MX2007010449A - Metodo y aparato para la medicion no invasiva de colesterol en tejido cutaneo. - Google Patents

Abstract

La presente invencion proporciona un metodo y aparato para la medicion no invasiva del colesterol en piel. Mas particularmente, un aspecto de la invencion proporciona un dispositivo para aplicar un reactivo detector a un area seleccionada de la piel. Otro aspecto mas de la invencion proporciona un dispositivo indicador para producir un cambio visual correspondiente a la cantidad de reactivo detector que es enlazado en la piel. El metodo y aparato de esta invencion no requieren tipicamente ninguna instrumentacion para ciertas modalidades, permitiendo que la invencion sea adecuada para la auto-prueba, por ejemplo, pero no limitada a, en el ambiente domestico. Como tal, la invencion es particularmente util para permitir que los individuos evaluen su riesgo de ateroesclerosis y enfermedades vasculares relacionadas.

Description

MÉTODO Y APARATO PARA LA MEDICIÓN NO INVASIVA DE COLESTEROL EN TEJIDO CUTÁNEO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un método y aparato para la medición no invasiva del colesterol en la piel o el tejido cutáneo. Más particularmente, la invención se refiere al ensayo directo de colesterol en muestras de piel, típicamente sin usar instrumentación, y como tal es adecuado para la auto-prueba. En particular, un aspecto de la invención proporciona un dispositivo para aplicar un reactivo detector a un área seleccionada de la piel. Otro aspecto más de la invención proporciona un dispositivo indicador para producir un cambio visual correspondiente a la cantidad de reactivo detector que está enlazado en la piel.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La identificación de personas con alto colesterol en piel es útil en la determinación de los individuos en riesgo ya sea de tener o de desarrollar ateroesclerosis, así como aquellos en riesgo de tener enfermedades similares u otras atribuibles a los altos niveles de colesterol. Las enfermedades de las arterias coronarias provocadas por las ateroesclerosis siguen siendo la causa número uno de morbididad y mortalidad en Norte América y Ref. : 185740 muchos otros países del mundo. La prevención e intervención requiere la identificación efectiva a bajo costo de aquellos individuos que no solamente tienen la enfermedad, sino también aquellos en riesgo de desarrollar la enfermedad. Por lo tanto, existe actualmente mucho interés en determinar los niveles de moléculas marcadoras que son capaces de predecir el riesgo de la enfermedad ateroesclerótica. La medición de los niveles de colesterol totales en plasmas sanguíneos es uno de los métodos más ampliamente utilizados para determinar el riesgo de la ateroesclerosis. No obstante, los niveles de colesterol total en plasma solos no predicen de manera precisa el riesgo y han sido obtenidos resultados mejores a través de la medición de las lipoproteínas plasmáticas. La medición del colesterol en la lipoproteína de baja densidad (LDL) y la lipoproteína de alta densidad (HDL) muestran ventajas sobre la medición de los niveles totales de colesterol . Todas estas mediciones requieren muestreo de sangre después de un periodo prolongado de ayuno, de modo que el colesterol en la dieta no interfiera. Adicionalmente, el muestreo puede ser incómodo e involucra cierto pequeño riesgo de infección. Además, el análisis a menudo requiere kit complicado y caro. Un ejemplo de un dispositivo que permite que un usuario obtenga un nivel de colesterol en sangre es mostrado en la Patente de los Estados Unidos No. 5,340,539. Esta patente evita algunos de los problemas asociados con las visitas a un médico o a la clínica, y hace más conveniente el ayuno. No obstante, una muestra de sangre obtenida de un piquete en el dedo con un dispositivo de lanceta, es todavía requerido, lo cual puede ser objetable para muchos individuos . En muchos casos, no obstante, los niveles de colesterol plasmáticos y lipoproteínas no relacionan con el grado de enfermedad ateroesclerótica. Es deseable por lo tanto, evaluar otras moléculas marcadoras que reflejen el grado de ateroesclerosis y proporcionen una evaluación del riesgo de la enfermedad cardiovascular. Por ejemplo, cantidades significativas de colesterol aparecen en el tejido además de aquel encontrado en plasma, y los niveles incrementados en el tejido han mostrado que juegan un papel principal en el desarrollo de la ateroesclerosis. Se ha demostrado que la acumulación de colesterol en tejidos, incluyendo la piel, correlaciona estrechamente con la cantidad de colesterol encontrado en los depósitos de las paredes arteriales. La medición del colesterol en piel, por lo tanto, puede reflejar el grado de ateroesclerosis. Por supuesto, los niveles de colesterol en muestras de biopsia de piel han mostrado que correlacionan con la arteroesclerosis y proporcionan una evaluación del riesgo para pacientes con enfermedad cardiaca isquémica (Bouissou H. , De Graeve J., et al . , Ann Biol. Clin. Vol. 40, 364-365, 1982) . También, la medición del colesterol extraído de muestras de biopsias de piel, liofilizadas, correlaciona con el cociente lipídico en suero en pacientes normales y en pacientes con enfermedad cardiaca isquémica (Y.P. Nikitin et al. Cardiología, II, 48-51, 1987) . Un inconveniente de obtener muestras de biopsia de piel para las determinaciones de colesterol en piel, para la evaluación del riesgo de la ateroesclerosis, es que puede existir dolor en la obtención de las muestras de piel. Además, es posible un riesgo de infección en el sitio de la biopsia. La obtención de muestras de piel requiere típicamente a profesionales entrenados. Además, tales muestras contienen grasa subcutánea y varias capas de piel, algunas de las cuales están altamente vascularizadas . En consecuencia, estas muestras contienen fuentes heterogéneas de colesterol y no dan resultados de ensayo de colesterol reproducibles y confiables. Un método para evaluar las diversas sustancias en la sangre directamente por debajo de la superficie de la piel o sobre su superficie se describe en la Patente de los Estados Unidos No. 4,458,686. Esta patente está basada en la medición electroquímica de las concentraciones de oxígeno generadas. Para sustancias no volátiles que no se difunden a través de la piel no obstante, es necesario implantar enzimas bajo la piel para efectuar cambios en la piel en la superficie de la piel. La patente describe el uso de la enzima colesterol-oxidasa para determinar el colesterol, pero parece que es el colesterol en sangre en vez del colesterol en piel el que está siendo medido. En consecuencia, existe una necesidad para un método y aparatos simples para la medición no invasiva de colesterol en la piel, que no se vea afectado por otras fuentes de colesterol.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un método y aparato para la medición no invasiva de colesterol en piel. Más particularmente, un aspecto de la invención proporciona un dispositivo para aplicar un reactivo detector a un área seleccionada de la piel. Otro aspecto más de la invención proporciona un dispositivo indicador para producir un cambio visual correspondiente a la cantidad de reactivo detector que es enlazado en la piel. El método y aparato de esta invención no requieren típicamente ninguna instrumentación para ciertas modalidades, permitiendo que la invención sea adecuada para la auto-prueba, por ejemplo, pero no limitada al ambiente doméstico. Como tal, la invención es particularmente útil para permitir que los individuos evalúen su riesgo de ateroesclerosis y enfermedades vasculares relacionadas . En un aspecto de la invención, se proporciona un método para la medición de colesterol en piel, el método comprende : a) aplicar un reactivo detector a un área seleccionada de la piel para enlazarse al colesterol presente en la piel; b) aplicar una superficie indicadora al área seleccionada de la piel, teniendo la superficie indicadora una solución que reacciona con el reactivo detector cuando la superficie indicadora está en contacto con el área seleccionada de la piel, la reacción es para producir un cambio de color visual correspondiente a la cantidad de reactivo detector enlazado al colesterol en la piel; y c) analizar el color producido sobre la superficie indicadora para obtener una medición del colesterol en piel. El reactivo detector puede ser aplicado al área seleccionada de la piel utilizando la acción capilar. En una modalidad preferida de la invención, el reactivo detector es aplicado al área seleccionada de la piel por al menos un elemento de pabilo o mecha. El elemento de mecha puede estar saturado con el reactivo detector. En una modalidad preferida de la invención, el elemento de mecha es retenido por un aplicador adecuado.

Además, el elemento de mecha puede deformar una cantidad controlada para liberar el reactivo detector. La concentración del reactivo detector puede ser elegida de modo que ocurre un cambio de color visual en el paso b) cuando el colesterol presente en la piel está sobre un umbral pre-seleccionado. Además, el método puede comprender la aplicación del reactivo detector mediante la aplicación de un reactivo detector de control y un reactivo detector de prueba a dos áreas separadas de la piel dentro del área seleccionada de la piel. El reactivo detector de control está a una más alta concentración del reactivo detector de prueba. Para este aspecto, la concentración del reactivo detector de prueba es elegida de modo que ocurre un cambio de color visual en el paso b) cuando el colesterol presente en la piel está sobre un umbral preseleccionado. Además, el método comprende también después del paso a) y antes del paso b) , la eliminación de cualquier reactivo detector en exceso no enlazado al colesterol en la piel . El reactivo detector en exceso puede ser removido por un medio absorbente adecuado. Además, la superficie indicadora puede incluir una solución de sustrato que reacciona con un componente reportero dentro del reactivo detector. La superficie indicadora puede ser una almohadilla de material absorbente saturada con una solución de sustrato, la solución de sustrato reacciona con el componente reportero dentro del reactivo detector. Además, el método puede comprender el análisis del color producido mediante un espectrofotómetro de reflectancia. Alternativamente, el color producido es analizado utilizando un comparador de color tal como, por ejemplo, pero no limitado a, la serie graduada de bandas de color. En otro aspecto más de la invención, es proporcionado un dispositivo para aplicar un reactivo detector a un área seleccionada de la piel, el dispositivo comprende : a) un cuerpo; y b) al menos un aplicador retenido en un extremo del mismo por el cuerpo, y que tiene un segundo extremo para hacer contacto con un área seleccionada de la piel, el segundo extremo del aplicador transfiere al área seleccionada de la piel un reactivo detector. El aplicador aplica preferentemente el reactivo detector al área seleccionada de la piel utilizando la acción capilar. En un aspecto, el aplicador incluye un elemento de mecha . El cuerpo del dispositivo puede incluir al menos un hueco en éste para recibir un extremo del elemento de mecha.

