MX2007000188A - Inhibidores a base de secuencias de fusion, hr1 y hr2 en adhesina bacteriana. - Google Patents

Abstract

Se describe una adhesina superficial (NadA) conocida en Neisseria meningitidis que contiene secuencias que corresponden al peptido de fusion, repeticion HR1 y repeticion HR2 observados en la proteina capside de virus. Pueden usarse entonces inhibidores de fusion para inhibir infeccion meningococica, y la invencion proporciona un compuesto que puede unirse a la secuencia o secuencias de repeticion septena HR! Y/o HR2 de la adhesina NadA sobre la superficie de un meningococo, inhibiendo de esta manera la capacidad del meningococo ya sea para infectar un organismo huesped o para difundir una infeccion existente.

Description

INHIBIDORES A BASE DE SECUENCIAS DE FUSIÓN, HRl Y HR2 EN ADHESINA BACTERIANA Campo de la Invención Esta invención está en el campo de antibacterianos, particularmente para prevenir infección meningocócica. Antecedentes de la Invención Neisseria meningi tidis es una bacteria encapsulada Gram-negativa que coloniza el tracto respiratorio superior de aproximadamente 10% de la población humana. Aproximadamente una vez en cada 10,000 personas colonizadas (o una vez en una población de 100,000) la bacteria entra en el torrente sanguíneo en donde se multiplica y causa sepsis. Del torrente sanguíneo la bacteria puede cruzar la barrera hemoencefálica y causar meningitis. Ambas enfermedades son devastadoras y pueden matar al 5-15% de los niños y adultos jóvenes afectados dentro de horas, a pesar de la disponibilidad de antibióticos efectivos. Hasta 25% de aquellos quienes sobreviven quedan con secuelas permanentes . Ha habido trabajo ampliamente difundido en la producción de vacunas para prevenir la infección meningocócica {1}, pero muy poco trabajo para proporcionar inhibidores de infección no inmunológicamente basados. Un objetivo de la invención es proporcionar estos inhibidores de infección meningocócica no inmunológicamente basados . REF.: 178629 Breve descripción de la invención La entrada de virus envueltos en células huésped objetivo requiere que sus membranas de dos capas lípidas se fusionen. El mecanismo de entrada del VIH ha sido descrito en detalle: la unión de la glicoproteína de cápside de VIH gpl20 al receptor CD4+ en células objetivo humanas induce cambios en conformación que hacen posible que gpl20 interactúe con un receptor de quimiocina en la célula huésped; la unión de gpl20 al co-receptor causa cambios en conformación subsecuentes en la glicoproteína de transmembrana viral gp41, exponiendo el "péptido de fusión" de gp41, el cual se inserta en la membrana celular; una región helicoidal de gp41, llamada HRl, interactúa después con una región helicoidal similar, HR2 , en gp41, dando como resultado un "cierre" las dos hélices juntas y mediando la fusión de membranas celulares y virales. Enfuvirtide (también conocido como "T-20" o "Fuzeon™" {2}) es el fármaco anti-VIH "inhibidor de fusión" prototípico. Es un péptido sintético lineal de 36 aminoácidos que inhibe la interacción VIH/células T al unirse a la región de repetición septena HRl en gp41 y previniendo los cambios en conformación requeridos para la fusión de la membrana. El Enfuvirtide se basa en la secuencia HR2 y se cree que actúa como un inhibidor competitivo de la interacción HR1/HR2 natural . Este mecanismo de fusión de membrana es típico para los virus, pero los inventores han encontrado que una adhesina de superficie conocida (NadA) en la bacteria Neisseria meningi tidis {3} contiene secuencias que corresponden al péptido de fusión, la repetición HRl y la repetición HR2 (véase figura 1) . Las secuencias dentro de NadA no tienen ninguna similitud de secuencia significativa con las secuencias virales, pero en su lugar se identificaron con base en la similitud estructural de NadA a la proteína spike (también proteína espina) del coronavirus del SARS . El sorprendente descubrimiento sugiere que los inhibidores de fusión podrían usarse para inhibir infección meningocócica. Aglutinantes de HRl y HR2 de NadA De esta manera la invención proporciona un compuesto que puede unirse a la secuencia o secuencias de repetición septena HRl y/o HR2 de la adhesina NadA sobre la superficie de un meningococo, inhibiendo de esta manera la capacidad del eningococo ya sea para infectar un organismo huésped o para difundir una infección existente. La región HRl dentro de Nad, usando como una referencia la secuencia de la cepa MC58 (SEQ ID NO: 1) , se localiza entre los residuos 117-152. La región HR2, de nuevo con referencia a la cepa MC58, se localiza entre los residuos 261-299. Las coordenadas correspondientes en otras cepas pueden identificarse por alineaciones simples con la secuencia de MC58.

De esta manera la invención proporciona también un compuesto que puede unirse a las regiones HRl y/o HR2 de la adhesina de NadA sobre la superficie de un meningococo, en donde la secuencia HRl, numerada de acuerdo con la secuencia de NadA en la cepa MC58, se localiza entre los residuos 117-152, y en donde la secuencia de HR2 , numerada de acuerdo con la secuencia NadA en la cepa MC58, se localiza entre los residuos 261-299. La cepa MC58 es la cepa que se usó para secuenciar el genoma del serogrupo B {4} y está ampliamente disponible (por ejemplo, ATCC BAA-335) . Haemophilus influenzae biogrupo aegyptius Así como identifican secuencias HRl y HR2 en la adhesina NadA de N. meningi tidis, los inventores han encontrado secuencias HRl y HR2 en la adhesina HadA {5; SEQ ID ?O: 35 en la presente} del biogrupo aegyptius de H. influenzae, el agente causante de la fiebre púrpura brasileña (BPF) . Las secuencias dentro de HadA no tienen ninguna similitud de secuencia significativa con las secuencias virales, pero en su lugar fueron identificadas con base en la similitud estructural a ?adA. La sorprendente similitud con las secuencias HR virales sugiere que inhibidores de fusión podrían usarse para inhibir la infección por H. influenzae. De esta manera la invención proporciona un compuesto que puede unirse a las secuencias de repetición septenas HRl y/o HR2 de la adhesina HadA sobre la superficie de una bacteria de haemophilus (particularmente H. influenzae, y más particularmente el biogrupo aegyptius) , inhibiendo de esta manera la capacidad del haemophilus ya sea para infectar un organismo huésped o para difundir una infección existente. La región HRl dentro de HadA, usando como una referencia la secuencia de la cepa F3031 (SEQ ID NO: 35) , se localiza entre los residuos 71-91. La región HR2 , de nuevo con referencia a la cepa F3031, se localiza entre los residuos 120-183. Las coordenadas correspondientes en otras cepas pueden identificarse mediante alineaciones simples con la secuencia de F3031. De esta forma la invención proporciona también un compuesto que puede unirse a las regiones HRl y/o HR2 de la adhesina HadA sobre la superficie de un haemophilus, en donde la secuencia HRl, numerada de acuerdo con la secuencia HadA en la cepa F3031, se localiza entre los residuos 71-91, y en donde la secuencia HR2 , numerada de acuerdo con la secuencia de HadA en la cepa F3031, se localiza entre los residuos 120-183. La cepa F3031 es un clon de BPF {6} y está ampliamente disponible (por ejemplo, ATCC 49252) . 01 i gopép t i dos Los compuestos de la invención típicamente serán oligopéptidos, por ejemplo, un péptido que consiste en no más de z aminoácidos, en donde z es 50 o menos (por ejemplo, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, etc.). La invención proporciona un oligopéptido que comprende un fragmento de una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: SEQ. ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO : 39 y SEQ ID NO : 40, en donde los fragmentos consisten en n aminoácidos consecutivos del identificador de secuencia (SEQ ID), y en donde n es 5 o más (por ejemplo, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, etc.). La invención proporciona también un oligopéptido que comprende un fragmento de una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 39 y SEQ ID NO : 40, en donde los fragmentos consisten en n aminoácidos consecutivos del identificador de secuencia, y en donde n es 5 ó más (por ejemplo, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, etc.)., siempre y cuando el fragmento incluya m sustituciones de aminoácido cuando se le compare con el identificador de secuencia, en donde m es un entero entre 1 y n .

