MX2007001240A - Derivados de diarilmetil-piperazina, preparaciones y usos de las mismas. - Google Patents

Abstract

Compuestos de la formula general I, asi como sus sales, enantiomeros y composiciones farmaceuticas que incluyen los compuestos preparados. Estos son utiles en terapia, en particular en el tratamiento de dolor, depresion y ansiedad.

Description

DERIVADOS DE DIARILMETIL-PIPERAZINA, PREPARACIONES Y USOS DE LAS MISMAS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención está enfocada en nuevos compuestos, en un proceso para su preparación, su uso y composiciones farmacéuticas que comprenden los nuevos compuestos. Los nuevos compuestos son útiles en terapia, y en particular para el tratamiento de dolor, ansiedad y trastornos gastrointestinales funcionales. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Se ha identificado que el receptor delta ("d") posee un papel en diversas funciones corporales, tales como sistemas circulatorios y de dolor. Por lo tanto, los ligandos para el receptor d pueden encontrar uso potencial como analgésicos, y/o como agentes antihipertensivos. Los ligandos para el receptor d también han mostrado que poseen actividades inmunomoduladoras . La identificación de al menos tres poblaciones diferentes de receptores opioides (µ, d y K) ahora se establece perfectamente y los tres son evidentes tanto en el sistema nervioso central como en el periférico de muchas especies, incluyendo el ser humano. Se ha observado analgesia en varios modelos animales cuando uno o más de estos receptores ha sido activado. REF.: 178601 Con pocas excepciones, los ligandos opioides d actualmente disponibles, selectivos, son de naturaleza peptídica y son inadecuados para la administración por rutas sistémicas. Un ejemplo de un agonista d no peptídico es SNC80 (Bils y E.J. et al., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 273(1), pp. 359-366 (1995). Han sido identificados muchos compuestos de agonistas d en la técnica anterior, los cuales tienen muchas desventajas ya que sufren de pobre farmacocinética y no son analgésicos cuando se administran por rutas sistémicas. También, se ha documentado que muchos de estos compuestos agonistas d muestran efectos convulsivos significativos cuando se administran sistémicamente. _ La publicación PCT O02/094794 describe algunos agonistas d. Sin embargo, persiste una necesidad de agonistas d mejorados . BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Ahora hemos descubierto sorprendentemente que ciertos compuestos muestran una o más propiedades mejoradas, es decir potencia de agonista d, potencia in vivo, farmacocinética, biodisponibilidad, estabilidad in vi tro, estabilidad in vivo, penetración cerebral, mejoradas y/o baja toxicidad. Excepto que se especifique de otro modo en el contexto de esta especificación, la nomenclatura utilizada en esta especificación generalmente va de acuerdo a los ejemplos y reglas establecidas en Nomenclature of Organic Chemistry, Secciones A, B, C, D, E, F, y H, Pergamon Press, Oxford 1979, la cual se incorpora por referencia en la presente, por sus nombres y reglas estructurales químicas ejemplares sobre la nomenclatura de estructuras químicas. Opcionalmente, se puede generar un nombre de un compuesto utilizando un programa de nomenclatura química: ACD/ChemSketch, Versión 5.09 /Septiembre 2001, Advanced Chemistry Development, Inc., Toronto Canadá. "Enantioméricamente puro" se refiere a un compuesto que contiene al menos 75% del enantiómero nombrado, fuera de la cantidad total de los ^ios posibles enantiómeros_ contenidos en éste. En una modalidad particular, "enantioméricamente puro" se refiere a un compuesto que contiene al menos 90% del enantiómero nombrado, fuera de la cantidad total de los dos posibles enantiómeros contenidos en éste. En una modalidad más particular, "enantioméricamente puro" se refiere a un compuesto que contiene al menos 95% del enantiómero nombrado fuera de la cantidad total de los dos posibles enantiómeros contenidos en éste. "Animal de sangre caliente" incluye al ser humano. En un aspecto, la invención proporciona un compuesto de la fórmula I, sus sales farmacéuticamente aceptables, sus solvatos, sus profármacos, sus diastereoisómeros, uno o más de sus enantiómeros, y sus mezclas : I En una modalidad, el compuesto de la invención se puede seleccionar de: sus sales farmacéuticamente aceptables, uno o más enantiómeros aislados de los mismos y mezclas de los mismos. En otra modalidad, el compuesto de la invención se puede seleccionar de: En otra modalidad, el compuesto de la presente invención se puede seleccionar de: £ y sus sales farmacéuticamente aceptables . En una modalidad más, el compuesto de la presente invención se puede seleccionar de: y sus sales farmacéuticamente aceptables. En otra modalidad, el compuesto de la presente invención se puede seleccionar de: y sus sales farmacéuticamente aceptables. En otra modalidad, el compuesto de la presente invención se puede seleccionar de 4- { (S) -3-aminofenil) [4- (4-fluorobencil Jpiperazin-1-il]metil }-N, N-dietilbenzamida; 4- { (R) -3-aminofenil) [4- (4-fluorobencil )piperazin-l-il] metil }-N,N-dietilbenzamida; 4- [ (R) - (3-aminofenil) [4- [ (2-fluorofenil ) metil ] -1-piperazinil ] metil ] -N, N-dietilbenzamida; 4-[ (R) - (3-aminofenil) [4-[ (3-fluorofenil)metil] -1-piperazinil ] metil] -N,, N-dietilbenzamida y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En una modalidad adicional, el compuesto de la presente invención se puede seleccionar de 4-{(S)-3-aminofenil) [4- (4-fluorobencil)piperazin-l-il]metil}-N,N-dietilbenzamida enantioméricamente pura; 4-{(R)-3-aminofenil) [4- (4-fluorobencil) piperazin-l-il]metil} -N, N-dietilbenzamida enantioméricamente pura; 4-[(R)-(3-aminofenil) [4- [ (2-fluorofenil) metil] -1-piperazinil]metil] -N, N-dietilbenzamida enantioméricamente pura; 4-[(R)-(3-aminofenil) [4- [ (3-fluorofenil) metil] -1-piperazinil]metil] -N, N-dietilbenzamida enantioméricamente pura y las sales farmacéuticamente aceptables de las mismas.