El hueco es de una profundidad suficiente para recibir en éste el elemento de mecha, de modo que el segundo extremo del elemento de mecha no se extiende más allá de la profundidad del hueco. Además, en una modalidad preferida de la invención, la extensión perimétrica de una porción del hueco es mayor que la extensión perimétrica del elemento de mecha. La porción del hueco que tiene la mayor extensión perimétrica rodea el segundo extremo del elemento de mecha, preferentemente de modo que es proporcionado un espacio vacío alrededor de éste. En una modalidad preferida de la invención, el elemento de mecha es un tapón de fibra. El elemento de mecha puede también ser de material de poliolefina inerte. Alternativamente, el aplicador puede ser un gel. Es preferible que el aplicador sea cilindrico, no obstante, donde son proporcionados dos aplicadores, los aplicadores pueden estar espaciados uno del otro, de modo que un aplicador aplica un reactivo detector de control y el segundo aplicador aplica un reactivo detector de prueba, y cada aplicador puede presentar una sección transversal diferente en el segundo extremo (o extremo superior) . El aplicador puede estar saturado con el reactivo detector. En un aspecto adicional de la invención, se proporciona un dispositivo indicador para producir un cambio de color visual correspondiente a una cantidad del reactivo detector que está enlazado al colesterol en la piel. El dispositivo indicador comprende una superficie indicadora proporcionada por un cuerpo del dispositivo, de modo que la superficie indicadora puede hacer contacto con un área seleccionada de la piel, la superficie indicadora contiene una cantidad suficiente de una solución que reacciona cuando hace contacto con un reactivo detector que está enlazado al colesterol en el área seleccionada de la piel, para producir un cambio de color visual al menos a una porción de la superficie indicadora. La solución puede ser una solución de sustrato que reacciona con un componente reportero del reactivo detector. La superficie indicadora puede comprender un material absorbente, preferentemente saturada con la solución. En una modalidad, el material absorbente es una almohadilla. La almohadilla puede ser tejida o, alternativamente, puede ser de una construcción de hoja fibrosa prensada, o es construida de material hidrofílico, o es una hoja absorbente basada en celulosa, o es construida a partir de material de fibra de vidrio. En un aspecto adicional de la invención, se proporciona un aparato para medir el colesterol en la piel, el aparato comprende: a) un cuerpo; b) al menos un aplicador retenido en un extremo del mismo por el cuerpo, y que tiene un segundo extremo para hacer contacto con un área seleccionada de la piel, el segundo extremo del aplicador transfiere al área seleccionada de la piel un reactivo detector; y c) una superficie indicadora proporcionada por el cuerpo, de modo que la superficie indicadora pueda hacer contacto con el área seleccionada de la piel, la superficie indicadora contiene una cantidad suficiente de una solución que reacciona cuando hace contacto con el reactivo detector que está enlazado al colesterol en el área seleccionada de la piel, para producir un cambio de color visual al menos a una porción de la superficie indicadora. El aplicador puede aplicar al reactivo detector al área seleccionada de la piel utilizando acción capilar. En una modalidad, el aplicador incluye un elemento de mecha. Además, el cuerpo puede incluir una superficie externa y al menos un hueco en ésta para recibir un extremo del elemento de mecha. En particular, el hueco es de una profundidad suficiente para recibir en éste el elemento de mecha, de modo que el segundo extremo del elemento de mecha no se extiende más allá de la superficie externa del cuerpo. Además, la extensión perimétrica de una extensión de hueco es mayor que la extensión perimétrica del elemento de mecha, con lo cual se permite que el hueco rodee el segundo extremo del elemento de mecha y, en una modalidad preferida, se forma un espacio vacío alrededor de éste. En una modalidad, el elemento de mecha es un tapón de fibra. Alternativamente, el elemento de mecha es de material de poliolefina inerte. En otra modalidad más, el aplicador puede ser un gel . El elemento de mecha puede ser cilindrico, en una modalidad preferida. Por ejemplo, donde son proporcionados dos aplicadores, los aplicadores pueden estar espaciados uno del otro, de modo que un aplicador aplica a un reactivo detector control y el segundo aplicador aplica un reactivo detector de prueba. Para esta modalidad, cada aplicador puede presentar una sección transversal diferente en los segundos extremos del mismo. El aplicador puede estar saturado con el reactivo detector. Además, la solución sobre la superficie indicadora puede ser una solución de sustrato que reacciona con un componente reportero del reactivo detector. La superficie indicadora puede comprender un material absorbente, el cual, en una modalidad preferida, está saturado con la solución. El material absorbente puede ser una almohadilla, la almohadilla puede estar tejida o, alternativamente, de una construcción de hoja fibrosa prensada, o es construido de material hidrofílico, o es una hoja absorbente basada en celulosa, o está construido de material de fibra de vidrio. En una modalidad preferida de la invención, el cuerpo presenta al menos un aplicador, y la superficie indicadora sobre lados opuestos del mismo. Además, el aparato puede comprender un medio absorbente, el medio absorbente proporcionado sobre el cuerpo y espaciado de al menos un aplicador y la superficie indicadora. En un aspecto, el medio absorbente está construido de material hidrofílico. Además, el aparato puede comprender al menos un marcador sobre una superficie del cuerpo que presenta al menos un aplicador, al menos un marcador conformado para realizar una impresión dentro del área seleccionada de la piel adyacente al área de la piel a la que el reactivo detector ha sido transferido. El aparato puede comprender además por lo tanto, al menos uno o de un segundo marcador sobre la superficie indicadora, al menos un segundo marcador correspondiente al menos a un marcador. En otro aspecto más de la invención, se proporciona un kit para medir el colesterol en piel, el kit comprende: a) una fuente del reactivo detector; b) un aplicador para aplicar el reactivo detector a un área seleccionada de la piel; c) una fuente de una solución que reacciona cuando hace contacto con el reactivo detector; y d) una superficie indicadora para recibir la solución, de modo que cuando la superficie indicadora hace contacto con el área seleccionada de la piel, la solución reacciona con el reactivo detector que es enlazado al colesterol en la piel para producir un cambio de color visual al menos a una porción de la superficie indicadora. El aplicador del kit utiliza preferentemente acción capilar para aplicar el reactivo detector al área seleccionada de la piel. El aplicador puede incluir un elemento de mecha, el cual puede ser un tapón de fibra o alternativamente, es de material de poliolefina inerte. Además, el aplicador puede ser un gel. El kit puede también proporcionar dos aplicadores, los aplicadores están espaciados uno del otro, de modo que un aplicador aplica un reactivo detector control y el segundo aplicador aplica un reactivo detector de prueba. Cada aplicador puede presentar una sección transversal diferente en los respectivos segundos extremos de los mismos . Además, el aplicador puede ser la fuente del reactivo detector y, preferentemente, está saturado con el reactivo detector. Además, la solución puede ser una solución de sustrato que reacciona con un componente reportero del reactivo detector, el cual, preferentemente, es proporcionado sobre la superficie indicadora, que puede ser un material absorbente. Además, en una modalidad preferida el material absorbente es la fuente de la solución. Además, el material absorbente puede estar saturado con la solución. En un aspecto de la invención, el material absorbente del kit puede ser una almohadilla. La almohadilla es tejida o alternativamente, la almohadilla es de una construcción de hoja fibrosa prensada, o es construida de material hidrofílico, o es una hoja absorbente basada en celulosa, o está construida de material de fibra de vidrio. Además, el kit puede comprender un medio absorbente, y el medio absorbente puede ser construido de material hidrofílico. Además, el aplicador del kit y la superficie indicadora pueden ser proporcionados sobre un aparato sobre lados opuestos del mismo. Alternativamente, el aplicador, la superficie indicadora, y el medio absorbente pueden ser proporcionados sobre un aparato. El kit puede comprender además un espectrómetro de reflectancia para analizar el color producido o alternativamente, un comparador de color para analizar el color producido tal como, pero no limitado a, una serie graduada de bandas de color. Además, se proporciona un método para aplicar un reactivo detector a un área seleccionada de la piel para enlazarse al colesterol presente en la piel. El método comprende : a) proporcionar al menos un aplicador que contiene una cantidad suficiente del reactivo detector, al menos un aplicador para transferir el reactivo detector a un área seleccionada de la piel utilizando acción capilar; y b) poner en contacto el área seleccionada de la piel con el aplicador para humedecer la piel con el reactivo detector. El reactivo detector puede ser aplicado al área seleccionada de la piel por al menos un elemento de mecha.

Además, el elemento de mecha puede estar saturado con el reactivo detector. El elemento de mecha deforma una cantidad controlada para liberar el reactivo detector. El elemento de mecha puede ser retenido por un aplicador adecuado. Además, el método de aplicación del reactivo detector comprende la aplicación de un reactivo detector control y un reactivo detector de prueba a dos áreas separadas de la piel dentro del área seleccionada de la piel.

