MX2008000778A - Agente desinfectante. - Google Patents
Agente desinfectante.Info
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Abstract
La invencion se refiere a un agente desinfectante que contiene una combinacion especial de fenoles biocidas y dado el caso derivados de fenol asi como un queratolitico. El agente desinfectante es adecuado especialmente para combatir protozoos parasitarios incluyendo sus formas duraderas.
Description
AGENTE DESINFECTANTE CAMPO DE LA INVENCION La invención se refiere a un agente desinfectante que contiene una combinación especial de fenoles biocidas y dado el caso derivados de fenol así como un queratolítico. El agente desinfectante es adecuado especialmente para combatir protozoos parasitarios incluyendo sus formas duraderas. ANTECEDENTES DE LA INVENCION Tales agentes desinfectantes tienen, por ejemplo, especial importancia en el combate de coccidiosis en animales útiles. Eimeria tenella es el agente patógeno protozoario de la coccidiosis de aves, una enfermedad que con la tenencia sobre suelo intensivamente de polluelos y gallinas ha llevado a problemas de importancia económica. La infección de los animales comienza tras la ingestión de oocistos esporulados que son vehículos de esporozoitos unicelulares infecciosos.
Los esporozoitos colonizan células intestinales en cuya protección se realiza la multiplicación por millones de los estadios de parásitos. A la patología de una enfermedad de coccidiosis pertenecen diarreas hemorrágicas que pueden provocar grandes daños económicos por una ingestión de alimentos reducida y una pérdida de peso de las gallinas. Para la profilaxis de esta enfermedad se emplean en la actualidad anticoccidios por valor de al menos 350 millones de dólares de Estados Unidos al año. El tratamiento
REF. : 189439 quimioterapéutico se lleva a cabo desde 1970 sobre todo con los ionóforos de poliéter monensina, narasina, salinomicina y lasalocida. Además de la fuerte carga de medicamentos de la gallina el desarrollo de resistencias a medicamentos constituye el mayor problema del tratamiento quimioterapéutico. La primera indicación de un desarrollo de resistencia es frecuentemente el aumento renovado de la excreción de oocistos. Una alternativa para el tratamiento quimioterapéutico de coccidiosis sería la desinfección temprana de los corrales de aves. Aquí se depositan estadios duraderos de Eimeria, los denominados oocistos, con el excremento de los animales y pueden persistir junto con los restos de excremento y componentes de pienso en pavimentos, superficies de paredes, en grietas de muros y en dispositivos de sujeción y como fuentes de infección continuas desencadenan nuevas enfermedades en animales presentes durante un largo periodo de tiempo. Los oocistos de Eimeria pueden ser aún infecciosos hasta un año tras la excreción. En este periodo de tiempo el arrastre de oocistos por personas o animales a corrales de aves adyacentes es un gravamen adicional . Los oocistos de Eimeria tenella tienen un tamaño de 24,5 a 18,3 µm y se forman por millones tras los ciclos de multiplicación asexuales en células intestinales de animales infectados . Un macrogameto femenino es fecundado por un microgameto masculino y forma el cigoto, que se rodea con dos capas típicas: una capa exterior lisa, que se genera tras fusión del cuerpo de formación de envoltura WFl ("wall forming body I") y una capa interior, que se genera tras fusión del cuerpo de formación de envoltura WFII ("wall forming body II"). Hasta la finalización de ambas capas el oocisto en maduración permanece en la vacuola parasitófora de células intestinales infectadas y se excreta enseguida con el excremento. En presencia de oxígeno comienza la denominada esporulación: a partir de los esporontes no diferenciados se generan mediante una división por reducción cuatro esporocistos, que contienen cada uno dos esporozoitos. La esporulación dura para Eimeria tenella por lo general de 2 a 3 días. Una vez finalizada el oocisto es infeccioso. La constitución y composición de ambas paredes de oocistos son de una remarcada capacidad de resistencia bioquímica-fisiológica y representan una barrera de protección efectiva para la supervivencia de gérmenes parásitos en libertad. Mientras que la pared de oocistos exterior está constituida por fosfolípidos, alcoholes de cadena larga y triglicéridos, la capa interior se compone de glicoproteínas que son estabilizadas por puentes de disulfuro. La proteína de pared de oocistos principal de 12 a 14 kDa contiene los aminoácidos serina, tirosina y treonina y está unida a hidratos de carbono. Estas proteínas facilitan a los oocistos una gran estabilidad estructural frente a calor o frío. Los lípidos de la capa exterior condicionan la gran resistencia a productos químicos. Las medidas de desinfección físicas sencillas mediante calor, frío, secado o irradiación son sólo de utilidad muy limitada: así los oocistos son eliminados en laboratorio a temperaturas de 60 a 100a C en pocos minutos, sin embargo en el corral el efecto de desinfección de agua caliente es en condiciones prácticas muy bajo en la mayoría de