por aerosol, infraocular, ¡ntratraqueal, intrarrectal, vaginal, cañón de genes, parche dérmico, gota ocular, gota ótica y enjuague bucal.

En un quinto aspecto, la invención provee un método para prevenir cáncer, un trastorno autoinmune, inflamación de vías respiratorias, trastornos inflamatorios, trastornos de la piel, alergia, asma o una enfermedad causada por un patógeno en un vertebrado. Este método comprende administrar al vertebrado cualquiera de las composiciones, solas o en combinación, descritas en el primer y segundo aspectos de la invención, en una cantidad farmacológicamente efectiva. Las composiciones descritas en la presente pueden administrarse a través de cualquier vía de administración adecuada que incluye, pero no está limitada a, parenteral, oral, sublingual, transdérmica, tópica, vía mucosas, por inhalación, intranasal, por aerosol, intraocular, intratraqueal, intrarrectal, vaginal, cañón de genes, parche dérmico, gota ocular, gota ótica y enjuague bucal.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS La figura 1 describe un esquema de síntesis para la síntesis lineal de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de la invención. La figura 2 describe la inducción de IL-12 en cultivos de células de bazo de ratones C57BL/6 por ejemplos de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de conformidad con la invención. Más generalmente, la figura 2 demuestra que haciendo variar la longitud, la composición de bases y/o las modificaciones químicas del oligonucleótido inmunomodulador palindromico, se generará una inducción de IL-12 distinta, y que la inducción de IL-12 única se genera a cada concentración para cada oligonucleotido inmunomodulador palindromico. Células de bazo de ratones C57BL/6 se trataron con oligonucleótidos que corresponden a la SEQ ID NO. indicada, según se indica. Med = grupo de tratamiento controi/con medio. La figura 3 describe la inducción de IL-6 en cultivos de células de bazo de ratones C57BL/6 por ejemplos de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de conformidad con la invención. Más generalmente, la figura 3 demuestra que haciendo variar la longitud, la composición de bases y/o las modificaciones químicas del oligonucleotido inmunomodulador palindromico, se generará una inducción de IL-6 distinta, y que la inducción de IL-6 única se genera a cada concentración para cada oligonucleotido inmunomodulador palindromico. Células de bazo de ratones C57BL/6 se trataron con oligonucleótidos que corresponden a la SEQ ID NO. indicada, según se indica. Med = grupo de tratamiento control/con medio. La figura 4 describe la inducción de IFN-a en cultivos de pDCs humanas por ejemplos de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de conformidad con la invención. Más generalmente, la figura 4 demuestra que haciendo variar la longitud, la composición de bases y/o las modificaciones químicas del oligonucleotido inmunomodulador palindromico, se generará una inducción de IFN-a distinta. Se trataron pDCs humanas con oligonucleótidos que corresponden a la SEQ ID NO. indicada a 10 pg/mL. Med = grupo de tratamiento control/con medio. La figura 5 describe la inducción de IFN-a en cultivos de PBMCs humanas por ejemplos de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de conformidad con la invención. Más generalmente, la figura 5 demuestra que haciendo variar la longitud, la composición de bases y/o las modificaciones químicas del oligonucleótido inmunomodulador palindrómico, se generará una inducción de IFN-a distinta. Se trataron PBMCs humanas con oligonucleótidos que corresponden a la SEQ ID NO. indicada a 10 pg/mL. Med = grupo de tratamiento control/con medio. La figura 6 describe la inducción de IL-6 en cultivos de PBMCs humanas por ejemplos de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de conformidad con la invención. Más generalmente, la figura 6 demuestra que haciendo variar la longitud, la composición de bases y/o las modificaciones químicas del oligonucleótido inmunomodulador palindrómico, se generará una inducción de IL-6 distinta. Se trataron PBMCs humanas con oligonucleótidos que corresponden a la SEQ ID NO. indicada a 10 pg/mL. Med = grupo de tratamiento control/con medio. La figura 7 describe la inducción de IL-10 en cultivos de PBMCs humanas por ejemplos de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de conformidad con la invención. Más generalmente, la figura 7 demuestra que haciendo variar la longitud, la composición de bases y/o las modificaciones químicas del oligonucleótido inmunomodulador palindrómico, se generará una inducción de IL-10 distinta. Se trataron PBMCs humanas con oligonucleótidos que corresponden a la SEQ ID NO. indicada a 10 pg/mL. Med = grupo de tratamiento control/con medio.

La figura 8a describe la inducción de IFN-a en cultivos de PBMCs humanas por ejemplos de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de conformidad con la invención. Más generalmente, la figura 8a demuestra que haciendo variar la longitud, la composición de bases y/o las modificaciones químicas del oligonucleótido inmunomodulador palindrómico, se generará una inducción de IFN-a distinta. Se trataron PBMCs humanas con oligonucleótidos que corresponden a la SEQ ID NO. indicada a 10 pg/mL. Med = grupo de tratamiento control/con medio. La figura 8b describe la inducción de IL-6 en cultivos de PBMCs humanas por ejemplos de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de conformidad con la invención. Más generalmente, la figura 8b demuestra que haciendo variar la longitud, la composición de bases y/o las modificaciones químicas del oligonucleótido inmunomodulador palindrómico, se generará una inducción de IL-6 distinta. Se trataron PBMCs humanas con oligonucleótidos que corresponden a la SEQ ID NO. indicada a 10 pg/mL. Med = grupo de tratamiento control/con medio. La figura 8c describe la inducción de IFN-a en cultivos de pDCs humanas por ejemplos de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de conformidad con la invención. Más generalmente, la figura 8c demuestra que haciendo variar la longitud, la composición de bases y/o las modificaciones químicas del oligonucleótido inmunomodulador palindrómico, se generará una inducción de IFN-a distinta. Se trataron pDCs humanas con oligonucleótidos que corresponden a la SEQ ID NO. indicada a 10 pg/mL. Med = grupo de tratamiento control/con medio.

