MD705Z - Process for microclonal propagation of grapevine - Google Patents
Process for microclonal propagation of grapevine Download PDFInfo
- Publication number
- MD705Z MD705Z MDS20130071A MDS20130071A MD705Z MD 705 Z MD705 Z MD 705Z MD S20130071 A MDS20130071 A MD S20130071A MD S20130071 A MDS20130071 A MD S20130071A MD 705 Z MD705 Z MD 705Z
- Authority
- MD
- Moldova
- Prior art keywords
- transferred
- murashige
- regenerants
- skoog
- shoots
- Prior art date
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
- Y02P60/14—Measures for saving energy, e.g. in green houses
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Invenţia se referă la biotehnologiile agricole şi poate fi utilizată pentru multiplicarea microclonală a viţei-de-vie. The invention relates to agricultural biotechnologies and can be used for microclonal multiplication of grapevines.
Recunoscând cerinţele de certificare a materialului săditor la viţa-de-vie, metodele de multiplicare microclonală a plantulelor de viţă-de-vie capătă o aplicabilitate în practică. Tehnica dată este justificată prin eficienţă şi beneficiul economic. Multiplicarea microclonală se aplică în propagarea rapidă a materialului devirusat sau a formelor reprezentate prin exemplare unice, permiţând crearea într-un interval scurt de timp a unui număr suficient de plantule pentru crearea de plantaţii-mamă. Recognizing the requirements for certification of grapevine planting material, methods of microclonal multiplication of grapevine seedlings gain practical applicability. This technique is justified by its efficiency and economic benefit. Microclonal multiplication is applied in the rapid propagation of virus-free material or forms represented by single specimens, allowing the creation in a short time of a sufficient number of seedlings for the creation of mother plantations.
Este cunoscut procedeul de multiplicare microclonală a plantulelor de viţă-de-vie, care cuprinde şase etape: 1- selectarea lăstarului, 2- inocularea in vitro a apexului, 3- obţinerea regeneranţilor, 4- subcultivarea şi microbutăşirea in vitro, 5- înrădăcinarea regeneranţilor, 6- adaptarea ex vitro şi transferul în substrat de sol a plantulelor. Conform celei mai apropiate soluţii pentru multiplicarea in vitro a viţei-de-vie se selectează lăstari în perioada iunie-iulie, care se spală în soluţie apoasă de 0,1% Tween 20 şi se sterilizează în soluţie de 1,2% hipoclorit de sodiu timp de 10 min, după care se spală şi se clătesc în apă sterilă; apexurile cu mărimea de 0,5…1 mm (ce conţin 2…4 frunzuliţe primordiale) se excizează şi se inoculează pe mediul nutritiv Murashige- Skoog (1962) suplimentat cu 5µM 6-benzilaminopurină (BAP), 0,5µM acid naftalinacetic (ANA); la 6…8 săptămâni de cultivare regeneranţii ce deţin 3…4 internoduri (cu o lungime de 1,5 cm) sunt butăşiţi, iar fiecare fragment este subcultivat pe durata a 3…6 săptămâni până la formarea de noi regeneranţi, procedura fiind repetată până la 6 cicluri de subcultivare; pentru inducerea rizogenezei regeneranţii obţinuţi sunt transferaţi pe mediul nutritiv Murashige-Skoog suplimentat cu 0,4 µM ANA, iar după formarea rădăcinilor, plantulele se transferă în substrat autoclavat constituit din sol:turbă [1]. The microclonal multiplication process of grapevine seedlings is known, which includes six stages: 1- selection of the shoot, 2- in vitro inoculation of the apex, 3- obtaining the regenerants, 4- subculturing and microcutting in vitro, 5- rooting of the regenerants, 6- ex vitro adaptation and transfer of the seedlings to the soil substrate. According to the closest solution for in vitro multiplication of grapevine, shoots are selected in the period June-July, which are washed in an aqueous solution of 0.1% Tween 20 and sterilized in a solution of 1.2% sodium hypochlorite for 10 min, after which they are washed and rinsed in sterile water; the apexes with a size of 0.5…1 mm (containing 2…4 primordial leaflets) are excised and inoculated on Murashige-Skoog (1962) nutrient medium supplemented with 5 µM 6-benzylaminopurine (BAP), 0.5 µM naphthaleneacetic acid (ANA); at 6…8 weeks of cultivation, the regenerants with 3…4 internodes (with a length of 1.5 cm) are cut, and each fragment is subcultured for 3…6 weeks until the formation of new regenerants, the procedure being repeated up to 6 subculture cycles; to induce rhizogenesis, the regenerants obtained are transferred to Murashige-Skoog nutrient medium supplemented with 0.4 µM ANA, and after the formation of roots, the plantlets are transferred to an autoclaved substrate consisting of soil:peat [1].
Însă acest procedeu are şi dezavantaje, determinate de rata de multiplicare redusă după primele 3…4 pasaje. Ponderea mai sporită de reproducere a microbutaşilor se atestă după pasajul 6, care corespunde duratei de cca 333 zile de cultivare in vitro, ceea ce este urmat de cheltuieli majore suplimentare, totodată există riscul inducerii variaţiilor somaclonale generate pe durata îndelungată de subcultivare în condiţii in vitro. However, this procedure also has disadvantages, determined by the reduced multiplication rate after the first 3…4 passages. The higher reproduction rate of microcuttings is attested after passage 6, which corresponds to a duration of about 333 days of in vitro cultivation, which is followed by major additional expenses, at the same time there is the risk of inducing somaclonal variations generated during the long period of subculturing under in vitro conditions.
