MD4890C1

MD4890C1 - Compoziţie de vaccin combinat, care conţine o doză redusă de poliovirus inactivat, şi procedeu de preparare a acesteia

Info

Publication number: MD4890C1
Application number: MDA20210028A
Authority: MD
Inventors: Индер Джит ШАРМА; Кумар РАКЕШ; Джаганатан Сембураккианнан КИЛВАНИ; Манохар ДОДДАПАНЕНИ; Анил Вьянкатрао ШИТОЛЕ
Original assignee: Serum Institute Of India Private Ltd
Priority date: 2018-10-12
Filing date: 2019-10-04
Publication date: 2024-11-30
Also published as: WO2020075184A1; CO2021004556A2; KR20210091158A; KR102822878B1; US12090195B2; EA202190778A1; MX2021004233A; AU2019359564B2; EP3863665A1; AR116631A1; TW202034948A; PE20211648A1; GEP20247684B; CN113164577A; MD4890B1; JOP20190242A1; UY38412A; SG11202103622SA; CA3115803A1; CN113164577B

Abstract

Invenţia se referă la o compoziţie imunogenică complet lichidă, care include o combinaţie de antigeni/imunogeni. Compoziţia imunogenică include o cantitate optimă de antigeni/imunogeni pentru asigurarea protecţiei împotriva unui şir de boli. Compoziţia manifestă imunogenicitate şi stabilitate îmbunătăţite. De asemenea, prezenta invenţie se referă la un procedeu de preparare a compoziţiei de vaccin.

Description

Invenţia se referă la domeniul biotehnologiei, în particular, ea se referă la o metodă de pregătire a compoziţiei de vaccin combinat cu doze multiple, care include un grup de antigeni/imunogeni şi conservant. Prezenta invenţie în continuare se referă la o metodă îmbunătăţită în domeniul producerii vaccinului combinat.

Un vaccin combinat care poate oferi imunogenitate împotriva unui număr larg de boli este mereu avantajos faţă de un vaccin monovalent, deoarece el reduce numărul de vaccinuri administrate, reduce complicaţiile asociate cu injecţiile intramusculare multiple, reduce costurile de administrare şi producere, micşorează costurile de stocare, reduce riscul vaccinărilor întârziate sau ratate şi îmbunătăţeşte complianţa pacientului prin reducerea numărului de vaccinări separate. În plus, preparatele complet lichide ale vaccinului combinat au avantage disticte peste acelea care necesită reconstituirea. Timpul mediu de pregătire se dovedeşte a fi aproape jumătate pentru vaccinul complet lichid comparat cu vaccinul care nu este complet lichid. Aproape tot personalul medical (97,6%) a stabilit că ei ar prefera utilizarea vaccinului complet lichid în practica lor de zi cu zi. (Soubeyrand B. et al. Assessment of preparation time with fully-liquid versus non-fully liquid paediatric hexavalent vaccines. A time and motion study; Vaccine, 2015, vol. 33, p. 3976-3982).

Vaccinurile combinate disponibile şi cunoscute în prezent nu pot conţine formulări potrivite de antigeni potriviţi în forme imunogenice potrivite pentru atingerea nivelelor dorite de siguranţă, eficacitate şi imunogenicitate într-o populaţie umană susceptibilă pentru un număr de boli într-o singură administrare. Numărul diferitor combinaţii de vaccinuri care pot fi create cu doar câţiva antigeni suplimentari este considerabil. Prin adăugarea de 1-4 alte componente antigenice (de ex. HIB (liofilizat sau lichid), HBV, IPV, HAV) la oricare DTwP sau DTaP, sunt 44 de combinaţii de vaccinuri posibile diferite care pot fi generate. Numărul ar creşte la sute dacă componentele individuale de la diferiţi producători au fost luate în considerare. Deoarece fiecare vaccin combinat nou individual (ţinând cont de diferenţele în componenţi conform sursei) trebuie dezvoltat separat pentru a demonstra siguranţă, stabilitate, compatibilitate şi eficacitate, dezvoltarea tuturor acestor vaccinuri devine o sarcină provocatoare.

Antigenii vaccinului combinat

Antigenii difteriei şi tetanosului

Difteria şi tetanosul sunt infecţii acute cauzate deCorynebacterium difteriae şiClostridium tetani, respectiv. În amble cazuri este o exotoxină potentă al acestor bacterii care este responsabilă pentru boala clinică. Vacinurile care oferă protecţie împotriva acestor bacterii conţin toxine care sunt modificate chimic pentru a forma toxoizi, o toxină chimic modificată care nu mai este toxică, dar este încă antigenică. Toxinele difteriei şi tetanosului sunt produse prin creştereaCorynebacterium difteriae şiClostridium tetani, într-un mediu ce conţine extract bovin. Toxinele sunt inactivate folosind următorul tratament care include: termal, UV, formalină/formaldehidă, glutaraldehidă, acetiletilenimină, etc. pentru crearea toxoizilor (Toxoid difteric (D) şi Toxoid tetanos (T)). Preocupările cu privire la encefalopatia spongiformă bovină (BSE), encefalopatia spongiformă transmisibilă (TSE), boala Creutzfeldt-Jakob (CJD şi variantele bolilor CJD) pot apărea de la componentele animale folosite în mediul de creştere ce conţine extract bovin răspândindu-se prin vaccin (WHO Guidelines on Transmissible Spongiform Encephalopathies in relation to Biological and Pharmaceutical Products, 2003 & EMEA/CPMP/BWP/819/01, 24 April 2001).

Antigeni pertussis

Introducerea de vaccinuri cu celule întregi compuse din organisme deBordetella pertussis inactivate chimic sau prin încălzire, care în anii 1940 a fost responsabilă pentru o reducere dramatică în incidenţa de tusă convulsivă cauzată deB. pertussis.