En un aspecto, el reactivo detector control está a una más alta concentración del reactivo detector de prueba. Además, la invención también proporciona un método para producir un cambio de color visual correspondiente a una cantidad de reactivo detector enlazado al colesterol en la piel, para medir el colesterol en la piel, el método comprende : a) aplicar una superficie indicadora a un área seleccionada de la piel, la superficie indicadora tiene una solución que reacciona con el reactivo detector cuando la superficie indicadora está en contacto con el área seleccionada de la piel, la reacción es para producir un cambio de color visual correspondiente a la cantidad de reactivo detector enlazado al colesterol en la piel; y b) el análisis del color producido sobre la superficie indicadora para obtener una medición del colesterol en piel. La superficie indicadora puede incluir una solución de sustrato que reacciona con un componente reportero dentro del reactivo detector. La superficie indicadora puede ser una almohadilla de color absorbente saturado con una solución de sustrato, la solución de sustrato reacciona con un componente reportero dentro del reactivo detector. El color producido puede ser analizado por un espectrómetro de reflectancia o alternativamente utilizando un comparador de colores, tal como una serie graduada de bandas de color.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Para un mejor entendimiento de la presente invención y para mostrar más claramente cómo sería llevada a efecto, se hará referencia ahora, a manera de ejemplo, a las figuras anexas que muestran una modalidad preferida de la presente invención, y en las cuales: La figura 1 es una sección transversal de parte de un dispositivo de la invención para aplicar un reactivo detector a un área seleccionada de la piel; La figura 2 es una vista en planta superior del dispositivo de la figura 1; La figura 3 es una vista en planta superior de parte de un dispositivo indicador de la invención; La figura 4 es una vista en perspectiva de un aparato de esta invención que incluye el dispositivo de la figura 1 y el dispositivo indicador de la figura 2 ; La figura 5 es una vista en planta superior del aparato de la figura 4; La figura 6 es una vista en planta inferior del aparato de la figura 4; Las figuras 7 a 12 ilustran una modalidad del método de esta invención utilizando el aparato de la figura 4; y La figura 7a es una vista en sección transversal tomada a lo largo de las líneas la- la de la figura 7.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un método y aparato para la medición no invasiva del colesterol en piel. Más particularmente, un aspecto de la invención proporciona un dispositivo para aplicar un reactivo detector a un área seleccionada de la piel. Otro aspecto más de la invención proporciona un dispositivo indicador para producir un cambio visual correspondiente a la cantidad de reactivo detector que se enlace en la piel. El método y el aparato de esta invención no requieren ninguna instrumentación, permitiendo que la invención sea adecuada para la auto-prueba, por ejemplo, pero no limitada a, el ambiente doméstico. Como tal, la invención es particularmente útil para permitir que individuos evalúen su riesgo de ateroesclerosis y enfermedades vasculares relacionadas, como se volverá aparente más adelante en la presente. En general, la invención proporciona un método de medición del colesterol en piel. El método incluye: aplicar un reactivo detector a un área seleccionada de la piel para enlazarse al colesterol presente en la piel, el reactivo detector incluye un componente reportero; retirar, cuando sea necesario, el reactivo detector en exceso por un medio absorbente adecuado; aplicar una superficie indicadora al área seleccionada de la piel, la superficie indicadora tiene una solución que reacciona con el componente reportero cuando la superficie indicadora está en contacto con el área seleccionada de la piel, la reacción produce un cambio de color visual correspondiente a la cantidad de reactivo detector con el componente reportero que es enlazado al colesterol en la piel; y analizar el color producido sobre la superficie indicadora, para obtener una medición del colesterol en piel. Se constata que un área de la piel puede ser utilizada para la prueba, pero la más adecuada es aquella de la superficie de la palma de la mano. La piel en el área de la palma no tiene glándulas sebáceas cuyas secreciones pueden tener colesterol que pudiera afectar los resultados. También, la palma es particularmente muy adecuada para la aplicación y colocación fácil por el aparato de esta invención, como se explicará más adelante. La descripción siguiente hace referencia a la palma como el área de la piel que es probada. No obstante, podrá ser constatado por aquellos de experiencia en la técnica que el método no está restringido al uso con la palma sino que puede ser aplicado a otras áreas de la piel. Además, el análisis del colesterol sobre un área de la piel es logrado mediante el uso de reactivos detectores que tienen especificidad del colesterol. Además, los reactivos detectores tienen un componente reportero vinculado que genera una señal que es mensurable cuando el componente reportero se hace reaccionar con una solución de sustrato adecuada . La aplicación del reactivo detector al área seleccionada de la piel da como resultado enlace específico a los componentes del colesterol presentes en la piel, y el enlace concomitante del componente reportero. En una forma del ensayo el reactivo detector es un compuesto del tipo A-C-B; donde A representa un componente de enlace específico al colesterol, B es un componente reportero, y C es un componente de enlace. Los reactivos de este tipo son descritos en la Patente de los Estados Unidos No. 5,489,510, la totalidad de la cual se incorpora por referencia en la presente . El componente A puede ser cualquier agente que se enlazará discriminadamente al colesterol en la piel. Los ejemplos de agentes adecuados incluyen, pero no están limitados a, glucósidos de esteroides, glucósidos de triterpeno, proteínas hidrofóbicas, antibióticos poliénicos, y anticuerpos anti-colesterol . Los compuestos del tipo A-C-B pueden ser utilizados donde el componente B es una enzima. Los ejemplos de enzimas adecuadas incluyen, pero no están limitadas a, peroxidasa, fosfatasa alcalina, ureasa, galactosidasa, glucosa-oxidasa, y acetil-colinesterasa. Además, los componentes C de enlace, que unen el componente específico de enlace al colesterol A, al componente reportero B, incluyen, por ejemplo, pero no están limitados a, reticuladores de longitud cero, reticuladores homobifuncionales y reticuladores heterobifuncionales. Los reticuladores de longitud cero son mediadores de la unión de las moléculas A y B por la formación de un enlace entre ellas que contienen átomos adicionales. Los reticuladores homobifuncionales tienen dos grupos reactivos idénticos que son utilizados para unir las moléculas A y B y formar un enlace entre ellas que tiene un número variable de átomos, dependiendo de la longitud del agente homobifuncional particular utilizado. Similarmente, los reticuladores heterobifuncionales tienen dos grupos funcionales diferentes que son utilizados para unir las moléculas A y B y formar un enlace entre ellas que tiene un número variable de átomos, dependiendo de la longitud del agente heterobifuncional particular utilizado. El componente C puede ser también un reticulador polimérico que tiene múltiples grupos funcionales, ya sea del mismo tipo o de diferentes tipos, y es también capaz de enlazar a muchas moléculas de A y B a una columna vertebral polimérica. Un reactivo particularmente útil del tipo A-C-B, es por ejemplo, donde A es digitonina, B es peroxidasa de rábano y C es un copolímero de anhídrido maleico N-vinilpirrolidona. Los dispositivos y aparatos de los diversos aspectos de la invención serán descritos ahora con más detalle. Se mostrará entonces el método de la invención que utiliza a manera de ejemplo, los dispositivos y aparatos descritos . Las figuras 1 y 2 ilustran un dispositivo para aplicar un reactivo detector a un área seleccionada de la piel, de acuerdo a un aspecto de la invención. El dispositivo 10 incluye un cuerpo 12 y al menos un aplicador 14. Para los propósitos de las figuras 1 y 2 únicamente se muestra parte del cuerpo 12. Se puede apreciar que la forma y la configuración del cuerpo pueden variar. Además, el cuerpo puede caracterizar diversas configuraciones de asa o mango (no ilustradas) para permitirle a un usuario sujetar fácilmente y utilizar el dispositivo para el método de la invención. El aplicador 14 es retenido en un extremo 16 (el extremo inferior para el aplicador mostrado en la figura 1) por el cuerpo 12. Un segundo extremo 18 (el extremo superior para el aplicador mostrado en la figura 1) del aplicador, es proporcionado para hacer contacto con un área seleccionada de la piel (ver figura 7a) . La humectación del área seleccionada de la piel con un reactivo detector es lograda por el segundo extremo 18 del aplicador 14, como se describirá más adelante en la presente. En la modalidad preferida de la invención, el aplicador 14 transfiere el reactivo detector al área seleccionada de la piel utilizando acción capilar. Para la auto-prueba, por ejemplo, en un ambiente doméstico, un medio práctico de aplicar el reactivo detector a la piel del operador, es necesario y no requiere medición u otra instrumentación. El inventor ha encontrado que una aplicación consistente del reactivo detector a un área definida de la piel es lograda a través del uso de la acción capilar. Para la modalidad ilustrada en las figuras 1 y 2, se utiliza un elemento de mecha 20 para la acción capilar. Para la modalidad ilustrada, el cuerpo 12 incluye un hueco 22 para recibir el aplicador 14. En particular, el hueco 22 tiene una porción inferior 24 y una porción superior 26. El extremo 16 del aplicador 14 puede ser conformado y configurado para ser retenido en la porción inferior 24 del hueco 22 por ejemplo, pero no limitado a, mediante un ajuste por fricción. La porción superior 26 del hueco 22 tiene una extensión perimétrica mayor que la extensión perimétrica del aplicador 14. En particular, como se ilustra, la porción superior 26 del hueco 22 dentro del cuerpo 12 rodea el segundo extremo 18 del aplicador 14, de modo que un espacio vacío 28 en la forma de un espacio anular es proporcionado alrededor de éste. Además, la modalidad preferida caracteriza el aplicador 14 ahuecado dentro del cuerpo 12, de modo que la superficie de contacto 17 del segundo extremo 18 del aplicador 14 no se extiende más alto que la superficie 30 del cuerpo . En una modalidad preferida, el aplicador 14 está saturado con el reactivo detector para transferir el reactivo detector a la piel después del contacto. La transferencia del reactivo detector debe ocurrir para humectar un área de la piel después del contacto, y ser relativamente independiente de la presión aplicada por el operador. Aunque se prefiere saturar el aplicador, se puede apreciar que sería aparente para aquellos expertos en la técnica que el aplicador no necesita ser saturado; no obstante, éste necesita contener una cantidad suficiente o una cantidad del reactivo detector para humedecer un área de la piel después del contacto. Pueden ser utilizadas diversas formas de aplicadores 14 dentro de esta invención. Por ejemplo, el aplicador puede ser un gel, o un tapón de fibra, el cual retiene el líquido a través de la acción capilar. Los tapones de material de poliolefina inertes son útiles ya que éstos están disponibles en formas que son hidrofílicas y por lo tanto absorben fácilmente los líquidos basados en agua como el reactivo detector. Los tapones que tienen una pared reforzada y con los elementos de fibra orientados longitudinalmente, son útiles, ya que éstos tienen buena resistencia axial, pueden conducir fácilmente el líquido a lo largo de sus ejes, y transfieren el líquido a la piel después del contacto. Además, el aplicador 14 puede ser de diversas formas en sección transversal, anchuras y longitudes. Los tapones cilindricos son convenientes para utilizarse como un aplicador 14, ya que el diámetro determina el área del reactivo detector que es transferida a la piel y por lo tanto al área del punto coloreado que es producido sobre la superficie indicadora, como se explicará más adelante en la presente. Por ejemplo, pero no limitado a, un tapón adecuado puede tener un diámetro de aproximadamente 3 mm hasta aproximadamente 15 mm, y más preferentemente de aproximadamente 4 mm hasta aproximadamente 10 mm de diámetro. Además, la altura de tal tapón puede ser de aproximadamente 4 mm hasta aproximadamente 10 mm. Como se mencionó previamente, el aplicador 14 está preferentemente ahuecado dentro del cuerpo 12 de modo que el segundo extremo 18 del aplicador 14 no se extiende más alto que la superficie 30 del cuerpo 12. Esto enfrenta una necesidad para limitar la cantidad de fuerza aplicada al segundo extremo 18 del aplicador 14 por un operador cuando hace contacto con la palma u otra área de la piel. También, mucha fuerza puede expulsar cantidades excesivas del reactivo detector y provocar que sea humedecida un área grande y descontrolada de la piel. De manera contraria, demasiada poca fuerza dará como resultado pobre contacto con la piel e insuficiente humectación de la piel. Por lo tanto, existe un requerimiento para controlar la cantidad de presión que es aplicada a un aplicador y mantener buen contacto con la piel. En la modalidad preferida, este control es ejercido por el ahuecamiento del aplicador 14 dentro del hueco 22 del cuerpo 12, como se ilustra en la figura 1, en donde el segundo extremo 18 del aplicador 14 está ahuecado justo por debajo de la superficie 30 del cuerpo 12. El aplicador 14 puede estar, por ejemplo, pero no limitado a, ahuecado a aproximadamente 0.2 mm hasta aproximadamente 2 mm, y más preferentemente de aproximadamente 0.5 mm hasta aproximadamente 1 mm. De esta manera, cualquier fuerza excesiva aplicada por la mano u otra área de la piel es transferida en general a la superficie circunvecina 30 del cuerpo 12, y no al aplicador 14 (ver figura 7a) . En general, una porción de la piel y el área carnosa subyacente, son fácilmente deformables y hacen contacto adecuado con el segundo extremo 18 del aplicador 14, cuando el aplicador 14 hace contacto con el área seleccionada de la piel. La parte carnosa del área hipotenar de la palma (ver figura 7) es particularmente adecuada y se deforma fácilmente para hacer buen contacto con el segundo extremo 18 del aplicador 14.