Problema pe care o rezolvă invenţia constă în mărirea ratei de plantule obţinute de la o clonă după primele pasaje de cultivare in vitro (3…4 subcultivări). The problem that the invention solves consists in increasing the rate of seedlings obtained from a clone after the first in vitro cultivation passages (3...4 subcultures).
Esenţa procedeului nou de majorare a ratei de plantule de viţă-de-vie obţinute de la o microclonă constă în aceea că se selectează lăstari cu lungimea de 6…10 cm, se spală, se clătesc în apă curgătoare, se sterilizează, se excizează apexuri cu mărimea de 0,5…1,0 mm, ce conţin meristeme cu 2…3 frunzuliţe primordiale, care se inoculează în mediul nutritiv Murashige & Skoog suplimentat cu 5 µM de 6-benzilaminopurină, 0,5 µM de acid naftalinacetic, 2% de zaharoză, 0,7% de agar, având pH-ul 5,7; după 2…3 săptămâni de la inoculare apexurile se iradiază în regim periodic, timp de 20…25 min, cu unde milimetrice de intensitate joasă cu lungimea de undă de 5,6 mm şi frecvenţa de 53,8 GHz, după ce regeneranţii proliferează şi se dezvoltă ei se transferă pe mediul Murashige & Skoog, se subcultivă pe parcursul a 6…7 cicluri şi se efectuează microbutăşirea lor in vitro, regeneranţii cu 3…4 internoduri se transferă pe mediul Murashige-Skoog suplimentat cu 0,4 µM de acid naftalinacetic, apoi regeneranţii cu sistem radicular bine dezvoltat se transferă în amestec de sol şi turbă, iar ulterior pe substrat de sol. The essence of the new procedure for increasing the rate of grapevine seedlings obtained from a microclone consists in selecting shoots with a length of 6…10 cm, washing them, rinsing them in running water, sterilizing them, excising apices with a size of 0.5…1.0 mm, containing meristems with 2…3 primordial leaflets, which are inoculated into the Murashige & Skoog nutrient medium supplemented with 5 µM of 6-benzylaminopurine, 0.5 µM of naphthaleneacetic acid, 2% of sucrose, 0.7% of agar, having a pH of 5.7; after 2…3 weeks from inoculation, the apexes are irradiated periodically, for 20…25 min, with low-intensity millimeter waves with a wavelength of 5.6 mm and a frequency of 53.8 GHz, after the regenerants proliferate and develop, they are transferred to Murashige & Skoog medium, subcultured for 6…7 cycles and their in vitro microcutting is performed, regenerants with 3…4 internodes are transferred to Murashige-Skoog medium supplemented with 0.4 µM of naphthaleneacetic acid, then regenerants with a well-developed root system are transferred to a mixture of soil and peat, and subsequently to a soil substrate.
Noutatea invenţiei constă în utilizarea undelor milimetrice de intensitate joasă pentru mărirea ratei de multiplicare a plantelor de viţă-de-vie derivate de la o clonă. The novelty of the invention consists in the use of low-intensity millimeter waves to increase the multiplication rate of grapevine plants derived from a clone.
Rezultatul invenţiei rezidă în posibilitatea obţinerii în urma a 3 subcultivări conform invenţiei a 321 lăstari, iar conform celei mai apropiate soluţii se obţin 120 lăstari, ceea ce denotă sporirea ratei de microbutăşire de 1,53…3,26 ori pentru soiurile analizate ale speciei Vitis vinifera, precum şi mărirea numărului de plantule într-un interval de timp mai scurt, astfel reducându-se cheltuielile aferente acestei proceduri. The result of the invention lies in the possibility of obtaining 321 shoots after 3 subcultivations according to the invention, and according to the closest solution 120 shoots are obtained, which denotes an increase in the microcutting rate of 1.53…3.26 times for the analyzed varieties of the Vitis vinifera species, as well as an increase in the number of seedlings in a shorter time interval, thus reducing the expenses related to this procedure.
Exemplu de realizare a invenţiei Example of embodiment of the invention
Pentru micropropagarea in vitro au fost selectate 6 genotipuri de viţă-de-vie de interes ameliorativ aflate în Colecţia Institutului Ştiinţifico-Practic de Horticultură şi Tehnologii Alimentare: 1-15-15, 1-5-71, Apiren roz, Apiren extratimpuriu, Gen Moldova şi Prezentabil. For in vitro micropropagation, 6 grapevine genotypes of amelioration interest were selected from the Collection of the Scientific-Practical Institute of Horticulture and Food Technologies: 1-15-15, 1-5-71, Apiren roz, Apiren extratimpuriu, Gen Moldova and Prezentabil.
