MX2007009200A - Inhibicion mediada por arni de objetivos oculares. - Google Patents

Inhibicion mediada por arni de objetivos oculares.

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Abstract

Se proporciona ARN de interferencia para inhibicion de la expresion de ARNm objetivo en hipertension ocular para disminuir la presion intraocular elevada en pacientes con glaucoma de angulo abierto o hipertension ocular. Los objetivos en hipertension ocular incluyen anhidrasa carbonica II, IV y XII; receptores adrenergicos (1 Y (2; acetilcolinesterasa; ATPasa de Na+/K+; y cotransportador de Na-K-2Cl. La hipertension ocular se trata al administrar los ARN de interferencia de la presente invencion.

Description

INHIBICIÓN MEDIADA POR ARNI DE OBJETIVOS OCULARES CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con el campo de composiciones de ARN de interferencia para la inhibición de la expresión de objetivos en hipertensión ocular en el glaucoma, en particular para glaucoma primario de ángulo abierto .
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El glaucoma es un grupo heterogéneo de neuropatías ópticas que comparten ciertas características clínicas. La pérdida de visión en el glaucoma se debe a la muerte selectiva de células del ganglio retiniano en la retina neural que se diagnostica clínicamente por cambios característicos en el campo visual, defectos en la capa de la fibra nerviosa, y una excavación progresiva de la cabeza del nervio óptico (ONH) . Uno de los principales factores de riesgo para el desarrollo del glaucoma es la presencia de hipertensión ocular (presión intraocular elevada, IOP) . Se necesita una presión íntraocular adecuada para mantener la conformación del ojo y para proporcionar un gradiente de presión para hacer posible el flujo de humor acuoso a la córnea y cristalino avasculares. Los niveles de IOP pueden también involucrarse en la patogénesis del glaucoma de tensión normal (NTG) , lo que se pone en evidencia por los pacientes que se benefician de las medicaciones que disminuyen la IOP. Una vez que los ajustes para el espesor corneal central se integran a las lecturas de IOP en pacientes con NTG, muchos de estos pacientes pueden encontrarse como hipertensivos oculares. La IOP elevada asociada con glaucoma se debe a la resistencia elevada al flujo externo de humor acuoso en la red trabecular (TM) , un tejido especializado pequeño ubicado en el ángulo iris-córnea de la cámara anterior ocular. Los cambios glaucomatosos para la TM incluyen una pérdida en células de la TM y la deposición y acumulación de restos extracelulares que incluyen material proteináceo tipo placa. Además, también existen cambios que se presentan en la ONH glaucomatosa . En los ojos glaucomatosos, existen cambios morfológicos y de movilidad en las células de la glía de la ONH. En respuesta a la IOP elevada y/o agresiones isquémicas transitorias, existe un cambio en la composición de la matriz extracelular de la ONH y alteraciones en las morfologías de la célula de la glía y del axón celular en el ganglio retiniano . Los glaucomas primarios resultan de disturbios en el flujo del fluido intraocular que tienen una base anatómica o fisiológica. Los glaucomas secundarios se presentan como un resultado de daño o trauma al ojo o de una enfermedad preexistente. El glaucoma primario de ángulo abierto (POAG), también conocido como glaucoma crónico o simple, representa el noventa por ciento de todos los glaucomas primarios. El POAG se caracteriza por la degeneración de la red trabecular^ lo que resulta en resistencia anormalmente alta al drenaje del fluido del ojo. Una consecuencia de tal resistencia es un incremento en la IOP que se requiere para conducir el fluido producido normalmente por el ojo a través de la resistencia incrementada . Las terapias antiglaucoma actuales incluyen disminuir la IOP por el uso de supresores o agentes de la formación de humor acuoso que intensifican el flujo externo uveoesclerótico mejorado, trabeculoplastía con láser, o trabeculectomía, que es una cirugía de filtración para mejorar el drenaje. Las estrategias antiglaucoma farmacéuticas han exhibido varios efectos colaterales indeseables. Por ejemplo, los mióticos tal como la pilocarpina pueden provocar nublamiento de la visión y otros efectos colaterales visuales negativos. Los inhibidores de la anhidrasa carbónica (los CAÍ) administrados de manera sistémica pueden p?ovocar también náusea, dispepsia, fatiga y acidosis metabólicá. Además, ciertos bloqueadores beta se han llegado a asociar de manera creciente con serios efectos colaterales pulmonares que se pueden atribuir a sus efectos en los receptores beta-2 en el tejido pulmonar. Los simpaticomiméticos provocan taquicardia, arritmia, e hipertensión. Tales efectos colaterales negativos pueden conducir a un cumplimiento disminuido por parte del paciente o la interrupción de la terapia. Además, la eficacia de las terapias actuales de disminución de la IOP es de duración relativamente corta, lo que requiere dosificación repetida durante cada día y, en algunos casos, la eficacia disminuye con el tiempo. En vista de la importancia de la hipertensión ocular en el glaucoma, y las insuficiencias de los métodos anteriores de tratamiento, sería deseable tener un método mejorado para tratar la hipertensión ocular, que pudiera dirigirse a las causas que subyacen de su progreso.
COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se dirige a los ARN de interferencia que silencian la expresión de ARNm objetivo en hipertensión ocular, lo que disminuye de esta manera la presión intraoculár en pacientes con glaucoma de ángulo abierto o hipertensión ocular. Los objetivos en hipertensión ocular incluyen anhidrasa carbónica II, IV, y XII; receptores adrenérgicos ßl y ß2; acetilcolinesterasa; ATPasa de Na+/K+; y cotransportador de Na-K-2C1. Los ARN de interferencia de la invención son útiles para tratar pacientes con glaucoma de ángulo abierto o hipertensión ocular.
Una modalidad de la presente invención proporciona un método para atenuar la expresión de un ARNm objetivo en hipertensión ocular tal como ARNm de anhidrasa carbónica II, IV, o XII; receptores adrenérgicos ßl o ß2; acetilcolinesterasa; ATPasa de Na+/K+; o cotransportador de Na-K-2C1 en un sujeto. El método comprende administrar al sujeto una composición que comprende una cantidad efectiva de ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y un portador farmacéuticamente aceptable. La administración es 'para el ojo del sujeto para atenuar la expresión de un objetivo en hipertensión ocular en un humano. En una modalidad de la invención, el ARN de interferencia comprende una hebra de nucleótidos sentido, una hebra de nucleótidos antisentido y una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos. Además, la hebra antisentido se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción de un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:l, SEC. DE IDENT. NO.:2, SEC.' DE IDENT. NO.:3, SEC. DE IDENT. NO.:4, SEC. DE IDENT. NO.-: 5, SEC. DE IDENT. NO.: 6, SEC. DE IDENT. NO.: 7, SEC. DE IDENT. NO.: 101, SEC. DE IDENT. NO.: 123, SEC. DE IDENT. NO.: 124,¡ SEC. DE IDENT. NO.: 125, SEC. DE IDENT. NO.:126, SEC. DE IDENT. NO.: 127, SEC. DE IDENT. NO.:128, SEC. DE IDENT. NO.: 129, SEC. DE IDENT. NO.: 130, SEC. DE IDENT. NO.:131, SEC. DE IDENT. NO.:132, SEC. DE IDENT. NO.:133, o SEC. DE IDENT. NO.:134 que son secuencias de ADNc sentido que codifican anhidrasa carbónica II y IV; receptores adrenérgicos ßl y ß2; variante E4-E5 de acetilcolinesterasa (ACHE) ; polipéptido a2 de la ATPasa de Na+/K+; cotransportador NKCC2 de Na-K-2Cl (SLC12A1), variante 1 de anhidrasa carbónica XII, variante E4-E6 de acetilcolinesterasa, variante 1 y variante 2 del polipéptido al de la ATPasa de Na+/K+, polipéptido a3 de la ATPasa de Na+/K+, variante 1 y variante 2 del polipéptido a4 de la ATPasa de Na+/K+, variante 1 y 2 del polipéptido ßl de la ATPasa de Na+/K+, polipéptido ß2 de la ATPasa de Na+/K+, polipéptido ß3 de la ATPasa de Na+/K+, cotransportador NKCC1 de Na-K-2C1 (SLC12A2), y variante 2 de la anhidrasa carbónica XII, respectivamente. La hebra antisentido tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:l, SEC. DE IDENT. NO.: 2, SEC. DE IDENT. NO,: 3, SEC. DE IDENT. NO.: 4, SEC. DE IDENT. NO.:5, SEC. DE IDENT. NO.:6, SEC. DE IDENT. NO . : 7 , SEC. DE IDENT. NO.:101, SEC. DE IDENT. NO.:123, SEC. DE IDENT. NO.: 124, SEC. DE IDENT . NO.: 125, SEC. DE IDENT. NO.: 126, SEC. DE IDENT. NO.: 127, SEC. DE IDENT. NO.: 128, SEC. DE IDENT. NO.: 129, SEC. DE TDENT . NO.: 130, SEC. DE IDENT. NO.: 131, SEC. DE IDENT. NO.: 132, SEC. DE IDENT. NO.: 133, o SEC. DE IDENT. NO.:134, respectivamente. La administración de tal composición atenúa la expresión de un ARNm objetivo en hipertensión ocular del sujeto. En una modalidad, el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica la anhidrasa carbónica II, IV o XII, y una hebra antisentido se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT.
N0.:1, SEC. DE IDENT. N0.:2, SEC. DE IDENT. NO.rlOl, o SEC.
DE IDENT. NO.: 134 y tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:l, SEC. DE IDENT. NO.: 2, SEC. DE IDENT. NO.rlOl, o SEC. DE IDENT. NO.:134, respectivamente . En otra modalidad, el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica un receptor adrenérgico ßl o ß2, y una hebra antisentido se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:3 o SEC. DE IDENT. NO . : y tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 3 o SEC. DE IDENT. NO.: , respectivamente . En una modalidad adicional, el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica una acetilcolinesterasa, y una hebra antisentido se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 5 o SEC. DE 'IDENT. NO.: 123 y tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 5 o SEC. DE IDENT. NO.:123, respectivamente. Aún en otra modalidad, el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica una subunidad de la ATPasa de Na+/K+, y una hebra antisentido se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 6, SEC. DE IDENT. NO.: 124, SEC. DE IDENT!' NO.:125, SEC. DE IDENT. NO.:12ß, SEC. DE IDENT. NO.:127, SEC. DE IDENT. NO.: 128, SEC. DE IDENT. NO.: 129, SEC. DE IDENT. NO.:130, SEC. DE IDENT . NO.:131, o SEC. DE IDENT. NO.:132 y tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación del1 ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:6, SEC. DE IDENT. NO.:124, SEC. DE IDENT. NO.:125, SEC. DE IDENT. NO.: 126, SEC. DE IDENT. NO.: 127, SEC. DE IDENT*. NO.:128, SEC. DE IDENT. NO.:129, SEC. DE IDENT. NO.:130, SEC.
DE IDENT. NO. : 131, ; o SEC. DE IDENT. NO.: 132, respectivamente. En una modalidad adicional, el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica un cotransportador de Na-K-2C1, y una hebra aritisentido se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO ., : 7 o SEC. DE IDENT. NO.: 133 y tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. N0.:7 o SEC. DE IDENT. NO.:133, respectivamente. En una modalidad de la invención, un ARN de interferencia se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. N0.:1 que comprende el nucleótido 232, 527, 721, 728, 809, 810, 855, 856, 921, 1139, 506, 547, 548, 740, 911, 1009, 1140, 1149, 1150, 1151, 1188, 1194, 1195, 1223, 1239, 1456, 1457, 1458, 100, 158, 166, 247, 286, 318, 322, 328,, 371, 412, 482, 504, 505, 541, 734, 772, 777, 814, 972, 998, 1232, 317, ó 401. En otra modalidad de la invención, un ARN de interferencia se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la . SEC. DE IDENT. NO.: 2 que comprende el nucleótido 213, 252, 258, 266, 399, 457, 463, 490, 595, 1064, 109, 112, 125, 126, 150, 261, 265, 280, 398, 453, 459, 462^ 467, 492, 534, 785, 801, 825, 827, 876, 1003, ó 1012. En una modalidad adicional de la invención, un ARN de interferencia se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 101 que comprende el nucleótido 191, 239, 274, 275, 341, 389, 412, 413, 423, 687, 689, 695, 710, 791, 792, 794, 983, 993, 994, 995, 691, 1039, 1568, 2326, 2332, 2425, 2433, 2844, 2845, 2880, 2884, 2891, 2954, 2955, 2956, 2957, 2964, 2965, 3006, 3007, 3012, ó 3026. En otra modalidad, un ARN de interferencia se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 134 que comprende el nucleótido 687, 1535, 2293, 2299, 2392, 2400, 2811, 2812, 2847, 2851, 2858, 2921, 2922, 2923, 2924, 2931, 2932, 2973, 2974, 2979, ó 2993. Otra modalidad de la invención proporciona un ARN de interferencia diseñado para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 3 que comprende el nucleótido 468, 523, 799, 1563, 1565, 1569, 1593, 1613, 1614, 1626, 310, 322, 726, 769, 772, 801, 802, 1501, 1576, 1577, 1579, 1580, 1581, 1586, 1590, 1592, 1594, 1615, 1616, 1632, 1633, ó 1654. Una modalidad adicional de la invención proporciona un ARN de interferencia diseñado para dirigirse a un ARNm que corresponde a la- SEC. DE IDENT. NO.: 4 que comprende el nucleótido 329, 375, 1031, 1046, 1149, 1163, 1371, 1401, 1426, 1880, 283, 607, 608, 609, 619, 623, 722, 857, 1037, 1091, 1115, 1124, ,1136, 1137, 1151, 1164, 1393, 1394, 1395, 1406, 1407, 1427, 1428, 1429, 1442, 1725, 1726, 1756, 1757, 1758, 1767, 1790, 1791, 1792, 1793, 1803, 1861, 1869, 1971, 1972, ó 1979. En otro método de la invención, un ARN de interferencia se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:123 que comprende el nucleótido 1875, 1890, 1891, 2011, 2012, 2133, ó 2134. Otra modalidad de la invención proporciona un ARN de interferencia diseñado para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:5 que comprende el nucleótido 366, 370, 384, 385, 525, 588, 768, 1045, 1046, 1061, 1090, 1232, 1314, 1316, 1460, 1461, 1462, 1528, 1607, 1705, 1713, 382, 393, 397, 622, 1131, 1459, 1530, 2251, 2885, 2886, 386, 1231, 1315, 2047, 2049, 2053, 2055, 2057, 2125, 2126, 2127, 2250, 2253, 2258, 2260, 2318, 2395, 2397, 2404, 2405, 2643, 2645, ó 2887. En una modalidad adicional, un ARN de interferencia se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 124 que comprende el nucleótido 2208, 2275, 2307, 2526, 2538, 2592, 2628, 2979, 2985, 3093, 3474, 3504, 3505, 3506, 3518, 343, 442, 700, 707, 811, 907, 1059, 1363, 1594, 1662, 1758, 1760, 1896, 2037, ó 2147. Aún en otra modalidad, un ARN de interferencia se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:125 que comprende el nucleótido 436, 441, 443, 552, 617, 701, 702, 832, 2204, 2291, ó 2495. Una modalidad adicional de la presente invención proporciona un ARN de interferencia diseñado para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 6 que comprende el nucleótido 471, 1990, 3080, 3797, 4037, 4093, 4225, 4323, 5213, 5285, 214, 467, 470, 472, 473, 632, 825, 946, 1693, 1767, 1768, 2157, 2263, 2589, 2590, 2765, 2988, 3094, 3144, 3145, 3344, 3345, 3418, 3666, 3828, 3850, 4040, 4041, 4061, 4882, 4894, 4900, 5040, 5114, 5115, 5128, 5129, 5253, 5296, 5375, 5384, ó 5385. En otra modalidad de la invención, un ARN de interferencia se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 126 que comprende el nucleótido 240, 272, 362, 1836, 1851, 2103, 2137, 2138, 2139, 2157, 2158, 2160, 2425, 2580, 2601, 2646, 2650, 2794, 2803, 3116, 3124, 3126, 3129, ó 3377. Aún en otra modalidad de la invención, un ARN de interferencia se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 127 que comprende el nucleótido 113, 612, 702, 833, 1101, 1732, 1733, 1836, 2070, 2071, 2143, 2328, 2475, 2861, 2862, 2952, 3203, 3281, 3377, 3379, 3470, 3471, 3554, 3614, 3615, 3616, 3617, 3625, 3626, 3642, 3646, 3647, 3653, 3655, 3797, 3801, 3803, 3809 ó 3810. En otra modalidad, un ARN de interferencia se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 128 que comprende el nucleótido 126, 251, 252, 253, 331, 427, 429, 520, 521, 530, 601, 602, 603, 604, 664,' 665, 666, 667, 675, 676, 692, 696, 697, 702, 703, 705, 707, 847, 851, 853, 859, ó 860. Aún en dtra modalidad, un ARN de interferencia se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:129 que comprende el nucleótido 1096, 1099, 1130, 1131, 1167, 1299, 1441, 1450, 1451, 1452, 1564, 1746, 1750, 1751, 1752, 1795, 203, 204, 214, 222, 224, 225, 226, 380, 525, 591, 612, 613, 615, 635, 636, 663, 664, 669, 699, 765, 790, 839, 840, 841, 900, 909, 933, ó 947. En otra modalidad, un ARN de interferencia se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 130 que comprende el nucleótido 1063, 1102, 1106, 1107, 1108, 1109, 1111, ó 1151. En otra modalidad, un ARN de interferencia se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:131 que comprende el nucleótido 653, 654, 771, 773, 841, 849, 853, 917, 918, 926, 927, 931, 981, 983, 984, 996, 998, 1022, 1023, 1160, 1214, 1355, 1356, 1381, 1394, 1425, 1474, 1550, 1620, 1707, 1740, 1753, 1825, 1956, 1965, 2598, 2599, 2608, 2828, 2829, 2888, 3012, ó 3251. En otra modalidad de la invención, un ARN de interferencia se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 132 que comprende el nucleótido 292, 434, 438, 457, 459, 488, 490, 498, 499, 592, 639, 723, 774, 775, 788, 857, 858, 910, 911, 930, 931, 932, 1009, 1010, 1023, 1024, 1111, 1146, 1147, 1220, 1246, 1321, 1325, 1326, 1327, ,1331, 1437, 1548, 1571, 1785, 1786, ó 1787. Otra modalidad de la presente invención proporciona un ARN de interferencia diseñado para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:7 que comprende el nucleótido 675, 974, 1373, 1780, 2102, 2151, 2315, 2542, 2609, 3197, 67, 71, 73, 353, 405, 864, 911, 912, 913, 1409, 1748, 1811, 1935, 1937, 1993, 2012, 2346, 2388, 2437, 2586, 3007, 3008, 3022, 3130, 3210, 3237, ó 3271. Otra modalidad de la presente invención proporciona un ARN de interferencia diseñado para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:133 que comprende el nucleótido 748, 749, 753, 1119, 1169, 1499, 1509, 1820, 2081, 2118, 2147, 2615, 2644, 2659, 2663, 2671, 2672, 2793, 2812, 2914, 2948, 3044, 3334, 3391, 3480, 3520, 3549, 3639, 3840, 3941, 3944, 4001, 4995, 4997, 5141, 5143, 5249, 5375, 5834, 5852, 5981, ó 6678. La presente invención además permite la administración de un segundo ARN de interferencia a un sujeto además de un primer ARN de interferencia. El método comprende administrar al sujeto un segundo ARN de interferencia que tiene una longitud- de 19 a 49 nucleótidos y que comprende una hebra de nucleótidos sentido, una hebra de nucleótidos antisentido, y una región de complementariedad por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos; en donde la hebra antisentído del segundo ARN de interferencia se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una segunda porción del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rl, SEC. DE IDENT. NO.:2, SEC. DE IDENT. NO.:3, SEC. DE IDENT. NO . : 4 , SEC. DE IDENT. NO.: 5, SEC. DE IDENT. NO.r6, SEC. DE IDENT.
