MD585Z - Procedeu de determinare cantitativă a flavonoizilor în materia primă vegetală - Google Patents

Procedeu de determinare cantitativă a flavonoizilor în materia primă vegetală Download PDF

Info

Publication number
MD585Z
MD585Z MDS20120065A MDS20120065A MD585Z MD 585 Z MD585 Z MD 585Z MD S20120065 A MDS20120065 A MD S20120065A MD S20120065 A MDS20120065 A MD S20120065A MD 585 Z MD585 Z MD 585Z
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
raw material
flavonoids
extract
amount
ethanol
Prior art date
Application number
MDS20120065A
Other languages
English (en)
Russian (ru)
Inventor
Владимир ВАЛИКА
Михаил ФИЛИППОВ
Дианна ШЕПЕЛЬ
Original Assignee
Государственный Медицинский И Фармацевтический Университет "Nicolae Testemitanu" Республики Молдова
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственный Медицинский И Фармацевтический Университет "Nicolae Testemitanu" Республики Молдова filed Critical Государственный Медицинский И Фармацевтический Университет "Nicolae Testemitanu" Республики Молдова
Priority to MDS20120065A priority Critical patent/MD585Z/ro
Publication of MD585Y publication Critical patent/MD585Y/ro
Publication of MD585Z publication Critical patent/MD585Z/ro

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)

Abstract

Invenţia se referă la domeniul farmaceutic, în special la un procedeu de determinare cantitativă a flavonoizilor în materia primă vegetală.Conform procedeului revendicat, se efectuează extragerea materiei prime vegetale cu etanol de 70…75%, tratarea cu clorură de aluminiu, determinarea fotometrică a densităţii optice a extractului şi calcularea cantităţii de flavonoizi, iar înainte de extragerea cu etanol materia primă se extrage cu cloroform, după care cloroformul se decantează, iar faza solidă se usucă, totodată densitatea optică a extractului se determină la 404 nm şi grosimea stratului de absorbţie de 0,1 cm, iar cantitatea de flavonoizi se exprimă prin cantitatea de quercetină.

