JP2008528637A - 眼標的のＲＮＡｉ媒介型阻害 - Google Patents

眼標的のＲＮＡｉ媒介型阻害 Download PDF

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Abstract

ＲＮＡ干渉により、高眼圧症の標的ｍＲＮＡ発現の阻害がもたらされ、開放隅角緑内障又は高眼圧症の患者における上昇した眼内圧を低下させることが可能となる。高眼圧症の標的には、カルボニックアンヒドラーゼＩＩ、ＩＶ及びＸＩＩ；β１−及びβ２−アドレナリン作動性受容体；アセチルコリンエステラーゼ；Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ；並びにＮａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体が含まれる。高眼圧症は、本発明の干渉ＲＮＡを投与することによって処置される。

Description

（発明の分野）
本発明は、緑内障において、具体的には原発性開放隅角緑内障に関して、高眼圧症標的の発現を阻害する干渉ＲＮＡ組成物の分野に関する。
（発明の背景）
緑内障は、特定の臨床的特徴を共通して有する視神経障害の不均一な群である。緑内障における視覚の喪失は、視野における特徴的な変化、神経線維層の欠陥、及び視神経乳頭（ＯＮＨ）の進行性の杯形成によって臨床的に診断される神経網膜における網膜神経節細胞の選択的な死に帰因する。緑内障の発症における主要な危険性因子の一つに、高眼圧症（眼内圧（ＩＯＰ）の上昇）の存在がある。眼の形状を維持し、血管がない角膜や水晶体への房水の流れを可能にする圧力勾配をもたらすには、適度な眼内圧が必要である。又、ＩＯＰレベルは、ＩＯＰ低下薬物から利益を受ける患者によって明らかにされるように、正常眼圧緑内障（ＮＴＧ）の病理発生にも関与する場合がある。ＮＴＧ患者のＩＯＰ測定値に対して中心角膜厚の調節が行われると、これらの患者の多くは高眼圧であることが分かることがある。
緑内障に伴うＩＯＰの上昇は、前眼房の虹彩角膜角に位置する小さな特殊組織である小柱網（ＴＭ）における房水流出抵抗の上昇に帰因する。ＴＭの緑内障性の変化には、ＴＭ細胞における喪失や、タンパク質性プラーク様物質を含む細胞外デブリスの沈着及び蓄積が含まれる。更に、緑内障性ＯＮＨにおける変化も生じる。緑内障性の眼では、ＯＮＨグリア細胞における形態学的及び運動性変化がみられる。又、ＩＯＰの上昇及び／又は一過性の虚血性傷害に応答して、ＯＮＨ細胞外マトリックスの組成における変化や、グリア細胞及び網膜神経節細胞の軸索の形態学的変化がみられる。
原発性緑内障は、解剖学又は生理学的な基礎を有する眼内液の流れの乱れから生じる。二次的な緑内障は、眼の傷害若しくは外傷、又は既に罹患している疾患により生じる。原発性開放隅角緑内障（ＰＯＡＧ）は、慢性又は単性緑内障としても知られており、全ての原発性緑内障の９０パーセントを占める。ＰＯＡＧは、眼からの排液に対する異常に高い抵抗をもたらす小柱網の変性を特徴とする。そのような抵抗性の結果、眼によって正常に産生される分泌液を、増大した抵抗を超えて流動させるためにＩＯＰの上昇が必要となる。
現在の抗緑内障治療法には、房水形成抑制剤若しくはブドウ膜強膜からの流出を高める薬剤の使用によるＩＯＰの低下、レーザー線維柱帯形成術、又は排液を改善するためのろ過手術である線維柱帯切除術が含まれる。抗緑内障薬の療法では、様々な望ましくない副作用が示されている。例えば、ピロカルピン等の縮瞳薬では、視界のぼやけやその他の負の視覚的副作用が引き起こされる可能性がある。全身投与されるカルボニックアンヒドラーゼ阻害剤（ＣＡＩ）でも、悪心、消化不良、疲労及び代謝性アシドーシスが引き起こされる可能性がある。更に、特定のベータ遮断剤は、肺組織のベータ−２受容体に対する作用に起因する肺の重篤な副作用に関連することが多くなってきている。交感神経様作用薬では、頻脈、不整脈及び高血圧が引き起こされる。このような負の副作用は、患者のコンプライアンスの低下や、治療の終了にもつながる場合ある。その上、現在のＩＯＰ低下療法は比較的効力が長続きしないため、毎日繰り返し服用しなければならず、次第に効力が低下していく場合もある。
このように緑内障における高眼圧症の重要性や、従来の処置法では不十分であることを鑑みると、高眼圧症の進行の根本的原因に対処する処置法を改善することが望ましいと考えられる。
（発明の要旨）
本発明は、高眼圧症の標的ｍＲＮＡの発現を封じ、それによって開放偶角緑内障又は高眼圧症患者の眼内圧を低下させる干渉ＲＮＡを対象とする。高眼圧症の標的には、カルボニックアンヒドラーゼＩＩ、ＩＶ及びＸＩＩ；β１−及びβ２−アドレナリン作動性受容体；アセチルコリンエステラーゼ；Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ；並びにＮａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体が含まれる。本発明の干渉ＲＮＡは、開放偶角緑内障又は高眼圧症患者の処置に有用である。
本発明の一実施形態では、カルボニックアンヒドラーゼＩＩ、ＩＶ又はＸＩＩ；β１−又はβ２−アドレナリン作動性受容体；アセチルコリンエステラーゼ；Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ；又はＮａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体のｍＲＮＡといった高眼圧症の標的ｍＲＮＡの発現を被験体において減少させる方法が提供される。この方法は、長さ１９〜４９ヌクレオチドの干渉ＲＮＡの有効量、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を被験体に投与する工程を包含する。投与は、ヒトにおいて高眼圧症標的の発現を減少させるために被験体の眼に対して行われる。
本発明の一実施形態において、干渉ＲＮＡは、センスヌクレオチド鎖、アンチセンスヌクレオチド鎖、及び少なくとも１９ヌクレオチドの少なくともほぼ完全な連続した相補性の領域を含む。更に、アンチセンス鎖は、カルボニックアンヒドラーゼＩＩ及びＩＶ；β１−及びβ２−アドレナリン作動性受容体；アセチルコリンエステラーゼ（ＡＣＨＥ）改変体Ｅ４−Ｅ５；Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのα２ポリペプチド；Ｎａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体ＮＫＣＣ２（ＳＬＣ１２Ａ１）、カルボニックアンヒドラーゼＸＩＩ改変体１、アセチルコリンエステラーゼ改変体Ｅ４−Ｅ６、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのα１ポリペプチド改変体１及び改変体２、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのα３ポリペプチド、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのα４ポリペプチドの改変体１及び改変体２、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのβ１ポリペプチドの改変体１及び改変体２、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのβ２ポリペプチド、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのβ３ポリペプチド、Ｎａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体ＮＫＣＣ１（ＳＬＣ１２Ａ２）、及びカルボニックアンヒドラーゼＸＩＩ改変体２をそれぞれコードするセンスｃＤＮＡ配列である、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１０１、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３又は配列番号１３４に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズする。アンチセンス鎖は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１０１、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３又は配列番号１３４にそれぞれ対応するｍＲＮＡのハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有する。そのような組成物の投与により、被験体の高眼圧症の標的ｍＲＮＡの発現を減少させることができる。
一実施形態において、高眼圧症の標的ｍＲＮＡは、カルボニックアンヒドラーゼＩＩ、ＩＶ又はＸＩＩをコードし、アンチセンス鎖は、配列番号１、配列番号２、配列番号１０１又は配列番号１３４に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ配列番号１、配列番号２、配列番号１０１又は配列番号１３４にそれぞれ対応するｍＲＮＡのハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有する。
別の実施形態において、高眼圧症の標的ｍＲＮＡは、β１−又はβ２−アドレナリン作動性受容体をコードし、アンチセンス鎖は、配列番号３又は配列番号４に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ配列番号３又は配列番号４にそれぞれ対応するｍＲＮＡのハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有する。
更なる実施形態において、高眼圧症の標的ｍＲＮＡは、アセチルコリンエステラーゼをコードし、アンチセンス鎖は、配列番号５又は配列番号１２３に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ配列番号５又は配列番号１２３にそれぞれ対応するｍＲＮＡのハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有する。
更に別の実施形態において、高眼圧症の標的ｍＲＮＡは、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅをコードし、アンチセンス鎖は、配列番号６、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１又は配列番号１３２に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ配列番号６、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１又は配列番号１３２にそれぞれ対応するｍＲＮＡのハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有する。
更なる実施形態において、高眼圧症の標的ｍＲＮＡは、Ｎａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体をコードし、アンチセンス鎖は、配列番号７又は配列番号１３３に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ配列番号７又は配列番号１３３にそれぞれ対応するｍＲＮＡのハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有する。
本発明の一実施形態において、干渉ＲＮＡは、ヌクレオチド２３２、５２７、７２１、７２８、８０９、８１０、８５５、８５６、９２１、１１３９、５０６、５４７、５４８、７４０、９１１、１００９、１１４０、１１４９、１１５０、１１５１、１１８８、１１９４、１１９５、１２２３、１２３９、１４５６、１４５７、１４５８、１００、１５８、１６６、２４７、２８６、３１８、３２２、３２８、３７１、４１２、４８２、５０４、５０５、５４１、７３４、７７２、７７７、８１４、９７２、９９８、１２３２、３１７又は４０１を含む、配列番号１に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている。
本発明の別の実施形態において、干渉ＲＮＡは、ヌクレオチド２１３、２５２、２５８、２６６、３９９、４５７、４６３、４９０、５９５、１０６４、１０９、１１２、１２５、１２６、１５０、２６１、２６５、２８０、３９８、４５３、４５９、４６２、４６７、４９２、５３４、７８５、８０１、８２５、８２７、８７６、１００３又は１０１２を含む、配列番号２に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている。
本発明の更なる実施形態において、干渉ＲＮＡは、ヌクレオチド１９１、２３９、２７４、２７５、３４１、３８９、４１２、４１３、４２３、６８７、６８９、６９５、７１０、７９１、７９２、７９４、９８３、９９３、９９４、９９５、６９１、１０３９、１５６８、２３２６、２３３２、２４２５、２４３３、２８４４、２８４５、２８８０、２８８４、２８９１、２９５４、２９５５、２９５６、２９５７、２９６４、２９６５、３００６、３００７、３０１２又は３０２６を含む、配列番号１０１に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている。
別の実施形態において、干渉ＲＮＡは、ヌクレオチド６８７、１５３５、２２９３、２２９９、２３９２、２４００、２８１１、２８１２、２８４７、２８５１、２８５８、２９２１、２９２２、２９２３、２９２４、２９３１、２９３２、２９７３、２９７４、２９７９又は２９９３を含む、配列番号１３４に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている。
本発明の別の実施形態では、ヌクレオチド４６８、５２３、７９９、１５６３、１５６５、１５６９、１５９３、１６１３、１６１４、１６２６、３１０、３２２、７２６、７６９、７７２、８０１、８０２、１５０１、１５７６、１５７７、１５７９、１５８０、１５８１、１５８６、１５９０、１５９２、１５９４、１６１５、１６１６、１６３２、１６３３又は１６５４を含む、配列番号３に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計された干渉ＲＮＡが提供される。
本発明の更なる実施形態では、ヌクレオチド３２９、３７５、１０３１、１０４６、１１４９、１１６３、１３７１、１４０１、１４２６、１８８０、２８３、６０７、６０８、６０９、６１９、６２３、７２２、８５７、１０３７、１０９１、１１１５、１１２４、１１３６、１１３７、１１５１、１１６４、１３９３、１３９４、１３９５、１４０６、１４０７、１４２７、１４２８、１４２９、１４４２、１７２５、１７２６、１７５６、１７５７、１７５８、１７６７、１７９０、１７９１、１７９２、１７９３、１８０３、１８６１、１８６９、１９７１、１９７２又は１９７９を含む、配列番号４に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計された干渉ＲＮＡが提供される。
本発明の別の方法において、干渉ＲＮＡは、ヌクレオチド１８７５、１８９０、１８９１、２０１１、２０１２、２１３３又は２１３４を含む、配列番号１２３に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている。
本発明の別の実施形態では、ヌクレオチド３６６、３７０、３８４、３８５、５２５、５８８、７６８、１０４５、１０４６、１０６１、１０９０、１２３２、１３１４、１３１６、１４６０、１４６１、１４６２、１５２８、１６０７、１７０５、１７１３、３８２、３９３、３９７、６２２、１１３１、１４５９、１５３０、２２５１、２８８５、２８８６、３８６、１２３１、１３１５、２０４７、２０４９、２０５３、２０５５、２０５７、２１２５、２１２６、２１２７、２２５０、２２５３、２２５８、２２６０、２３１８、２３９５、２３９７、２４０４、２４０５、２６４３、２６４５又は２８８７を含む、配列番号５に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計された干渉ＲＮＡが提供される。
更なる実施形態において、干渉ＲＮＡは、ヌクレオチド２２０８、２２７５、２３０７、２５２６、２５３８、２５９２、２６２８、２９７９、２９８５、３０９３、３４７４、３５０４、３５０５、３５０６、３５１８、３４３、４４２、７００、７０７、８１１、９０７、１０５９、１３６３、１５９４、１６６２、１７５８、１７６０、１８９６、２０３７又は２１４７を含む、配列番号１２４に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている。
更に別の実施形態において、干渉ＲＮＡは、ヌクレオチド４３６、４４１、４４３、５５２、６１７、７０１、７０２、８３２、２２０４、２２９１又は２４９５を含む、配列番号１２５に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている。
本発明の更なる実施形態では、ヌクレオチド４７１、１９９０、３０８０、３７９７、４０３７、４０９３、４２２５、４３２３、５２１３、５２８５、２１４、４６７、４７０、４７２、４７３、６３２、８２５、９４６、１６９３、１７６７、１７６８、２１５７、２２６３、２５８９、２５９０、２７６５、２９８８、３０９４、３１４４、３１４５、３３４４、３３４５、３４１８、３６６６、３８２８、３８５０、４０４０、４０４１、４０６１、４８８２、４８９４、４９００、５０４０、５１１４、５１１５、５１２８、５１２９、５２５３、５２９６、５３７５、５３８４又は５３８５を含む、配列番号６に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計された干渉ＲＮＡが提供される。
本発明の別の実施形態において、干渉ＲＮＡは、ヌクレオチド２４０、２７２、３６２、１８３６、１８５１、２１０３、２１３７、２１３８、２１３９、２１５７、２１５８、２１６０、２４２５、２５８０、２６０１、２６４６、２６５０、２７９４、２８０３、３１１６、３１２４、３１２６、３１２９又は３３７７を含む、配列番号１２６に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている。
本発明の更に別の実施形態において、干渉ＲＮＡは、ヌクレオチド１１３、６１２、７０２、８３３、１１０１、１７３２、１７３３、１８３６、２０７０、２０７１、２１４３、２３２８、２４７５、２８６１、２８６２、２９５２、３２０３、３２８１、３３７７、３３７９、３４７０、３４７１、３５５４、３６１４、３６１５、３６１６、３６１７、３６２５、３６２６、３６４２、３６４６、３６４７、３６５３、３６５５、３７９７、３８０１、３８０３、３８０９又は３８１０を含む、配列番号１２７に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている。
別の実施形態において、干渉ＲＮＡは、ヌクレオチド１２６、２５１、２５２、２５３、３３１、４２７、４２９、５２０、５２１、５３０、６０１、６０２、６０３、６０４、６６４、６６５、６６６、６６７、６７５、６７６、６９２、６９６、６９７、７０２、７０３、７０５、７０７、８４７、８５１、８５３、８５９又は８６０を含む、配列番号１２８に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている。