NO.:7, SEC. DE IDENT. NO.rlOl, SEC. DE IDENT. NO.:123, SEC.
DE IDENT. NO.: 124,, SEC. DE IDENT. NO.: 125, SEC. DE IDENT.
NO.:126, SEC. DE IDENT. NO.:127, SEC. DE IDENT. NO.:128, SEC. DE IDENT. NO.: 129,' SEC. DE IDENT. NO.: 130, SEC. DE IDENT.
NO.:131, SEC. DE IDENT . NO.:132, SEC. DE IDENT. NO.:133, o SEC. DE IDENT. NO.: 134, y la hebra antisentido tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la segunda porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rl, SEC. DE IDENT. NO . : 2 , SEC. DE IDENT. NO.: 3, SEC. DE IDENT. NO . : 4 , SEC. DE IDENT. NO . : 5 , SEC. DE IDENT.
NO.: 6, SEC. DE IDENT. NO . : 7 , SEC. DE IDENT. NO.rlOl, SEC. DE IDENT. NO.: 123, SEC. DE IDENT. NO.: 124, SEC. DE IDENT. NO.:125, SEC. DE IDENT. NO.:126, SEC. DE IDENT. NO.:127, SEC.
DE IDENT. NO.: 128, SEC. DE IDENT. NO.: 129, SEC. DE IDENT.
NO.:130, SEC. DE IDENT. NO.:131, SEC. DE IDENT. NO.:132, SEC.
DE IDENT. NO.:133, o SEC. DE IDENT. NO.:134, respectivamente.
El segundo ARN de interferencia puede dirigirse al mismo ARNm como el primer ARN de interferencia, o puede dirigirse a un ARNm diferente. Además, un tercer, cuarto o quinto, etc., ARN de interferencia p,uede administrarse en una manera similar. Una modalidad adicional de la invención es un método para tratar la hipertensión ocular en un sujeto en necesidad del mismo. El método comprende administrar al ojo del sujeto una composición que comprende una cantidad efectiva de ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y un portador farmacéuticamente aceptable, el ARN de interferencia comprende una hebra de nucleótidos sentido, una hebra de nucleótidos antisentido, y una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos. La hebra antisentido se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rl, SEC. DE IDENT. N0.:2, SEC. DE IDENT. NO.: 3, SEC. DE IDENT. NO . : 4 , SEC. DE IDENT. NO.: 5, SEC. DE IDENT. NO.: 6, SEC. DE IDENT. NO . : 7 , SEC. DE IDENT. NO.: 101, SEC. DE IDENT. NO.: 123, SEC. DE IDENT. NO.:124, SEC. DE IDENT. NO.rl25, SEC. DE IDENT. NO.:126, SEC. DE IDENT. NO.:127, SEC. DE IDENT. NO.:128, SEC. DE IDENT. NO.: 129, SEC. DE IDENT. NO.: 130, SEC. DE IDENT. NO.: 131, SEC. DE IDENT. NO.: 132,' SEC. DE IDENT. NO.: 133, o SEC. DE IDENT. NO.: 134 y tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rl, SEC. DE IDENT. NO.r2, SEC. DE IDENT. NO.:3, SEC. DE IDENT. NO . : 4 , SEC. DE IDENT. NO. 5, SEC. DE IDENT!. NO.r6, SEC. DE IDENT. NO.r7, SEC. DE IDENT. NO.rlOl, SEC. DÉ IDENT. NO.:123, SEC. DE IDENT. NO.:124, SEC. DE IDENT. NO.:125, SEC. DE IDENT. NO.:126, SEC. DE IDENT. NO.:127, SEC. DE IDENT. NO.:128, SEC. DE IDENT. NO.:129, SEC. DE IDENT.
NO.:130, SEC. DE IDÉNT. N0.:131, SEC. DE IDENT. NO.:132, SEC. DE IDENT. NO.: 133, o SEC. DE IDENT. NO.: 134, respectivamente.' La hipertensión ocular se trata por consiguiente. Otra modalidad de la invención es un método para atenuar la expresión de un ARNm objetivo en hipertensión ocular en un sujeto que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una cantidad efectiva de ARN de interferencia de hebra sencilla que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y un portador farmacéuticamente aceptable. Para atenuar la expresión de un objetivo en hipertensión ocular, el ARN de interferencia de hebra sencilla se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción del ARNm que corresponde a los identificadores de secuencia y posiciones de nucleótidos citados en lo anterior para las hebras antisentido. Otra modalidad de la invención es un método para atenuar la expresión de un ARNm objetivo en hipertensión ocular en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una cantidad efectiva de ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y un portador farmacéuticamente aceptable, donde el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad ' de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.:8, SEC. DE IDENT. NO.: 14- SEC. DE IDENT. NO.: 100, SEC. DE IDENT. NO.: 102 - SEC. DE IDENT. NO.: 122, SEC. DE IDENT. NO.: 135- SEC. DE IDENT. NO.:717, SEC. DE IDENT. NO.:720, y SEC. DE IDENT. NO.: 21, como sigue. Cuando el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica el ARNm de la anhidrasa carbónica, el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.:8, SEC. DE IDENT. NO.:14 - SEC. DE IDENT. NO.:32, SEC. DE IDENT. NO.:83 - SEC. DE IDENT. NO.: 100, SEC. DE IDENT. NO.: 102- SEC. DE IDENT. NO.: 122, SEC. DE IDENT. NO.: 135- SEC. DE IDENT.
NO.:219, SEC. DE IDENT. NO.:720, y SEC. DE IDENT. NO.:721. Cuando el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica un ARNm - del receptor adrenérgico ß, el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad [ de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.:33- SEC. DE IDENT. NO.:52, y SEC. DE IDENT. NO.:220- SEC. DE IDENT. NO.:282.
Cuando el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica el ARNm de la ACHE, el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.r'53- SEC. DE IDENT. NO.: 62 y SEC. DE IDENT. NO. :283-333. Cuando el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica el ARNm de ATP1A1, el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.:334- SEC. DE IDENT. NO.:374. Cuando él ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica el ARNm dé ATP1A2, el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.:63- SEC. DE IDENT. NO.:72 y SEC. DE IDENT. NO.:375- SEC. DE IDENT. NO. :416. Cuando el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica el ARNm de ATP1A3, el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.:417- SEC. DE IDENT. NO.:440. Cuando el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica el ARNm de ATP1A4, el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.:441- SEC. DE IDENT. NO.:511. Cuando el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica el ARNm de ATP1B1, el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.:512- SEC. DE IDENT. NO.:563. Cuando el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica el ARNm de ATP1B2, el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT.
NO.:564- SEC. DE IDENT. NO.:606. Cuando el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica el ARNm de ATP1B3, el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.:607- SEC. DE IDENT. NO.:648. Cuando el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica el ARNm de SLC12A1, el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.:73- SEC. DE IDENT. NO.:82 y SEC. DE IDENT. NO.:649- SEC. DE IDENT. NO.:675. Cuando el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica el ARNm1 de SLC12A2, el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.: 676- SEC. DE IDENT. NO.:717. En una modalidad adicional de la presente invención, la región de nucleótidos contiguos es una región de por lo menos 14 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 85% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 85% de identidad de secuencia con, los 14 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de la secuencia del identificador de secuencia. Aún en otra modalidad de la invención, la región de nucleótidos contiguos es una región de por lo menos 15, 16, 17 ó 18 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 80% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 80% de identidad de secuencia con, los 15, 16, 17 ó 18 penúltimos nucleótidos, respectivamente, del extremo 3' de la secuencia del identificador dé secuencia. Una composición que comprende ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y que tiene una secuencia de nucleótidos de cualquiera de las SEC. DE IDENT. NOS.: 8, SEC. DE IDENT. NO.:14- SEC. DE IDENT. NO.rlOO, SEC. DE IDENT. NO.: 102- SEC. DE IDENT. NO.: 122, SEC. DE IDENT. NO.:135- SEC. DE IDENT. NO.:717, SEC. DE IDENT. NO.:720, y SEC. DE IDENT. NO.:721, o un complemento de las mismas, y un portador farmacéuticamente aceptable es una modalidad de la presente invención. En una modalidad, se aisla el ARN de interferencia. El término "aislado" significa que el ARN de interferencia está libre de su medio ambiente natural total. Otra modalidad de la invención es un método para tratar la hipertensión ocular en un sujeto en necesidad del mismo, el método comprende administrar a un ojo del sujeto una composición que comprende una cantidad efectiva de ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y un portador farmacéuticamente aceptable, el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.: 8, SEC. DE IDENT. NO.:14- SEC. - DE IDENT. NO.rlOO, SEC. DE IDENT. NO.rl02 - SEC. DE IDENT. NO.rl22, SEC. DE IDENT. NO.:135- SEC. DE IDENT. NO.: 717, SEC. DE IDENT. NO.: 720, y SEC. DE IDENT. NO.: 721, en donde la hipertensión ocular se trata por consiguiente . Un método para atenuar la expresión de una primera variante de ARNm objetivo en hipertensión ocular sin atenuar la expresión de uña segunda variante de ARNm objetivo en hipertensión ocular en un sujeto es una modalidad adicional de la invención. El método comprende administrar al sujeto una composición que comprende una cantidad efectiva de ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y un portador farmacéuticamente aceptable, el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de la primera variante, en donde la expresión de la primera variante de ARNm se atenúa sin atenuar la expresión de la segunda variante de ARNm, y en donde la primera variante del ARNm objetivo es la SEC. DE IDENT. NO.rlOl, SEC. DE IDENT. N0.r5, SEC. DE IDENT. NO.rl24, SEC. DE IDENT. NO. r 127, o SEC. DE IDENT. NO.: 129, y la segunda variante del ARNm objetivo es la SEC. DE IDENT. NO.: 134, SEC. DE IDENT. NO.: 123, SEC. DE IDENT. NO.: 125, SEC. DE IDENT. NO.: 128, o SEC. DE IDENT. NO.: 130, respectivamente. En una modalidad adicional del método citado en lo anterior, la primera variante del ARNm objetivo es la SEC. DE IDENT. NO.: 134, SEC. DE IDENT. NO.: 123, SEC. DE IDENT. NO.:125, SEC. DE IDENT. NO.:128, o SEC. DE IDENT. NO.:130, y la segunda variante del ARNm objetivo es la SEC. DE IDENT. NO.rlOl, SEC. DE IDENT. NO.:5, SEC. DE IDENT. NO.:124, SEC.
DE IDENT. NO.:127, o SEC. DE IDENT. NO.:129, respectivamente. El uso de cualquiera de las modalidades como se describen en la presente en la preparación de un medicamento para atenuar la expresión de un ARNm de hipertensión ocular también es una modalidad de la presente invención.