El valor de m es de preferencia 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10. Los m aminoácidos son sustituidos típicamente por A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W O Y. Cada una de las m sustituciones puede ser la misma o diferente que las demás. La sustitución es de preferencia por G o, más preferiblemente, por A. El aminoácido sustituyente puede ser un L- o un D-aminoácido pero, cuando los otros n-m aminoácidos compartan todos una sola configuración estéreo (es decir, todos D- o todos L-), el aminoácido sustituyente también de preferencia tiene la configuración estéreo (aunque, por supuesto, G no tiene estereoisómeros) . Cuando el fragmento de n aminoácidos incluye una C, el valor de m es de preferencia por lo menos 1 de tal forma que la C sea sustituida por otro aminoácido, tal como S. La remoción de C de esta manera puede mejorar la resistencia a la oxidación. Los fragmentos preferidos de SEQ ID NO: 12 son también fragmentos de SEQ ID NO: 5. Los fragmentos preferidos de SEQ ID NO: 13 son también fragmentos de SEQ ID NO: 6. Los fragmentos preferidos de SEQ ID NO: 14 son también fragmentos de SEQ ID NO: 7. Los fragmentos preferidos de SEQ ID NO: 15 son también fragmentos de SEQ ID NO: 8. Los fragmentos preferidos de SEQ ID NO: 16 son también fragmentos de SEQ ID NO: 10. Los fragmentos preferidos de SEQ ID NO: 17 son también fragmentos de SEQ ID NO: 11. Los fragmentos preferidos de SEQ ID NO: 39 son también fragmentos de SEQ ID NO: 37. Los fragmentos preferidos de SEQ ID NO: 40 son también fragmentos de SEQ ID NO: 38. Los oligopéptidos que se prefieren particularmente comprenden o consisten en una de las siguientes secuencias de aminoácidos: SEQ ID NOs : 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 29, 30, 31, 37 y 38. Polipéptidos El compuesto de la invención puede ser un polipéptido, por ejemplo, que consista entre 2 y 1,000 aminoácidos. El polipéptido consiste de preferencia en no más de 250 aminoácidos (por ejemplo, no más de 225, 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 95, 90, 80, 70, 60, o no más de 50) . El polipéptido puede tener la fórmula NH2-A- (B-C)n-D- COOH, en donde: n es un entero entre 1 y 5, -A- es una secuencia de término N opcional que consiste en a aminoácidos; (cada) -B- es una secuencia de aminoácidos que comprende un fragmento de b aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 39 y/o SEQ ID NO: 40; (cada) -C- es una secuencia enlazadora opcional que consiste en c aminoácidos y -D- es una secuencia del término C opcional que consiste en d aminoácidos. El valor de i? es 5 o más (por ejemplo, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, etc.). Los fragmentos que se prefieren son como los definidos arriba (es decir, SEQ ID NOs : 4-11 y 29-31) . En algunos polipéptidos, la secuencia de aminoácidos de la (o de una o más de cada) porción -B- puede contener m sustituciones de aminoácido, en donde m es un entero entre 1 y p/ , como se definió arriba. Cada una de las n instancias de -B- puede ser la misma que o diferente de otra -B- . El valor de a generalmente es de por lo menos 1 (por ejemplo, al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, etc.), pero puede ser cero (es decir, -A-está ausente) . Ejemplos de porciones -A- típicas incluyen secuencias líder para dirigir el tráfico de proteínas, o secuencias de péptidos cortas que facilitan la clonación o purificación (por ejemplo marcadores de histidina, es decir, His en donde n = 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más). Otras secuencias de aminoácidos N-terminales adecuadas serán aparentes para aquellos expertos en la técnica. El valor de d generalmente es de por lo menos 1 (por ejemplo, al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, etc.), pero puede ser cero (es decir, -D-está ausente) . Ejemplos de porciones -D- típicas incluyen secuencias para dirigir el tráfico de proteínas, secuencias de péptidos cortos que facilitan la clonación o purificación (por ejemplo, que comprenden marcadores de histidina, es decir, His? en donde n =3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más), o secuencias que incrementan la estabilidad de la proteína. Otras secuencias de aminoácidos C-terminales adecuadas serán aparentes para aquellos expertos en la técnica. El valor de a+d puede ser 0 o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, etc.). Se prefiere que el valor de a+d sea de cuando mucho 1000 (por ejemplo, cuando mucho 900, 800, 700, 600,500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2). La secuencia de aminoácidos de -A- típicamente comparte menos de x% de identidad de secuencia con los a aminoácidos los cuales son N-terminales de la secuencia de -B-en una secuencia de NadA (o, cuando sea aplicable, HadA) (por ejemplo, en SEQ ID NO: 1 ó 2 ó 35) , y la secuencia de aminoácidos de -D- típicamente comparte menos de y% de identidad de secuencia con los d aminoácidos que están C- terminales de la secuencia -B- en una secuencia de NadA (o HadA) (por ejemplo, en SEQ ID NO: 1 ó 2 ó 35) . En general, los valores de x y y son ambos 60 o menos (por ejemplo, 50, 40, 30, 20, 10 o menos) . Los valores de x y y pueden ser los mismos o diferentes unos de otros. El valor de cada c generalmente es de por lo menos 1 (por ejemplo, al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, etc.), pero puede ser cero (es decir, -C- está ausente) . Los valores de cada n instancia de c pueden ser los mismos o diferentes unos de otros. Cada una de las n instancias de C puede ser la misma o diferente de otra C. La secuencia de aminoácidos de -Cn- (es decir, la n instancia de la porción -C-) comparte típicamente menos de z% de identidad de secuencia con los c aminoácidos que están C-terminales de la secuencia de -Bp- en una secuencia de NadA (o HadA) (por ejemplo, en SEQ ID NO: 1 ó 2 ó 35) . En general, el valor de z es 60 o menos (por ejemplo, 50, 40, 30, 20, 10 o menos). Cuando n>l , los valores de cada z pueden ser los mismos o diferentes unos de otros. El valor de n es de preferencia 1, de tal forma que el polipéptido tenga la fórmula NH2-A-B-C-D-COOH.

Péptidos de la invención Los polipéptidos de la invención (incluyendo oligopéptidos, colectivamente "péptidos") pueden ser lineales, ramificados o cíclicos, pero son de preferencia cadenas lineales de aminoácidos. Cuando residuos de cisteína están presentes, los péptidos de la invención pueden ser enlazados a otros péptidos por medio de puentes de disulfuro. Los péptidos de la invención pueden comprender L-aminoácidos y/o D-aminoácidos. La inclusión de D-aminoácidos puede preferirse para conferir así resistencia a proteasas de mamífero. El residuo del término N de un péptido de la invención puede modificarse covalentemente. Los grupos covalentes adecuados incluyen, pero no están limitados a: acetilo (como en Fuzeon™) ; un grupo hidrofóbico; carbobenzoxilo; dansilo; T-butiloxicarbonilo; amido; 9-fluorenilmetoxi-carbonilo (FMOC) ; un lípido; un ácido graso; polietileno; carbohidrato; etc. En forma similar, el residuo del término C de un péptido puede modificarse covalentemente (por ejemplo, carboxamida, como en Fuzeon™, etc.). Los grupos covalentes adecuados incluyen, pero no están limitados a: acetilo (como en Fuzeon™) ; un grupo hidrofóbico; amido; carbobenzoxilo; dansilo; t-butiloxicarbonilo,• 9-fluorenilmetoxi-carbonilo (FMOC) ; un lípido; un ácido graso; polietileno; carbohidrato; etc .

Los péptidos de la invención pueden producirse por varios medios . Un método preferido para la producción incluye síntesis química in vi tro {7, 8}. Se prefiere particularmente la síntesis de péptidos en fase sólida, tal como los métodos a base de química de t-Boc o Fmoc {9}. La síntesis enzimática {10} también se puede usar en parte o completamente. Como una alternativa para la síntesis química, se puede usar síntesis biológica, por ejemplo, los péptidos pueden producirse mediante traducción. Esto se puede llevar a cabo in vi tro o in vivo . Los métodos biológicos están en general restringidos a la producción de péptidos a base de L-aminoácidos, pero la manipulación de maquinaria de traducción (por ejemplo de moléculas aminoacilo-ARNt) se puede usar para permitir la introducción de D-aminoácidos (o de otros aminoácidos no naturales, tales como yodotirosina o metilfenilalanina, azidohomoalanina, etc.) {11}. Cuando se incluyen D-aminoácidos en los péptidos de la invención, sin embargo, se prefiere usar síntesis química. La producción de péptidos mediante medios biológicos da péptidos con un residuo de metionina del término N. Cuando el término N de un péptido de la invención no es una metionina entonces este residuo (y cualquier otro residuo extraño) tendrá que ser removido, por ejemplo mediante digestión proteolítica.

