MX2007010983A - Composiciones de tigeciclina y metodos de preparacion. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se dirige a nuevas composiciones de tigeciclina con estabilidad mejorada tanto en estados solidos como en solucion y procesos para hacer estas composiciones. Estas composiciones comprenden tigeciclina, un carbohidrato adecuado, y un acido o amortiguador.

Description

COMPOSICIONES DE TIGECICLINA Y MÉTODOS DE PREPARACIÓN CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a composiciones de tigeciclina mejoradas y métodos para hacer tales composiciones. Las composiciones de la invención tienen estabilidad mejorada en estados tanto sólidos como en solución. Las composiciones de la invención comprenden tigeciclina, un carbohidrato adecuado, y un ácido o amortiguador. La combinación del carbohidrato adecuado y el ácido o amortiguador reduce la degradación de tigeciclina como se explica posteriormente. La presente invención proporciona ventajas sobre la técnica previa proporcionando composiciones de tigeciclina estables y métodos para hacer tales composiciones que logran estabilidad tanto contra degradación oxidante como epimerización. Estas composiciones, por lo tanto, son más estables cuando se disuelven, liofilizan, reconstituyen, y/o diluyen que las composiciones de tigeciclina no hechas de acuerdo con la invención. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La tigeciclina es un antibiótico conocido de la familia de tetraciclina y un análogo químico de minociclina. Se puede usar como un tratamiento contra bacterias resistentes a fármaco, y se ha mostrado que trabaja donde los antibióticos han fallado. Por ejemplo, es activa contra Staphylococcus aureus resistente a meticilina, Streptococcus Rsf. 185473 pneumoniae resistente a penicilina, enterococos resistentes a vancomicina (D. J. Beidenbach et . Al., Diagnostic Microbology and Infectious Disease 40:173-177 (2001); H. W. Boucher et. Al., Antimicrobial Agents & Chemotherapy 44:2225-2229 (2000); P. A. Bradford Clin. Microbiol. Newslett. 26:163-168 (2004); D. Milatovic et . al., Antimicrob. Agents Chemother. 47:400-404 (2003); R. Patel et . al., Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 38: 177-179 (2000); P. J. Petersen et . al., Antimicrob. Agents Chemother. 46:2595-2601 (2002); and P. J. Petersen et al., Antimicrob. Agents Chemother. 43:738-744 (1999), y contra organismos que portan cualquiera de las dos formas principales de resistencia a tetraciclina: protección ribosomal y flujo (C. Betriu et. al., Antimicrob. Agents Chemother. 48:323-325 (2004); T. Hirata et. al. Antimicrob. Agents Chemother. 48:2179-2184 (2004); y P. J. Petersen et . al., Antimicrob. Agents Chemother. 43:738-744 (1999) . La tigeciclina históricamente se ha administrado intravenosamente debido a que exhibe generalmente pobre biodisponibilidad cuando se da oralmente. Las soluciones intravenosas se han preparado grandemente inmediatamente previo al uso, por ejemplo, administración a un paciente, de polvos liofilizados debido a que la tigeciclina se degrada en solución principalmente vía oxidación. Podría ser preferible así como deseable tener una formulación intravenosa de tigeciclina que no requiera uso inmediato y podrá permanecer estable en solución por hasta 24 horas. La tigeciclina actualmente se manufactura como un polvo liofilizado. Debido a la predisposición de la tigeciclina a degradarse, estos polvos son preferidos bajo condiciones de bajo oxígeno y baja temperatura para minimizar la degradación. Tal procesamiento es costoso debido a que requiere equipo y manejo especial. El proceso típico para preparar estas composiciones en polvo involucra disolver la tigeciclina en agua (composición) y liofilizar (secado por congelamiento) la solución a sequedad para formas tortas sólidas de tigeciclina amorfa. Estas tortas luego se cargan bajo nitrógeno en viales de vidrio tapados y se embarcan a usuarios finales tales como farmacias de hospitales. Previo a ser administrada a pacientes, las tortas son reconstituidas, frecuentemente en 0.9% solución salina, a una concentración de, por ejemplo, aproximadamente 10 mg/ml. A esta concentración, la tigeciclina se degrada rápidamente en solución y por lo tanto, se debe usar sin retraso. Por consiguiente, estas soluciones reconstituidas son inmediatamente diluidas (también conocido como mezclado) a aproximadamente 1 mg/ml con solución salina u otros diluyentes farmacéuticamente aceptables en bolsas intravenosas para suministro a pacientes.