los casos, ya que el agua se enfría muy rápidamente sobre el suelo del corral. También con limpiezas a alta presión se consigue a bajos tiempos de acción sólo una desinfección parcial. Los oocistos presentan también frente al frío una fuerza de resistencia considerable. Incluso con ultracongelación de -25a C durante 14 días los oocistos de Eimeria sobreviven y se mantienen infecciosos. El secado consigue un determinado grado de daño, sin embargo el procedimiento para la desinfección se mostró como poco fiable. Las irradiaciones gamma y con electrones conducen a partir de 3,5-4,0 kGy a la pérdida de la capacidad de esporulación de oocistos, sin embargo su uso no es práctico debido a los elevados costes de adquisición de equipos requeridos para la agricultura. La mayor parte de los agentes desinfectantes químicos efectivos contra bacterias y virus no son efectivos contra oocistos de Eimeria ya que sus envolturas están constituidas de forma químicamente compleja y dificulta la introducción de productos químicos. En primer lugar un agente desinfectante específico del parásito debe penetrar las envolturas exteriores que contienen lípidos de los oocistos y luego atacar las glicoproteínas estables de las envolturas interiores antes de que pueda dañar los esporocistos y esporozoitos que contienen membrana. Frente a sustancias inorgánicas agresivas como sosa cáustica (NaOH) o hipoclorito sódico (NaOCl) los oocistos de Eimeria son capaces de resistir 1000 veces más que las bacterias. Incluso a concentraciones > 5% y un tiempo de acción de 120 minutos no se pierde la infecciosidad de oocistos. En países de Europa del Este se usa ocasionalmente de forma exitosa amoniaco (NH3) con un tiempo de acción de 24 horas, no obstante es muy alta la molestia simultánea por olores de una atmósfera saturada de amoniaco. El etanol (70 a 90%) y formaldehído no tienen en la práctica efecto suficiente sobre los oocistos capaces de resistir de la especies Eimeria . Determinados derivados del fenol, especialmente el p-cloro- -cresol, están contenidos como principios activos orgánicos exclusivos en algunos preparados comerciales (tabla 1), además también en combinación con sulfuro de carbono y cloroformo (tabla 1) . Estos se usan en la práctica para combatir la coccidiosis del ave en corrales vacíos. Tabla 1: agentes desinfectantes permitidos con actividad contra oocistos de Eimeria (Bóhm 2000) Nombre comercial Principios Api icación (%, h) activos Calgonit sterizid Cresoles 4%, 2 h P24 Dessau DES SPEZIAL N Cresoles 4%, 2 h ENDOSANFORTE S Neu Cresoles 4%, 2 h JEMET-OKOK 5 Compuestos de 5%, 2 h fenol Sulfuro de carbono Cloroformo LOMASEPT® L 20 Compuestos de 5%, 2 h fenol Sulfuro de carbono Cloroformo NEOPREDISAN 135-1 Cresoles 4%, 2 h NOACK-DES ENDO Cresoles 4%, 2 h
El documento WO 94/17661 describe un agente desinfectante con actividad parasiticida que contiene uno o varios fenoles en combinación con ácidos orgánicos queratolíticamente activos, etilenglicoldialquiléteres así como alquilsulfonatos o sulfatos de sodio o potasio. Los agentes desinfectantes antiparasitarios se ensayan en Alemania en cuanto a actividad según las directrices de la Sociedad de Medicina Veterinaria Alemana (DVG) en oocistos de Eimeria tenella en el ensayo en suspensión (ensayo de lisis) así como en el ensayo de infección en excrementos de gallina. Oocistos de Eimeria tenella , cepa "Houghton", se clasifican como de capacidad de resistencia especial y por tanto se recomiendan como organismos de ensayo. En la práctica es sobre todo un problema combatir oocistos de la especie Eimeria . Sin embargo la formación de la pared de cistos en otros protozoos, especialmente coccidios, y también en gusanos es similar. La descripción previa en el ejemplo de especies de Eimeria se puede trasladar por tanto a estos organismos. En la aplicación de estos sistemas de ensayo se ha encontrado de forma sorprendente que agentes que contienen una combinación de distintos fenoles o derivados de fenol biocidas con aplicación simultánea de queratolíticos superan claramente la actividad desinfectante de agentes desinfectantes existentes.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCION La invención se refiere por tanto a: agentes desinfectantes que contienen (a) un fenol biocida clorado (b) un fenol biocida clorado o no clorado adicional (c) un fenol y/o un derivado de fenol biocida no clorado adicional (d) un queratolítico Por fenoles biocidas se entiende aquellos compuestos de fenol que portan un grupo OH libre y presentan un efecto biocida. Estos fenoles pueden portar otros sustituyentes de anillo adicionales como, por ejemplo, halógenos, especialmente cloro, alquilo C?