Para facilitar la síntesis biológica de péptidos, la invención proporciona ácido nucleico que codifica para un péptido de la invención. El ácido nucleico puede ser un ADN o ARN (o híbridos de los mismos) , o sus análogos, tales como aquellos que contienen estructuras de base modificadas (por ejemplo, fósforotioatos) o ácidos nucleicos péptidos (PNA) . Puede ser de una sola hebra (por ejemplo, ARNm) o de doble hebra, y la invención incluye ambas hebras individuales de un ácido nucleico de doble hebra (por ejemplo, para propósitos antisentido, cebadores o de sondeo) . Puede ser lineal o circular. Puede ser marcado. Puede estar fijado a un soporte sólido. El ácido nucleico de acuerdo con la invención puede, por supuesto, prepararse de muchas maneras, por ejemplo mediante síntesis química (por ejemplo, síntesis de ADN con fosforamidita) completamente o en parte, mediante digestión con nucleasas de moléculas más grandes, mediante ligación de moléculas más cortas, a partir de bibliotecas genómicas o de ADNc, mediante el uso de polimerasas, etc. La invención proporciona vectores (por ejemplo, plásmidos) que comprenden ácido nucleico de la invención (por ejemplo vectores de expresión y vectores de clonación) y células huésped (procarióticas o eucarióticas) transformadas con estos vectores.

Diseño de fármaco y pept idomimét icos Los péptidos de la invención son antibacerianos útiles por su propia cuenta. Sin embargo, pueden refinarse para mejorar la actividad antibacteriana o para mejorar características farmacológicamente importantes tales como biodisponibilidad, toxicología, metabolismo, farmacocinética, etc. Los péptidos pueden por lo tanto usarse como compuestos líderes para investigación y refinación adicionales. Los péptidos de la invención se pueden usar para diseñar moléculas peptidomiméticas {por ejemplo, referencias 12 a 18} con actividad anti-meningocócica o anti- ha emophilus . Éstos serán típicamente isostéricos con respecto a los péptidos de la invención pero carecerán de uno o más de sus enlaces péptidos. Por ejemplo, la estructura de base péptida puede reemplazarse por una estructura de base no péptida conservando al mismo tiempo cadenas laterales de aminoácidos importantes . La molécula peptidomimética puede comprender aminoácidos de azúcar {19}. Pueden usarse peptoides . Para ayudar en el diseño de moléculas peptidomiméticas, un farmacóforo (es decir, una colección de características químicas y restricciones 3D que expresan características específicas responsables de actividad) puede definirse para los péptidos KM. El farmacóforo incluye de preferencia características accesibles en superficie, muy preferiblemente incluyendo donadores y aceptores de enlaces de hidrógeno, grupos cargados/ionizables y/o parches hidrofóbicos . Éstos pueden ser ponderados dependiendo de la importancia relativa en conferir actividad {20} . Los farmacóforos pueden determinarse usando software tal como CATALYST (incluyendo HypoGen o HipHop) {21}, CERIUS2, o construirse manualmente a partir de una conformación conocida de un polipéptido de la invención. El farmacóforo se puede usar para tamizar bibliotecas estructurales, usando un programa tal como CATALYST. También se puede usar el programa CLIX {22}, el cual busca orientaciones de moléculas candidatas en bases de datos estructurales que producen una coincidencia espacial máxima con grupos químicos que interactúan con el receptor . La superficie de unión o farmacóforo puede usarse para mapear posiciones de interacción favorables para grupos funcionales (por ejemplo, protones, grupos hidroxilo, grupos amina, grupos hidrofóbicos) o fragmentos de molécula pequeña. Después pueden ser diseñados de novo compuestos en los cuales grupos funcionales relevantes se localicen sustancialmente en la misma relación espacial que en los polipéptidos de la invención. Lo grupos funcionales pueden enlazarse en un solo compuesto usando ya sea fragmentos de puenteo con el tamaño y geometría correctos, o armazones que pueden soportar los grupos funcionales en orientaciones favorables, proporcionando de esta manera un compuesto peptidomimético de acuerdo con la invención. Aunque el enlace de grupos funcionales de esta manera se puede hacer manualmente, tal vez con la ayuda de software tal como QUANTA o SYBYL, también están disponibles enfoques de diseño de novo automatizados o semi-automatizados, tales como: - MCSS/HOOK {23, 24, 21}, el cual enlaza varios grupos funcionales con plantillas moleculares tomadas de una base de datos. - LUDÍ {25, 21}, el cual calcula los puntos de interacción que pudieran idealmente ser satisfechos por un ligando, pone fragmentos en el sitio de unión con base en su capacidad para interactuar con el receptor, y luego los conecta para producir un ligando. - MCDLNG {26}, el cual llena un sitio de unión a receptor con una disposición estrechamente empacada de átomos genéricos y usa un procedimiento Monte Cario para variar aleatoriamente tipos de átomos, posiciones, disposiciones de enlace y otras propiedades . - GRO {27}, el cual inicia con un fragmento de 'semilla' inicial (puesto manualmente o automáticamente) y hace crecer el ligando hacia afuera. SPROUT {28}, juego que incluye módulos para: identificar regiones de enlace a hidrógeno e hidrofóbicas favorables dentro de una cavidad de unión (módulo HIPPO) ; seleccionar grupos funcionales y colocarlos en sitios objetivo para formar fragmentos de partida para la generación de estructuras (EleFanT) ; generar esqueletos que satisfagan las restricciones estéricas de la cavidad de unión al cultivar fragmentos separadores sobre los fragmentos de partida y luego conectar los esqueletos parciales resultantes (SPIDeR) ; sustituir heteroátomos en los esqueletos para generar moléculas con las propiedades electrostáticas que sean complementarias a aquellas del sitio receptor (MARABOU) . Las soluciones pueden agruparse y calificarse usando el módulo ALLigaTOR. - CAVEAT {29}, el cual diseña unidades de enlace para restringir moléculas acíclicas . - LEAPFROG {30}, el cual evalúa ligandos al hacer cambios estructurales por pasos pequeños y evaluar rápidamente la energía de unión del nuevo compuesto . Los cambios se mantienen o se descartan con base en la energía de unión alterada, y surgen estructuras para incrementar la energía de interacción con el receptor. - GROUPBUILD {31}, el cual usa una biblioteca de plantillas orgánicas comunes y una descripción de campo de fuerza empírica completa de las interacciones no de enlace entre un ligando y receptor para construir ligandos que tengan una estructura químicamente razonable y tengan propiedades estéricas y electrostáticas complementarias a las del sitio de unión a receptor. RASSE {32}. Estos métodos identifican compuestos antibacterianos. Estos compuestos pueden diseñarse de novo, pueden ser compuestos conocidos, o pueden basarse en compuestos conocidos. Los compuestos pueden ser antibacterianos útiles ellos mismos, o pueden ser prototipos que puedan usarse para una refinación farmacéutica adicional (por ejemplo, compuestos líder) para mejorar la afinidad de unión u otras características farmacológicamente importantes (por ejemplo, bio-disponibilidad, toxicología, metabolismo, farmacocinética, etc.). La invención proporciona entonces: (i) un compuesto identificado usando estos métodos de diseño de fármacos; (ii) un compuesto identificado usando estos métodos de diseño de fármacos, para usarse como un farmacéutico; (iii) el uso de un compuesto identificado usando estos métodos de diseño de fármacos en la fabricación de un antibacteriano, por ejemplo, para prevenir infección meningocócica o por haemophilus; (iv) un método para tratar un paciente, que comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto identificado usando estos métodos de diseño de fármacos. Siendo también compuestos útiles individualmente, los ligandos identificados in silico por las técnicas de diseño a base de estructura también se pueden usar para sugerir bibliotecas de compuestos para métodos de tamizado in vi tro o in vivo 'tradicionales' . Los motivos farmacéuticos importantes en los ligandos pueden identificarse e imitarse en bibliotecas de compuestos (por ejemplo, bibliotecas combinatorias) para tamizar actividad microbicida y/o antiviral . Meningococos atenuados La adhesina NadA forma oligómeros expuestos en superficie sobre meningococos y está implicada en la adhesión a células epiteliales {41} . La adhesión es parte del ciclo patogénico en meningococo, y su inhibición podría atenuar la bacteria de tal forma que no pudiera invadir células y causar enfermedad, sin pérdida de la inmunogenicidad completa de la bacteria. Una manera de inhibir la adhesión de acuerdo con la invención es remover de NadA una o más de las secuencias péptidas HRl, HR2 o de fusión. De esta manera la invención proporciona una proteína NadA mutante, en donde la proteína mutante carece de una o más de las secuencias HRl, HR2 o de fusión. La invención proporciona también una proteína NadA mutante, en donde el mutante no contiene una o más de las secuencias de aminoácidos siguientes: (i) una secuencia que tiene al menos p% de identidad con SEQ ID NO: 3; (ii) una secuencia que tiene al menos q% de identidad con SEQ ID NO: 5; (iii) una secuencia que tiene al menos r% de identidad con SEQ ID NO: 7; (iv) una secuencia que tiene al menos s% de identidad con SEQ ID NO: 10. El valor de p es 50 o más. El valor de q es 50 o más. El valor de r es 50 o más. El valor de s es 50 o más. Los valores de p, q, r y s son independientes unos de otros, y valores típicos son 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98, 99 ó 100. Las secuencias de aminoácidos (i) , (ii) , (iii) y (iv) tienen de preferencia 10 aminoácidos de largo, y muy preferiblemente al menos 15 aminoácidos de largo. La invención proporciona también una proteína NadA mutante, que comprende una secuencia de aminoácidos -A-B-C-D-E-F-G-H-I-, en donde: -A- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos a% de identidad de secuencia con los aminoácidos 26-116 de SEQ ID NO: 1; -B- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos b% de identidad de secuencia con los aminoácidos 117-152 de SEQ ID NO: 1; -C- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos c% de identidad de secuencia con los aminoácidos 153-180 de SEQ ID NO: 1; -D es una secuencia de aminoácidos con por lo menos d% de identidad de secuencia con los aminoácidos 181-199 de SEQ ID NO: 1; -E- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos e% de identidad de secuencia con los aminoácidos 200-260 de SEQ ID NO: 1; -F- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos f% de identidad de secuencia con los aminoácidos 261-275 de SEQ ID NO: 1; -G-es una secuencia de aminoácidos con por lo menos g de identidad de secuencia con los aminoácidos 276-277 de SEQ ID NO: 1; -H- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos h% de identidad de secuencia con los aminoácidos 278-299 de SEQ ID NO: 1; -I- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos i% de identidad de secuencia con los aminoácidos 300-364 de SEQ ID NO: 1, siempre que por lo menos uno de -B-, -D- , -F- o -H- no esté presente en dicha proteína. El valor de a es 50 o más. El valor de b es 50 o más. El valor de c es 50 o más. El valor de d es 50 o más. El valor de e es 50 o más. El valor de f es 50 o más. El valor de g es 50 o más. El valor de h es 50 o más. El valor de i es 50 o más. Los valores de a, b, c, d, e, f, g, h e i son independientes unos de otros, y valores típicos son 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98, 99 ó 100. La invención proporciona también ácido nucleico que codifica para estas proteínas NadA mutantes. La invención proporciona también un meningococo que expresa al ácido nucleico (a) , el cual despliega la proteína NadA mutante sobre su superficie, y el cual no puede unirse y/o entrar en células epiteliales humanas. Las mutaciones pueden introducirse en el meningococos objetivo mediante recombinación homologa (por ejemplo, usando la técnica de supresión isogénica) para remover la secuencia nadA nativa.