DESCRIPCION DETALLADA DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS Las patentes expedidas, solicitudes de patente y referencias que se citan en la presente se incorporan en la presente como referencia, al mismo grado como si se indicara que cada una fuese específicamente e individualmente incorporada en la presente como referencia. En caso de inconsistencias entre cualquier enseñanza de cualquier referencia citada en la presente y la presente especificación, la última prevalecerá para los propósitos de la invención. La invención se refiere al uso terapéutico de oligonucleótidos palindrómicos como agentes inmunomoduladores para aplicaciones en inmunoterapia. La invención provee también métodos para generar, intensificar y modificar la respuesta inmune causada por compuestos inmunomoduladores palindrómicos usados para aplicaciones en inmunoterapia tales como, pero no limitadas a, tratamiento y/o prevención de cáncer, trastornos autoinmunes, asma, alergias respiratorias, alergias a alimentos e infecciones por bacterias, parásitos y virus, en aplicaciones en humanos adultos y pediátricos y veterinarias. El asma alérgico, es una cierta condición descrita para tratamiento mediante los presentes métodos y compuestos. De esta manera, la invención provee además compuestos que tienen niveles óptimos de efecto inmunomodulador palindrómico para inmunoterapia, y métodos para obtener y usar dichos compuestos. Además, los oligonucleotidos inmunomoduladores palindrómicos de la invención son útiles como adyuvantes en combinación con vacunas de ADN, anticuerpos, antígenos, alérgenos, agentes quimioterapéuticos y oligonucleotidos antisentido. El término "oligonucleótido inmunomodulador palindrómico" se refiere en general a un oligonucleótido inmunomodulador palindrómico que contiene una secuencia palindrómica que tiene un dinucleótido de CG dentro de la secuencia palindrómica. En ciertas modalidades, la citosina y/o guanosina del dinucleótido de CG dentro de la secuencia palindrómica son modificadas, siempre que no se sospeche que el oligonucleótido inmunomodulador palindrómico está sujeto a unión no deseada a proteínas en comparación con un oligonucleótido palindrómico no modificado lineal, mientras que mantiene aún, e incluso adapta, la respuesta inmune. El oligonucleótido inmunomodulador palindrómico puede contener oligonucleotidos y oligonucleosidos modificados, o combinaciones de los mismos. El oligonucleótido inmunomodulador palindrómico puede ser lineal o ramificado, con ácidos nucleicos que son polímeros de nucleósidos enlazados a través de, por ejemplo, enlaces fosfodiéster, fosforotioato o alternos. Un oligonucleótido inmunomodulador palindrómico puede consistir de una base de purina (adenina (A), inosina (I) o guanina (G), o derivados de las mismas) o de pirimidina (citosina (C), uracilo (U) o timina (T), o derivados de los mismos) unida covalentemente a un residuo de azúcar ribosa, o un derivado del mismo. En un primer aspecto, la invención provee un compuesto de oligonucleótido inmunomodulador palindrómico de acuerdo con IMO™ Nos. 1 , 2, 3, 4, 10 u 11. Los presentes inventores han descubierto que la modificación de la citosina y/o guanosina del dinucleotido de CG dentro de la secuencia palindrómica y un enlace 3'-3' de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos lineales, afecta las capacidades inmunomoduladoras de la secuencia palindrómica. Sin que se desee que sea limitado por alguna teoría en particular, los presentes inventores esperan que esta modificación altere la porción palindrómica, de modo que la actividad del oligonucleótido inmunomodulador palindrómico no sea alterada por unión no deseada a proteínas en comparación con un oligonucleótido palindrómico no modificado, mientras que mantiene aún, e incluso adapta, la respuesta inmune. Este aspecto de la invención provee un ácido nucleico inmunomodulador palindrómico que tiene una secuencia de ácido nucleico que contiene por lo menos un dinucleotido seleccionado de CpG*, C*pG y C*pG*, en donde C es citosina o 2 -desoxicitosina, G es guanosina o 2'-desoxiguanosina, C* es 2'-desoxitimidina, 1-(2'-desoxi-p-D-ribofuranosil)-2-oxo-7-desaza-8-metil-purina, 2'-didesoxi-5-halocitosina, 2'-didesoxi-5-nitrocitosina, arabinocitidina, 2'-desoxi-arabinocitidina 2'-sustituida, 2'-arabinocitidina O-sustituida, 2'-desoxi-5-hidroxicitidina, 2'-desoxi-N4-alquil-citidina, 2'-desoxi-4-tiouridina, u otros análogos de nucleósido de pirimidina, G* es 2'-desoxi-7-desazaguanosina, 2'-desoxi-6-tioguanosina, arabinoguanosina, 2'-desoxi-arabinoguanosina 2 -sustituida, 2'-arabinoguanosina O-sustituida, 2'-desoxiinosina, u otros análogos de nucleósido de purina, y p es un enlace internucleósido seleccionado del grupo que consiste de fosfodiéster, fosforotioato y fosforoditioato. En algunas modalidades, el oligonucleótido inmunomodulador palindrómico tiene de aproximadamente 2 a aproximadamente 50 nucleótidos de longitud. En ciertas modalidades, el oligonucleótido inmunomodulador palindrómico tiene de aproximadamente 11 a aproximadamente 30 nucleótidos de longitud. En algunas modalidades, los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos tienen de aproximadamente 3 a aproximadamente 35 residuos de nucleósido, o de aproximadamente 4 a aproximadamente 30 residuos de nucleósido, o de aproximadamente 7 a aproximadamente 19 residuos de nucleósido. En algunas modalidades, los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos tienen de aproximadamente 5 a aproximadamente 18, o de aproximadamente 7 a aproximadamente 11 , residuos de nucleósido. Como se usa en la presente, el término "aproximadamente" implica que el número exacto no es crítico. De esta manera, el número de residuos de nucleósido en los oligonucleótidos no es crítico, y oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos que tienen uno o dos residuos de nucleósido menos, o de uno a varios residuos de nucleósido adicionales, se contemplan como equivalentes de cada una de las modalidades descritas anteriormente. En algunas modalidades, uno o más de los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos tienen 11 nucleótidos.

En modalidades adicionales de este aspecto, la invención provee un oligonucleótido inmunomodulador que comprende por lo menos dos oligonucleótidos inmunomoduladores enlazados a través de sus extremos 3' o enlaces internucleósido o una nucleobase o azúcar funcionalizado por un enlazador no de nucleotidos, en donde la secuencia de por lo menos uno de los oligonucleótidos inmunomoduladores contiene un oligonucleótido inmunomodulador palindrómico. En modalidades de conformidad con este aspecto de la invención, por lo menos uno de los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos contiene por lo menos un dinucleótido seleccionado de CpG*, C*pG y C*pG*, en donde C es citosina o 2'-desoxicitosina, G es guanosina o 2'-desoxiguanosina, C* es 2'-desoxitim¡dina, 1-(2'-desoxi-P-D-ribofuranosil)-2-oxo-7-desaza-8-metil-purina, 2'-didesoxi-5-halocitosina, 2'-didesoxi-5-nitrocitosina, arabinocitidina, 2'-desoxi-arabinocitidina 2'-sust¡tuida, 2'-arab¡nocitid¡na O-sustituida, 2'-desoxi-5-hidroxicitidina, 2'-desoxi-N4-alquil-citidina, 2'-desoxi-4-tiouridina, u otros análogos de nucleósido de pirimidina, G* es 2'-desoxi-7-desazaguanosina, 2'-desoxi-6-tioguanosina, arabinoguanosina, 2'-desoxi-arabinoguanosina 2'-sustituida, 2 -arabinoguanosina O-sustituida, 2 -desoxiinosina, u otros análogos de nucleósido de purina, y p es un enlace internucleósido seleccionado del grupo que consiste de fosfodiéster, fosforotioato y fosforad itioato. El término "enlazador no de nucleotidos" se refiere en general a cualquier enlace o porción que puede enlazar o ser enlazado a los oligonucleótidos menos a través de un enlace que contenga fósforo. De preferencia, dicho enlazador tiene de aproximadamente 2 angstroms a aproximadamente 200 angstroms de longitud. El término "enlace de nucleótido" se refiere en general a un enlace 3'-5' directo que une directamente los grupos hidroxilo 3' y 5' de dos nucleósidos a través de un enlace que contiene fósforo. En algunas modalidades, el enlazador no de nucleotidos es una molécula pequeña, macromolécula o biomolécula que incluye, sin limitación, polipéptidos, anticuerpos, lípidos, antígenos, alérgenos y oligosacáridos. En algunas otras modalidades, el enlazador no de nucleotidos es una molécula pequeña. Para los propósitos de la invención, una molécula pequeña es una porción orgánica que tiene un peso molecular menor de 1 ,000 Da. En algunas modalidades, la molécula pequeña tiene un peso molecular menor de 750 Da. En algunas modalidades, la molécula pequeña es un hidrocarburo alifático o aromático, cualquiera de los cuales puede incluir opcionalmente, ya sea en la cadena lineal que une a los oligorribonucleótidos o unidos a la misma, uno o más grupos funcionales que incluyen, pero no están limitados a, hidroxi, amino, tiol, tioéter, éter, amida, tioamida, éster, urea o tiourea. La molécula pequeña puede ser cíclica o acíclica. Ejemplos de enlazadores de molécula pequeña incluyen, pero no están limitados a, aminoácidos, carbohidratos, ciclodextrinas, adamantano, colesterol, haptenos y antibióticos. Sin embargo, para los propósitos de describir el enlazador no de nucleotidos, no se pretende que el término "molécula pequeña" incluya un nucleósido. En algunas modalidades, el enlazador no de nucleótidos es un enlazador de alquilo o enlazador de amino. El enlazador de alquilo puede ser ramificado o no ramificado, cíclico o acíclico, sustituido o no sustituido, saturado o insaturado, quiral, aquiral o mezcla racémica. Los enlazadores de alquilo pueden tener de aproximadamente 2 a aproximadamente 18 átomos de carbono. En algunas modalidades, dichos enlazadores de alquilo tienen de aproximadamente 3 a aproximadamente 9 átomos de carbono. Algunos enlazadores de alquilo incluyen uno o más grupos funcionales que incluyen, pero no están limitados a, hidroxi, amino, tiol, tioéter, éter, amida, tioamida, éster, urea y tioéter. Dichos enlazadores de alquilo pueden incluir, pero no están limitados a, 1 ,2-propanodiol, 1 ,2,3-propanotriol, 1 ,3-propanodiol, trietilenglicol, hexaetilenglicol, enlazadores de polietilenglicol (por ejemplo [-0-CH2-CH2-]n (n = 1-9)), enlazadores de metilo, enlazadores de etilo, enlazadores de propilo, enlazadores de butilo o enlazadores de hexilo. En algunas modalidades, dichos enlazadores de alquilo pueden incluir péptidos o aminoácidos. En algunas modalidades, el enlazador de molécula pequeña es glicerol o un homólogo de glicerol de la fórmula HO-(CH2)0-CH(OH)-(CH2)P-OH, en donde o y p son independientemente enteros de 1 a aproximadamente 6, de 1 a aproximadamente 4, o de 1 a aproximadamente 3. En algunas otras modalidades, el enlazador de molécula pequeña es un derivado de 1 ,3-diamino-2-hidroxipropano. Algunos de dichos derivados tienen la fórmula HO- (CH2)m-C(0)NH-CH2-CH(OH)-CH2-NHC(OHCH2)m-OH, en donde m es un entero de 0 a aproximadamente 10, de 0 a aproximadamente 6, de 2 a aproximadamente 6, o de 2 a aproximadamente 4. Algunos enlazadores no de nucleótidos de conformidad con la invención permiten la unión de más de dos oligonucleotidos. Por ejemplo, el enlazador de molécula pequeña glicerol tiene tres grupos hidroxilo a los cuales pueden unirse covalentemente oligonucleotidos. Algunos oligonucleotidos inmunomoduladores palindromicos de conformidad con la invención comprenden, por lo tanto, dos o más oligonucleotidos enlazados a un enlazador de nucleótidos o un enlazador no de nucleótidos. Se refiere que dichos oligonucleotidos inmunomoduladores palindromicos son "ramificados". Los compuestos de oligonucleotidos inmunomoduladores palindromicos pueden comprender por lo menos dos oligonucleotidos enlazados no covalentemente, tal como mediante interacciones electrostáticas, interacciones hidrofóbicas, interacciones de apilamiento p, unión por enlaces de hidrógeno, y combinaciones de las mismas. Ejemplos no limitativos de dicho enlace no covalente incluyen apareamientos de bases de Watson-Crick, apareamiento de bases de Hoogsteen y apilamiento de bases. Los oligonucleotidos inmunomoduladores palindromicos usados en este estudio como ejemplos de la invención incluyen, pero no están limitados a, los descritos en el cuadro 1. Los oligonucleotidos inmunomoduladores palindromicos contienen segmentos de secuencia de oligonucleótido idénticos o no idénticos enlazados o unidos a través de sus extremos 3' por medio de un enlazador no de nucleósidos que incluye, pero no está limitado a, glicerol, enlazador de C3, enlazador de alquilo de C3 o propanodiol. Los IMOs 6-9 (SEQ ID NOS. 6-9) contienen dos segmentos de secuencia idénticos, mientras que los IMOs 1-5 y 10-11 (SEQ ID NOS. 1-5 y 10-18) contienen dos segmentos de secuencia no idénticos. El segundo segmento de oligonucleotido inmunomodulador palindrómico fue no idéntico y diferente del primer segmento en términos de su longitud, composición de bases y/o modificaciones químicas incorporadas.