El espacio vacío 18 o el espacio anular pueden también prevenir que el reactivo detector en exceso sea exprimido de manera descontrolada sobre la piel, cuando el aplicador 14 hace contacto con la palma. Cualquier presión en exceso aplicada al segundo extremo 18 del aplicador 14 puede provocar que el aplicador se deforme hacia fuera. Esto será acomodado por el espacio vacío 28, ya que el aplicador 14 no está restringido en su segundo extremo 18 por las paredes 32 de la porción superior 26 del hueco 22. Sin el espacio vacío 28, la aplicación de presión en exceso a un aplicador dentro de un hueco del mismo diámetro que el aplicador daría como resultado la expulsión descontrolada del reactivo detector en exceso del aplicador, dando como resultado humectación excesiva de la piel. En efecto, el espacio 28, o el anillo anular, representa un depósito dentro del cual puede ser retenido cualquier reactivo detector en exceso que seas exprimido del aplicador. El espacio vacío 28 puede ser, por ejemplo, pero no está limitado a, de aproximadamente 0.2 mm hasta aproximadamente 2 mm de ancho, con espacios vacíos de aproximadamente 0.5 mm hasta aproximadamente 1 mm que es lo más preferible. Las dimensiones proporcionadas anteriormente para el aplicador están destinadas a ser ilustrativas de una modalidad ejemplar de la invención únicamente, y se debe entender que la invención no está limitada a estas dimensiones, y que son contempladas por esta invención otras formas, configuraciones y dimensiones. La figura 3 ilustra un dispositivo indicador 50 para producir un cambio de color visual correspondiente a una cantidad de reactivo detector que se enlaza al colesterol en la piel. El dispositivo indicador tiene un cuerpo 52 y una superficie indicadora 54 proporcionada por el cuerpo 52. La superficie indicadora 54 está acomodada sobre el cuerpo 52, de modo que ésta puede hacer contacto con el área seleccionada de la piel. Además, como se describirá más adelante en la presente, la superficie indicadora 54 contiene una cantidad suficiente de una solución que reacciona cuando hace contacto con el reactivo detector que está enlazado al colesterol en el área seleccionada de la piel, para producir un cambio de color visual al menos a una porción de la superficie indicadora. En la modalidad ilustrada en la figura 3, la superficie indicadora 54, es un material absorbente en la forma de una almohadilla 56, preferentemente saturada con la solución, tal como, por ejemplo, una solución de sustrato que reacciona con el componente reportero del reactivo detector. En particular, la detección del reactivo detector específicamente enlazado, es lograda a través de una solución de sustrato o un compuesto generador de señales que reacciona con el componente reportero del reactivo detector. Esto es más convenientemente logrado cuando el componente reportero del reactivo detector es una enzima, y la solución de sustrato es un sustrato productor de color para la enzima. La peroxidasa de rábano es una enzima comúnmente utilizada en estos sistemas que utilizan un sustrato de peróxido, tal como el peróxido de hidrógeno, en combinación con un componente reportero redox, productor de color. En muchos ensayos clínicos e inmunoensayos, el componente enzimático reacciona con el sustrato en una fase fluida para producir una solución coloreada cuya intensidad puede ser medida espectrofotométricamente. Alternativamente, en ensayos donde el componente reportero enzimático es inmovilizado sobre una fase sólida, tal como un ensayo de inmunotransferencia, una solución sustrato formadora de color, de precipitación, es superpuesta sobre la enzima inmovilizada. Esto genera un producto coloreado depositado en el sitio de la enzima enlazada. En el método de la presente invención la enzima inmovilizada es enlazada a la piel a través de un componente de enlace de colesterol específico del reactivo detector, y no es adecuado para métodos de detección convencionales que utilizan una solución de sustrato, como se utiliza para los ensayos en fase fluida y de inmunotransferencia descritos anteriormente . En un aspecto novedoso de la invención, se encontró que al poner en contacto una almohadilla 56 de material absorbente que tiene una cantidad suficiente o una cantidad de solución sustrato (y preferentemente saturada con tal solución) al área de la piel que tiene el componente reportero enlazado, da como resultado un desarrollo de color. Este desarrollo de color es de fase fluida por naturaleza, pero da como resultado el desarrollo de color sobre la almohadilla de sustrato de una manera similar a aquella producida en un método de inmunotransferencia. El componente reportero coloreado, soluble o insoluble generado a partir de la reacción enzimática, es atrapado en los espacios intersticiales (no ilustrados) de la almohadilla 56, y se difunde solo lentamente, con lo cual se forma un área coloreada. El área de color desarrollada corresponde al área de detector enzimático que es inmovilizado sobre la piel aplicada. Por ejemplo, cuando el reactivo detector es aplicado a la piel utilizando el aplicador 14 como se describe anteriormente con respecto a las figuras 1 y 2, entonces como se volverá aparente a partir de la descripción más detallada del método siguiente, es obtenido sobre la almohadilla 56 un punto circular coloreado 58, correspondiente . Además de generar un punto coloreado 58 que corresponde en área al detector específicamente enlazado, la intensidad del punto coloreado 58 correlaciona con la concentración del reactivo detector utilizado. La intensidad de color de los puntos puede ser fácil y convenientemente medida utilizando, por ejemplo, pero no limitada a, un espectrofotómetro de reflectancia y se registra la cantidad de color como cromaticidad, reflectancia o densidad óptica. Varios tipos de materiales son utilizables para la almohadilla 56 adecuada para absorber la solución del sustrato, se puede apreciar que el material utilizado en la construcción de la almohadilla y la apertura de los espacios intersticiales afecta cómo la solución de sustrato es absorbida y esto a su vez determina que tan bien definido es producido un punto coloreado 58. Materiales de hoja fibrosa delgados, tejidos o prensados son los más adecuados, y los materiales hidrofílicos son particularmente útiles para las almohadillas 56 que emplean soluciones de sustrato basadas en agua. Las hojas absorbentes basadas en celulosa son fácilmente disponibles y cuando se utilizan como almohadillas 56, producen buenos puntos coloreados 58. Las hojas delgadas de material de fibra de vidrio, como se utilizan para filtros, son las más útiles. La fibra de vidrio es altamente hidrofílica y los capilares tortuosos y densos de material grado filtro, dan como resultado punto 58 muy bien definidos que muestran poca difusión del color. Además, la fibra de vidrio es muy blanca y proporciona un buen fondo para la visualización de los puntos coloreados 58, particularmente para puntos que tienen baja intensidad de color. Se desea también mojar la almohadilla 56 con una solución de sustrato adecuada para generar buenos puntos coloreados 58. Por ejemplo, cuando el reactivo detector sea del tipo A-C-B, con la peroxidasa de rábano con el componente enzimático, entonces pueden ser utilizados reactivos de sustrato comercialmente disponibles, altamente sensibles, como el componente reportero. Estos componentes reporteros contienen típicamente peróxido de hidrógeno y un colorante indicador redox, basado en bencidina, tal como 3, 3', 5,5'-tetrametilbencidina, y producen un producto de reacción de color azul con enzimas peroxidasas. Estos reactivos basados en líquido son particularmente útiles para mojar almohadillas 56 del dispositivo indicador para generar subsecuentemente puntos coloreados . Se sabe que las tiras de reactivos secas y las almohadillas incorporan un colorante indicador, con o sin un peróxido y se utilizan para detectar actividad de peroxidasa o de pseudoperoxidasa. Un tipo de almohadilla de reactivo seco emplea un reportero de peroxidasa, pero sin un componente de peroxidasa, y se utiliza para la detección de hemoglobina (una pseudo-peroxidasa) en heces. La hemoglobina es un marcador para ocultar la sangre y las almohadillas de reactivo se utilizan en la detección de cáncer de colon. En este sistema, el reportero redox es usualmente guayaico, absorbido sobre una matriz porosa. El material fecal es aplicado a un lado de la almohadilla porosa que es luego enviada para la prueba. En el sitio de la prueba, la solución de peróxido de hidrógeno es aplicada al segundo lado de la almohadilla, donde se difunde a través de la matriz y reacciona con cualquier hemoglobina presente. La reacción subsiguiente con el guayaico genera un producto de reacción de color azul indicador de la presencia de hemoglobina. Podría ser apreciado por aquellos expertos en la técnica que obviamente, los reporteros redox para la peroxidasa diferentes del guayaico pueden ser utilizados también en tales almohadillas y son incluidos en la presente por extensión. Un segundo tipo de almohadilla de reactivo seco es utilizada para detectar la actividad de peroxidasa, por ejemplo, palillos de inmersión de orina para detectar la hemoglobina. En general, estos sistemas emplean un hidroperóxido orgánico (por ejemplo, hidroperóxido de eumeno, hidroxiperóxido de butilo o un compuesto similar) así como un colorante indicador redox (o-tolideno, 3, 3', 5,5'-tetrametilbencidina o un indicador redox similar) . Una solución de estos reactivos junto con el estabilizador, el amortiguador y otros ingredientes son absorbidos sobre una matriz porosa y luego secados para formar una almohadilla indicadora estable. Ver por ejemplo, las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,071,318 y 5,318,894, la totalidad de las cuales se incorpora por referencia en la presente, que instruyen en los métodos de preparación de tales materiales de reactivos secos. En aspectos adicionales de la invención, ambos de los tipos anteriores de almohadillas de reactivo seco pueden ser utilizadas como un sistema indicador para señalar la actividad peroxidativa del reactivo detector enlazado al colesterol en piel. En el primer caso, una almohadilla seca que contiene el guayaico u otro indicador peroxidativo, es humedecida con la solución diluida de peróxido de hidrógeno y, en el método de la invención, la palma, que tiene el reactivo detector enlazado, se aplica a la almohadilla húmeda. La peroxidasa, específicamente enlazada al colesterol en la piel, provoca un cambio de color sobre la almohadilla indicadora, que corresponde al área del detector enlazado . En el segundo caso la almohadilla seca, que contiene el hidroperóxido y el indicador, es humedecida con agua. La palma, que tiene el reactivo detector enlazado, es luego aplicada a la almohadilla húmeda. El reactivo detector, específicamente enlazado al colesterol en la piel, provoca un cambio de color sobre la almohadilla en un área que corresponde a la peroxidasa enlazada. En todos los casos, el uso de una