Se comprenderá que cuando los compuestos de la presente invención contienen uno o más centros quirales, los compuestos de la invención pueden existir en, y ser aislados como, formas enantioméricas o diastereoisoméricas, o como una mezcla racémica. La presente invención incluye cualquier posible enantiómero, diastereoisómero, racemato o mezcla de los mismos, de un compuesto de la formula I. Las formas ópticamente activas del compuesto de la invención se pueden preparar, por ejemplo, por separación cromatográfica quiral de un racemato, por síntesis a partir de materiales iniciales ópticamente activos o por síntesis asimétrica con base en los procedimientos descritos más adelante. También se comprenderá que ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas solvatadas, por ejemplo hidratadas, así como no solvatadas. Además se debe comprender que la presente invención abarca todas las formas solvatadas tales de los compuestos de la fórmula I. Dentro del alcance de la invención, también se encuentran sales de los compuestos de la fórmula I. Generalmente, las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención se pueden obtener utilizando procedimientos estándares bien conocidos en la técnica, por ejemplo mediante reacción de un compuesto suficientemente básico, por ejemplo una amina alcalina con un ácido adecuado, por ejemplo, HCl o ácido acético, para proporcionar un anión fisiológicamente aceptable. También puede ser posible producir una sal de metal alcalino correspondiente (tal como sodio, potasio, o litio) o una sal de metal alcalinotérreo (tal como calcio) mediante tratamiento de un compuesto de la presente invención que tenga un protón adecuadamente ácido, tal como un ácido carboxílico o un fenol, con un equivalente de un metal alcalino, o hidróxido o alcóxido de metal alcalinotérreo (tal como el etóxido o metóxido) , o una amina orgánica adecuadamente básica (tal como colina o meglumina) en un medio acuoso, seguido por técnicas convencionales de purificación. En una modalidad, el compuesto de la fórmula I anterior puede ser convertido en una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, particularmente, una sal por adición de ácido tal como un clorhidrato, bromhidrato, fosfato, acetato, fumarato, maleato, tartrato, citrato, metansulfonato o p-toluensulfonato. Los nuevos compuestos de la presente invención son útiles en terapia, especialmente para el tratamiento de diversas afecciones dolorosas tales como dolor crónico, dolor neuropático, dolor agudo, dolor por cáncer, dolor provocado por artritis reumatoide, migraña, dolor visceral, etc. Esta lista sin embargo, no se debe interpretar como exhaustiva. Los compuestos de la invención son útiles para el tratamiento de diarrea, depresión, ansiedad, y/o trastornos relacionados al estrés tales como trastornos por estrés post-traumático, trastorno de pánico, trastorno de ansiedad generalizada, fobia social, trastorno obsesivo-compulsivo, incontinencia urinaria, eyaculación precoz, diversas enfermedades mentales, tos, edema pulmonar, diversos trastornos gastrointestinales, por ejemplo constipación, trastornos gastrointestinales funcionales tales como síndrome de intestino irritable y dispepsia funcional, enfermedad de Parkinson y otros trastornos motores, lesión cerebral traumática, accidentes cerebrovasculares, cardioprotección después de infarto al miocardio, lesión de la médula espinal y adicción a fármacos, incluyendo el tratamiento de abuso de alcohol, nicotina, opioides y otros fármacos y para trastornos del sistema nervioso simpático, por ejemplo hipertensión. Los compuestos de la invención son útiles como inmunomoduladores, especialmente para enfermedades autoinmunitarias, tales como artritis, para injertos de piel, trasplantes de órganos y necesidades quirúrgicas similares, para enfermedades del colágeno, diversas alergias, para utilizarse como agentes antitumorales y agentes antivirales. Los compuestos de la invención son útiles en estados de enfermedad, en donde está presente o implicada la degeneración o la disfunción de receptores de opioides en ese paradigma. Esto puede implicar el uso de versiones isotópicamente marcadas de los compuestos de la invención, en técnicas de diagnóstico y aplicaciones de formación de imagen tales como tomografía de emisión de positrones (PET) . Los compuestos de la invención son útiles como un agente analgésico para utilizarse durante anestesia general y el cuidado monitoreado de anestesia. Las combinaciones de agentes con propiedades diferentes se utilizan frecuentemente para lograr un balance de efectos, necesario para mantener el estado anestésico (por ejemplo amnesia, analgesia, relajación y sedación muscular) . Se incluyen en esta combinación los anestésicos inhalados, hipnóticos, ansiolíticos, bloqueadores neuromusculares y opioides. Se encuentra dentro del alcance de la invención, el uso de cualquier compuesto de la fórmula I como se define anteriormente, para la fabricación de un medicamento. También se encuentra dentro del alcance de la invención, el uso de cualquier compuesto de la invención para la fabricación de un medicamento, para la terapia de dolor que incluye, pero no se limita a: dolor agudo, dolor crónico, dolor neuropático, dolor de espalda, dolor por cáncer, y dolor visceral . También dentro del alcance de la invención se encuentra el uso de cualquier compuesto de la invención, para la fabricación de un medicamento para la terapia de ansiedad, que incluye pero no se limita a: fobia social, trastorno de ansiedad general, ansiedad aguda. También dentro del alcance de la invención se encuentra el uso de cualquier compuesto de la invención, para la fabricación de un medicamento para la terapia de depresión. También dentro del alcance la invención se encuentra el uso de cualquier compuesto de la invención, para la fabricación de un medicamento para la terapia de la enfermedad de Parkinson. También dentro del alcance de la invención se encuentra el uso de cualquier compuesto de la presente _ invención, para la_ fabricación de un medicamento para el tratamiento de cualquiera de las afecciones descritas anteriormente. Otro aspecto más de la invención es un método para el tratamiento de un sujeto que sufre cualquiera de las afecciones descritas anteriormente, mediante el cual, una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención, se administra a un paciente que necesita tal tratamiento. De este modo, la invención proporciona un compuesto de la fórmula I, o sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define anteriormente en la presente, para el uso en terapia. En el contexto de la presente especificación, el término "terapia" también incluye "profilaxis", excepto que las indicaciones específicas digan lo contrario. Los términos "terapéutico" y "terapéuticamente" se deben construir en concordancia. El término "terapia" dentro del contexto de la presente invención, también abarca administrar una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención, para mitigar ya sea un estado de enfermedad preexistente, afección aguda o crónica, o recurrente. Esta definición también abarca terapias profilácticas para la prevención de afecciones recurrentes y terapia continuada para trastornos crónicos . En el uso para la terapia en un animal de sangre caliente tal como un humano, el compuesto de la invención se puede administrar en la forma de una composición farmacéutica convencional mediante cualquier ruta, incluyendo la oral, intramuscular, subcutánea, tópica, intranasal, intraperitoneal, intratoráxica, intravenosa, epidural, intratecal, intracerebroventricular y por inyección en las coyunturas . En una modalidad de la invención, la ruta de administración puede ser oral, intravenosa o intramuscular. La dosificación dependerá de la ruta de administración, la severidad de la enfermedad, la edad y el peso del paciente y otros factores normalmente considerados por el médico que atiende, cuando se determina el régimen individual y el nivel de dosificación en el caso más apropiado para un paciente particular. Además, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención, sus solvatos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un portador farmacéuticamente aceptable. Particularmente, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención, sus solvatos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un portador farmacéuticamente aceptable para terapia, más particularmente para terapia de dolor y ansiedad. Además, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención, sus solvatos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un portador farmacéuticamente aceptable, utilizado en cualquiera de las afecciones descritas anteriormente . Para preparar las composiciones farmacéuticas a partir de los compuestos de esta invención, los portadores farmacéuticamente aceptables, inertes pueden ser sólidos o líquidos. Las preparaciones en forma sólida incluyen polvos, tabletas, granulos dispersables, cápsulas, cachets, y supositorios. Un portador sólido puede ser una o más sustancias, que pueden también actuar como diluyentes, agentes saborizantes, solubilizantes, lubricantes, agentes de suspensión, aglutinantes, o agentes desintegradores de tableta; también puede ser un material de encapsulamiento. En polvos, el portador es un sólido finamente dividido, que está en una mezcla con el compuesto finamente dividido de la invención, o el componente activo. En tabletas, el componente activo está mezclado con el portador, que tiene las propiedades de enlace necesarias, en proporciones adecuadas y compactado en la forma y tamaño deseados . Para preparar composiciones de supositorios, una cera con pajo punto de fusión tal corno_ una mezcla de glicéridos de ácido graso y manteca de cacao, se funde primeramente y el ingrediente activo se dispersa ahí mediante, por ejemplo agitación. La mezcla homogénea fundida entonces se vacía en moldes de tamaño conveniente y se deja enfriar y solidificar. Los portadores adecuados son carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, lactosa, azúcar, pectina, dextrina, almidón, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, una cera de bajo punto de fusión, manteca de cacao, y similares. El término composición se pretende que también incluya la formulación del componente activo con material de encapsulamiento como un portador, proporcionando una cápsula en la cual el componente activo (con o sin otros portadores) está rodeado por un portador que está en asociación con éste. Similarmente, se incluyen los cachets. Las tabletas, polvos, cachets, y cápsulas se pueden utilizar como formas de dosificación sólida, adecuadas para la administración oral. Las composiciones en forma líquida incluyen soluciones, suspensiones, y emulsiones. Por ejemplo, el agua estéril o las soluciones acuosas de propilenglicol de los compuestos activos, pueden ser preparaciones líquidas adecuadas para la administración parenteral. Las composiciones, líquidas^ .también se ..pueden _ formular en solución, en solución acuosa de polietilenglicol. Las soluciones acuosas para la administración oral se pueden preparar mediante la disolución del componente activo en agua y agregando colorantes, agentes saborizantes, estabilizantes, y agentes espesantes, adecuados, como se desee. Las suspensiones acuosas para el uso oral se pueden producir mediante la dispersión del componente activo finamente dividido en agua, junto con un material viscoso tal como gomas sintéticas naturales, resinas, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, y otros agentes de la suspensión, conocidos en la técnica de formulación farmacéutica.

Dependiendo del modo de administración, la composición farmacéutica preferentemente incluirá desde 0.05% hasta 99% p (por ciento en peso), más preferentemente desde 0.10 hasta 50% p, del compuesto de la invención, todos los porcentajes en peso se basan en la composición total. Una cantidad terapéuticamente eficaz para la práctica de la presente invención se puede determinar, mediante el uso de los criterios conocidos, incluyendo la edad, peso y respuesta del paciente individual, e interpretados dentro del contexto de la enfermedad que se esté tratando o que se vaya a prevenir, por alguien de experiencia ordinaria en la técnica. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En un aspecto adicional, la presente_ invención proporciona un método de preparación de los compuestos de la presente invención. En una modalidad, la invención proporciona un proceso para preparar un compuesto de la fórmula I, que comprende: I hacer reaccionar N,N-dietil-4- [ (3-nitrofenil) (1-piperazinil) metil] benzamida con R-CH2X o R-CHO para formar un compuesto intermediario nitro; reducir el compuesto intermediario con un agente reductor adecuado, en donde R se selecciona de 2-fluorofenilo, 3-fluorofenilo y 4-fluorofenilo; y X se selecciona de Cl, I, Br, -OTs (tosilo) y -OMs (mesilato) . En una modalidad, el agente reductor se puede seleccionar de hidrógeno, zinc y hierro. En otra modalidad, el N,N-dietil-4- [ (3-nitrofenil) (1-piperazinil) metil] enzamida se puede seleccionar de N,N-dietil-4- [ (S) - (3-nitrofenil) (1-piperazinil)metil] benzamida y N,N-dietil-4- [ (R) - (3-nitrofenil) (1-piperazinil)metil] benzamida. En otra modalidad, R puede ser 2-fluorofenilo; y el compuesto de la fórmula I puede ser 4- [ (3-aminofenil) [4- [ (2-fluorofenil) metil] -1-piperazinil] metil] -N, N-dietilbenzamida . En otra modalidad, R puede ser 3-fluorofenilo; y el compuesto de la fórmula I puede ser 4- [ (3-aminofenil) [4-[(3-fluorofenil ) metil ] -1-piperazinil ]metil ] -N, N-dietilbenzamida . En otra modalidad, R puede ser 4-fluorofenilo; y el compuesto de la fórmula I puede ser 4- [ (3-aminofenil) [4- [ (4-fluorofenil ) metil ] -1-piperazinil] metil ] -N, N-dietilbenzamida . Más particularmente, los compuestos de la presente invención e intermediarios utilizados para la preparación de éstos, se pueden preparar de acuerdo a las rutas sintéticas como se ejemplifica en los Esquemas de reacción 1 y 2 Esquema de reacción 1 Intermediario 4b: enantiómero (R) Esquema de reacción 2 Intermediario 4a: enantiómero (S) , - c oro etano Enantiómeros (R): Compuesto 2: R1 =4-fluorofenilo; Compuesto 3: R1 =2-fluorofenilo; Compuesto 4: R1 =3-fluorofenilo.