CUADRO 1 Secuencias de ejemplos de oligonucleótidos inmunomoduladores palindromicos IMOI M No. Secuencia 5'-TCGiTCGiTTCTC-Y-GiCTTGiCAAGiCT-5' (SEQ ID NOS. 1 y 12) 2 S'-TCGiTCdTTCTC-Y-GAdCTTGiCAAdCTCT-S' (SEQ ID NOS. 2 y 13) 3 S'-TCG^CdTTCTC-Y-GAGAG^TTdCAAdCTCTCT-S' (SEQ ID NOS. 3 y 14) 4 S'-TCdTCG^CTC-Y-GCCGCGCGGC-S' (SEQ ID NOS. 4 y 15) 5 S'-TCdTCdTTAGA-Y-TdCTGiCT-S' (SEQ ID NOS. 5 y 16) 6 S'-TCGiAACGiTTCGi-X-G^TTG^AAG^T-S' (SEQ ID NO. 6) 7 S'-TCdTCGiTTCTG-X-GTCTTGiCTdCT-S' (SEQ ID NO. 7) 8 S'-TCTGACdTTCT-X-TCTTdCAGTCT-S' (SEQ ID NO. 8) 9 5'-ACACACCAACT-X-TCAACCACACA-5' (SEQ ID NO. 9) 10 S'-TCGiTCGiTTC-Y-dCTTdCAAdCT-S' (SEQ ID NOS. 10 y 17) 11 5'-TCG2TCG2TTC-Y-G1CTTG1CAAG1CT-5' (SEQ ID NOS. 11 y 18) X = enlazador de glicerol; Y = enlazador de C3; G-\ = 7-desaza-dG; G2 = AraG.

Como los expertos en la técnica reconocerían, la secuencia complementaria de los oligonucleótidos inmunomoduladores palindromicos permite la unión por enlaces de hidrógeno intermoleculares, dando de esta manera la estructura secundaria de los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos. Como se usa en la presente, el término "estructura secundaria" se refiere a la unión por enlaces de hidrógeno intermoleculares. La unión por enlaces de hidrógeno intermoleculares resulta en la formación de una molécula de ácido nucleico de doble cadena. Oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos adicionales pueden unirse entre sí, creando de esta manera una cadena, o multímeros, de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de conformidad con la invención. El término "secuencia palindrómica" significará una repetición invertida (es decir, una secuencia tal como ABCDEE'D'C'B'A', en la cual A y A, B y B', etc., son bases capaces de formar los pares de bases de Watson-Crick usuales. Bajo condiciones adecuadas, tales como condiciones de pH y salinidad fisiológicas, dichas secuencias pueden formar estructuras de doble cadena. En una modalidad, el ácido nucleico inmunomodulador contiene una secuencia palindrómica. Una secuencia palindrómica usada en este contexto, se refiere a un palíndromo en el cual CpG forma parte del palíndromo. En algunas modalidades, CpG es el centro del palíndromo. En algunas modalidades de este aspecto de la invención, la secuencia palindrómica es autocomplementaria por lo cual, tras alineación adecuada, puede formar apareamiento de bases intramolecular o, más típicamente, intermolecular entre G-C, G*-C, G*-C*, G-C*, l-C, A-T, A-U y/o pares de bamboleo G-U. En una modalidad, el grado de autocomplementariedad es de por lo menos 50 por ciento. Por ejemplo, un octámero que sea por lo menos 50 por ciento autocomplementario puede tener una secuencia capaz de formar 4, 5, 6, 7 u 8 pares de bases G-C, A-T, A-U y/o pares de bases de bamboleo G-U. Dichos pares de bases pueden necesitar, pero no necesariamente implican, bases localizadas en cualquier extremo del oligonucleótido inmunomodulador palindrómico autocomplementario. En donde la estabilización del ácido nucleico puede ser importante para el oligonucleótido inmunomodulador palindrómico, puede ser ventajoso "sujetar" uno o ambos extremos de un ácido nucleico de doble cadena, ya sea mediante apareamiento de bases o mediante cualquier otro medio adecuado. El grado de autocomplementariedad puede depender de la alineación entre los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos, y dicha alineación puede incluir o no proyecciones de nucleósidos individuales o múltiples. En otras modalidades, el grado de autocomplementariedad es de por lo menos 60 por ciento, por lo menos 70 por ciento, por lo menos 80 por ciento, por lo menos 90 por ciento, o incluso 100 por ciento. Consideraciones similares se aplican al apareamiento de bases intermolecular entre oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de diferente secuencia de bases. De esta manera, en donde una pluralidad de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos se usan en conjunto, la pluralidad de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos puede incluir, pero no necesita, secuencias que sean por lo menos parcialmente complementarias con alguna otra. En una modalidad, la pluralidad de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos incluye un oligonucleótido inmunomodulador palindrómico que tiene una primera secuencia, y un oligonucleótido inmunomodulador palindrómico que tiene una segunda secuencia, en donde la primera secuencia y la segunda secuencia son por lo menos 50 por ciento complementarias. Por ejemplo, aproximadamente entre dos octámeros que sean por lo menos 50 por ciento complementarios, pueden formar 4, 5, 6, 7 u 8 pares de bases G-C, A-T, A-U, y/o pares de bases de bamboleo G-U. Dichos pares de bases pueden necesitar, pero no necesariamente implican, bases localizadas en cualquier extremo de los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos complementarios. El grado de complementariedad puede depender de la alineación entre los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos, y dicha alineación puede incluir o no proyecciones de nucleósidos individuales o múltiples. En otras modalidades, el grado de complementariedad es de por lo menos 60 por ciento, por lo menos 70 por ciento, por lo menos 80 por ciento, por lo menos 90 por ciento, o incluso 100 por ciento. Como se usa en la presente, el término "complementario" significa que tiene la capacidad para hibridar con un ácido nucleico. Dicha hibridación es ordinariamente el resultado de unión por enlaces de hidrógeno entre cadenas complementarias, de preferencia para formar pares de bases de Watson-Crick o de Hoogsteen, aunque otros modos de unión por enlaces de hidrógeno, así como apilamiento de bases, pueden llevar también a hibridación.