更に別の実施形態において、干渉ＲＮＡは、ヌクレオチド１０９６、１０９９、１１３０、１１３１、１１６７、１２９９、１４４１、１４５０、１４５１、１４５２、１５６４、１７４６、１７５０、１７５１、１７５２、１７９５、２０３、２０４、２１４、２２２、２２４、２２５、２２６、３８０、５２５、５９１、６１２、６１３、６１５、６３５、６３６、６６３、６６４、６６９、６９９、７６５、７９０、８３９、８４０、８４１、９００、９０９、９３３又は９４７を含む、配列番号１２９に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている。
別の実施形態において、干渉ＲＮＡは、ヌクレオチド１０６３、１１０２、１１０６、１１０７、１１０８、１１０９、１１１１又は１１５１を含む、配列番号１３０に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている。
別の実施形態において、干渉ＲＮＡは、ヌクレオチド６５３、６５４、７７１、７７３、８４１、８４９、８５３、９１７、９１８、９２６、９２７、９３１、９８１、９８３、９８４、９９６、９９８、１０２２、１０２３、１１６０、１２１４、１３５５、１３５６、１３８１、１３９４、１４２５、１４７４、１５５０、１６２０、１７０７、１７４０、１７５３、１８２５、１９５６、１９６５、２５９８、２５９９、２６０８、２８２８、２８２９、２８８８、３０１２又は３２５１を含む、配列番号１３１に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている。
本発明の別の実施形態において、干渉ＲＮＡは、ヌクレオチド２９２、４３４、４３８、４５７、４５９、４８８、４９０、４９８、４９９、５９２、６３９、７２３、７７４、７７５、７８８、８５７、８５８、９１０、９１１、９３０、９３１、９３２、１００９、１０１０、１０２３、１０２４、１１１１、１１４６、１１４７、１２２０、１２４６、１３２１、１３２５、１３２６、１３２７、１３３１、１４３７、１５４８、１５７１、１７８５、１７８６又は１７８７を含む、配列番号１３２に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている。
本発明の別の実施形態では、ヌクレオチド６７５、９７４、１３７３、１７８０、２１０２、２１５１、２３１５、２５４２、２６０９、３１９７、６７、７１、７３、３５３、４０５、８６４、９１１、９１２、９１３、１４０９、１７４８、１８１１、１９３５、１９３７、１９９３、２０１２、２３４６、２３８８、２４３７、２５８６、３００７、３００８、３０２２、３１３０、３２１０、３２３７又は３２７１を含む、配列番号７に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計された干渉ＲＮＡが提供される。
本発明の別の実施形態では、ヌクレオチド７４８、７４９、７５３、１１１９、１１６９、１４９９、１５０９、１８２０、２０８１、２１１８、２１４７、２６１５、２６４４、２６５９、２６６３、２６７１、２６７２、２７９３、２８１２、２９１４、２９４８、３０４４、３３３４、３３９１、３４８０、３５２０、３５４９、３６３９、３８４０、３９４１、３９４４、４００１、４９９５、４９９７、５１４１、５１４３、５２４９、５３７５、５８３４、５８５２、５９８１又は６６７８を含む、配列番号１３３に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計された干渉ＲＮＡが提供される。
本発明は更に、第１の干渉ＲＮＡに加えて、第２の干渉ＲＮＡを被験体に投与することを提供する。この方法は、長さ１９〜４９ヌクレオチドで、且つセンスヌクレオチド鎖、アンチセンスヌクレオチド鎖、及び少なくとも１９ヌクレオチドの少なくともほぼ完全な相補性の領域を含む第２の干渉ＲＮＡを被験体に投与する工程を包含し；ここで第２の干渉ＲＮＡのアンチセンス鎖は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１０１、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３又は配列番号１３４に対応するｍＲＮＡの第２の部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つアンチセンス鎖は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１０１、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３又は配列番号１３４にそれぞれ対応するｍＲＮＡの第２のハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有する。第２の干渉ＲＮＡは、第１の干渉ＲＮＡと同じ標的ｍＲＮＡを標的化する場合もあれば、異なるｍＲＮＡを標的化する場合もある。更に、第３、第４又は第５等の干渉ＲＮＡが同様の様式で投与される場合がある。
本発明の更なる実施形態は、治療を必要とする被験体において高眼圧症を処置する方法である。この方法は、長さ１９〜４９ヌクレオチドの干渉ＲＮＡの有効量、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を被験体の眼に投与する工程を包含し、この場合、干渉ＲＮＡは、センスヌクレオチド鎖、アンチセンスヌクレオチド鎖、及び少なくとも１９ヌクレオチドの少なくともほぼ完全な連続した相補性の領域を含む。アンチセンス鎖は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１０１、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３又は配列番号１３４に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１０１、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３又は配列番号１３４にそれぞれ対応するｍＲＮＡのハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有する。これにより高眼圧症が処置される。
本発明の別の実施形態は、長さ１９〜４９ヌクレオチドの一本鎖の干渉ＲＮＡの有効量、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を被験体に投与する工程を包含する、被験体において高眼圧症の標的ｍＲＮＡの発現を減少させる方法である。高眼圧症標的の発現を減少させるため、一本鎖の干渉ＲＮＡは、アンチセンス鎖について上に示した配列識別子及びヌクレオチド位置に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズする。
本発明の別の実施形態は、長さ１９〜４９ヌクレオチドの一本鎖の干渉ＲＮＡの有効量、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を被験体に投与する工程を包含する、被験体において高眼圧症の標的ｍＲＮＡの発現を減少させる方法であって、干渉ＲＮＡが、以下の通り、配列番号８、配列番号１４〜配列番号１００、配列番号１０２〜配列番号１２２、配列番号１３５〜配列番号７１７、配列番号７２０及び配列番号７２１のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む方法である。
高眼圧症の標的ｍＲＮＡがカルボニックアンヒドラーゼｍＲＮＡをコードする場合、干渉ＲＮＡは、配列番号８、配列番号１４〜配列番号３２、配列番号８３〜配列番号１００、配列番号１０２〜配列番号１２２、配列番号１３５〜配列番号２１９、配列番号７２０及び配列番号７２１のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む。
高眼圧症の標的ｍＲＮＡがβ−アドレナリン作動性受容体ｍＲＮＡをコードする場合、干渉ＲＮＡは、配列番号３３〜配列番号５２、配列番号２２０〜配列番号２８２のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む。
高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＡＣＨＥ ｍＲＮＡをコードする場合、干渉ＲＮＡは、配列番号５３〜配列番号６２及び配列番号２８３〜配列番号３３３のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む。
高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＡＴＰ１Ａ１ ｍＲＮＡをコードする場合、干渉ＲＮＡは、配列番号３３４〜配列番号３７４のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む。
高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＡＴＰ１Ａ２ ｍＲＮＡをコードする場合、干渉ＲＮＡは、配列番号６３〜配列番号７２及び配列番号３７５〜配列番号４１６のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む。
高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＡＴＰ１Ａ３ ｍＲＮＡをコードする場合、干渉ＲＮＡは、配列番号４１７〜配列番号４４０のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む。
高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＡＴＰ１Ａ４ ｍＲＮＡをコードする場合、干渉ＲＮＡは、配列番号４４１〜配列番号５１１のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む。
高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＡＴＰ１Ｂ１ ｍＲＮＡをコードする場合、干渉ＲＮＡは、配列番号５１２〜配列番号５６３のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む。
高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＡＴＰ１Ｂ２ ｍＲＮＡをコードする場合、干渉ＲＮＡは、配列番号５６４〜配列番号６０６のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む。
高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＡＴＰ１Ｂ３ ｍＲＮＡをコードする場合、干渉ＲＮＡは、配列番号６０７〜配列番号６４８のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む。
高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＳＬＣ１２Ａ１ ｍＲＮＡをコードする場合、干渉ＲＮＡは、配列番号７３〜配列番号８２及び配列番号６４９〜配列番号６７５のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む。
高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＳＬＣ１２Ａ２ ｍＲＮＡをコードする場合、干渉ＲＮＡは、配列番号６７６〜配列番号７１７のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む。
本発明の更なる実施形態において、連続したヌクレオチドの領域は、配列識別子の配列の３’末端の末位２番目からの１４ヌクレオチドに対する少なくとも８５％の配列相補性又は少なくとも８５％の配列同一性をそれぞれ有する、少なくとも１４個の連続したヌクレオチドの領域である。本発明の更に別の実施形態において、連続したヌクレオチドの領域は、配列識別子の配列の３’末端の末位２番目からの１５、１６、１７又は１８ヌクレオチドに対する少なくとも８０％の配列相補性又は少なくとも８０％の配列同一性をそれぞれ有する、少なくとも１５個、１６個、１７個又は１８個の連続したヌクレオチドの領域である。
１９〜４９ヌクレオチドの長さを有し、且つ配列番号８、配列番号１４〜配列番号１００、配列番号１０２〜配列番号１２２、配列番号１３５〜配列番号７１７、配列番号７２０及び配列番号７２１のいずれか１つのヌクレオチド配列又はその相補体を含む干渉ＲＮＡ、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物は、本発明の実施形態である。一実施形態において、干渉ＲＮＡは単離されている。「単離されている」という用語は、干渉ＲＮＡがその完全な天然環境にないことを意味する。
本発明の別の実施形態は、治療を必要とする被験体において高眼圧症を処置する方法であり、この場合、この方法は、長さ１９〜４９ヌクレオチドの干渉ＲＮＡの有効量、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を被験体の眼に投与する工程を包含し、干渉ＲＮＡは、配列番号８、配列番号１４〜配列番号１００、配列番号１０２〜配列番号１２２、配列番号１３５〜配列番号７１７、配列番号７２０及び配列番号７２１のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含み、これにより高眼圧症が処置される。
被験体において高眼圧症の標的ｍＲＮＡの第２の改変体の発現を減少させることなく高眼圧症の標的ｍＲＮＡの第１の改変体の発現を減少させる方法は、本発明の更なる実施形態である。この方法は、長さ１９〜４９ヌクレオチドの干渉ＲＮＡの有効量、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を被験体に投与する工程を包含し、干渉ＲＮＡは、第１の改変体の３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含み、第１の改変体ｍＲＮＡの発現は、第２の改変体ｍＲＮＡの発現を減少させることなく減少し、且つそれぞれ、第１の改変体標的ｍＲＮＡは、配列番号１０１、配列番号５、配列番号１２４、配列番号１２７又は配列番号１２９であり、第２の改変体標的ｍＲＮＡは、配列番号１３４、配列番号１２３、配列番号１２５、配列番号１２８又は配列番号１３０である。
上述の方法の更なる実施形態において、それぞれ、第１の改変体標的ｍＲＮＡは、配列番号１３４、配列番号１２３、配列番号１２５、配列番号１２８又は配列番号１３０であり、第２の改変体標的ｍＲＮＡは、配列番号１０１、配列番号５、配列番号１２４、配列番号１２７又は配列番号１２９である。
高眼圧症ｍＲＮＡの発現を減少させるための医薬品の調製における、本明細書に記載されるようないずれかの実施形態の使用も又、本発明の実施形態である。
（発明の詳細な説明）
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、遺伝子発現を封じるために二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が使用されるプロセスである。理論により拘束されることを望むわけではないが、ＲＮＡｉは、長いｄｓＲＮＡがＲＮａｓｅＩＩＩ様酵素（ダイサー）によって小さな干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）に切断されることから始まる。ｓｉＲＮＡは、通常の場合長さが約１９〜２８ヌクレオチド、又は２０〜２５ヌクレオチド、又は２１〜２２ヌクレオチドであり、多くの場合２ヌクレオチドの３’突出、並びに５’リン酸末端及び３’ヒドロキシル末端を含有するｄｓＲＮＡである。ｓｉＲＮＡの一方の鎖が、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）として知られるリボヌクレオタンパク質複合体に取り込まれる。ＲＩＳＣはこのｓｉＲＮＡ鎖を使用して、取り込まれたｓｉＲＮＡ鎖に対して少なくとも部分的に相補的であるｍＲＮＡ分子を同定し、その後これらの標的ｍＲＮＡを切断するか、又はそれらの翻訳を阻害する。従って、ＲＩＳＣに取り込まれるｓｉＲＮＡ鎖は、ガイド鎖又はアンチセンス鎖として知られている。もう一方のｓｉＲＮＡ鎖は、パッセンジャー鎖又はセンス鎖として知られており、ｓｉＲＮＡから取り除かれて、標的ｍＲＮＡに対して少なくとも部分的に相同的となる。基本的に、ｓｉＲＮＡのいずれの鎖もＲＩＳＣに取り込まれ、ガイド鎖として機能することができることを、当業者は認識する。しかし、ｓｉＲＮＡの設計（例えば、アンチセンス鎖の５’末端におけるｓｉＲＮＡ二重鎖安定性の低下）により、アンチセンス鎖のＲＩＳＣへの取り込みを助け得る。
ガイド鎖に対して少なくとも部分的に相補的である配列を有するｍＲＮＡの、ＲＩＳＣによる切断は、そのｍＲＮＡの定常状態レベル、及びこのｍＲＮＡによってコードされる対応するタンパク質の定常状態レベルにおける減少をもたらす。或いは、ＲＩＳＣは又、標的ｍＲＮＡの切断を伴うことなく、翻訳抑制によって対応するタンパク質の発現を低下させることも可能である。その他のＲＮＡ分子及びＲＮＡ様分子も又、ＲＩＳＣと相互作用し、遺伝子発現を封じることができる。ＲＩＳＣと相互作用することができるその他のＲＮＡ分子の例には、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、一本鎖ｓｉＲＮＡ、ミクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、及びダイサーと基質の２７ｍｅｒ二重鎖が含まれる。本明細書で使用される「ｓｉＲＮＡ」という用語は、別途記載のない限り、二本鎖の干渉ＲＮＡを指す。ＲＩＳＣと相互作用することができるその他のＲＮＡ様分子の例には、１つ以上の化学的に改変されたヌクレオチド、１つ以上のデオキシリボヌクレオチド、及び／又は１つ以上の非ホスホジエステル結合を含有するＲＮＡ分子が含まれる。本発明の考察として、ＲＩＳＣと相互作用することができ、遺伝子発現におけるＲＩＳＣ媒介型の変化に関わる全てのＲＮＡ又はＲＮＡ様分子は、「干渉ＲＮＡ」と称される。従って、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、及びダイサーと基質の２７ｍｅｒ二重鎖が、「干渉ＲＮＡ」のサブセットである。
本発明の実施形態の干渉ＲＮＡは、標的ｍＲＮＡの切断に対して触媒作用を持つと考えられている。即ち、干渉ＲＮＡは、準化学量論的な量で標的ｍＲＮＡの阻害を行うことができる。従って、アンチセンス療法と比べると、こうした切断条件下で治療効果をもたらすのに必要となる干渉ＲＮＡは著しく少なくなる。
本発明は、高眼圧症の標的ｍＲＮＡの発現を阻害し、それによって開放偶角緑内障又は高眼圧症の患者において眼内圧を低下させるための干渉ＲＮＡの使用に関する。高眼圧症の標的には、カルボニックアンヒドラーゼＩＩ、ＩＶ及びＸＩＩ；β１−及びβ２−アドレナリン作動性受容体；アセチルコリンエステラーゼ；Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅサブユニット；並びにＮａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体が含まれる。本発明によれば、外部から提供されるか又は内因的に発現される干渉ＲＮＡは、眼組織における高眼圧症の標的ｍＲＮＡのサイレンシングをもたらす。