EVALUACIÓN BIOLÓGICA Y PROPIEDADES Se descubrió que los compuestos de la invención son activos hacia los receptores d en animales de sangre caliente, por ejemplo el humano. Particularmente se descubrió que los compuestos de la invención son ligandos efectivos del receptor d .

En ensayos in vi tro, más adelante, se demuestra que éstos tienen actividades sorprendentes, especialmente con respecto a la potencia y a la eficacia de los agonistas como se demuestra en el ensayo funcional de cerebro de rata y/o el ensayo funcional del receptor d humano (bajo) . Esta característica puede estar relacionada a la actividad in vivo y puede no estar correlacionada linealmente con la afinidad de enlace. En estos ensayos in vi tro, se prueba un compuesto para observar su actividad hacia los receptores d y se obtiene el IC50 para determinar la actividad selectiva para un compuesto particular hacia los receptores d. En el presente contexto, IC50 generalmente se refiere a la concentración del compuesto, en el cual se ha observado 50% de desplazamiento de un ligando del receptor d radioactivo, estándar. Las actividades del compuesto hacia los receptores K y µ también se miden en un ensayo similar. Modelos in vitro Cultivo celular Las células humanas 293S que expresan los receptores K, d y µ humanos y resistencia a neomicina se desarrollan en suspensión a 37°C y 5% de C02 en matraces agitados que contienen DMEM sin calcio y FBS al 10%, BCS al 5%, Pluronic F-68 al 0.1%, y 600 µg/ml de geneticina. Los cerebros de rata se pesaron y se enjuagaron en PBS enfriado en hielo (que contenía EDTA 2.5 mM, pH 7.4). Los cerebros (rata) se homogeneizaron con un aparato Polytron durante 30 segundos en amortiguador de lisis enfriado en hielo (Tris 50 mM, pH 7.0, EDTA 2.5 mM, con fluoruro de fenilmetilsulfonilo agregado justo antes del uso hasta 0.5 mM a partir de una reserva 0.5 M en DMSO: etanol) . Preparación membranal Las células se convirtieron en pellas y se resuspendieron en amortiguador de lisis (Tris, 50 mM pH 7.0, EDTA 2.5 mM, con PMSF agregado junto antes del uso hasta 0.1 mM a partir de una reserva 0.1 M en etanol), se incubaron en hielo durante 15 minutos, luego se homogeneizaron con un aparato Polytron por 30 segundos. La suspensión se agitó a 1,000 g (max.) durante 10 minutos a 4°C. El sobrenadante se guardó en hielo y las pellas se resuspendieron y se agitaron como se dijo anteriormente. Los sobrenadantes de ambas agitaciones se combinaron y se agitaron a 46,000 g (max.) durante 30 minutos. Las pellas se resuspendieron en amortiguador Tris frío (Tris 50 mM/Cl, pH 7.0) y se agitaron nuevamente. Las pellas finales se resuspendieron en amortiguador membranal (Tris 50 mML sacarosa 0.32 M_,_ pH 7.0). Alícuotas (1 ml) en tubos de polipropileno se congelaron en hielo seco/etanol y se almacenaron a -70°C hasta su uso. Las concentraciones proteicas se determinaron por un ensayo de Lowry modificado, con dodecil-sulfato de sodio. Ensayos de enlace Las membranas se descongelaron a 37°C, se enfriaron en hielo (o se mantuvieron sobre hielo si no se utilizaban inmediatamente) , se pasaron tres veces a través de una aguja de calibre 25, y se diluyeron en amortiguador de enlace (Tris 50 mM, MgCl2 3 mM, 1 mg/ml de BSA (Sigma A-7888), pH 7.4, el cual se almacenó a 4°C después de la filtración a través de un filtro de 0.22 µm, y al cual se le había agregado recientemente 5 µg/ml de aprotinina, bestatina 10 µM, diprotina A 10 µM, si las membranas se derivaban de tejido (rata, ratón, mono, sin DTT) . Las alícuotas de 100 µl se agregaron a tubos de polipropileno de 12x75mm helados que contenían 100 µl del radioligando apropiado y 100 µl de compuesto de prueba a diversas concentraciones. Se determinaron el enlace total (TB) e inespecífico (NS) en ausencia y presencia de naloxona 10 µM respectivamente. Los tubos se agitaron en torbellino y se incubaron a 25°C durante 60-75 minutos, después de ese tiempo el contenido se filtró a vacío rápidamente y se lavó con aproximadamente 12 ml/tubo de amortiguador de lavado helado (Tris 50 mM, pH 7.0, MgCl2 3 mM) , a través de_filtros GF/B (Whatman) previamente remojados por al menos 2 horas en polietilenimina al 0.1%. La radioactividad (dpm) retenida en los filtros se midió con un contador beta después de remojar los filtros por al menos 12 horas en minifráseos que contenían 6.7 ml de fluido de cintilación. Si el ensayo se ajusta en placas de 96 pozos profundos, la filtración se realiza sobre unifiltros remojados en PEÍ con 96 lugares, los cuales se lavan con 3 x 1 ml de amortiguador de lavado, y se secan en un horno a 55°C durante 2 horas. Las placas de filtro se cuentan en un contador TopCount (Packard) después de agregar 50 µl de fluido de cintilación MS-20/pozo. En el caso de ensayos efectuados en placas de 96 pozos profundos, el IC50 de los compuestos se evalúa a partir de las curvas de desplazamiento de 10 puntos en el caso de Delta, y de curvas de desplazamiento de 5 puntos en el caso de Mu y Kappa. El ensayo se da en 300 µl con la cantidad apropiada de proteína membranal (2 µg, 35 µg, y 1 µg, en el caso de Delta, Mu, y Kappa, respectivamente) y 50000-80000 dpm/pozo del rastreador apropiado (1251-Deltorphin II, 125I-FK33824 , y 125I-DPDYN para Delta, Mu, y Kappa, respectivamente) . Se determinaron el enlace total y el enlace inespecí fico , en ausencia y presencia de 10 µM de Naloxona. Ensayos funcionales La actividad agonista de los compuestos se midió mediante la determinación del grado al cual el complejo de receptor de compuestos activa el enlace de GTP a proteínas G, a las que están acoplados los receptores. El ensayo de unión con GTP, GTP[?]35S se combina con compuestos de prueba y membranas provenientes de células HEK-293S que expresan los receptores opioides humanos clonados o a partir de cerebro de ratón o de rata homogeneizado. Los agonistas estimulan el enlace de GTP[?]35S en estas membranas. Los valores EC50 y Emax de los compuestos se determinan a través de las curvas de dosis-respuesta. Se efectúan desplazamientos a la derecha de la curva de dosis-respuesta por el antagonista delta naltrindol, para verificar que la actividad agonista es mediada a través de los receptores delta. Para los ensayos funcionales del receptor d humano, se mide el EC50 (bajo) cuando los receptores d humanos utilizados en el ensayo se expresan a niveles inferiores en comparación con aquellos utilizados en la determinación de EC50 (alto) . Se determinan los valores Emax en relación al agonista d estándar SNC80, por ejemplo, superior al 100% es un compuesto que tiene una eficacia mejor que SNC80. Procedimiento para GTP de cerebro de rata Las membranas de cerebro _de_ rata se descongelan a 37°C, se pasan 3 veces a través de una aguja de extremo romo, de calibre 25 y se diluyen en el enlace de GTP?S (Hepes 50 mM, NaOH 20 mM, NaCl 100 mM, EDTA 1 mM , MgCl2 5 mM, pH 7.4, Agregar primero: DTT 1 mM, BSA al 0.1%). Se agrega al final GDP 120 µM en diluciones membranales. Se evalúan el EC50 y Emax de los compuestos a partir de las curvas de dosis-respuesta de 10 puntos, dadas en 300 µl con la cantidad apropiada de proteína membranal (20 µg/pozo) y 100000-130000 dpm de GTP?35S por pozo (0.11-0.14 nM) . Se determina el enlace estimulado basal y máximo en ausencia y presencia de SNC80 3 µm . El ensayo se realiza sobre células HEK 293S que expresan establemente los receptores Delta clonados, se da en un amortiguador ligeramente diferente (Hepes 50 mM, NaOH 20 mM, NaCl 200 mM, EDTA 1 mM, MgCl2 5 mM, pH 7.4, Agregar primero: BSA al 0.5%, sin DTT) y con una concentración final de 3µM de GDP. Análisis de datos Se calculó el enlace específico (SB) como TB-NS, y el SB en presencia de varios compuestos de prueba se expresó como el porcentaje de SB control. Los valores de IC50 y el coeficiente de Hill (nH) para los ligandos en el desplazamiento del radioligando enlazado específicamente, se calcularon a partir de gráficas lógicas o programas de ajuste de curvas tales como Ligand, GraphPad Prism, SigmaPlot, o ReceptorFit. Los valores de ?x se calcularon a partir de la ecuación de Cheng-Prussoff . Se reportaron los valores de la media ± S.E.M. (error estándar de la media) de IC50, Kx y nH para los ligandos probados en al menos tres curvas de desplazamiento . La tabla 1 muestra algunos datos biológicos de ciertos compuestos de la invención, medidos utilizando los ensayos descritos anteriormente.