Description

Invenţia se referă la domeniul farmaceutic, în special la un procedeu de determinare cantitativă a flavonoizilor în materia primă vegetală.
Este cunoscut procedeul de determinare cantitativă a flavonoizilor în materia primă vegetală pe baza schimbării densităţii optice la maximumul de absorbţie al complecşilor de flavonoizi cu clorură de aluminiu (AlCl3). În acest scop se propune fierberea cantităţii exacte de materie vegetală timp de 20…30 min cu etanol 30…70% în raport de 1:(100…200) într-un balon cu un răcitor cu reflux, după care se efectuează răcirea, se aduce cu etanol corespunzător la masa iniţială, proba alicvotă filtrată a extractului se tratează cu soluţie de clorură de aluminiu (AlCl3) în etanol 70% şi se măsoară densitatea optică a soluţiei la lungimea de undă analitică de 410…415 nm la un spectrofotometru pe fonul probei care nu este tratată cu clorură de aluminiu şi este acidulată cu acid acetic. În paralel, în aceleaşi condiţii se efectuează experienţa şi cu proba cu 1,5 ml de soluţie de rutină 0,1%. Conţinutul de flavonoizi se calculează în unităţi de rutină [1].
Dezavantajele principale ale procedeului cunoscut sunt: la determinare se presupune că numai flavonoizii (FL) formează un complex cu AlCl3, nu se ia în consideraţie efectul de denaturare asupra rezultatelor analizei de formare a complexului compuşilor secundari cu AlCl3. În primul rând se denaturează rezultatele analizei din cauza prezenţei clorofilei extrase din plantă cu alcool etilic. Clorofila în regiunea 350…450 nm are aşa-numitele benzi de absorbţie Sore, intensitatea de absorbţie a cărora scade după acţiunea cu AlCl3 care afectează rezultatele analizei. Determinarea în mai multe etape duce la o creştere a timpului analizei şi include obţinerea extractului, luarea de probă alicvotă, prepararea soluţiei de lucru şi a soluţiei de referinţă cu şi fără adaos de AlCl3, prepararea soluţiei standard de rutină, de asemenea, cu şi fără adaos de AlCl3. Rezultatele analizei se exprimă în unităţi de rutină, dar dacă materialul analizat conţine FL, alţii decât de rutină, este necesară recalcularea luând în consideraţie diferenţa dintre masele lor moleculare. Deci, în dependenţă de raportul probei de rutină : quercetină se observă o schimbare în intensitatea de absorbţie a luminii, diferenţa dintre absorbţia de rutină şi quercetină creşte la deplasarea absorbţiei totale la lungimi de undă mai lungi, ceea ce duce la o denaturare foarte puternică a rezultatelor de determinare a FL. Dacă măsurile fotometrice se efectuează în intervalul 410…415 nm, atunci rezultatele analizei depind foarte mult de compoziţia flavonoizilor extractului.
Problema pe care o soluţionează invenţia constă în elaborarea unui procedeu de determinare cantitativă a flavonoizilor în materia primă vegetală cu un număr mai mic de operaţii luând în consideraţie impactul asupra rezultatelor de determinare şi a compuşilor extractibili secundari.
Conform procedeului revendicat, se efectuează extragerea materiei prime vegetale cu etanol de 70…75%, tratarea cu clorură de aluminiu, determinarea fotometrică a densităţii optice a extractului şi calcularea cantităţii de flavonoizi, iar înainte de extragerea cu etanol materia primă se extrage cu cloroform, după care cloroformul se decantează, iar faza solidă se usucă, totodată densitatea optică a extractului se determină la 404 nm şi grosimea stratului de absorbţie de 0,1 cm, iar cantitatea de flavonoizi se exprimă prin cantitatea de quercetină.
Avantajele invenţiei propuse constau în aceea că la extracţia preliminară cu cloroform se reuşeşte lichidarea influenţei componentelor secundare, inclusiv a clorofilei, asupra determinării flavonoizilor, aplicarea unui exces mare de etanol 70…75% permite extragerea completă a FL şi simplificarea procedurii de determinare; fotometria extractului cu adaos de AlCl3 în punctul isosbestic la 404 nm, unde se intersectează curbele de absorbţie ale complecşilor de rutină şi quercetină cu AlCl3 permite de a calcula printr-un mod mai comod şi de a exprima cu exactitate rezultatele de determinare a FL într-un extract din materie primă vegetală.
Rezultatul invenţiei constă în: simplificarea procedeului de determinare, reducerea numărului de operaţiuni în determinarea FL, micşorarea influenţei compuşilor secundari şi a clorofilei asupra rezultatului analizei.
Procedeul de determinare cantitativă a flavonoizilor se realizează în modul următor: la 20 mg de materie primă se toarnă 10…15 ml de cloroform şi se încălzeşte într-un balon conectat la un răcitor cu reflux la temperatura de fierbere timp de 85…95 min. După răcire faza lichidă se decantează. Înainte de eliminarea fazei solide din balon se efectuează uscarea ei într-o etuvă la temperatura de 50…60°C. La faza solidă uscată se toarnă 10 ml de etanol 70…75% şi se efectuează extracţia într-un balon cu răcitor cu reflux la temperatura de fierbere timp de 85…95 min. După răcire, balonul se deconectează de la răcitor. La 3 ml de extract se adaugă 1 ml de soluţie apoasă de AlCl3 0,1 M.
Peste 20…30 min se fotometrează soluţia complexului flavonoizilor cu AlCl3 la 404 nm la grosimea stratului de absorbţie de 0,1 cm.
Rezultatele analizei se exprimă în procente de greutate ale agliconului (quercetină - CQ) prin formula:
, unde:
CQ - cantitatea de quercetină, în %;
D - densitatea optică a extractului, valori absolute;
n - coeficientul de diluare a extractului alcoolic cu soluţie de clorură de aluminiu, valori absolute;
V - volumul de etanol, ml;
m - masa materiei prime, mg;
W - umiditatea materiei prime, %.
Umiditatea materiei prime vegetale se determină prin metoda prevăzută în Farmacopeea de Stat [Государственная фармакопея СССР, издание 11-е, том. 1, Медицина, Москва, 1987, с. 285-286].
Recalcularea rezultatului analizei pentru altă flavonoidă rutină se efectuează prin înmulţirea raportului masei moleculare a flavonoidei rutină anhidră C27H30O16 (RUT) la masa moleculară de quercetină anhidră C15H10O7 (CQ), care este aglicon al rutinei:
Masa moleculară a rutinei:
MRUT = 610,5 [http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/summary/summary.cgi?cid=5280805&loc=ec_rcs].
Masa moleculară a quercetinei:
MCQ=302,2 [http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/summary/summary.cgi?cid=5280343&loc=ec_rcs].
La determinarea cantitativă a FL conform procedeului propus la extragerea preliminară a materiei prime vegetale cu cloroform este eliminat cel puţin componentul principal care împiedică la determinarea flavonoizilor - clorofila, care este prezentă în toate plantele, precum şi alţi compuşi secundari. FL din materie primă vegetală nu se extrag cu cloroform. Folosirea unui exces mare de etanol 70…75% (raport 1:500…1000) asigură extragerea completă a FL, exclude procedura ulterioară de diluare a extractului la pregătirea soluţiilor fotometrice, aceasta permite reducerea volumelor extractului (până la 10 ml) şi a soluţiilor fotometrice (până la 4 ml), ce simplifică esenţial procesul de determinare. Extractul cu adaos de AlCl3 se fotometrează în punctul isosbestic la 404 nm, unde se intersectează curbele de absorbţie ale complecşilor de rutină trihidrat 0,001M (RUT·3H2O, M = 664,56)
http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/summary/summary.cgi?cid=16218542
&loc=ec_rcs] şi quercetină dihidrat 0,001M (CQ·2H2O, M = 338,2) [http://pubchem.ncbi.nlm.nih.
gov/summary/summary.cgi?cid=16218542&loc=ec_rcs], obţinuţi după prelucrarea cu soluţie apoasă de 0,1M AlCl3, adică în punctul coeficienţilor molari de extracţie egali ai lor ε404 = 1,716 · 104 1·M-1·cm-1. Se determină concentraţia molară totală a componentelor FL anhidre. Recalcularea conţinutului (%) oricărui component al amestecului de flavonoizi se efectuează prin înmulţirea rezultatului de fotometrie la masa moleculară a flavonoidului-standard. Recalcularea conţinutului de FL în cantitatea sumară de aglicon (quercetină) este cea mai comodă şi precisă, deci în acest caz rezultatele analizei sunt mai puţin dependente de compoziţia FL extractului. De asemenea, activitatea biologică a FL este determinată în principal de aglicon, şi, respectiv, evaluarea farmacologică a extractului se determină de asemenea prin suma totală de aglicon.
Exemplu
La 20,27 mg de frunze uscate de sunătoare (m), cu conţinutul de umiditate 6% (W) se toarnă 10 ml de cloroform şi se încălzeşte într-un balon conectat la un răcitor cu reflux la temperatura de fierbere timp de 90 min. După răcire faza lichidă se decantează. Faza solidă rămasă într-un balon se spală cu 5 ml de cloroform. Neeliminând faza solidă din balon se efectuează uscarea ei într-o etuvă la temperatura de 50…60°C. La faza solidă uscată se toarnă 10 ml de etanol 70% (V), se încălzeşte într-un balon cu răcitor cu reflux la temperatura de fierbere timp de 90 min. După răcire balonul se deconectează de la răcitor. La 3 ml de extract se adaugă 1 ml de soluţie apoasă de AlCl3 0,1 M. n = 4/3 = 1,33 - coeficientul de diluare a extractului alcoolic după adăugarea la el a soluţiei de AlCl3. Peste 20 min se măsoară densitatea optică a soluţiei complexului flavonoizilor cu AlCl3 la 404 nm la grosimea stratului de absorbţie de 0,1 cm. A fost obţinută valoarea D = 0,207.
Conţinutul FL în recalcul pe quercetină se calculează după formula sus-menţionată. Conţinutul flavonoizilor în frunzele de sunătoare a constituit 2,43%. După recalcularea pe rutină conţinutul FL a constituit 5,13%.
Conţinutul FL în petalele florilor de sunătoare a constituit 3,19%. După recalcularea pe rutină conţinutul FL a constituit 6,44%.
Cercetările au fost efectuate în Centrul Ştiinţific în Domeniul Medicamentului al USMF „Nicolae Testemiţanu” şi în Laboratorul Metode Fizico-Chimice de Cercetare şi Analiză al Institutului de Chimie al AŞM. Au fost efectuate 34 de cercetări experimentale.
1. SU 1507394 A1 1989.09.15