カルボニックアンヒドラーゼは、二酸化炭素の可逆的水和を触媒し、房水形成の調節において役割を果たすと考えられている。カルボニックアンヒドラーゼ阻害剤は、産生される液体の量を減少させることによって眼の圧力を低下させる。カルボニックアンヒドラーゼ阻害剤は、点眼剤（ドルゾラミド、ブリンゾラミド）又は錠剤／カプセル（アセタゾラミド、メタゾラミド）として利用可能である。点眼剤は、錠剤又はカプセルよりも副作用が少なく、多くの患者により良好に許容される。ＡＺＯＰＴ（登録商標）（ブリンゾラミド）眼用懸濁物（１％）は、局所用カルボニックアンヒドラーゼ阻害剤（Ａｌｃｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．［米国テキサス州フォートワース］）である。
眼用β遮断剤は、眼において産生される液体の量を減少させることによって眼の圧力を低下させる。このような薬物は、非選択的ベータ遮断剤（チモロール、レボブノロール、メチプラノロール、カルテオロール）及びβ−１選択的遮断剤（ベタキソロール）という２種類の薬物に分類される。通常の投薬量は、使用される薬物により、各眼に１日１回又は２回、１滴である。この産物の一例には、ＢＥＴＯＰＴＩＣＳ（登録商標）（ベタキソロールＨＣｌ）眼用懸濁物（０．２５％）（Ａｌｃｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．［米国テキサス州フォートワース］）がある。
アセチルコリンエステラーゼの阻害剤は、加水分解に関わる酵素（アセチルコリンエステラーゼ）をブロックすることによってアセチルコリンを受容体部位に保つ。アセチルコリンが受容体に蓄積すると、毛様体筋の収縮（直接作用するコリン作動性アゴニストの作用と類似）によって眼内圧の低下をもたらす。
ウアバイン、一酸化窒素供与体及びエンドセリン等のＮａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ阻害剤は、毛様体突起による房水形成の駆動力となるＮａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅの活性を低下させる。
エタクリン酸等の塩素輸送阻害剤は、房水流出率を向上させるために小柱網の細胞体積を変化させる。
本明細書に記載される核酸は、別途指示のない限り、５’から３’の方向で記載される。本明細書で使用される「核酸」という用語は、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ、又はＤＮＡに存在するプリン若しくはピリミジン塩基（アデニン「Ａ」、シトシン「Ｃ」、グアニン「Ｇ」、チミン「Ｔ」）又はＲＮＡに存在するプリン若しくはピリミジン塩基（アデニン「Ａ」、シトシン「Ｃ」、グアニン「Ｇ」、ウラシル「Ｕ」）を含むそれらの改変形態のいずれかを指す。本明細書に示される干渉ＲＮＡは、「Ｔ」塩基がＲＮＡに天然で存在しないとしても、特に３’末端に「Ｔ」塩基を含む場合がある。「核酸」は「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」という用語を包含し、一本鎖分子又は二本鎖分子を指すことができる。二本鎖分子は、Ａ塩基とＴ塩基との間、Ｃ塩基とＧ塩基との間、及びＡ塩基とＵ塩基との間のワトソン・クリック塩基対形成によって形成される。二本鎖分子の鎖は、互いに部分的な相補性、実質的な相補性又は完全な相補性を有する場合があり、塩基配列の相補性の性質及び程度により結合の強さが異なる二重鎖ハイブリッドを形成する。
ｍＲＮＡ配列は、対応するＤＮＡの配列から容易に推定することができる。例えば、配列番号１は、カルボニックアンヒドラーゼＩＩのｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を提供する。ｍＲＮＡ配列は、「Ｔ」塩基が「Ｕ」塩基で置換されたＤＮＡセンス鎖配列と同一である。
従って、カルボニックアンヒドラーゼＩＩのｍＲＮＡ配列は配列番号１から公知であり、カルボニックアンヒドラーゼＩＶのｍＲＮＡ配列は配列番号２から公知であり、β１−アドレナリン作動性受容体のｍＲＮＡ配列は配列番号３から公知であり、β２−アドレナリン作動性受容体のｍＲＮＡ配列は配列番号４から公知であり、アセチルコリンエステラーゼのスプライス改変体Ｅ４−Ｅ５のｍＲＮＡ配列は配列番号５から公知であり、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ α２のｍＲＮＡ配列は配列番号６から公知であり、Ｎａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体Ａ１のｍＲＮＡ配列は配列番号７から公知であり、カルボニックアンヒドラーゼＸＩＩの改変体１のｍＲＮＡ配列は配列番号１０１から公知であり、アセチルコリンエステラーゼのスプライス改変体Ｅ４−Ｅ６のｍＲＮＡ配列は配列番号１２３から公知であり、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ α１の改変体１のｍＲＮＡ配列は配列番号１２４から公知であり、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ α１の改変体２のｍＲＮＡ配列は配列番号１２５から公知であり、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ α３のｍＲＮＡ配列は配列番号１２６から公知であり、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ α４の改変体１のｍＲＮＡ配列は配列番号１２７から公知であり、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ α４の改変体２のｍＲＮＡ配列は配列番号１２８から公知であり、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ β１の改変体１のｍＲＮＡ配列は配列番号１２９から公知であり、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ β１の改変体２のｍＲＮＡ配列は配列番号１３０から公知であり、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ β２のｍＲＮＡ配列は配列番号１３１から公知であり、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ β３のｍＲＮＡ配列は配列番号１３２から公知であり、Ｎａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体Ａ２のｍＲＮＡ配列は配列番号１３３から公知であり、カルボニックアンヒドラーゼＸＩＩの改変体２のｍＲＮＡ配列は配列番号１３４から公知である。
カルボニックアンヒドラーゼＩＩ、ＩＶ及びＸＩＩのｍＲＮＡ（ＣＡ２、ＣＡ４及びＣＡ１２）：カルボニックアンヒドラーゼ（ＣＡ）ＩＩ、ＩＶ及びＸＩＩは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースに記載されるように、二酸化炭素の可逆的水和を触媒する亜鉛金属酵素の大きなファミリーのメンバーである。カルボニックアンヒドラーゼは、重要な生理学的プロセス、例えば、呼吸及び代謝組織と肺との間のＣＯ２／重炭酸塩の輸送、ｐＨ及びＣＯ２の恒常性、様々な組織及び器官における電解質分泌、生合成反応（例えば、糖新生、脂質生成及び尿素形成）、骨再吸収、石灰化、並びに腫瘍原性に関与する。
１４個の異なるカルボニックアンヒドラーゼイソ酵素が、異なる細胞内局在化及び組織分布によって同定されており、カルボニックアンヒドラーゼＩＩが細胞質ゾル酵素であるのに対して、カルボニックアンヒドラーゼＩＶ及びＸＩＩが膜結合型である。又、異なるイソ型をコードする２つの転写物改変体が、ＣＡ−ＸＩＩ遺伝子において同定されており、改変体１が比較的長いイソ型をコードするのに対し、改変体２が、転写物改変体１と比べて内部のコードエキソンの１つを有しておらず、それによりイソ型１と比べて１１アミノ酸の部分が欠失している。全身性のカルボニックアンヒドラーゼ阻害剤（ＣＡＩ）は、緑内障に特徴的である眼内圧（ＩＯＰ）の上昇を低下させるのに有用である。毛様体突起に存在するイソ酵素（スルホンアミド感受性イソ酵素のＣＡ ＩＩ及びＣＡ ＩＶ）の阻害によって、重炭酸塩及び房水の分泌速度が低下し、それによってＩＯＰが２５％〜３０％低下する。しかし、眼球外組織に存在する各種ＣＡイソ酵素の阻害は、四肢のしびれ及び刺痛、金属味、うつ病、疲労、倦怠感、体重減少、性欲減退、胃腸過敏、代謝性アシドーシス、腎結石及び一過性近視をはじめとする様々な副作用をもたらす。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＣＡ２のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿００００６７として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号１として示される。配列番号１は、ＣＡＩＩをコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。ＣＡＩＩのコード配列は、ヌクレオチド６６〜ヌクレオチド８４８である。
上述のＣＡ２ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態、イソ酵素又は同族体である。同族体は、配列番号１に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＣＡ２ ｍＲＮＡである。配列番号１に関連するＣＡ２核酸配列には、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｍ７７１８１、Ｘ０３２５１、ＢＣ０１１９４９、ＢＣ０３５４２４、ＣＲ５３６５２６、ＣＲ５４１８７５、Ｊ０３０３７、Ｍ３６５３２、Ｓ６９５２６及びＹ００３３９を有する核酸配列が含まれる。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＣＡ４のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿０００７１７として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号２として提供される。配列番号２は、ＣＡＩＶをコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。ＣＡＩＶのコード配列は、ヌクレオチド４７〜ヌクレオチド９８５である。
上述のＣＡ４ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態、イソ酵素又は同族体である。同族体は、配列番号２に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＣＡ４ ｍＲＮＡである。配列番号２に関連するＣＡ４核酸配列には、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｌ１０９５５、ＢＣ０５７７９２、ＢＣ０６９６４９、ＢＣ０７４７６８、ＣＲ５４１７６６及びＭ８３６７０を有する核酸配列が含まれる。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＣＡ１２の改変体１のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿００１２１８として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号１０１として示される。配列番号１０１は、ＣＡＸＩＩの改変体１をコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。ＣＡＸＩＩの改変体１のコード配列は、ヌクレオチド１５７〜ヌクレオチド１２２１である。
上述のＣＡ１２の改変体１ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態、イソ酵素又は同族体である。同族体は、配列番号１０１に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＣＡ１２ ｍＲＮＡである。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＣＡ１２の改変体２のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿２０６９２５として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号１３４として示される。配列番号１３４は、ＣＡＸＩＩの改変体２をコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。ＣＡＸＩＩの改変体２のコード配列は、ヌクレオチド１５７〜ヌクレオチド１１８８である。改変体２は、改変体１と比べて内部のコードエキソンの１つを有さない。
上述のＣＡ１２の改変体２ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態、イソ酵素又は同族体である。同族体は、配列番号１３４に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＣＡ１２ ｍＲＮＡである。
β１−及びβ２−アドレナリン作動性受容体のｍＲＮＡ（ＡＤＲＢ１及びＡＤＲＢ２）：アドレナリン作動性受容体（サブタイプα１、α２、β１及びβ２）は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースに記載されるように、ホルモンのエピネフリン及び神経伝達物質のノルエピネフリンの生理学的作用を媒介するＧタンパク質共役受容体の原型ファミリーである。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＡＤＲＢ１のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿０００６８４として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号３として示される。配列番号３は、β１−アドレナリン作動性受容体をコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。β１−アドレナリン作動性受容体のコード配列は、ヌクレオチド８７〜ヌクレオチド１５２０である。
上述のＡＤＲＢ１ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号３に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＡＤＲＢ１ ｍＲＮＡである。配列番号３に関連するＡＤＲＢ１核酸配列には、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＦ１６９００６、ＡＦ１６９００７、ＡＹ５６７８３７及びＪ０３０１９を有する核酸配列が含まれる。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＡＤＲＢ２のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿００００２４として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号４として示される。配列番号４は、β２−アドレナリン作動性受容体をコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。β２−アドレナリン作動性受容体のコード配列は、ヌクレオチド２２０〜ヌクレオチド１４６１である。
上述のＡＤＲＢ２ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号４に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＡＤＲＢ２ ｍＲＮＡである。配列番号４に関連するＡＤＲＢ２核酸配列には、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＦ０２２９５３、ＡＦ０２２９５４、ＡＦ０２２９５５、ＡＦ０２２９５６、ＡＦ１６９２２５、ＡＦ２０２３０５、ＡＦ２０３３８６、ＡＹ０１１２９１、Ｊ０２９６０、Ｙ００１０６、ＡＹ１３６７４１、ＢＣ０１２４８１、ＢＣ０６３４８６、ＢＣ０７３８５６、Ｍ１５１６９及びＸ０４８２７を有する核酸配列が含まれる。
アセチルコリンエステラーゼｍＲＮＡのスプライス改変体Ｅ４−Ｅ６及びＥ４−Ｅ５（ＡＣＨＥ）；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースに記載されるように、アセチルコリンエステラーゼは神経伝達物質のアセチルコリンを神経筋接合部及び脳のコリン作動性シナプスにおいて加水分解し、それによってシグナル伝播を終了させる。アセチルコリンエステラーゼは又、アセチルコリンエステラーゼがＹｔ血液型抗原を構成する赤血球膜においても見出される。アセチルコリンエステラーゼは、類似する触媒作用特性を有するが、そのオリゴマー集合、及び細胞表面への細胞結合の様式が異なる多分子形態で存在する。アセチルコリンエステラーゼは単一のＡＣＨＥ遺伝子によってコードされ、遺伝子産物における構造多様性が、選択的ｍＲＮＡスプライシング、並びに触媒サブユニット及び構造サブユニットの翻訳後会合により生じる。脳、筋肉及びその他の組織に見出されるアセチルコリンエステラーゼの主要な形態は、親水性の種であり、これはコラーゲン性又は脂質含有構造サブユニットを伴うジスルフィド結合したオリゴマーを形成する。それ以外の選択的スプライシング形態は、主に赤芽球系組織で発現し、Ｃ末端が異なり、ＧＰＩアンカー部位を伴う切断可能な疎水性ペプチドを含有する。アセチルコリンエステラーゼは、翻訳後に付加されたホスホイノシチド（ＰＩ）部分を介して膜と会合する。スプライス改変体Ｅ４−Ｅ６は、主要な転写物であり、エキソン４からエキソン６のスプライシングにより生じる。スプライス改変体Ｅ４−Ｅ５は、エキソン４からエキソン５の選択的スプライシングにより生じる。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＡＣＨＥスプライス改変体Ｅ４−Ｅ５のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿０１５８３１として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号５として示される。配列番号５は、アセチルコリンエステラーゼＥ４−Ｅ５をコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。アセチルコリンエステラーゼＥ４−Ｅ５のコード配列は、ヌクレオチド９５〜ヌクレオチド１９４８である。
