RU2814635C1 - Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя белого - Google Patents
Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя белого Download PDFInfo
- Publication number
- RU2814635C1 RU2814635C1 RU2023117515A RU2023117515A RU2814635C1 RU 2814635 C1 RU2814635 C1 RU 2814635C1 RU 2023117515 A RU2023117515 A RU 2023117515A RU 2023117515 A RU2023117515 A RU 2023117515A RU 2814635 C1 RU2814635 C1 RU 2814635C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rutin
- flavonoids
- solution
- raw materials
- extraction
- Prior art date
Links
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 title claims abstract description 43
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 title claims abstract description 43
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 title claims abstract description 43
- 241000168036 Populus alba Species 0.000 title claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N Bioquercetin Natural products CC1OC(OCC(O)C2OC(OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 63
- IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N eriodictyol 7-O-rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C=C3C(C(C(O)=C(O3)C=3C=C(O)C(O)=CC=3)=O)=C(O)C=2)O1 IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 63
- FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N quercetin rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 63
- 235000005493 rutin Nutrition 0.000 claims abstract description 63
- ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N rutin Natural products CC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5 ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 63
- 229960004555 rutoside Drugs 0.000 claims abstract description 63
- IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N rutin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N 0.000 claims abstract description 62
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 52
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 35
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims abstract description 32
- VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K aluminium trichloride Chemical compound Cl[Al](Cl)Cl VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 22
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 21
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims abstract description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 43
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 15
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 11
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 8
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 claims description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 7
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 7
- 239000012675 alcoholic extract Substances 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 241000218982 Populus nigra Species 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 3
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 3
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000538 analytical sample Substances 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 description 2
- 238000000424 optical density measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 2
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- ORJDDOBAOGKRJV-CQSZACIVSA-N (2S)-Pinocembrin Natural products C1([C@H]2CC(=O)C3=C(O)C=C(C=C3O2)OC)=CC=CC=C1 ORJDDOBAOGKRJV-CQSZACIVSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- RTIXKCRFFJGDFG-UHFFFAOYSA-N Chrysin Natural products C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=CC=C1 RTIXKCRFFJGDFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ORJDDOBAOGKRJV-UHFFFAOYSA-N Dihydrotectochrysin Natural products O1C2=CC(OC)=CC(O)=C2C(=O)CC1C1=CC=CC=C1 ORJDDOBAOGKRJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 1
- FGUBFGWYEYFGRK-HNNXBMFYSA-N Pinocembrin Natural products Cc1cc(C)c2C(=O)C[C@H](Oc2c1)c3ccccc3 FGUBFGWYEYFGRK-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 241000241413 Propolis Species 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- URFCJEUYXNAHFI-ZDUSSCGKSA-N pinocembrin Chemical compound C1([C@@H]2CC(=O)C3=C(O)C=C(C=C3O2)O)=CC=CC=C1 URFCJEUYXNAHFI-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- ORJDDOBAOGKRJV-AWEZNQCLSA-N pinostrobin Chemical compound C1([C@@H]2CC(=O)C3=C(O)C=C(C=C3O2)OC)=CC=CC=C1 ORJDDOBAOGKRJV-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- 229940069949 propolis Drugs 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- -1 salicin (3 Chemical class 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности. Раскрыт способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя белого путем экстракции сырья органическими растворителями с последующей пробоподготовкой и определения оптической плотности методом дифференциальной спектрофотометрии, при этом экстракцию сырья осуществляют в соотношении 1 г сырья на 30 мл этилового спирта в концентрации 80%, время экстракции - извлечение на кипящей водяной бане в течение 90 мин, степень измельчения сырья - 2 мм, реакция комплексообразования с хлоридом алюминия в течение 30 мин; количественное определение суммы флавоноидов в листьях тополя белого проводят при длине волны 410 нм в пересчете на рутин; рассчитывают содержание суммы флавоноидов X в процентах в пересчете на рутин. Изобретение обеспечивает создание способа количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя белого в пересчете на рутин. 3 ил., 3 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в центрах контроля качества лекарственных средств и контрольно-аналитических лабораториях при проведении количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя белого (Populus alba L.).
Виды растения рода Тополь (Populus L.) широко произрастают на территории Российской Федерации (1). Тополь белый (Populus alba L.) не является фармакопейным представителем рода Populus, но имеет схожий химический состав с тополем черным и может выступать в качестве перспективного источника сырья, содержащего фенольные соединения, в частности, флавоноиды (2, 4).