Vaccinurile DTP cu celule întregi sunt frecvent asociate cu mai multe efecte adverse locale (de ex., eritem, inflamaţie, şi durere în locul injectării), febră, şi alte evenimente sistemice uşoare (de ex., somnolenţă, iritabilitate, şi anorexie) (Cody C.L., Baraff L.J., Cherry J.D., Marcy S.M., Manclarck C.R. The nature and rate of adverse reactions associated with DTP and DT immunization in infants and children. Paediatrics, 1981, vol. 68, p. 650-660) & (Long S.S., DeForest A., Pennridge Pediatric Associates, et al. Longitudinal study of adverse reactions following Diphtheria-tetanos-pertussis vaccine in infancy. Paediatrics, 1990, vol. 85, p. 294-302). Efecte sistemice mai severe (de ex., convulsii {cu sau fără febră} şi episoade hipotonice hiporesponsive) apar mai rar (raport de 1 caz la 1,750 doze administrate) printre copiii care primesc vaccina DTP cu celule întregi (Cody C.L., Baraff L.J., Cherry J.D., Marcy S.M., Manclarck C.R. The nature and rate of adverse reactions associated with DTP and DT immunization in infants and children. Paediatrics, 1981, vol. 68, p. 650-660). Encefalopatia acută apare chiar mai rar (raport de 0…10,5 cazuri la un milion de doze administrate). Experţii sunt de acord că vaccinul pertussis cu celule întregi provoacă leziuni cerebrale de durată în unele cazuri rare (Institute of Medicine; DPT vaccine and chronic nervous system dysfunction, a new analysis; Washington D.C., National Academy Press, 1994).

Mai multe rapoarte citează o relaţie între vaccinarea cu pertussis cu celule întregi, reactogenitate şi efectele secundare serioase care au dus la un declin în acceptarea vaccinului şi epidemiile reînnoite în consecinţă (Miller D.L., Ross E.M., Alderslade R., Bellman M.H., and Brawson N.S.B. Pertussis immunization and serious acute neurological illness in children: Brit. Med. J. 1981, vol. 282, p. 1595-1599).

Reacţiile adverse asociate cu pertussis cu celule întregi (wP) sunt o piedică pentru utilizarea lor continuă la nivel mondial şi prin urmare vaccinurile combinate bazate pe wP au fost treptat înlocuite în lumea industrializată prin vaccinurile combinate bazate pe pertussis acelular.

Mai recent, un vaccin cu component definit contra pertussiss a fost dezvoltat. Toate vaccinurile hexavalente lichide pe bază de pertussis acelular (DTaP IPV PRP-T-HBsAg) au fost raportate anterior [1].

Infanrix® Hexa (GSK) este în prezent singurul vaccin pediatric combinat hexavalent comercializat la nivel global ce conţine Salk IPV. Acest produs (DTaP3 -IPV-HBV//Hib) este vândut ca o seringă preîmplută a produsului pentavalent co-ambalat cu un antigen PRP-T Hib leofilizat conjugat într-o fiolă separată pentru a fi reconstituită cu restul vaccinului înainte de utilizare.

Al doilea vaccin hexavalent, Hexyon® (numit şi Hexacima® şi Hexaxim®) este un hexavalent total lichid de la Sanofi Pasteur; totuşi este de asemenea cu aP. Acest vaccin probabil este destinat pentru pieţele private din Europa şi la nivel mondial.

Un vaccin combinat heptavalent este în curs de dezvoltare de Bharat Biotech International care constă din DT, pertussis acelular, Sabin IPV (tip 1: 40 DU, tip 2: 8 DU, tip 3: 32 DU), o singură tulpină inactivată de rotavirus (tulpina G9, adică tulpină 116E), un conjugat al gripeiHaemophilus de tip b PRP conjugat la TT şi un vaccin recombinant împotriva hepatitei B.

Totuşi au apărut preocupări privind eficacitatea pe termen lung al vaccinulor pertussis acelular (aP), în special în condiţiile ţărilor în curs de dezvoltare. Rapoartele recente sugerează că imunitatea la pertussis scade în adolescenţă şi că acesta este responsabil pentru o creştere de cazuri la copii sub vârsta de şase luni, înainte ca ei să fie complet vaccinaţi. Eficacitatea vaccinului a fost estimată de a fi 24 procente la cei de la 8 la 12 ani imunizaţi în pruncie cu aP. Un studiu observaţional în Australia de asemenea a arătat o rată mai înaltă de cazuri printre adolescenţii cărora li s-a administrat vaccinul aP în pruncie decât printre cei cărora li s-a administrat vaccinul wP (risc relativ de 3,3, 95 procente, interval de încredere 2,4…4,5).

Din perspectiva costurilor, antigenii aP au depăşit istoric costul antigenilor wP cu un factor de la 10 la 30 datorită diferenţelor de producere şi costurile dreptului de autor şi deci constituie o povară economică pentru dezvoltarea ţărilor. Ca urmare, costul vaccinlor hexavalente bazate pe wP va fi mai potrivită pentru utilizare în sectorul public al ţărilot cu resurse reduse.

Prin urmare, utilizarea pertussis cu celule întregi (wP) în vaccinul hexavalent destinat pentru ţările în curs de dezvoltare a devenit important din cauza costului şi preocupărilor apărute privind eficacitatea pe termen lung al vaccinulor aP, în special în condiţiile ţărilor în curs de dezvoltare.

Comparat cu cele mai bune vaccinuri pertussis cu celule întregi, Vaccinurile aP nu sunt la fel de eficiente în programele de imunizare în masă (Vickers et al., 2006; Cherry, 2012).

Studiile recente ale focarelor în populaţiile înalt imunizate au arătat că durata protecţiei a vaccinlor aP este prea scurtă (Klein et al. 2012; Misegades et al., 2012), rezultând într-o descreştere a imunităţii la copii mai mari şi adolescenţi, şi o creştere corespunzătoare de cazuri în acest grup de vârstă (Skowronski et al., 2002; Klein et al., 2012). Aceasta este în contrast cu vaccina wP, care oferă protecţie bună în anii adolescenţei (Klein et al., 2012). Ca urmare a acestor neajunsuri, în ţările care au trecut la vaccinul aP în anii 1990 acum avem o generaţie de copii nu doar mai puţin protejată împotriva pertussis, dar care poate, de asemenea, fi mai puţin receptivi la rapel, deoarece vaccinul care este administrat la un copil poate determina răspunsul lor imunitar la vaccinarea mai târzie de rapel (Podda et al., 1995; Mascart et al., 2007; Sheridan et al., 2012; Liko, Robison and Cieslak, 2013; Smits et al,. 2013).