Haemophil us atenuado Una forma de inhibir la adhesión a haemophilus de acuerdo con la invención es remover de HadA una o más de las secuencias de péptidos HRl, HR2 o de fusión. De esta manera la invención proporciona una proteína HadA mutante, en donde la proteína mutante carece de una o más de las secuencias HRl, HR2 o de fusión. La invención proporciona también una proteína HadA mutante, en donde el mutante no contiene una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos p% de identidad con SEQ ID NO: 35, en donde el valor de p es 50 o más (por ejemplo, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98, 99 ó 100). La secuencia de aminoácidos tiene de preferencia al menos 10 aminoácidos de largo, y muy preferiblemente al menos 15 aminoácidos de largo. La invención proporciona también una proteína HadA mutante, que comprende una secuencia de aminoácidos -A-B-C-D-E-F-G-, en donde: -A- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos a% de identidad de secuencia con los aminoácidos 27-50 de SEQ ID NO: 35; -B- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos J% de identidad de secuencia con los aminoácidos 51-67 de SEQ ID NO: 35; -C- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos c% de identidad de secuencia con los aminoácidos 68-70 de SEQ ID NO : 35; -D es una secuencia de aminoácidos con por lo menos d% de identidad de secuencia con los aminoácidos 71-91 de SEQ ID NO: 35; -E- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos e% de identidad de secuencia con los aminoácidos 92-119 de SEQ ID NO: 35; -F- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos f% de identidad de secuencia con los aminoácidos 120-183 de SEQ ID NO: 35; -G- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos g% de identidad de secuencia con los aminoácidos 184-256 de SEQ ID NO: 35; siempre y cuando por lo menos uno de -B-, -D- o -F- no esté presente en dicha proteína. El valor de a es 50 o más. El valor de b es 50 o más. El valor de c es 50 o más. El valor de d es 50 o más. El valor de e es 50 o más. El valor de f es 50 o más. El valor de g es 50 o más. Los valores de a, b, c, d, e, f y g son independientes unos de otros, y valores típicos son 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98, 99 ó 100. La invención proporciona también ácido nucleico que codifica para estas proteínas HadA mutantes. La invención proporciona también un haemophilus que expresa al ácido nucleico (a) , el cual presenta a la proteína HadA mutante sobre su superficie, y el cual no puede unirse y/o entrar en células epiteliales humanas . Las mutaciones pueden introducirse en haemophilus objetivo mediante recombinación homologa (por ejemplo, usando la técnica de supresión isogénica) para remover la secuencia hadA nativa.

Composiciones farmacéuticas La invención proporciona una composición farmacéutica que comprende (a) un péptido de la invención y (b) un vehículo farmacéutico. El componente (a) es el ingrediente activo en la composición, y está presente en una cantidad terapéuticamente efectiva, por ejemplo, una cantidad suficiente para inhibir infección meningocócica o por haemophilus . La cantidad efectiva precisa para un paciente dado dependerá de su talla y salud, la naturaleza y grado de infección, y la composición o combinación de composiciones seleccionadas para su administración. La cantidad efectiva puede determinarse mediante experimentación de rutina y está dentro del juicio del médico. Para los propósitos de la presente invención, una dosis efectiva generalmente será de alrededor de 0.01 mg/kg a aproximadamente 5 mg/kg, o alrededor de 0.01 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg o alrededor de 0.05 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg. Las composiciones farmacéuticas a base de péptidos se conocen bien en la técnica (por ejemplo, FUZEON™) . Se pueden incluir péptidos en la composición en forma de sales y/o esteres. El vehículo (b) puede ser cualquier sustancia que a su vez no induzca la producción de anticuerpos dañinos para el paciente que reciba la composición, y la cual puede administrarse sin toxicidad indebida. Los vehículos adecuados pueden ser grandes macromoléculas lentamente metabolizadas tales como proteínas, polisacáridos, ácidos polilácticos, ácidos poliglicólicos, aminoácidos poliméricos, copolímeros de aminoácidos y partículas de virus inactivas. Estos vehículos se conocen bien por aquellos expertos en la técnica. Los vehículos farmacéuticamente aceptables pueden incluir líquidos tales como agua, solución salina, glicerol y etanol. Sustancias auxiliares, tales como agentes humectantes o emulsionantes, sustancias reguladoras de pH y similares, también pueden estar presentes en estos vehículos. Los liposomas son vehículos adecuados. Una descripción detallada de vehículos farmacéuticos está disponible en la referencia 33. Las infecciones meningocócicas y por haemophilus afectan varias áreas del cuerpo y por lo tanto las composiciones de la invención se pueden preparar en varias formas. Por ejemplo, las composiciones pueden prepararse como inyectables, ya sea como soluciones o suspensiones líquidas. Las formas sólidas adecuadas para solución en, o suspensión en, vehículos líquidos antes de inyección también pueden prepararse. La composición puede prepararse para administración tópica, por ejemplo como un ungüento, crema o polvo. La composición puede prepararse para administración oral, por ejemplo, como una tableta o cápsula, o como un jarabe (opcionalmente saborizado) . La composición puede prepararse para administración pulmonar, por ejemplo como un inhalador, usando un polvo fino o una atomización. La composición puede prepararse como un supositorio o pesario. La composición puede prepararse para administración nasal, oral u ocular, por ejemplo, como gotas, como una atomización o como un polvo {por ejemplo 34}. La composición puede incluirse como un enjuague bucal. La composición puede ser liofilizada. La composición farmacéutica es de preferencia estéril. De preferencia está libre de pirógenos. Es de preferencia regulada en pH por ejemplo a entre pH 6 y pH 8, generalmente alrededor de un pH 7. La invención proporciona también un dispositivo de suministro que contiene una composición farmacéutica de la invención. El dispositivo puede ser, por ejemplo, una jeringa o un inhalador . Los péptidos de la invención pueden ser coadministrados con uno o más antibióticos, de preferencia aquellos que sean activos contra meningococo y/o haemophilus . Las composiciones de la invención pueden entonces incluir uno o más antibióticos. Tratamientos médicos y usos La invención proporciona un compuesto de la invención para usarse como un medicamento. La invención proporciona también un método para tratar un paciente que sufra de una infección meningocócica y/o por haemophilus, que comprenden administrar al paciente una composición farmacéutica de la invención. La invención proporciona también el uso de un compuesto de la invención en la fabricación de un medicamento para tratar a un paciente. El paciente es de preferencia un humano. El humano puede ser un adulto o, de preferencia, un niño. Una composición destinada para niños también puede administrarse a adultos, por ejemplo, para evaluar la seguridad, dosificación, inmunogenicidad, etc. Las composiciones de la invención generalmente serán administradas directamente a un paciente. El suministro directo puede lograrse mediante inyección parenteral (por ejemplo, subcutáneamente, intraperitonealmente, intravenosamente, intramuscularmente o al espacio intersticial de un tejido) , o mediante administración rectal, oral (por ejemplo, tableta, atomización), vaginal, tópica, transdérmica {por ejemplo, véase referencia 35} o transcutánea {por ejemplo, véanse referencias 36 y 37}, intranasal {por ejemplo, véase referencia 38}, ocular, ótica, pulmonar u otra administración en mucosas. El tratamiento de dosificación puede ser un programa de una sola dosis o un programa de varias dosis. Los usos y métodos de la invención pueden usarse terapéuticamente (por ejemplo para tratar una meningitis bacteriana y meningocócica existente o BPF) o profilácticamente (por ejemplo, en una situación en la que se espere contacto con microbios y en donde el establecimiento de la infección vaya a prevenirse) . Se prefiere el uso terapéutico, y la eficacia del tratamiento puede probarse al monitorear títulos bacterianos después de la administración de la composición farmacéutica de la invención, o al monitorear síntomas . Procesos La invención proporciona también un proceso para producir un péptido de la invención, que comprende la etapa de cultivar una célula huésped transformada con ácido nucleico de la invención bajo condiciones que induzcan la expresión del péptido. La invención proporciona un proceso para producir un péptido de la invención, que comprende la etapa de sintetizar el péptido mediante medios químicos. El péptido puede ser sintetizado completamente o en parte por estos medios químicos . General El término "que comprende" abarca "que incluye" así como "que consiste en", por ejemplo, una composición "que comprende" X puede consistir exclusivamente en X o puede incluir algo adicional, por ejemplo X + Y. El término "aproximadamente" en relación a un valor numérico x significa, por ejemplo, x±10%.