De la tufele genotipurilor de viţă-de-vie selectate în perioada creşterii intensive (iunie-iulie) au fost preluaţi lăstări (6…10 cm), care au fost spălaţi în soluţie apoasă de 0,1% Tween 20 şi clătiţi în apă curgătoare timp de 15 min. Shoots (6…10 cm) were taken from the bushes of selected grapevine genotypes during the intensive growth period (June-July), which were washed in an aqueous solution of 0.1% Tween 20 and rinsed in running water for 15 min.
Pentru aseptizare, fragmentele de lăstari au fost plasate pentru 2…3 s în etanol de 70% şi ulterior trecute în soluţie de hipoclorit de sodiu de 5,2% pentru 5…7 min, apoi clătite în 3 băi de apă sterilă, a câte 5 min fiecare, pentru înlăturarea totală a clorului. For asepsis, the shoot fragments were placed for 2…3 s in 70% ethanol and subsequently placed in 5.2% sodium hypochlorite solution for 5…7 min, then rinsed in 3 sterile water baths, 5 min each, for total removal of chlorine.
Toate operaţiunile de sterilizare a lăstarilor, precum şi excizarea apexurilor cu mărimea de 0,5…1 mm (ce conţin meristeme cu 2…3 frunzuliţe primordiale) şi inocularea lor pe medii de cultură s-au desfăşurat în condiţii aseptice, în interiorul hotei cu flux laminar de aer steril. Vitrocultura a fost iniţiată în eprubete, conţinând câte 2 ml de mediul nutritiv Murashige-Skoog (1962) suplimentat cu BAP (5 µM), ANA (0,5 µM), 2% zaharoză şi 0,7% agar, care s-a dovedit a fi optim pentru toate genotipurile analizate (tab. 1). Valoarea pH-ului mediului nutritiv a fost ajustată înainte de autoclavare la 5,7. Pentru inducerea regenerării eprubetele au fost incubate în condiţii controlate cu o fotoperioadă de 16 ore-lumină, la temperatura de 27°C şi iluminarea de 2000 lx. La 2…3 săptămâni de la inoculare, după stabilirea răspunsului pozitiv apexurile au fost iradiate timp de 20…25 min cu unde milimetrice de intensitate joasă cu lungimea de undă λ=5,6 mm şi frecvenţa de 53,8 GHz în regim periodic emise de dispozitivul „Iavi-1” (densitatea fluxului 1...10 mW/cm2). După tratare apexurile au fost replasate în camera de cultivare în aceleaşi condiţii controlate. All operations of shoot sterilization, as well as excision of the 0.5…1 mm apexes (containing meristems with 2…3 primordial leaflets) and their inoculation on culture media were carried out under aseptic conditions, inside the hood with a laminar flow of sterile air. Vitroculture was initiated in test tubes, containing 2 ml of Murashige-Skoog (1962) nutrient medium supplemented with BAP (5 µM), ANA (0.5 µM), 2% sucrose and 0.7% agar, which proved to be optimal for all genotypes analyzed (tab. 1). The pH value of the nutrient medium was adjusted before autoclaving to 5.7. To induce regeneration, the test tubes were incubated under controlled conditions with a photoperiod of 16 hours-light, at a temperature of 27°C and illumination of 2000 lx. 2...3 weeks after inoculation, after establishing the positive response, the apices were irradiated for 20...25 min with low-intensity millimeter waves with a wavelength of λ=5.6 mm and a frequency of 53.8 GHz in a periodic mode emitted by the "Iavi-1" device (flux density 1...10 mW/cm2). After treatment, the apices were placed back in the cultivation chamber under the same controlled conditions.
Schema multiplicării microclonale a viţei-de-vie este prezentată în figură, unde: 1 - selectarea lăstarului, 2 - inocularea in vitro a apexului, 3 - iradierea cu unde milimetrice, 4 - obţinerea regeneranţilor, 5 - subcultivarea şi microbutăşirea in vitro, 6 - înrădăcinarea regeneranţilor, 7 - adaptarea ex vitro şi transferul în substrat de sol al plantelor. The scheme of microclonal multiplication of grapevine is presented in the figure, where: 1 - shoot selection, 2 - in vitro inoculation of the apex, 3 - irradiation with millimeter waves, 4 - obtaining regenerants, 5 - subculturing and in vitro microcuttings, 6 - rooting of regenerants, 7 - ex vitro adaptation and transfer of plants to soil substrate.