Unul din cei mai importanţi factori care contribuie la reactogenitatea wP este prezenţa lipozaharidelor (LOS), endotoxinelor din membrana externă bacteriană.

Inactivarea toxinei în vaccina wP poate fi realizată prin metode variate, dar toxina labila la încălzire activă nu ar trebui să fie detectată în produsul final. Procesul global de pertussis celular (wP) pentru inactivarea toxinei wP practicat de mulţi producători include tratamentul termic/formalina. Mai multe rapoarte citează utilizarea Thimerosal-ului pentru inactivarea wP. Totuşi, utilizarea Thimerosal-ului provoacă pierderea antigenicităţii IPV (Deleterious effect of thimerosal on the potency of inactivated poliovirus vaccine. Vaccine. 1994, vol. 12, no 9, p. 851-856), şi prin urmare în cazul unui vaccin combinat care conţine IPV, poate fi necesar de prezentat într-o fiolă separată de Thimerosal ce conţine wP ca sa-şi păstreze potenţa în timp sau schimbarea sursei de inactivare masivă a pertussis. Unii antigeni, de ex. PT active, pot de asemenea servi ca modificatori ai răspunsului imun, şi diferenţe semnificative în răspunsuri imune la variaţi antigeni între diferite vaccinuri au fost observate (WHO, 1993).

Extracţia chimică a LOS rezultată într-o descreştere semnificativă a conţinutului de endotoxină (20%) şi un declin surprinzător a toxicităţii endotoxinei asociate (până la 97%), în funcţie de testulin vitro sauin vivo utilizat. Extracţia LOS n-a afectat integritatea produsului şi, mai important, n-a afectat potenţa şi/sau stabilitatea DTP. În plus, nu s-au observat diferenţe în răspunsurile anticorpilor şi T-celulelor (Waldely Oliveira Dias et. Al. An improved whole cell pertussis vaccine with reduced content of endotoxin. Human Vaccines & Immunotherapeutics. February 2012, vol. 9, no 2, p. 339-348)

Antigenii hepatitelor B

Există diverse tulpini ale virusului de hepatită. Hepatita B este a boală cauzată de virusul hepatitei B (HepB) care infectează ficatul oamenilor, şi provoacă o inflamaţie numită hepatita. Vaccinul împotriva bolii conţine una din proteinele învelişului viral, antigenul de suprafaţă a hepatitei B (HBsAg). Vaccinurile care au fost folosite pentru imunizarea în masă sunt acum disponibile, de exemplu produsul Recombivax HB® şi Comvax® de la Merck, Engerix-B® şi Pediarix® de la Glaxo SmithKlinie Biologicals. Vaccinul combinat având componentul hepatitei B a fost asociat atât cu rezultate mai ridicate de completare, cât şi de conformitate în comparaţie cu vaccinul HepB cu un singur antigen [2]. Unele referinţe citează adsorbţia antigenului de suprafaţă a hepatitei B pe fosfat de aluminiu în combinaţie cu alţi antigeni. Hexavac® un vaccin combinat care a fost retras de pe piaţă datorită imunogenităţii joase al componentului hepatitei B. Există deci o necesitate de o compoziţie de vaccin combinat care include un antigen al hepatitei B cu imunogenicitate adecvată sau îmbunătăţită.

AntigeniiHaemophilus influenzae (Hib)

Haemophilus influenzae este un coccobacil Gram-negativ care este o parte normală a florei tractului respirator superior.Haemophilus influenzae de tip b (Hib b) este o cauză majoră a infecţiilor cu meningită invazivă transmisă prin sânge la copiii mici şi cauza majoră a meningitei în primii 2 ani de viaţă. Imunizarea împotrivaHaemophilus influenzae a început în Canada în 1987 cu un vaccin polizaharidic (fosfat de poliriboză ribitol (PRP)). Capsula de fosfat de poliribosilribitol (PRP) a Hib este un factor major al virulenţei pentru organism. Anticorpul la PRP este factorul primar la activitatea bactericidă serică, şi creşterea nivelurilor de anticorpi sunt asociate cu descreşterea riscului de boală invazivă. PRP este un antigen independent al T-celulelor şi prin urmare este caracterizat prin a) inducţia unui răspuns slab la anticorpi la sugari şi copii cu vârsta sub 18 luni, b) un răspuns variabil şi cantitativ mai mic la anticorpi decât cel observat la antigenii dependenţi de T-celule, c) producerea unei proporţii superioare de imunoglobulină M (IgM), şi d) incapacitatea de a induce un răspuns de rapel.

Vaccinul iniţial bazat doar pe componentul PRP s-a dovedit a fi ineficient pentru sugari. În continuare eforturile au fost direcţionate spre un vaccin conjugat PRP, în care PRP-ul este conjugata la proteina numită proteina purtătoare ca proteina membranei externe aNeisseria meningitidis, toxoid difteric, toxoid tetanos şi CRM 197. Incluziunea componenţilor Hib-conjugaţi în vaccinurile combinate au fost asociate cu imunogenicitatea Hib redusă. În plus, Hib-conjugaţii sunt instabili în mediu apos şi nu pot supravieţui depozitarea îndelungată în această formă. Prin urmare, polizaharida PRP aHaemophilus influenzae b (Hib) este formulată frecvent ca un solid uscat, care este reconstituit în timpul livrării cu o formulare lichidă de alţi antigeni. De exemplu în Infanrix® hexa [3].

Antigenul poliomielitei

Diferite feluri de vaccin sunt disponibile:

Un vaccin viu atenuat (slăbit) oral împotriva virusului de poliomielită (OPV) dezvoltat de Dr. Albert Sabin în 1961. OPV, care include tulpini Sabin, este administrat oral.

Un vaccin împotriva virusului de poliomielită inactivat (omorât) (IPV) dezvoltat în 1955 de Dr. Jonas Salk. IPV, care include tulpinile Salk, este administrat ca o injecţie.