almohadilla absorbente 56, mojada con sustrato de acuerdo con esta invención, evita la aplicación directa de la solución de sustrato líquida a la piel, y los problemas de contenimiento muy restrictivos que esto podría involucrar. Se puede apreciar que el dispositivo 10 para aplicar el reactivo detector como se ilustra en las figuras 1 y 2, y el dispositivo indicador 50 ilustrado en la figura 3, pueden ser fácilmente combinados en un aparato 100 como se ilustra mejor en las figuras 4, 5 y 6. Al combinar el aplicador 14 del dispositivo 10 con el dispositivo indicador 50 en un aparato simple 100, esta invención permite un método relativamente simple para la auto-prueba de niveles de colesterol, particularmente en, por ejemplo, pero no limitados a, un ambiente doméstico. La referencia al aparato 100 será realizada utilizando los mismos caracteres de referencia que se utilizan para el dispositivo 10, de las figuras 1 y 2, y el dispositivo indicador 50 de la figura 3, pero precedido con un "1". Por ejemplo, en la figura 4 donde el aplicador 14 de la figura 1 es mostrado, está etiquetado 114, y en la figura 6, donde la superficie indicadora 54 de la figura 3 es mostrada, está etiquetado 154. Los nuevos elementos son introducidos precedidos por un "2", por ejemplo, el aparato 100 incluye un cuerpo 202, que caracteriza un asa o mango 204 en un extremo, y en el otro extremo del mismo, una porción (o extremo) 206 de contacto con la piel, que lleva el aplicador 114, y la superficie indicadora 154. Se apreciará que el aparato 100 representa una modalidad ilustrativa que combina el dispositivo 10 para aplicar el reactivo detector y el dispositivo indicador 50. Como se ilustra, el aparato 100 presenta el aplicador 114 sobre un lado del extremo 206, y la superficie indicadora 154 sobre el lado opuesto del mismo. Otras configuraciones aparentes para aquellos expertos en la técnica están destinadas a ser cubiertas por esta invención. Por ejemplo, el aparato 100 podría también proporcionar espacio para un medio absorbente adicional (no ilustrado) para transferir el reactivo detector en exceso, cuando sea necesario. El medio absorbente puede estar espaciado del aplicador y la superficie indicadora. La descripción del dispositivo 10 para aplicar un reactivo detector proporcionado anteriormente con respecto a las figuras 1 y 2, aplica a la descripción del aparato 100 en cuanto a que el aparato 100 es utilizado para aplicar un reactivo detector. En particular, el aparato 100 tiene al menos un aplicador 114 (son mostrados dos para la modalidad ilustrada) , proporcionado dentro de un hueco 122 (ver figura 5) . Además, el aplicador 114 está ahuecado, de modo que el segundo extremo 118 no se extiende más alto que la superficie 130 del cuerpo 202 del aparato 100. La superficie 130 del aparato 100 caracteriza un número de marcadores 208a localizadores espaciados alrededor de una porción del extremo 206. El propósito de estos marcadores es dejar una impresión del área de la piel contactada por el aparato 100, cuando se aplica el reactivo detector, como se explicará más adelante en la presente. En una modalidad preferida de la invención, el aparato 100 caracteriza dos aplicadores 114 espaciados uno del otro, como se ilustra en la figura 5. Uno de los aplicadores aplica a un reactivo detector control al área de la piel y el segundo aplicador aplica a un reactivo detector de prueba. Aunque la modalidad del aparato 100 como se ilustra en las figuras 4 y 5, muestra los aplicadores 114 que tienen la misma sección transversal, se puede apreciar que cada aplicador podría presentar una sección transversal diferente en el segundo extremo del mismo para el contacto con la piel. Esto permitiría una verificación visual rápida respecto cuál es el reactivo detectado control y cuál es el reactivo detecto de prueba. Similarmente, la descripción del dispositivo indicador 50 proporcionada anteriormente y con respecto a la figura 3, aplica a la descripción del aparato 100 en cuanto a que el aparato 100 es utilizado como un dispositivo indicador. En particular, el aparato 100 tiene al menos una superficie indicadora 154 (se muestran dos para la modalidad ilustrada en la figura 6) . La superficie indicadora 154 puede producir un cambio de color visual correspondiente a una cantidad de reactivo detector que es enlazado al colesterol en la piel, una vez que la superficie indicadora 154 hace contacto con el área seleccionada de la piel. Como se discutió previamente, en relación al dispositivo indicador 50 de la figura 3, la superficie indicadora 154 es un material absorbente en la forma de una almohadilla 153, y preferentemente saturado con la solución, tal como, por ejemplo, una solución sustrato que reacciona con el componente reportero del reactivo detector aplicado por los aplicadores 114 del aparato 100. Similarmente a la superficie 130 del aparato 100, la superficie 210 del extremo 206 caracteriza un número de marcadores localizadores 208b espaciados alrededor de ésta. El propósito de estos marcadores es acoplar o hacer concordar las impresiones correspondientes en el área de la piel dejada por los marcadores 208a, cuando se aplica el reactivo detector, de modo que las almohadillas 156 pueden traslapar la misma área de piel, como será explicada más adelante. En una modalidad preferida de la invención, el aparato 100 caracteriza dos almohadillas 156, espaciadas una de la otra, como se ilustra en la figura 6. Cada almohadilla 156 corresponde a uno de los aplicadores 114. Se debe apreciar, no obstante, que una almohadilla puede ser proporcionada de tamaño adecuada para abarcar un área similar al área de las dos almohadillas 156, mostradas para el aparato 100. Otras formas y configuraciones para las almohadillas pueden ser también contempladas por aquellos expertos en la técnica. Se puede apreciar que para fines de prueba el área de la piel puede hacer contacto con el reactivo detector de control y el reactivo detector de prueba, cada reactivo detector aplicado por aplicadores separados 114. En la práctica, se utiliza el mismo reactivo detector con ambos aplicadores; una alta concentración del reactor detector es utilizada en el control, no obstante. La alta concentración del reactivo detector control es elegida tal que después del desarrollo subsiguiente sobre la superficie indicadora 154, todos los individuos probados , independientemente de su nivel de colesterol en piel, producirán una mancha coloreada claramente visible. Dando una mancha coloreada fácilmente distinguible con el detector control, se asegura al individuo que el área de la piel por ejemplo, la palma, ha hecho suficiente y buen contacto con los reactivos detectores. El aplicador transfiere el reactivo detector de prueba contiene una concentración menor del mismo reactivo detector que el reactivo detector control. La concentración del reactivo detector de prueba es elegida tal que después del revelado o desarrollo sobre la superficie indicadora, es producida una mancha coloreada cuya intensidad refleja el nivel de colesterol en la piel. En otro aspecto más de la invención, la concentración del reactivo detector es elegida tal que los individuos con un nivel de umbral establecido de colesterol en piel, no producirán manchas coloreadas sobre la superficie indicadora. Los individuos con niveles de colesterol en piel por arriba de este nivel de umbral producirán una mancha cuya intensidad refleje su nivel de colesterol en piel. De esta manera, es proporcionada una prueba simple para identificar a los individuos con un nivel de colesterol en piel por arriba de un nivel seleccionado (por ejemplo, una mancha de color discernible es producida) , y por lo tanto se considera que está por arriba de una cantidad de umbral pre-seleccionada que los coloca en un riesgo incrementado para la ateroesclerosis y otras enfermedades cardiovasculares relacionadas . En otro aspecto más de la invención las concentraciones del reactivo detector pueden ser elegidas de modo que todos los individuos probados den una mancha coloreada y la intensidad sea proporcional a su nivel de colesterol en piel. Los individuos con altos niveles de colesterol en piel enlazarán más reactivo detector en un tiempo de contacto dado que los individuos con niveles bajos de colesterol en piel y el color desarrollado será proporcional a la cantidad de detector enlazado. En este tipo de ensayo la intensidad de la mancha coloreada puede ser comparada a uno de varios colores prescritos sobre una tarjeta comparadora de colores, como se describirá más adelante en la presente. El color de la mancha producida hace posible que el colesterol de la piel de un individuo sea semi-cuantitativamente determinada, y luego asignada a uno de los diversos grupos de riesgo, por ejemplo, bajo, normal y alto. La determinación más precisa de la intensidad de las manchas coloreadas desarrolladas con estos ensayos puede ser realizada utilizando instrumentos que miden la cantidad de color. Por ejemplo, los espectrómetros de reflectancia simple pueden ser utilizados y los atributos de color tales como la cromaticidad, la reflectancia, y la densidad óptica, pueden ser utilizadas para determinar la cantidad de color, como se describe en la solicitud de patente internacional, publicación No. WO 01/011359 A3 , la totalidad de la cual se incorpora por referencia en la presente. El método de la invención será descrito ahora con detalle haciendo referencia a las figuras 7, 7a, 8, 9, 10, 11 y 12, y utilizando para fines de ilustración, el aparato 100 de la invención. Se puede apreciar, no obstante, que el mismo método puede ser practicado utilizando, por ejemplo, un dispositivo separado 10 y el dispositivo indicador 50 y aplicando los siguientes pasos. Primeramente, el aparato 100 es utilizado para aplicar reactivos detectores a un área seleccionada de la piel, por ejemplo, la palma 300. Para este ejemplo, los aplicadores 114 son dos filtros de poliolefina absorbentes, redondos, 114a y 114b, de 5 mm de diámetro, de 5 mm de longitud y éstos están disponibles de Filtrona Inc (Richmond, VA) . Los filtros son insertados dentro de un cartucho de polipropileno moldeado por inyección, que permite que los filtros sean mantenidos por un ajuste de fricción en el cartucho, y coloca el segundo extremo 118 aproximadamente a 0.5 mm por debajo de la superficie 130 del aparato. Además, el segundo extremo 118 de cada filtro es rodeado por un espacio anular de aproximadamente 0.75 mm de ancho. Cada filtro está saturado con un reactivo detector de un conjugado A-C-B de digitonina (A) y peroxidasa de rábano (B) enlazada a un copolímero (C) de anhídrido maleico N-vinilpirrolidona. Un filtro 114a, es designado como un control positivo, es saturado con una alta concentración del reactivo detector y el segundo filtro 114b es diseñado como un filtro de prueba, es saturado con una menor concentración del reactivo detector. Típicamente, el control positivo tendrá el reactivo detector aproximadamente a 50-100 ug/ml, y el reactivo detector de prueba aproximadamente a 1-10 ug/ml.