上述のＡＣＨＥ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号５に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＡＣＨＥ ｍＲＮＡである。配列番号５に関連するＡＣＨＥ核酸配列には、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＣ０１１８９５、ＡＦ００２９９３、ＡＦ３１２０３２、ＡＹ７５０１４６、ＣＨ２３６９５６、Ｌ０６４８４、Ｌ４２８１２、Ｓ７１１２９、ＡＦ３３４２７０、ＢＣ０２６３１５、ＢＣ０３６８１３、Ｍ５５０４０及びＮＭ＿０００６６５を有する核酸配列が含まれる。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＡＣＨＥスプライス改変体Ｅ４−Ｅ６のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿０００６６５として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号１２３として示される。配列番号１２３は、アセチルコリンエステラーゼＥ４−Ｅ６改変体をコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。アセチルコリンエステラーゼＥ４−Ｅ６のコード配列は、ヌクレオチド９５〜ヌクレオチド１９３９である。
上述のＡＣＨＥ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号１２３に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＡＣＨＥ ｍＲＮＡである。配列番号１２３に関連するＡＣＨＥ核酸配列には、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿０１５８３１、ＡＣ０１１８９５、ＡＦ００２９９３、ＡＦ３１２０３２、ＡＹ７５０１４６、ＣＨ２３６９５６、Ｌ０６４８４、Ｌ４２８１２、Ｓ７１１２９、ＡＦ３３４２７０、ＢＣ０２６３１５、ＢＣ０３６８１３及びＭ５５０４０を有する核酸配列が含まれる。
Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ α及びβのｍＲＮＡ（ＡＴＰ１−Ａ１改変体１、−Ａ１改変体２、−Ａ２、−Ａ３、−Ａ４改変体１、−Ａ４改変体２、−Ｂ１改変体１、−Ｂ１改変体２、−Ｂ２及び−Ｂ３）：ＧｅｎＢａｎｋデータベースに記載されるように、これらの遺伝子によってコードされるタンパク質は、Ｐ型カチオン輸送ＡＴＰａｓｅのファミリー、及びＮａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのサブファミリーに属する。Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅは、原形質膜間のＮａイオン及びＫイオンの電気化学的勾配を確立及び維持することに関わる内在性膜タンパクである。これらの勾配は、浸透圧調節に、様々な有機分子及び無機分子のナトリウム共役輸送に、並びに神経及び筋肉の電気的興奮性に不可欠なものである。この酵素は、大きな触媒サブユニット（α又はＡ）と比較的小さな糖タンパク質サブユニット（β又はＢ）という２つのサブユニットから構成される。Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅの触媒サブユニットは、複数の遺伝子によってコードされる。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＡＴＰ１Ａ１改変体１のＤＮＡ配列受入番号がＮＭ＿０００７０１として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号１２４として示される。配列番号１２４は、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅサブユニットＡ１の改変体１をコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅサブユニットＡ１の改変体１のコード配列は、ヌクレオチド２９９〜ヌクレオチド３３７０である。
上述のＡＴＰ１Ａ１改変体１ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号１２４に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＡＴＰ１Ａ１改変体１ ｍＲＮＡである。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＡＴＰ１Ａ１改変体２のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿００１００１５８６として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号１２５として示される。配列番号１２５は、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅサブユニットＡ１の改変体２をコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅサブユニットＡ１の改変体２のコード配列は、ヌクレオチド２９９〜ヌクレオチド２３４４である。
上述のＡＴＰ１Ａ１改変体２ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号１２５に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＡＴＰ１Ａ１改変体２ ｍＲＮＡである。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＡＴＰ１Ａ２のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿０００７０２として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号６として示される。配列番号６は、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＡ２サブユニットをコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＡ２サブユニットのコード配列は、ヌクレオチド１０５〜ヌクレオチド３１６７である。
上述のＡＴＰ１Ａ２ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号６に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＡＴＰ１Ａ２ ｍＲＮＡである。配列番号６に関連するＡＴＰ１Ａ２核酸配列には、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｊ０５０９６、Ｍ２７５７８、ＡＢ０１８３２１、ＡＫ０９１６１７、ＡＫ１２４５８１、ＡＫ１２６５７３、ＡＬ８３１９９１、ＡＬ８３１９９７、ＢＣ０１３６８０、ＢＣ０４７５３３、ＢＣ０５２２７１、Ｍ１６７９５及びＹ０７４９４を有する核酸配列が含まれる。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＡＴＰ１Ａ３のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿１５２２９６として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号１２６として示される。配列番号１２６は、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＡ３サブユニットをコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＡ３サブユニットのコード配列は、ヌクレオチド１５５〜ヌクレオチド３１９６である。
上述のＡＴＰ１Ａ３ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号１２６に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＡＴＰ１Ａ３ ｍＲＮＡである。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＡＴＰ１Ａ４改変体１のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿１４４６９９として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号１２７として示される。配列番号１２７は、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＡ４サブユニットの改変体１をコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＡ４サブユニットの改変体１のコード配列は、ヌクレオチド４６９〜ヌクレオチド３５５８である。
上述のＡＴＰ１Ａ４改変体１ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号１２７に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＡＴＰ１Ａ４改変体１ ｍＲＮＡである。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＡＴＰ１Ａ４改変体２のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿００１００１７３４として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号１２８として示される。配列番号１２８は、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＡ４サブユニットの改変体２をコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＡ４サブユニットの改変体２のコード配列は、ヌクレオチド１１１〜ヌクレオチド６０８である。
上述のＡＴＰ１Ａ４改変体２ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号１２８に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＡＴＰ１Ａ４改変体２ ｍＲＮＡである。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＡＴＰ１Ｂ１改変体１のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿００１６７７として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号１２９として示される。配列番号１２９は、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＢ１サブユニットの改変体１をコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＢ１サブユニットの改変体１のコード配列は、ヌクレオチド１２２〜ヌクレオチド１０３３である。
上述のＡＴＰ１Ｂ１改変体１ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号１２９に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＡＴＰ１Ｂ１改変体１ ｍＲＮＡである。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＡＴＰ１Ｂ１改変体２のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿００１００１７８７として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号１３０として示される。配列番号１３０は、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＢ１サブユニットの改変体２をコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＢ１サブユニットの改変体２のコード配列は、ヌクレオチド１２２〜ヌクレオチド１０２７である。
上述のＡＴＰ１Ｂ１改変体２ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号１３０に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＡＴＰ１Ｂ１改変体２ ｍＲＮＡである。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＡＴＰ１Ｂ２のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿００１６７８として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号１３１として示される。配列番号１３１は、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＢ２サブユニットをコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＢ２サブユニットのコード配列は、ヌクレオチド５８４〜ヌクレオチド１４５６である。
上述のＡＴＰ１Ｂ２ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号１３１に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＡＴＰ１Ｂ２ ｍＲＮＡである。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＡＴＰ１Ｂ３のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿００１６７９として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号１３２として示される。配列番号１３２は、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＢ３サブユニットをコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＢ３サブユニットのコード配列は、ヌクレオチド１７５〜ヌクレオチド１０１４である。
上述のＡＴＰ１Ｂ３ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号１３２に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＡＴＰ１Ｂ３ ｍＲＮＡである。
Ｎａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体ｍＲＮＡ（ＳＬＣ１２Ａ１及びＳＬＣ１２Ａ２）：ナトリウム−カリウム−塩素共輸送体（Ｎａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体又はＮＫＣＣ）は、原形質膜間のＮａ＋、Ｋ＋及びＣｌ−イオンの共役した共輸送を促進させる。イソ型には、ＮＫＣＣ１及びＮＫＣＣ２の２つが存在する。ＮＫＣＣ１は、眼を含めた殆どの組織で発現するのに対し、ＮＫＣＣ２は主に腎臓で発現するが、眼におけるこのイソ型の発現レベルの方が低いことも認められている。ＮＫＣＣ１はＳＬＣ１２Ａ２遺伝子（溶質キャリアファミリー１２、メンバー２）によってコードされ、ＮＫＣＣ２はＳＬＣ１２Ａ１遺伝子によってコードされる。小柱網細胞は頑強なＮａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体を有する。この共輸送体の活性は、神経伝達物質及びホルモン（例えば、共輸送活性を低下させるノルエピネフリン、又は、共輸送活性を増大させるバソプレシン等）によって調節される。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＳＬＣ１２Ａ１のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿０００３３８として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号７として示される。配列番号７は、Ｎａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体ＮＫＣＣ２をコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。Ｎａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体ＮＫＣＣ２のコード配列は、ヌクレオチド２０〜ヌクレオチド３３１９である。
上述のＮａ−Ｋ−２Ｃｌ ＮＫＣＣ２共輸送体ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号７に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＮａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体ＮＫＣＣ２ ｍＲＮＡである。配列番号７に関連するＳＬＣ１２Ａ１核酸配列には、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＪ００５３３２、ＡＪ００５３３３、ＡＢ０３２５２５、ＡＢ０３２５２７、ＢＣ０４０１３８、ＢＸ６４７０６７、ＢＸ６４７４８４及びＵ５８１３０を有する核酸配列が含まれる。
ＧｅｎＢａｎｋデータベースでは、ＳＬＣ１２Ａ２のＤＮＡ配列が受入番号ＮＭ＿００１０４６として示され、このＤＮＡ配列は「配列表」で配列番号１３３として示される。配列番号１３３は、Ｎａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体ＮＫＣＣ１をコードするｍＲＮＡに対応するＤＮＡのセンス鎖配列を示す（但し、「Ｕ」塩基の代わりに「Ｔ」塩基が含まれる）。Ｎａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体ＮＫＣＣ１のコード配列は、ヌクレオチド１６５〜ヌクレオチド３８０３である。
上述のＮａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体ＮＫＣＣ１ ｍＲＮＡ配列の等価体は、その選択的スプライス形態、対立遺伝子形態又は同族体である。同族体は、配列番号１３３に対して相同的である（即ち、オルソログである）別の哺乳動物種に由来するＮａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体ＮＫＣＣ１ ｍＲＮＡである。
ｍＲＮＡ発現の減少：本明細書で使用される「ｍＲＮＡの発現を減少させる」という表現は、ｍＲＮＡの切断によるか、翻訳の直接的な阻害によるかのいずれかによって標的ｍＲＮＡのタンパク質への翻訳を低下させるために、一定量の干渉ＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡ）を投与又は発現させることを意味する。標的ｍＲＮＡ又は対応するタンパク質の発現における低下は、一般的に「ノックダウン」と呼ばれ、非標的化コントロールＲＮＡ（例えば、非標的化コントロールｓｉＲＮＡ）の投与又は発現後に存在するレベルを基準として報告される。５０％及び１００％を含めた５０％〜１００％の発現のノックダウンが、本明細書の実施形態によって検討されている。しかし、そのようなノックダウンレベルが本発明において達成されることが必ずしも必要というわけではない。一実施形態においては、高眼圧症標的の１つを標的化する単一の干渉ＲＮＡが、ＩＯＰを低下させるために投与される。他の実施形態においては、同じ高眼圧症標的（例えば、ＣＡ２）を標的化する複数の干渉ＲＮＡが、ＩＯＰを低下させるために投与される。更に他の実施形態においては、複数の高眼圧症標的（例えば、ＣＡ２及びＡＤＲＢ２）を標的化する複数の干渉ＲＮＡが、ＩＯＰを低下させるために投与される。