În primele 25…35 zile de la inoculare s-a atestat proliferarea şi dezvoltarea regeneranţilor, care ulterior au fost transferaţi pe medii nutritive pentru multiplicare (tabelul 1) în vase Magenta ce conţineau 10…12 ml mediu. La fiecare 4…5 săptămâni lăstăraşii ce deţineau 3…4 internoduri au fost butăşiţi şi inoculaţi pe medii nutritive proaspete pentru multiplicare, fiind realizate până la 6…7 cicluri de subcultivare. Plantulele cu 3…4 internoduri rezultate din fiecare ciclu de subcultivare au fost transferate pentru rizogeneză pe mediul Murashige-Skoog (1962) suplimentat cu ANA (0,4 µM). La 6…7 zile după pasajul pe acest substrat regeneranţii care prezentau un sistem radicular cu perişori absorbanţi bine dezvoltaţi au fost transferaţi în vase de plastic de 500 ml cu amestec de sol:turbă (1:3). Vasele cu regeneranţi au fost acoperite cu peliculă de polietilenă şi transferate în camera de cultivare la 25…27°C şi la iluminarea de 2000 lx cu o fotoperioadă de 16 ore-lumină. La apariţia a 2…3 frunzuliţe noi plantulele au fost transferate în substrat de sol conform tehnicilor standarde. In the first 25…35 days after inoculation, the proliferation and development of the regenerants was attested, which were subsequently transferred to nutrient media for multiplication (table 1) in Magenta pots containing 10…12 ml of medium. Every 4…5 weeks, the shoots that had 3…4 internodes were cut and inoculated onto fresh nutrient media for multiplication, being carried out up to 6…7 subcultivation cycles. The seedlings with 3…4 internodes resulting from each subcultivation cycle were transferred for rhizogenesis onto Murashige-Skoog medium (1962) supplemented with ANA (0.4 µM). 6…7 days after passage on this substrate, the regenerants that presented a root system with well-developed absorbent hairs were transferred into 500 ml plastic pots with a soil:peat mixture (1:3). The pots with regenerants were covered with polyethylene film and transferred to the cultivation room at 25…27°C and 2000 lx illumination with a photoperiod of 16 hours of light. When 2…3 new leaves appeared, the seedlings were transferred to soil substrate according to standard techniques.
Tabelul 1 Table 1
Compoziţia mediului nutritiv folosit pentru proliferarea in vitro a plantulelor de viţă-de-vie Composition of the nutrient medium used for in vitro proliferation of grapevine seedlings
Nr MS (Murashige-Skoog, 1962) Componentele mediului Cantitatea (mg/l) Cantitatea (µM) Macroelemente 1 KNO3 1900 18,8 2 NH4NO3 1650 20,6 3 CaCl2 * 2H2O 440 3,0 4 MgSO4 * H2O 370 1,5 5 KH2PO4 170 1,25 6 FeSO4 * 7H2O 28 0,1 7 Na2EDTA 37 0,1 Microelemente 8 MnSO4 * 4H2O 22,3 100,0 9 H3BO3 6,2 100,0 10 ZnSO4 * 7H2O 8,6 30,0 11 KI 0,83 5,0 12 Na2MoO4 * 2H2O 0,25 1,0 13 CuSO4 * 5 H2O 0,025 0,1 14 CoCl2 * 6H2O 0,025 0,1 Vitamine 15 Mioinozitol 100 55,5 16 Tiamină (B1) 0,5 3 17 Piridoxină (B6) 0,5 5 18 Ac. nicotinic (PP) 0,5 8 Alţi factori 19 Zaharoză 2% 20 Agar 0,7% pH 5,7No. MS (Murashige-Skoog, 1962) Medium components Amount (mg/l) Amount (µM) Macroelements 1 KNO3 1900 18.8 2 NH4NO3 1650 20.6 3 CaCl2 * 2H2O 440 3.0 4 MgSO4 * H2O 370 1.5 5 KH2PO4 170 1.25 6 FeSO4 * 7H2O 28 0.1 7 Na2EDTA 37 0.1 Microelements 8 MnSO4 * 4H2O 22.3 100.0 9 H3BO3 6.2 100.0 10 ZnSO4 * 7H2O 8.6 30.0 11 KI 0.83 5.0 12 Na2MoO4 * 2H2O 0.25 1.0 13 CuSO4 * 5 H2O 0.025 0.1 14 CoCl2 * 6H2O 0.025 0.1 Vitamins 15 Myoinositol 100 55.5 16 Thiamine (B1) 0.5 3 17 Pyridoxine (B6) 0.5 5 18 Nicotinic acid (PP) 0.5 8 Other factors 19 Sucrose 2% 20 Agar 0.7% pH 5.7
Conform rezultatelor obţinute, aplicarea schemei de multiplicare cu utilizarea undelor milimetrice, comparativ cu cea de referinţă, a condus la reducerea nesemnificativă a numărului de explante care au supravieţuit sau la majorarea acestora (tab. 2). Pentru cele 6 genotipuri analizate procentul explantelor ce au format lăstăraşi a variat în varianta de referinţă de la 8,39 la Apiren extratimpuriu până la 46,04 pentru genotipul 1-1-15. Potrivit datelor expuse în sursa de referinţă, reacţia de răspuns a explantelor la condiţiile de cultivare in vitro şi numărul de lăstăraşi formaţi sunt dependenţi prioritar de genotip, ceea ce este confirmat şi de rezultatele obţinute. According to the results obtained, the application of the multiplication scheme using millimeter waves, compared to the reference one, led to a insignificant reduction in the number of explants that survived or to their increase (tab. 2). For the 6 genotypes analyzed, the percentage of explants that formed shoots varied in the reference variant from 8.39 for Apiren extratimpuriu to 46.04 for the 1-1-15 genotype. According to the data presented in the reference source, the response of explants to in vitro cultivation conditions and the number of shoots formed are primarily dependent on the genotype, which is also confirmed by the results obtained.