En este estado diluido, la tigeciclina está lista para suministro intravenoso a un paciente. A una concentración de 1 mg/ml, sin embargo, la tigeciclina se deberá usar dentro de 6 horas de dilución. Debido a que las infusiones intravenosas pueden tomar varias horas, el personal del hospital debe actuar rápidamente de modo que el tiempo de mezclado comience al tiempo que la dosis de tigeciclina se ha administrado a un paciente, no más de que 6 horas han transcurrido. Podría ser más preferido proporcionar al personal del hospital con la flexibilidad y ventajas que llegan con tiempos de mezclado y reconstitución más largos de modo que, por ejemplo, un farmacéutico del hospital podrá prepara una solución el día antes que se necesite ser administrada a un paciente. La tigeciclina tiene un tiempo de mezclado corto y el tiempo de reconstitución es esencialmente cero debido a que en solución, la oxidación de tigeciclina es relativamente rápida. Bajo condiciones de manufactura almacenamiento, y administración actuales, la forma más frecuente es vía oxidación. La razón de que la oxidación sea la forma más frecuente de degradación en formulaciones previas se relaciona a la estructura química de tigeciclina. Posee una porción fenol, y es bien conocido en la técnica de química orgánica que los fenoles son particularmente propensos a oxidación. Cuando la tigeciclina se disuelve en agua previo a la liofilización, el pH es ligeramente básico (aproximadamente 7.8). Este es mayor que la pKa del grupo fenólico en tigeciclina. Por consiguiente, las soluciones tanto en agua como solución salina, el grupo fenólico llega a ser desprotonado y más susceptible a la reacción con oxígeno el cual es la causa que la composición y liofilización de tigeciclina ocurra bajo un manto de nitrógeno. Por consiguiente, se debe tomar cuidado de evitar la exposición innecesaria a oxígeno por el personal del hospital durante la reconstitución y dilución. Si el pH de la solución de tigeciclina fuera menor que la pKa del grupo fenólico en tigeciclina, entonces la oxidación podría ocurrir, pero a un menor grado. En efecto, se ha observado que la degradación oxidante de tigeciclina no disminuye cuando el pH se disminuye. A pH bajo, sin embargo, ocurre otro proceso degradante, epimerización. A pH inferiores, la epimerización emerge como la trayectoria de degradación más predominante. La tigeciclina difiere estructuralmente de su epímero solamente en un aspecto.

FORMULA I FORMULA II En la tigeciclina, el grupo N-dimetilo en el carbono 4 está cis al hidrógeno adyacente como se mostró anteriormente en la fórmula I, mientras que en el epímero, fórmula II, están trans entre si en la manera indicada. Aunque el epímero de tigeciclina se cree que es no tóxico, carece de la eficacia anti-bacteriana de la tigeciclina y, por lo tanto, es un producto de degradación indeseable. En el estado liofilizado, la tigeciclina sigue las mismas trayectorias de degradación como en solución, pero la velocidad de degradación es inferior. Por consiguiente, cuando la tigeciclina se liofiliza en agua de modo que el pH es aproximadamente 7.8, la torta liofilizada resultante exhibe degradación oxidante, aunque a una velocidad inferior que en solución. De manera similar, cuando la tigeciclina se liofiliza en una solución acida, la trayectoria de degradación primaria es epimerización y también ocurre a una velocidad inferior que en solución. La epimerización es una trayectoria de degradación conocida en tetraciclinas generalmente, aunque la velocidad de degradación puede variar dependiendo de la tetraciclina. Comparativamente, la velocidad de epimerización de la tigeciclina es particularmente rápida. La literatura de la tigeciclina reporta diversos métodos que científicos han usado para probar y minimizar la formación de epímero en tetraciclinas. En algunos métodos, la formación de sales de metal de calcio, magnesio, zinc o aluminio con tretraciclinas limita la formación de epímero cuando se hace a pHs básicos en soluciones no acuosas. (Gordon, P.N, Steohons Jr, C. R . , Noscworthy, M. M. , Toare, F.W., Patente del Reino Unido No. 901,107). En otros métodos, (Tobkes, Patento de los Estados Unidos No. 4,038,315) la formación de un complejo metálico se realiza a pll ácido y una forma sólida estable de] fármaco se prepara posteriormente. Ot os métodos para reducir la formación de epímero incluyen mantener los plls mayores que aproxi adamente 6.0 durante el procesamiento; evitando el contacto con conjugados de ácidos débitos tales corno formi tos, acetatos, fosfatos, o boronatos; y evitando el contacto con la humedad incluyendo soluciones de base acuosa. Con respecto a la protección contra humedad, Noseworthy and Spiegel (Patente de los Estados Unidos No. 3,026,248) y Nash and Haeger, (Patente de los Estados Unidos No. 3,219,529) han propuesto formular análogos cié tetraci cl i -*a en vehículos no acuosos para mejorar la estabilidad de fármaco. Su: embargo, la mayoría de los vehículos incluidos en estas invenciones son más apropiados para uso tópico que parenteral. La epimerización de tetraciclina también es conocida por ser dependiente de la temperatura de este modo la producción y almacenamiento de tetraciclinas a bajas temperaturas también pueden reducir la velocidad de la formación do opímero (Yucn, P.H., Sokoloski, T.D., J. Pharm. Sci. 66: 1648-1650,1977; Pa elczyk, E., Matlak, B, Pol. J. Pharmacol. Pharm. 34: 4O9-421, 1982). Varios do estos métodos so han intentado con tigeciclina pero ninguno ha tenido éxito en la reducción tanto de formación de epímero como degradación oxidante mientras no introducen degradantes adicionales. La complejación metálica, por ejemplo, se encontró que cieñe poco efecto ya sea en l a formación de epi mero o degradación generalmente a pH bási co . Aunque el uso de amortiguadores de fosfato, acetato, y citrato mejoran la estabilidad en estado de solución, paiece que aceleran la degradación de tigeciclina en el estado 1. ofi 1 i ..ado . Aún sin un amortiguador, sin embargo, la epimerización es un problema más serio con la tigeciclina que con otras tetraciclinas tal como mi nocid ina. Otros de estos métodos fallan de manera similar para reduc r tanto la epimerización como degradación oxidante. Aunque se encontró que mantener un pH de más de aproximadamente 6.0 ayuda a reducir la formación de epímero, como se señalo anteriormente, tales condiciones conducen a mayor sensibilidad a oxígeno. Con respecto a vehículos no acuosos, aunque se conoce que el agua acelera la