ノックダウンは一般的に、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）増幅を使用してｍＲＮＡレベルを測定することによって、或いはウエスタンブロット又は酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）によりタンパク質レベルを測定することによって評価される。タンパク質レベルを分析することにより、ｍＲＮＡ切断と翻訳阻害の両方の評価が可能となる。ノックダウンを測定する更なる技法には、ＲＮＡ溶液のハイブリダイゼーション、ヌクレアーゼの保護、ノーザンハイブリダイゼーション、マイクロアレイを使用した遺伝子発現モニタリング、抗体結合、放射免疫アッセイ及び蛍光活性化細胞分析が含まれる。
本明細書に記載される標的の阻害は又、例えば、緑内障の症状の改善（例えば、眼内圧の改善、視野喪失の改善、又は、視神経乳頭変化の改善）を観察することにより、ヒト又は哺乳動物において推定される。
本発明の実施形態の干渉ＲＮＡは、標的ＲＮＡの切断に対して触媒作用を持つと考えられている。即ち、干渉ＲＮＡは、準化学量論的な量で標的ｍＲＮＡの阻害を行うことができる。従って、アンチセンス療法と比べると、こうした切断条件下で治療効果をもたらすのに必要となる干渉ＲＮＡは著しく少なくなる。
干渉ＲＮＡ：本発明の一実施形態において、干渉ＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡ）は、センス鎖及びアンチセンス鎖を有し、これらのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、少なくとも１９ヌクレオチドの少なくともほぼ完全な連続した相補性の領域を含む。本発明の更なる実施形態において、干渉ＲＮＡは、それぞれｍＲＮＡ内の対応する標的配列の３’末端の末位２番目からの１３、１４、１５、１６、１７又は１８ヌクレオチドに対する所定パーセントの配列相補性又は所定パーセントの配列同一性を有する、少なくとも１３個、１４個、１５個、１６個、１７個又は１８個の連続したヌクレオチドの領域を含む。
干渉ＲＮＡのそれぞれの鎖の長さは、１９個〜４９個のヌクレオチドを含むが、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個又は４９個のヌクレオチドを含む場合もある。
ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖は、アンチセンス鎖がＲＩＳＣに取り込まれ、それによってＲＩＳＣが、切断又は翻訳抑制のために、アンチセンスｓｉＲＮＡ鎖に対する少なくとも部分的な相補性を有する標的ｍＲＮＡを識別できるようになるという点において、ｓｉＲＮＡの能動的な誘導剤である。
本発明において、標的ｍＲＮＡ配列内の干渉ＲＮＡ標的配列（例えば、ｓｉＲＮＡ標的配列）は、利用可能な設計ツールを使用して選択される。このような標的配列に対応する干渉ＲＮＡは、その後、標的ｍＲＮＡを発現する細胞のトランスフェクションと、それに続く上述のノックダウンの評価によって試験される。そして５０％〜１００％の発現のノックダウンをもたらす干渉ＲＮＡが、更なる分析のために選択される。
ｓｉＲＮＡの標的配列を選択する技法は、Ｔｕｓｃｈｌ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ｓｉＲＮＡ Ｕｓｅｒ Ｇｕｉｄｅ”（２００４年５月６日改訂；ロックフェラー大学のウェブサイトに掲載）；Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ＃５０６，“ｓｉＲＮＡ Ｄｅｓｉｇｎ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ，”（Ａｍｂｉｏｎ Ｉｎｃ．）（Ａｍｂｉｏｎのウェブサイトに掲載）、及び例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ又はＰｒｏｌｉｇｏのウェブサイトに掲載される、ウェブベースその他の設計ツールによって提供される。最初の検索パラメータには、３５％〜５５％の間でのＧ／Ｃ含有量、及び１９〜２７ヌクレオチドのｓｉＲＮＡの長さが含まれてもよい。標的配列は、ｍＲＮＡのコード領域又は５’若しくは３’非翻訳領域に位置する場合がある。
カルボニックアンヒドラーゼＩＩの１９ヌクレオチドのＤＮＡ標的配列の実施形態は、以下の配列番号１のヌクレオチド２３２〜２５０に存在する：
Figure 2008528637
 配列番号８の対応するｍＲＮＡ配列を標的化するための本発明のｓｉＲＮＡであって、２１ヌクレオチドの鎖、及び２ヌクレオチドの３’突出を有するｓｉＲＮＡは、以下の通りである：
Figure 2008528637
 各Ｎは、任意のヌクレオチド（Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｕ、Ｔ）又は改変ヌクレオチドであってもよい。３’末端は、１、２、３、４、５及び６を含めたそれらの間の数の「Ｎ」残基を有することができる。いずれかの鎖における「Ｎ」残基は、同じ残基（例えば、ＵＵ、ＡＡ、ＣＣ、ＧＧ又はＴＴ）であってもよく、或いは異なる残基（例えば、ＡＣ、ＡＧ、ＡＵ、ＣＡ、ＣＧ、ＣＵ、ＧＡ、ＧＣ、ＧＵ、ＵＡ、ＵＣ又はＵＧ）であってもよい。３’突出は同じであってもよく、或いは異なっていてもよい。一実施形態においては、いずれの鎖も３’ＵＵ突出を有する。
配列番号８の対応するｍＲＮＡ配列を標的化するための本発明のｓｉＲＮＡであって、２１ヌクレオチドの鎖、及び各鎖の３’ＵＵ突出を有するｓｉＲＮＡは、以下の通りである：
Figure 2008528637
 干渉ＲＮＡは又、５’のヌクレオチド突出を有する場合もあれば、平滑末端を有する場合もある。配列番号８の対応するｍＲＮＡ配列を標的化するための本発明のｓｉＲＮＡであって、１９ヌクレオチドの鎖及び平滑末端を有するｓｉＲＮＡは、以下の通りである：
Figure 2008528637
 二本鎖の干渉ＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡ）の鎖は、ヘアピン又はステムループ構造（例えば、ｓｈＲＮＡ）を形成させるために結合される場合がある。配列番号８の対応するｍＲＮＡ配列を標的化するための本発明のｓｈＲＮＡであって、１９ｂｐの二本鎖ステム領域及び３’ＵＵ突出を有するｓｈＲＮＡは、以下の通りである：
Figure 2008528637
 Ｎは、ヌクレオチド（Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ又はＵ）であるか、又は当業者により知られる改変形態である。ループ内のヌクレオチドＮの数は、３及び２３を含めた３〜２３の数、５及び１５を含めた５〜１５の数、７及び１３を含めた７〜１３の数、４及び９を含めた４〜９の数、又は９及び１１を含めた９〜１１の数であり、或いはヌクレオチドＮの数は９である。ループ内のヌクレオチドの一部は、ループ内のその他のヌクレオチドとの塩基対相互作用に関与してもよい。ループを形成させるために使用できるオリゴヌクレオチド配列の例には、５’−ＵＵＣＡＡＧＡＧＡ−３’（Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ，Ｔ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９６：５５０）及び５’−ＵＵＵＧＵＧＵＡＧ−３’（Ｃａｓｔａｎｏｔｔｏ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，（２００２）ＲＮＡ ８：１４５４）が含まれる。結果として得られる一本鎖オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉ機構と相互作用することができる二本鎖領域を含むステムループ又はヘアピン構造を形成することが、当業者によって認識される。
上で同定されたｓｉＲＮＡ標的配列は、ダイサーと基質の２７ｍｅｒ二重鎖の設計を容易にするために、３’末端において延長されることが可能である。カルボニックアンヒドラーゼＩＩのＤＮＡ配列（配列番号１）において同定された１９ヌクレオチドのＤＮＡ標的配列（配列番号８）の、６ヌクレオチドによる延長は、以下の配列番号１のヌクレオチド２３２〜ヌクレオチド２５６に存在する２５ヌクレオチドのＤＮＡ標的配列をもたらす：
Figure 2008528637
 配列番号７２４の対応するｍＲＮＡ配列を標的化するための本発明のダイサーと基質の２７ｍｅｒ二重鎖は、以下の通りである：
Figure 2008528637
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 センス鎖の３’末端における２つのヌクレオチド（即ち、配列番号７１８のＣＡヌクレオチド）は、プロセシング強化ためのデオキシヌクレオチドである場合がある。１９〜２１ヌクレオチドの標的配列（例えば、本明細書に示す標的配列）からのダイサーと基質の２７ｍｅｒ二重鎖の設計については、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ＩＤＴ）のウェブサイト、及びＫｉｍ，Ｄ．−Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，（Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００５）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：２；２２２−２２６で詳細に考察されている。
干渉ＲＮＡが化学合成によって産生されると、一方又は両方の鎖（存在する場合）の５’末端におけるヌクレオチドの５’位リン酸化により、ｓｉＲＮＡの効率、及び結合したＲＩＳＣ複合体の特異性を向上させることができるが、リン酸化は細胞内で生じるため、このようなリン酸化は必要とされない。
表１には、上述のような様式で本発明のｓｉＲＮＡが設計されている、ＣＡ２、ＣＡ４及びＣＡ１２の改変体１及び改変体２のＤＮＡ配列（それぞれ、配列番号１、配列番号２、配列番号１０１及び配列番号１３４）内におけるｓｉＲＮＡ標的配列の例が示されている。ＣＡ２、ＣＡ４及びＣＡ１２の改変体１及び改変体２は、カルボニックアンヒドラーゼＩＩ、ＩＶ及びＸＩＩの改変体１及び２をそれぞれコードする。
（表１：ｓｉＲＮＡのＣＡ２、ＣＡ４及びＣＡ１２標的配列）
Figure 2008528637
Figure 2008528637
Figure 2008528637
Figure 2008528637
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 表２には、上述のような様式で本発明のｓｉＲＮＡが設計されている、ＡＤＲＢ１及びＡＤＲＢ２のＤＮＡ配列（それぞれ、配列番号３及び配列番号４）内におけるｓｉＲＮＡ標的配列の例が示されている。上述の通り、ＡＤＲＢ１及びＡＤＲＢ２は、β１−及びβ２−アドレナリン作動性受容体をそれぞれコードする。
（表２：ｓｉＲＮＡのＡＤＲＢ１及びＡＤＲＢ２標的配列）
Figure 2008528637
Figure 2008528637
Figure 2008528637
 表３には、上述のような様式で本発明のｓｉＲＮＡが設計されている、スプライス改変体Ｅ４−Ｅ５及びスプライス改変体Ｅ４−Ｅ６のＡＣＨＥのＤＮＡ配列（それぞれ、配列番号５及び配列番号１２３）内におけるｓｉＲＮＡ標的配列の例が示されている。上述の通り、ＡＣＨＥは、アセチルコリンエステラーゼをコードする。
（表３：ｓｉＲＮＡのＡＣＨＥ標的配列）
Figure 2008528637
Figure 2008528637
Figure 2008528637
 表４には、上述のような様式で本発明のｓｉＲＮＡが設計されている、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのＡ及びＢサブユニットのＤＮＡ配列（ＡＴＰ１Ａ１改変体１、配列番号１２４；ＡＴＰ１Ａ１改変体２、配列番号１２５；ＡＴＰ１Ａ２、配列番号６；ＡＴＰ１Ａ３、配列番号１２６；ＡＴＰ１Ａ４改変体１、配列番号１２７；ＡＴＰ１Ａ４改変体２、配列番号１２８；ＡＴＰ１Ｂ１改変体１、配列番号１２９；ＡＴＰ１Ｂ１改変体２、配列番号１３０；ＡＴＰ１Ｂ２、配列番号１３１；及びＡＴＰ１Ｂ３、配列番号１３２）内におけるｓｉＲＮＡ標的配列の例が示されている。
（表４：ｓｉＲＮＡのＡＴＰ１Ａ及びＡＴＰ１Ｂ標的配列）
Figure 2008528637
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 表５には、上述のような様式で本発明のｓｉＲＮＡが設計されている、ＳＬＣ１２Ａ１及びＳＬＣ１２Ａ２のＤＮＡ配列（それぞれ、配列番号７及び配列番号１３３）内におけるｓｉＲＮＡ標的配列の例が示されている。上述の通り、ＳＬＣ１２Ａ１及びＳＬＣ１２Ａ２は、Ｎａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体であるＮＫＣＣ２及びＮＫＣＣ１をそれぞれコードする。
（表５：ｓｉＲＮＡのＳＬＣ１２Ａ１標的配列）
Figure 2008528637
Figure 2008528637
Figure 2008528637
 上の例に示す通り、当業者は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１０１、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３又は配列番号１３４における配列位置を参照して、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１０１、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３又は配列番号１３４に対して相補的又はほぼ相補的なヌクレオチドをそれぞれ付加又は欠失することによって、表１〜表５に示す配列よりも長さが短い又は長い干渉ＲＮＡを設計するために、表１〜表５に示す標的配列情報を使用することができる。
干渉ＲＮＡのｓｉＲＮＡ及びその他の形態により導かれる標的ＲＮＡ切断反応は、配列特異性が高い。一般的に、標的ｍＲＮＡの部分と配列が同一であるセンスヌクレオチド鎖、及び標的ｍＲＮＡの部分に対して厳密に相補的であるアンチセンスヌクレオチド鎖を含有するｓｉＲＮＡは、本明細書に記載のｍＲＮＡを阻害するためのｓｉＲＮＡ実施形態である。しかし、アンチセンスｓｉＲＮＡ鎖と標的ｍＲＮＡの間、又はアンチセンスｓｉＲＮＡ鎖とセンスｓｉＲＮＡ鎖の間の１００％の配列相補性が、本発明の実施に必要なわけではない。従って、例えば、本発明では、遺伝子変異、鎖多型又は進化的多様性によって予想される配列変化が考慮される。
本発明の一実施形態において、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖は、標的ｍＲＮＡに対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドを有する。本明細書で使用される「ほぼ完全な」という用語は、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖が少なくとも標的ｍＲＮＡの部分に対して「実質的に相補的」であり、且つｓｉＲＮＡのセンス鎖が少なくとも標的ｍＲＮＡの部分に対して「実質的に同一」であることを意味する。「同一性」は、当業者に公知の通り、配列間のヌクレオチドの順序及び同一性を一致させることによって測定されるような、ヌクレオチド配列間の配列関連性の程度を指す。一実施形態において、標的ｍＲＮＡ配列に対する８０％の相補性、８０％〜１００％の相補性、例えば８５％、９０％又は９５％の相補性を有するｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖は、ほぼ完全に相補的であると見なされ、本発明において使用される場合がある。「完全な」連続した相補性は、隣接する塩基対の標準的なワトソン・クリック塩基対形成である。「少なくともほぼ完全な」連続した相補性には、本明細書で使用される「完全な」相補性が含まれる。ヌクレオチド配列が一致する最大程度を同定するために、同一性又は相補性を測定するコンピュータ方法は、各種設計されている（例えば、ＢＬＡＳＴＮ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３−４１０））。
「％同一性」という用語は、第２の核酸分子における同じ長さの連続した１組のヌクレオチドと同じである、第１の核酸分子における連続したヌクレオチドの割合を説明している。「％相補性」という用語は、第２の核酸分子における連続した１組のヌクレオチドと、ワトソン・クリック塩基対形成が可能な第１の核酸分子における連続したヌクレオチドの割合を説明している。
標的ｍＲＮＡ（センス鎖）とｓｉＲＮＡの一方の鎖（センス鎖）の間の関係性は、同一性の関係性を指す。ｓｉＲＮＡのセンス鎖は又、存在する場合、パッセンジャー鎖とも呼ばれる。標的ｍＲＮＡ（センス鎖）とｓｉＲＮＡの他方の鎖（アンチセンス鎖）の間の関係性は、相補性の関係性を指す。ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖は又ガイド鎖とも呼ばれる。
５’から３’の方向で記載される核酸配列における末位２番目の塩基は、最後の塩基の隣り、即ち、３’塩基の隣りの塩基である。５’から３’の方向で記載される核酸配列の末位２番目からの１３塩基は、３’塩基の隣りで、３’塩基を含まない配列の最後の１３塩基である。同様に、５’から３’の方向で記載された核酸配列の末位２番目からの１４、１５、１６、１７又は１８塩基はそれぞれ、３’塩基の隣りで、３’塩基を含まない配列のそれぞれ最後の１４、１５、１６、１７又は１８塩基である。
「（配列識別子）のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域」という表現は、一ヌクレオチド置換を可能にする。２つのヌクレオチド置換（即ち、１１／１３＝８５％の同一性／相補性）は、かかる表現に含まれない。
本発明の一実施形態において、連続したヌクレオチドの領域は、それぞれの配列識別子によって同定される配列の３’末端の末位２番目からの１４ヌクレオチドに対する少なくとも８５％の配列相補性又は少なくとも８５％の配列同一性を有する、少なくとも１４個の連続したヌクレオチドの領域である。２つのヌクレオチド置換（即ち、１２／１４＝８６％の同一性／相補性）が、かかる表現に含まれる。
本発明の更なる実施形態において、連続したヌクレオチドの領域は、配列識別子の配列の３’末端の末位２番目からの１４ヌクレオチドに対する少なくとも８０％の配列相補性又は少なくとも８０％の配列同一性を有する、少なくとも１５、１６、１７又は１８個の連続したヌクレオチドの領域である。３つのヌクレオチド置換が、かかる表現に含まれる。
配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１０１、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３又は配列番号１３４に対応するｍＲＮＡにおける標的配列は、ｍＲＮＡの５’又は３’非翻訳領域、並びにｍＲＮＡのコード領域に存在する場合がある。