Para los propósitos de la invención, el término "oligonucleotido" se refiere a un polinucleósido formado de una pluralidad de unidades de nucleósido enlazadas. Dichos oligonucleótidos pueden obtenerse de fuentes de ácido nucleico existentes, que incluyen ADN genómico o ADNc, pero se producen de preferencia mediante métodos de síntesis. En algunas modalidades, cada unidad de nucleósido incluye una base heterocíclica y un grupo azúcar de pentofuranosilo, 2'-desoxipentofuranosilo, trehalosa, arabinosa, 2'-desoxi-arabinosa 2'-sustituida, 2 -arabinosa O-sustituida o hexosa. Los residuos de nucleósido pueden acoplarse entre sí mediante cualquiera de los numerosos enlaces internucleósido conocidos. Dichos enlaces internucleósido incluyen, sin limitación, fosfodiéster, fosforotioato, fosforoditioato, alquilfosfonato, alquilfosfonotioato, fosfotriéster, fosforamidato, siloxano, carbonato, carboalcoxi, acetamidato, carbamato, morfolino, borano, tioéter, fosforamidato unido por puentes, metilenfosfonato unido por puentes, fosforotioato unido por puentes y enlaces internucleósido de sulfona. El término "oligonucleotido" abarca también polinucleósidos que tienen uno o más enlaces internucleósido estereoespecíficos (por ejemplo, enlaces (RP)- o (SP)-fosforotioato, alquilfosfonato o fosfotriéster). Como se usa en la presente, se pretende expresamente que los términos "oligonucleótido" y "dinucleótido" incluyan polinucleósidos y dinucleósidos que tengan cualquiera de dichos enlaces internucleósido, ya sea que el enlace comprenda o no un grupo fosfato. En ciertas modalidades, estos enlaces internucleósido pueden ser enlaces fosfodiéster, fosforotioato o fosforoditioato, o combinaciones de los mismos. El término "oligonucleótido" abarca también polinucleósidos que tienen sustituyentes adicionales que incluyen, sin limitación, grupos proteína, grupos lipofílicos, agentes de intercalación, diaminas, ácido fólico, colesterol y adamantano. El término "oligonucleótido" abarca también cualquier otro polímero que contenga nucleobases incluyendo, sin limitación, ácidos nucleicos peptídicos con grupos fosfato, ácidos nucleicos bloqueados (LNA), oligonucleotidos de estructura de base de morfolino, y oligonucleotidos que tengan secciones de estructura de base con enlazadores de alquilo o enlazadores de amino. Los oligonucleotidos inmunomoduladores palindrómicos de la invención pueden incluir nucleósidos de ocurrencia natural, nucleósidos modificados, o mezclas de los mismos. Como se usa en la presente, el término "nucleosido modificado" es un nucleosido que incluye una base heterocíclica modificada, una porción de azúcar modificada, o una combinación de las mismas. En algunas modalidades, el nucleosido modificado es un nucleosido de pirimidina o purina no natural, como se describe en la presente. En algunas modalidades, el nucleosido modificado es un ribonucleósido 2'-sustituido, un arabinonucleósido o un arabinósido 2'-desoxi-2'-sustituido. Para los propósitos de la invención, el término "ribonucleósido 2'-sustituido" o "arabinósido 2'-sustituido" incluye ribonucleósidos o arabinonucleósidos en los cuales el grupo hidroxilo en la posición 2' de la porción pentosa es sustituido para producir un ribonucleósido 2'-sustituido o 2'-0-sustituido. En ciertas modalidades, dicha sustitución es con un grupo alquilo inferior que contiene de 1 a 6 átomos de carbono saturados o insaturados, o con un grupo arilo que tiene de 6 a 10 átomos de carbono, en donde dicho grupo alquilo o arilo puede ser no sustituido o puede ser sustituido, por ejemplo, con grupos halo, hidroxi, trifluorometilo, ciano, nitro, acilo, aciloxi, alcoxi, carboxilo, carboalcoxi o amino. Ejemplos de ribonucleósidos 2'-0-sustituidos o arabinósidos 2'-0-sustituidos incluyen, sin limitación, 2'-0-metilribonucleósidos o 2'-0-metilarabinósidos y 2'-0-metoxietoxirribonucleósidos o 2'-0-metoxietoxiarabinósidos. El término "ribonucleósido 2-sustituido" o "arabinósido 2'-sustituido", incluye también ribonucleósidos o arabinonucleósidos en los cuales el grupo 2'-hidroxilo es reemplazado con un grupo alquilo inferior que contiene de 1 a 6 átomos de carbono saturados o insaturados, o con un grupo amino o halo. Ejemplos de dichos ribonucleósidos 2'-sustituidos o arabinósidos 2'-sustituidos incluyen, sin limitación, ribonucleósidos o arabinósidos 2'-amino, 2'-fluoro, 2'-alilo y 2'-propargilo. El término "oligonucleótido" incluye oligonucleótidos híbridos y quiméricos. Un "oligonucleótido quimérico" es un oligonucleótido que tiene más de un tipo de enlace internucleósido. Un ejemplo no limitativo de dicho oligonucleótido quimérico, es un oligonucleótido quimérico que comprende una región de fosforotioato, fosfodiéster o fosforoditioato, y enlaces no iónicos tales como enlaces alquilfosfonato o alquilfosfonotioato (véase, por ejemplo, Pederson et al., patente de E.U.A. Nos. 5,635,377 y 5,366,878). Un "oligonucleótido híbrido" es un oligonucleótido que tiene más de un tipo de nucleosido. Un ejemplo no limitativo de dicho oligonucleótido híbrido comprende un ribonucleotido o región de ribonucleotido 2'-sustituida, y una región de desoxirribonucleótido (véase, por ejemplo, Metelev y Agrawal, patente de E.U.A. No. 5,652,355, 6,346,614 y 6,143,881 ). En un segundo aspecto, la invención provee composiciones farmacéuticas. Estas composiciones comprenden cualquiera de las composiciones descritas en la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Como se usa en la presente, el término "farmacéuticamente aceptable" se refiere a un material que no interfiere con la eficacia de las composiciones de primer, segundo o tercer aspectos de la invención, y es compatible con un sistema biológico tal como una célula, cultivo de células, tejido u organismo. En ciertas modalidades, el sistema biológico es un organismo vivo, tal como un vertebrado. Como se usa en la presente, el término "vehículo" abarca cualquier excipiente, diluyente, llenador, sal, regulador de pH, estabilizador, solubilizador, lípido u otro material bien conocido en la técnica para su uso en formulaciones farmacéuticas. Se entenderá que las características del vehículo, excipiente o diluyente dependerán de la vía de administración para una aplicación particular. La preparación de formulaciones farmacéuticamente aceptables que contienen estos materiales se describe, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, decimoctava edición, ed. A. Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990, ISBN: 0-912734-04-3. Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden incluir también una vacuna contra el cáncer, que incluye una vacuna contra el cáncer seleccionada de EGF, vacunas contra el cáncer antiidiotípicas, antígeno Gp75, vacuna de melanoma GMK, vacuna de conjugados de gangliósido MGV, Her2/new, Ovarex, M-Vax, O-Vax, L-Vax, terátopo de STn-KHL, BLP25 (MUC-1 ), vacuna idiotípica liposomal, Melacine, vacunas de antígenos peptídicos, vacunas de toxinas/antígenos, vacuna basada en MVA, PACIS, vacuna BCG, TA-HPV, TA-CIN, virus DISC e ImmunCyst/TheraCys. El oligonucleótido inmunomodulador palindrómico, o la vacuna, o ambos, pueden ser enlazados opcionalmente a una proteína inmunógena, tal como hemocianina de la lapa Fissurella (KLH), subunidad de la toxina B del cólera, o cualquier otra proteína portadora inmunógena o proteína portadora no inmunógena. Cualquiera de la plétora de adyuvantes puede usarse incluyendo, sin limitación, adyuvante completo de Freund, adyuvante incompleto de Freund, KLH, lípido A de monofosforilo (MPL), alumbre y saponinas, que incluyen QS-21 , imiquimod, R848, o combinaciones de los mismos. En varias modalidades de la invención, las composiciones del primer o segundo aspectos de la invención pueden ser enlazadas covalentemente a un antígeno, o de otra manera operativamente asociadas con un antígeno. Como se usa en la presente, el término "asociadas operativamente con" se refiere a cualquier asociación que mantenga la actividad tanto de las composiciones del primer, segundo o tercer aspectos de la invención y el antígeno. Ejemplos no limitativos de dichas asociaciones operativas incluyen el ser parte del mismo liposoma u otro de dicho vehículo de suministro o reactivo. En modalidades en donde las composiciones del primer, segundo o tercer aspectos de la invención son enlazadas covalentemente a un antígeno, dicho enlace covalente es en cualquier posición en las composiciones del primer, segundo o tercer aspectos de la invención, menos un extremo 5' accesible de un oligonucleótido inmunomodulador palindromico. Por ejemplo, el antígeno puede ser unido a un enlace internucleósido, o puede ser unido al enlazador no nucleotídico. En forma alternativa, el antígeno puede ser por sí mismo el enlazador no nucleotídico. En varias modalidades de la invención, las composiciones del primer o segundo aspectos de la invención pueden incluir un oligonucleótido inmunomodulador palindromico con actividad antisentido. Como se usa en la presente, "actividad antisentido" significa que el oligonucleótido inmunomodulador palindromico, cuando es introducido en una célula o un animal, causa una reducción en la expresión del gen al cual es complementario. En varias modalidades de la invención, las composiciones del primer o segundo aspectos de la invención pueden incluir una secuencia de oligonucleótido inmunomodulador palindromico que sea un aptámero. Los aptámeros son moléculas de ácido nucleico que se han seleccionado de grupos al azar basados en su capacidad para unirse a otras moléculas. Se han seleccionado aptámeros que se unen a ácidos nucleicos, proteínas, compuestos orgánicos pequeños e incluso organismos enteros. Estas moléculas novedosas tienen muchos usos potenciales en medicina y tecnología (véase, por ejemplo, Burgstaller P., et al., Curr Opin Drug Discov Devel. 5: 690-700 (2002)). Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden administrarse mediante cualquier vía adecuada que incluye, sin limitación, parenteral, oral, sublingual, transdérmica, tópica, vía mucosas, por inhalación, intranasal, por aerosol, intraocular, intratraqueal, intrarrectal, vaginal, mediante cañón de genes, parche dérmico o en forma de gota ocular o enjuague bucal. Las composiciones farmacéuticas pueden suministrarse usando procedimientos conocidos a dosificaciones y por períodos efectivos para lograr el efecto deseado, por ejemplo, el tratamiento de cáncer, el tratamiento de infección y el tratamiento de enfermedades autoinmunes. Cuando se administran sistémicamente, las composiciones farmacéuticas se administran a una dosificación suficiente para alcanzar un nivel de las composiciones en sangre del primer, segundo y/o tercer aspectos de la invención, de aproximadamente 0.0001 micromolar a aproximadamente 10 micromolar. Para administración localizada, concentraciones mucho menores que ésta pueden ser efectivas, y concentraciones mucho mayores pueden ser toleradas. En ciertas modalidades, una dosificación total de oligonucleotido inmunomodulador palindromico varía de aproximadamente 0.0001 mg por paciente por día a aproximadamente 200 mg por kg de peso corporal por día. Puede ser deseable administrar simultáneamente, o secuencialmente, una cantidad terapéuticamente efectiva de una o más de las composiciones terapéuticas de la invención a un individuo como un episodio de tratamiento individual. Ejemplos de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de la invención se crearon usando los siguientes protocolos para síntesis. Los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de la invención pueden sintetizarse convenientemente usando un sintetizador automatizado, y el procedimiento de fosforamidita como se muestra esquemáticamente en la figura 1. En algunas modalidades, los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos se sintetizan mediante un procedimiento de síntesis lineal. Enlazadores representativos para esta síntesis se muestran a continuación. Como se usa en la presente, el término "síntesis lineal" se refiere a una síntesis que inicia en un extremo del oligonucleotido inmunomodulador palindromico, y progresa linealmente hacia el otro extremo. La síntesis lineal permite la incorporación de unidades monoméricas idénticas o no idénticas (en términos de longitud, composición de bases y/o modificaciones químicas incorporadas) en los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos.