degradación de tigeciclina, podría ser impráctico preparar una medicación intravenosa usando talos vehículos. Mientras que se ha determinado que el procesamiento a temperaturas interiores que la temperatura ambiente, tal como por debajo de aproximadamente 10°C, reduce la velocidad de degradación de riqecilina, tal procesamiento es costoso y podría ser ventajoso usar una composición que no requiera refrigeración costosa durante el procesamiento. La solicitud de patente China CN 1390550A describe que la mi nocí cima se podrá combinar con un ácido para incrementar la estabilidad hacia la degradación oxidante. Adicion lmente describe el uso de un agente aglomerante, tal como manitol. Esta referencia no dice nada acerca de la tigeciclina ni sugiere que se podrán usar carbohidratos para reducir ya sea la oxidación o epimepzación de minociclina en ambientes de pH reducido. En efecto, la minociclina se puede formular como una sal de clorhidrato en productos intravenosos sin epimeri ación significativa. En sales de clorhidrato de ti geciel ina, sin embargo, ocurre la epimerización significativa. Por consiguiente, la minociclina y tigeciclina poseen diferentes propiedades de epimeri zación . En otro experimento, la minociclina se liofilizó a un pH de aproximadamente 5.0 y la torta liofilizada se almacenó por 20 días a 40°C y 75% de humedad relativa. Al final de los 20 días, la torta se analizó por CLAR. El epímero de minociclina se midió estando presente a un nivel de 2.65% en masa. Por comparación, cuando la tigeciclina se liofilizó a un pH de aproximadamente 5.0 y la muestra se almacenó bajo las mismas condiciones, pero por solamente 4 días seguidos por análisis de CLAR, el epímero de tigeciclina se midió estando a un nivel de 5.40%, más de dos veces cuando mucho aun aunque la tigeciclina fue solamente conservada a condiciones severas por 1/55 tanto tiempo como la minociclina. Por consiguiente, la tigeciclina se epimeriza mucho más fácilmente que la minociclina, y la epimerización es un problema mucho más significativo con la tigeciclina que lo que es para la minociclina. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención dirige los diversos problemas y desventajas de la técnica previa proporcionando composiciones estables de tigeciclina en forma sólida y solución. Liofilizando una solución acuosa que contiene tigeciclina y un carbohidrato adecuado a un pH ácido, se han preparado composiciones de tigeciclina que son más estables tanto contra degradación oxidante como epimerización que las composiciones existentes. Debido a que el pH es ácido, la degradación oxidante se ha minimizado. Además, se ha determinado que los carbohidratos adecuados actúan para estabilizar la formación de tigeciclina contra epímero a pHs ácidos. Las composiciones de la invención son más estables en el estado liofilizado que las composiciones existentes y no requieren condiciones de procesamiento de baja temperatura y bajo oxígeno. También se espera que tales composiciones posean tiempos de reconstitución y estabilidad de mezcla mayores que aquellos de las composiciones existentes. Por ejemplo, una modalidad de la invención es estable por 6 horas después de la reconstitución y estable por unas 18 horas adicionales después de la mezcla. Estos tiempos de estabilidad extendidos hace a la tigeciclina mucho más fácil de usar en un ambiente de hospi al proporcionando flexibilidad necesaria al personal del hospital cuando se tratan pacientes. Las composiciones en estado sólido de la invención comprenden tigeciclina, un carbohidrato adecuado, y un ácido o amortiguador. Los carbohidratos adecuados son aquellos carbohidr tos capaces de reducir la formación de epímero en al menos una forma sólida preparada en al menos un ambiente de píl cuando se compara con una forma sólida de tigeciclina preparada al mismo ambiente de pH que carece de carbohidratos adecuados. En una modalidad, el ambiente de pH varía desde aproximadamente 3.0 a aproximadamente 7.0, tales como pHs que varían desde aproximadamente 4.0 a aproximadamente 5.0, o desde aproximadamente 4.2 a aproximadamente 4.8. En una modalidad, al menos una forma sólida se elige de polvos y tortas liofilizadas de tigeciclina. Los ejemplos de carbohidratos adecuados incluyen las formas anhidras, hidratadas, y solvatadas de compuestos tales como lactosa, mañosa, sucrosa, y glucosa. Los carbohidratos adecuados incluyen mono y disacáridos, por ejemplo un monosacárido de aldosa o un disacárido, preferiblemente un disacárido tal como lactosa y sucrosa. La lactosa es más preferida. Por consiguiente, los carbohidratos adecuados pueden incluir diferentes formas sólidas. Por ejemplo, por lactosa se incluyen las diferentes formas sólidas de lactosa tal como lactosa anhidra, monohidrato de lactosa o cualquier otra forma hidratada o solvatada de lactosa. La lactosa y sucrosa son disacáridos. Por lo tanto se espera que los disacáridos como una clase trabajarán de acuerdo con la i venei ó . Las composiciones de la invención incluyen soluciones, tales como aquellas preparadas previo a la liofil i zaci ón, que contienen tigeciclina, un carbohidrato adecuado, y un ácido o amortiguador. En algunas modalidades de la invención, las soluciones se pueden almacenar por varias horas previo a la liofilización para proporcionar mayor flexibilidad de manufactura. Las composiciones de la invenc ón adi cionalmcnte incluyen tortas o polvos Liofilizados que contienen riqcciclina, un carbohidrato adecuado, y un ácido o amortiguador. En algunas modalidades de la invención, el carbohidrato adecuado usado es monohidrato de lactosa y la relación molar de tigeciclina a monohidrato do lactosa en la torta o polvo liofilizado está entre aproximadamente 1:0.2 a aproximadamente 1:5. Algunas modalidades tiene relaciones molares de tigeciclina a monohidrato de lactosa de entre aproximadamente 1:1.6 a aproximadamente 1:3.3. Las composiciones de la invención también incluyen soluciones hechas de la torta o polvo li of Lli zado, por ejemplo, por reconstitución con solución salina u otros diluyentes farmacéuticamente aceptables. Las composiciones de la invención adicionalmente incluye soluciones que resultan de la dilución de aquellas soluciones reconstituidas con diluyentes farmacéuticamente aceptables para el uso en bolsas i nt ravenosas . Cualquier carbohidrato capaz de reducir la formación de epímero en la invención es un carbohidrato adecuado y esta invención no se limita a composiciones que emplean aquellos carbohidratos específicamente identificados.