Почки, листья, побеги и кора тополя белого содержат флавоноиды (пиностробин, пиноцембрин, рутин, кверцетин) и другие фенольные соединения, в том числе салицин (3, 7, 8). Одним из основных флавоноидов листьев тополя белого является рутин (7). Известно, что рутин проявляет капилляроукрепляющую активность. Этот флавоноид обладает способностью связывать металлы в прочные комплексы с образованием каталитически неактивных комплексов. Рутин (3-О-рутинозид кверцетина) в дозе 25 мг/кг оказывает антиоксидантное действие, проявляющееся в снижении содержания МДА (малонового диальдегида) в гомогенате (в 1,3 раза), повышает активность каталазы (в 1,2 раза), проявляет тенденцию к повышению активности ферментов супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы (5).
Ранее была разработана методика определения суммы флавоноидов в листьях тополя черного (6). Данная методика выбрана нами в качестве прототипа.
Следовательно, является актуальным исследование в плане разработки методики количественного определения суммы флавоноидов в сырье данного растения.
Таким образом, целью изобретения является разработка способа количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя белого, обладающего высокой специфичностью и точностью.
Техническим результатом является создание способа количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя белого в пересчете на рутин.
Технический результат достигается тем, что экстракцию сырья осуществляют однократно, в качестве экстрагента используют этиловый спирт в концентрации 80% в соотношении «сырье-экстрагент» - 1:30, время экстракции - извлечение на кипящей водяной бане в течение 90 мин, степень измельчения сырья - 2 мм, реакция комплексообразования с хлоридом алюминия в течение 30 мин. Количественное определение суммы флавоноидов в листьях тополя белого проводят при длине волны 410 нм в пересчете на рутин; содержание суммы флавоноидов (X в процентах) в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
D o - оптическая плотность раствора стандартного образца рутина;
m - масса сырья, г;
m о - масса стандартного образца рутина, г;
W - потеря в массе при высушивании, %.
В случае отсутствия стандартного образца рутина для расчета целесообразно использовать теоретическое значение удельного показателя поглощения при 410 нм - 220:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
m - масса сырья, г;
m о - масса СО рутина, г;
220 - удельный показатель поглощения (E) СО рутина при 410 нм;
W - потеря в массе при высушивании в процентах.
При изучении спектральных характеристик было выявлено, что именно
рутин определяет характер кривой поглощения водно-спиртового извлечения из листьев тополя белого. Определено, что в УФ-спектре водно-спиртового извлечения тополя белого наблюдается батохромный сдвиг длинноволновой полосы флавоноидов - Фигура 1, как и в случае рутина - Фигура 2, где кривая 1 на фигуре 1 и фигуре 2 демонстрирует исходный раствор водно-спиртового извлечения из листьев тополя белого или исходный раствор рутина соответственно, а кривая 2 - раствор водно-спиртового извлечения из листьев тополя белого в присутствии алюминия хлорида или раствор рутина в присутствии алюминия хлорида соответственно.
рутин определяет характер кривой поглощения водно-спиртового извлечения из листьев тополя белого. Определено, что в УФ-спектре водно-спиртового извлечения тополя белого наблюдается батохромный сдвиг длинноволновой полосы флавоноидов - Фигура 1, как и в случае рутина - Фигура 2, где кривая 1 на фигуре 1 и фигуре 2 демонстрирует исходный раствор водно-спиртового извлечения из листьев тополя белого или исходный раствор рутина соответственно, а кривая 2 - раствор водно-спиртового извлечения из листьев тополя белого в присутствии алюминия хлорида или раствор рутина в присутствии алюминия хлорида соответственно.
Изучение УФ-спектров фигуры 2 (где кривая 1 - раствор рутина, а кривая 2 - раствор рутина с добавлением алюминия хлорида) показало, что раствор СО рутина в присутствии алюминия хлорида имеет максимум поглощения при длине волны 410 нм. В УФ-спектре водно-спиртового извлечения из листьев тополя белого в дифференциальном варианте на фигуре 3 обнаруживается при длине волны 410 нм максимум поглощения, который соответствует максимуму поглощения спиртового раствора рутина.
Данный факт позволяет проводить спектрофотометрическое определение суммы флавоноидов в листьях тополя белого при аналитической длине волны 410 нм.
Также нами было изучено влияние экстрагента на процесс экстракции. В таблице 1 представлена зависимость выхода флавоноидов листьев тополя белого от концентрации экстрагента. В результате эксперимента в качестве оптимального экстрагента нами был выбран 80% этиловый спирт, так как выход действующих веществ из сырья при его использовании максимален.
Далее нами был изучен вопрос относительно продолжительности экстракции на кипящей водяной бане, в таблице 2 представлена зависимость выхода флавоноидов листьев тополя белого от времени экстракции на кипящей водяной бане, при этом было выбрано время экстракции 90 минут.