Claims (1)

  1. Procedeu de determinare cantitativă a flavonoizilor în materia primă vegetală, care constă în extragerea materiei prime vegetale cu etanol de 70…75%, tratarea cu clorură de aluminiu, determinarea fotometrică a densităţii optice a extractului şi calcularea cantităţii de flavonoizi, caracterizat prin aceea că înainte de extragerea cu etanol materia primă se extrage cu cloroform, după care cloroformul se decantează, iar faza solidă se usucă, totodată densitatea optică a extractului se determină la 404 nm şi grosimea stratului de absorbţie de 0,1 cm, iar cantitatea de flavonoizi se exprimă prin cantitatea de quercetină, care se determină conform formulei, în %:
    , \tabunde:
    CQ - cantitatea de quercetină, în %;
    D - densitatea optică a extractului, valori absolute;
    n - coeficientul de diluare a extractului alcoolic cu soluţie de clorură de aluminiu, valori absolute;
    V - volumul de etanol, ml;
    m - masa materiei prime, mg;
    W - umiditatea materiei prime, %.
MDS20120065A 2012-04-13 2012-04-13 Procedeu de determinare cantitativă a flavonoizilor în materia primă vegetală MD585Z (ro)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDS20120065A MD585Z (ro) 2012-04-13 2012-04-13 Procedeu de determinare cantitativă a flavonoizilor în materia primă vegetală

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDS20120065A MD585Z (ro) 2012-04-13 2012-04-13 Procedeu de determinare cantitativă a flavonoizilor în materia primă vegetală