Tabelul 2 Table 2
Proliferarea lăstăraşilor de viţă-de-vie în condiţii in vitro Proliferation of grapevine shoots under in vitro conditions
Genotip Varianta experimentală Numărul de apexuri inoculate Explante supravieţuite (număr) Explante cu lăstăraşi (%) Număr de lăstăraşi/explant 1-15-15 martor 21 19 46,04 5,98 unde milimetrice 18 17 75,00 9,88 1-5-71 martor 16 14 38,89 5,67 unde milimetrice 12 11 52,78 27,83 Gen Moldova martor 40 37 23,99 2,64 unde milimetrice 31 29 55,83 3,92 Apiren Roz martor 13 12 16,67 1,00 unde milimetrice 13 12 25,00 2,75 Apiren extratimpuriu martor 25 24 8,39 2,00 unde milimetrice 19 18 18,83 9,75 Prezentabil martor 9 8 25,00 1,00 unde milimetrice 14 14 27,50 3,50Genotype Experimental variant Number of inoculated apices Surviving explants (number) Explants with shoots (%) Number of shoots/explant 1-15-15 control 21 19 46.04 5.98 millimeter waves 18 17 75.00 9.88 1-5-71 control 16 14 38.89 5.67 millimeter waves 12 11 52.78 27.83 Gen Moldova control 40 37 23.99 2.64 millimeter waves 31 29 55.83 3.92 Apiren Roz control 13 12 16.67 1.00 millimeter waves 13 12 25.00 2.75 Apiren extratimpuriu control 25 24 8.39 2.00 millimeter waves 19 18 18.83 9.75 Presentable blank 9 8 25.00 1.00 millimeter waves 14 14 27.50 3.50
Iradierea apexurilor a contribuit la sporirea semnificativă a cotei explantelor cu lăstăraşi. Cea mai mare creştere a fost atestată la soiul Apiren extratimpuriu, fiind remarcată o sporire de 2,24 ori, iar cea mai mică influenţă a fost înregistrată la soiul Prezentabil (o creştere cu 10%). Irradiation of the apexes contributed to a significant increase in the proportion of explants with shoots. The highest increase was observed in the Apiren extratimpuriu variety, with a 2.24-fold increase, and the lowest influence was recorded in the Prezentabil variety (an increase of 10%).
De asemenea, la toate cele 6 genotipuri de viţă-de-vie cercetate a fost constatată o majorare semnificativă a numărului de lăstăraşi derivaţi de la un explant. Potenţa creşterii acestui indice a fost cuprinsă între 1,48 pentru soiul Gen Moldova şi 4,91 la genotipul 1-5-71. Also, a significant increase in the number of shoots derived from an explant was observed in all 6 grapevine genotypes studied. The growth potential of this index ranged from 1.48 for the Gen Moldova variety to 4.91 for the 1-5-71 genotype.
Factorul aplicat conform invenţiei (undele milimetrice de intensitate joasă) deţine o putere de influenţă de 11,4 %, ceea ce corespunde unor diferenţe semnificative (tab. 3). The factor applied according to the invention (low intensity millimeter waves) has an influence power of 11.4%, which corresponds to significant differences (tab. 3).
Tabelul 3 Table 3
Analiza variaţiei numărului de lăstăraşi per explant Analysis of variation in the number of shoots per explant
Sursa variaţiei Suma pătratelor Grade de libertate Dispersia Test F Puterea de influenţă, % Genotip (A) 930,348 5 186,07 3,90** 30,87 Unde milimetrice (B) 343,904 1 343,904 7,20* 11,41 Interacţiunea AB 501,2 5 100,24 2,10 16,63 Rezidual 1242,03 26 47,7704 Total 3014,04 37 Source of variation Sum of squares Degrees of freedom Dispersion F-test Influence strength, % Genotype (A) 930.348 5 186.07 3.90** 30.87 Millimeter waves (B) 343.904 1 343.904 7.20* 11.41 AB interaction 501.2 5 100.24 2.10 16.63 Residual 1242.03 26 47.7704 Total 3014.04 37
**; *- diferenţe semnificative pentru P≤ 0,01 şi P≤ 0,05 **; *- significant differences for P≤ 0.01 and P≤ 0.05
Deosebiri semnificative între rezultatele obţinute conform celei mai apropiate soluţii şi invenţiei propuse se constată între numărul de lăstăraşi per explant în corespundere cu ciclul de subcultivări (tab. 4). Significant differences between the results obtained according to the closest solution and the proposed invention are found between the number of shoots per explant in accordance with the subcultivation cycle (tab. 4).
Dacă la martor potenţa de multiplicare se atestă după ciclul trei de subcultivare în condiţii in vitro, iradierea cu unde de intensitate joasă a explantelor a dus la obţinerea unui spor al numărului de lăstăraşi după prima subcultivare, eficienţa de multiplicare fiind cea mai mare după ciclul 2…3 de subcultivare. If in the control the multiplication potency is attested after the third cycle of subcultivation under in vitro conditions, irradiation with low intensity waves of the explants led to an increase in the number of shoots after the first subcultivation, the multiplication efficiency being the highest after the 2nd...3rd cycle of subcultivation.