二本鎖の干渉ＲＮＡの一方又は両方の鎖が、リボヌクレオチド若しくはデオキシリボヌクレオチド又はそれらの混合物であり得る、１〜６ヌクレオチドの３’突出を有し得る。突出部のヌクレオチドは、塩基対形成しない。本発明の一実施形態において、干渉ＲＮＡは、ＴＴ又はＵＵの３’突出を含む。本発明の別の実施形態において、干渉ＲＮＡは、少なくとも１つの平滑末端を含む。末端は通常、５’リン酸基又は３’ヒドロキシル基を有する。他の実施形態において、アンチセンス鎖は５’リン酸基を有し、センス鎖は５’ヒドロキシル基を有する。更に他の実施形態において、末端は、その他の分子又は官能基の共有結合による付加によって更に改変される。
二本鎖ｓｉＲＮＡのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、上述のような２つの一本鎖の二重鎖形成の状態である場合もあれば、相補性の領域が塩基対形成され、ヘアピンループにより共有結合されて、一本鎖を形成するような単一分子である場合もある。ヘアピンは、ダイサーと呼ばれるタンパク質によって分子内で切断され、２つの個々の塩基対形成されたＲＮＡ分子の干渉ＲＮＡを形成すると考えられている。
干渉ＲＮＡは、１つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換又は改変によって、天然のＲＮＡとは異なる場合がある。非ヌクレオチド物質は、５’末端、３’末端又は内部のいずれかにおいて干渉ＲＮＡと結合する場合がある。このような改変は一般的に、干渉ＲＮＡのヌクレアーゼ抵抗性を増大させるため、細胞取り込みを向上させるため、細胞標的化を向上させるため、干渉ＲＮＡの追跡を助けるため、安定性を更に向上させるため、又はインターフェロン経路の活性化の可能性を低下させるために設計されている。例えば、干渉ＲＮＡは、プリンヌクレオチドを突出部の末端において含む場合がある。例えば、コレステロールをピロリジンリンカーによりｓｉＲＮＡ分子のセンス鎖の３’末端に結合体化することによっても、ｓｉＲＮＡに安定性がもたらされる。
更なる改変には、例えば、３’末端のビオチン分子、細胞浸透性を有することが知られているペプチド、ナノ粒子、ペプチド模倣体、蛍光性色素又はデンドリマーが含まれる。
ヌクレオチドは、その塩基部分、その糖部分、又は分子のリン酸部分において改変され、本発明の実施形態において機能する場合がある。改変には、例えば、アルキル基、アルコキシ基、アミノ基、デアザ基、ハロ基、ヒドロキシル基、チオール基又はそれらの組み合わせによる置換が含まれる。ヌクレオチドは、例えば、より安定性に優れたアナログ（例えば、リボヌクレオチドをデオキシリボヌクレオチドで置換するアナログ）、又は糖修飾を有するアナログ（例えば、２’ＯＨ基が２’アミノ基、２’Ｏ−メチル基、２’メトキシエチル基又は２’−Ｏ，４’−Ｃメチレン架橋によって置換されるアナログ）により置換される場合がある。ヌクレオチドのプリン又はピリミジンアナログの例には、キサンチン、ヒポキサンチン、アザプリン、メチルチオアデニン、７−デアザ−アデノシン並びにＯ−及びＮ−改変ヌクレオチドが含まれる。ヌクレオチドのリン酸基は、リン酸基の酸素の１つ以上を窒素又はイオウにより置換することによって改変される場合がある（ホスホロチオアート）。改変は、例えば、機能を向上させるのに、安定性又は透過性を向上させるのに、又は局在化若しくは標的化を導くのに有用である。
又、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１０１、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３又は配列番号１３４の部分に対して相補的でないアンチセンス干渉ＲＮＡ鎖の領域が存在する場合もある。非相補的な領域は、相補性領域の３’末端、５’末端若しくは両末端に、又は２つの相補性領域の間に存在する場合がある。
干渉ＲＮＡは、化学合成によって、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写によって、又は比較的長い二本鎖ＲＮＡをダイサー若しくは類似する活性を有するその他の適切なヌクレアーゼで切断することによって、外因により作製される場合がある。従来のＤＮＡ／ＲＮＡ合成機を使用して保護リボヌクレオシドホスホルアミダイトから産生される、化学合成された干渉ＲＮＡは、例えば、Ａｍｂｉｏｎ Ｉｎｃ．（米国テキサス州フォートワース）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（米国カリフォルニア州カールスバッド）又はＤｈａｒｍａｃｏｎ（米国コロラド州ラファイエット）等の民間供給業者から入手できる場合がある。干渉ＲＮＡは、例えば、溶媒若しくは樹脂による抽出、沈殿化、電気泳動、クロマトグラフィー、又はこれらの組み合わせによって精製される。或いは、干渉ＲＮＡは、試料処理による損失を避けるため、殆ど精製することなく、使用される場合がある。
干渉ＲＮＡは又、プラスミド若しくはウイルス発現ベクターから、又は最小限の発現カセット（例えば、１つ以上のプロモーター、及び干渉ＲＮＡに適切な１つ以上の鋳型を含むＰＣＲ生成フラグメント）から内因により発現される場合がある。ｓｈＲＮＡの市販のプラスミド型発現ベクターの例には、ｐＳｉｌｅｎｃｅｒシリーズの発現ベクター（Ａｍｂｉｏｎ［米国テキサス州オースティン］）及びｐＣｐＧ−ｓｉＲＮＡ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ［米国カリフォルニア州サンディエゴ］）が含まれる。干渉ＲＮＡ発現のためのウイルスベクターは、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ、ＦＩＶ及びＥＩＡＶ）及びヘルペスウイルスを含む様々なウイルスに由来する場合がある。ｓｈＲＮＡ発現のための市販のウイルスベクターの例には、ｐＳｉｌｅｎｃｅｒアデノ（Ａｍｂｉｏｎ［米国テキサス州オースティン］）及びｐＬｅｎｔｉ６／ＢＬＯＣＫ−ｉＴＴＭ−ＤＥＳＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ［米国カリフォルニア州カールスバッド］）が含まれる。ウイルスベクターの選択、干渉ＲＮＡをベクターから発現させるための方法、及びウイルスベクターを送達する方法は、当業者の範囲に含まれる。ＰＣＲ生成ｓｈＲＮＡ発現カセットを作製するためのキットの例には、Ｓｉｌｅｎｃｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ａｍｂｉｏｎ［米国テキサス州オースティン］）及びｓｉＸｐｒｅｓｓ（Ｍｉｒｕｓ［米国ウィスコンシン州マディソン］）が含まれる。
干渉ＲＮＡは、ｐｏｌ ＩＩＩプロモーター（例えば、Ｕ６プロモーター又はＨ１プロモーター等）又はｐｏｌ ＩＩプロモーター（例えば、サイトメガロウイルスプロモーター等）を含め、当業者に既知の様々な真核生物プロモーターから発現される場合がある。これらのプロモーターも又、干渉ＲＮＡの誘導可能な発現を可能にするために適応させることができることを、当業者は認識する。
生理学的条件下でのハイブリダイゼーション：本発明の特定の実施形態において、干渉ＲＮＡのアンチセンス鎖は、ＲＩＳＣ複合体の部分としてｉｎ ｖｉｖｏでｍＲＮＡとハイブリダイズする。
「ハイブリダイゼーション」という用語は、相補的又はほぼ相補的な塩基配列を有する一本鎖核酸が相互作用して、ハイブリッドと呼ばれる水素結合した複合体を形成するプロセスを指す。ハイブリダイゼーション反応は高感度かつ選択的である。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、ハイブリダイゼーションの特異性（即ち、ストリンジェンシー）は、例えば、プレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーション溶液における塩若しくはホルムアミドの濃度によって、又はハイブリダイゼーション温度によって制御されるが、このような手法はこの分野で周知である。具体的に、ストリンジェンシーは、塩の濃度を低下させる、ホルムアミドの濃度を上昇させる、又はハイブリダイゼーション温度を上昇させることによって増大する。
例えば、高ストリンジェンシーの条件は、約５０％のホルムアミド、３７℃〜４２℃の温度で生じ、約３５％〜２５％のホルムアミド、３０℃〜３５℃の温度で低ストリンジェンシーの条件が生じる。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシー条件の例については、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．に示されている。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の更なる例には、４００ｍＭ ＮａＣｌ、４０ｍＭ ＰＩＰＥＳ（ｐＨ６．４）、１ｍＭ ＥＤＴＡ、５０℃又は７０℃、１２時間〜１６時間、その後洗浄、或いは１ＸＳＳＣ中７０℃若しくは１ＸＳＳＣ中５０℃、５０％ホルムアミドでのハイブリダイゼーションの後０．３ＸＳＳＣ中７０℃での洗浄、或いは４ＸＳＳＣ中７０℃若しくは４ＸＳＳＣ中５０℃、５０％ホルムアミドでのハイブリダイゼーションの後、１ＸＳＳＣ中６７℃での洗浄が含まれる。ハイブリダイゼーションのための温度は、ハイブリッドの融解温度（Ｔｍ）よりも約５℃〜１０℃低い。この場合、Ｔｍは、長さが１９〜４９塩基対のハイブリッドの場合、以下の計算式を使用して求められる：Ｔｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ１０［Ｎａ＋］）＋０．４１（％Ｇ＋Ｃ）−（６００／Ｎ）、式中、Ｎはハイブリッドにおける塩基の数であり、［Ｎａ＋］はハイブリダイゼーション緩衝液におけるナトリウムイオンの濃度である。
上述のｉｎ ｖｉｔｒｏハイブリダイゼーションアッセイは、候補ｓｉＲＮＡと標的の間の結合が特異性を有するかどうかを予測する方法を提供する。しかし、ＲＩＳＣ複合体に関連して、標的の特異的な切断は又、ハイブリダイゼーションのための高ストリンジェンシーをｉｎ ｖｉｔｒｏで示さないアンチセンス鎖によっても生じる可能性がある。
一本鎖の干渉ＲＮＡ：上述の通り、干渉ＲＮＡは、究極的には一本鎖として機能する。一般鎖（ｓｓ）干渉ＲＮＡは、二本鎖ＲＮＡよりも効率的でないが、ｍＲＮＡのサイレンシングを行うことが見出されている。従って、本発明の実施形態では又、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１０１、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３又は配列番号１３４の部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１０１、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３又は配列番号１３４それぞれのハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するｓｓ干渉ＲＮＡの投与が提供される。ｓｓ干渉ＲＮＡは、上述のｄｓ干渉ＲＮＡの場合のように１９〜４９ヌクレオチドの長さを有する。ｓｓ干渉ＲＮＡは５’リン酸を有するか、又は５’位がｉｎ ｓｉｔｕ又はｉｎ ｖｉｖｏでリン酸化される。「５’位リン酸化」という用語は、例えば、ポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの５’末端における糖（例えば、リボース、デオキシリボース、又はそれらのアナログ）のＣ５ヒドロキシルへのエステル結合により結合したリン酸基を有するポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドを記述するために使用される。
ｓｓ干渉ＲＮＡは、ｄｓ干渉ＲＮＡの場合のように、化学的に又はｉｎ ｖｉｔｒｏ転写によって合成されるか、又はベクター若しくは発現カセットから内因により発現される。５’リン酸基がキナーゼによって付加される場合もあれば、５’リン酸がＲＮＡのヌクレアーゼ切断により生成される場合もある。送達は、ｄｓ干渉ＲＮＡの場合と同様である。一実施形態においては、保護された末端及びヌクレアーゼ抵抗性の改変を有するｓｓ干渉ＲＮＡが、サイレンシングのための投与される。ｓｓ干渉ＲＮＡは貯蔵のために乾燥させる場合もあれば、水溶液に溶解される場合もある。溶液は、アニーリングを阻害するため又は安定化をもたらすために、緩衝剤又は塩を含有する場合がある。
ヘアピン干渉ＲＮＡ：ヘアピン干渉ＲＮＡは、干渉ＲＮＡのセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方をステムループ又はヘアピン構造で含む単一分子（例えば、単一のオリゴヌクレオチド鎖）である（例えば、ｓｈＲＮＡ）。例えば、ｓｈＲＮＡは、センス干渉ＲＮＡ鎖をコードするＤＮＡオリゴヌクレオチドが、短いスペーサーによって、逆向きの相補的なアンチセンス干渉ＲＮＡ鎖をコードするＤＮＡオリゴヌクレオチドに結合されるＤＮＡベクターから発現させることができる。選択した発現ベクターに必要な場合は、３’末端のＴ、及び制限部位を形成するヌクレオチドが付加される場合がある。結果として得られるＲＮＡ転写物は、それ自体で折り畳まれて、ステムループ構造を形成する。
投与様式：干渉ＲＮＡは、眼組織注射、例えば、眼周囲、結膜、テノン嚢下、眼房内、硝子体内、眼内、網膜下、結膜下、球後又は管内注射によって；カテーテル又はその他の留置デバイス（例えば、多孔性物質、非多孔性物質又はゼラチン様物質を含む網膜ペレット、眼内挿入物、坐薬又はインプラント）を使用した眼への直接適用によって；局所的な点眼剤又は眼用軟膏によって；又は盲嚢における徐放性デバイス、若しくは強膜に隣接して（経強膜的）若しくは眼の内部に埋め込まれる徐放性デバイスによって、眼に直接送達される場合がある。眼房内注射は、薬剤が小柱網に到達するように角膜を介して前眼房内に行われる場合がある。管内注射は、シュレム管から流出する静脈コレクターチャネルの中に、又は、シュレム管の中に行われる場合がある。静脈内、皮下及び経口送達が含まれるが、これらに限定されない、全身又は非経口投与が検討されている。
被験体：高眼圧症の処置を必要としているか、又は高眼圧症を発症する危険性がある被験体は、本明細書に記載する標的（即ち、カルボニックアンヒドラーゼＩＩ、ＩＶ又はＸＩＩ；β１−又はβ２−アドレナリン作動性受容体；アセチルコリンエステラーゼ；Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ；又はＮａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体）の望ましくない若しくは不適切な発現若しくは活性に関連する高眼圧症を有するか、又はこのような高眼圧症を有する危険性があるヒト又はその他の哺乳動物である。このような障害に関連する眼の構造体には、例えば、眼、網膜、脈絡膜、水晶体、角膜、小柱網、虹彩、視神経、視神経乳頭、強膜、眼房、硝子体腔又は毛様体が含まれる場合がある。被験体は又、眼細胞、細胞培養物、器官、又はｅｘ ｖｉｖｏの器官若しくは組織である場合がある。
処方物及び投薬量：医薬処方物は、生理学的に許容される眼用キャリア媒体（例えば、水、緩衝液、生理的食塩水、グリセリン、ヒアルロン酸及びマンニトール）と混合される、最高９９重量％の本発明の干渉ＲＮＡ又はその塩を含む。
本発明の干渉ＲＮＡは、溶液、懸濁物又はエマルションとして投与される。以下は、本発明により具現化される可能な処方物の例である。
Figure 2008528637
 一般的に、本発明の実施形態の干渉ＲＮＡの有効量は、１００ｐＭ〜１００ｎＭ、１ｎＭ〜５０ｎＭ、５ｎＭ〜約１０ｎＭ、又は約２５ｎＭまでの標的細胞の表面における細胞外濃度をもたらす。このような局所的濃度を達成するために必要となる服用量は、送達方法、送達部位、送達部位と標的細胞又は標的組織との間における細胞層の数、送達が局所的であるか全身的であるかといった幾つかの要因により異なる。送達部位における濃度は、標的細胞又は標的組織の表面におけるよりもかなり高くなる場合がある。局所用組成物は、通常の技能を有する医師の日常的な裁量に従って、１日１回〜４回、或いは毎日、毎週、２週間毎、毎月又はそれ以上といった長期にわたる送達スケジュールで、眼の表面に送達される。処方物のｐＨは、約ｐＨ４〜９又は約４．５〜ｐＨ７．４である。
高眼圧症の標的ｍＲＮＡに対して向けられたｓｉＲＮＡによる患者の治療的処置は、作用の持続期間を増大させ、それによってより少ない頻度での服用、及び、より大きい患者コンプライアンスを可能にすることで小分子の局所用点眼剤よりも有益であることが予想される。
正確な治療方式は医師の裁量に委ねられるが、干渉ＲＮＡは、医師によって指示されるように１滴をそれぞれの眼に入れることによって投与される場合がある。処方物の有効量は、様々な要因（例えば、患者の年齢、人種及び性別、高眼圧症の重篤度、標的遺伝子転写物／タンパク質の代謝回転の速度、干渉ＲＮＡの効力、及び、干渉ＲＮＡの安定性等）により異なる場合がある。一実施形態において、干渉ＲＮＡは眼に局所的に送達され、小柱網、網膜又は視神経乳頭に治療的用量で到達し、それによって高眼圧症に関連する疾患プロセスを改善する。
受容可能なキャリア：眼に受容可能なキャリアは、最大でも、眼の刺激を全く生じさせないか、又は眼の刺激を殆ど生じさせず、必要に応じて好適な保護を提供し、且つ本発明の１つ以上の干渉ＲＮＡを均一な投薬量で送達するようなキャリアを示す。本発明の実施形態の干渉ＲＮＡの投与のための許容され得るキャリアには、カチオン性脂質系トランスフェクション試薬のＴｒａｎｓＩＴ（登録商標）−ＴＫＯ（Ｍｉｎｉｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ［米国ウィスコンシン州マディソン］）、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ、ＯＬＩＧＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥＴＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ［米国カリフォルニア州カールスバッド］）又はＤＨＡＲＭＡＦＥＣＴＴＭ（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ［米国コロラド州ラファイエット］）；ポリカチオン（例えば、ポリエチレンイミン）；カチオン性ペプチド、例えば、Ｔａｔ、ポリアルギニン又はＰｅｎｅｔｒａｔｉｎ（Ａｎｔｐペプチド）等；又はリポソームが含まれる。リポソームは、標準的な小胞形成離質及びステロール（例えば、コレステロール等）から形成され、標的化分子（例えば、内皮細胞表面抗原に対する結合親和性を有するモノクローナル抗体等）を含むことができる。更に、リポソームはＰＥＧ化リポソームである場合がある。
干渉ＲＮＡは、溶液で、懸濁物で、又は生体内分解性若しくは生体内非分解性の送達デバイスで送達される場合がある。干渉ＲＮＡは、単独で、共有結合結合体の成分として、カチオン性脂質、カチオン性ペプチド又はカチオン性ポリマーと複合体化されて、又は標的化ナノ粒子若しくは非標的化ナノ粒子に包まれて送達される場合がある。