Se espera que los derivados de azúcares, por ejemplo, puedan trabajar de acuerdo con la invención para reducir la formación de epímero. Por consiguiente, al grado que los derivados de azúcares, tales como alcoholes de azúcar, glucosaminas, y esteres de alquilo solos o en combinación reduzcan la formación de epímero de acuerdo con la invención, son carbohidratos adecuados. Igualmente, otros carbohidratos adecuados pueden incluir mayores sacáridos talos como pol isacáridos; carbohidratos complejos tales como hetastarch, dextrano; y celulosas tales como hidroxipropilmetil celulosa e hidroxipropil celulosa. Se espera adicionalmente que las combinaciones de carbohidratos, incluyendo monosacáridos y tri sacar i dos, serán carbohidratos adecuados y trabajarán para reducir la formación de epímero de acuerdo con la invención. Los ácidos y amortiguadores de la invención incluyen cualquier ácido o amortiguador farmacéuticamente aceptable capaz de ajustar el pH de una solución de tigecicli na/carbohi dr to adecuado a entre aproximadamente 3.0 a aproximadamente 7.0, aproximadamente 4.0 a aproximadamente 5.0, o aproximadamente 4.2 a aproximadamente 4.8. Los ejemplos de tales ácidos incluyen, pero no se limitan a, ácido clorhídrico, incluyendo ÍIC1 1.0 N, ácido gentísico, ácido láctico, ácido cítrico, ácido acético, y ácido fosfórico. Los ejemplos de amortiguadores adecuados incluyen succinatos . Los compuestos de la invención se pueden preparar vía un número de métodos aceptables. Los métodos descritos posteriormente son ejemplares y no proponen limitar la invención. En un método de la invención, la tigeciclina se disuelve en agua para formar una solución. El pH de la solución posteriormente se disminuye por adición de un ácido o amortiguador. Un carbohidrato adecuado luego se disuelve en la solución y ia solución se liofil iza a sequedad para formar una torta o polvo liofilizado. La tigeciclina se puede mezclar con un carbohidrato adecuado y se disuelve en agua. Después que el pH de la solución se ajusta de modo que es acida, la solución luego se puede liofil izar a sequedad para formar una torta o polvo li ofil i zado. La liofilización de soluciones de la invención se puede realizar por cualquier medio farmacéuticamente aceptable. Una vez liofilizadas, las composiciones de la invención se pueden almacenar bajo un gas inerte, tal como nitrógeno, para retardar adi cionalmente el proceso de degradación, pero, diferente de la composición de tigeciclina actual, tales ambientes de bajo oxígeno no son necesarios para la in ención. Cuando a tigeciclina se combina con un carbohidrato adecuado, cualquier forma on estado sólido do tigeciclina que sea suficientemente soluble en agua se puede usar. Tales formas en estado sólido incluyen polimorfos, formas amorfas, y sales de ti eciciina cristalina. Adi ci onalmente, cuando se preparan las soluciones de tigeciclina de la invención por liofilización, se agrega suficiente ácido o amortiguador a la solución acuosa que contiene tigeciclina para obtener un pH desde aproximadamente 3.0 y aproximadamente 7.0 incluyendo desde aproximadamente 4.0 a aproximadamente 5.0 y desde aproximadamente 4.2 a aproximadamente 4.8. Las composiciones de la invención se pueden preparar para uso cié dosificación única. En esta modalidad, las soluciones de la invención son liofili adas en viales Individuales, tales como viales de 20 mi. En la 1 i of i 1 i /aei ón , los viales son tapados con cualquier tapón. Los viales apados uego se embarcan para el uso. Cuando se necesite, los viales se pueden reconstituir agregando suficiente diluyente para lograr la concentración deseada de tigeoiclina. La concentración de las soluciones reconstituidas se puede determinar fácilmente por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica. Cualquier diluyente farmacéuticamente aceptable se puede usar. Los ejemplos de tales diluyentes incluyen agua, solución salina, tal como 0.9C,, soLrción salina, solución para .inyección de Ringer Lactada y soluciones de dextrosa que incluyen 5% dextrosa (D5 ) . Las soluciones reconstituidas de la invención luego se pueden almacenar cn un estado reconstituido, diferente de las composiciones actuales, previo a la mezcla. La mezcla puedo ocurrir, por ejemplo, cn una bolsa intravenosa. Para preparar una mezcla, se mezcla suficiente solución reconstituida en una bolsa intravenosa que contiene un diluyente farmacéuticamente aceptable tal como solución salina o solución de dextrosa tal como D5 . La concentración do las mezclas se puede determinar fácilmente por aquellos de experiencia ordinaria cn Ja técnica. Los tiempos de mezcla para las composiciones de la invención pueden ser mucho más largos que aquellos de la composición existente. Una vez mezclada, la solución de tigociclina está lista para la ad inistración al paciente. La mezcla se puede administrar sola o con untamente con otra composición o agente farmacéut i co . Los siguientes seis ejemplos ilustran varias modalidades de la invención y no se proponen para limitar la invención en alguna forma. Cada ejemplo detalla diversos experimentos donde la tigeeiclina se disuelve con un carbohidrato en solución acida acuosa, se liofiliza, y analiza para productos de degradación por CLAR. Las condiciones de CLAR para cada ejemplo fueron esencialmente las mismas. Las tablas quo acompañan los ejemplos reflejan los resultados de los datos de CLAR los cuales muestran los productos de degradación oxidantes identificados en las tablas como tiempos de retención relativos (TRR) 0.50/PM 601 y TRR 0.55/PM 583, el epímero (TRR 0.74/PM 585), y la cantidad total de tigeciclina presente bajo una variedad de condiciones (identificada como "Tigeciclina" en las Tablas). En muchos casos, después que las soluciones fueron liofilizadas, se colocaron bajo condiciones de estabilidad acelerada de 40°C y 75t de humedad relativa. Estas condiciones son estándares industriales usados para simular el efecto de almacenamiento a largo plazo bajo condiciones en anaquel normales. En el ejemplo 1, las soluciones de tigeciclina, lactosa, y HCl 1.0 N se li of11 i zaron y las tortas resultantes se colocaron en cámaras de estabilidad a 40°C y 75% de humedad relativa por 25 días. Al final de los 25 días, las tortas se analizaron por CLAR para identificar productos de degradación . Un experimento similar se detalla en el ejemplo 2a.