BREVE DESCRIPCIÓN DEL DIBUJO La FIGURA 1 proporciona una transferencia western, sondeado con anticuerpos contra CA2 y actina, de células HeLa transfectadas con los siARN #1, #3, #4 y #5 de CA2; un siARN control no dirigido; y un control de tampón (siARN) . Los siARN estuvieron a una concentración de 100 nM o 1 nM. Las flechas indican las posiciones de las bandas de la proteína CA2 de ~30- Da y de la proteína actina de 42-kDa.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La interferencia del ARN (iARN) es un proceso por el cual el ARN de doble hebra (dsARN) se utiliza para silenciar la expresión génica. Aunque no es deseable limitarse por la teoría, la iARN comienza con la escisión de dsARN más largos en pequeños ARN de interferencia (siARN) por una enzima tipo RNasalII, dicer. Los siARN son dsARN que por lo común son de aproximadamente 19 a 28 nucleótidos, o 20 a 25 nucleótidos, o 21 a 22 nucleótidos de longitud y con frecuencia contienen salientes 3' de 2 nucleótidos, y extremos terminales fosfato 5'e hidroxilo 3'. Una hebra del siARN se incorpora en un complejo de ribonucleoproteína conocido como el complejo de silenciamiento inducido por ARN (RISC) . El RISC utiliza esta hebra de siARN para identificar moléculas de ARNm que son complementarias por lo menos parcialmente a la hebra de siARN incorporada, y entonces escinde estos ARNm objetivo o inhibe su traducción. Por lo tanto, la hebra ¡de siARN que se incorpora en el RISC se conoce como la hebra guía o la hebra antisentido. La otra hebra del siARN, conocida como la hebra pasajera o la hebra sentido, se elimina del siARN y es homologa por lo menos parcialmente al ARNm objetivo. Aquellos con experiencia en la técnica reconocerán que, en principio, cada hebra de un siARN puede incorporarse en el RISC y funcionar como una hebra guía. Sin embargo, el diseño del siARN (por ejemplo, estabilidad disminuida del duplo de siARN en el extremo 5' de la hebra antisentido) puede favorecer la incorporación de la hebra antisentido en el RISC. La escisión mediada por el RISC de los ARNm que tienen una secuencia complementaria por lo menos parcialmente a la hebra guía, conduce a una disminución en el nivel de estado de equilibrio de ese ARNm y de la proteína correspondiente codificada por este ARNm. Alternativamente, el RISC puede también disminuir la expresión de la proteína correspondiente mediante represión de la traducción, sin escisión del ARNm objetivo. Otras moléculas de ARN y moléculas de tipo ARN pueden también interactuar con el RISC y silenciar la expresión génica. Ejemplos de otras moléculas de ARN que pueden- interactuar con el RISC incluyen ARN de horquilla cortos (shARN) , siARN de hebra sencilla, microARN (miARN) , y duplos de 27 monómeros sustratos de dicer. El término "siARN" como se utiliza en la presente se refiere a un ARN de interferencia de doble hebra, a menos que se haga notar de otra manera. Ejemplos de moléculas tipo ARN que pueden interactuar con el RISC incluyen moléculas de ARN que contienen uno o más nucleótidos químicamente modificados, uno o más desoxirribonucleótidos, uno o más desoxirribonucleótidos, y/o uno o más enlaces no fosfodiéster. Para propósitos de la presente discusión, todas las moléculas de ARN o de tipo ARN que pueden interactuar con el RISC y participar en los cambios mediados por el RISC en la expresión génica, serán referidas como "ARN de interferencia". Los siARN, shARN, miARN, y duplos de 27 monómeros sustratos de dicer son, por lo tanto, subgrupos de "ARN de interferencia". El ARN de interferencia de las modalidades de la invención parece actuar de manera catalítica para la escisión del ARNm objetivo, es decir, el ARN de interferencia es capaz de efectuar la inhibición del ARNm objetivo en cantidades subestequiométricas . En comparación con las terapias antisentido, se requiere significativamente menos ARN dé interferencia para1 proporcionar un efecto terapéutico bajo tales condiciones de escisión. La presente invención se relaciona con el uso de ARN de interferencia para inhibir la expresión de ARNm objetivo en hipertensión ocular, lo que disminuye de esta manera la presión intraocular en pacientes con glaucoma de ángulo abierto o hipertensión ocular. Los objetivos en hipertensión ocular incluyen anhidrasa carbónica II, IV y XII; receptores adrenérgicos ßl y ß2; acetilcolinesterasa; subunidades de ATPasa de Na+/K+; y cotransportador de Na-K-2C1. De acuerdo con la presente invención, los ARN de interferencia proporcionados de manera exógena o expresados de manera endógena efectúan el silenciamiento del ARNm objetivo en hipertensión ocular en el o los tejidos oculares. La anhidrasa carbónica cataliza la hidratación reversible del dióxido de carbono y parece jugar un papel en la regulación de la formación del humor acuoso. Los inhibidores de la anhidrasa carbónica disminuyen la presión en el ojo al reducir la cantidad de fluido producido. Los inhibidores de la anhidrasa carbónica se encuentran disponibles como gotas oculares (dorzolamida, brinzolamida) o tabletas/cápsulas (acetazolamida, metazolamida) . Las gotas oculares se asocian con menos efectos colaterales que las tabletas o cápsulas, y se toleran mejor por muchos pacientes. AZOPT® (brinzolamida), suspensión oftálmica al 1%, es un inhibidor tópico de la anhidrasa carbónica (Alcon Laboratories, Inc., Fort Worth, TX) . Los bloqueadores ß oftálmicos disminuyen la presión en el ojo al reducir la cantidad de fluido producido en el ojo. Estos fármacos se dividen en dos clasesr los bloqueadores beta no selectivos (timolol, levobunolol, metipranolol, carteolol) y los bloqueadores selectivos ß-1 (betaxolol) . La dosificación usual es una gota en cada ojo una o dos veces al día, dependiendo del fármaco utilizado. Un ejemplo de este producto es BETOPTIC S® (betaxolol HCl), suspensión oftálmica al 0.25% (Alcon Laboratories, Inc., Fort Worth, TX) . Los inhibidores de la acetilcolinesterasa conservan la acetilcolina en el sitio receptor al bloquear la enzima responsable de su hidrólisis, la acetilcolinesterasa. La acetilcolina se acumula en el receptor, lo que produce una reducción en la presión infraocular por contracción del músculo ciliar, similar a la acción de los agonistas colinérgicos de acción directa. Los inhibidores de la ATPasa de Na+/K+ tales como ouabaina, donadores de óxido nítrico y endotelina disminuyen la actividad de la ATPasa de Na+/K+, la fuerza de conducción para la formación de humor acuoso por el proceso ciliar. Los inhibidores del transporte de cloruro, tal como el ácido etacrínico, alteran el volumen celular de la red trabecular para incrementar la facilidad del flujo externo. Las secuencias de ácidos nucleicos citadas en la presente se escriben en una dirección 5' a 3' a menos que se indique de otra manera. El término "ácido nucleico", como se utiliza en la presente, se refiere a ADN o ARN o a una forma modificada de los mismos que comprende las bases purina o pirimidina presentes en el ADN (adenina "A", citosina "C", guanina "G", timiria "T") o en el ARN (adenina "A", citosina "C", guanina "G", uracilo "U") . Los ARN de interferencia proporcionados en la presente pueden comprender bases "T", particularmente en los extremos 3' , aún cuando las bases "T" no se presentan de manera natural en el ARN. "Ácidos nucleicos" incluye los términos "oligonucleótido" y "polinucleótido" y puede referirse a una molécula de hebra sencilla o a una molécula de doble hebra. Una molécula de doble hebra se forma por apareamiento de bases Watson-Crick entre bases A y T', bases C y G, y entre bases A y U. Las hebras de una molécula de doble hebra pueden tener complementariedad parcial, substancial o completa entre sí y formarán un híbrido dual, cuya fuerza de enlace es dependiente de la naturaleza y grado de complementariedad de la secuencia de bases. Una secuencia de ARNm se deduce fácilmente a partir de la secuencia de la secuencia del ADN correspondiente. Por ejemplo, la SEC. DE IDENT. NO.rl proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm para la anhidrasa carbónica II. La secuencia del ARNm es idéntica a la secuencia de la hebra sentido del ADN con las bases "T" reemplazadas con las bases "U". Por lo tanto, la secuencia del ARNm de la anhidrasa carbónica II se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.rl, la secuencia del ARNm de la anhidrasa carbónica IV se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.:2, la secuencia del ARNm del receptor adrenérgico ßl se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. N0.:3, la secuencia del ARNm del receptor adrenérgico ß2 se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. N0.r4, la secuencia del ARNm de la variante E4-E5 de edición de la acetilcolinesterasa se conoce de la SEC. DE IDENT. NO.:5, la secuencia del ARNm de la ATPasa a2 de Na+/K+ se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.: 6, la secuencia del ARNm del cotransportador Al de Na-K-2C1 se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.: 7, la secuencia del ARNm de la anhidrasa carbónica XII, variante 1 se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.: 101, la secuencia del ARNm de la variante E4-E6 de edición de la acetilcolinesterasa se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.: 123, la secuencia del ARNm de la ATPasa al de Na+/K+, variante 1, se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.: 124, la secuencia del ARNm de la ATPasa al de Na+/K+, variante 2, se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.:125, la secuencia del ARNm de la ATPasa a3 de Na+/K+ se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.: 126, la secuencia del ARNm de la ATPasa a4 de Na+/K+, variante 1, se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.': 127, la secuencia del ARNm de la ATPasa a4 de Na+/K+, variant 2, se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.: 128, la secuencia del ARNm de la ATPasa ßl de Na+/K+, variante 1, se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.:129, la secuencia del ARNm de la ATPasa ßl de Na+/K+, variante 2, se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.:130, la secuencia del ARNm de la ATPasa ß2 de Na+/K+, se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. N0.:131, la secuencia del ARNm de la ATPasa ß3 de Na+/K+ se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.:132, la secuencia del ARNm del cotransportador A2 de Na-K-2C1 se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.:133, y la secuencia del ARNm de la anhidrasa carbónica XII, variante 2, se conoce a partir de la SEC. DE IDENT. NO.:134. ARNm de las anhidrasas carbónicas II, IV, y XII (CA2 , CA4 , y CA12)' : Las anhidrasas carbónicas (CA) II, IV y XII son miembros de una gran familia de metaloenzimas de zinc que catalizan la hidratación reversible del dióxido de carbono como se describe por la base de datos del GenBank del Centro Nacional para Información en Biotecnología en ncbi.nlm.nih.gov. Las anhidrasas carbónicas se involucran en procesos fisiológicos cruciales tales como respiración y transporte de C02/bicarbonato entre los tejidos metabólicos y los pulmones, homeostasis de pH y C02, secreción de electrolitos en una variedad de tejidos y órganos, reacciones biosintéticas (tales como gluconeogénesis, lipogénesis y ureagénesis ) , resorción ósea, calcificación y tumorigenicidad. Se han identificado catorce diferentes isoenzimas de la anhidrasa1 carbónica con diferentes ubicaciones subcelulares y distribuciones en tejidos. La anhidrasa carbónica II es u'na isoenzima citosólica, mientras que las anhidrasas carbónicas IV y XII se unen a membranas. Se han identificado dos variantes del transcrito que codifican diferentes isoformas para el gen CA-XII, la variante 1 codifica la isoforma más larga mientras que la variante 2 carece de uno de los exones codificantes internos en comparación con la variante 1 del transcrito, con lo que se pierde por consiguiente un segmento de 11 aminoácidos en comparación con la isoforma 1. Los inhibidores sistémicos de la anhidrasa carbónica (CAÍ) son útiles en la reducción de la presión intraocular (IOP) elevada que es característica del glaucoma. La inhibición de las isoenzimas presentes en el proceso ciliar (las isoenzimas CA II y CA IV susceptibles a sulfonamida) reduce la velocidad de secreción de bicarbonato y humor acuoso, lo que conduce a una disminución del 25-30% en la IOP. Sin embargo, la inhibición de varias isoenzimas de CA presentes en los tejidos extraoculares conduce a efectos colaterales que incluyen entumecimiento y hormigueo de extremidades, sabor metálico, depresión, fatiga, malestar, pérdida de peso,' apetito sexual disminuido, irritación gastrointestinal, , acidosis metabólica, cálculos renales y miopía transitoria. La base, de datos del GenBank proporciona lá secuencia del ADN ,para la CA2 como no. de acceso NM_000067, proporcionada en ;el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.rl. La- SEC. DE IDENT. NO.rl proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica la CAII (con la excepción de las bases "T" por las bases "U"). La secuencia codificante para CAII es de los nucleótidos 66-848. Los equivalentes de la secuencia del ARNm de CA2 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, isoenzimas o un análogo de los mismos. Un análogo es un ARNm de CA2 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.rl (es decir, un ortólogo). Las secuencias de ácidos nucleicos de CA2 relacionadas con la SEC. DE IDENT. NO.rl incluyen a aquellas que tienen los números de acceso del GenBank M77181, X03251, BC011949, BC035424, CR536526, CR541875, J03037, M36532, S69526, y Y00339. La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para CA4 como no. de acceso NM_000717, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.:2. La SEC. DE IDENT. NO. 2 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica la CAIV (con la excepción de las bases "T" por las bases "U"). La secuencia codificante para CAIV es de los nucleótidos 47-985. Los equivalentes de la secuencia del ARNm de CA4 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, isoenzimas o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de CA4 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.:2 (es decir, un ortólogo). Las secuencias de ácidos nucleicos de CA4 relacionadas con la SEC. DE IDENT. N0.r2 incluyen a aquellas que tienen los números de acceso del GenBank L10955, BC057792, BC069649, BC074768, CR541766 y M83670. La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN -para CAÍ2, variante 1, como no. de acceso NM_001218, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.rlOl. La SEC. DE IDENT. NO.rlOl proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica la CAXII, variante 1 (con la excepción de las bases "T" por las bases "U") . La secuencia codificante para CAXII, variante 1, es de los nucleótidos 157-1221. Los equivalentes de la secuencia del ARNm de CA12, variante 1 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, isoenzimas o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de CA12 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.rlOl (es decir, un ortólogo) . La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para CA12, variante 2, como no. de acceso NM_206925, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.:134. La SEC. DE IDENT. NO.rl34 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica la CAXII, variante 2 (con la excepción de las bases "T" por las bases "U"). La secuencia codificante para CAXII, variante 2, es de los nucleótidos 157-1188. La variante 2 carece de un exón codificante interno en comparación con la variante 1. Los equivalentes de la secuencia de ARNm de CA12, variante 2 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, isoenzimas o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de CA12 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.rl34 (es decir, un ortólogo) . ARNm de los receptores ßl y ß2 adrenérgicos (ADRB1 y ADRB2) : Los receptores adrenérgicos (subtipos al, a2, ßl y ß2) son una familia prototípica de receptores acoplados a proteínas G que median los efectos fisiológicos de la hormona epinefrina y el neurotransmisor norepinefrina como se describe por la base de datos del GenBank del Centro Nacional para Información en Biotecnología en ncbi.nlm.nih.gov. La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para ADRB1 como no. de acceso NM_000684, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.: 3. La SEC. DE IDENT. NO . r 3 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica el receptor adrenérgico ßl (con la excepción de las bases "T" por las bases "U"). La secuencia codificante para el receptor adrenérgico ßl es de los nucleótidos 87- 1520. Los equivalentes de la secuencia de ARNm de ADRB1 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de ADRBl de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.:3 (es decir, un ortólogo). Las secuencias de ácidos nucleicos de ADRB1 relacionadas con la SEC. DE IDENT. NO . : 3 incluyen a aquellas que tienen los números de acceso del GenBank AF169006,. AF169007, AY567837, y J03019. La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para ADRB2 como no. de acceso NM_000024, proporcionada en lo siguiente como SEC. DE IDENT. NO.:4. La SEC. DE IDENT. NO.:4 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica el receptor adrenérgico ß2 (con la excepción de las bases "T" por las bases "U")'. La secuencia codificante para el receptor adrenérgico ß2 es de los nucleótidos 220-1461. Los equivalentes de la secuencia del ARNm de ADRB2 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de ADRB2 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.:4 (es decir, un ortólogo). Las secuencias de ácidos nucleicos de ADRB2 relacionadas con la SEC. DE IDENT. NO.:4 incluyen a aquellas que tienen los números de acceso del GenBank AF022953, AF022954, AF022955, AF022956, AF169225, AF202305, AF203386, AY011291, J02960, Y00106, AY136741, BC012481, BC063486, BC073856, M15169 y X04827. Varian tes E4-E6 y E4-E5 de edición del ARNm de acetilcolinesterasa (ACHE) : Como se describe por la base de datos del GenBank del Centro Nacional para Información en Biotecnología en ncbi.nlm.nih.gov, la acetilcolinesterasa hidroliza el neurotransmisor acetilcolina en las placas neuromusculares y las sinapsis colinérgicas cerebrales, y termina de esta manera con la transmisión de la señal. También