Recent, virusul de poliomielită Sabin inactivat, care a fost pregătit prin inactivarea tulpinelor de virus de poliomielită Sabin cu formalina, a fost dezvoltat pentru injecţie şi de asemenea a fost disponibil în produsele comerciale.

Ambele vaccine, vie atenuată (OPV) şi inactivată (IPV), împotriva virusului de poliomielită au fost efective în controlul bolii virusului de poliomielită la nivel mondial. Vaccinul împotriva virusului de poliomielită poate include tulpinile Salk sau Sabin.

În 1955, Dr. Jonas Salk a reuşit prin inactivarea virusului de poliomielită de tip sălbatic, astfel făcând-o disponibilă într-o formulare de tip injecţie, şi numind-o ca tulpina Salk, care include Mahoney de tip 1, MEF de tip 2, şi Saukett de tip 3 care au fost folosite în vaccinul împotriva bolii virusului de poliomielită. Tulpinele Sabin includ tulpinele Sabin 1 şi Sabin 2.

Doza standard de vaccinuri împotriva virusului de poliomielită acceptată în prezent conţine 40 unităţi de antigen D de virus de poliomielită inactivat de tip 1 (Mahoney), 8 unităţi de antigen D de virus de poliomielită inactivat de tip 2 (MEF-I) şi 32 unităţi de antigen D de virus de poliomielită inactivat de tip 3 (Saukett) de ex. Infanrix-hexa® [3].

IPV este în prezent disponibil fie ca o formulare neadjuvantă de sine stătătoare, sau în diverse combinaţii, inclusiv DT-IPV (cu toxoizi difteric şi tetanos) şi vaccin hexavalent-IPV (în plus cu pertussis, hepatita B,Haemophilus influenzae b şi adjuvant) de ex. Infanrix® hexa [3].

Totuşi, în comparaţie cu OPV, costul total de producere a IPV este semnificativ mai mare. Acest lucru se datorează în principal cerinţelor pentru: (i) mai mult virus per doză; (ii) procesare suplimentară în aval (de ex. concentrarea, purificare şi inactivare), şi testare QC asociată (iii) pierderea antigenului sau recuperarea slabă în aval şi iv) întreruperea. Până în prezent, provocarea financiara a fost un dezavantaj major pentru inovarea IPV şi implementarea în ţările cu venituri mici şi medii.

Viitoarea cerere globală pentru IPV după iradicarea virusului de poliomielită ar putea creşte de la nivelul curent de 80 milioane doze la 450 milioane doze pe an. În consecinţă, este posibil să fie necesare abordări pentru „extinderea” aprovizionării cu IPV.

Solicitanţii prezenţi au găsit în mod surprinzător că o doză redusă de IPV nu prezintă inferioritate/protecţie echivalentă împotriva virusului de poliomielită în comparaţie cu o doză standard a antigenului IPV. Formulări eficiente de vaccin cu doză redusă care oferă protecţie împotriva infecţiei folosind o doză mai joasă a antigenului IPV sunt de dorit în situaţiile în care aprovizionarea cu vaccin convenţional este insuficientă pentru a atinge necesităţile globale sau în care costul de fabricaţie a vaccinului convenţional împiedică vânzarea vaccinului la un preţ care este accesibil pentru ţările în curs de dezvoltare. De asemenea expunerea la doză mai joasă de IPV; comparat cu fromulările comerciale existente ar putea fi mai sigură. Astfel diverse strategii de a face IPV-ul disponibil la preţuri mai accesibile trebuie să fie evaluate. Prin urmare un vaccin combinat care include doză redusă IPV ar putea s-o facă în continuare ieftină şi uşor de administrat.

În cazul vaccinurilor antigripale pandemice utilizarea adjuvanţilor a permis reducerea dozei, a crescut disponibilitatea şi a redus costul vaccinului. Prin urmare, s-a speculat că o formulare de vaccin adjuvantă a IPV ar reduce costul şi de asemenea ar creşte numărul de doze IPV disponibile la nivel mondial.

În continuare, sărurile de aluminiu au fost considerate sigure, sunt deja folosite în vaccinurile combinate ce conţin IPV, au cele mai mici obstacole de dezvoltare şi sunt ieftine la fabricare. Totuşi, adjuvanţii din aluminiu nu sunt cunoscuţi pentru că permit reducerea semnificativă a dozei.

În plus, antigenul pertussis cu celule întregi prezent în vaccinul hexavalent s-a dovedit a fi un stimulator imun puternic. Datorită efectului stimulator imun al ambilor, adjuvantului fosfat de aluminiu şi vaccinului pertussis cu celule întregi, noi presupunem să primim un răspuns imun bun cu doză redusă de IPV.

Alţi antigeni

Alţi antigeni care pot fi incluşi în vaccinul combinat suntHaemophilus influenzae (serotipurile a, c, d, e, f şi tulpinile neîncapsulate), hepatita (tulpinile A, C, D, E, F şi G),Neisseria meningitidis A, B, C, W, X, Y, gripa, pneumococii, streptococii, antraxul, dengue, malaria, rujeola, oreion, rubeola, BCG, encefalita Japoneză, rotavirus, variola, friguri galbene, febră tifoidă, zoster, virus de varicelă şi alţii.

Gama şi tipul de antigeni folosiţi într-un vaccin combinat depinde de vârsta populaţiei ţintă pentru care trebuie să fie folosite ca sugari, copii mici, copii, adolescenţi, şi adulţi. Cel mai devreme vaccin combinat cunoscut care poate preveni infecţiile provocate deBordetella pertussis,Clostridium tetani,Corynebacterium difteriae, şi opţional de virusul de poliomielită inactivat (IPV), şi/sau infecţiei virusul hepatitei B, şi/sauHaemophilus influenzae de tip B este cunoscut [4], [5], [6], [7], [8], [9].

Totuşi, fenomenul bine documentat al competiţiei antigenice a complicat şi împiedicat dezvoltarea vaccinului multivalent. Acest fenomen se referă la observaţia că la administrarea simultană a mai multor antigeni adesea rezultă un răspuns diminuat la anumiţi antigeni în raport cu răspunsul imun la aceşti antigeni atunci când sunt administraţi separat.