В таблице 3 представлена зависимость выхода флавоноидов листьев тополя белого от соотношения «сырье-экстрагент». Из таблицы видно, что максимальный выход действующих веществ наблюдается при соотношении «сырье-экстрагент» 1:30, по этой причине данное соотношение было выбрано нами в качестве оптимального.
Учитывая, что увеличение числа операций на стадии пробоподготовки ведет к возрастанию ошибки, выбор сделан в пользу одностадийного процесса экстракции с подтверждением требуемой точности количественного определения.
Таким образом, было определено, что оптимальными параметрами экстракции являются: однократное извлечение 80% этиловым спиртом на кипящей водяной бане в течение 90 минут в соотношении «сырье-экстрагент» - 1:30.
Принимая по внимание тот факт, что специфическим для листьев тополя белого является рутин, а максимумы поглощения раствора рутина и водно-спиртового извлечения листьев тополя белого находятся в области 410 нм, целесообразным является определение содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин при длине волны 410 нм.
Способ реализуется следующим образом.
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл 80 % этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарированных весах с точностью до ±0,01. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 90 мин. Затем ее охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (красная полоса) (испытуемый раствор А).
1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 % концентрации (испытуемый раствор Б).
Оптическую плотность испытуемого раствора Б измеряют через 30 мин на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл раствора А, доведенный спиртом 96 % до метки в мерной колбе вместимостью 50 мл.
Примечание: Приготовление раствора стандартного образца рутина. Около 0,025 г (точная навеска) рутина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 30 мл спирта 70% концентрации при нагревании на водяной бане. После охлаждения содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем раствора спиртом этиловым 70% концентрации до метки (раствор А рутина). 1 мл раствора А рутина помещают в мерную колбу на 25 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия (III) хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом 96 % концентрации (испытуемый раствор Б рутина). Измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 410 нм. В качестве раствора сравнения используют раствор, который готовят следующим образом: 1 мл раствора А рутина помещают в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора до метки спиртом 96 % концентрации (раствор сравнения Б рутина).
Измерение оптической плотности проводят при длине волны 410 нм через 30 минут после приготовления всех растворов.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
D o - оптическая плотность раствора СО рутина;
m - масса сырья, г;
m о - масса СО рутина, г;
W - потеря в массе при высушивании, %.
При условиях, когда отсутствует стандартный образец рутина, целесообразно использовать теоретическое значение удельного показателя поглощения, равное 220.
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
m - масса сырья, г;
m
о
- масса СО рутина, г;
220 - удельный показатель поглощения (E) СО рутина при 410 нм;
W - потеря в массе при высушивании, %.
Предлагаемый способ поясняется следующими примерами.
Пример 1.
Аналитическую пробу листьев тополя белого измельчают до размера частиц 2 мм (заготовлено в Самарской области, июнь 2022 г.). 1,0020 г измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл 80% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарирных весах с точностью до ±0,01. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 90 минут. Затем колбу охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (красная полоса).
Испытуемый раствор для анализа суммы флавоноидов готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96% (испытуемый раствор).
Раствор сравнения готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу на 50 мл, доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96% (раствор сравнения).
Для расчета содержания суммы флавоноидов готовят раствор стандартного образца рутина, добавляют к нему 3% спиртовой раствор хлорида алюминия, измеряют оптическую плотность окрашенного комплекса при длине волны 410 нм и определенное значение оптической плотности используют в формуле расчета.
Приготовление раствора стандартного образца рутина.
0,0208 г рутина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 30 мл 70% этилового спирта при нагревании на водяной бане. После охлаждения содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем раствора 70% этиловым спиртом до метки (раствор А рутина). 1 мл раствора А рутина помещают в мерную колбу на 25 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия (III) хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом 96 % концентрации (испытуемый раствор Б рутина). Измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 410 нм. В качестве раствора сравнения используют раствор, который готовят следующим образом: 1 мл раствора А рутина помещают в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора до метки спиртом 96 % концентрации (раствор сравнения Б рутина).
Измерение оптической плотности проводят при длине волны 410 нм через 30 минут после приготовления всех растворов.
Содержание суммы флавоноидов (X в процентах) в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:
где:
0,2915 - оптическая плотность испытуемого раствора;
0,3588 - оптическая плотность раствора стандартного образца
рутина;
рутина;
1,0020 - масса сырья, г;
0,0208 - масса стандартного образца рутина, г.
10 - потеря в массе при высушивании, %.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин = 2,23 %.
Пример 2.