-6, cicloalquilo C3-6, fenilo, clorofenilo, bencilo y/o clorobencilo. Son fenoles biocidas no clorados, por ejemplo: 2-metilfenol, 3-metilfenol, 4-metilfenol, 4-etilfenol, 2,4-dimetilfenol, 2 , 5-dimetilfenol, 3 , 4-dimetilfenol , 2,6-dimetilfenol, 4-n-propilfenol , 4-n-butilfenol , 4-n-amilfenol, 4-n-hexilfenol, timol (5-metil-2-isopropilfenol) , 2-fenilfenol, 4-fenilfenol, 2-bencilfenol . Preferiblemente se usa como fenol biocida no clorado 2-fenilfenol . Son fenoles biocidas clorados, por ejemplo, 4-cloro-3-metilfenol (PCMC, p-cloro-m-cresol) , 4-cloro-3-etilfenol, 2-n-amil-4-clorofenol, 2-n-hexil-4-clorofenol, 2-ciclohexil-4-clorofenol, 4-cloro-3 , 5-xilenol (PCMX, p-cloro-m-xilenol) , 2, 4-dicloro-3 , 5-xilenol (DCMX, dicloro-p-xilenol, 4-cloro-2-fenilfenol, 2-bencil-4-clorofenol, bencil-4-cloro-m-cresol, 4-clorobencil-dicloro-m-cresol . Son fenoles biocidas clorados preferidos 2-bencil-4-clorofenol, 4-cloro-3 , 5-xilenol, 2,4-dicloro-3 , 5-xilenol así como especialmente 4-cloro-3-metilfenol . DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCION Por derivados de fenol se entiende en esta invención aquellos compuestos derivados de fenol cuyo grupo OH está derivatizado, de modo que no contienen grupo OH libre alguno. Son preferidos fenoléteres, especialmente con alcoholes alifáticos con 1 a 6 átomos de carbono. Como ejemplo preferido es de citar fenoxietanol. Según una forma de realización de acuerdo con la invención se pueden combinar como principios activos biocidas un fenol no clorado con dos fenoles clorados. Un ejemplo preferido es la combinación de 4-cloro-3-metilfenol, 2-fenilfenol y 2-bencil-4-clorofenol . Se ha mostrado sin embargo que justo el uso de derivados de fenol no clorados, especialmente fenoxietanol, junto con fenoles biocidas conduce por lo general de nuevo a una mejora del efecto. Según una forma de realización preferida se pueden usar como principios activos biocidas un fenol clorado, un fenol no clorado y un derivado de fenol no clorado, especialmente fenoxietanol . Según una forma de realización preferida adicional se pueden usar como principios activos biocidas dos fenoles clorados distintos y un derivado de fenol no clorado, especialmente fenoxietanol . Se usan con especial preferencia como principios activos biocidas dos fenoles clorados distintos, un fenol no clorado y un derivado de fenol no clorado, especialmente fenoxietanol. Un ejemplo especialmente preferido es la combinación de 4-cloro-3-metilfenol, 2-fenilfenol, 2-bencil-4-fenol y fenoxietanol. Los queratolíticos son sustancias que influyen en y desnaturalizan en caso extremo la queratina o la pueden descomponer. Para los agentes de acuerdo con la invención se tienen en cuenta como queratolíticos: ácidos orgánicos, como ácido cítrico, ácido fórmico y ácido salicílico; además de urea, resorcina, ácido tioglicólico, sulfuros, urea, 5-fluorouracilo. Se prefiere de acuerdo con la invención ácido salicílico. Los principios activos fenólicos y el queratolítico se pueden formular de distinta forma para dar un agente desinfectante, considerándose formulaciones sólidas o líquidas . Se pueden usar formulaciones sólidas, por ejemplo, en forma de polvos, formulación para espolvoreo, granulos etc.
Estos contienen normalmente vehículos y/o coadyuvantes. Los principios activos se pueden mezclar con los vehículos y/o coadyuvantes o se dispersan en estos. Sin embargo se prefieren formulaciones líquidas, por ejemplo, en forma de emulsiones, suspensiones o especialmente soluciones. Se pueden usar formulaciones líquidas directamente, preferiblemente se trata de concentrados que antes de la aplicación se diluyen en general con agua hasta la concentración adecuada. Las emulsiones son del tipo agua en aceite o del tipo aceite en agua. Estas se preparan disolviendo los principios activos bien en la fase hidrófoba o bien en la fase hidrófila y estos se homogenizan con el disolvente de la otra fase con ayuda de emulsionantes adecuados y dado el caso de otros coadyuvantes como colorantes, conservantes, antioxidantes, agentes fotoprotectores, sustancias que aumentan la viscosidad. Como fase hidrófoba (aceites) son de citar: aceites de parafina, aceites de silicona, aceites vegetales naturales como aceite de sésamo, aceite de almendras, aceite de ricino, triglicéridos sintéticos como biglicérido de ácido caprílico/cáprico, mezcla de triglicéridos con ácidos grasos vegetales de longitud de cadena C8-?2 u otros ácidos grasos naturales especialmente seleccionados, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos saturados o insaturados, eventualmente también que contienen grupos hidroxilo, mono y diglicéridos de ácidos grasos Cß Cio- Esteres de ácido graso como estearato de etilo, adipato de di-n-butirilo, éster hexílico de ácido láurico, pelargonato de dipropilenglicol, esteres de un ácido graso ramificado de longitud de cadena media con alcoholes grasos saturados de longitud de cadena C16-C18, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, esteres de ácido caprílico/cáprico de alcoholes grasos saturados de longitud de cadena C?2-C?s, estearato de isopropilo, éster oleílico de ácido oleico, éster decílico de ácido oleico, oleato de etilo, éster etílico de ácido láctico, esteres de ácido graso de tipo ceroso como ftalato de dibutilo, éster diisopropílico de ácido adípico, mezclas de esteres relacionados con este último entre otros de alcoholes grasos como alcohol isotridecílico, 2-octildodecanol, alcohol cetilestearílico, alcohol oleílico; ácidos grasos como, por ejemplo, ácido oleico y sus mezclas.