TABLA 1 N/A: no disponible 5 Experimentos de saturación del receptor Se determinaron los valores Kd del radioligando al efectuar los ensayos de enlace sobre membranas celulares con los radioligandos apropiados, a concentraciones que oscilan desde 0.2 hasta 5 veces el Kd estimado (hasta 10 veces si las cantidades de radioligando requerido son factibles) . El enlace de radioligando específico se expresa como pmol/mg de proteína membranal . Los valores de Kd y Bp,a? de los experimentos individuales se obtienen a partir de los ajustes no lineales de radioligando enlazado específicamente (B) vs . sin nM (F) del individuo de acuerdo a un modelo de un sitio. Determinación de Mecano-Alodinia utilizando prueba de Von Frey La prueba se efectúa entre las 08:00 y las 16:00 hrs. utilizando el método descrito por Chaplan et al (1994). Las ratas se colocan en jaulas de Plexiglás en la parte superior de un piso de malla de alambre, el cual permitía el acceso a la pata, y se les dejó habituarse por 10-15 min. El área probada es la pata trasera izquierda mesoplantar, evitando las almohadillas de las patas menos sensibles. La pata se tocó con una serie de 8 pelos de Von Frey con estiramiento incrementado logarítmicamente (0.41, 0.69, 1.20, 2.04, 3.63, 5.50, 8.51, y 15.14 gramos; Stoelting, III, EUA). El pelo de Von Frey se aplica desde debajo del piso de malla, perpendicular a la superficie plantar con la fuerza suficiente para provocar un ligero pandeo contra la pata, y se mantiene por aproximadamente 6-8 segundos. Se observa una respuesta positiva si la pata se retira abruptamente. Echarse atrás inmediatamente después de retirar el pelo, también se considera una prueba positiva. El paseo se considera una respuesta ambigua, y en tales casos se repite el estímulo. Protocolo de Prueba Los animales se prueban en el día 1 post-operatorio para el grupo tratado con FCA. El umbral de retiro del 50% se determina utilizando el método de arriba-abajo de Dixon (1980) . La prueba se inicia con el pelo de 2.04 g en la mitad de la serie. Los estímulos siempre se presentan de una manera consecutiva, ya sea ascendente o descendentemente. En ausencia de una respuesta de retiro de la pata al pelo inicialmente seleccionado, se presenta un estímulo más fuerte; en el caso de retiro de la pata, se elige el siguiente estímulo más débil. El cálculo del umbral óptimo por este método requiere 6 respuestas en la cercanía inmediata del umbral del 50%, y el conteo de estas 6 respuestas inicia cuando ocurre el primer cambio en la respuesta, es decir el umbral se cruza primero. En casos donde el umbral cae fuera del intervalo de estímulos, se asignan respectivamente valores de 15.4 (sensibilidad normal) ó 0.41 (máximo alodínico) . El patrón resultante de respuestas positivas y negativas se tabula utilizando la convención; X = sin retiro: 0 = retiro, y el umbral del 50% de retiro se interpola utilizando la formula: 50% g umbral = io(xf+kd) / 10,000 en donde Xf = valor del último pelo de Von Frey utilizado (unidades logarítmicas) ; k = valor tabulado (de Chaplan et al (1994)) para el patrón de repuestas positivas/negativas; y d = diferencia promedio entre estímulos (unidades logarítmicas). Aquí d = 0.224. Los umbrales de Von Frey se convierten a porcentaje del efecto posible máximo (% MPE) de acuerdo a Chaplan et al 1994. Se utiliza la siguiente ecuación para computar %MPE: y PE - Urarcltratadoc81fipnaco (g) -umbral alodinia(g) X 100 Umbralcontrol (wg)' -umbral alodinia(wg) Administración de sustancia de prueba Las ratas se inyectan (subcutáneamente, intraperitonealmente, intravenosamente u oralmente) con una sustancia de prueba, antes de la prueba de Von Frey, el tiempo entre la administración del compuesto de prueba y la prueba de von Frey varía, dependiendo de la naturaleza del compuesto probado.

Prueba de retorcimiento El ácido acético originará contracciones abdominales cuando se administra intraperitonealmente en los ratones. Éstos entonces extenderán su cuerpo en un patrón típico. Cuando se administran fármacos analgésicos, este movimiento descrito se observa menos frecuentemente y el fármaco se selecciona como un buen candidato potencial . Se considera un reflejo de retorcimiento completo y típico solamente cuando se encuentran presentes los siguientes elementos: el animal no está en movimiento; el lomo inferior está ligeramente deprimido; el aspecto plantar de ambas patas es observable. En este ensayo, los compuestos de- -la presente- invención -demuestran inhibición significativa de respuestas de retorcimiento después de la dosificación oral de 1-100 µmol/kg. (i) Preparación de soluciones Ácido Acético (AcOH) : Se agrega 120µl a 19.88 ml de agua destilada, con el fin de obtener un volumen de 20ml con una concentración final de 0.6% de AcOH. Después la solución se mezcla (en torbellino) y se prepara para inyección. Compuesto (fármaco) : cada compuesto se prepara y se disuelve en el vehículo más adecuado de acuerdo a procedimientos estándares . (ii) Administración de Soluciones El compuesto (fármaco) se administra oralmente, intraperitonealmente (i.p.), subcutáneamente (s.c.) o intravenosamente (i.v.) a 10 ml/kg (considerando el peso corporal promedio de los ratones) 20, 30 ó 40 minutos (de acuerdo a la clase de compuesto y sus características) antes de la prueba. Cuando el compuesto se administra centralmente: intraventricularmente (i.c.v.) o intratecalmente (i.t.) se administra un volumen de 5µl . El AcOH se administra intraperitonealmente (i.p.) en dos sitios a 10 ml/kg (considerando el peso corporal promedio de los ratones) , inmediatamente antes de la prueba, (iii) Prueba - - -- - - -.. . - - — - - El animal (ratón) se observa por un periodo de 20 minutos, y se anotan y compilan al final del experimento^ el número de ocasiones (reflejo de retorcimiento) . Los ratones se mantienen en jaulas individuales tipo "caja de zapatos" con cama de paja de contacto. Usualmente se observa un total de 4 ratones al mismo tiempo: un control y tres dosis de fármaco. Para las indicaciones de ansiedad y similar a la ansiedad, la eficacia se estableció en la prueba de conflicto de geller-seifter en la rata. Para la indicación de trastorno gastrointestinal funcional, la eficacia se puede establecer en el ensayo descrito por Coutinho SV et al , en American Journal of Physiology - Gastrointestinal & Liver Physiology. 282(2): G307-16, 2002 Feb, en la rata. Protocolos de prueba in vivo, adicionales Sujetos y alojamiento Ratas Sprague Dawley macho, naturales (de 175-200 g) se alojaron en grupos de 5 en un cuarto con temperatura controlada (22°C, 40-70% de humedad, 12 horas luz/oscuridad) . Los experimentos se realizaron durante la fase luminosa del ciclo. Los animales tenían alimento y agua adlibi tum y se sacrificaron inmediatamente después de la adquisición de los datos . Muestra La prueba del compuesto (fármaco) incluye grupos de ratas que no reciben ningún tratamiento y otras que son tratadas con lipopolisacáridos (LPS) de E. coli . Para el experimento tratado con LPS, cuatro grupos se inyectaron con LPS, uno de los cuatro grupos son tratados con vehículo, mientras que los otros tres grupos se inyectan con el fármaco y su vehículo. Se conduce un segundo grupo de experimentos que implica cinco grupos de ratas; todos ellos no reciben tratamiento con LPS. El grupo natural no recibe compuesto (fármaco) o vehículo; los otros cuatro grupos son tratados con vehículo, con o sin fármaco. Éstos se efectúan para determinar los efectos ansiolíticos o sedantes de fármacos, que pueden contribuir a una reducción en USV. Administración de LPS A las ratas se les permite habituarse en el laboratorio experimental por 15-20 minutos antes del tratamiento. Se induce inflamación mediante la administración de LPS (endotoxina de serotipo 0111 :B4 de bacteria E. coli gram-negativo, Sigma). LPS (2.4 µg) se inyecta intracerebro- ventricularmente (i.c.v.), en un volumen de 10 µl, utilizando técnicas quirúrgicas estereotáxicas estándares bajo anestesia con isoflurano. La piel entre las orejas se empuja rostralmente y se realiza una incisión longitudinal de aproximadamente 1 cm para exponer la superficie del cráneo. El sitio de punción se determina por las coordenadas: 0.8mm posterior al bregma, 1.5mm lateral (izquierda) a la lambda (sutura sagital) , y 5 mm arriba de la superficie del cráneo (vertical) en el ventrículo lateral. Se inyecta LPS a través de una aguja de acero inoxidable estéril (26-G 3/8) de 5 mm de largo, unida a una jeringa Hamilton de lOOµl por tubo de polietileno (PE20; 10-15cm) . Un tapón de 4mm elaborado de una aguja de corte (20-G) se coloca y se asegura a la aguja 26-G por pegamento de silicona, para crear la profundidad deseada de 5mm. Después de la inyección de LPS, la aguja permanece 'en su lugar por 10 segundos más para permitir la difusión del compuesto, después se retira. La incisión se cierra y la rata se regresa a su jaula original y se le deja descansar por un mínimo de 3.5 horas, antes de la prueba. Planteamiento experimental para estimulación de soplo de aire Las ratas permanecen en el laboratorio experimental después de la inyección con LPS y administración del compuesto (fármaco) . Durante la prueba, todas las ratas se retiran y se colocan fuera del laboratorio. Una rata a la vez se lleva al laboratorio de prueba y se coloca en una caja vacía (9 x 9 x 18 cm) la cual es luego colocada en un cubículo ventilado con atenuación de sonido 62 (ancho) x 35 (largo) x 46 (altura) cm (BRS/LVE, Div. Tech-Serv Inc) . El suministro de soplos de aire, a través de una boquilla con salida de aire de 0.32cm, se controla por un sistema (AirStim, San Diego Instruments) capaz de suministrar soplos de aire de duración fija (0.2 seg.) e intensidad fija con una frecuencia de 1 soplo por 10 segundos. Se administra un máximo de 10 soplos, o hasta que inicie la vocalización, la cual siempre llega primero. El primer soplo de aire marca el inicio del registro. Planteamiento experimental para registrar el ultrasonido Las vocalizaciones se registran durante 10 minutos utilizando micrófonos (G.R.A.S. sonidos y vibraciones Vedbaek, Dinamarca) colocados dentro de cada cubículo y controlados por software LMS (LMS CADA-X 3.5B, Monitor de Adquisición de Datos, Troy, Michigan). Las frecuencias entre O y 32,000Hz se registran, se respaldan y se analizan por el mismo software (LMS CADA-X 3.5B, Monitor de Procesamiento de Datos y UPA (Programación y Análisis de Usuario) . Compuestos (Fármacos) Todos los compuestos (fármacos) se ajustan con el pH entre 6.5 y 7.5 y se administran a un volumen de 4 ml/kg. Después de la administración del compuesto (fármaco), los animales se regresan a sus jaulas originales hasta el tiempo de la prueba. Análisis El registro se corre a través de análisis de Fourier y estadísticas para filtro (entre 20-24 kHz) y para calcular los parámetros de interés. Los_datos_ se expresan como la media ± SEM. Se evalúa la significancia estadística utilizando la prueba de T para la comparación entre ratas naturales y ratas tratadas con LPS, y ANOVA de una vía seguido de una prueba de comparación múltiple de Dunnett (post-hoc) para la efectividad del fármaco. Una diferencia entre grupos se considera significativa con un valor p mínimo de = 0.05. Los experimentos se repiten un mínimo de dos veces .