Grupo de enlazadores de molécula pequeña Al final de la síntesis, los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de conformidad con la invención pueden ser desprotegidos convenientemente con solución de amoníaco concentrada, o como es recomendado por el proveedor de fosforamidita, si se incorpora un nucleósido modificado. El oligonucleotido inmunomodulador palindromico producto es de preferencia purificado mediante CLAR de fase invertida, detritilado, desalado y dializado. Las composiciones descritas en el primer y segundo aspectos de la invención pueden comprender el oligonucleotido inmunomodulador palindromico solo o como conjugados de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos. Un conjugado de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos comprende un oligonucleótido inmunomodulador palindrómico, como se describió anteriormente, y un compuesto conjugado con el oligonucleótido inmunomodulador palindrómico en una posición diferente del extremo 5' accesible. En algunas modalidades, el compuesto es conjugado con el enlazador no nucleotídico. En algunas otras modalidades, el compuesto es conjugado con el oligonucleótido inmunomodulador palindrómico en una posición diferente de su extremo 5'. Compuestos adecuados que pueden ser conjugados con los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de la invención incluyen, pero no están limitados a, colesterol, diferentes longitudes de polietilenglicol, péptidos, anticuerpos, proteínas, vacunas, lípidos, antígenos, y cualquier molécula pequeña inmunomoduladora tal como, pero no limitada a, imiquimod, R848, loxoribina, isatorbina, así como agentes quimioterapéuticos. El oligonucleótido inmunomodulador palindrómico o inmunómero (véase la publicación de patente de E.U.A. No. 20040097719) solo o como conjugados de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos, puede administrarse en los métodos discutidos más adelante. El antígeno se selecciona opcionalmente de antígenos asociados con un patógeno, antígenos asociados con un cáncer, antígenos asociados con un trastorno autoinmune y antígenos asociados con otras enfermedades tales como, pero no limitadas a, enfermedades veterinarias o pediátricas, o en donde el antígeno sea un alérgeno. En algunas modalidades, el antígeno produce un efecto de vacuna. Para los propósitos de la invención, el término "asociado con" significa que el antígeno está presente cuando el patógeno, cáncer, trastorno autoinmune, alergia a alimentos, alergia de la piel, alergia respiratoria, asma u otra enfermedad está presente, pero ya sea que no está presente, o está presente en cantidades reducidas, cuando el patógeno, cáncer, trastorno autoinmune, alergia a alimentos, alergia de la piel, alergia respiratoria o enfermedad está ausente. El oligonucleotido inmunomodulador palindrómico está enlazado covalentemente al antígeno, o de otra manera está asociado operativamente con el antígeno. Como se usa en la presente, el término "asociado operativamente con" se refiere a cualquier asociación que mantenga la actividad del oligonucleotido inmunomodulador palindrómico y el antígeno. Ejemplos no limitativos de dichas asociaciones operativas incluyen el ser parte del mismo liposoma u otro de dicho vehículo de suministro o reactivo. En modalidades en donde el oligonucleotido inmunomodulador palindrómico está enlazado covalentemente al antígeno, dicho enlace covalente es de preferencia en cualquier posición en el oligonucleotido inmunomodulador palindrómico diferente de un extremo 5' accesible de un oligonucleotido inmunomodulador palindrómico. Por ejemplo, el antígeno puede estar unido en un enlace internucleósido, o puede estar unido al enlazador no nucleotídico. En forma alternativa, el antígeno puede ser por sí mismo el enlazador no nucleotídico. En un tercer aspecto, la invención provee métodos para generar y/o modular una respuesta inmune en un vertebrado, dichos métodos comprendiendo administrar al vertebrado un oligonucleotido inmunomodulador palindrómico o conjugado del mismo de conformidad con la invención. En algunas modalidades, el vertebrado es un mamífero. Para los propósitos de esta invención, se pretende expresamente que el término "mamífero" incluya humanos. En ciertas modalidades, el oligonucleotido inmunomodulador palindrómico o conjugado del mismo se administra a un vertebrado que necesita de inmunomodulación. Como se usa en la presente, el término "modulación" o "modular" se refiere a incrementar o disminuir la actividad inmunomoduladora de un ácido nucleico inmunomodulador palindrómico respecto a la actividad del ácido nucleico inmunomodulador palindrómico precursor. En los métodos de conformidad con este aspecto de la invención, la administración de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos puede ser mediante cualquier vía adecuada que incluye, sin limitación, parenteral, oral, sublingual, transdérmica, tópica, vía mucosas, por inhalación, intranasal, intramuscular, intraperitoneal, subcutánea, intradérmica, por aerosol, intraocular, intratraqueal, intrarrectal, vaginal, mediante cañón de genes, parche dérmico o en forma de gota ocular o enjuague bucal. La administración de las composiciones terapéuticas de inmunómeros puede llevarse a cabo usando procedimientos conocidos a dosificaciones y por períodos efectivos para reducir síntomas o subrogar marcadores de la enfermedad. Cuando se administra sistémicamente, la composición terapéutica se administra de preferencia a una dosificación suficiente para alcanzar un nivel de oligonucleótido inmunomodulador palindromico en sangre de aproximadamente 0.0001 micromolar a aproximadamente 10 micromolar. Para administración localizada, concentraciones mucho menores que ésta pueden ser efectivas, y concentraciones mucho mayores pueden ser toleradas. De preferencia, una dosificación total de oligonucleótido inmunomodulador palindromico varía de aproximadamente 0.001 mg por paciente por día a aproximadamente 200 mg por kg de peso corporal por día. Puede ser deseable administrar simultáneamente, o secuencialmente, una cantidad terapéuticamente efectiva de una o más de las composiciones terapéuticas de la invención a un individuo como un episodio de tratamiento individual. Los métodos de conformidad con este aspecto de la invención son útiles para estudios modelo del sistema inmune. Los métodos son también útiles para el tratamiento profiláctico o terapéutico de enfermedad en humanos o animales. Por ejemplo, los métodos son útiles para aplicaciones de vacunas pediátricas y veterinarias. En un cuarto aspecto, la invención provee métodos para tratar terapéuticamente a un vertebrado que sufre de una enfermedad o trastorno, dichos métodos comprendiendo administrar al vertebrado un oligonucleótido inmunomodulador palindromico o conjugado del mismo de conformidad con la invención. En varias modalidades, la enfermedad o trastorno que se tratará es cáncer, un trastorno autoinmune, inflamación de vías respiratorias, trastornos inflamatorios, alergia, asma o una enfermedad causada por un patógeno.