Como fase hidrófila son de citar: agua, alcoholes como, por ejemplo, propilenglicol, glicerina, sorbitol, etanol, 1-propanol, 2-propanol, n-butanol, así como mezclas de estos disolventes . Como emulsionantes son de citar: tensioactivos no ionógenos, por ejemplo, aceite de ricino polioxietilado, monooleato de sorbitán polioxietilado, monoestearato de sorbitán, monoestearato de glicerina, estearato de polioxietilo, alquilfenolpoliglicoléteres; tensioactivos anfolíticos como N-lauril-ß-iminodipropionato de di-sodio o lecitina; tensioactivos anionactivos, como etersulfatos de alcohol graso, alquil Cs-is-sulfonatos o alquil Cs-is-sulfatos, como laurilsulfato de sodio o alquilsulfonatos secundarios (Mersolate®, preferiblemente con una longitud de cadena de alquilo media de 15 átomos de carbono) , sal monoetanolamínica de éster de ácido mono/dialquilpoliglicoleterortofosfórico; tensioactivos cationactivos como cloruro de cetiltrimetilamonio . Como otros coadyuvantes son de citar: sustancias que aumentan la viscosidad y que estabilizan la emulsión como carboximetilcelulosa, metilcelulosa y otros derivados de celulosa y almidón, poliacrilatos, alginatos, polivinilpirrolidona, poli (alcohol vinílico), copolímeros de metilviniléter y anhídrido de ácido maleico, polietilenglicoles, ceras, ácido silícico coloidal o mezclas de las sustancias citadas. Se preparan suspensiones suspendiendo el principio activo en un líquido vehículo dado el caso con adición de otros coadyuvantes como humectantes, colorantes, conservantes, antioxidantes, agentes fotoprotectores. Como líquidos vehículo se tienen en cuenta todos los disolventes citados y mezclas de disolventes homogéneas.
Como humectantes (agentes dispersantes) son de citar los tensioactivos citados anteriormente. Se preparan soluciones disolviendo el principio activo en un disolvente adecuado y eventualmente se añaden aditivos como tensioactivos, facilitadores de la disolución, ácidos, bases, sales tampón, antioxidantes, conservantes. Como disolventes son de citar: agua, alcoholes como alcanoles con 1 a 4 átomos de carbono (por ejemplo, etanol, 1-propanol, 2-propanol, n-butanol), alcoholes sustituidos aromáticamente como alcohol bencílico, feniletanol; glicerina, glicoles, propilenglicol, polietilenglicoles, polipropilenglicoles, esteres como éster etílico de ácido acético, acetato de butilo, benzoato de bencilo; éteres como alquilenglicolalquiléteres como dipropilenglicolmonometiléter, dietilenglicolmonobutiléter; cetonas como acetona, metiletilcetona, hidrocarburos aromáticos y/o alifáticos, aceites vegetales o sintéticos, dimetilformamida (DMF) , dimetilacetamida, N-metilpirrolidona, 2-dimetil-4-oxi-metilen-l, 3-dioxolano así como mezclas de los mismos. Tensioactivos para el uso en las soluciones pueden ser los tensioactivos citados anteriormente en las emulsiones, se prefieren tensioactivos aniónicos, especialmente alquil Cß-iß- sulfonatos o alquil C8-i8-sulfatos, por ejemplo, alquilsulfonatos secundarios (Mersolate®) , preferiblemente con una longitud de cadena de alquilo media de 15 átomos de carbono . Como facilitadores de la disolución son de citar: disolventes que favorecen la disolución del principio activo en el disolvente principal o impiden su precipitación. Son ejemplos polivinilpirrolidona, aceite de ricino polioxietilado, éster de sorbitán polioxietilado. Como coadyuvantes o aditivos adicionales los agentes desinfectantes de acuerdo con la invención pueden contener también desendurecedores y/o inhibidores de la corrosión. Como desendurecedores se tienen en cuenta, por ejemplo, aditivos conocidos del tratamiento de agua, por ejemplo, ácidos fosfónicos, polifosfatos que forman cadena o poli (ácidos carboxílicos) de bajo peso molecular. En los casos en los que los agentes desinfectantes de acuerdo con la invención aún se deberían diluir para la aplicación, las sustancias internas están presentes normalmente en las siguientes concentraciones: Los fenoles y dado el caso derivados de fenol biocidas están contenidos normalmente en una concentración total de 10 a 90% en peso, preferiblemente de 10 a 50% en peso, con especial preferencia de 15 a 40% en peso referido al agente desinfectante . Preferiblemente la relación de fenoles biocidas clorados a fenoles o derivados de fenol biocidas no clorados se encuentra en el intervalo de 40:60 a 90:10, preferiblemente de 50:50 a 85:15, con especial preferencia de 65:35 a 82:18 (relaciones en peso referidas al peso total de los fenoles o derivados de fenol biocidas contenidos, en lo sucesivo designados de forma resumida como biocidas fenólicos) . A modo de ejemplo son de indicar aquí para biocidas fenólicos preferidos intervalos de concentración preferidos (se dan respectivamente porcentaje en peso referido al peso total de todos los biocidas fenólicos contenidos en el agente en cuestión) : 4-Cloro-3-metilfenol : de 30 a 80, preferiblemente de 40 a 70, con especial preferencia de 45 a 60%. 2-Bencil-4-clorofenol : de 5 a 50, preferiblemente de 10 a 40, con especial preferencia de 15 a 30%. 2-Fenilfenol : de 5 a 60, preferiblemente de 10 a 50, con especial preferencia de 13 a 45%. Fenoxietanol: de 3 a 30, preferiblemente de 5 a 25, con especial preferencia de 10 a 20%. Según una forma de realización especialmente preferida el agente desinfectante de acuerdo con la invención contiene como fenoles biocidas una combinación de 4-cloro-3-metilfenol, 2-bencil-4-clorofenol y 2-fenilfenol, que puede contener dado el caso y con especial preferencia también fenoxietanol . Las concentraciones de principio activo se encuentran entonces en los intervalos citados previamente.