La palabra "sustancialmente" no excluye "completamente", por ejemplo, una composición que esté "sustancialmente libre" de Y puede estar completamente libre de Y. Cuando sea necesario, la palabra "sustancialmente" puede omitirse de la definición de la invención. Las referencias a la identidad de secuencia porcentual entre dos secuencias de aminoácidos significa que, cuando son alineadas, ese porcentaje de aminoácidos es el mismo al comparar las dos secuencias. Esta alineación y la homología o identidad de secuencia porcentual se pueden determinar usando programas de software conocidos en la técnica, por ejemplo aquellos descritos en la sección 7.7.18 de la referencia 39. Una alineación que se prefiere es determinada por el algoritmo de búsqueda de homología de Smith-Waterman usando una búsqueda de espacios a fines con una penalidad abierta de espacios de 12 y una penalidad de extensión de espacios de 2, la matriz BLOSUM de 62. El algoritmo de búsqueda de homología de Smith-Waterman se describe en la referencia 40. El uso de "NH2" y "COOH" en secuencias de péptidos implica únicamente la dirección de la cadena de péptidos del término N al término C, y no implica que el residuo del término N deba tener un grupo -NH2 libre o que el término C deba tener un grupo -COOH libre (aunque tampoco se excluye esta situación) . Por el contrario, los términos N y C pueden modificarse covalentemente. Los compuestos de la invención pueden inhibir de preferencia ya sea (a) la interacción de HRl de NadA con HR2 de NadA, o (b) la interacción de HRl de HadA con HR2 de HadA. La interacción de unión entre un compuesto de la invención y NadA/HadA es específica. La especificidad en este contexto no significa que el compuesto se una a otra cosa que no sea NadA/HadA (por ejemplo, puede unirse a otras adhesinas o proteínas de superficie) , sino significa que el compuesto se une a NadA/HadA arriba de los niveles de fondo (es decir, no específico) . Por ejemplo, el compuesto se une a NadA/HadA más estrechamente de lo que se une a proteínas tales como albúminas, globulinas, etc. Breve descripción de las figuras La figura 1 muestra NadA de la cepa MC58, con regiones de interés resaltadas. La figura 2A muestra un análisis de rueda helicoidal de SARS, La figura 2B muestra un análisis de rueda helicoidal de NadA. La figura 3A muestra modelos de cambios en conformación en HA de influenza. La figura 3B muestra modelos de cambios en conformación en HadA.

Breve descripción del listado de secuencias Descripción detallada de la invención NadA meningocócica La referencia 3 describe detalles de la Adhesina A de Neisseria , una proteína superficial de Neisseria meningi tidis . Las secuencias de NadA se dan a partir de 26 cepas meningocócicas diferentes, incluyendo cepas de los serogrupos A, B y C. Las secuencias fueron divididas en tres alelos diferentes. NadA no se observó en el linaje hipervirulento III de N. meningi tidis, en N. gonorrhoeae, N. lactamica o N. cinérea . ?adA también está ausente de la secuencia publicada de la cepa meningocócica del serogrupo A Z2491. Las secuencias diferentes han sido depositadas en GenBank, y también se pueden ver en SEQ ID ?Os: 1 a 14 de la referencia 41. Con base en las secuencias y caracterización publicadas, la persona capacitada será capaz de identificar la secuencia de ?adA (o su ausencia) para cualquier cepa de meningococo dada. SEQ ID ?O: 1 en la presente es la secuencia de ?adA de la cepa MC58, la cual tiene el alelo "1". SEQ ID ?O: 2 es la secuencia de ?adA de la cepa 2996, la cual tiene el alelo "3". Una alineación de estas dos secuencias se da a continuación : 20 30 40 50 60 ALELO- 3 MKHFPSKVLTTAILATFCSGAL TNDDDVKKMTVAIAAAYNNGQEINGFKAGETIYDI MKHFPSKVLTTñlLATFCSGAIAATSDDDVKKAATVAIVñAYNNGQEINGFKAGETIYDI ALELO- 1 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 ALELO-3 DEDGTITKKDAT DVEADDFKG G KKWTNLTKTVNENKQNVDAKVKAAESEIEKLTT iiiiihiüimiiiiimiiiiimiimiiiiiimimiiiiiiiim GEDGTITQKDAT DVEADDFKGLGLKKWTNLTKTV ENKQNVDAKVKñAESEIEKLTT ALELO- 1 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 ALELO- 3 KLADTDAALADTDAALDATTNA NK GENITTFAEETKTNIVKIDEKLEAVADTVDKHAE imiimimmi iimiimmiiiiiiimiiiiiiiiiimimii K ADTDAA ADTDAA DETTNALNK GENITTFAEETKTNIVKIDEKLEAVADTVDKHAE ALELO- 1 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 ALELO- 3 AFNDIADSLDETNTííADEAVKTANEAKQTAEETKQNVDAKVKAAETAAGKAEA GTANT AFNDIADSLDETNTKADEAVKTANEAKQTAEETKQNVDAKVKAAETAAGKAEAAAGTANT ALELO- 1_ 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 ALELO- 3 AADKAEAVAAKVTDIKADIATNKDNIAKKANSADVYTREESDSKFVRIDGLNATTEKLDT iiiiimiiimmmm :i?? m •• AADKAEAVAAKVTDIKADIAGNKADIAK—NSARI ALELO- 1 250 260 270 310 320 330 340 350 360 ALELO- 3 RLASAEKSIADHDTRLNGLDKTVSDLRKETRQGLAEQAASGLFQPYNVGRFNVTAAVGG :: 111 : 1 :: 11111111111111111 ! 11111111111111111 DS DKNVA RKETRQG AEQAALSGLFQPYNVGRF VTAAVGG ALELO- 1 280 290 300 310 370 380 390 400 ALELO- 3 YKSESAVAIGTGFRFTENFAAKAGVAVGTSSGSSAAYHVGVNYEW YKSESAVAIGTGFRFTENFAAKAGVAVGTSSGSSAAYHVGVNYEW ALELO- 1 320 330 340 350 360 La referencia 3 muestra que NadA tiene un ancla de membrana y que la proteína se ensambla en la membrana meningocócica para formar oligómeros que se asocian por medio de dominios súper bobinados .