Patógenos incluyen bacterias, parásitos, hongos, virus, viroides y priones. La administración se lleva a cabo como se describió para el tercer aspecto de la invención. Para los propósitos de la invención, el término "alergia" incluye, sin limitación, alergias a alimentos, dermatitis atópica, rinitis alérgica (conocida también como fiebre el heno), conjuntivitis alérgica, urticaria, alergias respiratorias y reacciones alérgicas a otras sustancias tales como látex, medicaciones y picaduras de insectos o problemas que resultan comúnmente de rinitis alérgica-sinusitis, otitis media y COPD (EPOC). El término "inflamación de vías respiratorias" incluye, sin limitación, asma. Ejemplos específicos de asma incluyen, pero no están limitados a, asma alérgico, asma no alérgico, asma inducido por ejercicio, asma ocupacional y asma nocturno. El asma alérgico se caracteriza por obstrucción de las vías respiratorias asociada con alergias y desencadenado por sustancias denominadas alérgenos. Desencadenantes del asma alérgico incluyen, pero no están limitados a, granos de polen aerotransportados, mohos, caspa de animales, ácaros del polvo doméstico y deyecciones de cucarachas. El asma no alérgico es causado por infecciones virales, ciertos medicamentos o irritantes presentes en el aire, que agravan la nariz y las vías respiratorias. Desencadenantes del asma no alérgico incluyen, pero no están limitados a, partículas aerotransportadas (por ejemplo, carbón, polvo de greda), contaminantes atmosféricos (por ejemplo, humo del tabaco, humo de la leña), fuertes olores o rocíos (por ejemplo, perfumes, limpiadores domésticos, humos de la cocina, pinturas o barnices), infecciones virales (por ejemplo, resfriados, neumonía viral, sinusitis, pólipos nasales), sensibilidad a la aspirina y enfermedad de reflujo gastroesofágico (GERD). El asma inducido por ejercicio (EIA) es desencadenado por la actividad física vigorosa. Los síntomas de EIA ocurren a grados variables en una mayoría de quienes sufren de asma, y es probable que sean desencadenados como resultado de que se respira aire seco frío mientras se hace ejercicio. Desencadenantes de EIA incluyen, pero no están limitados a, respiración de granos de polen aerotransportados durante el ejercicio, respiración de contaminantes atmosféricos durante el ejercicio, ejercicio con infecciones virales del tracto respiratorio y ejercicio en aire seco frío. El asma ocupacional, está relacionado directamente con la inhalación de irritantes y otras sustancias potencialmente nocivas presentes en el sitio de trabajo. Desencadenantes del asma ocupacional incluyen, pero no están limitados a, humos, químicos, gases, resinas, metales, polvos, vapores e insecticidas. Como se usa en la presente, el término "trastorno autoinmune" se refiere a trastornos en los cuales las "auto" proteínas sufren ataque por el sistema inmune. Dicho término incluye asma autoinmune. En un quinto aspecto, la invención provee un método para prevenir cáncer, un trastorno autoinmune, inflamación de vías respiratorias, trastornos inflamatorios, trastornos de la piel, alergia, asma o una enfermedad causada por un patógeno en un vertebrado. Este método comprende administrar al vertebrado cualquiera de las composiciones, solas o en combinación, descritas en la invención. Patógenos incluyen bacterias, parásitos, hongos, virus, viroides y priones. La administración se lleva a cabo como se describió para el tercer aspecto de la invención. En cualquiera de los métodos de conformidad con la invención, el oligonucleótido inmunomodulador palindrómico o un conjugado del mismo puede administrarse en combinación con cualquier otro agente útil para tratar la enfermedad o condición, que no disminuya el efecto inmunomodulador del oligonucleótido inmunomodulador palindrómico. Para los propósitos de este aspecto de la invención, el término "en combinación con" significa en el curso de tratar la misma enfermedad en el mismo paciente, e incluye administrar el oligonucleótido inmunomodulador palindrómico y un agente en cualquier orden, incluyendo administración simultánea, así como cualquier orden temporalmente espaciado, por ejemplo, de secuencialmente con uno inmediatamente después del otro hasta varios días de separación. Dicho tratamiento de combinación puede incluir también más que una administración individual del oligonucleótido inmunomodulador palindrómico, e independientemente el agente. La administración del oligonucleótido inmunomodulador palindrómico y el agente puede ser por la misma vía o vías diferentes. En cualquiera de los métodos de conformidad con la invención, el oligonucleótido inmunomodulador palindrómico o conjugado de oligonucleotidos inmunomoduladores palindromicos puede administrarse en combinación con cualquier otro agente útil para tratar o prevenir la enfermedad o condición que no disminuya el efecto inmunoestimulador del oligonucleótido inmunomodulador palindromico. En cualquiera de los métodos de conformidad con la invención, el agente útil para tratar la enfermedad o condición incluye, pero no está limitado a, vacunas, antígenos, anticuerpos, agentes citotóxicos, alérgenos, anticuerpos, oligonucleótidos antisentido, péptidos, proteínas, vectores para terapia génica, vacunas de ADN y/o adyuvantes que mejoren la especificidad o magnitud de la respuesta inmune, o moléculas co-estimuladoras tales como citocinas, quimiocinas, ligandos de proteína, factores de trans-activación, péptidos y péptidos que comprendan aminoácidos modificados. Por ejemplo, en el tratamiento de cáncer, se contempla que el oligonucleótido inmunomodulador palindrómico o conjugado de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos pueda administrarse en combinación con un compuesto quimioterapéutico o un anticuerpo monoclonal. En forma alternativa, el agente puede incluir vectores de ADN que codifiquen para antígeno o alérgeno. En estas modalidades, los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de la invención pueden actuar diversamente como adyuvantes, y/o pueden producir efectos inmunomoduladores directos. Los agentes quimioterapéuticos preferidos usados en los métodos de conformidad con la invención incluyen, sin limitación, gemcitabina, metotrexato, vincristina, adriamicina, cisplatino, cloroetilnitrosoureas que no contengan azúcar, 5-fluorouracilo, mitomicina C, bleomicina, doxorrubicina, dacarbazina, taxol, fragilina, Meglamine GLA, valrubicina, carmustina y poliferposán, MM1270, BAY 12-9566, inhibidor de RAS farnesil transferasa, inhibidor de farnesil transferasa, MMP, MTA/LY231514, LY264618/Lometexol, Glamolec, CI-994, TNP-470, Hicamtin/Topotecan, PKC412, Valspodar/PSC833, Novantrona/Mitoxantrona, Metaret/Suramin, Batimastat, E7070, BCH-4556, CS-682, 9-AC, AG3340, AG3433, lncel/VX-710, VX-853, ZD0101 , ISI641 , ODN 698, TA 2516/Marmistat, BB2516/Marmistat, CDP 845, D2163, PD183805, DX8951f, Lemonal DP 2202, FK 317, Picibanil/OK-432, AD 32/Valrubicina, Metastron/derivado de estroncio, Temodal/Temozolomida, Evacet/doxorrubicina liposomal, Yewtaxan/Placlitaxel, Taxol/Paclitaxel, Xeload/Capecitabina, Furtulon/Doxifluridina, Cyclopax/paclitaxel oral, taxoide oral, SPU-077/Cisplatino, HMR 1275/Flavopiridol, CP-358 (774)/EGFR, CP-609 (754)/inhibidor del oncogen RAS, BMS-182751 /platino oral, UFT(Tegafur/Uracilo), Ergamisol/Levamisol, Eniluracilo/776C85/intensificador de 5FU, Campto/Levamisol, Camptosar/lrinotecan, Tumodex/Ralitrexed, Leustatina/Cladribina, Paxex/Paclitaxel, Doxil/doxorrubicina liposomal, Caelyx/doxorrubicina liposomal, Fludara/Fludarabina, Farmarrubicina/Epirrubicina, DepoCyt, ZDI 839, LU 79553/Bis-Naftalimida, LU 03793/Dolastaina, Caetyx/doxorrubicina liposomal, Gemzar/Gemcitabina, ZD 0473/Anormed, YM 116, semillas de yodo, inhibidores de CDK4 y CDK2, inhibidores de PARP, D4809/Dexifosamida, Ifes/Mesnex/lfosamida, Vumon/Tenipósido, Paraplatino/Carboplatino, Plantinol/cisplatino, Vepésido/Etopósido, ZD 9331 , Taxotere/Docetaxel, profármaco de arabinósido de guanina, análogo de taxano, nitrosoureas, agentes alquilantes tales como melfelán y ciclofosfamida, aminoglutetimida, asparaginasa, busulfán, carboplatino, clorambucilo, clorhidrato de citarabina, dactinomicina, clorhidrato de daunorrubicina, fosfato sódico de estramustina, etopósido (VP 16-213), floxuridina, fluorouracilo (5-FU), flutamida, hidroxiurea (hidroxicarbamida), ifosfamida, interferón alfa-2a, alfa-2b, acetato de leuprolida (análogo del factor liberador de LHRH), lomustina (CCNU), clorhidrato de mecloretamina (mostaza de nitrógeno), mercaptopurina, mesna, mitotano (o.p'-DDD), clorhidrato de mitoxantrona, octreótido, plicamicina, clorhidrato de procarbazina, estreptozocina, citrato de tamoxifeno, tioguanina, tiotepa, sulfato de vinblastina, amsacrina (m-AMSA), azacitidina, eritropoyetina, hexametilmelamina (HMM), interleucina-2, mitoguazona (metil-GAG; metil glioxal bis-guanilhidrazona; MGBG), pentostatina (2'-desoxicoformicina), semustina (metil-CCNU), tenipósido (VM-26), sulfato de vindesina, inhibidores de tirosina cinasa, tales como inhibidores del EGFR y VEGF que incluyen, pero no están limitados a, lapatinib (EGFR y ErbB-2 (Her2/neu), inhibidor doble de tirosina cinasa (GSK)), gefitinib (ZD1839/lressa (AstraZeneca)), erlotinib (Tarceva - EGFR/inhibidor de HER1 (Genentech)), talidomida ((talidomida) - fármaco antiangiogénico), imatinib (Glivec) y vatalanib (inhibidor de tirosina cinasa del VEGFR), sorafenib (inibidor de Raf cinasa (Bayer)), VX-680 (inhibidor de Aurora cinasa), Sutent (inhibidor del receptor de tirosina cinasas (RTKs) (Pfizer)), bortezomib ((Velcade) inhibidor de proteosomas), temozolomida ((Temodal) agente alquilante), e interferón alfa (Intron A, Roferon A).