El queratolítico se usa en general en los agentes desinfectantes de acuerdo con la invención en una relación en peso respecto a los biocidas fenólicos de 50:50 a 10:90, preferiblemente de 40:60 a 15:85, con especial preferencia de 30:70 a 20:80. Referido al agente desinfectante preparado (normalmente concentrado) las concentraciones en queratolítico se encuentran por lo general en 1 a 30% en peso, preferiblemente en3 a 20% en peso, con especial preferencia en 5 a 18% en peso. Los agentes desinfectantes de acuerdo con la invención contienen preferiblemente tensioactivos, y en concreto normalmente en concentraciones de 3 a 20% en peso, preferiblemente de 5 a 20% en peso, con especial preferencia de 5 a 15% en peso. La proporción de disolvente se puede variar en amplios límites. En concentrados se usan los disolventes no acuosos, preferiblemente los alcanoles indicados anteriormente con 1 a 4 átomos de carbono (por ejemplo, etanol, 1-propanol, 2-propanol, n-butanol) normalmente en cantidades de 15 a 65% en peso, preferiblemente de 20 a 60% en peso, con especial preferencia de 30 a 50% en peso. Además los agentes contienen preferiblemente agua, y en concreto normalmente de 0 a 30% en peso, preferiblemente de 5 a 25% en peso, con especial preferencia de 5 a 20% en peso. .Los agentes desinfectantes descritos con mayor detalle previamente son concentrados que se diluyen para la aplicación por lo general con agua. Las soluciones listas para uso contienen normalmente de 0,5 a 20% en volumen, preferiblemente de 1 a 10% en volumen, con especial preferencia de 1 a 5% en volumen de concentrado de agente desinfectante. La concentración usada se puede variar según cada finalidad de uso. A modo de ejemplo en agentes muy concentrados los tiempos de acción requeridos para un efecto satisfactorio son más cortos. Tiempos de acción típicos se encuentran, por ejemplo, en 0,5 a 5 horas, preferiblemente en 1 a 4 horas. Los agentes desinfectantes de acuerdo con la invención son adecuados para combatir protozoos parasitarios y helmintos que se dan en la tenencia de animales y cría de animales en animales útiles, de cría, de zoológico, de laboratorio, de experimentación y de compañía. A este respecto son efectivos sobre todo contra los estadios duraderos (estadios de cistos extracelulares) . A los protozoos parasitarios pertenecen: Sarcomas tigophora (Rhizopoda) como Entamoebidae, por ejemplo, Entamoeba histolytica, Hartmamellidae, por ejemplo, Acanthamoeba sp . , Hartmanella sp . Apicomplexa (Sporozoa) , especialmente coccidios, como Eimeridae, por ejemplo, Eimeria acervulina, E. adenoides, E. alabahmensis, E. anatis, E. anseris, E. arloingi , E. ashata, E. auburnensis, E. Bovis, E. brunetti, E. canis, E. chinchillae, E. clupearum, E. columbae, E. contorta, E. crandalis, E. debliecki, E. dispersa, E. ellipsoidales, E. falciformis, E. faurei, E. flavescens, E. gallopavonis , E. hagani, E. intestinalis, E. iroquoina, E. irresidua, E. labbeana, E. leucarti, E. magna, E. máxima, E. media, E. meleagridis, E. meleagrimitis , E. mi tis, E. necatrix, E. ninakohlyakimovae , E. ovis, E. parva, E. pavonis, E. perf orans, E. phasani, E. piriformis, E. praecox, E. residua, E. scabra, E. spec., E. stiedai, E. suie, E. tenella, E. truncata, E. truttae, E. zuernii, Globidium spec., Isospora belli, I. canis, I. felis, I. ohioensis, I. rivolta, I. spec., I. suis, Neospara caninum, Cystisospora spec.,
Cryptosporidium spec. como Toxoplasmadidae, por ejemplo, Toxoplasma gondii, como Sarcocystidae, por ejemplo,
Sarcocystis bovicanis, S. bovihominis, S. ovicanis, S. ovifelis, S. spec. y S. suihominis . Mastigophora (Flagellata) como, por ejemplo, Giardia lamblia, G. canis. Además, Myxospora y Microspora, por ejemplo, Glugea spec. Nosema spec. A los helmintos pertenecen tremátodos, cestodos y nematodos . A los tremátodos pertenecen, por ejemplo, agentes patógenos de las familias/géneros: Fasciola, Paramphistomum, Dicrocoelium, Opisthorchis; a los cestodos pertenecen, por ejemplo, agentes patógenos de las familias/géneros Moniezia, Anoplocephala, Diphyllobothrium, Taenia, Echinococcus, Dipylidium, Raillietina, Choanotaenia, Echinuria, a los nematodos pertenecen, por ejemplo, agentes patógenos de las familias/géneros: Strongyloides, Haemonchus, Ostertagia, Trichostrongylus, Cooperia, Nematodirus,
Trichuris, Oes ophagost omum, Chabertia, Bunostomum, Toxocara vi tulorum, Ascaris, Parascaris, Oxyuris, Oesophagostumum, Globocephalus , Hyostrongylus , Spirocerca, Toxascaris,