Pro teína spike del coronavirus del SARS La proteína spike ( también proteína espina) E2 del coronavirus del SARS ha sido reportada . Una secuencia de aminoácidos de esta proteína se da en la presente como SEQ ID NO : 18 . Una alineación CLUSTALW de SEQ ID NOs : 1 y 18 ( es decir , NadA y E2 ) revela menos de 6% de identidad : 70 80 90 100 110 120 NadA MSMKHFP SARS PFYSNVTGFHTINHTFGNPVIPFKDGIYFAATEKSNWRG VFGSTMNNKSQSVIIINNS 130 140 150 160 170 180 NadA SKV TTAILATFCSGALAATSD SARS TNWIRACNFE CDNPFFAVSKPMGTQTHTMIFDNAFNCTFEYISDAFSLDVSEKSGNFK 190 200 210 220 230 240 I I I I NadA DDVKKAAT VAIVAAYNN SARS H REFVFKNKDGFLYVYKGYQPIDWRDLPSGFNTLKPIFKLPLGINITNFRAILTAFSP 250 260 270 280 290 300 I I NadA GQEING FKAGETIYDIGEDGTIT SARS AQDIWGTSAAAYFVGYI.KPTTFMLKYDENGTITDAVDCSQNPLAELKCSVKSFEIDKGIY 370 380 390 400 410 420 NadA QKDATAADVEADDFKGLG-- KKWTNLTKTVNE SARS FSTFKCYGVSATKLND CFSNVYADSFWKGDDVRQIAPGQTGVIADYNYKLPDDFMGCV 430 440 450 460 470 480 l i l i l í NadA — KQNVDA KVKAAESEIEK TT SARS LAWNTRNIDATSTGNYNYKYRYLRHGKLRPFERDISNVPFSPDGKPCTPPALNCYWPLND 490 500 510 520 530 540 NadA KIADTDAALADTDAA DETTN SARS YGFYTTTGIGYQPYRVWLSFELLNAPATVCGPKLSTDLIKNQCVNFNFNG TGTGVLTP 550 560 570 580 590 600 I NadA ALNKLGENITTFAEETK TNIVKIDEKLEAVADTVDKHAEAFNDIADSLDE SARS SSKRFQPFQQFGRDVSDFTDSVRDPKTSEILDISPCSFGGVSVITPGTNASSEVAVLYQD 610 620 630 640 650 660 l i l i l í NadA TN TKADEAVKTAN EAKQTAEETKQNVDAKVKAAE SARS VNCTDVSTAIHADQ TPAWRIYSTGNNVFQTQAGCLIGAEHVDTSYECDIPIGAGICASY 670 680 690 700 710 720 l i l i l í NadA TAAGKAEAAAG TANTAADKAEAVAAKVTDIKADIATNKADIAKNSARIDS SARS HTVSLRSTSQKSIVAYTMSLGADSSIAYSNNTIAIPTNFSISITTEVMPVSMAKTSVDC 730 740 750 760 770 780 l i l i l í NaA LDKNVANLRKET-RQGLAEQAALSGLFQPYNVGRFN SARS N YICGDSTECANLLQYGSFCTQLNRALSGIAAEQDRNTREVFAQVKQMYKTPTLKYFG 790 800 810 820 830 840 l i l i l í NadA VTAAVGGYKSESAVAIG TGFRFTENF— SARS GFNFSQILPDPKPTKRSFIEDLLFNKVTLADAGFMKQYGEC GDINARDLICAQKFNG 850 860 870 880 890 900 l i l i l í NadA AAKAGVAVGTSSGSSAAYHVGVNYEW SARS TVLPPLLTDDMIAAYTAALVSGTATAG TFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYE De esta manera, con base simplemente en la secuencia primaria, el cual es el criterio usual mediante el cual se juzgan relaciones evolutivas, la proteína del SARS viral de 1255 meros y la proteína NadA bacteriana de 364 meros aparecen no emparentadas . Una predicción de estructura secundaria para la proteína E2 del SARS se da a continuación, en donde C representa una bobina, H representa una hélice y E representa una secuencia extendida: 10 20 30 40 50 60 70 I I I I I I I PIFttBTiT TSGSDI JRCTTFDDVQAPNYTQHTSSl^GVrrPDEIFRSDT ?lTQD FLPFYSNWGFH CeEEEEEEccCCCccceeeeCCCCCCCCCCCCCceEEEEEeCCcEEEEEEEEceEEEEEEeceEEcCeEe TIOTTFGNF TCPFi?GIYF SNVVRa^ ceeeeCCCceeeEeCCccecCCCCCCceEEEEEEEEccCCCcEEEEEeCCCEEEEEEEEEeccCCCCCCC SKPMGTQTHT iroNAFNCTFEYISDAFS DVSEKSGNFKHLRBFVFKNKDßFl?VmGYQPm c CCCCCCeEEEEEEEcCCCCcEEEEEeeeEEEcCCCCCChhHHheEEEEeCCCEEEEEEcCCCCCCcCCCC SGFNTLKPIFKLPLGINITi ^AI TAFSPAQDIWGTSAMYí /G?LKPTTE^-LKYD NGTITDAVDCSQ CCCccccccceEEEeeeeceeeeEEEeccCcCCCcCCccchHHhhhccceEEEEEcCCCCEEEEeccCCC NPI^ KCSVKSFEIDKGIYQTSNFRVVPSGDVVPJ'PNi CPFGE CCCceEEeCceEeeeCCcEEEeCCeEEEeCCEEEEEeCCCCCCCccceecCCCCCCccHHH HHHhhcch DYSVLWSTFFSTFKCYGVSATKI-^ CFSNVYADSF^ HHHHHHhhceEEeeeeceeececcccceeeEeEeeEEEcCCCeeecccCCCceEeecccceCCccceEE IAWTraiDATSTGNYOTKYRYLPJJGKI-WraPJJIS rPFSPDGKPCTPPAILNCYW EEEeCCCCCCcCCCCCCCCceccccCccCCccCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCceeccCCcc ?QP?P ?rtO?S EUjNAPA!I?CGP.asmiKNQC FN^ Ü eeEEEEEEEEEeCCCCCcccCCCCcCCceEEeeeeEEEEeeccceeeeHHHHHHHhhHHHh eccCCCcc SVPJ)PKTSEII )ISPCSFGl^SVITPGTi SSEVAV YQDVNCTDVSTAIHADQ TPAT?RI?STGNNVFQ cccccCCCcEEEEEEccCceEEEEEeCCCCCCCceEEeeecceEEEeCCCCcccCCCCccccCCCCcHHH TQAGCLIGAEHVDTSYECDIPIGAGICASYHWSL RSTSQKSGVAYT SLGADSSIAYSNNTIAIPTNF hhccceeeccCCCCCCCCCccCCCcceeEEeecceeeeeecCeEEEEEecCCCCCcccCCCCeEEeeCcc SISlTTEV PVSMAKTSVDCNM?ICGDSTEC^AOT;LLQYGSFCTQUp«-LSGIAAEQDRNTREW EcccceEEEEEeCCceeecccccccCChHHHHHHHHHHhHHHHHHHHHHHHHHHHhhchHHHHHHHHHhC YKTPTLKYFGGFlWSQILPDPKPT-a<SFIEDLI'-«p;.^ CeeeEEecCCceecccCCCCCCCcCC HHHHHHHhccceeeeccceccccccCCCcccccEEEEEEcCCc 5 TVPPI?TDDMrAAYTAAVSGTATAGWTFGAGAAQIPFAMQlftYRFNßlGWQNV YENQKQIANQFN EeccCCCCcHHHHHHHHHHHhhhcCCCchhHhHHH ccceeEeEhhhcCCcchhhHHHHHHHHHHHHHH KAISQIQESLTTTSTAI.GKLQDVVNQNAQAL VKQ^ HHHHHHHHhhHhHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHhcchHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHH GPXQSLQnWQQLIPJ^IPASANIAATKMSECVL^ HHHHHHHHHHHHHHhHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHhcccceccccchhH eeeccCCCcEEEEEEEEE PSQEKSFTGAPAICHEGKAYFPP?GVFVFNGTSWFITQP>NFFSPQIITTDNTFVSGNCD IGIINN Y ECceeeeeccCCeeeeeeeecccCcEEEecCCEEEEcCCCccCCCcccCCCEEEEEEEEEEEeCCceecC DPI/JPELDSFKEELDKYFKiraTSPDVDFGDISGii SVVN^^ Q cCCCCCCcHHHHHHHHHHH CCCCCCCCCcCcceeEeeeccHHHHHHHHHHHHHHhcchhhHHhCCcEEE YIKWPWYVWI?FIAG IAIVMOT!II .CCMTSCCSCI?GACSCGSCCKFDEDDSEPVIJ GVK HY EecchHHHHHHHHHHHHhheeEEEEEEEeCCCCcceecCCCCCCCcccCCCCCCeEEcccEEEcC La estructura secundaria revelada para la proteína E2 del SARS (y, de hecho , para las proteínas de fusión de muchos otros virus envueltos ) es similar aquella observada en 5 NadA : MSMKHFES TTAIIATFCSGAI_AATSDDDVKKAATVArVAAYW^ CCCCCCCcHHHHHHHHHHHH HhhhccCCHHHHHHHHHhhhhhhcCcceeecccCCeEeeccCCCCceec KDATAADVEADDFKGLG KKVVTOIIKinmE.WO^ AKyKAAESEIE.aT c hhHHhhhHHh CCCeeeehHHHHHHH hchHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHhcccccchHhccc TTNAI-SKLGENIíraFAEEreiraiVKIDEK SAVADTVDKHAElAFN^ cHHHHHHhcccHhHHHHhhccCccccchhHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHhhc HHHHHHHH ccHHH rAEETKQNVDAKVKVAETAAGKAEAAAGTANTAADKAEA^ HHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHhhecCCCchHHHHhcccceEEEEe HHHHhcCCCccccCCcchHHHHH NVANI-Ria¡TR{^IJ-EQAAI)SG FQPY-WGRFNVTAAVGG HHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHhcCCCCcceeEEEEEeCCCchhheeecCCccchhHHHHHhCCcEEEcCC GSSAAYHVGVNYEW CCcceeeeCeeecC Esta similitud a nivel de estructura secundaria sugirió a los inventores que NadA podría compartir características funcionales con la proteína spike viral . En particular , una secuencia HR2 recientemente han mostrado inhibir la entrada y fusión a la membrana virales del coronavirus { 42 } , como se observa con FUZEON™ en VIH, y por lo tanto los inventores buscaron en NadA para localizar posibles secuencias de fusión, HRl y HR2 . Secuencias de repetición septena y de fusión de NadA Las secuencias de péptidos de fusión para varias proteínas spike virales se muestran a continuación , seguidas por una secuencia de consenso : Spike del MHV ( 971 ) KMIASAFNNALGAIQDGFD SEQ ID NO : 19 Spike del BCV ( 1015 ) KLIANAFNNALDAIQEGFD SEQ ID NO : 20 Spike del FIPV ( 1079 ) KILANAFNNAIGNITLALG SEQ ID NO : 21 Spike del TGEV (1060) QILASAFNQAIGNITQSFG SEQ ID NO: 22 Spike del IBV aviar (795) EKIAASFNKAIGHMQEGRF SEQ ID NO: 23 Spike del HcoV 229E (792) KILAASFNKAMTNIVDAFT SEQ ID NO: 24 Spike del HcoV OC43 (1005) KLIANAFNNALYAIQEGFD SEQ ID NO: 25 Spike del SARS chiron (903) KQIANQFNKAISQIQESLT SEQ ID NO: 26 Consenso (1123) KIIANAFNNAIGNIQEGF SEQ ID NO: 27 Esta secuencia de consenso se usó para identificar una secuencia de fusión en NadA (SEQ ID NOs: 1 y 2) : 179 KH-AEAFNDIADSLDETNT 196 SEQ ID NO: 28 I I lll::: : I I 2 KIIANAFNNAIGNIQEGLT 19 SEQ ID NO: 34 Tomando en cuenta la similitud con la secuencia de fusión del SARS y la anfipaticidad de la secuencia helicoidal de una secuencia de péptidos, entonces las secuencias SEQ ID NO: 28 y SEQ ID NO: 3 pueden identificarse como secuencias de fusión. En combinación estas dos secuencias dan SEQ ID NO: 33. Una proyección de rueda helicoidal de E2 (residuos 903-921) y NadA (residuos 181-199) se muestra en la figura 2. Las caras hidrofóbicas se ven claramente (residuos en cuadro) . Las secuencias de repetición septena fueron identificadas en NadA (SEQ ID NO: 1) como se muestra en la figura 1. La secuencia HRl mapea a los residuos 117-152 de SEQ ID NO: 1, mostrando una repetición septena abcdefg regular con residuos apropiados en las posiciones a y d. La secuencia HRl en SEQ ID NO: 2 difiere ligeramente al tener una sustitución Ala/Glu (compárense SEQ ID NOs: 5 y 6; SEQ ID NO: 4). Dos secuencias HR2 posibles se muestran, la primera (HR2a) siendo más corta que la segunda (HR2b) . La secuencia HR2a mapea a los residuos 261-275 de SEQ ID NO: 1, y HR2b mapea a los residuos 278-299. La secuencia HR2a está en una región en donde las alineaciones de los alelos 1 y 3 de NadA muestran un espacio claro, y esto se refleja en los términos C de las secuencias HR2a (compárense SEQ ID NOs: 7 y 8). Las secuencias HR2b están hacia el extremo 3' de la inserción y están más estrechamente emparentadas (compárense SEQ ID NOs: 10 y 11; SEQ ID NO: 9) . Péptidos HRl y HR2 de NadA Con base en la sorprendente relación entre NadA meningocócica y proteína spike del coronavirus del SARS (véase arriba) , sobre la eficacia recientemente identificada de los péptidos HR2 para prevenir la entrada de coronavirus {42}, y sobre la eficacia conocida de los péptidos HR2 para prevenir la actividad de VIH (es decir, FUZEON™) , las secuencias HRl y HR2 de NadA fueron sintetizadas químicamente como oligopéptidos para probarse contra meningococo. Las secuencias se tomaron del alelo "3" de NadA (de SEQ ID NO: 2). El oligopéptido HRl es SEQ ID NO: 29. El oligopéptido HR2a es SEQ ID NO: 30. el oligopéptido HR2b es SEQ ID NO: 31. Cada una de estas secuencia se basa en la secuencia "central" (SEQ ID NOs: 6, 8 y 11) extendida tres aminoácidos en las direcciones del término N y C. Un oligopéptido a base del péptido de fusión también fue preparado (SEQ ID NO: 32) . Péptidos HRl y HR2 de HadA La secuencia HadA de longitud completa del clon F3031 de BPF se da como SEQ ID NO: 35. El análisis de la secuencia revela una secuencia líder (aminoácidos 1-26), una posible secuencia de fusión (51-67; SEQ ID NO: 36), una secuencia HRl (71-21; SEQ ID NO: 37), una secuencia HR2 (120-183; SEQ ID NO: 38) y un ancla de membrana (186-256). Estas características se indican abajo, con el subrayado mostrando (i) residuos hidrofóbicos en la secuencia de fusión o (ii) residuos de repetición septena en HRl y HR2 : i MKRNIÍLKQSVIAVIÍI GGTTVSNYAIÍAQAQAQAQVKKDELSELKKQVKEMD 51 AAIDGI--iDDNIAYEA-SrVDAKLDQHSAAIiGRHTNRI.NlTI.KTIAEKAKGDS S 101 EALDKIEALEEQNDEFLADITALEEGVDGLDDDITGIQDNISDIEDDINQ 151 SADIATNTAAIATHTQR^NI£>NRV^^ 201 NVGKLNLTAAVGGYKSQTAVAVGTGYRYNENI AAKAGVAFTHGGSAT YNV 251 GV FEW* Un modelo para el cambio de conformación dependiente de pH de la hemaglutinina del virus de la influenza se muestra en la figura 3A, y la figura 3B muestra un modelo que ilustra cómo un cambio en conformación equivalente en HadA (y por analogía NadA) podría estar implicado en la adhesión. Secuencias sintéticas SEQ ID NO: 39 y SEQ ID NO: 40 fueron preparadas para estos estudios de fusión. Se entenderá que la invención ha sido descrita a manera de ejemplo únicamente _ y que pueden hacerse modificaciones permaneciendo aún dentro del alcance y espíritu de la invención. Referencias (los contenidos de las cuales se incorporan en la presente a manera de referencia) {1} Bethell y Pollard (2002) Expert Rev Vaccines 1:75-84. {2} Patente de E.U.A. No. 5,464,933. {3} Comanducci et al . , (2002) J Exp Med 195:1445- 1454. {4} Tetteline et al . , (2000) Science 287:1809-1815. {5} WO2004/113371. {6} Smoot et al . (2002) Infect Immun 70:2694-99. {7} Bodanszky (1993) Principies of Peptide Synthesis (ISBN: 0387564314) . {8} Fields et al . (1997) Methods in Enzymology 289 : Solid-Phase Peptide Synthesis . ISBN: 0121821900. {9} Chan y White (2000) Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis . ISBN: 0199637245. {10} Kull ann (1987) Enzymatic Peptide Synthesis . ISBN: 0849368413. {11} Ibba (1996) J Biotechnol Genet Eng Rev 13:197-216. {12} Kazmierski (1999) Peptidomimetics Protocols .