Publications (2)

Publication Number Publication Date
MD585Y MD585Y (ro) 2013-01-31
MD585Z true MD585Z (ro) 2013-08-31

Family

ID=47681254

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDS20120065A MD585Z (ro) 2012-04-13 2012-04-13 Procedeu de determinare cantitativă a flavonoizilor în materia primă vegetală

Country Status (1)

Country Link
MD (1) MD585Z (ro)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MD825Z (ro) * 2014-01-22 2015-05-31 Алёна ГЕНДОВ-МОШАНУ Procedeu de obţinere a polifenolilor din tescovină de struguri

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103267738A (zh) * 2013-05-15 2013-08-28 浙江大学 一种白僵蚕体黄酮类化合物含量的测定方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1507394A1 (ru) * 1987-08-25 1989-09-15 Всесоюзный научно-исследовательский институт химии и технологии лекарственных средств Способ количественного определени флавоноидов в растительном сырье
RU2035460C1 (ru) * 1993-06-29 1995-05-20 Борис Алексеевич Фадеев Способ получения кверцетина
RU2085203C1 (ru) * 1994-07-06 1997-07-27 Александр Владиленович Мазулин Способ количественного определения флавоноидов в экстракционных маслах из растительного сырья
  • 2012

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1507394A1 (ru) * 1987-08-25 1989-09-15 Всесоюзный научно-исследовательский институт химии и технологии лекарственных средств Способ количественного определени флавоноидов в растительном сырье
RU2035460C1 (ru) * 1993-06-29 1995-05-20 Борис Алексеевич Фадеев Способ получения кверцетина
RU2085203C1 (ru) * 1994-07-06 1997-07-27 Александр Владиленович Мазулин Способ количественного определения флавоноидов в экстракционных маслах из растительного сырья

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MD825Z (ro) * 2014-01-22 2015-05-31 Алёна ГЕНДОВ-МОШАНУ Procedeu de obţinere a polifenolilor din tescovină de struguri

Also Published As

Publication number Publication date
MD585Y (ro) 2013-01-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Dong et al. Comparative study on phenolic compounds, triterpenoids, and antioxidant activity of Ganoderma lucidum affected by different drying methods
Dobiáš et al. Comparison of pressurised fluid and ultrasonic extraction methods for analysis of plant antioxidants and their antioxidant capacity
Yousuf et al. Isolation of Prunin from the fruit shell of Bixa orellana and the effect of β-cyclodextrin on its binding with calf thymus DNA
RU2701726C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя черного
CN101363828B (zh) 一种蜂王浆品质的评价方法
MD585Z (ro) Procedeu de determinare cantitativă a flavonoizilor în materia primă vegetală
Tan et al. Extraction of steroidal glycoside from small-typed bitter gourd (Momordica charantia L.)
Kurkin et al. Quantitative determination of total flavonoids in blood-red hawthorn fruit
CN102914508A (zh) 一种油茶籽中多糖含量的测定方法
CN102178707A (zh) 具有抗氧化活性的榛属植物提取物及其制备方法
Ningsih et al. Quantification of tannin in chromolaena odorat (kirinyu) leaf extract
Shaghaghi et al. Determination of flavonoids in pharmaceutical preparations using Terbium sensitized fluorescence method
Bazarnova et al. Isolation and analysis of extractives from white cinquefoil (Potentilla alba L.) grown under different conditions
Mohammad et al. Comparison study on antioxidant capacity of chromolaena odorata leaves extract obtained from maceration and ultrasound-assisted maceration
Khelassi-Sefaoui et al. Phytochemical investigation, antibacterial and antioxidant activities of Sideritis incana L extracts
JP6523634B2 (ja) 血栓予防治療剤及びその製造方法
Din et al. Effect of plant organs of ficus deltoidea in the synthesis of silver nanoparticles
RU2772387C1 (ru) Способ получения сухого растительного экстракта, обладающего противовирусной и антиоксидантной активностью
CN102688264A (zh) 钟花报春花或其提取物的新用途
Brazil et al. Optimization of Coumarins Extraction from Pterocaulon balansae by Box-Behnken Design and Anti-Trichomonas vaginalis Activity
Apoyan et al. Quantitative Determination of Tannin in Nettle by Spectrophotometric and Chromatographic Methods
RU2814635C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя белого
RU2763263C1 (ru) Способ количественного определения суммы дубильных веществ в эвтерпы овощной плодах
Zebib et al. Satureja myrtifolia (Boiss. & Hohen.) Lebanese wild plant, as a resource of natural antioxidants
RU2772821C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в цветках бархатцев отклоненных

Legal Events

Date Code Title Description
FG9Y Short term patent issued
KA4Y Short-term patent lapsed due to non-payment of fees (with right of restoration)