Toxocara, Ancylostoma, Uncinaria, Capillaria, Prosthogonimus , Amidostomum, Capillaria, Ascaridia, Heterakis, Syngamus, Acanthocephalen . Además del uso contra protozoos y helmintos los agentes desinfectantes de acuerdo con la invención se pueden usar también, por ejemplo, para combatir bacterias como, por ejemplo, clostridios, Escherichia coli , Salmonella spec . Pseudomonas spec. Staphylococcus spec . , Mycobacterium tuberculosis y levaduras como, por ejemplo, Candida albicans e infecciones fúngicas . Además los agentes desinfectantes de acuerdo con la invención se pueden usar también para combatir virus como, por ejemplo, virus de la gripe. Se conocen virus de la gripe de tipo A y de tipo B. De este modo son, por ejemplo, de especial importancia para aves los virus de la gripe aviar que pertenecen al tipo A. Como ejemplo son de citar los virus de la gripe aviar del subtipo H5N1. A los animales útiles y de cría pertenecen mamíferos como, por ejemplo, vacas, caballos, ovejas, cerdos, cabras, camellos, búfalos arni, burros, muías, cebras, conejos, gamos, renos, animales de pieles como, por ejemplo, visones, chinchillas, mapaches, aves como, por ejemplo, gallinas, gansos, pavos, patos, palomas, faisanes así como especies de aves para el hogar y zoológico. A los animales de laboratorio y experimentación pertenecen ratones, ratas, conejillos de indias, hámster dorado, perros y gatos. A los animales de compañía pertenecen perros y gatos . Los agentes desinfectantes de acuerdo con la invención son adecuados sobre todo para el uso en la tenencia de animales en estabulación, especialmente por ejemplo en la cría de aves (por ejemplo en la tenencia de gallinas) , la tenencia de terneros o de cerdos . Ejemplos I. Ejemplos de formulación Protocolo de preparación general Se disuelven los fenoles en el alcohol o mezcla de alcohol con agitación. Se añaden a la solución alcohólica obtenida agua, dado el caso fenoxietanol, ácido salicílico y alcanosulfonato (Mersolat® W 93) y se disuelve con agitación continua. Material y procedimientos para los procedimientos de ensayo biológicos El ensayo de las formulaciones desinfectantes se orientó a las directrices para el ensayo de agentes desinfectantes químicos de la Sociedad de Medicina Veterinaria Alemana así como a los procedimientos publicados por Daugschies y col. (2002) . 1. Obtención de los oocistos Para el ensayo se usó la cepa "Houghton" de Eimeria tenella (Institute for Animal Health, Compton Laboratories, Near Newbury, Berks. RG16 ONN, RU) . Para la multiplicación y obtención de oocistos se usaron polluelos de raza ponedora machos de 14 días de edad (familia LSL) de la compañía Brinckschulte . Los animales se suministraron como polluelos de un día al centro de animales y se mantuvieron en el centro de animales libres de coccidios con pienso de cría de polluelos sin coccidiostáticos y agua a voluntad hasta el comienzo del experimento. Para la infección se inocularon los animales con 13.000 oocistos por sonda esofágica individualmente en 0,2 ml de agua. A partir del séptimo día tras la infección se sacrificaron los animales sin dolor con dióxido de carbono, se aislaron los oocistos de los intestinos ciegos y se recogieron en solución de dicromato de potasio al 2% durante 4 días hasta la esporulación. En el día del ensayo se lavó el dicromato de potasio de la suspensión de oocistos mediante centrifugación, respectivamente 3 veces durante 5 minutos a 2000 rpm y resuspensión del sedimento en agua. Tras la tercera centrifugación se ajustó la suspensión de oocistos mediante cámara Bürker a una concentración de 25.000 oocistos por ml de solución madre. 2. Desinfección de oocistos (ensayo de lisis) Los agentes desinfectantes que se van a ensayar se llevaron inmediatamente antes de cada ensayo a la doble concentración de aplicación en agua (agua desmineralizada y desionizada) . A partir de la solución madre se prepararon soluciones al 1%, 2% y 4%: 100 µl de solución madre + 4900 µl de agua destilada (= 1%, ¡doblemente concentrada!) 200 µl de solución madre + 4800 µl de agua destilada (= 2%, ¡doblemente concentrada!) 400 µl de solución madre + 4600 µl de agua destilada (= 4%, ¡doblemente concentrada!) Se aplicó cada formulación en cada ensayo como determinación doble. Por preparado se dispusieron 0,5 ml de suspensión de oocistos (= 12.500 oocistos = 100%) y 0,5 ml de solución desinfectante en dos vasos de precipitados de vidrio de 25 ml . Para el control no tratado interno (Kl) de ensayo se dispusieron 0,5 ml de agua con 0,5 ml de suspensión de oocistos. Durante el tiempo de acción (1 h, 2 h ó 3 h) se mantuvieron las suspensiones en un equipo de agitación en 5