眼送達のため、干渉ＲＮＡは、水性の無菌の眼用懸濁物又は眼用溶液を形成するための眼科学的に受容可能な保存剤、共溶媒、界面活性剤、粘度増強剤、浸透強化剤、緩衝剤、塩化ナトリウム又は水と組み合わせられる場合がある。眼用溶液処方物は、干渉ＲＮＡを生理学的に許容され得る等張性の水性緩衝液に溶解することによって調製される場合がある。更に、眼用溶液は、阻害剤の溶解を助けるための眼科学的に受容可能な界面活性剤を含む場合がある。粘度上昇剤（例えば、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロース又はポリビニルピロリドン等）が、化合物の保持を改善するために、本発明の組成物に添加される場合がある。
無菌の眼用軟膏処方物を調製するため、干渉ＲＮＡは、適切なビヒクル（例えば、鉱油、液体ラノリン又は白色ワセリン）において保存剤と組み合わされる。無菌の眼用ゲル処方物は、眼用処方物についてこの分野で知られる方法に従って、例えば、ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標）−９４０（ＢＦ Ｇｏｏｄｒｉｃｈ［米国ノースカロライナ州シャーロット］）の組み合わせから調製される親水性基剤に干渉ＲＮＡを懸濁することによって調製される場合がある。例えば、ＶＩＳＣＯＡＴ（登録商標）（Ａｌｃｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．［米国テキサス州フォートワース］）が眼内注射のために使用される場合もある。本発明のその他の組成物は、干渉ＲＮＡが眼において余り浸透性でない場合に、浸透強化剤（例えば、クレメホル（ｃｒｅｍｅｐｈｏｒ）及びＴＷＥＥＮ（登録商標）８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノラウラート、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ［米国ミズーリ州セントルイス］）等）を含有する場合がある。
キット：本発明の実施形態は、本明細書に示されるようなｍＲＮＡの発現を細胞において減少させるための試薬を含むキットを提供する。キットはｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡ発現ベクターを含有する。ｓｉＲＮＡ及び非ウイルス性のｓｈＲＮＡ発現ベクターの場合、キットは又、トランスフェクション試薬又は他の好適な送達ビヒクルを含有する場合もある。ウイルス性のｓｈＲＮＡ発現ベクターの場合、キットは、ウイルスベクター作製のためのウイルスベクター及び／又は必要な成分を含有する場合もある（例えば、パッケージング細胞株、並びにウイルスベクター鋳型を含むベクター及びパッケージングのための更なるヘルパーベクター）。キットは又、ポジティブコントロール及びネガティブコントロールｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡ発現ベクターを含有する場合もある（例えば、非標的化コントロールｓｉＲＮＡ、又は関連性のないｍＲＮＡを標的化するｓｉＲＮＡ）。キットは又、所期の標的遺伝子のノックダウンを評価するための試薬を含有する場合もある（例えば、標的ｍＲＮＡを検出するための定量的ＰＣＲのためのプライマー及びプローブ、並びに対応するタンパク質に対するウエスタンブロット用の抗体）。或いは、キットは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写によってｓｉＲＮＡを生じさせるために必要な、又はｓｈＲＮＡ発現ベクターを構築するために必要なｓｉＲＮＡ配列又はｓｈＲＮＡ配列、並びに説明書及び材料を含む場合がある。
容器手段をそれによる厳重な閉じ込めで受け入れるために適合化された担体手段と、干渉ＲＮＡ組成物及び眼に受容可能なキャリアを含む第１の容器手段とを組み合わせたパッケージで含むキット形態での薬学的組み合わせが更に提供される。そのようなキットは、当業者には容易に明らかであるように、所望の場合、様々な従来の医薬用キット成分の１つ又は複数（例えば、１つ以上の薬学的に受容可能なキャリアを伴う容器、更なる容器等）を更に含んでもよい。投与する成分の量、投与のための指針、及び／又は、成分を混合するための指針を示す印刷された説明書も又、添付文書又はラベルのいずれであっても、キットに含めることができる。
内因性の標的遺伝子発現のレベルを、例えば、ヒト小柱網（ＴＭ）細胞においてノックダウンする干渉ＲＮＡの能力が下記のようにｉｎ ｖｉｔｒｏで評価される。形質転換されたヒトＴＭ細胞（例えば、ＧＴＭ−３又はＨＴＭ−３と名付けられた細胞株（Ｐａｎｇ，Ｉ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｃｕｒｒ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．，１３：５１〜６３を参照））を標準的な成長培地（例えば、１％ウシ胎児血清が補充されたＤＭＥＭ）においてトランスフェクションの２４時間前に置床する。トランスフェクションを、０．１ｎＭ〜１００ｎＭの範囲での干渉ＲＮＡ濃度で、製造者の説明書に従ってＤｈａｒｍｆｅｃｔ１（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ［米国コロラド州ラファイエット］）を使用して行う。非標的化コントロールの干渉ＲＮＡ及びラミンＡ／Ｃの干渉ＲＮＡ（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）をコントロールとして使用する。標的ｍＲＮＡのレベルを、例えば、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）用のフォワードプライマー及びリバースプライマー、並びに標的部位を包含するプローブセット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ［米国カリフォルニア州フォスターシティー］）を使用して、トランスフェクション後２４時間でｑＰＣＲによって評価する。標的タンパク質のレベルは、例えば、ウエスタンブロットによってトランスフェクション後の約７２時間で評価され得る（実際の時間はタンパク質の代謝回転速度に依存する）。培養された細胞からのＲＮＡ及び／又はタンパク質の単離のための様々な標準的な技術が当業者に周知である。非特異的な、標的を外れた影響の可能性を低下させるために、標的遺伝子の発現における所望されるレベルのノックダウンをもたらす、できる限り低い濃度の干渉ＲＮＡを使用しなければならない。
ＣＡ２タンパク質の発現のレベルをノックダウンする本発明の干渉ＲＮＡの能力は、以下の実施例１において更に例示する。
（実施例１）
（ＨｅＬａ細胞においてＣＡ２を特異的に封じるための干渉ＲＮＡ）
本研究では、培養されたＨｅＬａ細胞における内因性ＣＡ２発現のレベルをノックダウンするＣＡ２干渉ＲＮＡの能力が調べられる。
ＨｅＬａ細胞のトランスフェクションを、標準的なｉｎ ｖｉｔｒｏ濃度（１００ｎＭ及び１ｎＭ）のＣＡ２ｓｉＲＮＡ又は非標的コントロールｓｉＲＮＡ、及び、ＤＨａｒｍａＦＥＣＴＴＭ １トランスフェクション試薬（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ［米国コロラド州ラファイエット］）を使用して行った。全てのｓｉＲＮＡを１Ｘ ｓｉＲＮＡ緩衝液（２０ｍＭ ＫＣｌ、６ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、０．２ｍＭ ＭｇＣｌ２の溶液）に溶解した。ＣＡ２タンパク質の発現及びアクチンタンパク質の発現（ローディングコントロール）をトランスフェクション７２時間後にウエスタンブロット分析によって評価した。ＣＡ２ｓｉＲＮＡは、下記の標的配列について特異性を有する二本鎖の干渉ＲＮＡである：ｓｉＣＡ２＃１は配列番号７２１を標的化する；ｓｉＣＡ２＃３は配列番号１５を標的化する；ｓｉＣＡ２＃４は配列番号７２０を標的化する；ｓｉＣＡ２＃５は配列番号１４１を標的化する。これら４つのＣＡ２ｓｉＲＮＡのそれぞれが、図１のウエスタンブロットデータによって示されるように、非標的化コントロールｓｉＲＮＡと比較して、ＣＡ２の発現を１００ｎＭ及び１ｎＭの両方で著しく低下させた。配列番号７２０を標的化するｓｉＣＡ２＃４、及び、配列番号１４１を標的化するｓｉＣＡ２＃５は、特に効果的であるようであった。
本明細書で引用される参考文献は、それらが、本明細書に示される詳細に対する補充となる例示的な手順の詳細又は他の詳細を提供する程度に、参考として特に組み込まれる。
当業者は、本開示に照らして、本明細書に開示された実施形態の自明な改変が、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく行われ得ることを理解する。本明細書に開示された実施形態の全てが、本開示に照らして過度な実験を行うことなく行うことができ、又、実行することができる。本発明の完全な範囲は本開示及びその均等な実施形態において示される。本明細書は、本発明に与えられる保護の完全な範囲を不当に狭くするために解釈してはならない。
別途指示がない限り、本明細書で使用される「ａ」及び「ａｎ」という用語は、「１つ」、「少なくとも１つ」又は「１つ又は複数」を意味するものとして解釈される。
図１は、ＣＡ２のｓｉＲＮＡ＃１、＃３、＃４及び＃５；非標的化コントロールｓｉＲＮＡ；及び緩衝液コントロール（−ｓｉＲＮＡ）によりトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞の、ＣＡ２及びアクチンに対する抗体によりプローブされたウエスタンブロットを示す。ｓｉＲＮＡは１００ｎＭ又は１ｎＭの濃度であった。矢印は約３０ｋＤａのＣＡ２タンパク質及び４２ｋＤａのアクチンタンパク質のバンドの位置を示す。

Claims (72)

  1. 被験体において高眼圧症の標的ｍＲＮＡの発現を減少させる方法であって、
    長さ１９〜４９ヌクレオチドの干渉ＲＮＡの有効量、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を該被験体に投与する工程を包含し、該干渉ＲＮＡが、配列番号３３〜配列番号８２及び配列番号２２０〜配列番号７１７のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、方法。
  2. 前記干渉ＲＮＡがｓｈＲＮＡである、請求項１に記載の方法。
  3. 前記高眼圧症の標的ｍＲＮＡがβ−アドレナリン作動性受容体をコードし、
    前記干渉ＲＮＡが、配列番号３３〜配列番号５２及び配列番号２２０〜配列番号２８２のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１に記載の方法。
  4. 前記高眼圧症の標的ｍＲＮＡがアセチルコリンエステラーゼをコードし、
    前記干渉ＲＮＡが、配列番号５３〜配列番号６２及び配列番号２８３〜配列番号３３３のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１に記載の方法。
  5. 前記高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＡＴＰ１Ａ１をコードし、
    前記干渉ＲＮＡが、配列番号３３４〜配列番号３７４のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１に記載の方法。
  6. 前記高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＡＴＰ１Ａ２をコードし、
    前記干渉ＲＮＡが、配列番号６３〜配列番号７２及び配列番号３７５〜配列番号４１６のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１に記載の方法。
  7. 前記高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＡＴＰ１Ａ３をコードし、
    前記干渉ＲＮＡが、配列番号４１７〜配列番号４４０のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１に記載の方法。
  8. 前記高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＡＴＰ１Ａ４をコードし、
    前記干渉ＲＮＡが、配列番号４４１〜配列番号５１１のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１に記載の方法。
  9. 前記高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＡＴＰ１Ｂ１をコードし、
    前記干渉ＲＮＡが、配列番号５１２〜配列番号５６３のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１に記載の方法。
  10. 前記高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＡＴＰ１Ｂ２をコードし、
    前記干渉ＲＮＡが、配列番号５６４〜配列番号６０６のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１に記載の方法。
  11. 前記高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＡＴＰ１Ｂ３をコードし、
    前記干渉ＲＮＡが、配列番号６０７〜配列番号６４８のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１に記載の方法。
  12. 前記高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＳＬＣ１２Ａ１をコードし、
    前記干渉ＲＮＡが、配列番号７３〜配列番号８２及び配列番号６４９〜配列番号６７５のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１に記載の方法。
  13. 前記高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＳＬＣ１２Ａ２をコードし、
    前記干渉ＲＮＡが、配列番号６７６〜配列番号７１７のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１に記載の方法。
  14. 連続したヌクレオチドの前記領域が、前記配列識別子の配列の３’末端の末位２番目からの１４ヌクレオチドに対する少なくとも８５％の配列相補性又は少なくとも８５％の配列同一性を有する、少なくとも１４個の連続したヌクレオチドの領域である、請求項１に記載の方法。
  15. 連続したヌクレオチドの前記領域が、前記配列識別子の配列の３’末端の末位２番目からのそれぞれ１５、１６、１７又は１８ヌクレオチドに対する少なくとも８０％の配列相補性又は少なくとも８０％の配列同一性を有する、少なくとも１５個、１６個、１７個又は１８個の連続したヌクレオチドの領域である、請求項１に記載の方法。
  16. 前記干渉ＲＮＡがｍｉＲＮＡである、請求項１に記載の方法。
  17. 前記干渉ＲＮＡがｓｉＲＮＡである、請求項１に記載の方法。
  18. 被験体において高眼圧症を処置するための医薬品の調製における、長さ１９〜４９ヌクレオチドの干渉ＲＮＡの有効量、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物の使用であって、
    該干渉ＲＮＡが、配列番号３３〜配列番号８２及び配列番号２２０〜配列番号７１７のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、使用。
  19. 前記干渉ＲＮＡが、配列番号３３〜配列番号４２及び配列番号２２０〜配列番号２４１のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１８に記載の使用。
  20. 前記干渉ＲＮＡが、配列番号４３〜配列番号５２及び配列番号２４２〜配列番号２８２のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１８に記載の使用。
  21. 前記干渉ＲＮＡが、配列番号５３〜配列番号６２及び配列番号２８３〜配列番号３３３のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１８に記載の使用。
  22. 前記干渉ＲＮＡが、配列番号３３４〜配列番号３７４のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１８に記載の使用。
  23. 前記干渉ＲＮＡが、配列番号６３〜配列番号７２及び配列番号３７５〜配列番号４１６のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１８に記載の使用。
  24. 前記干渉ＲＮＡが、配列番号４１７〜配列番号４４０のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１８に記載の使用。
  25. 前記干渉ＲＮＡが、配列番号４４１〜配列番号５１１のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１８に記載の使用。
  26. 前記干渉ＲＮＡが、配列番号５１２〜配列番号５６３のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１８に記載の使用。
  27. 前記干渉ＲＮＡが、配列番号５６４〜配列番号６０６のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１８に記載の使用。
  28. 前記干渉ＲＮＡが、配列番号６０７〜配列番号６４８のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１８に記載の使用。
  29. 前記干渉ＲＮＡが、配列番号７３〜配列番号８２及び配列番号６４９〜配列番号６７５のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１８に記載の使用。
  30. 前記干渉ＲＮＡが、配列番号６７６〜配列番号７１７のいずれか１つの３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含む、請求項１８に記載の使用。
  31. 前記干渉ＲＮＡがｓｈＲＮＡである、請求項１８に記載の使用。
  32. 前記干渉ＲＮＡがｓｉＲＮＡである、請求項１８に記載の使用。
  33. 前記組成物が、局所、硝子体内、経強膜、眼周囲、結膜、テノン嚢下、眼房内、網膜下、結膜下、球後又は管内投与のために調製される、請求項１８に記載の使用。
  34. 前記組成物が、前記干渉ＲＮＡを発現することができる発現ベクターである、請求項１８に記載の使用。
  35. 前記干渉ＲＮＡがｍｉＲＮＡである、請求項１８に記載の使用。
  36. 被験体において高眼圧症の標的ｍＲＮＡの第２の改変体の発現を減少させることなく高眼圧症の標的ｍＲＮＡの第１の改変体の発現を減少させる方法であって、長さ１９〜４９ヌクレオチドの干渉ＲＮＡの有効量、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を該被験体に投与する工程を包含し、該干渉ＲＮＡが、該第１の改変体の３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含み、該第２の改変体ｍＲＮＡの発現を減少させることなく該第１の改変体ｍＲＮＡの発現が減少し、該第１の改変体標的ｍＲＮＡが配列番号５、配列番号１２４、配列番号１２７又は配列番号１２９であり、該第２の改変体標的ｍＲＮＡが配列番号１２３、配列番号１２５、配列番号１２８又は配列番号１３０である、方法。