Între timp, un vaccin cu doze multiple ar trebui să includă un consevant pentru a evita contaminarea cu microbi dăunători. Pentru produsele de vaccinare exportate în ţările slab dezvoltate, vaccinurile cu doze multiple ce conţin un consevant sunt preferate, luând in considerare condiţiile tărilor unde vacinurile trebuie folosite, metodele de distribuţie etc. Examplele de conservanţi care au fost folosiţi includ clorura de benzetoniu (Phemerol), Thiomersal, fenol, formaldehida şi 2-fenoxietanol (2-PE) sunt cunoscute din stadiul anterior. Conservanţii potriviţi pentru vaccin ar trebui să fie ecologici, efectivi împotriva bacteriilor precum drojdiile şi alţi fungi şi lipsit de impact negativ asupra efectului imunogen al vaccinului.

Thiomersal-ul este un derivat al etil mercurului care a fost extensiv folosit în multe vaccinuri ca un conservant. Thimerosal-ul a fost cunoscut pentru prevenirea creşterii organismelor contaminante şi menţinerea condiţiilor sterile pe durata de depozitare sau utilizării produselor de vaccinare, şi multe vaccinuri combinate, care au obţinut Precalificarea WHO (PQ), conţin Thimerosal ca un conservant. Totuşi, există anumite rapoarte referitoare la unele reacţii alergice (aproximativ 16% din populaţie) la Thiomersal în principal sub formă de reacţii de hipersensibilitate locală de tip întârziat, inclusiv roşeaţă şi umflături la locul injectării.

În continuare, vaccinul inactivat împotriva virusului de poliomielită convenţional foloseşte 2-PE ca un conservant în loc de Thiomersal de cand utilizarea Thiomersal-ului ca conservant în vaccinul inactivat împotriva virusului de poliomielită este cunoscut că reduce potenţa vaccinului cu 50% sau mai mult într-o săptămână chiar şi când este depozitat într-un frigider (Deleterious effect of thimerosal on the potency of inactivated poliovirus vaccine Vaccine. 1994, vol. 12, no 9, p. 851-856).

Vaccinurile combinate (inclusiv D, T, wP, Hib, HBsAg, şi IPV) de asemenea utilizează 2-PE într-o concentrarea de 5 mg/mL [10], [11], [12].

Totuşi, s-a constatat că 2-PE are activitate antimicrobiană mai slabă decăt Thimerosal-ul împotriva drojdiilor şi fungilor în vaccinul combinat bazat pe DPT la 2…8°C. Îmbunătăţirea eficacităţii de conservare a vaccinului combinat prin creşterea cantităţii de 2-PE cu scopul pentru a atinge criteriile necesare este una din opţiuni. Totuşi, creşterea concentraţiei 2-PE poate cauza probleme de siguranţă la copii mici care sunt subiecţii care trebuie să primească vaccinurile combinate şi ducând astfel la obstacole de reglementare pentru aprobarea de astfel de vaccin(uri).

Prin urmare, va fi avantajos de îmbunătăţit eficacitatea conservantă a vaccinului combinat prin combinarea 2-PE cu cel puţin un alt conservant care îndeplineşte criteriile de siguranţă şi reglementare. Examplele de conservanţi în afară de 2-PE care pot fi folosiţi includ clorură de benzetoniu (Phemerol), esteri parabenici, fenol, formaldehida şi sunt cunoscut din stadiul anterior.

Metil- şi propilparabenii, alcoolul benzilic s-a constatat că trec testarea antimicrobiană în conformitate cu USP, BP, şi EP. În continuare aceşti conservanţii sunt netoxici, dar efectivi. Toxicitatea parabenilor este relativ joasă, datorită uşurinţei şi rapidităţii cu care corpul se eliberează singur de aceste medicamente. LD50-ul metil parabenului în şareci intraperitoneal este de 1 g/kg. Un amestec de metil şi propil parabeni nu a fost niciodată folosit în vaccinurile comerciale.

Solicitanţii prezenţi au găsit că eficacitatea de conservare a unui amestec de 2-fenoxietanol şi esteri parabenici, (de ex. metil-, propilparabenii) este relativ mai efectivă în comparaţie cu 2-fenoxietanolul singur.

În continuare solicitanţii prezenţi au găsit că imunogenicitatea, reactogenitatea, stabilitatea şi mentenanţa formei potrivite de antigeni într-o compoziţie de vaccin combinat depinde de modul în care compoziţia a fost formulată să includă:

Procesul de producere a antigenilor individuali.

Secvenţa de adiţie a antigenilor.

Utilizarea adjuvanţilor specifici într-o cantitate specifică pentru anumiţi antigeni.

Adsorbţia individuală sau absorbţia combinată a antigenilor pe adjuvanţi, în care absorbţia combinată are avantajele sale în forma uşurinţei de operare şi disavantaje care include faptul, că primii antigeni preadsorbiţi se pot desorbi parţial sau complet pe durata adiţiei ulterioare a antigenilor. Antigenii adăugaţi la ultima etapă nu pot fi adsorbiţi complet, deoarece antigenii anteriori ar putea satura capacitatea de adsorbţie. Antigenii slab adsorbiţi se pot desorbi la depozitare.

Gradul de adsorbţie a antigenilor pe adjuvanţi.

Folosind concentraţia minimă de aluminiu.

Folosind concentraţia optimă şi tipul de conservant.

Utilizarea diferitor parametri inclusiv a agitării, temperaturii şi pH-ului.

Unele din obiectele prezentei dezvăluiri, în care cel puţin un exemplu de realizare aici îl satisface, sunt precum urmează:

Un obiect al prezentei dezvăluiri ameliorează una sau mai mult probleme din stadiul anterior sau cel putin oferă o alternativă utilă.

Un alt obiect al prezentei dezvăluiri este de a oferi un vaccin combinat complet lichid potrivit pentru prevenirea şi profilaxia infecţiilor cauzate de difterie, tetanos, pertussis, virusul de poliomielită,Haemophilus influenzae şi hepatita B sau să prevină, amelioreze, sau încetinească debutul sau progresul manifestărilor clinice a acestora.