Determinación de hiperalgesia térmica utilizando la prueba plantar de Hargreaves Administración de FCA o carragenano Adyuvante completo de Freund (FCA) : SIGMA cat # F 5881, Mycabacterium tuberculosis (H37Ra, ATCC 25177), 1 mg/ml, muertas con calor, secas, 0.85 ml de parafina, 0.15ml de monooleato de manitol. O carragenano lambda tipo IV (Cg) : Sigma cat #C-3889, (gelatina, vegetal; musgo irlandés) (solución al 1.0%) en NaCl. Las inyecciones se realizan con una jeringa Hamilton, con un tamaño de aguja estéril 26G 15.8 mm (5/8") se tratan y colocan en cámara para anestesia con isoflurano. Cuando—se—alcanza -e-l- efecto deseado, a -la-rata &e le retira y se le coloca en decúbito ventral (posición esternal) . Se sujeta la pata trasera izquierda y se introduce subcutáneamente la aguja, de aspecto ventral entre la almohadilla de la pata del dedo # 2 y # 3, con el fin de alcanzar la mitad de la pata (área metatarsal) . Finalmente, un volumen de lOOµl de FCA, o de lOOµl de solución de carragenano, se inyecta lentamente en la pata y se aplica una pequeña presión durante 3-4 segundos, después de retirar las agujas . Si los animales están despiertos durante el procedimiento, se les regresa a la cámara de inhalación hasta que se alcance el efecto deseado.

Después de la inyección intraplantar, a los animales se les deja despertar bajo observación en su jaula. Para el tratamiento con FCA, a las ratas se les deja 48 horas para el desarrollo del proceso inflamatorio. Para el tratamiento con carragenano, a las ratas se les deja desarrollar el proceso inflamatorio. En la mañana de la prueba, las ratas se colocan en el laboratorio (en sus jaulas) , se les deja habituarse a la habitación por al menos 30 minutos. Sitio de prueba Se aplica estímulo térmico al centro de la superficie plantar, entre las almohadillas. El sitio de - prueba- debe- estar en - contacto- -con el- vidrio, -si- --orina, ni heces en esté, con el fin de mantener las propiedades de transferencia térmica correctas desde el vidrio hacia la piel . El aparato plantar consiste de una caja con una parte superior de vidrio/plataforma, la superficie de vidrio se mantiene a 30°C por un mecanismo de retroalimentación interno. Bajo esta plataforma de vidrio se encuentra un bulbo de luz, montado en un brazo móvil, se coloca un espejo por abajo para permitir que la luz esté colocada bajo la pata de la rata. Cuando la luz se activa, brilla a través de una abertura de ~2 mm de diámetro. El experimentador activa una luz, y los sensores automáticos apagan la luz cuando la pata es retirada; un corte de 20.48 segundos asegura que no ocurra daño al tejido, si la rata falla en retirar su pata. El experimentador también puede apagar la luz en cualquier momento. Un cronómetro registrará la duración del tiempo en que la luz está activada. Medidor de flujo: mide el flujo/cm2 cuando la luz es activada. Éste se debe mantener en -97-98; el flujo se puede modificar al ajustar el dispositivo plantar, pero nunca se debe cambiar a la mitad de un experimento. Curso de tiempo El experimento se puede efectuar después de variar los periodos de tiempo después de la inducción de la inflamación. La hip ralgesia se -mide 4-8- -horas-- después de- -la-inyección de FCA ó 3 horas después de la inyección de carragenano. Procedimiento de prueba Ratas naturales: para el procedimiento de establecimiento de una curva de Dosis-Respuesta, se utiliza un grupo de 7 ratas como un grupo control; se les anestesia con las 28 ratas restantes; pero no se les da ninguna inyección. La prueba del grupo natural se puede realizar ya sea antes de iniciar o inmediatamente después del experimento, con el mínimo estrés posible, las ratas se colocan en cajas individuales de Plexiglás (14 x 21 x 9 cm) sobre la parte superior del dispositivo plantar; se les deja habituarse por un peryodo de 30 minutos. Cuando los animales están listos para la prueba, la luz se coloca directamente bajo el sitio de prueba y se activa, y se registra la latencia al retiro. Después de un peryodo de 5-8 minutos, se permite que la temperatura de la piel regrese a la normal, se toma una segunda lectura, y las ratas se retiran y se regresan a su jaula. Valores de línea base: Las 28 ratas restantes (divididas en 4 grupos) que han sido inyectadas con FCA (o carragenano) se colocan en cajas individuales sobre la máquina y se les deja habituarse por 30 minutos. El experimentador debe verificar el grado de inflamación de la pata y revisar el decoloramiento. El estímulo _térmico se coloca bajo el sitio de prueba, y se registra la latencia al retiro; se toman dos lecturas, como se indico anteriormente. Esta es la comparación de estos valores de línea base con aquellos de los animales naturales, que establece si está presente la hiperalgesia. Prueba post-fármaco : Una vez que se establece la hiperalgesia, las ratas son inyectadas con el compuesto de interés. Cada compuesto se prepara y se disuelve en el vehículo más adecuado, de acuerdo a procedimientos estándares. La ruta de administración, las dosis, el volumen, y el tiempo de prueba después de la inyección, se especifican para ese compuesto (o clase de compuestos). Cuando se prueban compuestos en 20-30 minutos después de la inyección, tal como por inyecciones i.v. o s.c., las ratas son colocadas y se les deja habituarse en el aparato plantar, mientras que el fármaco produce su efecto. Cuando se prueban compuestos en 60 minutos o más después de la inyección, las ratas se colocan de regreso en su jaula original con sus parejas de jaula. Las ratas siempre se vuelven a colocar en sus jaulas originales con sus parejas de jaulas originales, para minimizar el estrés del restablecimiento de una estructura social dentro de un grupo de ratas. 30 minutos después las ratas son colocadas en la máquina plantar y se les deja 30 minutos para habituarse a la maquina plantar. La prueba se efectúa como se describe anteriormente. Se to an 2 lecturas. Criterios para la Prueba: Los animales deben estar calmados y quietos, incluso alertas, y en la posición correcta, sin orina ni heces entre la piel de la pata y la superficie de vidrio de la maquina. Un animal no debe ser evaluado si: El animal está en movimiento, incluso olfateando, acicalándose y explorando. - El animal está durmiendo. - El animal muestra signos obvios de estrés (inmovilidad tónica, vocalizaciones, orejas caídas), excepto si éstos son el posible resultado de un efecto secundario del compuesto y no se puede evitar.

- El animal está colocado de tal manera que la pata no está en contacto directo con el vidrio (la pata descansa en la parte superior de la cola) . - La pata del animal muestra coloración azul como resultado de una mala inyección. En este caso, el animal es rechazado del experimento completamente (al inicio) . Cuando están presentes heces u orina, el animal es retirado, la superficie del vidrio se limpia frotando, y luego el animal se vuelve a colocar. Cuando el animal está durmiendo, o muestra inmovilidad tónica, el experimentador puede mover suavemente la caja o mover su mano frente a la caja para promover un comportamiento de atención a corto plaz"s.'La -observación cercana -del- comportamiento—dei animal-se debe conducir en toda la prueba. Nuevas pruebas : En cualquier momento durante el experimento, si el experimentador no está seguro de que la respuesta al retiro de la pata no fue una respuesta al estímulo térmico, el animal puede volver a ser evaluado después de 5-8 minutos. Esto puede deberse a que el animal puede moverse repentinamente, o a que se orina o defeca mientras el estímulo está siendo aplicado. Respuestas Aceptables: Cualquiera de las siguientes^ se consideran respuestas al estímulo térmico: Movimiento de retiro de la pata, del vidrio (frecuentemente seguido por lamido de la pata) . - Movimiento lateral del cuerpo ( contralateral para la pata estimulada) . - Las uñas se alejan del vidrio. El aspecto centroplanar (pata media) de la pata inflamada es retirado del vidrio.