La inmunoterapia pasiva en la forma de anticuerpos, y en particular anticuerpos monoclonales, ha sido el sujeto de investigación y desarrollo considerables como agentes contra el cáncer. El término "anticuerpo monoclonal", como se usa en la presente, se refiere a una molécula de anticuerpo o composición molecular individual. Una composición de anticuerpo monoclonal exhibe una especificidad y afinidad de unión singular por un epítope particular. Por consiguiente, el término "anticuerpo monoclonal humano" se refiere a anticuerpos que exhiben una especificidad de unión singular que tienen regiones variables y constantes derivadas de secuencias de ¡nmunoglobulina de la línea germinal humana. Ejemplos de agentes contra el cáncer incluyen, pero no están limitados a, Panorex (Glaxo-Wellcome), Rituxan (IDEC/Genentech/Hoffman la Roche), Mylotarg (Wyeth), Campath (Millennium), Zevalin (IDEC y Schering AG), Bexxar (Corixa/GSK), Erbitux (Imclone/BMS), Avastin (Genentech), Herceptin (Genentech/Hoffman la Roche), Cetuximab (Imclone) y Panitumumab (Abgenix/Amgen). Pueden usarse también anticuerpos en inmunoterapia activa usando anticuerpos antiidiotípicos que parecen imitar (en un sentido inmunológico) los antígenos del cáncer. Pueden generarse anticuerpos monoclonales mediante métodos conocidos por los expertos en la técnica de tecnología de ADN recombinante. Se pretende que los siguientes ejemplos ilustren además ciertas modalidades preferidas de la invención, y no se pretende que limiten el alcance de la invención.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Síntesis y purificación de oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos de CpR de fosforotioato con segmentos de secuencia no idénticos Se sintetizaron oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos en una escala de 1 a 2 micromolar, usando química de ß-cianoetilfosforamidita en un sintetizador de ADN 8909 Expedite de PerSeptive Biosystem. El enlazador de glicerilo protegido con Di-DMT unido al soporte sólido de CPG y el enlazador de DMT-propanodiol fosforamidita, se obtuvieron de ChemGenes Corporation (Wilmington, MA). El monómero T cargado de 5'-CPG, 5'-fosforamiditas y 7-desaza-2'-desoxiguanosina 3'-fosforamidita, se obtuvieron de ChemGenes. Las fosforamiditas 3' de dA, dG, dC y T se obtuvieron de Proligo. Se usó reactivo de Beaucage como un oxidante para obtener la modificación de la estructura de base de fosforotioato. Se usó un protocolo de acoplamiento modificado para 5'-fosforamiditas y 7-desaza-2'-desoxiguanosina 3'-fosforamiditas. Después de la síntesis, los inmunomeros fueron desprotegidos usando protocolos estándar, purificados mediante RP-CLAR, detritilados y dializados, contra agua estéril de calidad para irrigación (Braun) de la farmacopea de los Estados Unidos. Los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos fueron liofilizados y disueltos de nuevo en agua destilada, y se determinaron las concentraciones midiendo la absorbancia de luz UV a 260 nm. La pureza de todos los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos sintetizados se determinó mediante PAGE desnaturalizante, y algunos de los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos se caracterizaron mediante espectrometría de masa MALDI-TOF para masa molecular. Todos los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos se sintetizaron y purificaron bajo condiciones idénticas, para reducir al mínimo la contaminación por endotoxinas.

EJEMPLO 2 Cultivos de células de bazo de ratón y medición de citocinas Células de bazo de ratones C57BL/6 de 4 a 8 semanas se prepararon y cultivaron en medio completo del RPMI. Se sembraron células de bazo de ratón en placas de 24 cavidades a 5 X 106 células/ml. Oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos disueltos en regulador de pH TE (Tris-HCI 10 mM, pH 7.5, EDTA 1 mM), se añadieron a una concentración final de 0.1 , 0.3, 1.0, 3.0 ó 10 pg/ml a los cultivos de células. Las células se incubaron entonces a 37°C por 24 horas, y los sobrenadantes se colectaron para pruebas de ELISA. Se midieron los niveles de IL-12 e IL-6 en los sobrenadantes mediante ELISA en sandwich. Los reactivos requeridos, incluyendo anticuerpos de citocinas y estándares, se adquirieron de BD Pharmingen. La estreptavidina-peroxidasa y el substrato se obtuvieron de KPL. Los resultados se muestran en las figuras 2 y 3.