ISBN: 0896035174. {13} Kirshenbaum et al . (1999) Curr Opin Struct Biol 9:530-5. {14} Abell (1999) Advances in Amino Acid Mime tics and Peptidomimeti cs . ISBN: 0762306149. {15} Patente de E.U.A. No. 5,331,573 (Balaj i'). {16} Goodman et al . (2001) Biopolymers 60:229-245. {17} Hruby y Balse (2000) Curr Med Chem 7:945-970. {18} Ribka y Rich (1998) Curr Opin Chem Biol 2:441-452 {19} Chakraborty et al . (2002) Curr Med Chem 9:421- 435 {20} Computer-Assisted Lead Finding and Optimization (eds. Testra & Folkers, 1997). {21} Disponible de Molecular Simulations Die (http://www.msi.com/) . {22} Davic y Lawrence (1992) Proteins 12:31-41. {23} Caflish et al . (1993) J. Med. Chem . 36:2142-67 {24} Eisen et al . (1994) Proteins : Str. Funct . Genet . 19:199-221. {25} Bóhm (1992) J. Comp . Aided Molec . Design 6:61-78. {26} Gehlhaar et al . (1995) J. Med . Chem. 38:466-72. {27} Moon y Howe (1991) Proteins : Str. Fund. Genet . 11:314-328. {28} Disponible de http : / /chem. leeds . ac . uk/lCAMS/SPROU .html . {29} Lauri y Bartlett (1994) Comp . Aided Mol . Design 8:51-66. {30} Disponible de Tripos Inc (http://www.tripos.com) . {31} Rotstein et al . (1993) J. Med. Chem . 36:1700. {32} Lai (1996), J. Chem . Inf . Comput . Sci . 36:1187-1194. {33} Gennaro (2000) Remington : The Science and Practice of Pharmacy. 20va ed. , ISBN: 0683306472 {34} Almeida y Alpar (1996) J. Drug Targeting 3:455-467. {35} W099/27961. {36} WO02/074244. {37} WO02/064162. {38} WO03/028760. {39} Current Protocols in Molecular Biology (P.M. Ausubel et al . , eds., 1987) Suplemento 30. {40} Smith y Waterman (1981) Adv. Appl . Math . 1: 482-489. {41} WO 03/010194. {42} Bosch et al . (2003) J. Virol 77:8801-11. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (22)