se ha encontrado en membranas de eritrocitos, donde constituye el antígeno Yt de grupo sanguíneo. La acetilcolinesterasa se presenta en múltiples formas moleculares que poseen propiedades catalíticas similares, pero difieren en sü ensamble oligomérico y modo de unión a la célula en la superficie celular. Se codifica por el único gen ACHE, y la diversidad estructural en los productos génicos surge de la edición alternativa del ARNm, y de las asociaciones postraduccionales de subunidades catalíticas y estructurales. La -forma principal de acetilcolinesterasa que se encuentra en el cerebro, músculo y otros tejidos es la especie hidrofílica, que forma oligómeros con enlace disulfuro con colágeno o subunidades estructurales que contienen lípidos. La otra, la forma editada de manera alternativa, expresada de manera primaria en los tejidos eritroides, difiere en el extremo C-terminal, y contiene un péptido hidrofóbico escindible con un sitio de anclaje de GPl. Ésta se asocia con las membranas a través de las porciones de fosfoinosítido (Pl) agregadas de manera postraduccional . La variante E4-E6 de edición es el transcrito principal y resulta de la edición del exón 4 al exón 6. La variante E4-E5 de edición resulta de la edición alternativa del exón 4 al exón 5. La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para la variante E4-E5 de edición de la ACHE como no. de acceso NM_015831, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.:5. La SEC. DE IDENT. NO.:5 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica acetilcolinesterasa E4-E5 (con la excepción de las bases "T" por las bases "U") . La secuencia codificante para la acetilcolinesterasa E4-E5 es de los nucleótidos 95-1948. Equivalentes de la secuencia del ARNm de la ACHE citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, o' un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de la ACHE de1 otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.: 5 (es decir, un ortólogo). Las secuencias de ácidos nucleicos de la ACHE relacionadas con la SEC. DE IDENT. NO.: 5 incluyen aquellas que tienen los números de acceso del GenBank AC011895, AF002993, AF312032, AY750146, CH236956, L06484, L42812, S71129, AF334270, BC026315, BC036813, M55040 y NM_000665. La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para la variante E4-E6 de edición de la ACHE como no. de acceso NM_000665, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.:123. La SEC. DE IDENT. NO.:123 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica la variante E4-E6 de la acetilcolinesterasa (con la excepción de las bases "T" por las bases "U") . La secuencia codificante para la acetilcolinesterasa E4-E6 es de los nucleótidos 95-1939. Equivalentes de la secuencia del ARNm de la ACHE citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de la ACHE de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.: 123 (es decir, un ortólogo). Las secuencias de ácidos nucleicos de la ACHE relacionadas con la SEC. DE IDENT. NO.: 123 incluyen aquellas que tienen los números de acceso del GenBank NM_015831, AC011895, AF002993, AF312032, AY750146, CH236956, L06484, L42812, S71129, AF334270, BC026315, BC036813, y M55040. ARNm de la ATPasa a y ß de Na+/K" (ATP1 -A1 varian te 1 , Al varian te 2 , A2 , A3 , A4 varian te 1 , A4 varian te 2, Bl varian te 1 , Bl varian te 2, B2 y B3) : Como se describe por la base de datos del GenBank, las proteínas codificadas por estos genes pertenecen a la familia de las ATPasas tipo P de transporte de cationes, y a la subfamilia de las ATPasas de Na+/K+. La ATPasa de Na+/K+ es una proteína integral de membrana responsable para establecer y mantener los gradientes electroquímicos de iones de Na y K a través de la membrana plasmática. Estos gradientes son esenciales para la osmorregulación, para el transporte acoplado a sodio de una diversidad de moléculas orgánicas e inorgánicas, y para la excitabilidad eléctrica del nervio y músculo. Esta enzima se compone de dos subunidades, una subunidad catalítica grande (a o A) y una subunidad de glicoproteína más pequeña (ß o B) . La subunidad catalítica de la ATPasa de Na+/K+ se codifica por genes múltiples. La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para la variante 1 de ATP1A1 como no. de acceso NM_000701, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.: 124. La SEC. DE IDENT. NO.: 124 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica la variante 1 de la subunidad Al de lá ATPasa de Na+/K+ (con la excepción de las bases "T" por las bases "U"). La secuencia codificante para la variante 1 de la subunidad Al de la ATPasa de Na+/K+ es de los nucleótidos 299-3370.
Equivalentes de la secuencia del ARNm de la variante 1 de ATP1A1 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de la variante 1 de ATP1A1 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.: 124 (es decir, un ortólogo). La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para la variante 2 de ATP1A1 como no. de acceso NM_001001586, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.: 125. La SEC. DE IDENT. NO.: 125 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica la variante 2 de la subunidad Al de la ATPasa de Na+/K+ (con la excepción de las bases "T" por las bases "U"). La secuencia codificante para la variante 2 de la subunidad Al de la ATPasa de Na+/K+ es de los nucleótidos 299-2344. Equivalentes de la secuencia del ARNm de la variante 2 de ATP1A1 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de la variante 2 de ATP1A1 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.: 125 (es decir, un ortólogo). La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para ATP1A2 como no. de acceso NM_000702, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.: 6. La SEC. DE IDENT. NO.: 6 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica la subunidad A2 de la ATPasa de Na+/K+ (con la excepción de las bases "T" por las bases "U"). La secuencia codificante para la subunidad A2 de la ATPasa de Na+/K+ es de los nucleótidos 105-3167. Equivalentes de la secuencia del ARNm de ATP1A2 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de ATP1A2 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO . : 6 (es decir, un ortólogo). Las secuencias de ácidos nucleicos de ATP1A2 relacionadas con la SEC. DE IDENT. NO . :( 6 incluyen aquellas que tienen los números de acceso del GenBank J05096, M27578, AB018321, AK091617, AK124581, AK126573, AL831991, AL831997, BC013680, BC047533, BC052271, M16795, y¡ Y07494. La base • de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para ATP1A3 como no. de acceso NM_152296, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.: 126. Lá SEC. DE IDENT. NO.: 126 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica la subunidad A3 de la ATPasa de Na+/K+ (con la excepción de las bases "T" por las bases "U") . La secuencia codificante para la subunidad A3 de la ATPasa de Na+/K+ es de los nucleótidos 155'-3196.
Equivalentes de la secuencia del ARNm de ATP1A3 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de ATP1A3 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.:126 (es decir, un ortólogo). La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para la variante 1 de ATP1A4 como no. de acceso NM_144699, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.: 127. La SEC. DE IDENT. NO.: 127 proporciona la sepuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica la variante 1 de la subunidad A4 de la ATPasa de Na+/K+ (con la excepción de las bases "T" por las bases "U"). La secuencia codificante para la variante 1 de la subunidad A4 de la ATPasa de Na+/K+ es de los nucleótidos 469-3558. Equivalentes de la secuencia del ARNm de la variante 1 de ATP1A4 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de la variante 1 de ATP1A4 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.: 127 (es decir, un ortólogo). La basé de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN1 para la variante 2 de ATP1A4 como no. de acceso NM_001001734, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.:128. La SEC. DE IDENT.' NO.: 128 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica variante 2 de la subunidad A4 de la- ATPasa de Na+/K+ (con la excepción de las bases "T" por las bases "U"). La secuencia codificante para la variante 2 de la subunidad A4 de la ATPasa de Na+/K+ es de los nucleótidos 111-608. Equivalentes de la secuencia del ARNm de la variante 2 de ATP-1A4 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, o un análogo de las mismas. Un análogo, es un ARNm de la variante 2 de ATP1A4 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.: 128 (es decir, un ortólogo). La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para la variante 1 de ATP1B1 como no. de acceso NM_001677, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.: 129. La SEC. DE IDENT. NO.: 129 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica la variante 1 de la subunidad Bl de la ATPasa de Na+/K+ (con la excepción de las bases "T" por las bases "U"). La secuencia codificante para la variante 1 de ia subunidad Bl de la ATPasa de Na+/K+ es de los nucleótidos 122-1033. Equivalentes de la secuencia del ARNm de la variante 1 de ATP1B1 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de la variante 1 de ATP1B1 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.: 129 (es decir, un ortólogo). La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para la variante 2 de ATP1B1 como no. de acceso NM_001001787 , proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.: 130. La SEC. DE IDENT. NO.: 130 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica la variante 2 de la subunidad Bl de la ATPasa de Na+/K+ (con la excepción de las bases "T" por las bases "U") . La secuencia codificante para la variante 2 de la subunidad Bl de la ATPasa de Na+/K+ es de los nucleótidos 122-1027. Equivalentes de la secuencia del ARNm de la variante 2 de ATP1B1 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de la variante 2 de ATP1B1 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.: 130 (es decir, - un ortólogo). La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para ATP1B2 como no. de acceso NM_001678, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.rl31. La SEC. DE IDENT. NO.:131 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica la súbunidad B2 de la ATPasa de Na+/K+ (con la excepción de las bases "T" por las bases "U"). La secuencia codificante para la subunidad B2 de la ATPasa de Na+/K+ es de los nucleótidos 584-1456. Equivalentes de la secuencia del ARNm de ATP1B2 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, o , un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de ATP1B2 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. N0.:131 (es decir, un ortólogo). La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para ATP1B3 como no. de acceso NM_001679, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.rl32. La SEC. DE IDENT. NO.:132 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica la subunidad B3 de la ATPasa de Na+/K+ (con la excepción de las bases "T" por las bases "U") . La secuencia codificante para la subunidad B3 de la ATPasa de Na+/K+ es de los nucleótidos 175-1014. Equivalentes de la secuencia del ARNm de ATP1B3 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas, o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm de ATP1B3 de Otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.:132 (es decir, un ortólogo). ARNm del cotransportador de Na -K-2C1 (SLC12A1 y SLC12A2) : El cotransportador de sodio-potasio-cloruro (Cotransportador de Na-K-2C1 o NKCC) facilita el cotransporte acoplado de iones de Na+, K+ y Cl" a través de la membrana plasmática. Existen dos isoformas: NKCC1 y NKCC2. NKCC1 se expresa en la mayor parte de los tejidos, incluyendo el ojo. En contraste, NKCC2 se expresa de manera primaria en el riñon, sin embargo, existe evidencia de un nivel menor de expresión de esta isoforma en el ojo también. NKCC1 se codifica por el gen SLC12A2 (familia 12 de portadores de solutos, miembro 2) y NKCC2 se codifica por el gen SLC12A1. Las células de la red trabecular poseen un cotransportador de Na-K-2C1 robusto. La actividad de este cotransportador se modula por neurotransmisores y hormonas tal como norepinefrina, que reduce la actividad de cotransporte, o vasopresina, que incrementa la actividad de cotransporte. La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para SLC12A1 como no. de acceso NM_000338, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. NO.:7. La SEC. DE IDENT. NO.: 7 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica el cotransportador NKCC2 de Na-K-2C1 (con la excepción de las bases "T" por las bases "U"). La secuencia codificante para el cotransportador NKCC2 de Na-K-2C1 es de los nucleótidos 20-3319. Equivalentes de la secuencia del ARNm del cotransportador NKCC2 de Na-K-2C1 citada en lo anterior son formas de edición alternativas, formas alélicas o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm del cotransportador NKCC2 de Na-K-2C1 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. N0.:7 (es decir, un ortólogo). Las secuencias de ácidos nucleicos de SLC12A1 relacionadas con la SEC. DE IDENT. NO . : 7 incluyen a aquellas que tienen los números de acceso del GenBank AJ005332, AJ005333, AB032525, AB032527, BC040138,, BX647067, BX647484 y U58130. La base de datos del GenBank proporciona la secuencia del ADN para SLC12A2 como no. de acceso NM_001046, proporcionada en el "Listado de Secuencias" como SEC. DE IDENT. N0.:133. La SEC. DE IDENT. NO.:133 proporciona la secuencia de la hebra sentido del ADN que corresponde al ARNm que codifica el cotransportador NKCCl de Na-K-2C1 (con la excepción de las bases "T" por las bases "U"). La secuencia codificante para el cotransportador NKCCl de Na-K-2C1 es de los nucleótidos 165-3803. Equivalentes de la secuencia del ARNm del cotransportador NKCCl de Na-K-2C1 citada en lo anterior son formas de edición ^alternativas, formas alélicas o un análogo de las mismas. Un análogo es un ARNm del cotransportador NKCCl de Na-K-2C1 de otra especie de mamífero que es homólogo a la SEC. DE IDENT. NO.: 133 (es decir, un ortólogo). Atenua ción de la expresión de un ARNm : La frase "atenuar la expresión de un ARNm", como se utiliza en la presente, significa administrar o expresar una cantidad de ARN de interferencia (por ejemplo, un siARN) para reducir la traducción del ARNm objetivo en proteína, a través de la escisión del ARNm o a través de la inhibición directa de la traducción. La reducción en la expresión del ARNm objetivo o la proteína correspondiente se refiere comúnmente como "abatimiento" y se reporta con relación a los niveles presentes después de la administración o expresión de un ARN control no dirigido (por ejemplo, un siARN control no dirigido) . El abatimiento de la expresión de una cantidad que incluye y está entre 50% y 100% se contempla por las modalidades en la presente. Sin embargo, no es necesario que se alcancen tales niveles de abatimiento para propósitos de la presente invención. En una modalidad, un solo ARN de interferencia que se dirige a uno de los objetivos en hipertensión ocular se administra para disminuir la IOP. En otras modalidades,' dos o más ARN de interferencia que se dirigen al mismo objetivo en hipertensión ocular (por ejemplo, CA2 ) se administran para disminuir la IOP. Aún en otras modalidades, dos o más ARN de interferencia que se dirigen a múltiples objetivos en hipertensión (por ejemplo, CA2 y ADRB2) se administran para disminuir la IOP. El abatimiento se valora comúnmente al medir los niveles de ARNm utilizando amplificación por reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) o al medir los niveles de proteína por transferencia western o ensayo de inmunoabsorción enzimática (ELISA) . Analizar el nivel de proteína proporciona una valoración de la escisión del ARNm así como también de la inhibición de la traducción. Técnicas adicionales para medir el abatimiento incluyen hibridación en solución de ARN, protección contra nucleasas, hibridación northern, monitoreo de expresión génica con un microarreglo, unión de anticuerpos, radioinmunoensayo y análisis celular activado por fluorescencia. La inhibición de los objetivos citados en la presente también se infiere en un humano o mamífero al observar una mejoría en un síntoma de glaucoma tal como, por ejemplo, mejoría en presión intraocular, mejoría en la pérdida del campo visual, o mejoría en los cambios de la cabeza del nervio óptico. El ARN de interferencia de las modalidades de la invención parece actuar de manera catalítica para la escisión del ARNm objetivo, es decir, el ARN de interferencia es capaz de efectuar la inhibición del ARNm objetivo en cantidades subestequiométricas . En comparación con las terapias antisentido, se requiere significativamente menos ARN de interferencia para proporcionar un efecto terapéutico bajo tales condiciones de escisión. ARN de in terferencia : En una modalidad de la invención, el ARN de interferencia (por ejemplo, siARN) tiene una hebra sentido y una hebra antisentido, y las hebras sentido y antisentido comprenden una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos. En una modalidad adicional de la invención, el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13, 14, 15, 16, 17 ó 18 nucleótidos contiguos que tienen porcentajes de complementariedad de secuencia a, o que tienen porcentajes de identidad de secuencia con, los 13, 14, 15, 16, 17 ó 18 penúltimos nucleótidos, respectivamente, del extremo 3' de la secuencia objetivo correspondiente dentro de un ARNm. La longitud de cada hebra del ARN de interferencia comprende 19 a 49 nucleótidos, y puede comprender una longitud de 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 ó 49 nucleótidos. La hebra antisentido de un siARN es el agente de guía activo del siARN en cuanto a que la hebra antisentido se incorpora en el RISC, lo que de esta manera permite al RISC identificar los ARNm objetivo con complementariedad por lo menos parcial a la hebra del siARN antisentido para la escisión o represión traduccional. En la presente invención, las secuencias objetivo del ARN de interferencia (por ejemplo, las secuencias objetivo del siARN') dentro de una secuencia del ARNm objetivo se seleccionan utilizando herramientas de diseño disponibles.