Un alt obiect al prezentei dezvăluiri este de a oferi un vaccin combinat complet lichid ce conţine diverse doze reduse de antigeni ai virusului de poliomielită inactivat (IPV) care arată non-inferioritate/protecţie echivalentă împotriva virusului de poliomielită în comparaţie cu a doza standard a antigenului IPV.

Un alt obiect al prezentei dezvăluiri este de a oferi un vaccin combinat complet lichid ce conţine cel puţin un paraben, de ex. conservant metil- sau propilparaben şi 2-fenoxietanol (2-PE), pentru a îmbunătăţit eficacitatea de conservare a vaccinului combinat cu doze multiple.

Un alt obiect al prezentei dezvăluiri este de a oferi o metodă îmbunătăţită de fabricare a unei astfel de compoziţie/formulare a vaccinului combinat în care, vaccinul care prezintă imunogenicitate îmbunătăţită, reactogenitate redusă, stabilitate îmbunătăţită şi îndeplineşte în continuare criteriul de seroprotecţie pentru fiecare din componenţi imunogenici menţionaţi.

Alte obiecte şi avantaje ale prezentei dezvăluiri vor fi mai aparente din descrierea următoare, care nu intenţionează să limiteze nici într-un fel scopul prezentei dezvăluiri.

O compoziţie de vaccin combinat care include doze reduse de antigen al virusului de poliomielită inactivat (IPV) combinate cu alţi antigeni/imunogeni şi cel puţin un ester parabenic de ex. metil- sau propilparaben şi 2-fenoxietanol (2-PE) folosit ca conservant în care eficacitatea de conservare a vaccinului combinat cu doze multiple şi procesul de producere a acestuia este îmbunătăţit.

Prezenta dezvăluire se referă la o compoziţie de vaccin combinat care include:

a) Un toxoid difteric (D) şi toxoid tetanos (T) de puritate superioară produs folosind mediu semisintetic, ulterior detoxifiat şi adsorbit individual pe adjuvantul fosfat de aluminiu, astfel rezultând în îmbunătăţirea imunogenicităţii.

b) Component inactivat cu celule întregi deB. pertussis (wP) preparat folosind o combinaţie a inactivării termice şi chimice, specific tulpiniiBordetella pertussis într-un raport rezultând o reactogenitate redusă şi o potenţă crescută.

c) Antigen polizaharidic capsular (PRP) aHaemophilus influenzae de tipb (Hib) conjugat la o proteină purtătoare (CP).

d) Doză redusă de IPV (virus de poliomelită inactivat) Salk sau Sabin care prezintă eficacitate comparabilă în comparaţie cu doza standard preparată prin utilizarea metodelor îmbunătăţite de inactivare cu formaldehidă şi adsorbit opţional pe adjuvant fosfat de aluminiu.

e) Antigen de suprafaţă a hepatitei B(HepB) adsorbit individual pe adjuvantul fosfat de aluminiu, rezultând astfel o imunogenicitate sporită.

f) Conţinut minim de aluminiu astfel, asigurând o reactogenitate redusă.

g) Cel puţin un ester parabenic de ex. metil sau propil paraben în afară de 2-fenoxietanol (2-PE) ca conservant.

Deşi prezenta dezvăluire poate fi succeptibilă pentru diferite exemple de realizare, anumite exemple de realizare sunt prezentate în următoarea discuţie detaliată, cu înţelegerea că prezenta dezvăluire poate fi considerată un exemplu a principiilor dezvăluirii şi nu intenţionează să limiteze scopul dezvăluirii precum este ilustrat şi dezvăluit în această descriere. Exemplele de realizare sunt oferite astfel încât să transmită temeinic şi pe deplin scopul prezentei dezvăluiri pentru un specialis din domeniu. Sunt expuse numeroase detalii, referitoare la componenţi şi metodele specifice, pentru a oferi o înţelegere deplină a exemplelor de realizare a prezentei dezvăluiri. Pentru un specialis din domeniu va fi evident că detaliile oferite în exemplele de realizare nu ar trebui să fie interpretate ca să limiteze scopul prezentei dezvăluiri. În unele exemple de realizare, compoziţia binecunoscută, procesul binecunoscut, şi tehnicile binecunoscute nu sunt descrise detaliat.

Terminologia este folosită în prezenta dezvăluire, doar cu scopul de a explica un exemplu de realizare particular şi o astfel de terminologie nu va fi considerată să limiteze scopul prezentei dezvăluiri. Precum este folosit în prezenta dezvăluire, formele "o" "un" şi "cel" pot fi intenţionate să includă şi formele la plural, cu excepţia cazului în care contextul sugerează în mod clar altfel.

Termenii primul, al doilea, al treilea, etc., nu ar trebui să fie interpretate astfel ca să limiteze scopul prezentei dezvăluiri deoarece termenii menţionaţi mai sus pot fi folosiţi doar pentru a distinge un element, component, regiune, strat sau secţiune dintr-un alt component, regiune, strat sau secţiune. Termeni ca primul, al doilea, al treilea etc., atunci când sunt folosiţi aici nu implică o secvenţă specifică sau o secvenţă sau o ordine specifică, cu excepţia cazului în care este sugerat în mod clar de prezenta dezvăluire. Prezenta dezvăluire oferă o compoziţie imunogenică şi un proces de pregătire a acesteia.

Termenul "vaccin" este substituit opţional cu termenul "compoziţie imunogenică" şi vice versa.