Los datos se expresan como la media ± SEM, se evalúa la significancia estadística utilizando la prueba T para la comparación entre las ratas inflamadas y naturales, y ANOVA de una vía seguido por prueba de comparación múltiple de Dunnett (post: hoc) para la efectividad del fármaco. Una diferencia de grupos se considera significativa con un valor p mínimo de = 0.05. METABOLISMO Y PROPIEDADES FARMACOCINÉTICAS DEL FÁRMACO Se descubrió sorprendentemente que una o más propiedades farmacocinéticas y metabol í ticas como fármaco, de los compuestos se mejoran gracias a la sustitución con flúor en el bencilo inferior de la porción bencil-piperazinilo de la formula I. En una modalidad, se encontró que ciertos metabolitos reactivos se reducen o se eliminan por los compuestos de la presente invención. En otra modalidad, ciertos compuestos de la presente invención proporcionan biodisponibilidad mejorada, la cual puede ser resultado de su débil afinidad con citocromo P450, 2D6 y 3A4. Los siguientes ensayos demuestran una o más de estas propiedades sorprendentes de estos compuestos . Incubaciones microsomales Un compuesto de la presente invención (concentración inicial nominal de 10 µM) se incubó individualmente con microsomas de hígado de rata (0.5 mg/ml de proteína) en amortiguador de KH2P04 0.1 M (pH 7._ )._ caa.. MgCl2_ 5. mM y_ reactivo^ de trampa 5 mM (Glutatión (GSH) , N-acetilcisteína (NaC) , o CH3ONH2) durante 60 minutos a 37°C. Las reacciones se iniciaron mediante la adición de NADPH (1 mM) y se terminaron mediante la adición de un volumen igual de sustancia acidificada (ácido fórmico al 0.1% en acetronilo) a la mezcla de incubación. Incubaciones de Hepatocitos Un compuesto de la presente invención (concentración inicial nominal de 10 µM) se incubó individualmente con hepatocitos de rata recientemente aislados (Sprague Dawley) y de perro criopreservado (sabueso pequeño) (1 x 106 células/ml) a pH 7.4 a 37°C durante una hora. Las mezclas de incubación de hepatocitos contenían medio E de Williams suplementado con HEPES 25 mM, solución de ITS-G al 1% (Life Technologies, Cat No. 41400-45), HEPES 10 mM (pH 7.4) , y L-Glutamina 2 mM . Las incubaciones se terminaron mediante la adición de volumen igual de acetonitrilo acidificado (ácido fórmico al 0.1%) a la mezcla de incubación. Análisis de LS-MS Después de la precipitación proteica, se analizaron los sobrenadantes de muestra para observar los metabolitos por LS-MS de exploración completa. La i-nfarmación.- del. pesa molecular- se -..ab-tuvQ . para .cada metabolito detectado. Los patrones de fragmentación de los experimentos adicionales de LC-MS/MS, se analizaron para ayudar a asignar estructuras de metabolitos primarios.

Instrumentos HPLC Sistema HPLC HP 1100 ( Hewlett Packard , D-76337 Waldbronn , Alemania ) MS LCQ ( Finnigan Corporation , 355 River Oaks Parkway, San José , CA) Condición de MS ( LCQ ) Voltaj e fuente 4 . 5 Kv Temperatura Capilar 180°C Fluj o de Gas Cubierta 80 Fluj o de Gas Auxiliar 5 Tipo de Fuente EPI Modo de Ionización Positiva Condiciones HPLC Columna Phenomenex Synergi MAX-RP, 4 µ, 2.0 x 150 mm (Phenomenex, Torrance, CA) Fase móvil A = 0.1% de ácido fórmico en agua, B = ACN Velocidad de Flujo 0.2 ml/min "Temperatura 45°d "" ~" " Detección Espectrómetro de masa LCQ Método de Gradiente Tiempo A B 0 90 10 30 40 60 30.1 10 90 33 10 90 33.1 90 10 40 90 10 Resultados de prueba Las trayectorias de biotransformación primarias observadas para los compuestos fueron la N-desetilación, N- desalquilación e hidroxilación. Para el compuesto de la presente invención, el cual tenía porción bencil-piperazinilo sustituido con fluoro, no se detectó aducto de glutatión sobre el benceno en incubados de hepatocitos de rata. En contraste, se observó algún aducto de glutatión sobre el anillo en los incubados de hepatocitos de rata para compuestos similares, sin el anillo de bencilo sustituido con fluoro . Métodos de icrodialisis in vivo Procedimiento Las ratas se asignaron aleatoriamente a ocho grupos de tratamiento: vehículo-quietud, vehículo-estrés, fármaco- "quietud," Fármaco-estrés . "" Se implantaron" "Sondas" ~ de microdiálisis (CMA/12, longitud de membrana 4 mm para mPFC) en el cerebro, 2 horas antes del experimento y se perfundieron con CSF artificial (aCSF, CMA microdialysis AB) a una velocidad de flujo de 1.1 ml/min. por 2 horas para estabilizar la línea base. Se recolectaron tres muestras de 20 minutos para definir la línea base, los animales se inyectaron i.p. con vehículo o compuestos, y la recolección de muestras se efectuó en las siguientes 5 horas. El programa de paradigma de estrés se inicio 20 minutos después de la administración de los compuestos. Las muestras se inyectaron inmediatamente (en línea) en los sistemas de HPLC para el análisis de concentraciones de monoamina. Las concentraciones de neurotransmisores en 3 muestras recolectadas antes de la administración de los compuestos/ vehículo, se promediaron y se definieron como la línea base (100%) . Las concentraciones de neurotransmisores en los microdializados posteriores se expresan como el porcentaje de niveles de línea base. Procedimiento de Estrés Para el procedimiento de estrés, se utilizan cajas para evitación pasiva estándares, equipadas con luces, tono y aparatos para producir choques eléctricos, (Med Associates, Inc.). Las cajas se colocan en cámaras con atenuación de sonido. En un día ocurre el paradigma de estrés. Los animales se aclimatan a las cámaras por 2 horas, luego se exponen en el . cursa de 6. minutas a una serie .de. centellea de luz, seguido por choques eléctricos a las patas (duración de 0.5 segundos, intensidad de 1.5 mA, total 10 choques). El grupo de "quietud" se expone a cámaras con luces, pero no recibe choques. 40 minutos más tarde, se repite la secuencia de luz a los animales, pero no se les administran choques. Administración del fármaco Todos los compuestos se disuelven en agua destilada estéril (vehículo) y se administran intraperitonealmente (i.p.) 20 minutos antes del procedimiento de estrés en el día. HPLC y detección electroquímica El sistema de HPLC consiste de una bomba 5041, detector modelo 5200A Coulochem II, columna MD-150 de 3 x 150 mm, celda amperométrica modelo 5041 (todos de ESA Inc.) e inyector en línea (de BAS Inc.). La fase móvil es: Na2HP04 75 mM, EDTA 25 mM, ácido 1-octansulfónico 1.7 mM, 100 µl/1 de trietilamina, acetonitrilo al 10%, pH 3.0. El potencial se ajusta a +0.65V, la velocidad de flujo se mantiene en 0.3 ml/min. Los datos se recolectan utilizando sistema de adquisición/análisis basado en PC (computadora 501 y software A/D, ESA, Inc.) se integran y se transfieren en software de hoja de avance/gráfica para el análisis posterior. Cuando los grupos de 6-8 ratas, preparados con sondas de microdiálisis intracerebrales, colocadas en la corteza prefrontral media (en donde la señal neuroquímica es más . fuerte)- se. someten- al- -paradi g a xie. condi i onami e o descrito anteriormente, se observan los incrementos en norepinefriña (NE) y dopamina en animales tratados con vehículo. Ciertos compuestos de la invención bloquean el incremento sostenido en NE y dopamina. Método de Modelo de Ansiedad de Geller-Siefter En la prueba de conflicto, los animales hambrientos se entrenan para presionar la palanca con el fin de suministrar el alimento en una cámara que opera en una forma estándar bajo dos condiciones. En la primera condición, denominada como el componente sin suprimir, el alimento se suministra en promedio después de que se realizan 17 presiones a la palanca (también denominado un programa de reforzamiento VR17). En la segunda condición, denominada como el componente suprimido y señalado por centelleo de luces dentro de la cámara operante, el alimento también se distribuye después de un promedio de 17 presiones a la palanca, pero el choque eléctrico se distribuye adicionalmente al piso de la jaula baja un programa separado VR17. Las sesiones diarias consisten de 5 presentaciones alternadas de cada tipo de componente: suprimido (3 minutos de duración) y sin suprimir (3 minutos de duración) . El número emitido de presiones a la palanca, en el componente suprimido es obviamente bajo con relación al componente sin suprimir. Los agentes antiansiedad, tales como diazepam, incrementan .el numero , de presiones a. _la_ palanca que -Ios-animales realizarán en el componente suprimido dentro de algún intervalo de dosis, sin alterar el numero de presiones a la palanca que se realizan en el componente no suprimido. Ciertos compuestos de la invención se perfilan como un ansiolítico en este procedimiento. EJEMPLOS La invención se describirá con mayor detalle a través de los siguientes ejemplos, que describen métodos mediante los cuales los compuestos de la presente invención se pueden preparar, purificar, analizar y probar biológicamente, y que no están construidos como restricción de la invención.