Los ARN de interferencia que corresponden a estas secuencias objetivo se prueban entonces por transfección de células que expresan el ARNm objetivo seguida de la valoración del abatimiento como se describe en lo anterior. Los ARN de interferencia que producen un abatimiento en la expresión de entre 50% y 100% sé seleccionan para análisis posterior. Las técnicas para seleccionar secuencias objetivo para los siARN se ' proporcionan por Tuschl, T. et al . , "The siRNA User Guide", revisado el 6 de mayo de 2004, disponible en el sitio web de la Universidad de Rockefeller; por el Boletín Técnico #506, "siRNA Design Guidelines", Ambion Inc., en el sitio web de Ambion; y por otras herramientas de diseño en la red en, por ejemplo, los sitios web de Invitrogen, Dharmacon, Integrated DNA Technologies, Genscript o Proligo. Los parámetros iniciales de búsqueda pueden incluir contenidos de G/C entre 35% y 55% y longitudes del siARN de entre 19 y 27 nucleótidos. La secuencia objetivo puede ubicarse en la región codificante o en las regiones no traducidas 5' o 3' del ARNm. Una modalidad de una secuencia objetivo de ADN de 19 nucleótidos para la anhidrasa carbónica II se presenta en los nucleótidos 232 a 250 de la SEC. DE IDENT. NO.rl r 5' -CCCTGAGGATCCTCAACAA-3' SEC. DE IDENT . NO.:8.
Un siARN de la invención para dirigirse a una secuencia de ARNm correspondiente de la SEC. DE IDENT. NO.: 8 y que tienen hebras de 21 nucleótidos y una saliente 3' de 2 nucleótidos es: -CCCUGAGGAUCCUCAACAANN-3' SEC. DE IDENT NO. :9 3' -NNGGGACUCCUAGGAGUUGUU-5' SEC. DE IDENT .
NO. :10. Cada residuo "N" puede ser cualquier nucleótido (A, C, G, U, T) o nucleótido modificado. El extremo 3' puede tener un número de residuos "N" de entre, y que incluye, 1, 2, 3, 4, 5 y 6. Los residuos "N" en cada hebra pueden ser el mismo residuo (por ejemplo, UU, AA, CC, GG, o TT) o pueden ser diferentes (por ejemplo, AC, AG, AU, CA, CG, CU, GA, GC, GU, UA, UC o UG) . Las salientes 3' pueden ser las mismas o pueden ser diferentes. En una modalidad, ambas hebras tienen una saliente UU 3' . Un siARN de la invención para dirigirse a una secuencia de ARNm correspondiente de la secuencia de SEC. DE IDENT. NO.: 8 y que tiene hebras de 21 nucleótidos y una saliente UU 3' en cada hebra es: 5' -CCCUGAGGAUCCUCAACAAUU-3' SEC. DE IDENT . NO.:ll 3' -UUGGGACUCCUAGGAGUUGUU-5' SEC. DE IDENT .
NO . : 12. El ARN de interferencia puede tener también una saliente de nucleótidos 5' o puede tener extremos romos. Un siARN de la invención para dirigirse a una secuencia de ARNm correspondiente de la SEC. DE IDENT. N0.:8 y que tiene hebras de 19 nucleótidos y extremos romos es: 5' -CCCUGAGGAUCCUCAACAA-3' SEC. DE IDENT .
NO. :722 3' -GGGACUCCUAGGAGUUGUU-5' SEC. DE IDENT .
NO. :723.
Las hebras de un ARN de interferencia de doble hebra (por ejemplo, un siARN) pueden conectarse para formar una estructura de horquilla o tallo-bucle (por ejemplo, un shARN) . Un shARN . de la invención que se dirige a una secuencia de ARNm correspondiente de la SEC. DE IDENT. NO.:8 y que tienen una región de tallo de doble hebra de 19 pb y una saliente UU 3' 'es: NNN / \ 5 ' - CCCUGAOGAUCCUCAACAA N 3 ' -UUGaGAOTCXprAGG?GUTJGUÜ H SEC. DE IDENT. NO: 13. \ / NNN N es un nucleótido A, T, C, G, U, o una forma modificada conocida por alguien con experiencia ordinaria en la técnica. El número de nucleótidos N en el bucle es un número entre, y que incluye, 3 a 23, o 5 a 15, o 7 a 13, o 4 a 9, o 9 a 11, o el número de nucleótidos N es 9. Algunos de los nucleótidos en el bucle pueden involucrarse en interacciones de apareamiento de bases con otros nucleótidos en el bucle. Ejemplos de secuencias de oligonucleótidos que pueden utilizarse para formar el bucle incluyen 5' -UUCAAGAGA-3' (Brummelkamp, T.R. et al . (2002) Science 296: 550) y 5'-UUUGUGUAG-3' (Castanotto, D. et al . (2002) RNA 8:1454). Se reconocerá por alguien con experiencia en la técnica que el oligonucleótido de cadena sencilla resultante forma una estructura de tallo-bucle u horquilla que comprende una región de doble hebra capaz de interactuar con la maquinaria de la iARN. La secuencia objetivo del siARN identificada en lo anterior puede extenderse en el extremo 3' para facilitar el diseño de duplos de 27 monómeros sustratos de dicer. La extensión de la secuencia objetivo de ADN de 19 nucleótidos (SEC. DE IDENT. NÓ.:8) identificada en la secuencia del ADN de la anhidrasa carbónica II (SEC. DE IDENT. NO.:l) en 6 nucleótidos produce una secuencia objetivo de ADN de 25 nucleótidos presente en los nucleótidos 232 a 256 de la SEC. DE IDENT. NO. r 1: 5' -CCCTGAGGATCCTCAACAATGGTCA-3' SEC. DE IDENT .
NO. :724. Un duplo de 27 monómeros sustrato de dicer de la invención para dirigirse a una secuencia de ARNm correspondiente de la SEC. DE IDENT. NO.:724 es: 5' -CCCUGAGGAUCCUCAACAAUGGUCA-3' SEC. DE IDENT .
NO. :718 -UUGGGACUCCUAGGAGUUGUUACCAGU-5' SEC. DE IDENT .
NO. :719.
Los dos nucleótidos en el extremo 3 ' de la hebra sentido (es decir, los nucleótidos de CA de la SEC. DE IDENT. NO.:718) pueden ser desoxinucleótidos para procesamiento intensificado. El diseño de los duplos de 27 monómeros sustratos de dicer de las secuencias objetivo de 19-21 nucleótidos, tal como se proporcionan en la presente, se discute además por el sitio web de Integrated DNA Technologies (IDT)' y por Kim, D.-H. et al . , (February, 2005) Na ture Biotechnology 23:2; 222-226. Cuando los ARN de interferencia se producen por síntesis química, la fosforilación en la posición 5' del nucleótido en el extremo 5' de una o ambas hebras (cuando se presentan) puede intensificar la eficacia del siARN y la especificidad del complejo RISC unido, pero no se requiere, ya que la fosforilación puede presentarse de manera intracelular. La tabla 1 enlista ejemplos de las secuencias objetivo de siARN dentro de las secuencias de ADN de CA2, CA4 y variante 1 y variante 2 de CA12 (SEC. DE IDENT. NO.:l, SEC. DE IDENT. NO.: 2, SEC. DE IDENT. NO.: 101 y SEC. DE IDENT. NO.: 134, respectivamente) a partir de las cuales los siARN de la presente invención se diseñan de una manera como se establece en lo anterior. CA2, CA4 y la variante 1 y variante 2 de CA12 codifican la anhidrasa carbónica II, IV y XII variante 1 y variante 2, respectivamente.
Tabla 1. Secuencias Objetivo de CA2 , CA4 y CA12 para siARN La tabla 2 enlista ejemplos de las secuencias objetivo del siARN dentro de las secuencias de ADN de ADRB1 y ADRB2 (SEC. DE IDENT. NO.:3 y SEC. DE IDENT. NO . : 4 , respectivamente) de las que los siARN de la presente invención se diseñan de una manera como se establece en lo anterior. Como se denota en lo anterior, ADRB1 y ADRB2 codifican los receptores adrenérgicos ßl y ß2, respectivamente.
Tabla 2. Secuencias Objetivo de ADRB1 y ADRB2 para los siARN La tabla 3 enlista ejemplos de las secuencias objetivo del siARN dentro de las secuencias de ADN de ACHE para las variantes de edición E4-E5 y E4-E6 (SEC. DE IDENT. NO.: 5 y SEC. DE IDENT. NO.: 123, respectivamente) de las que los siARN de la presente invención se diseñan de una manera como se establece en lo anterior. Como se denota en lo anterior, ACHE codifica la acetilcolinesterasa.
Tabla 3. Secuencias Objetivo de ACHE para los siARN La tabla 4 enlista ejemplos de las secuencias objetivo del siARN dentro de las secuencias de ADN de las subunidades A y B de la ATPasa de Na+/K+ (ATP1A1 variante 1, SEC. DE IDENT. NO.:124; ATP1A1 variante 2, SEC. DE IDENT. NO.: 125; ATP1A2, SEC. DE IDENT. NO.: 6; ATP1A3, SEC. DE IDENT. NO.: 126; ATP1A4 variante 1, SEC. DE IDENT. NO.: 127; ATP1A4 variante 2, SEC. DE IDENT. NO.:128; ATP1B1 variante 1, SEC. DE IDENT. NO.: 129; ATP1B1 variante 2, SEC. DE IDENT. NO. : 130; ATP1B2, SEC. DE IDENT. NO.:131; y ATP1B3, SEC. DE IDENT. NO.: 132) de las que los siARN de la presente invención se diseñan de una manera como se establece en lo anterior.
Tabla 4. Secuencias Objetivo de ATP1A y ATPlB para los siARN La tabla 5 enlista ejemplos de secuencias objetivo del siARN dentro de las secuencias de ADN de SLC12A1 y SLC12A2 (SEC. DE IDENT. NO . : 7 y SEC. DE IDENT. NO.:133, respectivamente) de las que los siARN de la presente invención se diseñan de una manera como se establece en lo anterior. Como se denota en lo anterior, SLC12A1 y SLC12A2 codifican el cotransportador de Na-K-2C1, NKCC2 y NKCCl, respectivamente .
Tabla 5. Secuencias Objetivo de SLC12A1 para siARN Como se cita en los ejemplos en lo anterior, alguien con experiencia en la técnica es capaz de utilizar la información de la secuencia objetivo proporcionada en las Tablas 1-5 para diseñar ARN de interferencia que tengan una longitud más corta o más larga que las secuencias proporcionadas en la Tabla 1-5 con referencia a la posición de la secuencia en la SEC. DE IDENT. NO.:l, SEC. DE IDENT. NO.: 2, SEC. DE IDENT. NO.: 3, SEC. DE IDENT. NO.: 4, SEC. DE IDENT. NO.: 5, SEC; DE IDENT. NO.: 6, SEC. DE IDENT. NO.:7, SEC. DE IDENT. NO.: 101, SEC. DE IDENT. NO.: 123, SEC. DE IDENT. NO.: 124, SEC. DE IDENT. NO.: 125, SEC. DE IDENT. NO.:126, SEC. DE IDENT. NO.:127, SEC. DE IDENT. NO.:128, SEC. DE IDENT. NO.: 129, SEC. DE IDENT. NO.: 130, SEC. DE IDENT. NO.:131, SEC. DE IDENT. NO.:132, SEC. DE IDENT. NO.rl33, o SEC. DE IDENT. NO.:134 y agregar o eliminar nucleótidos complementarios o casi complementarios a la SEC. DE IDENT.