"Unităţi de antigen D" (de asemenea menţionate ca "unităţi internaţionale" sau UI): Forma antigenică D a virusului de poliomielită induce anticorpi neutralizanţi de protecţie. Unităţile de antigen D menţionate până aici (de exemplu în vacinurile conform invenţiei) unităţile totale de antigen D măsurate din fiecare volum de antigen de tip IPV neadsorbit înainte de formularea vaccinului final care sunt adăugate în fiecare doză umană al vaccinului formulat (de obicei 0.5 mL volum final). Metode sigure de măsurare a unităţilor de antigen D sunt bine cunoscute din stadiul anterior şi sunt publicate, de exemplu, de Farmacopeia Europeană. De exemplu, unităţi de antigen D pot fi măsurate folosind testul ELISA aşa cum este descris în Exemplul 1 ("D-antigen quantification by ELISA") de mai jos. Farmacopeia Europeană oferă o probă test (European Pharmacopoeia Biological Reference Preparation - available from Ph. Eur. Secretariat, e.g. Code P 216 0000) pentru standardizarea unei astfel de metode între producători (Pharmeuropa Special Issue, Bio 96-2). Astfel, valoarea unităţii de antigeni D este bine cunoscută din stadiul anterior.

Termenul "doza" aici este de obicei o administrare de vaccin conform invenţiei, care este de obicei o injecţie. O doză umană tipică este de 0,5 mL. Desigur diverse doze pot fi administrate într-un program de administrare a vaccinului.

Termenul "IPV" sau o compoziţie imunogenică care include aceşti componenţi aici intenţionează să însemne virus inactivat de poliomelită de tip 1 (de ex. Mahoney, ca folosit de preferinţă), de tip 2 (de ex. MEF-1), sau de tip 3 (de ex. Saukett), sau o combinaţie de serotip Sabin 1, 2, 3 de fie două, fie din toate aceste trei tipuri. Un exemplu de o doza întreagă (sau standard) (unităţi de antigen 40-8-32 D ale IPV bazat pe Salk de tipuri 1, 2 şi 3, respectiv) Compoziţie imunogenică IPV pentru scopurile acestei invenţii ar putea fi Polivac® (Serum Institute of India Pvt. Ltd.). Astfel, precum se afirmă aici reducerea dozei de una, două, trei ori (redusă) în comparaţie cu doza standard al IPV bazat pe Salk este prezent într-o compoziţie imunogenică conform invenţiei înseamnă unităţi de antigen D echivalente cu X% de reducere a dozei cu 40, 8, şi/sau 32 de unităţi de antigen D al IPV de tipurile 1, 2 şi/sau 3 respectiv (măsurat în fiecare volum de antigen IPV de orice tip) sunt formulate în fiecare doză de vaccin menţionat.

Termenul "zaharide" în toată acesastă specificare poate indicate polizaharida sau oligozaharidele şi le include pe ambele. Antigenul zaharidic capsular poate fi o polizaharidă cu lungimea întreagă sau poate fi extinsă la zaharide de mărimi bacteriene şi oligozaharide (care natural au un număr mic de unităţi care se repetă, sau care sunt polizaharide cu mărimea redusă pentru flexibilitate, dar sunt încă capabile să indică un răspuns imun protectiv într-o gazdă.

În conformitate cu un prim exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, compoziţia de vaccin combinat include un grup de antigeni/imunogeni selectaţi din, dar fără a se limita la toxoiduldifteric (D), toxoidul titanos (T), cu celule întregiB. pertussis(wP),Haemophilus influenzae de tip b (Hib) PRP-CP conjugat, hepatita B (HepB), doză redusă de virus de poliomelită inactivat (IPV) şi include în plus o combinaţie de 2-fenoxietanol şi cel puţin unul din esterii parabenici conservanţi.

În conformitate cu al doilea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, compoziţia de vaccin combinat or putea în continuare include unul sau mai mulţi antigeni selectaţi din grupul ce constă din, dar fără a se limita la antigenii Haemophilus influenzae(serotipurile a, c, d, e, f şi tulpinile neîncapsulate), hepatita (tulpinile A, C, D, E, F şi G), Neisseria meningitidisA, B, C, Y, W-135, sau X, gripa, Staphylococcus aureus, Salmonella typhiantigen(i),antigen acelular pertussis, adenilat ciclaza modificată, antigen malaric (RTS, S), pneumococi, streptococi, antrax, dengue, malaria, rujeola, oreion, rubeola, BCG, virusul papilomei umane, encefalita Japoneză, dengue, zika, ebola, chikungunya, rotavirus, variola, friguri galbene, flavivirus, zoster, virusul de varicelă, respectiv.

În conformitate cu al treilea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, tulpinile IPV folosite în compoziţia de vaccin combinat includ tulpini inactivate Sabin selectate din grupul de tip 1, tip 2, şi tip 3 sau tulpini inactivate Salk selectate din grupul Mahoney de tip 1, MEF de tip 2 şi Saukett de tip 3.

În unul din aspectele celui de al treilea exemplu de realizare, virusului de poliomielită poate fi crescut prin următoarea metodă:

Linia de celule CCL81-VERO (rinichi de maimuţă) a fost folosită ca celule gazdă pentru creşterea virusului de poliomielită de ex. tulpinile Sabin şi Salk.

După infectarea celulelor gazdă cu tulpina dorită de virus de poliomielită şi incubarea timp de 72 ore, mediul ce conţine virusul şi resturile celulare au fost unite şi colectate într-un singur container.

Filtratul a fost supus filtrării tangenţiale în flux cu o caseta de 100 KDa; diafiltrat folosind soluţia tampon fosfat şi purificat folosind cromatografia de schimb ionic.

Înainte de administrare la pacienţi, virusul poate fi inactivat folosind metode de inactivare potrivite.

Totuşi, inventatorii prezenţi au găsit în mod surprinzător că pierderea procentuală înaltă a antigenilor D după inactivarea cu formaldehidă s-ar putea datorită prezenţei soluţiei tampon fosfat care provoacă în mod neaşteptat agregarea nedorită a particulelor de virus de poliomielită.

Prin urmare, un aspect important al prezentei dezvăluiri include, un proces îmbunătăţit de inactivare cu formalină care include următoarele etape:

a) setul de virus purificat o fost supus schimbului tampon de la soluţia tampon fosfat la soluţia tampon Tris în limitele de la (30 la 50 mM), având pH-ul între 7 şi 7,5;

b) la amestecul de mai sus s-a adăugat mediul M-199 ce conţine glicină (5 gm/L);

c) s-a adăugat 0,025% formaldehidă şi cu amestecarea ulterioară;

d) amestecul a fost ulterior incubat la 37°C pentru 5…13 zile cu agitare continuă a masei virale cu un agitator magnetic;

e) amestecul după incubare a fost supus sistemului intermediar TFF (100 KDa, 0,1 m2) în ziua a 7-a şi filtrării finale după inactivare;

f) ulterior volumul filtrat o fost depozitat la 2…8°C;

g) realizarea ELISA D-Ag pentru determinare unităţilor D-Ag.