При необходимости определения суммы флавоноидов в листьях тополя белого при отсутствии стандартного образца рутина, необходимо провести все действия из примера 1 до приготовления раствора стандартного образца рутина.
После измерения оптической плотности извлечения из листьев тополя белого при длине волны 410 нм, содержание суммы флавоноидов (X в процентах) в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле, используя теоретическое значение удельного показателя поглощения при 410 нм - 220.
где:
0,2915 - оптическая плотность испытуемого раствора;
1,0037 - масса сырья, г;
220 - удельный показатель поглощения (E - оптическая плотность раствора вещества с концентрацией 1 г/100 мл в кювете с толщиной слоя 1 см) стандартного образца рутина при 410 нм;
10 - потеря в массе при высушивании, %.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин = 2,21 %, что сравнимо со значением, полученном в примере 1.
Все результаты были статистически обработаны. Ошибка единичного количественного определения составила ±5,22%.
Таким образом, предлагаемый способ количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в листьях тополя белого с использованием дифференциальной спектрофотометрии разработан впервые для данного вида сырья и обладает следующими преимуществами:
1. Разработанный метод является специфичным и селективным, а также позволяет эффективно проводить экстракцию сырья однократно, поскольку в качестве экстрагента используется 80% этиловый спирт, позволяющий исчерпывающе извлекать целевые вещества (флавоноиды) в течение 90 минут.
2. Пересчет суммы флавоноидов идет на специфическое для листьев тополя белого вещество - рутин, содержащийся в сырье данного растения.
Этот способ можно применять в центрах контроля качества лекарственных средств, на фармацевтических предприятиях и контрольно-аналитических лабораториях для количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя белого (Populus alba L.).
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ:
1. Браславский В.Б. Ива, тополь и прополис в медицине и фармации: монография. Самара, 2012. 116 с.
2. Государственная фармакопея Российской Федерации / МЗ РФ. - XIV изд. - Т. I-IV. М., 2018. [Электронный ресурс] URL: http://femb.ru/femb/pharmacopea.php .
3. Куркин В.А., Куприянова Е.А. Сравнительное исследование флавоноидного состава листьев фармакопейных видов рода Populus / Куркин В.А. // Химия растительного сырья. - 2020. - № 1. - С. 117-124. DOI: 10.14258/jcprm.2020015818.
4. Куркин В.А. Фармакогнозия: учебник для студентов фармацевтических вузов. 5-е изд., перераб. и доп. ООО «Полиграфическое объединение «Стандарт», Самара (2020). С. 372-377.
5. Куркина А.В. Флавоноиды фармакопейных растений: монография. Самара: ООО «Офорт», ГБОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2012. 290 с.
6. Куприянова Е.А., Куркин В.А. Разработка подходов к стандартизации листьев тополя черного // Аспирантский вестник Поволжья. - 2018. - № 5-6. - С. 17-22.
7. Куприянова Е.А. Сравнительное фармакогностическое исследование представителей рода Тополь (Populus L.): Дис. …канд. фарм. наук. - Самара, 2020. Доступно по: https://samsmu.ru/files/referats/2020/kupriyanova/dissertation.pdf.
| СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ЛИСТЬЯХ ТОПОЛЯ БЕЛОГО Таблица 1 |
|
| Экстрагент | Содержание суммы флавоноидов в пересчете на абсолютно сухое сырье и рутин |
| 40% этиловый спирт | 1,74±0,01 |
| 50% этиловый спирт | 1,71±0,02 |
| 60% этиловый спирт | 1,20±0,02 |
| 70% этиловый спирт | 1,80±0,02 |
| 80% этиловый спирт | 2,03±0,01 |
| 96% этиловый спирт | 0,90±0,01 |
1.
| ПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ЛИСТЬЯХ ТОПОЛЯ БЕЛОГО Таблица 2 |
|
| Время экстракции на кипящей водяной бане | Содержание суммы флавоноидов в пересчете на абсолютно сухое сырье и рутин |
| 30 минут | 1,66±0,02 |
| 45 минут | 1,83±0,02 |
| 60 минут | 1,86±0,03 |
| 90 минут | 2,19±0,02 |
| 120 мин | 1,98±0,02 |
2.
| СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ЛИСТЬЯХ ТОПОЛЯ БЕЛОГО Таблица 3 |
|
| Соотношение «сырье-экстрагент» |
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на абсолютно сухое сырье и рутин |
| 1:20 | 1,18±0,02 |
| 1:30 | 2,16±0,02 |
| 1:50 | 2,22±0,03 |
Claims (14)
- Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя белого путем экстракции сырья органическими растворителями с последующей пробоподготовкой и определения оптической плотности методом дифференциальной спектрофотометрии, отличающийся тем, что экстракцию сырья осуществляют в соотношении 1 г сырья на 30 мл этилового спирта в концентрации 80%, время экстракции - извлечение на кипящей водяной бане в течение 90 мин, степень измельчения сырья - 2 мм, реакция комплексообразования с хлоридом алюминия в течение 30 мин; количественное определение суммы флавоноидов в листьях тополя белого проводят при длине волны 410 нм в пересчете на рутин; содержание суммы флавоноидов X в процентах в пересчете на рутин вычисляют по формуле:
-
- где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
- D o - оптическая плотность раствора стандартного образца рутина;
- m - масса сырья, г;
- m о - масса стандартного образца рутина, г;
- W - потеря в массе при высушивании, %;
- или по формуле
-
- где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
- m - масса сырья, г;
- m о - масса СО рутина, г;
- 220 - удельный показатель поглощения (E) СО рутина при 410 нм;
- W - потеря в массе при высушивании в процентах.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2814635C1 true RU2814635C1 (ru) | 2024-03-04 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2475724C2 (ru) * | 2011-05-06 | 2013-02-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежский государственный университет" (ГОУ ВПО ВГТУ) | Способ количественного определения флавоноидов в растительном сырье флуориметрическим методом |
| CN106511577B (zh) * | 2015-09-10 | 2019-12-20 | 宁夏医科大学 | 一种抗菌毛白杨叶总黄酮的制备方法 |
| RU2747482C1 (ru) * | 2020-09-04 | 2021-05-05 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях ореха грецкого |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2475724C2 (ru) * | 2011-05-06 | 2013-02-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежский государственный университет" (ГОУ ВПО ВГТУ) | Способ количественного определения флавоноидов в растительном сырье флуориметрическим методом |
| CN106511577B (zh) * | 2015-09-10 | 2019-12-20 | 宁夏医科大学 | 一种抗菌毛白杨叶总黄酮的制备方法 |
| RU2747482C1 (ru) * | 2020-09-04 | 2021-05-05 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях ореха грецкого |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| DANISE T. et al. White poplar (Populus alba L.) leaf waste recovery and intercropping outcome on its polyphenols // Industrial Crops & Products, 2021, V. 171, pp. 1-13. * |
| ЗОЛОТОВ Ю. А. Основы аналитической химии // Издательский центр "Академия", Москва, 2012, Т. 1, 5-е изд., 384 с. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2701726C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя черного | |
| RU2696770C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в траве монарды дудчатой | |
| RU2669162C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях боярышника кроваво-красного | |
| Guglani et al. | In-vitro antioxidant activity, total phenolic, flavonoid and tannin contents in the Ajuga bracteosa wall. ex benth, grown at middle hill climatic condition of western Himalayas | |
| RU2814635C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя белого | |
| RU2747483C1 (ru) | Способ количественного определения суммы фенилпропаноидов в цветках сирени обыкновенной | |
| RU2747482C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях ореха грецкого | |
| RU2747417C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в коре ореха черного | |
| RU2806035C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в траве тысячелистника обыкновенного | |
| RU2763263C1 (ru) | Способ количественного определения суммы дубильных веществ в эвтерпы овощной плодах | |
| RU2772821C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в цветках бархатцев отклоненных | |
| RU2806047C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в траве солодки голой | |
| RU2786440C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в траве чернушки посевной | |
| RU2807831C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях цефалярии гигантской | |
| RU2752316C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях сирени обыкновенной | |
| Kurkina et al. | Development of quantitative determination methods for total flavonoids in Tagetes patula L. herbs | |
| RU2751189C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях дуба черешчатого | |
| Savitri et al. | Antioxidant, Cytotoxic Activity and Protein Target Inhibition of Ethyl Acetate Fraction Melinjo Seed (Gnetum gnemon L.) by In Vitro and In Silico Studies on HeLa Cervical Cancer Cells | |
| RU2695760C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в плодах боярышника мягковатого | |
| Ighodaro et al. | Antioxidant activity and assessment of total phenolic and flavonoid contents of Caesalpinia pulcherrima leaf extract and fractions | |
| RU2811264C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в траве лабазника вязолистного | |
| RU2763264C1 (ru) | Способ количественного определения суммы фенилпропаноидов в моринги масличной листьях | |
| Kurkin et al. | Quantitative determination of total saponins in Aralia mandshurica plant raw material | |
| Shaghaghi et al. | Determination of flavonoids in pharmaceutical preparations using Terbium sensitized fluorescence method | |
| RU2782618C1 (ru) | Способ количественного определения суммы флавоноидов в почках дуба черешчатого |