Accelerarea multiplicării este însoţită de asemenea de o rată majoră de reproducere microclonală, ca rezultat se obţine un număr sporit de lăstăraşi într-un interval de timp mai redus. The acceleration of multiplication is also accompanied by a greater rate of microclonal reproduction, resulting in an increased number of shoots in a shorter time frame.
Reducerea duratei de subcultivare în condiţii in vitro este însoţită de diminuarea semnificativă a cheltuielilor legate de costul componentelor mediului nutritiv de cultivare, condiţiile de întreţinere, numărul de zile-om lucrătoare, totodată preîntâmpină riscul inducerii variaţiilor somaclonale şi vitrifierii culturii, ceea ce poate fi remarcat pe măsura creşterii duratei de aflare în condiţii in vitro. Reducing the duration of subculturing in vitro conditions is accompanied by a significant reduction in expenses related to the cost of the components of the nutrient cultivation medium, maintenance conditions, the number of working man-days, and also prevents the risk of inducing somaclonal variations and vitrification of the culture, which can be noted as the duration of exposure in vitro conditions increases.
Tabelul 4 Table 4
Proliferarea lăstăraşilor cu 3 şi mai multe internoduri în corespundere cu ciclul subcultivării în condiţii in vitro Proliferation of shoots with 3 and more internodes in accordance with the subcultivation cycle under in vitro conditions
Ciclul subcultivării Numărul de lăstăraşi per explant Gen Moldova 1-5-71 1-15-15 martor unde milimetrice martor unde milimetrice martor unde milimetrice Prima multiplicare - 1 - - 0,67 1 I subcultivare 0 4 0 12,33 0 8 II subcultivare 0 4,33 0 19,67 0 14,75 III subcultivare 1,33 4,33 1 12,33 1,33 10,5 IV subcultivare 2,33 - 4,33 15 4,25 4 V subcultivare 3 - 5,5 - 2,5 - VI subcultivare 7 - 2 - 2 - VII subcultivare 3 - - - 1 -Subculture cycle Number of shoots per explant Gen Moldova 1-5-71 1-15-15 millimeter wave control millimeter wave control millimeter wave control First multiplication - 1 - - 0.67 1 I subculture 0 4 0 12.33 0 8 II subculture 0 4.33 0 19.67 0 14.75 III subculture 1.33 4.33 1 12.33 1.33 10.5 IV subculture 2.33 - 4.33 15 4.25 4 V subculture 3 - 5.5 - 2.5 - VI subculture 7 - 2 - 2 - VII subculture 3 - - - 1 -
În corespundere cu rezultatele obţinute efectul factorului aplicat se remarcă atât prin accelerarea multiplicării, cât şi prin sporirea ratei de reproducere microclonală. Astfel, dacă la variantele martor valoarea coeficientului de multiplicare microclonală a variat între 2,38 şi 3,63 la genotipurile Gen Moldova şi 1-5-71, atunci ca rezultat al iradierii cu unde milimetrice s-a constatat majorarea acestui indice până la 4,2 şi 14,8 respectiv la aceleaşi genotipuri (tab. 5). In accordance with the results obtained, the effect of the applied factor is noted both by accelerating multiplication and by increasing the microclonal reproduction rate. Thus, if in the control variants the value of the microclonal multiplication coefficient varied between 2.38 and 3.63 in the Gen Moldova and 1-5-71 genotypes, then as a result of millimeter wave irradiation, an increase in this index was observed up to 4.2 and 14.8 respectively in the same genotypes (tab. 5).
Tabelul 5 Table 5
Potenţa teoretică a procedeului de multiplicare microclonală a viţei-de-vie Theoretical potency of the microclonal multiplication process of grapevines
prin cultivare in vitro by in vitro cultivation
Ciclul subcultivării Zile de cultivare Numărul de lăstăraşi cu 3 şi mai multe internoduri Gen Moldova 1-5-71 1-15-15 martor unde milimetrice martor unde milimetrice martor unde milimetrice Explante subcultivate 13 15 8 10 9 12 Coeficientul de multiplicare 2,38 4,2 3,63 14,8 2,77 10,75 Explante multiplicate * 18 28 45 15 31 90 I subcultivare* 60 32,9 78,4 204,3 222 95,5 806,4 II subcultivare * 90 60,3 219,5 927,5 3285,6 294,1 7225,3 III subcultivare* 120 110,3 614,7 4210,9 48626,9 905,8 64739,1 IV subcultivare* 150 201,9 1721 19117,7 719677,8 2789,8 580062,2 V subcultivare* 180 369,4 4818,9 86794,4 10651231,8 8592,4 5197357,1 VI subcultivare* 210 676,1 13492,9 394046,7 157638230,6 26464,6 46568319,7Subcultivation cycle Cultivation days Number of shoots with 3 and more internodes Gen Moldova 1-5-71 1-15-15 control millimeter waves control millimeter waves control millimeter waves Subcultivated explants 13 15 8 10 9 12 Multiplication coefficient 2.38 4.2 3.63 14.8 2.77 10.75 Multiplied explants * 18 28 45 15 31 90 I subcultivation* 60 32.9 78.4 204.3 222 95.5 806.4 II subcultivation * 90 60.3 219.5 927.5 3285.6 294.1 7225.3 III subcultivation* 120 110.3 614.7 4210.9 48626.9 905.8 64739.1 IV subcultivation* 150 201.9 1721 19117.7 719677.8 2789.8 580062.2 V subcultivation* 180 369.4 4818.9 86794.4 10651231.8 8592.4 5197357.1 VI subcultivation* 210 676.1 13492.9 394046.7 157638230.6 26464.6 46568319.7
* - potenţa teoretică de multiplicare raportată la zece regeneranţi subcultivaţi * - theoretical multiplication potency reported to ten subcultured regenerants
În baza rezultatelor obţinute putem constata că potenţa de multiplicare microclonală, conform invenţiei, ar putea permite obţinerea pe parcursul a 6 subcultivari a unui număr de zeci şi mii de ori mai mare decât schema de referinţă (la Gen Moldova de 19,9 ori, genotipul 1-5-71 - de 400, iar la genotipul 1-15-15 - de peste 1759 ori). Based on the results obtained, we can conclude that the microclonal multiplication potency, according to the invention, could allow obtaining, over the course of 6 subcultivations, a number tens and thousands of times greater than the reference scheme (for Gen Moldova 19.9 times, genotype 1-5-71 - 400, and for genotype 1-15-15 - over 1759 times).