En este, las tortas liofilizadas se analizaron por CLAR después de ser almacenadas por 39 días a 40 °C y 75% de humedad relativa. Las tortas de muestra de dos de los experimentos se reconstituyeron en D5 (5% dextrosa) y las muestras de las tortas restantes se reconstituyeron en solución salina inmediatamente previo al análisis de CL?R . En el experimento 2b, después de que las tortas liofilizadas so sometieron a condiciones severas según las condiciones en cl ejemplo 2a, varias de las tortas fueron reconstituidas on 0.9's solución salina y se mantuvieron en solución por 6 horas. Otras so reconstituyeron en dextrosa.

Al final de L período de 6 horas, algunas de las muestras de solución, como se identifica en la tabla 2b, fueron probadas por CLAR. EL ejemplo 2c ilustra una prueba de estabilidad en soluciones mezcladas. En estas soluciones, las soluciones reconstituidas del ejemplo 2b se mantuvieron por 6 horas a aproximadamente 10 mg/rril y luego se diluyeron a aproximadamente 1 mg/ml, la concentración intravenosa típica de tigeciclina, y se mantuvieron por 18 horas previo al análisis por CIAR (tabla 2e) . En el ejemplo 3, acido gentísico, antes que ácido clorhídrico, se utilizó para reducir el pH de las soluciones pre-1 i ofi 1 i zadrus de tu geo i el i ría . Una vez lio ilizadas, las tortas se sometieron a condiciones severas a 45°C y 75% de humedad relativa por 48 días y luego se analizaron por CLAR. Las muestras del ejemplo 4 muestran los efectos del cambio de lactosa a otros carbohidratos en la formación de epímero y recuperación de tigeciclina cuando se hacen las soluciones de tigeciclina pre-liofilizadas . En cada uno de los ejemplos 4a, 4b, y 4c, las soluciones indicadas se prepararon y liofilizaron. Cada torta se sometió a condición severa de acuerdo con los parámetros proporcionados en los ejemplos 4a-4c, se tomó en solución, y se analizó por CLAR. El tiempo de retención, el tiempo entre la composición y liofilización, y el orden de adición de tigeciclina y lactosa se estudiaron como factores en la formación de epímero y recupercación de tigeciclina en el ejemplo 5. Una vez que las tortas se liofilizaron, se sometieron a condiciones severas a 40°C y 75% de humedad relativa por 48 días previo al análisis de CLAR. Los resúmenes de los datos de CLAR aparecen en la tabla 5. La relación de lactosa a tigeciclina se hizo variar en los experimentos en el ejemplo 6. Cuando se preparan las soluciones a ser liofilizadas, se emplearon relaciones variadas de lactosa a tigeciclina. Las relaciones de masa se reportan en la primera columna de la tabla 6. Las soluciones, las cuales tienen un pH de aproximadamente 5.0, posteriormente se liofilizaron a sequedad y las tortas resultantes se sometieron a condiciones severas a 40°C y 75% de humedad relativa por 20 días y se analizaron por CLAR. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Ejemplo 1 Se disolvió tigeciclina (1880 mg) en 75 ml de agua Milli-Q para formar una solución principal. Una alícuota de esta solución principal que contiene aproximadamente 100 mg do tigeciclina se disolvió en un vial de 20 ml que contiene 200 mg de monohidrato de lactosa. Otra alícuota de la solución principal que contiene aproximadamente 100 mg de tigeciclina se colocó en un vial de muestra de 20 ml vacío. Ningún ajuste de pH se hizo a cualquiera de estas dos soluciones. Las soluciones posteriormente se liofilizaron a sequedad. El pH de la solución principal restante se disminuyó a aproximadamente 6.0 con la adición de HCl 1.0 N. Una vez que un pH de aproximadamente 6.0 se obtuvo, una alícuota de la solución principal que contiene aproximadamente 100 mg de tigeciclina se disolvió en un vial de muestra de 20 ml que contiene aproximadamente 200 mg de monohidrato de lactosa y la solución restante se liofilizó a sequedad. La solución principal restante se trató con HCl 0.1 N hasta que un pH de aproximadamente 5.5 se obtuvo, en este punto 100 mg de tigeciclina de la solución principal se transfirieron en un vial de 20 ml que contiene 200 mg de monohidrato de lactosa. Después de la disolución, la solución se liofilizó a sequedad. De manera similar, 20 ml de viales de muestra que contienen soluciones de aproximadamente 100 mg de tigeciclina y aproximadamente 200 mg de lactosa se prepararon a pHs de aproximadamente 5.0 y aproximadamente 4.5. Otra muestra de solución se preparó a aproximadamente pH 4.5 sin alguna lactosa. En cada caso, las