NO.rl, SEC. DE IDENT. N0.r2, SEC. DE IDENT. NO . r 3 , SEC. DE IDENT. NO.:4, SEC. DE IDENT. NO.:5, SEC. DE IDENT. NO.r6, SEC. DE IDENT. NO.:7, SEC. DE IDENT. NO.rlOl, SEC. DE IDENT. NO.:123, SEC. DE IDENT. NO.rl24, SEC. DE IDENT. NO.rl25, SEC. DE IDENT. NO.: 126, SEC. DE IDENT. NO.: 127, SEC. DE IDENT. NO.:128, SEC. DE IDENT. NO.:129, SEC. DE IDENT. NO.:130, SEC. DE IDENT. NO.: 131, SEC. DE IDENT. NO.: 132, SEC. DE IDENT. NO.: 133, o SEC. DE IDENT. NO.: 134, respectivamente. La reacción de escisión del ARN objetivo guiada por los siARN y otras formas de ARN de interferencia es altamente específica de secuencia. En general, el siARN que contiene una hebra de nucleótidos sentido idéntica en secuencia a una porción del ARNm objetivo y una hebra de nucleótidos antisentido exactamente complementaria a una porción del ARNm objetivo son modalidades de siARN para la inhibición de los ARNm citados en la presente. Sin embargo, una complementariedad de secuencia del 100% entre la hebra del siARN antisentido y el ARNm objetivo, o entre la hebra del siARN antisentido y la hebra del siARN sentido, no se requiere para practicar la presente invención. De esta manera, por ejemplo, la invención considera variaciones de secuencia que podrían esperarse debido a mutación genética, polimorfismo de cepas o divergencia evolutiva. En una modalidad de la invención, la hebra antisentido del siARN tiene complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con el ARNm objetivo. "Casi perfecta", como se utiliza en la presente, significa que la hebra antisentido del siARN es "sustancialmente complementaria a", y la hebra sentido del siARN es "sustancialmente idéntica" a por lo menos una porción del ARNm objetivo. "Identidad", como se conoce por alguien con experiencia ordinaria en la técnica, es el grado de relación de secuencia, entre secuencias de nucleótidos, determinado al correlacionar el orden e identidad de los nucleótidos entre las secuencias. En una modalidad, la hebra antisentido de un siARN que tiene 80% y entre 80% hasta 100% de complementariedad, por ejemplo, 85%, 90% o 95% de complementariedad, a la secuencia del ARNm objetivo se consideran complementariedad casi perfecta y puede utilizarse en la presente- invención. Complementariedad contigua "perfecta" es apareamiento de bases Watson-Crick estándar de pares de bases adyacentes. Complementariedad contigua "por lo menos casi perfecta" incluye complementariedad "perfecta" como se utiliza en la presente. Métodos computarizados para determinar identidad o complementariedad se diseñan para identificar el mayor grado de correlación de secuencias de nucleótidos, por ejemplo, BLASTN (Altschul, S.F., et al . (1990) J. Mol . Biol . 215:403-410). El término "identidad por ciento" describe el porcentaje de nucleótidos contiguos en una primera molécula de ácidos nucleicos que es el mismo que en un grupo de nucleótidos contiguos de la misma longitud en una segunda molécula de ácidos nucleicos. El término "complementariedad por ciento" describe el porcentaje de nucleótidos contiguos en una primera molécula de ácidos nucleicos que puede aparearse en bases, en el sentido Watson-Crick, con un grupo de nucleótidos contiguos en una segunda molécula de ácidos nucleicos . La relación entre un ARNm objetivo (hebra sentido) y una hebra de un siARN (la hebra sentido) es aquella de identidad. La hebra sentido de un siARN se llama también una hebra pasajera, si se presenta. La relación entre un ARNm objetivo (hebra sentido) y la otra hebra de un siARN (la hebra antisentido) es aquella de complementariedad. La hebra antisentido de un siARN se llama también una hebra guía. La penúltima base en una secuencia de ácidos nucleicos que se escribe en una dirección 5' a 3' es la siguiente a la última base, es decir, la base siguiente a la base 3' . Las 13 penúltimas bases de una secuencia de ácidos nucleicos escrita en una dirección 5' a 3' son las últimas 13 bases de una secuencia siguiente a la base 3' y que no incluyen la base 3' . De manera similar, las 14, 15, 16, 17 ó 18 penúltimas bases de una secuencia de ácidos nucleicos escrita en una dirección 5' a 3' son las últimas 14, 15, 16, 17 ó 18 bases de una secuencia, respectivamente, siguientes a la base 3' y que no incluyen la base 3' . La frase "una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de (un identificador de secuencia) " permite una sustitución de un nucleótido. Sustituciones de dos nucleótidos (es decir, 11/13=85% de identidad/compleme?tariedad) no se incluyen en tal frase. En una modalidad de la invención, la región de nucleótidos contiguos es una región de por lo menos 14 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 85% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 85% de identidad de secuencia con, los 14 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de la secuencia identificada por cada identificador de s-ecuencia. Sustituciones de dos nucleótidos (es decir, 12/14=86% de identidad/complementariedad) se incluyen en tal frase. En una modalidad adicional de la invención, la región de nucleótidos contiguos es una región de por lo menos 15, 16, 17 ó 18 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 80% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 80% de identidad de secuencia con, los 14 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de la secuencia del identificador de secuencia. Sustituciones de tres nucleótidos se incluyen en tal frase. La secuencia objetivo en los ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rl, SEC. DE IDENT. NO.: 2, SEC. DE IDENT. NO.: 3, SEC. DE IDENT. NO.: , SEC. DE IDENT. NO.: 5, SEC. DE IDENT. NO.:6, SEC. DE IDENT. NO.:7, SEC. DE IDENT. NO.rlOl, SEC. DE IDENT. NÓ.rl23, SEC. DE IDENT. NO.rl24, SEC. DE IDENT. NO.: 125, SEC. DE IDENT. NO.: 126, SEC. DE IDENT. NO.: 127, SEC. DE iDENT. NO.: 128, SEC. DE IDENT. NO.: 129, SEC. DE IDENT. NO.: 130, SEC. DE IDENT. NO.: 131, SEC. DE IDENT. NO.: 132, SEC. DE IDENT. NO.: 133, o SEC. DE IDENT. NO.: 134, pueden estar en las regiones no traducidas 5' o 3' del ARNm así como también en la región codificante del ARNm. Una o ambas hebras del ARN de interferencia de doble hebra pueden tener una saliente 3' de 1 a 6 nucleótidos, que pueden ser ribonucleótidos o desoxirribonucleótidos o una mezcla de los mismos. Los nucleótidos de la saliente no se aparean en bases. En una modalidad de la invención, el ARN de interferencia comprende una saliente 3' de TT o UU. En otra modalidad de la invención, el ARN :de interferencia comprende por lo menos un extremo romo. Los extremos terminales usualmente tienen un grupo fosfato 5'' o un grupo hidroxilo 3' . En otras modalidades, la hebra antisentido tiene un grupo fosfato 5', y la hebra sentido tiene un grupo hidroxilo 5' . Aún en otras modalidades, los extremos terminales además se modifican por adición covalente de otras moléculas o grupos funcionales. Las hebras sentido y antisentido del siARN de doble hebra pueden estar en una formación dual de dos hebras sencillas como se describe en lo anterior, o pueden ser una sola molécula donde las regiones de complementariedad se aparean en bases y se enlazan de manera covalente por un bucle de horquilla de manera que forman una sola hebra. Se cree que la horquilla se escinde de manera intracelular por una proteína denominada dicer para formar un ARN de interferencia de dos moléculas individuales de ARN apareadas en bases. Los ARN de interferencia pueden diferir del ARN que se presenta en la naturaleza por la adición, eliminación, sustitución o modificación de uno o más nucleótidos. El material no nucleótido puede unirse al ARN de interferencia en el extremo 5', el extremo 3' o de manera interna. Tales modificaciones se1 diseñan comúnmente para incrementar la resistencia de los- ARN de interferencia a las nucleasas, para mejorar la asimilación celular, para intensificar el direccionamiento celular, para ayudar en el rastreo del ARN de interferencia, para mejorar además la estabilidad, o para reducir el potencial para la activación de la ruta del interferón. Por ejemplo, los ARN de interferencia pueden comprender un nucleótido de purina en los extremos de las salientes. La conjugación de colesterol en el extremo 3' de la hebra sentido de una molécula de siARN por medio de un enlazador de pirrolidina, por ejemplo, también proporciona estabilidad a un siARN. Modificaciones adicionales incluyen una molécula de biotina terminal 3', por ejemplo, un péptido conocido por tener propiedades de penetración celular, una nanopartícula, un peptidomimético, un tinte fluorescente, o un dendrímero. Los nucleótidos pueden modificarse en su porción base, en su porción azúcar, o en la porción fosfato de la molécula y funcionar en modalidades de la presente invención. Las modificaciones incluyen sustituciones, por ejemplo, con grupos alquilo, alcoxi, amino, deaza, halo, hidroxilo, tiol o una combinación de los mismos. Los nucleótidos pueden sustituirse con análogos con mayor estabilidad tal como el reemplazo de un ribonucleótido con un desoxirribonucleótido, o tener modificaciones del azúcar tales como, por ejemplo, grupos OH 2' reemplazados por grupos amino 2', grupos 0-metilo 2' , grupos metoxietilo 2' o un puente de metileno 0-2', C-4'. Ejemplos de un análogo de nucleótidos de purina o pirimidina incluyen una xantina, una hipoxantina, una azapurina, una metiltioadenina, 7-deaza-adenosina y nucleótidos 0 y N modificados. El grupo fosfato del nucleótido puede modificarse al sustituir uno o más de los oxígenos en el grupo fosfato con nitrógeno o con azufre ( fosforotioatos ) . Las modificaciones son útiles, por ejemplo, para intensificar la función, para mejorar la estabilidad o permeabilidad, o para dirigir la ubicación o el direccionamiento . Puede haber una región o regiones de la hebra antisentido de ARN de interferencia que no es (son) complementaria a una porción de la SEC. DE IDENT. N0.:1, SEC. DE IDENT. NO.: 2, SEC. DE IDENT. NO.: 3, SEC. DE IDENT. NO . : 4 , SEC. DE IDENT. NO.: 5, SEC. DE IDENT. NO.: 6, SEC. DE IDENT. NO.:7, SEC. DE IDENT. NO.rlOl, SEC. DE IDENT. NO.rl23, SEC. DE IDENT. NO. r 124, SEC. DE IDENT. NO. r 125, SEC. DE IDENT. NO. r 126, SEC. DE IDENT. NO. r 127, SEC. DE IDENT. NO.: 128, SEC. DE IDENT. NO.rl29, SEC. DE IDENT. NO.rl30, SEC. DE IDENT. NO.: 131, SEC. DE IDENT. NO.: 132, SEC. DE IDENT. NO.: 133, o SEC. DE IDENT. NO..-134. Las regiones no complementarias pueden estar en el extremo 3', 5' o ambos de una región complementaria o entre dos regiones complementarias. Los ARN de interferencia pueden generarse de manera exógena por síntesis química, por transcripción in vi tro, o por escisión de ARN de doble hebra más largo con dicer u otra nucleasa apropiada con actividad similar. Los ARN de interferencia químicamente sintetizados, producidos a partir de fosforamiditas de ribonucleósido protegidas utilizando un sintetizador de ADN/ARN convencional, pueden obtenerse de proveedores comerciales tales como Ambion Inc. (Austin, TX) , Invitrogen (Carisbad, CA) , o Dharmacon (Lafayette, CO) . Los ARN de interferencia por ejemplo, se purifican por extracción con un solvente o resina, precipitación, electroforesis, cromatografía o una combinación de los mismos. De manera alternativa, el ARN de interferencia puede utilizarse con poca o ninguna purificación para evitar pérdidas debido al procesamiento de la muestra. Los ARN de interferencia también pueden expresarse de manera endógena a partir de vectores de expresión plasmídicos o virales o de casetes de expresión mínima, por ejemplo, fragmentos generados por PCR que comprenden uno o más promotores y una plantilla o plantillas apropiadas para el ARN de interferencia. Ejemplos de vectores de expresión basados en plásmidos comercialmente disponibles para shARN incluyen miembros de la serie pSilencer (Ambion, Austin, TX) y pCpG-siARN (InvivoGen, San Diego, CA) . Los vectores virales para la expresión de ARN de interferencia pueden derivarse de una diversidad de virus incluyendo adenovirus, virus adenoasociados, lentivirus, (por ejemplo, HIV, FIV y EIAV) y herpes virus. Ejemplos de vectores virales comercialmente disponibles para expresión de shARN incluyen pSilencer adeno (Ambion, Austin, TX) y pLenti6/BLOCK-iT™-DEST (Invitrogen, Carisbad, CA) . La selección de vectores virales, métodos para expresar el ARN de interferencia a partir del vector y métodos para entregar el vector viral están dentro de la experiencia ordinaria de alguien en la técnica. Ejemplos de paquetes para la producción de casetes de expresión de shARN generados por PCR incluyen Silencer Express (Ambion, Austin, TX) y siXpress (Mirus, Madison, Wl) . Los ARN de interferencia pueden expresarse a partir de una diversidad de promotores eucarióticos conocidos por aquellos con experiencia ordinaria en la técnica, incluyendo promotores pol III, tales como los promotores U6 o Hl, o promotores pol II, tal como el promotor del citomegalovirus. Aquellos con experiencia en la técnica reconocerán que estos promotores pueden también adaptarse para permitir la expresión inducible del ARN de interferencia. Hibridación bajo Condiciones Fisiológicas : En ciertas modalidades de la presente invención, una hebra antisentido de un ARN de interferencia se hibrida con un ARNm in vivo como parte del complejo RISC. "Hibridación" se refiere a un proceso en el que los ácidos nucleicos de hebra sencilla, con secuencias de bases complementarias o casi complementarias, interactúan para formar complejos enlazados con hidrógeno llamados híbridos. Las reacciones de hibridación son sensibles y selectivas. In vi tro, la especificidad de la hibridación (es decir, la astringencia) se controla por las concentraciones de sal o formamida en las soluciones de prehibridación e hibridación, por ejemplo, y por la temperatura de hibridación; tales procedimientos son bien conocidos en la técnica. En particular, la astringencia se incrementa al reducir la concentración de sal, al incrementar la concentración de formamida o al elevar la temperatura de hibridación. I Por ejemplo, condiciones de alta astringencia pueden presentarse a aproximadamente 50% de formamida a 37 °C a 42°C. Condiciones de astringencia reducida pueden presentarse a aproximadamente 35% a 25% de formamida a 30°C a 35°C. Ejemplos de condiciones de astringencia para hibridación se proporcionan en Sambrook, J. , 1989, Molecular Cloning: A Labora tory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. Ejemplos adicionales de condiciones astringentes de hibridación incluyen NaCl 400 mM, PIPES 40 mM pH 6.4, EDTA 1 mM, 50°C o 70°C durante 12-16 horas seguido de lavado, o hibridación a 70°C en 1XSSC o 50°C en 1XSSC, 50% de formamida seguida de lavado a 70°C en 0.3XSSC, o hibridación a 70°C en 4XSSC o 50°C en 4XSSC, 50% de formamida seguida de lavado a 67 °C en 1XSSC. La temperatura para la hibridación es aproximadamente 5-10°C menor que la temperatura de fusión (Tm) del híbrido donde Tm se determina para híbridos entre 19 y 49 pares de bases de longitud utilizando el siguiente cálculo: Tm °C = 81.5 + 16.6(log?0[Na+] ) + 0.41 (% G+C) - (600/N) donde N es el número de bases en el híbrido, y [Na+] es la concentración de iones de sodio en el tampón de hibridación. El ensayo de hibridación in vi tro descrito en lo anterior proporciona un método para predecir si la unión ente un siARN candidato y un objetivo tendrá especificidad. Sin embargo, en el contexto del complejo RISC, la escisión específica de un objetivo puede presentarse también con una hebra antisentido que no demuestre alta astringencia para la hibridación in vi tro . ARN de in terferencia de hebra sencilla : Como se cita en lo anterior, los ARN de interferencia funcionan en última instancia como hebras sencillas. Se ha encontrado que el ARN de interferencia de hebra sencilla (ss) efectúa silenciamiento del ARNm, aunque de manera menos eficiente que el ARN de doble hebra. Por lo tanto, las modalidades de la presente invención también proporcionan la administración de un ARN de interferencia ss que se hibrida bajo condiciones fisiológicas a una porción de la SEC. DE IDENT. N0.:1, SEC. DE IDENT. NO.: 2, SEC. DE IDENT. NO.: 3, SEC. DE IDENT. NO.: 4, SEC. DE IDENT. NO.:5, SEC. DE IDENT. NO.:6, SEC. DE IDENT. NO.:7, SEC. DE IDENT. NO.rlOl, SEC. DE IDENT. NO.rl23, SEC. DE IDENT. NO.: 124, SEC. DE IDENT. NO.: 125, SEC. DE IDENT. NO.:126, SEC. DE IDENT. NO.:127, SEC. DE IDENT. NO.:128, SEC. DE IDENT. NO.: 129, SEC. DE IDENT. NO.: 130, SEC. DE IDENT. NO.:131, SEC. DE IDENT. NO.:132, SEC. DE IDENT. NO.rl33, o SEC. DE IDENT. NO.:134 y tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación de la SEC. DE IDENT. NO . : 1 , SEC. DE IDENT. NO . : 2 , SEC. DE IDENT. NO.: 3, SEC. DE IDENT. NO.: 4, SEC. DE IDENT. NO.: 5, SEC. DE IDENT. NO.: 6, SEC. DE IDENT. NO . : 7 , SEC. DE IDENT. NO.rlOl, SEC. DE IDENT. NO.:123, SEC. DE IDENT. NO.rl24, SEC. DE IDENT. NO.: 125, SEC. DE IDENT. NO.: 126, SEC. DE IDENT. NO.: 127, SEC. DE IDENT. NO.: 128, SEC. DE IDENT. NO.: 129, SEC. DE IDENT. NO.: 130, SEC. DE IDENT. NO.: 131, SEC. DE IDENT. NO.:132, SEC. DE IDENT. NO.rl33, o SEC. DE IDENT. NO.:134, respectivamente. El ARN de interferencia ss tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos, con respecto del ARN de interferencia ds citado en lo anterior. El ARN de interferencia ss tiene un fosfato 5' o se fosforila in si tu o in vivo en la posición 5'. El término "fosforilado en 5'" se utiliza para describir, por ejemplo, polinucleótidos u oligonucleótidos que tienen un grupo fosfato unido mediante enlace éster al hidroxilo C5 del azúcar (por ejemplo, ribosa, desoxirribosa o un análogo de las mismas) en el extremo 5' del polinucleótido, u oligonucleótido. Los ARN de interferencia ss se sintetizan químicamente o por transcripción in vi tro, o se expresan de manera endógena a partir de vectores o casetes de expresión, con respecto de los ARN de interferencia ds . Los grupos fosfato 5' pueden agregarse mediante una cinasa, o un fosfato 5' puede ser el resultado de la escisión por nucleasas de un ARN. La entrega es con respecto de los ARN de interferencia ds. En una modalidad, los ARN de interferencia ss que tienen extremos protegidos y modificaciones resistentes a nucleasas se administran para silenciamiento. Los ARN de interferencia ss pueden secarse para almacenamiento o disolverse en una solución acuosa. La solución puede contener tampones o sales para inhibir el templado o para estabilización. ARN de interferencia de horquilla : Un ARN de interferencia de horquilla es una sola molécula (por ejemplo, una sola cadena de oligonucleótidos) que comprende las hebras sentido y antisentido de un ARN de interferencia en una estructura de tallo-bucle u horquilla (por ejemplo, un shARN) . Por ejemplo, los shARN pueden expresarse a partir de vectores de ADN en los que los oligonucleótidos de ADN que codifican una hebra sentido de ARN de interferencia se enlazan a los oligonucleótidos de ADN que codifican la hebra antisentido complementaria inversa del ARN de interferencia por un espaciador corto. Si es necesario para el vector de expresión elegido, pueden agregarse T y nucleótidos terminales 3' que forman sitios de restricción. El transcrito de ARN resultante1 se pliega sobre sí mismo para formar una estructura de tallo-bucle. Modo de administra ción : El ARN de interferencia puede entregarse directamente al ojo por inyección del tejido ocular tal como por inyecciones periocular, conjuntival, subtenoniana, intracameral, intravítrea, intraocular, subretiniana, subconjuntival, retrobulbar o intracanalicular; por aplicación directa al ojo utilizando un catéter u otro dispositivo de colocación tales como un pelet retiniano, inserto intraocular, supositorio o un implante que comprenda un material poroso, no poroso o gelatinoso; por gotas o ungüentos oculares tópicos; o por un dispositivo de liberación lenta en el fondo del saco o implantado adyacente a la esclerótica (transesclerótico) o dentro del ojo. La inyección intracameral puede ser a través de la cornea en la cámara anterior para permitir que el agente alcance la red trabecular. La inyección intracanalicular puede ser en los canales recolectores venosos que drenan el canal de Schlemm o en el canal Schlemm. La administración sistémica o parenteral se contempla incluyendo, pero no se limita a, entrega intravenosa, subcutánea y oral. Suj eto : Un sujeto en necesidad de tratamiento para hipertensión ocul r o en riesgo de desarrollar hipertensión ocular es un humano u otro mamífero que tiene hipertensión ocular o en riesgo de tener hipertensión ocular asociada con expresión o actividad indeseada o inapropiada de objetivos como se cita en la presente, es decir, anhidrasa carbónica II, IV o XII, receptores adrenérgicos ßl o ß2; acetilcolinesteras;a; ATPasa de Na+/K+; o cotransportador de Na-K-2C1. Las estructuras oculares asociadas con tales trastornos pueden incluir, por ejemplo, el ojo, retina, coroides, cristalino, córnea, red trabecular, iris, nervio óptico, cabeza del nervio óptico, esclerótica, cámara acuosa, cámara vitrea o cuerpo ciliar. Un sujeto puede también ser una célula ocular, cultivo celular, órgano o un órgano o tejido ex vivo . Formula ciones y Dosifi cación : Las formulaciones farmacéuticas comprenden un ARN de interferencia, o sal del mismo, de la invención hasta 99% en peso mezclado con un medio portador oftálmico fisiológicamente aceptable tales como agua, tampón, solución salina, glicina, ácido hialurónico, manitol y similares. Los ARN -de interferencia de la presente invención se administran como soluciones, suspensiones o emulsiones. Los siguientes son ejemplos de formulaciones posibles modalizadas por esta invención.
