RU2807831C1 - Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях цефалярии гигантской - Google Patents

Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях цефалярии гигантской Download PDF

Info

Publication number
RU2807831C1
RU2807831C1 RU2023110652A RU2023110652A RU2807831C1 RU 2807831 C1 RU2807831 C1 RU 2807831C1 RU 2023110652 A RU2023110652 A RU 2023110652A RU 2023110652 A RU2023110652 A RU 2023110652A RU 2807831 C1 RU2807831 C1 RU 2807831C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cynaroside
raw materials
flavonoids
leaves
cephalaria
Prior art date
Application number
RU2023110652A
Other languages
English (en)
Inventor
Ольга Александровна Калашникова
Виталий Михайлович Рыжов
Владимир Александрович Куркин
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Application granted granted Critical
Publication of RU2807831C1 publication Critical patent/RU2807831C1/ru

Links

Abstract

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности. Раскрыт способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях цефалярии гигантской, включающий однократную экстракцию воздушно-сухого сырья 70% этиловым спиртом в соотношении 1 г сырья на 50 мл спирта на кипящей водяной бане в течение 90 минут, с последующей пробоподготовкой и определением оптической плотности методом дифференциальной спектрофотометрии с использованием стандартного образца цинарозида, а при его отсутствии - с использованием значения теоретического удельного показателя поглощения. При этом получают водно-спиртовое извлечение из листьев цефалярии гигантской путем однократной экстракции воздушно-сухого сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм; количественное определение суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид проводят при длине волны 406 нм и содержание суммы флавоноидов, выраженное в процентах, в пересчете на цинарозид рассчитывают по математическим формулам. Изобретение обеспечивает возможность количественного определения суммы флаваноидов в листьях Цефалярии гигантской в пересчете на цинарозид. 4 ил., 2 пр.