1. REIVINDICACIONES
2. Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: 1. Un compuesto caracterizado porque puede unirse a la secuencia o secuencias de repetición septena HRl y/o HR2 de la adhesina NadA sobre la superficie de un meningococo, inhibiendo de esta manera la capacidad del meningococo ya sea para infectar un organismo hospedero o para difundir una infección existente. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, con referencia a la numeración de SEQ ID NO: 1, la secuencia HRl es los residuos 117-152 y la secuencia HR2 es los residuos 261-299.
3. 3. Un compuesto caracterizado porque puede unirse a la secuencia o secuencias de repetición septena HRl y/o HR2 de la adhesina NadA sobre la superficie de una bacteria haemophilus, inhibiendo de esta manera la capacidad de la haemophilus ya sea para infectar un organismo huésped o para difundir una infección existente.
4. 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque, con referencia a la numeración de SEQ ID NO: 35, la secuencia HRl es los residuos 71-91 y la secuencia HR2 es los residuos 120-183.
5. 5. El compuesto de conformidad con cualquier reivindicación anterior, caracterizado porque es un oligopéptido.
6. 6. El oligopéptido de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque consiste en no más de 50 aminoácidos.
7. 7. El oligopéptido de conformidad con la reivindicación 5 o la reivindicación 6, caracterizado porque comprende un fragmento de cinco o más aminoácidos consecutivos de una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO : 39 y SEQ ID NO: 40.
8. 8. El oligopéptido de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque existe siempre y cuando el fragmento incluya m sustituciones de aminoácido cuando se compare con el identificador de secuencia (SEQ ID) , en donde m es 1 o más .
9. 9. El oligopéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, caracterizado porque comprende una o más secuencias de aminoácidos SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID O: 37 y SEQ ID NO: 38.
10. 10. Un polipéptido caracterizado porque tiene la fórmula NH2-A- (B-C) n-D-COOH, en donde: n es un entero entre 1 y 5, -A- es una secuencia de término N opcional que consiste en 1 o más aminoácidos; (cada) -B- es una secuencia de aminoácidos que comprende un fragmento de 5 o más aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 y/o SEQ ID NO: 17; (cada) -C- es una secuencia enlazadora opcional que consiste en 1 o más aminoácidos y -D- es una secuencia del término C opcional que consiste en 1 o más aminoácidos.
11. 11. Un compuesto peptidomimético del oligopéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 3 a 9, caracterizado porque tiene actividad anti-meningocócica y/o anti- ha emophi 1 us .
12. 12. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende (a) el compuesto de conformidad con cualquier reivindicación anterior y (b) un vehículo farmacéutico.
13. 13. Un método para tratar un paciente que sufra de una infección meningocócica o por haemophilus , caracterizado porque comprende administrar al paciente la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 12.
14. 14. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque es para usarse como un medicamento.
15. 15. Uso del compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en la preparación de un medicamento para tratar un paciente.
16. 16. Una proteína NadA mutante, caracterizada porque carece de una o más de las secuencias HRl, HR2 o de fusión.
17. 17. La proteína NadA mutante de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada porque no contiene una o más de las siguientes secuencias de aminoácidos: (i) una secuencia que tiene al menos 50% de identidad con SEQ ID NO: 3; (ii) una secuencia que tiene al menos 50% de identidad con SEQ ID NO: 5; (iii) una secuencia que tiene al menos 50% de identidad con SEQ ID NO: 7; (iv) una secuencia que tiene al menos 50% de identidad con SEQ ID NO: 10.
18. 18. El mutante de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque las secuencias de aminoácidos (i), (ii) , (iii) y (iv) tienen cada una al menos 10 aminoácidos de largo.
19. 19. La proteína NadA mutante de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada porque comprende la secuencia de aminoácidos -A-B-C-D-E-F-G-H-I-, en donde: -A- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos 50% de identidad de secuencia con los aminoácidos 26-116 de SEQ ID NO: 1; -B- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos 50% de identidad de secuencia con los aminoácidos 117-152 de SEQ ID NO: 1; -C-es una secuencia de aminoácidos con por lo menos 50% de identidad de secuencia con los aminoácidos 153-180 de SEQ ID NO: 1; -D es una secuencia de aminoácidos con por lo menos 50% de identidad de secuencia con los aminoácidos 181-199 de SEQ ID NO: 1; -E- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos 50% de identidad de secuencia con los aminoácidos 200-260 de SEQ ID NO: 1; -F- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos 50% de identidad de secuencia con los aminoácidos 261-275 de SEQ ID NO: 1; -G- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos 50% de identidad de secuencia con los aminoácidos 276-277 de SEQ ID NO: 1; -H- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos 50% de identidad de secuencia con los aminoácidos 278-299 de SEQ ID NO: 1; -I- es una secuencia de aminoácidos con por lo menos 50% de identidad de secuencia con los aminoácidos 300-364 de SEQ ID NO: 1, siempre que por lo menos uno de -B- , -D-, -F- o -H- no esté presente en dicha proteína.
20. 20. Una proteína HadA mutante, caracterizada porque carece de una o más de las secuencias HRl, HR2 o de fusión.
21. 21. Ácido nucleico caracterizado porque codifica para la proteína mutante de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 20.
22. 22. Una bacteria caracterizada porque expresa el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 21.