Cantidad en % en peso ARN de interferencia hasta 99; 0.1-99; 0.1--50; 0.5-10.0 Fosfato de sodio monobásico 0.05 Fosfato de sodio dibásico 0.15 (anhidro) Cloruro de sodio 0.75 EDTA disódico 0.05 Cremophor EL 0.1 Cloruro de Benzalconio 0.01 HCl y/o NaOH pH 7.3-7.4 Agua purificada (libre de c.s. para 100% RNasa) En general, una cantidad efectiva del ARN de interferencia de modalidades de la invención resulta en una concentración extracelular en la superficie de la célula objetivo desde 100 pM hasta 100 nM, o desde 1 nM hasta 50 nM, o desde 5 nM hasta aproximadamente 10 nM, o hasta aproximadamente 25 nM. La dosis requerida para alcanzar esta concentración local variará dependiendo de una serie de factores que incluyen el método de entrega, el sitio de entrega, el número de capas celulares entre el sitio de entrega y la célula o tejido objetivo, si la entrega es local o sistémica, etc. La concentración en el sitio de entrega será considerablemente más alta que si esta fuera en la superficie de la célula o tejido objetivo. Las composiciones tópicas se entregan en la superficie del ojo de una a cuatro veces al día, o en un calendario de entrega extendido tales como diariamente, .semanalmente, bisemanalmente, mensualmente o más prolongado, de acuerdo con el criterio de rutina de un médico experimentado. El pH de la formulación es aproximadamente un pH de 4-9, o pH de 4.5 a pH de 7.4. El tratamiento terapéutico de pacientes con siARN dirigidos contra los ARNm objetivo en hipertensión ocular, se espera que sea benéfico sobre las gotas oculares tópicas de moléculas pequeñas al incrementar la duración de la acción, lo que por consiguiente permite dosificación menos frecuente y mayor cumplimiento por parte del paciente. Mientras que el régimen preciso se deja a criterio del médico, el ARN de interferencia puede administrarse al colocar una gota en cada ojo según lo dirija el médico. Una cantidad efectiva de una formulación puede depender de factores tales como, por ejemplo, la edad, grupo étnico y sexo del sujeto, la severidad de la hipertensión ocular, la velocidad de recambio transcrito/proteína del gen objetivo, la potencia del ARN de interferencia y la estabilidad del ARN de interferencia. En una modalidad, el ARN de interferencia se entrega de manera tópica al ojo y alcanza la red trabecular, la retina o cabeza del nervio óptico a una dosis terapéutica lo que por consiguiente mejora un proceso de enfermedad asociado con hipertensión ocular. Portadores aceptables : Un portador oftálmicamente aceptable se refiere a aquellos portadores que causan como máximo poca o ninguna irritación ocular, proporcionan conservación adecuada si se necesita, y entregan uno o más ARN de interferencia de la presente invención en una dosificación homogénea. Un portador aceptable para la administración de ARN de interferencia de modalidades de la presente invención incluye los reactivos de transfección basados en lípidos catiónicos TransIT®-TKO (Mirus Corporation, Madison, Wl) , LIPOFECTIN®, Lipofectamina, OLIGOFECTAMINE™ (Invitrogen, Carisbad, CA) , o DHARMAFECT™ (Dharmacon, Lafayette, CO) ; policationes tal como polietilenimina; péptidos catiónicos tales como Tat, poliarginina, o Penetratina (péptido Antp) ; o liposomas. Los liposomas se forman de lípidos formadores de vesícula estándar y un esterol, tal como colesterol, y pueden incluir una molécula de direccionamiento tal como, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal que tiene afinidad de unión por antígenos de superficie celular endotelícos. Además, los liposomas pueden ser liposomas polietilglicolados . Los ARN de interferencia pueden entregarse en solución, en suspensión, o dispositivos de entrega biodegradables o no biodegradables. Los ARN de interferencia pueden entregarse solos, como componentes de conjugados covalentes, en complejo con lípidos catiónicos, péptidos catiónicos o polímeros catiónicos, o encapsulados en nanopartículas dirigidas o no dirigidas. Para la entrega oftálmica, un ARN de interferencia puede combinarse con conservadores, con solventes, tensioactivos, intensificadores de la viscosidad, intensificadores de la penetración, tampones, cloruro de sodio o agua oftalmológicamente aceptables para formar una suspensión o solución oftálmica estéril acuosa. Las formulaciones en solución oftálmica pueden prepararse al disolver el ARN de interferencia en un tampón acuoso isotónico fisiológicamente aceptable. Además, la solución oftálmica puede incluir un tensioactivo oftalmológicamente aceptable para ayudar en la disolución del inhibidor. Agentes de formación de viscosidad, tales como hidroximetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, metilcelulosa, polivinilpirrolidona o similares pueden agregarse a las composiciones de la presente invención para mejorar la retención del compuesto. A fin de preparar una formulación en ungüento oftálmica estéril, el ARN de interferencia se combina con un conservador en un vehículo apropiado, tales como aceite mineral, lanolina líquida o vaselina filante. Las formulaciones en gel oftálmicas estériles pueden prepararse al suspender el ARN de interferencia en una base hidrofílica preparada de la combinación de, por ejemplo, CARBOPOL®-940 (BF Goodrich, Charlotte, NC) , o similares, de acuerdo con métodos conocidos en la técnica para otras formulaciones oftálmicas. VISCOAT® (Alcon Laboratories, Inc., Fort Worth, TX) por ejemplo, puede utilizarse para inyección intraocular. Otras composiciones de la presente invención pueden contener agentes que intensifican la penetración tales como cremephor y TWEEN® 80 (monolaurato de polioxietilen sorbitan, Sigma Aldrich, St. Louis, MO) , en caso de que el ARN de interferencia sea menos penetrante en el ojo. Paguetes: Las modalidades de la presente invención proporcionan un paquete que incluye reactivos para atenuar la expresión de un ARNm como se cita en la presente en una célula. El paquete contiene un siARN o un vector de expresión de shARN. Para los siARN y los vectores de expresión de shARN no virales el paquete puede contener también un reactivo de transfección u otro vehículo de entrega adecuado. Para los vectores de expresión de shARN virales, el paquete puede contener el vector viral y/o los componentes necesarios para la producción del vector viral (por ejemplo, una línea celular empaquetada así como también un vector que comprende la plantilla del vector viral y vectores ayudadores adicionales para el empaquetamiento) . El paquete puede contener también siARN o vectores de expresión de shARN de control positivo y negativo (por ejemplo, un siARN de control no dirigido o un siARN que se dirige a un ARNm no relacionado) . El paquete puede contener también reactivos para valorar el abatimiento del gen objetivo pretendido (por ejemplo, cebadores y sondas para PCR cuantitativo para detectar el ARNm objetivo y/o anticuerpos contra la proteína correspondiente para transferencia western) . Alternativamente, el paquete puede comprende una secuencia de siARN o una secuencia de shARN y las instrucciones y materiales necesarios para generar el siARN por transcripción in vi tro o para construir un vector de expresión de shARN. Se proporciona además una combinación farmacéutica en forma de paquete que incluye, en combinación empaquetada, en un medio portador adaptado para recibir en un medio contenedor en confinamiento cerrado con el mismo y en un primer medio contenedor que incluye una composición de ARN de interferencia y un portador oftálmicamente aceptable. Tales paquetes pueden además incluir, si se desea, uno o más de varios componentes de paquete farmacéuticos convencionales, tales como, por ejemplo, contenedores con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables, contenedores adicionales, etc., como será fácilmente aparentemente para aquellos con experiencia en la técnica. Instrucciones impresas, como inserciones o como etiquetas, que indican cantidades de los componentes que se administrarán, lineamientos para la administración, y/o lineamientos para mezclar los componentes pueden también incluirse en el paquete . La capacidad el ARN de interferencia para abatir los niveles de la expresión del gen objetivo endógeno en, por ejemplo, células de la red trabecular (TM) humanas se evalúa in vi tro como sigue. Las células de TM humanas transformadas, por ejemplo, línea celulares designadas GTM-3 o HTM-3 (véase Pang, I.H. et al . , 1994. Curr . Eye Res . 13:51-63), se colocan en placas 24 horas previo a la transfección en un medio de crecimiento estándar (por ejemplo, DMEM suplementado con 10% de suero bovino fetal) . La transfección se realiza utilizando Dharmafect 1 (Dharmacon, Lafayette, CO) de acuerdo con las instrucciones del fabricante a concentraciones de ARN de interferencia que varían de 0.1 nM - 100 nM. ARN de interferencia control no dirigido y ARN de interferencia de lámina A/C (Dharmacon) se utilizan como controles. Los niveles de ARN objetivo se valoran por qPCR 24 horas después de la transfección utilizando, por ejemplo, cebadores hacia delante y hacia atrás TAQMAN® y un grupo de sondas que incluye el sitio objetivo (Applied Biosystems, Foster City, CA) . Los niveles de proteína objetivo pueden valorarse aproximadamente 72 horas después de la transfección (tiempo real dependiente de la velocidad de recambio de la proteína) por ejemplo, por transferencia western. Técnicas estándar para asilamiento de ARN y/o proteína de células cultivadas son bien conocidas para aquellos con experiencia en la técnica. Para reducir la oportunidad de efecto de desvió de objetivo y no específicos, debe utilizarse la concentración de ARN de interferencia más baja posible que producirá el nivel deseado de abatimiento en la expresión del gen objetivo. La capacidad de los ARN de interferencia de la presente invención para abatir los niveles de la expresión de la proteína CA2 se ejemplifica además en el Ejemplo 1 como sigue. Ejemplo 1 ARN de interferencia para Silenciar de Manera Especifica CA2 en Células HeLa El presente estudio examina la capacidad del ARN de interferencia de CA2 para abatir los niveles de la expresión de CA2 endógena en células HeLa cultivadas. La transfección de células HeLa se llevó a cabo utilizando concentraciones in vi tro estándar (100 nM y 1 nM) de siARN de CA2 , o un siARN control no dirigido y reactivo de transfección DharmaFECT™l (Dharmacon, Lafayette, CO) . Todos los siARN se disolvieron en tampón de siARN IX, una solución acuosa de 20 mM de KCl, 6 mM de HEPES (pH 7.5), 0.2 mM de MgCl . La expresión de la proteína CA2 y la expresión de la proteína actina (control de carga) se evaluaron por análisis de transferencia western 72 horas después de la transfección. Los siARN de CA2 son ARN de interferencia de doble hebra que tiene especificidad por las siguientes secuencias objetivo: siCA2#l se dirige a la SEC. DE IDENT. N0.:721; siCA2#3 se dirige a la SEC. DE IDENT. NO.:15; siCA2#4 se dirige a la SEC. DE IDENT. NO. :720; siCA2#5 se dirige a la SEC. DE IDENT. NO.:141. Cada uno de los cuatro siARN de CA2 disminuyeron la expresión de CA2 de manera significativa en 100 nM y 1 nM con relación al siARN de control no dirigió como se muestra por los datos de transferencia western de la FIGURA 1. El SiCA2#4 que se dirige a la SEC. DE IDENT. NO.:720 y siCA2#5 que se dirige a la SEC. DE IDENT. NO.:141 parecieron ser particularmente efectivos. Las referencias citadas en la presente, en la magnitud en que proporcionan detalles de procedimiento ejemplares u otros suplementarios a aquellos establecidos en la presente, se incorporan específicamente para referencia. Aquellos con experiencia en la técnica, a la luz de la presente descripción, apreciarán que modificaciones obvias de las modalidades descritas en la presente pueden hacerse sin apartarse del espíritu y alcance de la invención. Todas las modalidades descritas en la presente pueden hacerse y ejecutarse sin experimentación infundada a la luz de la presente descripción. El alcance completo de la invención se explica en la descripción y modalidades equivalentes de la misma. La especificación no debe interpretarse para estrechar de manera indebida el alcance completo de la protección para la cual la presente invención se titula. Como se utiliza en la presente y a menos que se indique de otra manera, los términos "un" y "una" se consideran que significan "uno", "por lo menos uno" o "uno o más".