Description

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в центрах контроля качества лекарственных средств и контрольно-аналитических лабораториях при проведении количественного определения суммы флавоноидов в листьях цефалярии гигантской.
Цефалярия гигантская [Cephalaria gigantea (Ledeb.) Bobrov] - вид рода Cephalaria (L.) Schrad., представляющий собой крупный многолетник до двух метров в высоту. Встречается в Южной Европе, Западной и Центральной Азии, а также в Северной и Южной Африке [1, 2].
Действующая система контроля качества требует постоянного усовершенствования подходов к стандартизации биологически активных соединений (БАС) с использованием современных методов анализа и актуальных данных об их свойствах, позволяющих дифференцированно определять конкретные группы биологически активных соединений. С этой целью необходимо разрабатывать новые, а также усовершенствовать уже имеющиеся методы количественного определения БАС, как фармакопейным, так и в малоизученном перспективном сырье, к которому относятся листья цефалярии гигантской [3].
Изучение химического состава малоизученных перспективных растительных объектов является важным направлением в современной фармации. Растение содержит БАС – тритерпеноиды, фенолкарбоновые кислоты и их производные, а также флавоноиды. Известно применение цефалярии гигантской в народной медицине, в качестве жаропонижающего, отхаркивающего, вяжущего и гемостатического средства [4, 5].
Анализ патентной и научной литературы показал: прототип способа определения действующих веществ в листьях Цефалярии гигантской [Cephalaria gigantea (Ledeb.) Bobrov] отсутствует. Об этом, в частности, свидетельствует отсутствие раздела определения действующих веществ в нормативно-технической документации.
Из RU2554780 C1 известен способ количественного определения суммы флавоноидов методом дифференциальной спектрофотометрии, в пересчете на цинарозид в Желчегонном сборе №3. Данная методика включает такие стадии как экстракцию сырья 70% этиловым спиртом, реакцию комплексообразования с хлоридом алюминия, измерение оптической плотности электронного спектра испытуемого раствора при аналитической длине волны 400 нм и расчет содержания суммы флавоноидов на основе значений оптической плотности комплекса государственного стандартного образца цинарозида с алюминием хлоридом.
Данный метод взят нами в качестве наиболее близкого аналога (прототипа). Использование этого способа для определения суммы флавоноидов в листьях Цефалярии гигантской не представляется возможным из-за отличия: в химическом составе растений; в консистенции и структуре растительного материала; в спектральных характеристиках; в последовательности выполнения аналитических операций.
Таким образом, целью изобретения является разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в листьях Цефалярии гигантской.
Техническим результатом является создание способа количественного определения суммы флавоноидов в листьях Цефалярии гигантской в пересчете на цинарозид.
Технический результат достигается тем, что экстракцию сырья осуществляют однократно, в качестве экстрагента используют этиловый спирт в концентрации 70% в соотношении 1 г сырья к 50 мл спирта, количественное определение суммы флавоноидов в листьях Цефалярии гигантской проводят методом дифференциальной спектрофотометрии при длине волны 406 нм в пересчете на цинарозид; содержание суммы флавоноидов X, выраженное в процентах, в пересчете на цинарозид и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:
,
где
D – оптическая плотность испытуемого раствора;
D o – оптическая плотность раствора стандартного образца (СО) цинарозида;
m – масса сырья, г;
m о – масса СО цинарозида, г;
W – потеря в массе при высушивании, %.
В случае отсутствия СО цинарозида целесообразно использовать рассчитанное значение удельного показателя поглощения при 406 нм – 323. В этом случае содержание суммы флавоноидов X, выраженное в процентах, в пересчете на цинарозид и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:
,
где
D – оптическая плотность испытуемого раствора;
m – масса сырья, г;
323– удельный показатель поглощения (E) СО цинарозида при 406 нм;
W – потеря в массе при высушивании, %.
Все результаты были статистически обработаны. Ошибка единичного количественного определения составила ±0,42%.
Способ реализуется следующим образом.
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл 70% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарированных весах с точностью до ±0,01. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 90 мин. Затем ее охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (красная полоса). Испытуемый раствор готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 % (испытуемый раствор А). Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 406 нм через 40 мин после приготовления. В качестве раствора сравнения раствор, используют раствор, полученный следующим образом: 1 мл извлечения (1:50) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора спиртом этиловым 96% до метки.
Приготовление раствора стандартного образца цинарозида.
Около 0,02 г (точная навеска) цинарозида помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 15 мл 70% этилового спирта при нагревании на водяной бане. После охлаждения содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем раствора 70% этиловым спиртом до метки (раствор А цинарозида). 1 мл раствора А цинарозида помещают в мерную колбу на 25 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 % (испытуемый раствор Б цинарозида). Раствор сравнения готовят следующим образом: 1 мл раствора А цинарозида помещают в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 % (раствор сравнения Б цинарозида). Содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
,