ligero movimiento. Una vez expirado el tiempo de acción respectivo se transfirió todo el contenido de los vasos de precipitados respectivamente a un matraz Erlenmeyer de 2000 ml . Los vasos de precipitados se lavaron con agua y se rellenó el matraz Erlenmeyer con el agua de lavado hasta 1500 ml . Se mezclaron los contenidos del matraz y se vertió el sobrenadante después de un tiempo de sedimentación de 24 horas a temperatura ambiente hasta 100 ml . Se transfirió el sedimento a un tubo de centrífuga de 200 ml y se rellenó con agua hasta 200 ml y se dejó reposar durante la noche. Al día siguiente se succionó el sobrenadante hasta aproximadamente 30 ml, se transfirió el sedimento a un tubo de centrífuga de 50 ml y se rellenó con agua hasta 50 ml . Tras la mezcla se pipetearon mediante inversión por preparado de desinfectante 6 x 200 µl en 6 pocilios de una placa de microtítulos de 96 pocilios. Se conservaron las placas hasta la valoración microscópica a 4a C en el refrigerador. Se realizó el recuento de oocistos presentes en un microscopio inverso con amplificación de 200 veces. Se contaron sólo los oocistos intactos sin modificación reconocible de la envoltura exterior. 3. Cálculo de la "tasa de lisis" Fueron fundamentos para el cálculo de la tasa de lisis los valores medios aritméticos del número de oocistos encontrados en dos placas de microtitulación (placa 1, placa 2, determinación doble) por preparado de desinfectante. A este respecto se relacionó la tasa de hallazgo (WR) de los preparados individuales de los agentes desinfectantes respecto a la tasa de hallazgo de los controles no tratados (Kl) (WR relativa): WR reí. [%] = WR de oocistos desinfectados x 100/WR de control (Kl) [%] . La actividad de las formulaciones de desinfectante se expresó en la "tasa de lisis" de oocistos y resultó de la diferencia hasta 100: tasa de lisis [%] = 100 - WR reí. [%] . 4. Ensayo principal in vivo (ensayo de infección con polluelos de gallina) Para comprobar si los oocistos desinfectados están realmente muertos y han perdido su infecciosidad se requiere también un ensayo de infección de oocistos desinfectados en polluelos de gallina según las directrices de la Sociedad de Veterinaria Alemana (DVG) . En nuestro ensayo se infectaron polluelos de raza ponedora de LSL de aproximadamente 14 días de edad con oocistos desinfectados. La densidad de la suspensión de oocistos obtenida tras desinfección y detención de la reacción se diluyó para este fin con el factor de dilución determinado para los controles correspondientes hasta una dosis teórica de 2000/ml. A tal fin se debieron obtener los valores del recuento de placas de microtítulos de 96 pocilios del ensayo de lisis in vi tro para determinar cuántos ml de suspensión de los tubillos de 50 ml de Kl contenían 2000 oocistos esporulados. El volumen determinado a este respecto se obtuvo también de todas las demás preparaciones de desinfectante para la infección, independientemente de la cantidad de los oocistos que provienen de ahí . El volumen de aplicación por polluelo fue de 0,5 ml . De forma adicional para el control de experimento interno se incluyó un control de infección de la suspensión de oocistos original de 2000 oocistos/ml en un volumen de 0,3 ml . En el día 7 después de la infección se sacrificaron los animales sin dolor con dióxido de carbono . Para la evaluación de la actividad se consideraron los siguientes criterios: aumento de peso desde el comienzo del experimento hasta el final del experimento, tasa de mortalidad condicionada por la infección, evaluación macroscópica de heces en lo que respecta a diarrea y excreción de sangre en los días 5 y 7 p. i. (valoración de 0 a 6), evaluación macroscópica de la mucosa del intestino en cuanto a lesiones, especialmente de los intestinos ciegos (valoración de 0 a 6) y la excreción de oocistos. El número de oocistos en el excremento se determinó con ayuda de la cámara de recuento de McMaster. Los hallazgos individuales se realizaron en relación a los grupos de control no infectados no tratados y se calculó una valoración total (Haberkorn y Greif, 1999) .