  37. 被験体において高眼圧症の標的ｍＲＮＡの第２の改変体の発現を減少させることなく高眼圧症の標的ｍＲＮＡの第１の改変体の発現を減少させる方法であって、
    長さ１９〜４９ヌクレオチドの干渉ＲＮＡの有効量、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を該被験体に投与する工程を包含し、該干渉ＲＮＡが、該第１の改変体の３’末端の末位２番目からの１３ヌクレオチドに対する少なくとも９０％の配列相補性又は少なくとも９０％の配列同一性を有する、少なくとも１３個の連続したヌクレオチドの領域を含み、
    該第２の改変体ｍＲＮＡの発現を減少させることなく該第１の改変体ｍＲＮＡの発現が減少し、該第１の改変体標的ｍＲＮＡが配列番号１２３、配列番号１２５、配列番号１２８又は配列番号１３０であり、該第２の改変体標的ｍＲＮＡが配列番号５、配列番号１２４、配列番号１２７又は配列番号１２９である、方法。
  38. 被験体の高眼圧症の標的ｍＲＮＡの発現を減少させる方法であって、
    長さ１９〜４９ヌクレオチドの干渉ＲＮＡの有効量、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を該被験体に投与する工程を包含し、
    該干渉ＲＮＡが、センスヌクレオチド鎖、アンチセンスヌクレオチド鎖、及び少なくとも１９ヌクレオチドの少なくともほぼ完全な連続した相補性の領域を含み；
    該アンチセンス鎖が、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２又は配列番号１３３に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２又は配列番号１３３にそれぞれ対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有し、
    高眼圧症の標的ｍＲＮＡの発現が減少する、方法。
  39. 前記組成物が、局所、硝子体内、経強膜、眼周囲、結膜、テノン嚢下、眼房内、網膜下、結膜下、球後又は管内経路を介して投与される、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記組成物が、前記干渉ＲＮＡを発現することができる発現ベクターからのｉｎ ｖｉｖｏ発現を介して投与される、請求項３８に記載の方法。
  41. 前記高眼圧症の標的ｍＲＮＡがβ１−及びβ２−アドレナリン作動性受容体をコードし、前記アンチセンス鎖が、配列番号３又は配列番号４に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ配列番号３又は配列番号４にそれぞれ対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有する、請求項３８に記載の方法。
  42. 前記高眼圧症の標的ｍＲＮＡがアセチルコリンエステラーゼをコードし、前記アンチセンス鎖が、配列番号５又は配列番号１２３に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ配列番号５又は配列番号１２３にそれぞれ対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有する、請求項３８に記載の方法。
  43. 前記高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＮａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅのサブユニットをコードし、前記アンチセンス鎖が、配列番号６、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１又は配列番号１３２に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ配列番号６、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１又は配列番号１３２にそれぞれ対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有する、請求項３８に記載の方法。
  44. 前記高眼圧症の標的ｍＲＮＡがＮａ−Ｋ−２Ｃｌ共輸送体をコードし、前記アンチセンス鎖が、配列番号７又は配列番号１３３に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ配列番号７又は配列番号１３３にそれぞれ対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有する、請求項３８に記載の方法。
  45. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号３に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  46. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号４に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  47. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド１８７５、１８９０、１８９１、２０１１、２０１２、２１３３又は２１３４を含む、配列番号１２３に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  48. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号５に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  49. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１２４に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  50. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド４３６、４４１、４４３、５５２、６１７、７０１、７０２、８３２、２２０４、２２９１又は２４９５を含む、配列番号１２５に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  51. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号６に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  52. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１２６に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  53. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１２７に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  54. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１２８に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  55. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１２９に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  56. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド１０６３、１１０２、１１０６、１１０７、１１０８、１１０９、１１１１又は１１５１を含む、配列番号１３０に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  57. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１３１に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  58. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１３２に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  59. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号７に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  60. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１３３に対応するｍＲＮＡを標的化するように設計されている、請求項３８に記載の方法。
  61. 更に、１９〜４９ヌクレオチドの長さを有し、且つセンスヌクレオチド鎖、アンチセンスヌクレオチド鎖、及び少なくとも１９ヌクレオチドの少なくともほぼ完全な相補性の領域を含む第２の干渉ＲＮＡを前記被験体に投与する工程を包含し；
    該第２の干渉ＲＮＡの該アンチセンス鎖が、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２又は配列番号１３３に対応するｍＲＮＡの第２の部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該アンチセンス鎖が、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２又は配列番号１３３にそれぞれ対応するｍＲＮＡの該第２のハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有する、請求項３８に記載の方法。
  62. 被験体において高眼圧症を処置するための医薬品の調製における、長さ１９〜４９ヌクレオチドの干渉ＲＮＡの有効量、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物の使用であって、
    該干渉ＲＮＡが、センスヌクレオチド鎖、アンチセンスヌクレオチド鎖、及び少なくとも１９ヌクレオチドの少なくともほぼ完全な連続した相補性の領域を含み；
    該アンチセンス鎖が、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２又は配列番号１３３に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２又は配列番号１３３にそれぞれ対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有する、使用。
  63. 前記センスヌクレオチド鎖及び前記アンチセンスヌクレオチド鎖がループヌクレオチド配列によって連結される、請求項６２に記載の使用。
  64. 前記組成物が、局所、硝子体内、経強膜、眼周囲、結膜、テノン嚢下、眼房内、網膜下、結膜下、球後又は管内投与のために調製される、請求項６２に記載の使用。
  65. 前記組成物が、前記干渉ＲＮＡを発現することができる発現ベクターを含む、請求項６２に記載の使用。
  66. 被験体の高眼圧症の標的ｍＲＮＡの発現を減少させる方法であって、
    長さ１９〜４９ヌクレオチドの一本鎖の干渉ＲＮＡの有効量、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を該被験体に投与する工程を包含し、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号３に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号３に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するか；
    又は、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号４に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号４に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するか；
    又は、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド１８７５、１８９０、１８９１、２０１１、２０１２、２１３３又は２１３４を含む、配列番号１２３に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号１２３に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するか；
    又は、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号５に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号５に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するか；
    又は、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１２４に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号１２４に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するか；
    又は、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド４３６、４４１、４４３、５５２、６１７、７０１、７０２、８３２、２２０４、２２９１又は２４９５を含む、配列番号１２５に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号１２５に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するか；
    又は、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号６に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号６に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するか；
    又は、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１２６に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号１２６に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するか；
    又は、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１２７に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号１２７に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するか；
    又は、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１２８に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号１２８に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するか；
    又は、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１２９に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号１２９に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するか；
    又は、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド１０６３、１１０２、１１０６、１１０７、１１０８、１１０９、１１１１又は１１５１を含む、配列番号１３０に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号１３０に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するか；
    又は、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１３１に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号１３１に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するか；
    又は、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１３２に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号１３２に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するか；
    又は、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号７に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号７に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有するか；
    又は、
    該一本鎖の干渉ＲＮＡが、ヌクレオチド
    Figure 2008528637
     を含む、配列番号１３３に対応するｍＲＮＡの部分に対して生理学的条件下でハイブリダイズし、且つ該干渉ＲＮＡが、配列番号１３３に対応するｍＲＮＡの該ハイブリダイズ部分に対し少なくともほぼ完全な連続した相補性の少なくとも１９ヌクレオチドの領域を有し；
    高眼圧症の標的ｍＲＮＡの発現がそれにより減少する、方法。
  67. 前記干渉ＲＮＡがｍｉＲＮＡである、請求項６６に記載の方法。
  68. 前記干渉ＲＮＡがｓｉＲＮＡである、請求項６６に記載の方法。
  69. １９〜４９ヌクレオチドの長さを有し、且つ配列番号３３〜配列番号８２及び配列番号２２０〜配列番号７１７のいずれか１つのヌクレオチド配列を有する干渉ＲＮＡ又はその相補体、及び薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物。
  70. 前記干渉ＲＮＡがｓｈＲＮＡである、請求項６９に記載の組成物。
  71. 前記干渉ＲＮＡがｓｉＲＮＡである、請求項６９に記載の組成物。
  72. 前記干渉ＲＮＡがｍｉＲＮＡである、請求項６９に記載の組成物。
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