El área hipotenar de la palma 300 se selecciona, se limpia, se seca y luego se coloca sobre el extremo 206 del aparato 100 para hacer el contacto así con los reactivos detectores sobre los aplicadores 114a y 114b. Esto permite que los reactivos detectores se enlacen al colesterol en la piel, como se muestra en 304a y 304b en la figura 8, en donde 304a representa el reactivo detector control del aplicador 114a y 304b representa el reactivo detector de prueba del aplicador 114b. Alternativamente, el aparato puede ser colocado en contacto con la palma 300. Después del contacto con los aplicadores 114a y 114b por aproximadamente 1 minuto, la palma 300 y el aparato 100 son separados, como se muestra en la figura 8. También como se muestra en la figura 8, los marcadores 208a, dejan impresiones 306 en la palma 300, delineando el área de la piel a la que han sido aplicados los reactivos detectores. Si se desea, los marcadores 208a pueden ser etiquetas que imprimen en la piel palabras adecuadas, tales como "control" o "prueba" que son impresos en el lado de la piel 304a y 304b, respectivamente, donde el reactivo detector control y el reactivo detector de prueba están enlazados al colesterol en la piel. Si existe algún reactivo detector no enlazado en exceso, éste es eliminado al aplicar inmediatamente un medio absorbente o almohadilla de transferencia 302 como se muestra en la figura 9. Dos pasos adicionales de manchado o transferencia pueden ser realizados mediante la aplicación de la palma a áreas frescas de material de celulosa. Todos los pasos de manchado o transferencia son llevados a cabo mediante la aplicación de presión firme en el área hipotenar de la palma 300 con la almohadilla de manchado 302. Se ha encontrado que mientras que una aplicación de manchado simple de la piel elimina casi todo el detector no específicamente enlazado, tres aplicaciones es lo más conveniente para eliminar el exceso. Más de tres aplicaciones es usualmente innecesario ya no elimina el detector enlazado no específicamente . La eliminación del detector no enlazado en exceso, si está presente, es necesario ya que únicamente el detector específicamente enlazado genera una señal significativa. El lavado es una alternativa y un medio equivalente para eliminar el reactivo detector no específicamente enlazado, pero es menos conveniente para el uso en una prueba rápida y simple, donde los pasos siguen en secuencia y son llevados a cabo por un aparato, tal como el aparato 100 de este ejemplo. Cualquiera de los diversos tipos de medios absorbentes 302 son adecuados como un material de manchado o transferencia. Los materiales hidrofílicos tejidos altamente absorbentes tales como tejidos basados en algodón o celulosa son particularmente muy adecuados. Las toallas para cocina desechables y otro material de hoja común similar, son preferidos y los materiales que no dejan residuos de pelusa sobre la palma son más preferidos. Como se mencionó previamente en relación a la discusión del aparato 100, el medio absorbente 302 puede ser parte del aparato adyacente a la superficie 130 que retiene los aplicadores 114. De esta manera, es un procedimiento simple después de aplicar los reactivos detectores, transferir la palma al medio absorbente 302 para la eliminación del detector no específicamente enlazado. En otra forma del método, y como se ilustra en la figura 9, el medio absorbente está separado del aparato utilizado para aplicar los reactivos detectores y la palma es luego movida al medio absorbente aislado 302 para el paso de manchado. El área 300 de la palma hipotenar, que tiene el reactivo detector específicamente enlazado, es luego colocada sobre una almohadilla 156 recién preparada, tales como las almohadillas 156a y 156b, ilustradas en la figura 10, saturada con una solución de sustrato. El material de fibra de vidrio 934 AH (Whatman Inc.) y la solución sustrato K-Blue Max (Neogen Corp.) son típicamente utilizados. Alternativamente, el aparato 100 puede ser puesto en contacto con la palma 300. En cualquier situación, las almohadillas 156a y 156b deben alinearse sobre donde los reactivos detectores se enlazan al colesterol en la piel como se muestra en 304a y 304b, respectivamente, en la figura 8. En consecuencia, los marcadores 208b sobre el lado 210 del extremo 206 del aparato 100 son utilizados para alinear el extremo 206 con las impresiones 306 dejadas sobre la palma 300 por los marcadores 208a. Después del contacto con la solución de sustrato sobre las almohadillas 156a y 156b por aproximadamente un minuto, la palma es retirada, como se muestra en la figura 11. Al retirar la palma 300 de las almohadillas 156a y 156b, existirán uno o dos puntos azules redondos 158a y 158b, respectivamente, de aproximadamente 5 mm de diámetro sobre las almohadillas. Estas manchas, 158a y 158b corresponden a donde los reactivos detectores de los aplicadores 114a y 114b fueron enlazados a la palma como en 304a y 304b, respectivamente. Todos los individuos tendrán una mancha azul en la posición que corresponde al aplicador control positivo. Si se utiliza una baja concentración de umbral del detector en el aplicador de prueba, una segunda mancha puede o no ser visible dependiendo del nivel de colesterol en la piel del individuo probado. Los individuos con niveles bajos o normales de colesterol en piel no darán una segunda mancha de prueba, mientras que los individuos con altos niveles de colesterol en piel desarrollarán una segunda mancha. Si se utiliza un nivel no de umbral del detector en un segundo aplicador de prueba, entonces todos los individuos producirán dos manchas azules. Además de una mancha control positiva de color azul fuerte, una segunda mancha azul de intensidad variable será observada. La intensidad de esta segunda mancha dependerá del nivel de colesterol en piel del individuo que se trate, y una medición de la intensidad puede ser realizada utilizando una tarjeta 308 comparadora de colores, como se muestra en la figura 12. La intensidad del color de la mancha de prueba es medida con la tarjeta 308 comparadora de color que tiene bandas 310 de colorante azul de intensidad variable. En una modalidad, cada banda puede tener un orificio 312 de aproximadamente 4 mm de diámetro en su centro. En esta modalidad, la tarjeta comparadora 308 puede ser guiada sobre la mancha de prueba 158b sobre la almohadilla 156b, de modo que la mancha de prueba se muestra en el orificio 312 en el centro de cada banda 310 de color. El orificio 312 en cada banda 310 es colocada a su vez sobre la mancha de prueba hasta que es lograda una concordancia de intensidad entre la mancha de prueba y una banda coloreada 310, circunvecina. Cada banda coloreada 310 puede ser dotada con una calificación que refleja un factor de riesgo basado en un nivel de colesterol en piel correspondiente. Los individuos con un alto nivel de colesterol en piel desarrollarán una mancha azul más intenso, obtendrán una calificación más alta, y tendrán un riesgo incrementado ya sea de tener o de desarrollar ateroesclerosis así como aquellos en riesgo de tener enfermedades similares u otras atribuibles a los altos niveles de colesterol. Mientras que el intervalo de niveles de colesterol en piel en la población normal y en riesgo determina la intensidad de las bandas 310 sobre las tarjetas comparadoras 308, el color de las bandas 310 es determinado por las soluciones de sustrato utilizadas. Con el sustrato de 3 , 3 ', 5, 5' -tetrametilbencidina las manchas desarrolladas son una mancha de agua azul . Un comparador de color adecuado y apropiado es preparado con base en el intervalo de matices y cromaticidades desarrollados utilizando este sustrato. Para otros sustratos, son desarrollados diferentes colores y son requeridas tarjetas comparadoras correspondientes. La incorporación de colorantes de color base de fondo en las almohadillas 156a y 156b puede permitir que la gama de colores desarrollados sea variada, así como las intensidades. Con las almohadillas de reactivos seco puede ser incorporado un colorante de color amarillo anaranjado con un indicador productor de azul. A bajos niveles de conversión en sustrato, las manchas coloreadas permanecen amarillas o anaranjadas, a niveles intermedios las manchas son verdosas y a altos niveles las manchas son azul verdoso. Esto permite que sean realizadas comparaciones de color variables en lugar de las comparaciones de intensidad, y puede proporcionar una alternativa y una lectura ventajosa de las manchas desarrolladas. Se puede apreciar que aunque el método de la invención ha sido descrito utilizando un aparato 100, puede ser utilizado un número de dispositivos alternativos, tales como un dispositivo separado para aplicar los reactivos detectores y un dispositivo indicador separado. En consecuencia, la invención es fácilmente adaptable a un kit adecuado para la auto-prueba de colesterol en piel, particularmente, por ejemplo, pero no limitado a un ambiente doméstico . El kit podría incluir una fuente del reactivo detector; un aplicador para aplicar el reactivo detector a un área seleccionada de la piel; una fuente de una solución que reacciona cuando hace contacto con el reactivo detector; y una superficie indicadora para recibir la solución, de modo que cuando la superficie indicadora hace contacto con el área seleccionada de la piel, la solución reacciona con el reactivo detector que está enlazado al colesterol en la piel, para producir un cambio de color visual al menos a una porción de la superficie indicadora. Se puede apreciar que el aplicador en el kit puede ser el mismo que el que es encontrado en el dispositivo 10, en el aparato 100 como se describió previamente. En particular, en la modalidad preferida, el aplicador es la fuente del reactivo detector (por ejemplo, éste ha sido saturado previamente con el reactivo detector) . No obstante, es contemplado por esta invención que el kit puede incluir los reactivos detectores separadamente, y por lo tanto el usuario tendría que humedecer el aplicador. Similarmente, la superficie indicadora en el kit puede ser la misma que es encontrada en el dispositivo 50 y 100 como se describió previamente. Por lo tanto, la superficie indicadora puede ser la fuente de la solución (por ejemplo, previamente remojada con la solución del sustrato) . No obstante, nuevamente, es contemplado por esta invención que el kit pueda incluir las soluciones de sustrato separadamente, y por lo tanto, el usuario tendría que remojar la superficie indicadora (almohadillas) . Además, el kit de esta invención puede también incluir un medio absorbente para el paso de manchado, cuando sea necesario. Como se describió previamente, por ejemplo el aparato 100, el aplicador y la superficie indicadora pueden ser proporcionados sobre el mismo aparato (por ejemplo, sobre lados opuestos del mismo) e incluido en el kit combinado como tal. Además, el kit puede proporcionar el aplicador, el indicador superficial y el medio absorbente sobre el mismo aparato . Finalmente, el kit puede proporcionar algún medio para analizar el color producido cuando el método es llevado a cabo. Por ejemplo, el kit puede incluir un comparador de color para analizar el color producido. El comparador de color puede ser una serie graduada de bandas de color, como se describió previamente. Alternativamente, el kit puede incluir un espectrofotómetro de reflectancia para analizar el color producido. Se entiende que la siguiente descripción es ilustrativa únicamente y no limitante. Otras modalidades de la invención serán aparentes para aquellos de experiencia ordinaria en la técnica en vista de esta descripción. Mientras que las modalidades de la invención descrita son actualmente consideradas como preferidas, pueden ser realizados diversos cambios y modificaciones sin apartarse del alcance de la invención. La descripción está destinada a ser ilustrativa y no exhaustiva. Esta descripción sugerirá muchas variaciones y alternativas para una persona de experiencia ordinaria en la técnica. Todas estas alternativas y variaciones están destinadas a ser incluidas dentro del alcance de las reivindicaciones. Aquellos familiarizados con la técnica pueden reconocer otros equivalentes a las modalidades específicas descritas que están también destinadas a ser abarcadas por las reivindicaciones. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (111)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un método para medir el colesterol en piel, caracterizado porque comprende: a) aplicar un reactivo detector a un área seleccionada de la piel para enlazarse al colesterol presente en la piel; b) aplicar una superficie indicadora al área seleccionada de la piel, teniendo la superficie indicadora una solución que reacciona con el reactivo detector cuando la superficie indicadora está en contacto con el área seleccionada de la piel, la reacción es para producir un cambio de color visual correspondiente a la cantidad de reactivo detector enlazado al colesterol en la piel; y c) analizar el color producido sobre la superficie indicadora para obtener una medición del colesterol en piel.