INTERMEDIARIO 1: 4-yodo-N, N-dietilbenzamida A una mezcla de cloruro de 4-yodo-benzoílo (75 g) en 500 ml de CH2C12, se agregó una mezcla de Et3N (50 ml) y Et2NH (100 ml) a 0°C. Después de la adición, la mezcla de reacción resultante se calentó hasta la temperatura ambiente en 1 hora y después se lavó con cloruro de amonio saturado. El extracto orgánico se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró. El residuo se recristalizó a partir de hexanos calientes para producir 80 g del INTERMEDIARIO 1. INTERMEDIARIO 2 4- [hidroxi (3-nitrofenil ) metil] N, N-dietilbenzamida Se disolvió N,N-dietil-4-yodobenzamida (5.0 g,16 mmal)__en THF (15Q ml) . .se..enfrió a -78°C b.ajo_ atmósfera de nitrógeno. Se agregó n-BuLi (15 ml, solución 1.07 M en hexano, 16 mmol) por goteo durante 10 minutos a -65 hasta -78°C . Después la solución canulada en 3-nitrobenzaldehído (2.4 g, 16 mmol) en tolueno/THF (aproximadamente 1:1, 100 ml) a -78°C se agregó NHC1 (acuoso) después de 30 minutos. Después de concentración a vacío, la extracción con EtOAc/agua, secado (MgS04) y evaporación de la fase orgánica, el residuo se purificó por cromatografía sobre sílice (0-75% EtOAc/heptano) para dar el INTERMEDIARIO 2 (2.6 g, 50%). XH RMN (400 MHz, CDC13) dH 1.0-1.3 (m, 6H) , 3.2 (m, 2H) , 3.5 (m, 2H) , 5.90 (s, 1H) , 7.30-7.40 (m, 4H) , 7.50 (m, 1H) , 7.70 (d, J = 8 Hz, 1H) , 8.12 (m, 1H) , 8.28 (m, 1H) .

INTERMEDIARIO 3: N, N-dietil-4- [ ( 3-nitrofenil ) ( 1-piperazinil ) -metil ] benzamida A una solución del alcohol INTERMEDIARIO 2 (10.01 g, 30.5 mmol) en diclorometano (200 ml) se agregó bromuro de tionilo (2.58 ml , 33.6 mmol). Después de una hora a temperatura ambiente, la reacción se lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado (100 ml) y la capa orgánica se separó.

La capa acuosa se lavó con diclorometano (3 x 100 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron (Na2S0 ) , se filtraron y se concentraron. El bromuro de bencilo crudo se disolvió en acetonitrilo (350 ml) y se agregó piperazina (10.5 g, 122 mmol) .. Después de calentar la reacción por una hora a_ 65^. la reacción se lavó con cloruro de amonio saturado/acetato de etilo y la capa orgánica se separó. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron (Na2S04) , se filtraron y se concentraron para producir el INTERMEDIARIO 3 racémico. INTERMEDIARIO 4bj N, N-dietil-4- [ (R) - (3-nitrofenil ) (1-piperazinil )metil] benzamida El INTERMEDIARIO 3 racémico se disolvió en etanol (150 ml) y se agregó ácido di-p-toluoil-D-tartárico (11.79 g, 1 equivalente) . El producto precipitó en un periodo de 12 horas. El sólido se recolectó por filtración y se redisolvió en etanol a reflujo hasta que todo el sólido se disolvió (aproximadamente 1200 ml de etanol) . Después del enfriamiento, el sólido se recolectó por filtración y se repitió la recristalización una segunda vez. El sólido se recolectó por filtración y se trató con hidróxido de sodio acuoso (2 M) y se extrajo con acetato de etilo. El extracto orgánico se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró para producir 1.986 g del INTERMEDIARIO 4b. XH RMN (400 MHz, CDCl3) dH 1.11 (s amplio, 3H) , 1.25 (s amplio, 3H) , 2.37 (s amplio, 4H) , 2.91 (t, J = 5 HZ, 4H) , 3.23 (s amplio, 2H) , 3.52 (s amplio, 2H) , 4.38 (s, 1H) , 7.31- 7.33 (m, 2H) , 7.41-7.43 (m, 2H) , 7.47 (t, J = 8 Hz, 1H) , 7.75-7.79 (m, 1H) , 8.06-8.09 (m, 1H) , 8.30-8.32 (m, 1H) . La pureza quiral se determinó pgr HPLC utilizando las siguientes condiciones: Columna quiralpack AD (Daicel Chemical Industries) Baja velocidad 1 ml/minuto Tiempo de corrida 30 minutos a 25°C Etanol al 15% isocrático (que contiene 0.1% v/v dietilamina) 85% de hexanos (que contienen 0.1% v/v de dietilamina) Tiempo de retención de molécula = 20 minutos INTERMEDIARIO 4a N, N-dietil-4- [ (S) - (3-nitrofenil ) (1- piperazinil ) metil] benzamida) El INTERMEDIARIO 4a, enantiómero (S) se puede -obtener al realizar el procedimiento de resolución anterior con ácido di-p-toluoil-L-tartárico .