soluciones posteriormente se liofilizaron a sequedad. Todas las liofilizaciones se hicieron cn soluciones congeladas a -70°C por hielo seco con acetona. Las muestras liofilizadas se colocaron en una cámara a 40°C/75% de HR por 25 días. Después, las muestras se analizaron por CLAR y un resumen de los resultados aparece posteriormente en ía tabla 1, la cual refleja los productos de degradación principales para cada torta que se probó. La suma total de los 6 productos de degradación principales listados en las tablas no igualan el 100% debido a que no todos los productos de degradación están listados en la tabla. De las 7 tortas probadas en el ejemplo 1, 5 fueron composiciones de la invención y las primeras dos (tigeciclina sola sin ajuste de pll y tigeciclina más lactosa sin ajuste de pH) fueron controles. lias ventajas de las composiciones de la invención son evidentes a partir de este ejemplo. Por ejemplo, en la composición preparada sin lactosa a un pH de aproximadamente 4.5, solamente 74.10% de tigeciclina se detectó mientras que el epímero estuvo presente en una cantidad de 23.51%. Por comparación, la muestra con pll 4.5 con lactosa contuvo solamente 2.53% de epímero y tuvo un contenido de tigeciclina de 97.17%.

Tabla 1 ND = No detectado; PM es peso molecular; TTR significa tiempo de retención relativo a pico de tigeciclina Ejemplo 2 ?a. Se disolvió tigeciclina (1700 mg) en 85 ml de agua Mili i -Q para formar una solución principal. Las soluciones que contienen aproximadamente 100 mg de tigeciclina y aproximadamente 200 mg de monohidrato de lactosa se prepararon a plls de aproximadamente 5.2, 5.0, 4.8, y 3.0 de la i sitia manera que las soluciones de tigec i cli na/1 act osd/HCl se prepararon en el ejemplo 1. Una solución de tigecicli a y lactosa a pH de aproximadamente 4.5 se preparó agregando NaOH 1.0 N a la solución principal a pH 3.0 seguido por disolución de una alícuota de solución principal que contiene aproxi adamente 100 mg de tigociclina cn un vial do 20 ml que contiene aproximadamente 200 mg de monohidrato do lactosa. Todas las muestras se liofilizaron (congeladas a -50°C por liofilizadores de AdVantage/Virtis) a sequedad. Las muestras liofilizadas se colocaron en una cámara a 40°C/75% do HR por 39 días y se s?b-muestrearon y analizaron por CLAR. Los datos se muestran en ia tabla 2a. 2b. Al final de ios 39 días, las tortas liofilizadas del ejemplo 2a so reconstituyeron con 0.9% NaCl a una concentración de 10 mg/ml de tigeciclina y se mantuvieron a temperatura ambiente por 6 horas. Las alícuotas separadas de las soluciones a pl? de aproximadamente 5.0 y aproximadamente 4.5 fueron reconstituidas con 5% Dextrosa, en lugar de solución salina, a una concentración de aproximadamente 10 mg/ml y se mantuvieron a temperatura ambiente por 6 horas. Cada una ce l s soluciones luego se analizó por CLAR, y los resultados se muesfran en la tabla 2b. Los datos muestran que las composiciones de ]a invención protegen contra la formación de epímero en soluciones reconstituidas por 6 horas. En efecto, el contenido de epímero máximo cié cualquiera de estos ejemplos fue solamente 2.45%, mientras que el contenido de tigeciclina mínimo fue 97.1%. En una modalidad, donde el pH fue aproximadamente 4.5 y el diluyente fue solución salina, al final dei período de reconstitución de 6 horas, solamente 1.60% de epímero estuvo presente. En esta modalidad, la cantidad de tiqcciclina se midió siendo 98.15%, en algunas aplicaciones, puede ser de pureza suficiente para el uso en hospital. 2c. Las soluciones de mezcla de tigeciclina (a 1 mg/ml) se hicieron diluyendo la solución reconstituida (del ejemplo 2b) con 0.9% NaCl o 5% Dextrosa dependiendo de cual diluyente se utilizó para la reconstitución. Las soluciones luego de mantuvieron a temperatura ambiente por 18 horas y se analizaron por CLAR. Los resultados se resumen en la tabla 2c. La muestra a aproximadamente pll 4.5 con lactosa y sin dextosa tuvo su incremento de concentración de epíero desde 1.60% a solamente 1.80% yendo de reconstitución a mezcla mientras que el contenido de tigeciclina total disminuyó solamente ligeramente para esta muestra desde 98.15% a 97.97%. Estos resultados en la muestra de aproximadamente pfi 4.5 ilustran que esta muestra es suficientemente estable después que la torta liofilizada se almacenó bajo condiciones de estabilidad aceleradas por 39 días seguido por 6 horas de reconstitución y 18 horas de mezcl a .