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un método para atenuar la expresión de un ARNm objetivo en hipertensión ocular en un sujeto, el método comprende: administrar al sujeto una composición que comprende una cantidad efectiva de ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y un portador farmacéuticamente aceptable, el ARN de interferencia comprende : una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.: 8, SEC. DE IDENT. NO.: 14- SEC. DE IDENT. NO.:32, SEC. DE IDENT. NO.:83- SEC. DE IDENT. NO.rlOO, SEC. DE IDENT. NO.:102i SEC. DE IDENT. NO.: 122, SEC. DE IDENT." NO.:135- SEC. DE IDENT. NO.r219, SEC. DE IDENT. NO.:720, y SEC. DE IDENT. NO. : 721. 2. El método de la reivindicación 1, en donde el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica anhidrasa carbónica II, y el ' RN de interferencia comprende: una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO . : 8 , SEC. DE IDENT. NO.: 14- SEC. DE IDENT. NO.:22, SEC. DE IDENT. NO.:83- SEC. DE IDENT. NO.rlOO, SEC. DE IDENT. NO.: 135- SEC. DE IDENT. NO.: 155, SEC. DE IDENT. NO.:720, y SEC. DE IDENT. NO.:721. 3. El método de la reivindicación 1, en donde el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica anhidrasa carbónica IV, y el ARN de interferencia comprende: una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.: 23- SEC. DE IDENT. NO.: 32, y SEC. DE IDENT. NO.:156- SEC. DE IDENT. NO.:177. 4. El método de la reivindicación 1, en donde el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica anhidrasa carbónica XII, y el ARN de interferencia comprende: una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. N?'. : 102- SEC. DE IDENT. NO.: 122, y SEC. DE IDENT. NO.:178- SEC. DE IDENT. NO.:219. 5. El método de la reivindicación 1, en donde la región de nucleótidos contiguos es una región de por lo menos 14 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 85% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 85% de identidad de secuencia con, los 14 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de la secuencia del identificador de secuencia. 6. El método de la reivindicación 1, en donde la región de nucleótidos contiguos es una región de por lo menos 15, 16, 17, o 18 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 80% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 80% de identidad de secuencia con, los 15, 16, 17, o 18 penúltimos nucleótidos, respectivamente, del extremo 3' de la secuencia del identificador de secuencia. 7. El método de la reivindicación 1, en donde el ARN de interferencia es un shARN. 8. El método de la reivindicación 1, en donde el ARN de interferencia es un miARN . 9. El método de la reivindicación 1, en donde el ARN de interferencia es un siARN. 10. El uso, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la hipertensión ocular en un sujeto, de una composición- que comprende una cantidad efectiva de ARN de interferencia ' que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y un portador farmacéuticamente aceptable, el ARN de interferencia comprende: una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO . : 8 , SEC. DE IDENT. NO.: 14- SEC. DE IDENT. NO.:32, SEC. DE IDENT. NO.:83- SEC. DE IDENT. NO.rlOO, SEC. DE IDENT. NO.: 102- SEC. DE IDENT. NO.: 122, SEC. DE IDENT. NO.:135- SEC. DE IDENT. NO.:219, SEC. DE IDENT. NO.:720, y SEC. DE IDENT. NO. : 721. 11. El uso de la reivindicación 10, en donde el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.:8, SEC. DE IDENT. NO.: 14- SEC. DE IDENT. NO.:22, SEC. DE IDENT. NO.:83-SEC. DE IDENT. NO.rlOO, SEC. DE IDENT. NO.:135- SEC. DE IDENT. NO.:155, SEC. DE IDENT. NO.:720, y SEC. DE IDENT. NO. :721. 12. El uso de la reivindicación 10, en donde el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.:23- SEC. DE IDENT. NO.: 32, y SEC. DE IDENT. NO.: 156- SEC. DE IDENT. NO. r 177. 13. El uso de la reivindicación 10, en donde el ARN de interferencia comprende una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.:102- SEC. DE IDENT. NO.:122,'y SEC. DE IDENT. NO.: 178- SEC. DE IDENT. NO. : 219. 14. El uso de la reivindicación 10, en donde el ARN de interferencia es un shARN. 15. El uso de la reivindicación 10, en donde la composición se prepara para administración tópica, intravítrea, transesclerótica, periocular, conjuntival, subtenon, intracameral, subretinal, subconjuntival, retrobulbar, o intracanalicular. 16. El uso de la reivindicación 10, en donde la composición se prepara para la administración mediante expresión in vivo de un vector de expresión capaz de expresar el ARN de interferencia. 17. El uso de la reivindicación 10, en donde el ARN de interferencia es un miARN . 18. El uso de la reivindicación 10, en donde el ARN de interferencia es un siARN. 19. Un método para atenuar la expresión de una primera variante del ARNm objetivo en hipertensión ocular sin atenuar la expresión de una segunda variante del ARNm objetivo en hipertensión ocular en un sujeto, que comprende: administrar al sujeto una composición que comprende una cantidad efectiva de ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y un portador farmacéuticamente aceptable, el ARN de interferencia comprende : una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de la primera variante, en donde la expresión de la primera variante del ARNm se atenúa sin atenuar la expresión de la segunda variante del ARNm, y, en donde la primera variante del ARNm objetivo es la SEC. DE IDENT. NO.: 101, y la segunda variante del ARNm objetivo es la SEC. DE IDENT. NO.:134. 20. Un método para atenuar la expresión de una primera variante del ARNm objetivo en hipertensión ocular sin atenuar la expresión de una segunda variante del ARNm objetivo en hipertensión ocular en un sujeto, que comprende: administrar al sujeto una composición que comprende una cantidad efectiva de ARN de interferencia que tiene una longitud de 19, a 49 nucleótidos y un portador farmacéuticamente aceptable, el ARN de interferencia comprende : una región de por lo menos 13 nucleótidos contiguos que tiene por lo menos 90% de complementariedad de secuencia a, o por lo menos 90% de identidad de secuencia con, los 13 penúltimos nucleótidos del extremo 3' de la primera variante, en donde la expresión de la primera variante del ARNm se atenúa sin atenuar la expresión de la segunda variante del ARNm, y, en donde la primera variante del ARNm objetivo es la SEC. DE IDENT. NO.: 134, y la segunda variante del ARNm objetivo es la SEC. DE IDENT. NO.rlOl. 21. Un método para atenuar la expresión de un ARNm objetivo en hipertensión ocular de un sujeto, que comprende: administrar al sujeto una composición que comprende una cantidad efectiva de ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y un portador farmacéuticamente aceptable, el ARN de interferencia comprende: una hebra de nucleótidos sentido, una hebra de nucleótidos antisentido, y una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos; en donde la hebra antisentido se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción de ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:l, SEC. DE IDENT. NO.:2^ SEC. DE IDENT. NO.: 101, o SEC. DE IDENT. NO.: 134, y tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rl, SEC. DE IDENT. N0.:2, SEC. DE IDENT. NO.rlOl, o SEC. DE IDENT. N0.:134, respectivamente, en donde la expresión de un ARNm objetivo en hipertensión ocular se atenúa. 22. El método de la reivindicación 21, en donde el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica anhidrasa carbónica II, y la hebra antisentido se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción de ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rl y tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rl. 23. El método de la reivindicación 21, en donde el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica anhidrasa carbónica IV, y , la hebra antisentido se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción de ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 2 y tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:2. 24. El método de la reivindicación 21, en donde el ARNm objetivo en hipertensión ocular codifica anhidrasa carbónica XII, y la hebra antisentido se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción de ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rlOl o SEC. DE IDENT. NO. r 134 y tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rlOl o SEC. DE IDENT. NO. r 134, respectivamente. 25. El método de la reivindicación 21, en donde la hebra antisentido se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rl que comprende el nucleótido 232, 527, 721, 728, 809, 810, 855, 856, 921, 1139, 506, 547, 548, 740, 911, 1009, 1140, 1149, 1150, 1151, 1188, 1194, 1195, 1223, 1239, 1456, 1457, 1458, 100, 158, 166, 247, 286, 318, 322, 328, 371, 412, 482, 504, 505, 541, 734, 772, 777, 814, 972, 998, 1232, 317, o 401. 26. El método de la reivindicación 21, en donde la hebra antisentido se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.r2 que comprende el nucleótido 213, 252, 258, 266, 399, 457, 463, 490, 595, 1064, 109, 112, 125, 126, 150, 261, 265, 280, 398, 453, 459, 462, 467, 492, 534, 785, 801, 825, 827, 876, 1003, o 1012. 27. El método de la reivindicación 21, en donde la hebra antisentido , se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la , SEC. DE IDENT. NO.rlOl que comprende el nucleótido 191, 23-9, 274, 275, 341, 389, 412, 413, 423, 687, 689, 695, 710, 791, 792, 794, 983, 993, 994, 995, 691, 1039, 1568, 2326, 2332, 2425, 2433, 2844, 2845, 2880, 2884, 2891, 2954, 2955, 2956, 2957, 2964, 2965, 3006, 3007, 3012, ó 3026. 28. El método de la reivindicación 21, en donde la hebra antisentido se diseña para dirigirse a un ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO. r 134 que comprende el nucleótido 687, 1535, 2293, 2299, 2392, 2400, 2811, 2812, 2847, 2851, 2858, 2921, 2922, 2923, 2924, 2931, 2932, 2973, 2974, 2979, ó 2993. 29. El método de la reivindicación 21, que además comprende administrar al sujeto un segundo ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos, y que comprende una hebra de nucleótidos sentido, una hebra de nucleótidos antisentido, y una región de complementariedad por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos; en donde la hebra antisentido del segundo ARN de interferencia se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una segunda porción de ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rl, SEC. DE IDENT. NO . r 2 , SEC. DE IDENT. NO.rlOl, o SEC. DE IDENT. NO.rl34, y la hebra antisentido tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la segunda porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rl, SEC. DE IDENT. NO.r2, SEC. DE IDENT. NO.rlOl, o SEC. DE IDENT. NO.:134, respectivamente. 30. El método de la reivindicación 21, en donde la hebra de nucleótidos sentido y la hebra de nucleótidos antisentido se conectan por una secuencia de nucleótidos en bucle. 31. El uso, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la hipertensión ocular en un sujeto, de una composición que comprende una cantidad efectiva de ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y un portador farmacéuticamente aceptable, el ARN de interferencia comprende: una hebra de nucleótidos sentido, una hebra de nucleótidos antisentido, y una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos; en donde la hebra antisentido se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción de ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rl, SEC. DE IDENT. NO.: 2, SEC. DE IDENT. NO.: 101, o SEC. DE IDENT. NO.: 134 y tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rl, SEC. DE IDÉNT. NO.r2, SEC. DE IDENT. NO.rlOl, o SEC. DE IDENT. NO.rl34, respectivamente. 32. El uso de la reivindicación 31, en donde la hebra de nucleótidos sentido y la hebra de nucleótidos antisentido se conectan por una secuencia de nucleótidos en bucle. 33. El uso de la reivindicación 31, en donde la composición se prepara para administración tópica, intravítrea, transesclerótica, periocular, conjuntival, subtenon, intracameral, subretinal, subconjuntival, retrobulbar, o intracanalicular. 34. El uso de la reivindicación 31, en donde la composición se prepara para la administración mediante expresión in vivo de un vector de expresión capaz de expresar el ARN de interferencia. 35. Un método para atenuar la expresión de un ARNm objetivo en hipertensión ocular de un sujeto, que comprende: administrar al sujeto una composición que comprende una cantidad efectiva de ARN de interferencia de hebra sencilla que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y un portador farmacéuticamente aceptable, en donde el ARN de interferencia de hebra sencilla se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción de ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:l que comprende el nucleótido 232, 527, 721, 728, 809, 810, 855, 856, 921, 1139, 506, 547, 548, 740, 911, 1009, 1140, 1149, 1150, 1151, 1188, 1194, 1195, 1223, 1239, 1456, 1457, 1458, 100, 158, 166, 247, 286, 318, 322, 328, 371, 412, 482, 504, 505, 541, 734, 772, 777, 814, 972, 998, 1232, 317, ó 401 y el ARN de interferencia tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta con la porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rl; o en donde el ARN de interferencia de hebra sencilla se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción de ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 2 que comprende el nucleótido 213, 252, 258, 266, 399, 457, 463, 490, 595, 1064, 109, 112, 125, 126, 150, 261, 265, 280, 398, 453, 459, 462, 467, 492, 534, 785, 801, 825, 827, 876, 1003, ó 1012, y el ARN de interferencia tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.:2; o en donde el ARN de interferencia de hebra sencilla se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción de ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.rlOl que comprende el nucleótido 191, 239, 274, 275, 341, 389, 412^ 413, 423, 687, 689, 695, 710, 791, 792, 794, 983, 993, 994, 995, 691, 1039, 1,568, 2326, 2332, 2425, 2433, 2844, 2845, 2880, 2884, 2891, 12954, 2955, 2956, 2957, 2964, 2965, 3006, 3007, 3012, ó 3026, y el ARN de interferencia tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO. rlOl; o en donde el ARN de interferencia de hebra sencilla se hibrida bajo condiciones fisiológicas con una porción de ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO.: 134 que comprende el nucleótido 687, 1535, 2293, 2299, 2392, 2400, 2811, 2812, 2847, 2851, 2858, 2921, 2922, 2923, 2924, 2931, 2932, 2973, 2974, 2979, ó 2993, y el ARN de interferencia tiene una región de complementariedad contigua por lo menos casi perfecta de por lo menos 19 nucleótidos con la porción de hibridación del ARNm que corresponde a la SEC. DE IDENT. NO. rl34; en donde la expresión de un ARNm objetivo en hipertensión ocular se atenúa por consiguiente. 36. El método de la reivindicación 35, en donde el ARN de interferencia es un miARN. 37. El método de la reivindicación 35, en donde el ARN de interferencia es un siARN. 38. Una composición que comprende ARN de interferencia que tiene una longitud de 19 a 49 nucleótidos y que tiene una secuencia de nucleótidos de cualquiera de la SEC. DE IDENT. NO.' :8, SEC. DE IDENT. NO.: 14- SEC. DE IDENT. NO.:32, SEC. DE IDENT. NO.:83- SEC. DE IDENT. NO.rlOO, SEC. DE IDENT. NO.: 102- SEC. DE IDENT. NO.: 122, SEC. DE IDENT. NO.:135- SEC. DE IDENT. NO.:219, SEC. DE IDENT. NO.:720, y SEC. DE IDENT. NO.:721, o un complemento de las mismas, y un portador farmacéuticamente aceptable. 39. La composición de la reivindicación 38, en donde el ARN de interferencia es un shARN. 40. La composición de la reivindicación 38, en donde el ARN de interferencia es un siARN. 41. La composición de la reivindicación 38, en donde el ARN de interferencia es un miARN .
MX2007009200A 2005-02-01 2006-02-01 Inhibicion mediada por arni de objetivos oculares. MX2007009200A (es)

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