2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el reactivo detector es aplicado al área seleccionada de la piel utilizando acción capilar.

3. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el reactivo detector es aplicado al área seleccionada de la piel por al menos un elemento de mecha .

4. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el elemento de mecha está saturado con el reactivo detector.

5. El método de conformidad con las reivindicaciones 3 ó 4, caracterizado porque el elemento de mecha deforma una cantidad controlada para liberar el reactivo detector.

6. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, caracterizado porque el elemento de mecha es retenido por un aplicador adecuado.

7. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la concentración del reactivo detector es elegida de modo que ocurre un cambio de color visual en el paso b) cuando el colesterol presente en la piel está sobre un umbral pre-seleccionado.

8. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la aplicación del reactivo detector comprende la aplicación de un reactivo detector de control y un reactivo detector de prueba a dos áreas separadas de la piel, dentro del área seleccionada de la piel.

9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el reactivo detector control está a una más alta concentración del reactivo detector de prueba.

10. El método de conformidad con las reivindicaciones 8 ó 9, caracterizado porque al menos la concentración del reactivo detector de prueba es elegida de modo que ocurre un cambio de color visual en el paso b) , cuando el colesterol presente en la piel está sobre un umbral preseleccionado.

11. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque comprende además después del paso a) y antes del paso b) , retirar cualquier reactivo detector en exceso no enlazado al colesterol en la piel.

12. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el reactivo detector en exceso es removido por un medio absorbente adecuado .

13. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque la superficie indicadora incluye una solución de sustrato que reacciona con un componente reportero dentro del reactivo detector.

14. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 , caracterizado porque la superficie indicadora es una almohadilla de material absorbente saturada con una solución de sustrato, la solución de sustrato reacciona con un componente reportero dentro del reactivo detector.

15. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado porque el color producido es analizado por un espectrofotómetro de reflectancia.

16. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado porque el color producido es analizado utilizando un comparador de colores.

17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el comparador de colores es una serie graduada de bandas de color.

18. Un dispositivo para aplicar un reactivo detector a un área seleccionada de la piel, caracterizado porque comprende : a) un cuerpo; y b) al menos un aplicador retenido en un extremo del mismo por el cuerpo, y que tiene un segundo extremo para hacer contacto con un área seleccionada de la piel, el segundo extremo del aplicador transfiere al área seleccionada de la piel un reactivo detector.

19. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el aplicador aplica el reactivo detector al área seleccionada de la piel, usando acción capilar.

20. El dispositivo de conformidad con las reivindicaciones 18 ó 19, caracterizado porque el aplicador incluye un elemento de mecha.

21. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque el cuerpo incluye al menos un hueco en éste para recibir un extremo del elemento de mecha.

22. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el hueco es de una profundidad suficiente para recibir en éste el elemento de mecha, de modo que el segundo extremo del elemento de mecha no está más allá de la profundidad del hueco.

23. El dispositivo de conformidad con las reivindicaciones 21 ó 22, caracterizado porque la extensión perimétrica de una porción del hueco es mayor que la extensión perimétrica del elemento de mecha.

24. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la porción del hueco que tiene la extensión perimétrica mayor rodea el segundo extremo del elemento de mecha.

25. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la porción del hueco que tiene la mayor extensión perimétrica rodea el segundo extremo del elemento de mecha, de modo es proporcionado un espacio vacío alrededor de ésta.

26. El dispositivo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 25, caracterizado porque el elemento de mecha es un tapón de fibra.

27. El dispositivo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 25, caracterizado porque el elemento de mecha es de un material de poliolefina inerte.

28. El dispositivo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 18 a 25, caracterizado porque el aplicador es un gel.

29. El dispositivo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 18 a 28, caracterizado porque el aplicador es cilindrico.

30. El dispositivo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 18 a 29, caracterizado porque son proporcionados dos aplicadores, los aplicadores están separados uno del otro, de modo que un aplicador aplica un reactivo detector control y el segundo aplicador aplica un reactivo detector de prueba.

31. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque cada aplicador presenta una sección transversal diferente en el segundo extremo .

32. El dispositivo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 18 a 31, caracterizado porque el aplicador está saturado con el reactivo detector.

33. Un dispositivo indicador para producir un cambio de color visual correspondiente a una cantidad de reactivo detector que está enlazado al colesterol en la piel, caracterizado porque comprende una superficie indicadora proporcionada por un cuerpo del dispositivo, de modo que la superficie indicadora puede hacer contacto con un área seleccionada de la piel, el dispositivo indicador contiene una cantidad suficiente de una solución que reacciona cuando hace contacto con un reactivo detector que está enlazado al colesterol en el área seleccionada de la piel, para producir un cambio de color visual al menos a una porción de la superficie indicadora.

34. El dispositivo indicador de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque la solución es una solución de sustrato que reacciona con un componente reportero del reactivo detector.

35. El dispositivo indicador de conformidad con las reivindicaciones 33 ó 34, caracterizado porque la superficie indicadora comprende un material absorbente.

36. El dispositivo indicador de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque el material absorbente está saturado con la solución.

37. El dispositivo indicador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 35 a 36, caracterizado porque el material absorbente es una almohadilla.

38. El dispositivo indicador de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque la almohadilla está tejida.

39. El dispositivo indicador de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque la almohadilla es de construcción de hoja fibrosa prensada.

40. El dispositivo indicador de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque la almohadilla es construida de material hidrofílico.

41. El dispositivo indicador de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque la almohadilla es una hoja absorbente basada en celulosa.

42. El dispositivo indicador de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque la almohadilla está construida de un material de fibra de vidrio.

43. Un aparato para medir el colesterol en piel, caracterizado porque comprende: a) un cuerpo; b) al menos un aplicador retenido en un extremo del mismo por el cuerpo, y que tiene un segundo extremo para hacer contacto con un área seleccionada de la piel, el segundo extremo del aplicador transfiere al área seleccionada de la piel un reactivo detector; y c) una superficie indicadora proporcionada por el cuerpo, de modo que la superficie indicadora pueda hacer contacto con el área seleccionada de la piel, la superficie indicadora contiene una cantidad suficiente de una solución que reacciona cuando hace contacto con el reactivo detector que está enlazado al colesterol en el área seleccionada de la piel, para producir un cambio de color visual al menos a una porción de la superficie indicadora.