Tabla 2a Tabla 2b Tabla 2c Ejemplo 3 Se disolvió tigeciclina (700 mg) en 28 ml de agua Milli-Q para formar una solución principal. Una alícuota de la solución principal que contiene aproximadamente 100 mg de tigeciclina se cargó en un vial de 20 ml como muestra de control. Las muestras de solución de tigeciclina, lactosa, y un ácido se prepararon a pHs de aproximadamente 5.8, 5.1, y .5 de acuerdo con los métodos del ejemplo 1 excepto que el ácido gentísico se utilizó para disminuir el pH de la solución principal antes que HCl 1.0 N. Unas dos muestras adicionales de soluciones de tigeciclina sin lactosa se prepararon, una a un pH de aproximadamente 5.1 y otra a un pH de aproximadamente 4.5. Todas las soluciones se congelaron a -70°C (por hielo seco con acetona) y se liofilizaron a sequedad. Las muestras liofilizadas se colocaron en una cámara a 40°C/75% de HR por 48 días y se analizaron por CLAR. Los datos se resumen en la tabla 3 y muestran que esta composición trabaja de acuerdo con la invención para reducir la degradación.

Tabla 3 Ejemplo 4 4a. 53o disolvió ti geo i el ina (1600 mg) en 64 ml de agua Milli-Q para formar una solución principal y dos muestras de la solución, cada una conteniendo aproximadamente 100 mg de tigeciclina, se cargaron en dos viales de muestra de 20 ml de muestra separados que contienen 160 mg de monohidrato de lactosa y 160 mg de man: toi respectivamente. Una tercera muestra que contiene aproxi adamente 100 mg de tigeciclina de ia solución principal se cargó en un vial de 20 ml de blanco. El pH del resto de la solución principal se ajustó posteriormente con HCl 0.1 N a aproximadamente 7.0, 6.5, y 6.0 según el procedimiento resumido en el ejemplo 1. Las soluciones de muestra conteniendo cada una aproximadamente 100 mg do tigeciclina se cargaron en viales de 20 ml que contienen 160 mg de monohidrato de lactosa, 160 mg de manitol, o ninguno a cada valor de pH. Las soluciones resultantes se liofilizaron (congeladas a -70°C por hielo seco con acetona) a sequedad. Las muestras liofilizadas se colocaron en un horno a 40°C por 70 horas y luego se analizaron por CLAR. Los datos se resumen en la tabla 4d. 4b. Se disolvió tigecLclina (1800 mg) en 72 ml de agua Milli-Q para formar una solución principal. Las alícuotas de la solución. principal que contienen aproximadamente 100 mg de tigeciclina se cargaron en tres viales de 20 ml separados que contienen aproximadamente 200 mg de monoh i ra O de lactosa, fructosa, y sucrosa respectivamente. El pll de la solución principal se ajustó poster i orinen te con HCl 1.0 N a aproximadamente 6.0 y 5.4 de acuerdo con el procedimiento resumido en el ejemplo 1. A cada vdlor de pll, las alícuotas de solución que contienen aproximadamente 100 mg de tigeciclina se tomaron en viales de 20 mi que contienen 200 mg de uno de los siguientes carbohidratos: monohidrato de lactosa, fructosa, o sucrosa y se disolvieron. Las soluciones sin carbohidratos también se prepararon a cada valor de pH . Las soluciones se liofilizaron (congeladas a -70°C por hielo seco con acetona) a sequedad. Las muestras liofilizadas se colocaron en un horno a 40°C por 89 horas y se analizaron por CLAR. Los resultados se resumen en la tabla 4b. 4c. Se disolvió tigeciclina (1000 mg) en 50 ml de agua Milli-Q para formar una solución principal. El pH de la solución principal se ajustó con HCl 1.0 N a aproximadamente 5.0. Cuatro alícuotas de la solución principal, cada una conteniendo aproximadamente 100 mg de tigeciclina, se cargaron en viales de 20 ml que contienen aproximadamente 200 mg de glucosa, mañosa, rabosa, y xilosa respectivamente y se disolvieron. Una quinta alícuota de solución principal que contiene aproximadamente 100 mg de tigeciclina se cargó en un vial de 20 ml que contiene aproximadamente 125 mg de treosa y se disolvió. Todas las cinco soluciones se 1 i ofi 1 izaron (congeladas a -50°C por 1 i ofi 1 i adores de AdVantage/Virtis) a sequedad. Las muestras 1 i o f i 1 i '/acias se colocaron en una cámara a 25°C/60% de HR por 4? días y se analizaron por CLAR. Los resultados se resumen en la tabla 4c. Se entiende que los datos en las tablas 4a-4c ilustran el efecto de los carbohidratos adecuados tal como lactosa en la i nvenci ón .