EJEMPLO 3 Cultivos de células humanas y pruebas de citocinas Se aislaron células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) de sangre recién extraída de voluntarios sanos (CBR Laboratories, Boston, MA), mediante el método de centrifugación por gradiente de densidad de Ficoll (Histopaque-1077, Sigma). Se aislaron DCs plasmacitoides de PBMCs por selección positiva, usando el equipo de aislamiento de células BDCA4 (Miltenyi Biotec) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se sembraron PBMCs humanas en placas de 48 cavidades usando 5X106 células/ml. Se sembraron pDCs en placas de 96 cavidades usando 1X106 células/ml. Los oligonucleótidos inmunomoduladores palindrómicos disueltos en DPBS (pH 7.4; Mediatech) se añadieron a una concentración final de 10.0 g/ml a los cultivos de células. Las células se incubaron entonces a 37°C por 24 horas (IFN-a e IL-6) o 48 horas (IL-10), y los sobrenadantes se colectaron para pruebas de ELISA. Los experimentos se realizaron en cavidades por triplicado. Los niveles de IFN-a, IL-6 y/o IL-10 se midieron mediante ELISA en sandwich. Los reactivos requeridos, incluyendo anticuerpos de citocinas y estándares, se adquirieron de BD PharMingen. Los resultados se muestran en las figuras 4 a 8a-8c.

Equivalentes Mientras que la invención anterior se ha descrito en cierto detalle para propósitos de claridad y entendimiento, los expertos en la técnica apreciarán después de leer esta descripción, que pueden hacerse varios cambios en forma y detalle sin que se aparten del alcance real de la invención y las reivindicaciones anexas.

Claims (13)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1.- Un oligonucleotido inmunomodulador palindromico que tiene una estructura seleccionada del grupo de 5'-TCGiTCGiTTCTC-Y-G1CTTG1CAAG1CT-5' (SEQ ID NOS. 1 y 12), S'-TCdTCG^CTC-Y-G AG i CTTG i CAAG ^ CTCT-5' (SEQ ID NOS. 2 y 13), S'-TCdTCdTTCTC-Y-G AG AG i CTTG 1 CAAG 1 CTCTCT-5' (SEQ ID NOS. 3 y 14), 5'-TCG!TCG!TTCTC-Y-GCCGCGCGGC-5' (SEQ ID NOS. 4 y 15), 5'-TCG i TCG -i TTAG A-Y-TG CTG 1 CT-5' (SEQ ID NOS. 5 y 16) o 5'-TCG!TCdTTC-Y-dCTTG!CAAGiCT-5' (SEQ ID NOS. 10 y 17); en donde X es un enlazador de glicerol, Y es un enlazador de C3 y Gi es 7-desazaguanosina.

2.- El uso de un oligonucleotido inmunomodulador palindromico que tenga una estructura seleccionada de 5'-TCGiTCGiTTCTC-Y-G!CTTG!CAAG!CT-5' (SEQ ID NOS. 1 y 12), S'-TCG^CG^CTC-Y-G AG i CTTG i CAAG 1 CTCT-5' (SEQ ID NOS. 2 y 13), S'-TCGiTCdTTCTC-Y-G AG AG i CTTG 1 CAAG i CTCTCT-5' (SEQ ID NOS. 3 y 14), 5'-TCdTCG!TTCTC-Y-GCCGCGCGGC-5* (SEQ ID NOS. 4 y 15), 5'-TCG i TCG i TTAG A-Y-TG 1 CTG 1 CT-5' (SEQ ID NOS. 5 y 16) o 5'-TC G i TCG i TTC- Y-G CTTG 1 CAAG 1 CT-5 ' (SEQ ID NOS. 10 y 17); en donde X es un enlazador de glicerol, Y es un enlazador de C3 y Gi es 7- desazaguanosina, para la elaboración de un medicamento útil para tratar a un vertebrado que sufre de cáncer, un trastorno autoinmune, inflamación de vías respiratorias, trastornos inflamatorios, trastornos de la piel, alergia, asma o una enfermedad causada por un patógeno.

3.- El uso como se reclama en la reivindicación 2, en donde el medicamento está adaptado para ser administrable por una vía de administración seleccionada de parenteral, oral, sublingual, transdérmica, tópica, vía mucosas, por inhalación, intranasal, por aerosol, infraocular, intratraqueal, intrarrectal, vaginal, cañón de genes, parche dérmico, gota ocular y enjuague bucal.

4. - Una formulación farmacéutica que comprende el oligonucleótido inmunomodulador palindrómico como el que se reclama en la reivindicación 1 y un vehículo fisiológicamente aceptable.

5. - El uso de un oligonucleótido inmunomodulador palindrómico que tenga una estructura seleccionada de 5'-TCGiTCGiTTCTC-Y- G i CTTG i CAAG 1 CT-5' (SEQ ID NOS. 1 y 12), S'-TCdTCGiTTCTC-Y-G AG i CTTG -i CAAG ^ CTCT-5' (SEQ ID NOS. 2 y 13), S'-TCdTCG^CTC-Y-G AG AG i CTTG 1 CAAG ^ CTCTCT-5 ' (SEQ ID NOS. 3 y 14), 5'-TCdTCG^CTC-Y-GCCGCGCGGC-S" (SEQ ID NOS. 4 y 15), 5'-TCG i TCG i TTAG A-Y-TG i CTG 1 CT-5' (SEQ ID NOS. 5 y 16) o 5'-TCG!TCG!TTC-Y-GiCTTG!CAAGiCT-5' (SEQ ID NOS. 10 y 17); en donde X es un enlazador de glicerol, Y es un enlazador de C3 y Gi es 7-desazaguanosina, para la elaboración de un medicamento útil para generar una respuesta inmune en un vertebrado.

6. - El uso como se reclama en la reivindicación 5, en donde el medicamento está adaptado para ser administrable por una vía de administración seleccionada de parenteral, oral, sublingual, transdérmica, tópica, vía mucosas, por inhalación, intranasal, por aerosol, intraocular, intratraqueal, intrarrectal, vaginal, cañón de genes, parche dérmico, gota ocular y enjuague bucal.

7. - El uso de un oligonucleótido inmunomodulador palindrómico que tenga una estructura seleccionada de 5'-TCGiTCGiTTCTC-Y-G!CTTG!CAAG!CT-5' (SEQ ID NOS. 1 y 12), G AG i CTTG i CAAG 1 CTCT-5' (SEQ ID NOS. 2 y 13), 5'-TCGiTCGiTTCTC-Y-GAGAGiCTTdCAAGiCTCTCT-5' (SEQ ID NOS. 3 y 14), 5'-TCdTCdTTCTC-Y-GCCGCGCGGC-5' (SEQ ID NOS. 4 y 15), 5'-TCG i TCG i TTAG A-Y-TG 1 CTG 1 CT-5' (SEQ ID NOS. 5 y 16) o 5'-TCG!TCG!TTC-Y-GiCTTG!CAAGiCT-5' (SEQ ID NOS. 10 y 17); en donde X es un enlazador de glicerol, Y es un enlazador de C3 y Gi es 7-desazaguanosina, para la elaboración de un medicamento útil para prevenir cáncer, un trastorno autoinmune, inflamación de vías respiratorias, trastornos inflamatorios, trastornos de la piel, alergia, asma o una enfermedad causada por un patógeno en un vertebrado.

8. - El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde el medicamento está adaptado para ser administrable por una vía de administración seleccionada de parenteral, oral, sublingual, transdérmica, tópica, vía mucosas, por inhalación, ¡ntranasal, por aerosol, intraocular, intratraqueal, intrarrectal, vaginal, cañón de genes, parche dérmico, gota ocular y enjuague bucal.

9. - El oligonucleótido de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque comprende adicionalmente un anticuerpo, oligonucleótido antisentido, proteína, antígeno, alérgeno, agente quimioterapéutico o adyuvante.

10. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada además porque comprende adicionalmente un anticuerpo, oligonucleótido antisentido, proteína, antígeno, alérgeno, agente quimioterapéutico o adyuvante.

11. - El uso como se reclama en la reivindicación 2, en donde el medicamento está adaptado adicionalmente para ser administrable con un anticuerpo, oligonucleótido antisentido, proteína, antígeno, alérgeno, agente quimioterapéutico o adyuvante.

12. - El uso como se reclama en la reivindicación 5, en donde el medicamento está adaptado adicionalmente para ser administrable con un anticuerpo, oligonucleótido antisentido, proteína, antígeno, alérgeno, agente quimioterapéutico o adyuvante.

13.- El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde el medicamento está adaptado adicionalmente para ser administrable con un anticuerpo, oligonucleótido antisentido, proteína, antígeno, alérgeno, agente quimioterapéutico o adyuvante.