Se indican a modo de ejemplo en la siguiente tabla los resultados del ensayo con formulaciones de acuerdo con la invención. La actividad mejorada de las nuevas formulaciones en comparación con una formulación comparativa no de acuerdo con la invención se evidencia especialmente en la reducción de la excreción de oocistos. En las tablas de los ejemplos B, E, F, H en la columna "tratamiento" significa la indicación Control no inf. = grupo de control no infectado Control inf. = grupo de control infectado Ej . 1 = formulación ejemplo na En la columna "muerte" se indica la cantidad de animales muertos / animales usados en el ensayo. En la columna "peso en % de control no inf." se da la relación del peso de animales tratados respecto al peso del grupo de control no infectado. En las columnas "diarrea", "lesiones" y "oocistos" se hacen las indicaciones individuales respecto al efecto. En la columna "% de actividad" se da la valoración total; 0% significa ningún efecto, 100% significa efecto total. Resultados de los procedimientos de ensayo biológicos Ejemplo biológico A Ensayo de distintas formulaciones desinfectantes (4%) contra oocistos de Eimeria tenella in vi tro tras un tiempo de acción de 3 horas
Ejemplo biológico B; Ensayo de distintas formulaciones desinfectantes (4%) contra Eimeria tenella en polluelos de gallina in vivo, tras un tiempo de acción de 3 horas
* no de acuerdo con la invención ** producto comercial Ejemplo biológico C; Ensayo de distintas formulaciones desinfectantes (1%, 2%, 4%) contra oocistos de Eimeria tenella in vi tro, tras un tiempo de acción de 3 horas Tratamiento Cantidad de Oocistos Tasa de Tasa
Formulación oocistos promedi o hallazgo de Placa 1 Placa 2 relativa % lisis
Ej. 3, 1% 0,2 15,0 7,6 25,9 74,1
Ej . 3, 2% 0,3 0,3 0,3 1,1 98,9
Ej . 3, 4% 0,0 0,8 0,4 1,4 98,6
Ej . 6, 1% 33,5 26,8 30,2 100 0
Ej . 6, 2% 7,7 16,8 12,3 41,8 58,2
Ejemplo biológico Dt Ensayo de distintas formulaciones desinfectantes (4%) contra oocistos de Eimeria tenella in vi tro, tras un tiempo de acción de 1, 2 y 3 horas
Ejemplo biológico E: Ensayo de distintas formulaciones desinfectantes (4%) contra Eimeria tenella en polluelos de gallina in vivo, tras un tiempo de acción de 3 horas
Ejemplo biológico F; Ensayo de distintas formulaciones desinfectantes (4%) contra oocistos de Eimeria tenella en polluelos de gallina in vivo, tras un tiempo de acción de 1 hora
Ejemplo biológico G; Ensayo de formulación desinfectante del ejemplo 6 (1%) contra oocistos de Eimeria tenella in vitro , en comparación con neopredisan (1%), tras tiempos de acción de 1 , 2 y 3 horas
Ejemplo biológico H Ensayo de formulación desinfectante del ejemplo 6 (1%, 4%) en comparación con Neopredisan® (1%, 4%) contra oocistos de Eimeria tenella en polluelos de gallina in vivo, tras un tiempo de acción de 1 hora.
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Haberkorn, A., Greif, G. (1999): Animal Models of
Coccidia Infection. In: Handbook of Animal Models of Infection, capítulo 99, Academic Press. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la practica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención
Claims (10)
- REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Agente desinfectante caracterizado porque contiene (a) un fenol biocida clorado (b) un fenol biocida clorado o no clorado adicional (c) un fenol y/o derivado de fenol biocida no clorado (d) un queratolítico
- 2. Agente desinfectante de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque contiene dos fenoles biocidas clorados distintos y un fenol biocida no clorado.
- 3. Agente desinfectante de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque que contiene un derivado de fenol biocida no clorado.
- 4. Agente desinfectante de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado por que los fenoles biocidas clorados se seleccionan del grupo: 4-cloro-3-metilfenol (PCMC, p-cloro-m-cresol) , 4-cloro-3-etilfenol , 2-n-amil-4-clorofenol, 2-n-hexil-4-clorofenol, 2-ciclohexil-4-clorofenol, 4-cloro-3 , 5-xilenol (PCMX, p-cloro-m-xilenol) , 2, 4-dicloro-3 , 5-xilenol (DCMX, dicloro-p-xilenol) , 4-cloro-2-fenilfenol, 2-bencil-4-clorofenol, bencil-4-cloro-m-cresol, 4-clorobencil-dicloro-m-cresol .
- 5. Agente desinfectante de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los fenoles biocidas no clorados se seleccionan del grupo: 2-metilfenol, 3-metilfenol, 4-metilfenol, 4-etilfenol, 2,4-dimetilfenol, 2 , 5-dimetilfenol, 3 , 4-dimetilfenol, 2,6-dimetilfenol, 4-n-propilfenol, 4-n-butilfenol, 4-n-amilfenol, 4-n-hexilfenol , timol (5-metil-2-isopropilfenol) , 2-fenilfenol, 4-fenilfenol , 2-bencilfenol .
- 6. Agente desinfectante de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el derivado de fenol biocida no clorado es un fenoléter, especialmente fenoxietanol .
- 7. Agente desinfectante de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el queratolítico se selecciona del grupo: ácidos orgánicos, como ácido cítrico, ácido fórmico y ácido salicílico; urea, resorcina, ácido tioglicólico, sulfuros, 5-fluorouracilo.
- 8. Agente desinfectante de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el queratolítico es ácido salicílico.
- 9. Uso del agente desinfectante de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, para combatir protozoos parasitarios, helmintos, bacterias y/o levaduras.
- 10. Uso de conformidad con la reivindicación 9, para combatir estadios duraderos de protozoos parasitarios y/o helmintos .
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