Tabla 4a Tabla 4b Tabla 4c Ejemplo 5 5a. Se disolvió tigeciclina (1000 mg) en 40 ml de agua Milli-Q para formar una solución principal. El pH de la solución principal se ajustó con HCl 1.0 N a aproximadamente 5.0. A este pH, dos alícuotas de la solución principal, cada una conteniendo aproximadamente 100 mg de tigeciclina, se cargaron separadamente en dos viales de 20 ml cada uno conteniendo aproximadamente 200 mg de monohidrato de lactosa. Una muestra se congeló inmediatamente a -70°C (por hielo seco con acetona) , y la otra muestra se mantuvo a temperatura ambiente por 5 horas antes del congelamiento. Las muestras congeladas posteriormente se liofilizaron a sequedad. Las muestras liofilizadas se colocaron en una cámara a 40°C/75% de HR por 48 días y se analizaron por CLAR. Los resultados se resumen en la Tabla 5 como las muestras "A" . 5b. Se disolvió monohidrato de lactosa (750 mg) en 15 ml de agua Milli-Q. Se adicionó tigeciclina (375 mg) a esta solución y el pH se ajustó a aproximadamente 5.0 con HCl 1.0 N. A este pH, dos alícuotas de la solución, cada una conteniendo aproximadamente 100 mg de tigeciclina y aproximadamente 200 mg de monohidrato de lactosa, se cargaron en dos viales de 20 ml respectivamente. La solución en un vial de muestra se congeló inmediatamente a -70°C (por hielo seco con acetona) . La solución en la otra muestra se mantuvo a temperatura ambiente por 5 horas antes del congelamiento. Las muestras congeladas se liofilizaron a sequedad. Las muestras liofilizadas se colocaron en una cámara a 40°C/75% de HR por 48 días y se analizaron por CLAR. Los resultados se resumen en la Tabla 5 como las muestras "B". Los datos "A" y "B" ilustran composiciones de la invención que reducen productos de degradación.

Tabla 5 Ejemplo 6 6a. Se disolvió tigeciclina (1700 mg) en 85 ml de agua Milli-Q para formar una solución principal. El pH de la solución principal se ajustó a aproximadamente 5.0 con HCl 1.0 N. Cuatro alícuotas de la solución principal, cada una conteniendo aproximadamente 100 mg de tigeciclina, se cargaron separadamente en cuatro viales de 20 ml que contienen aproximadamente 50, 100, 200, y 300 mg de monohidrato de lactosa respectivamente. Una vez que la lactosa se disolvió completamente, las muestras se liofilizaron (congeladas a -50°C por liofilizadores de AdVantage/Virtis) a sequedad. Las muestras liofilizadas se colocaron en una cámara a 40°C/75% de HR por 4 días y se analizaron por CLAR. Los resultados se resumen en la tabla 6a y dan ejemplos de composiciones de la invención. 6b. Se disolvió tigeciclina (400 mg) en 20 ml de agua Milli-Q para formar una solución principal. El pH de la solución principal se ajustó a aproximadamente 5.0 con HCl 1.0 N. Tres alícuotas de la solución principal, cada una conteniendo aproximadamente 100 mg de tigeciclina, se cargaron separadamente en tres viales de 20 ml que contienen 15, 31, y 62 mg de monohidrato de lactosa respectivamente. En la disolución, las muestras se liofilizaron (congeladas a -50°C por liofilizadores de AdVantage/Virtis) a sequedad. Las muestras liofilizadas se colocaron en una cámara a 40°C/75% de HR por 20 días y se analizaron por CLAR. Los resultados se resumen en la tabla 6b y muestran composiciones de la invención Tabla 6a Tabla 6b Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Composición, caracterizada porque comprende tigeciclina, al menos un carbohidrato adecuado, y un ácido o amortiguador . 2. Composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque un carbohidrato adecuado se elige de lactosa, mañosa, sucrosa, y glucosa. 3. Composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque el carbohidrato adecuado es lactosa. 4. Composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque la composición es liofilizada. 5. Composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque adicionalmente comprende un diluyente farmacéuticamente aceptable. 6. Composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque el diluyente farmacéuticamente aceptable es una solución salina, solución para inyección de Ringer Lactada o solución de dextrosa. 7. Composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque el pH de la composición está entre aproximadamente 3.0 y aproximadamente 7.0. 8. Composición de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque el pH de la composición está entre aproximadamente 4.0 y aproximadamente 5.0. 9. Composición de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque el pH de la composición está entre aproximadamente 4.2 y aproximadamente 4.8. 10. Composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada porque el ácido es HCl 1.0 N. 11. Composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada porque el ácido es ácido gentísico. 12. Proceso para praparar una composición de tigeciclina, caracterizado porque comprende combinar al menos un carbohidrato adecuado para reducir la epimerización con tigeciclina y agua para formar una solución; reducir el pH de la solución con un ácido o amortiguador para reducir la degradación oxidante; y liofilizar la solución a sequedad. 13. Proceso de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque un carbohidrato adecuado para reducir la epimerización se selecciona de lactosa, mañosa, sucrosa, y glucosa. 1 . Proceso de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el carbohidrato adecuado para reducir la epimerización es lactosa. 15. Proceso de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque adicionalmente comprende combinar la composición obtenida por liofilización de la solución a sequedad con una solución salina, solución para inyección de Ringer Lactada o solución de dextrosa. 16. Proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15, caracterizado porque el ácido o amortiguador reduce el pH de la solución entre aproximadamente 3.0 y aproximadamente 7.0. 17. Proceso de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el pH de la solución se reduce entre aproximadamente 4.0 y aproximadamente 5.0. 18. Proceso de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el pH de la solución se reduce entre aproximadamente 4.2 y aproximadamente 4.8. 19. Proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 18, caracterizado porque el ácido es HCl 1.0 N. 20. Proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 18, caracterizado porque el ácido es ácido gentísico. 21. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende tigeciclina, un carbohidrato adecuado, y un ácido o amortiguador. 22. Composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque el carbohidrato adecuado es un disacárido o un monosacárido de aldosa. 23. Proceso para preparar una composición farmacéutica de tigeciclina, caracterizado porque comprende combinar un carbohidrato adecuado con tigeciclina y agua para formar una solución; reducir el pH de la solución con un ácido o amortiguador; liofilizar la solución a sequedad. 24. Proceso de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque el carbohidrato adecuado es un disacárido o un monosacárido de aldosa.