где D – оптическая плотность испытуемого раствора; D o – оптическая плотность раствора СО цинарозида; m – масса сырья, г; m о – масса СО цинарозида, г; W – потеря в массе при высушивании, %.
В случае отсутствия СО цинарозида целесообразно использовать рассчитанное значение удельного показателя поглощения при 406 нм – 323.
,
где D – оптическая плотность испытуемого раствора; m – масса сырья, г; 323– удельный показатель поглощения (E) СО цинарозида при 406 нм; W – потеря в массе при высушивании, %.
При изучении спектральных характеристик было выявлено, что именно цинарозид (Фигура 1) определяет характер кривой поглощения водно-спиртового извлечения из листьев цефалярии гигантской. Определено, что в УФ-спектре водно-спиртового извлечения цефалярии гигантской наблюдается батохромный сдвиг длинноволновой полосы флавоноидов (Фигура 2), как и в случае цинарозида (Фигура 3).
Изучение УФ-спектров показало, что раствор СО цинарозида в присутствии алюминия хлорида имеет максимум поглощения при длине волны 406 нм. В УФ-спектре водно-спиртового извлечения из листьев цефалярии гигантской в дифференциальном варианте обнаруживается при длине волны 406 нм максимум поглощения, который соответствует максимуму поглощения спиртового раствора цинарозида.
Данный факт позволяет проводить спектрофотометрическое определение суммы флавоноидов в листьях цефалярии гигантской при аналитической длине волны 406 нм.
Также нами было изучено влияние экстрагента на процесс экстракции. В таблице (Фигура 4) представлена зависимость выхода флавоноидов из листьев цефалярии гигантской от концентрации экстрагента. В результате эксперимента в качестве оптимального экстрагента нами был выбран 70% этиловый спирт, так как выход действующих веществ из сырья при его использовании максимален.
Предлагаемый способ поясняется следующими примерами.
Пример 1
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл 70% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарированных весах с точностью до ±0,01. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 90 мин. Затем ее охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (красная полоса). Испытуемый раствор готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 % (испытуемый раствор А). Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 406 нм через 40 мин после приготовления. В качестве раствора сравнения раствор, используют раствор, полученный следующим образом: 1 мл извлечения (1:50) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора спиртом этиловым 96% до метки.
Приготовление раствора стандартного образца цинарозида.
Около 0,02 г (точная навеска) цинарозида помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 15 мл 70% этилового спирта при нагревании на водяной бане. После охлаждения содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем раствора 70% этиловым спиртом до метки (раствор А цинарозида). 5 мл раствора А цинарозида помещают в мерную колбу на 25 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 % (испытуемый раствор Б цинарозида). Раствор сравнения готовят следующим образом: 5 мл раствора А цинарозида помещают в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 % (раствор сравнения Б цинарозида). Содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
,
где
0,3801 – оптическая плотность испытуемого раствора;
0,6623 – оптическая плотность раствора СО цинарозида;
1,0032 – масса сырья, г;
0,0025 – масса СО цинарозида, г;
1,7 – потеря в массе при высушивании, %.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид –2,9%.
Пример 2
В случае отсутствия СО цинарозида целесообразно использовать рассчитанное значение удельного показателя поглощения при 406 нм – 323.
,
где
0,3825 – оптическая плотность испытуемого раствора;
1,0028 – масса сырья, г;
323– удельный показатель поглощения (E) СО цинарозида при 406 нм;
1,7 – потеря в массе при высушивании, %.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид x=3,0%, что сравнимо со значением, полученном в примере 1.
Таким образом, предлагаемый способ количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид в листьях цефалярии гигантской с использованием дифференциальной спектрофотометрии разработан впервые для данного вида сырья и обладает следующими преимуществами:
1. Разработанный метод является специфичным и селективным, а также позволяет проводить экстракцию сырья однократно, поскольку в качестве экстрагента используется 70% этиловый спирт, позволяющий исчерпывающе извлекать целевые вещества (флавоноиды).
2. Пересчет суммы флавоноидов идет на специфическое для листьев цефалярии гигантской вещество - цинарозид.
3. Ошибка единичного определения предлагаемого способа составляет ±0,42%, что свидетельствует об объективности разработанного способа и более высокой точности.
Этот способ можно применять в центрах контроля качества лекарственных средств, на фармацевтических предприятиях и контрольно-аналитических лабораториях при проведении количественного анализа листьев цефалярии гигантской (Cephalaria gigantea (LEDEB.) Bobrov).
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ:
1. Е. Г. Бобров, И. Т. Васильченко, С. Г. Горшкова, Ан. А. Федоров, Флора СССР. Том XXIV. – Издательство академии наук СССР. – Москва, Ленинград, 1957. – с. 29-30.
2. И. А. Губанов, К. В. Киселёва, В. С. Новиков, В. Н. Тихомиров. Иллюстрированный определитель растений Средней России. Том 2: Покрытосеменные (двудольные: раздельнолепестные). – Москва: Товарищество научных изданий КМК, Институт технологических исследований, 2003.
3. Т. Л. Киселева, Ю. А. Смирнова, Лекарственные растения в мировой медицинской практике: государственное регулирование номенклатуры и качества. – М., 2009.
4. И. С. Мовсумов, Э. А. Гараев, Химия растительного сырья, №3, с. 5-10 (2010).
5. А. В. Куркина, Флавоноиды фармакопейных растений: монография. – Самара: СамГМУ Росздрава: ООО «Офорт», 2012. – 290 с.