COMPUESTO lj 4-{ (S) - (3-aminofenil) [4- (4-fluorobencil ) piperazin-1-il] metil} -N, N-dietilbenzamida A una solución del INTERMEDIARIO 4a (467 mg) en 1, 2-dicloroetano (13 ml) se agregó 4-fluorobenzaldehído (252 µl; 2 eq. ) y triacetoxiborohidruro de sodio (498 mg; 2 eq. ) . La reacción se agitó a temperatura ambiente bajo atmósfera de nitrógeno por 18_ horas „y se_ concentró.. Se_ agregó bicarbonato de sodio saturado y la solución acuosa se extrajo con tres porciones de diclorometano, y los materiales orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron. El compuesto se disolvió en una mezcla de etanol, tetrahidrofurano, agua y cloruro de amonio saturado (4 ml; proporciones 4:2:1:1 v/v). Se agregaron nanopartículas de hierro (3 puntas de espátula) y la solución se calentó a 150°C durante 10 minutos en el microondas. La mezcla, resultante se enfrió, se filtró a través de celite y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente de 1% hasta 5% de MeOH en diclorometano. El producto obtenido se disolvió en diclorometano en el cual se agregó 1.2 ml de HCl 1 M en éter. El solvente se retiró y el producto se aisló como la sal de clorhidrato para producir el COMPUESTO 1 (164 mg, 30% de rendimiento) como un sólido incoloro. Pureza (HPLC) : > 99%; pureza óptica (HPLC quiral) : > 99%; XH RMN (400 MHz, CD3OD) , 1.08 (t, J = 6.5 Hz , 3H) , 1.21 (t, J = 6.5 Hz, 3H) , 3.20-3.26 (m, 4H) , 3.51-3.54 (m, 6H) , 4.43 (s, 2H) , 7.19-723 (m, 2H) , 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.40 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.54-7.63 (m, 3H) , 7.70-7.82 (m, 4H) . Encontrado C, 54.63; H, 6.49, N, 8.68. C29H36N4OF x 4.1 HCl x 0.08 H20 x 0.1 CH10O tiene C, 57.67; H, 6.51; N, 8.67%. COMPUESTO 2 : 4-{ (R) - ( 3-aminofenil ) [4- (4-fluorobencil) -pjperazin-1-il]metil}-N, N-dietilbenzamida _ . _ A una solución del INTERMEDIARIO 4b (5.790 g, 14.6 mmol) en 1, 2-dicloroetano (60 ml) se agregó 4-fluorobenzaldehído (2.04 ml, 19.0 mmol) y triacetoxiborohidruro de sodio (4.02 g, 19.0 ml) . Después de 20 horas a temperatura ambiente, la reacción se apagó con bicarbonato de sodio acuoso y la capa orgánica se separó. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 100 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron (Na2S0 ) , se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía instantánea, eluyendo de 30% hasta 50% de acetona en hexanos para proporcionar una espuma incolora (5.285 g, 71%), la cual es el intermediario nitro. El intermediario nitro (5.285 g, 10.4 mmol) se disolvió en una mezcla de etanol, tetrahidrofurano, agua y cloruro de amonio saturado acuoso (proporción 4:2:1:1 v/v) (100 ml) y se agregaron granulos de hierro (0.63 mg, 11.5 mmol). La reacción se calentó a reflujo y se agregaron periódicamente más granulos de hierro. Después de 24 horas a reflujo (90°C) , la reacción se enfrió a temperatura . ambienteL se filtró a . través _de_..celite,.. y. se concentró. Al residuo se agregó bicarbonato de sodio acuoso y diclorometano. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 100 ml) y los extractos orgánicos se secaron (Na2S0 ) , se filtraron y se concentraron. El producto se purificó sobre gel de sílice, eluyendo de 1% hasta 5% de metanol en diclorometano para proporcionar el COMPUESTO 2 (3.505 g) como una espuma color amarillo pálido. El material impuro se obtuvo adicionalmente a partir de la cromatografía instantánea anterior y éste se repurificó mediante una segunda cromatografía instantánea, eluyendo 100% de acetato de etilo a 5% de metanol en acetato de etilo, para producir 0.949 g más del COMPUESTO 2. Material combinado obtenido: 4.454 g (rendimiento 90%) pureza (HPLC): > 99%; pureza óptica (HPLC quiral): > 99%; XH RNM (400 MHz, CD3OD) , 1.08 (t, J = 6.5 Hz, 3H) , 1.21 (t, J = 6.5 Hz, 3H) , 3.20-3.26 (m, 4H) , 3.51-3.54 (m, 6H) , 4.43 (s, 2H) , 7.19-7.23 (m, 2H) , 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.40 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.54-7.63 (m, 3H) , 7.70-7.82 (m, 4H) . Encontrado: C, 54.00; H, 6.34; N, 8 . 47 . C29H35FN40 x 4 . 7 HCl x 0 . 2 C4H10O x 0 . 1 H20 tiene C , 54 . 02 ; H , 6 . 37 ; N , 8 . 46% COMPUESTO 3: 4- [ (R) -3-aminofenil ) [4- [( 2-fluorofenil ) metil ] -1-piperazinil]metil] -N,N-dietil-benzamida A una solución del INTERMEDIARIO 4b (298 mg, 0.752 mmol) en 1 , 2-dicloroetano (8.5 ml) se agregó 2-fluorobenzaldehído (160 mg, 1.503 mmol, 2 eq. ) y triacetoxiborohidruro de sodio (319 mg, 1.503 mmol, 2 eq. ) . La reacción se agitó a temperatura ambiente bajo atmósfera de nitrógeno durante 18 horas y se concentró. Se agregó bicarbonato de sodio saturado, y la solución acuosa se extrajo con tres porciones de diclorometano y los materiales orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron. El compuesto se disolvió en una mezcla de etanol, tetrahidrofurano, agua y cloruro de amonio saturado (3 ml; proporciones 4:2:1:1 v/v). Se agregaron nanopartículas de hierro (3 puntas de espátula) y la solución se calentó a 150°C durante 10 minutos en el microondas. La mezcla resultante se enfrió, se filtró a través de celite y se concentró. El material crudo se disolvió en CH2C12 y se lavó con agua. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se secaron (Na2S04) , se filtraron y se concentraron. El producto se purificó por HPLC de fase inversa (gradientes 5-50% CH3CN en H20 que contiene TFA al ..Q,l%) _para... obtener e.L OMPUESTO 3. 1 ..28 g . 46%. de rendimiento) como la sal de TFA. Este material se liofilizó a partir de CH3CN/H20 para producir un polvo amarillo pálido. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 1.08 (t, J = 6.6 Hz, 3H) , 1.22 (t, J = 6.6 Hz, 3H) , 2.39 (s amplio, 2H) , 3.02 (s amplio, 2H) , 3.18-3.38 (m, 4H) , 3.43 (s amplio, 2H) , 3.52 (q, J = 6.8 Hz, 2H) , 4.43 (s, 2H) , 4.53 (s, 1H) , 7.09 (dt, J = 2.3, 6.8 Hz, 1H) , 7.24-7.30 (m, 1H) , 7.30-7.41 (m, 6H) , 7.52-7.60 (m, 4H) . Análisis calculado para C29H35FN0 x 2.8 de TFA x 0.4 H20: C, 51.88; H, 4.86; N, 6.99. Encontrado: C, 51.89; H, 4.89; N, 6.97% M.S. (calculado): 475.3 (MH+), M.S. (encontrado): 475.2 (MH+) . HPLC: k': 2.35; Pureza: > 99% (215 nm) , > 99% (254 nm) , > 99% (280 nm) . Condiciones de HPLC: Zorbax C-18, gradiente 10-95% B, flujo: 1 ml/minuto, 25°C, A: TFA al 0.1% en H20, B: TFA al 0.1% en MeCN. Rotación': [ ]16D = -8.91 (c = 1.179, MeOH) . COMPUESTO 4: 4- [ (R) - ( 3-aminofenil ) [4- [ (3-fluorofenil) metil] -1-piperazinil]metil] -N,N-dietil-benzamida A una solución del INTERMEDIARIO 4b (281 mg, 0.709 minoI.) .en l^-rdicloroetano _ (8 ml) .. se ..agregó 3r fluorobenzaldehído (180 mg, 1.417 mmol, 2 eq. ) y triacetoxiborohidruro de sodio (300 mg, 1.417 mmol, 2 eq.). La reacción se agitó a temperatura ambiente bajo atmósfera de nitrógeno por 18 horas y se concentró. Se agregó bicarbonato de sodio saturado y la solución acuosa se extrajo con tres porciones de diclorometano, y los materiales orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron. El producto se disolvió en una mezcla de etanol, tetrahidrofurano, agua y cloruro de amonio saturado (3 ml; proporciones 4:2:1:1 v/v). Se agregaron nanopartículas de hierro (3 puntas de espátula) y la solución se calentó a 150°C durante 10 minutos en el microondas. La mezcla resultante se enfrió, se filtró a través de celite y concentró. El producto resultante se disolvió en CH2C12 y se lavó con agua. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se secaron (Na2S04) , se filtraron y se concentraron. El producto se purificó por HPLC inversa (gradiente 5-50% CH3CN en H20 que contiene TFA al 0.1%) para dar el COMPUESTO 4 (0.375 g, 65% de rendimiento) como su sal de TFA. Este material se liofilizó a partir de GH3CN/H20 para producir un polvo amarillo pálido. H RNM (400 MHz, CD3OD) 1.08 (t, J = 6.4 Hz, 3H) , 1.21 (t, J = 6.8 Hz, 3H) , 2.38 (s amplio, 2H) , 3.00 (s amplio 2H) , 3.16-3.28 (m, 4H) , 3.40 (s amplio, 2H), 3.51 (q, J = 6.8 Hz, 2H) , 4.37 (s, 2H) , 4.56 (s, 1H) , 7.18 (ddd, J = 1.2, 2.3, 7.8 Hz, 1H) , 7.24 (ddd, J = 1.0, 2.7, 8.8 Hz, 1H) , 7.28-7..38 {mL 4H1, _ 7.55. .(< .J = _8..2_ Hz, _2H . Análisis .calculado.. ara. C29H35FN40 x 2.7 TFA x 1.1 H20: C, 51.50; H, 5.01; N, 6.98. Encontrado: C, 51.52; H, 5.01; N, 6.87%. M.S. (calculado) :' 475.3 (MH+) , M.S. (encontrado): 475.2 (MH+) . HPLC: k' : 2.43; pureza: > 99% (215 nm) , > 99% (254 nm) , > 99% (280 nm) . Condiciones de HPLC: Zorbax C-18, gradiente 10-95% B, flujo: 1 ml/minuto, 25°C, A: TFA al 0.1% en H20, B: TFA al 0.1% en MeCN. Rotación: [a]16D= -8.94 (c = 1.04, MeOH). Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (16)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un compuesto de la fórmula I, sus sales farmacéuticamente aceptables, sus solvatos, sus profármacos, sus diastereoisómeros, uno o más de sus enantiómeros, y sus mezclas, caracterizado porque es: (i)

2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se selecciona de: sus sales farmacéuticamente aceptables, uno o más de sus enantiómeros aislados y sus mezclas.

3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se selecciona de: y sus sales farmacéuticamente aceptables.

4. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se selecciona de: y sus sales farmacéuticamente aceptables.

5. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se selecciona de: y sus sales farmacéuticamente aceptables.

6. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se selecciona de: y sus sales farmacéuticamente aceptables.

7. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizado porque se usa como un medicamento .

8. El uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en la fabricación de un medicamento para la terapia de dolor, ansiedad, depresión o enfermedad de Parkinson.

9. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6 y un portador farmacéuticamente aceptable.

10. Uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, para la manufactura de un medicamento para la terapia de dolor.

11. Uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, para la manufactura de un medicamento para la terapia de dolor.

12. Uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, para la manufactura de un medicamento para la terapia de depresión.

13. Uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, para la manufactura de un medicamento para la enfermedad de Parkinson.

14. Un proceso para preparar un compuesto de la fórmula I, caracterizado porque comprende: I hacer reaccionar N,N-dietil-4- [ (3-nitrofenil) (1-piperazinil) metil]benzamida con R-CH2X o R-CHO para formar un compuesto intermediario; reducir el compuesto intermediario con un agente reductor adecuado, en donde R se selecciona de 2-fluorofenilo, 3-fluorofenilo y 4-fluorofenilo; y X se selecciona de Cl, I, Br, -OTs (tosilo) y -OMs (mesilato) .

15. Un proceso de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el agente reductor se puede seleccionar de hidrógeno, zinc y hierro.

16. Un compuesto, caracterizado porque se selecciona de 4-{ (S) - (3-aminofenil) [4- (4-fluorobencil)piperazin-l-il]metil}-N,N-dietilbenzamida enantioméricamente pura; 4-{(R)-(3-aminofenil) [4- (4-fluorobencil)piperazin-l-il]metil}-N,N-dietilbenzamida enantioméricamente pura; 4- [ (R) - (3-aminofenil) [4-[ (2-fluorofenil)metil] -1-piperazinil]metil] -N,N-dietil-benzamida enantioméricamente pura; 4- [ (R) - (3-aminofenil) [4- [ (3-fluorofenil) metil] -1-piperazinil]metil] -N, N-dietilbenzamida y sus sales farmacéuticamente aceptables.