Din punct de vedere practic procedeul este mai eficient în scopul accelerării multiplicării după 3…4 subcultivări, ceea ce este asigurat de un număr suficient de clone pentru fondarea unor plantaţii-mamă de viţă-de-vie pentru soiurile de interes ameliorativ. From a practical point of view, the process is more efficient in terms of accelerating multiplication after 3...4 subcultivations, which is ensured by a sufficient number of clones for founding mother vine plantations for varieties of amelioration interest.
1. Chee R., Pool R. M. and Bucher D. A method for large scale in vitro propagation of Vitis. New York's food and life sciences bulletin. Nr. 109, 1984, p.1-9 1. Chee R., Pool R. M. and Bucher D. A method for large scale in vitro propagation of Vitis. New York's food and life sciences bulletin. No. 109, 1984, p.1-9
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20130071A MD705Z (en) | 2013-04-19 | 2013-04-19 | Process for microclonal propagation of grapevine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20130071A MD705Z (en) | 2013-04-19 | 2013-04-19 | Process for microclonal propagation of grapevine |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MD705Y MD705Y (en) | 2013-12-31 |
| MD705Z true MD705Z (en) | 2014-07-31 |
Family
ID=49912588
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MDS20130071A MD705Z (en) | 2013-04-19 | 2013-04-19 | Process for microclonal propagation of grapevine |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| MD (1) | MD705Z (en) |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2041609C1 (en) * | 1993-02-01 | 1995-08-20 | Научно-Производственное Объединение "Виноград" | Method of microclonal reproduction of grape |
| RU95104581A (en) * | 1995-03-29 | 1996-07-10 | Научно-Производственное Объединение "Виноград" | Method of reproduction of vine "in vitro" |
| RU93005426A (en) * | 1993-02-01 | 1997-04-20 | Научно-Производственное Объединение "Виноград" | METHOD FOR MICROCLONAL REPRODUCTION OF GRAPES "IN VITRO" |
| MD701G2 (en) * | 1996-09-20 | 1998-02-28 | Институт Физиологии Растений Академии Наук Республики Молдова | Process for cultivation of the grape-vine |
| MD1089G2 (en) * | 1997-05-07 | 1999-05-31 | Институт Генетики И Физиологии Растений Академии Наук Молдовы | Vine cultivation process |
| MD1603G2 (en) * | 1999-12-20 | 2001-08-31 | Институт Физиологии Растений Академии Наук Республики Молдова | Process for vine-growing |
| RU2003127668A (en) * | 2003-09-11 | 2005-04-10 | ГНУ Всероссийский НИИвиноградарства и винодели им. Я.И. Потапенко (ВНИИВиВ) (RU) | METHOD FOR OPTIMIZING CLONAL MICROPROPORTATION OF GRAPES IN VITRO |
| RU2265319C2 (en) * | 2003-09-11 | 2005-12-10 | ГНУ Всероссийский НИИ виноградарства и виноделия им. Я.И. Потапенко (ВНИИВиВ) | Meristem regeneration method |
| MD2924G2 (en) * | 2005-04-06 | 2006-07-31 | Институт Физиологии Растений Академии Наук Республики Молдова | process for vine treatment |
| RU2332838C1 (en) * | 2007-01-31 | 2008-09-10 | Государственное общеобразовательное учреждение высшего профессионального образования "Алтайский государственный технический университет им. И.И. Ползунова" (АлтГТУ) | Method of reproduction of grafts of grapes |
-
2013
- 2013-04-19 MD MDS20130071A patent/MD705Z/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2041609C1 (en) * | 1993-02-01 | 1995-08-20 | Научно-Производственное Объединение "Виноград" | Method of microclonal reproduction of grape |
| RU93005426A (en) * | 1993-02-01 | 1997-04-20 | Научно-Производственное Объединение "Виноград" | METHOD FOR MICROCLONAL REPRODUCTION OF GRAPES "IN VITRO" |
| RU95104581A (en) * | 1995-03-29 | 1996-07-10 | Научно-Производственное Объединение "Виноград" | Method of reproduction of vine "in vitro" |
| RU2077192C1 (en) * | 1995-03-29 | 1997-04-20 | Научно-Производственное Объединение "Виноград" | Method for in vitro propagation of grape |
| MD701G2 (en) * | 1996-09-20 | 1998-02-28 | Институт Физиологии Растений Академии Наук Республики Молдова | Process for cultivation of the grape-vine |
| MD1089G2 (en) * | 1997-05-07 | 1999-05-31 | Институт Генетики И Физиологии Растений Академии Наук Молдовы | Vine cultivation process |
| MD1603G2 (en) * | 1999-12-20 | 2001-08-31 | Институт Физиологии Растений Академии Наук Республики Молдова | Process for vine-growing |