Claims (16)

  1. Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях цефалярии гигантской, включающий однократную экстракцию воздушно-сухого сырья 70% этиловым спиртом в соотношении 1 г сырья на 50 мл спирта на кипящей водяной бане в течение 90 минут, с последующей пробоподготовкой и определением оптической плотности методом дифференциальной спектрофотометрии с использованием стандартного образца цинарозида, а при его отсутствии - с использованием значения теоретического удельного показателя поглощения,
  2. отличающийся тем, что получают водно-спиртовое извлечение из листьев цефалярии гигантской путем однократной экстракции воздушно-сухого сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм; количественное определение суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид проводят при длине волны 406 нм и содержание суммы флавоноидов Х, выраженное в процентах, в пересчете на цинарозид рассчитывают по формуле:
  3. ,
  4. где
  5. D – оптическая плотность испытуемого раствора;
  6. D o – оптическая плотность раствора СО цинарозида;
  7. m – масса сырья, г;
  8. m о – масса СО цинарозида, г;
  9. W – потеря в массе при высушивании, %;
  10. в случае отсутствия СО цинарозида целесообразно использовать рассчитанное значение удельного показателя поглощения E стандартного образца цинарозида при 406 нм, равное 323:
  11. ,
  12. где
  13. D – оптическая плотность испытуемого раствора;
  14. m – масса сырья, г;
  15. 323– удельный показатель поглощения (E) СО цинарозида при 406 нм;
  16. W – потеря в массе при высушивании, %.
RU2023110652A 2023-04-25 Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях цефалярии гигантской RU2807831C1 (ru)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2807831C1 true RU2807831C1 (ru) 2023-11-21

Family

ID=

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100455297C (zh) * 2006-03-03 2009-01-28 中国科学院长春应用化学研究所 注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的质量检测方法
RU2554780C1 (ru) * 2014-06-05 2015-06-27 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ количественного определения флавоноидов в желчегонном сборе № 3
RU2696770C1 (ru) * 2018-11-08 2019-08-06 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ количественного определения суммы флавоноидов в траве монарды дудчатой

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100455297C (zh) * 2006-03-03 2009-01-28 中国科学院长春应用化学研究所 注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的质量检测方法
RU2554780C1 (ru) * 2014-06-05 2015-06-27 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ количественного определения флавоноидов в желчегонном сборе № 3
RU2696770C1 (ru) * 2018-11-08 2019-08-06 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ количественного определения суммы флавоноидов в траве монарды дудчатой

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
КАЛАШНИКОВА О.А. и др. Цефалярия гигантская как перспективный источник биологически активных соединений // ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ ОБРАЗОВАНИЕ САМГМУ. ИСТОРИЯ, СОВРЕМЕННОСТЬ, ПЕРСПЕКТИВЫ. Сборник материалов. Самарский государственный медицинский университет. Самара, 2021, стр.291-296. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2696770C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в траве монарды дудчатой
RU2701726C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях тополя черного
RU2669162C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях боярышника кроваво-красного
CN103940929B (zh) 一种治疗心脑血管疾病的中药注射液的检测方法
CN109060985A (zh) 一种俄色果提取物及其质量检测方法
RU2807831C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях цефалярии гигантской
RU2747483C1 (ru) Способ количественного определения суммы фенилпропаноидов в цветках сирени обыкновенной
CN112666280B (zh) 一种青黛辐照前后主要成分的测定方法
Kurkin et al. Methodological approaches to standardization of rhizomes and roots of Eleutherococcus senticosus
CN106706532A (zh) 苦瓜叶中总黄酮含量的检测方法
Olennikov et al. Quantitative analysis of polysaccharides from Plantago major leaves using the Dreywood method
CN110455934B (zh) 一种金樱根指纹图谱的建立方法及金樱根的质量检测方法
Taufiq et al. Antioxidant Activity of Ethanol and n-hexane Extracts of Javanese Bark (Lannea coromandelica) Using the DPPH Method
RU2786440C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в траве чернушки посевной
RU2772821C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в цветках бархатцев отклоненных
Savitri et al. Antioxidant, Cytotoxic Activity and Protein Target Inhibition of Ethyl Acetate Fraction Melinjo Seed (Gnetum gnemon L.) by In Vitro and In Silico Studies on HeLa Cervical Cancer Cells
RU2752316C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях сирени обыкновенной
RU2695760C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в плодах боярышника мягковатого
RU2806047C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в траве солодки голой
RU2806035C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в траве тысячелистника обыкновенного
Kurkina et al. Development of quantitative determination methods for total flavonoids in Tagetes patula L. herbs
RU2747482C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в листьях ореха грецкого
RU2747417C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в коре ореха черного
RU2782618C1 (ru) Способ количественного определения суммы флавоноидов в почках дуба черешчатого
RU2763264C1 (ru) Способ количественного определения суммы фенилпропаноидов в моринги масличной листьях