44. El aparato de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque el aplicador aplica el reactivo detector al área seleccionada de la piel, utilizando acción capilar.

45. El aparato de conformidad con las reivindicaciones 43 ó 44, caracterizado porque el aplicador incluye un elemento de mecha.

46. El aparato de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque el cuerpo incluye una superficie externa y al menos un hueco en ésta para recibir un extremo del elemento de mecha.

47. El aparato de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque el hueco es de una profundidad suficiente para recibir en ésta el elemento de mecha, de modo que el segundo extremo del elemento de mecha no se extiende más allá de la superficie externa del cuerpo.

48. El aparato de conformidad con las reivindicaciones 46 ó 47, caracterizado porque la extensión perimétrica de una porción del hueco es mayor que la extensión perimétrica del elemento de mecha.

49. El aparato de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque la porción del hueco que tiene la mayor extensión perimétrica rodea el segundo extremo del elemento de mecha.

50. El aparato de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque la porción del hueco que tiene la mayor extensión perimétrica rodea el segundo extremo del elemento de mecha de modo que es proporcionado un espacio vacío alrededor de ésta.

51. El aparato de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45 a 50, caracterizado porque el elemento de mecha es un tapón de fibra.

52. El aparato de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45 a 50, caracterizado porque el elemento de mecha es de material de poliolefina inerte.

53. El aparato de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 43 a 50, caracterizado porque el aplicador es un gel .

54. El aparato de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45 a 50, caracterizado porque el elemento de mecha es cilindrico.

55. El aparato de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 43 a 54, caracterizado porque son proporcionados dos aplicadores, los aplicadores están separados uno del otro, de modo que un aplicador aplica un reactivo detector control y el segundo aplicador aplica un reactivo detector de prueba.

56. El aparato de conformidad con la reivindicación 55, caracterizado porque cada aplicador presenta una sección transversal diferente en el segundo extremo.

57. El aparato de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 43 a 56, caracterizado porque el aplicador es saturado con el reactivo detector.

58. el aparato de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 43 a 47, caracterizado porque la solución es una solución de sustrato que reacciona con un componente reportero del reactivo detector.

59. El aparato de conformidad con las reivindicaciones 43 ó 58, caracterizado porque la superficie indicadora comprende un material absorbente .

60. El aparato de conformidad con la reivindicación 59, caracterizado porque el material absorbente está saturado con la solución.

61. El aparato de conformidad con las reivindicaciones 59 ó 60, caracterizado porque el material absorbente es una almohadilla.

62. El aparato de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque la almohadilla está tejida.

63. El aparato de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque la almohadilla es de una construcción de hoja fibrosa prensada.

64. El aparato de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque la almohadilla es construida de material hidrofílico.

65. El aparato de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque la almohadilla es una hoja absorbente basada en celulosa.

66. El aparato de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque la almohadilla está construida de material de fibra de vidrio.

67. El aparato de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 43 a 66, caracterizado porque el cuerpo presenta al menos un aplicador y la superficie indicadora sobre lados opuestos de la misma.

68. El aparato de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 43 a 67, caracterizado porque comprende además un medio absorbente, el medio absorbente es proporcionado sobre el cuerpo y está espaciado de al menos un aplicador y la superficie indicadora.

69. El aparato de conformidad con la reivindicación 68, caracterizado porque el medio absorbente está construido de material hidrofílico.

70. El aparato de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 67, 68 ó 69, caracterizado porque comprende además al menos un marcador sobre una superficie del cuerpo, que presenta al menos un aplicador, al menos un marcador está conformado para realizar una impresión dentro del área seleccionada de la piel adyacente al área de la piel a la que ha sido transferido el reactivo detector.

71. El aparato de conformidad con la reivindicación 70, caracterizado porque comprende además al menos uno de un segundo marcador sobre la superficie indicadora, al menos en el segundo marcador correspondiente en forma al menos a un marcador.

72. Un kit para medir el colesterol en piel, caracterizado porque comprende: a) una fuente del reactivo detector; b) un aplicador para aplicar el reactivo detector a un área seleccionada de la piel; c) una fuente de una solución que reacciona cuando hace contacto con el reactivo detector; y d) una superficie indicadora para recibir la solución, de modo que cuando la superficie indicadora hace contacto con el área seleccionada de la piel, la solución reacciona con el reactivo detector que es enlazado al colesterol en la piel para producir un cambio de color visual al menos a una porción de la superficie indicadora.

73. El kit de conformidad con la reivindicación 72, caracterizado porque el aplicador utiliza acción capilar para aplicar el reactivo detector al área seleccionada de la piel .

74. El kit de conformidad con las reivindicaciones 72 ó 73, caracterizado porque el aplicador incluye un elemento de mecha.

75. El kit de conformidad con la reivindicación 74, caracterizado porque el elemento de mecha es un tapón de fibra.

76. El kit de conformidad con la reivindicación 74, caracterizado porque el elemento de mecha es de material de poliolefina inerte.

77. El kit de conformidad con las reivindicaciones 72, 73 ó 74, caracterizado porque el aplicador es un gel.

78. El kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 72 a 77, caracterizado porque son proporcionados dos aplicadores, los aplicadores están separados uno del otro, de modo que un aplicador aplica un reactivo detector control y el segundo aplicador aplica un reactivo detector de prueba.

79. El kit de conformidad con la reivindicación 78, caracterizado porque cada aplicador presenta una sección transversal diferente en el segundo extremo.

80. El kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 72 a 79, caracterizado porque el aplicador es la fuente del reactivo detector.

81. El kit de conformidad con la reivindicación 80, caracterizado porque el aplicador está saturado con el reactivo detector.

82. El kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 72 a 81, caracterizado porque la solución es una solución de sustrato que reacciona con un componente reportero del reactivo detector.

83. El kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 72 a 82, caracterizado porque la superficie indicadora comprende un material absorbente .

84. El kit de conformidad con la reivindicación 83, caracterizado porque el material absorbente es la fuente de la solución.

85. El kit de conformidad con la reivindicación 84, caracterizado porque el material absorbente está saturado con la solución.

86. El kit de conformidad con las reivindicaciones 83, 84 u 85, caracterizado porque el material absorbente es una almohadilla.

87. El kit de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque la almohadilla está tejida.

88. El kit de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque la almohadilla es de construcción de hoja fibrosa prensada.

89. El kit de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque la almohadilla está construida de material hidrofílico.

90. El kit de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque la almohadilla es una hoja absorbente basada en celulosa.

91. El kit de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque la almohadilla está construida de material de fibra de vidrio.

92. El kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 72 a 91, caracterizado porque comprende además un medio absorbente .

93. El kit de conformidad con la reivindicación 92, caracterizado porque el medio absorbente está construido de material hidrofílico.

94. El kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 72 a 93, caracterizado porque el aplicador y la superficie indicadora son proporcionados sobre un aparato sobre lados opuestos del mismo.

95. El kit de conformidad con las reivindicaciones 92 ó 93, caracterizado porque el aplicador, la superficie indicadora, y el medio absorbente son proporcionados sobre un aparato.

96. El kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 72 a 95, caracterizado porque comprende además un espectrofotómetro de reflectancia para analizar el color producido.

97. El kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 72 a 95, caracterizado porque comprende además un comparador de color para analizar el color producido.

98. El kit de conformidad con la reivindicación 97, caracterizado porque el comparador de color es una serie graduada de bandas de color.

99. Un método para aplicar un reactivo detector a un área seleccionada de la piel para enlazarse al colesterol presente en la piel, caracterizado porque comprende: a) proporcionar al menos un aplicador que contiene una cantidad suficiente del reactivo detector, al menos un aplicador para transferir el reactivo detector a un área seleccionada de la piel utilizando acción capilar; y b) poner en contacto el área seleccionada de la piel con el aplicador para humedecer la piel con el reactivo detector.

100. El método de conformidad con la reivindicación 99, caracterizado porque el reactivo detector es aplicado al área seleccionada de la piel por al menos un elemento de mech .

101. El método de conformidad con la reivindicación 100, caracterizado porque el elemento de mecha está saturado con el reactivo detector.

102. El método de conformidad con las reivindicaciones 100 ó 101, caracterizado porque el elemento de mecha deforma una cantidad controlada para liberar el reactivo detector.

103. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 99 a 102, caracterizado porque el elemento de mecha es retenido por un aplicador adecuado.

104. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 99 a 103, caracterizado porque la aplicación del reactivo detector comprende la aplicación de un reactivo detector control y al menos un reactivo detector a dos áreas separadas de la piel dentro del área seleccionada de la piel .

105. El método de conformidad con la reivindicación 104, caracterizado porque el reactivo detector control está a una más alta concentración del reactivo detector de prueba.

106. Un método para producir un cambio de color visual correspondiente a una cantidad de reactivo detector enlazado al colesterol en la piel, para medir el colesterol en piel, el método está caracterizado porque comprende: a) aplicar una superficie indicadora a un área seleccionada de la piel, la superficie indicadora tiene una solución que reacciona con el reactivo detector cuando la superficie indicadora está en contacto con el área seleccionada de la piel, la reacción es para producir un cambio de color visual correspondiente a la cantidad de reactivo detector enlazado al colesterol en la piel; y b) el análisis del color producido sobre la superficie indicadora para obtener una medición del colesterol en piel.

107. El método de conformidad con la reivindicación 106, caracterizado porque la superficie indicadora incluye una solución sustrato que reacciona con un componente reportero dentro del reactivo detector.

108. El método de conformidad con las reivindicaciones 106 ó 107, caracterizado porque la superficie indicadora es una almohadilla de material absorbente saturada con una solución de sustrato, la solución de sustrato reacciona con un componente reportero dentro del reactivo detector.

109. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 106 a 108, caracterizado porque el color producido es analizado por un espectrofotómetro de reflectancia.

110. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 106 a 108, caracterizado porque el color producido es analizado utilizando un comparador de color.

111. El método de conformidad con la reivindicación 110, caracterizado porque el comparador de color es una serie graduada de bandas de color.