| RU2003127668A (en) * | 2003-09-11 | 2005-04-10 | ГНУ Всероссийский НИИвиноградарства и винодели им. Я.И. Потапенко (ВНИИВиВ) (RU) | METHOD FOR OPTIMIZING CLONAL MICROPROPORTATION OF GRAPES IN VITRO |
| RU2264706C2 (en) * | 2003-09-11 | 2005-11-27 | ГНУ Всероссийский НИИ виноградарства и виноделия им. Я.И. Потапенко (ВНИИВиВ) | Method for optimization of clonal in vitro micro multiplication of grape |
| RU2265319C2 (en) * | 2003-09-11 | 2005-12-10 | ГНУ Всероссийский НИИ виноградарства и виноделия им. Я.И. Потапенко (ВНИИВиВ) | Meristem regeneration method |
| MD2924G2 (en) * | 2005-04-06 | 2006-07-31 | Институт Физиологии Растений Академии Наук Республики Молдова | process for vine treatment |
| RU2332838C1 (en) * | 2007-01-31 | 2008-09-10 | Государственное общеобразовательное учреждение высшего профессионального образования "Алтайский государственный технический университет им. И.И. Ползунова" (АлтГТУ) | Method of reproduction of grafts of grapes |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Chee R., Pool R. M. and Bucher D. A method for large scale in vitro propagation of Vitis. New York's food and life sciences bulletin. Nr. 109, 1984, p.1-9 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MD705Y (en) | 2013-12-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104285813B (en) | Camellia chrysantha tissue culture propagation method | |
| Mukherjee et al. | In vitro propagation of a grape rootstock, deGrasset (Vitis champinii Planch.): Effects of medium compositions and plant growth regulators | |
| Demeke et al. | Effects of plant growth regulators on in vitro cultured nodal explants of cassava (Manihot esculenta Crantz) clones | |
| Singh et al. | Direct shoot organogenesis on hypocotyl explants from in vitro germinated seedlings of Psidium guajava L. cv. Allahabad Safeda | |
| Deb et al. | In vitro propagation of some threatened plant species of India | |
| Palei et al. | Callus induction and indirect regeneration of strawberry (Fragaria× Ananassa) Duch. CV. Chandler | |
| CN108575747B (en) | Adventitious bud regeneration method of cerasus serrulata | |
| Islam et al. | In vitro regeneration protocol for artificial seed production in an important medicinal plant Mentha arvensis L | |
| Hegde et al. | Production of synthetic seed in cassava (Manihot esculenta Crantz) | |
| Mir et al. | In vitro development and regeneration of microcorms in saffron (Crocus sativus L) | |
| Sudhersan et al. | In vitro propagation of Ziziphus mauritiana cultivar Umran by shoot tip and nodal multiplication | |
| CN116369196A (en) | A method for callus induction and plant regeneration of deer japonicus heterochromia | |
| Ravindra et al. | Sachet technique–an efficient method for the acclimatization of micropropagated grapes (Vitis vinifera L.) | |
| KR101701494B1 (en) | Method of plant tissue culture for mass propagation of Corydalis turtschaninovii Besser. | |
| CN103548679A (en) | Method for quercus nuttallii somatic embryogenesis | |
| Beruto et al. | In vitro culture of tree peony through axillary budding | |
| MD705Z (en) | Process for microclonal propagation of grapevine | |
| Sinha et al. | Clonal propagation of Phalaenopsis amabilis (L.) BL. cv.'Golden Horizon'through In vitro culture of leaf segments | |
| Singh et al. | In vitro propagation of Rhododendron niveum Hook F (state tree of Sikkim) an endangered rhododendron species of Sikkim Himalaya | |
| CN104770297B (en) | A kind of plant regeneration method of pine tree using pine leaves as explants | |
| Nacheva et al. | Micropropagation of Camptotheca Acuminata Decne (Nyssaceae)–Endangered Ornamental and Medicinal Tree. | |
| Nahar et al. | Effect of light quality and plant growth regulator on organogenesis of orkid Cymbidium dayanum | |
| CN107372126A (en) | A kind of method for inducing Chinese podophyllum root somatic embryo occur | |
| Mascarello et al. | Rosmarinus officinalis L.: Micropropagation and callus induction for cell biomass development | |
| CN113207695A (en) | Formula for tissue culture of ulmus parvifolia |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG9Y | Short term patent issued | ||
| KA4Y | Short-term patent lapsed due to non-payment of fees (with right of restoration) |