În conformitate cu al patrulea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, tulpinile IPV folosite în compoziţia de vaccin combinat include o doză redusă de tulpini inactivate Sabin selectate din grupul de tip 1, tip 2, şi tip 3 sau tulpini inactivate Salk selectat din grupul Mahoney de tip 1, MEF de tip 2 şi Saukett de tip 3.

În conformitate cu al cincilea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, IPV-ul (tulpinile Sabin sau Salk) nu poate fi adsorbit individual pe nici un adjuvant şi ulterior adăugat la compoziţia finală de vaccin combinat.

În conformitate cu aspectul preferat al exemplului cinci de realizare, IPV-ul (tulpinile Sabin sau Salk) poate fi adsorbit pe adjuvant mai preferabil sare de aluminiu sau fosfat sau hidroxid prezent în vaccinul combinat în care procentul de adsorbţie al antigenului IPV pentru IPV de tip 1 pot fi în limitele de la 10…100 %, IPV de tip 2 pot fi în limitele de la 60…100% şi IPV de tip 3 pot fi în limitele de la 10…100 %.

În conformitate cu al şaselea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, IPV-ul (tulpinile Sabin sau Salk) component(ţii) poate fi adsorbit individual pe un adjuvant selectat din grupul de sare de aluminiu (Al3+) precum hidroxidul de aluminiu (Al(OH)3) sau fosfatul de aluminiu (AlPO4), aluminiu, fosfat de calciu, MPLA, 3D-MPL, QS21, un adjuvant ce conţine oligodeoxinucleotide-CpG, liposom, sau emulsie ulei-în-apă sau o combinaţie a acestora. (de ex. înainte sau după amestecarea cu alte componenţi dacă sunt prezenţi). Dacă este adsorbit, unul sau mai mulţi componenţi IPV pot fi adsorbiţi separat sau împreună ca un amestec pe hidroxid de aluminiu (Al(OH)3) sau fosfat de aluminiu.

IPV-ul (tulpinile Sabin sau Salk) componentul(ţii) poate fi adsorbit pe o sare de aluminiu prin următoarea procedură:

luarea volumul dorit de Al(PO)4 sau Al(OH)3 autoclavatpentru a obţine concentraţia finală de aluminiu (Al3+) de la 0,1 până la 0,8 mg/doza într-un container de 50 mL;

adăugarea volumului IPV cu unitatea D-Ag ajustată şi pregătirea volumului cu diluant (10 x M-199 + 0,5% glicină);

adjustarea pH-lui formulării finale şi obţinerea formulării finale cu pH-ul între 6 şi 7,5.

În unul din aspectele celui de al şaselea exemplu de realizare, adsorbţia IPV inactivat cu formalină poate fi realizată pe aluminiu (Al3+) având concentraţia selectată de 0,1 mg/doză, 0,2 mg/doză, 0,3 mg/doză, 0,4 mg/doză, 0,5 mg/doză, 0,6 mg/doză, 0,7 mg/doză şi 0,8 mg/doză, preferabil între 0,1 mg/doză la 1,25 mg/doză per serotip şi la un pH selectat din 6,2; 6,3; 6,4; 6,5; 6,6; 6,7 şi 6,8 preferabil 6,5.

Într-un alt aspect al celui de al şaselea exemplu de realizare, procentul de recuperare a antigenilor D după inactivarea cu formalină în prezenţă de Tris ar putea fie 50%, 60%, 70% sau 80% şi procente de adsorbţie după adsorbţia pe fosfat de aluminiu ar putea fi între 70% şi 80%, 80% şi 90% sau 90% şi 99% sau 95% şi 99%.

În conformitate cu al şaptelea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, toxinadifterică (exotoxina) şi toxina tetanos (exotoxina) au fost obţinute dinCorynebacterium difteriae şiClostridium tetani respectiv şi ulterior detoxifiate folosind o metodă potrivită de inactivare. Toxoidul difteric (D) şi toxoidul titanos (T) astfel obţinut pot fi purificaţi folosind cromatografia cu filtrare pe gel. DT-ul purificat, astfel obţinut a fost în continuare folosit pentru formulare vaccinului combinat.

În unul din aspectele al celui de al şaptelea exemplu de realizare, toxina difterică este produsă prin creştereaCorynebacterium difteriae într-un mediu semisintetic ce constă din următorii ingredienţi la concentraţii optime în oricare dintre următoarele combinaţii:

Combinaţia 1:

Hidrolizat de cazeină, maltoză monohidrat, acid acetic glacial, lactat de sodiu, sulfat de magneziu,ß-alanină, acid pimelic, acid nicotinic, sulfat de cupru, sulfat de zinc, clorură de mangan, L-cistina, clorură de calciu dihidrat, dihidrogenofosfat de potasiu, hidrogenofosfat de potasiu, sulfat de fier şi WFI.

Combinaţia 2:

Hidrolizat de cazeină, maltoză monohidrat, acid acetic glacial, lactat de sodiu, sulfat de magneziu,ß-alanină, acid pimelic, acid nicotinic, clorură de mangan, L-cistină, clorură de calciu dihidrat, dihidrogenofosfat de potasiu, hidrogenofosfat de potasiu, sulfat de fier şi WFI.

Combinaţia 3:

Hidrolizat de cazeină, maltoză monohidrat, acid acetic glacial, lactat de sodiu,ß-alanină, acid pimelic, acid nicotinic, sulfat de cupru, sulfat de zinc, clorură de mangan, L-cistină, clorură de calciu dihidrat, dihidrogenofosfat de potasiu, hidrogenofosfat de potasiu şi WFI.

Combinaţia 4:

Extract din drojdie, maltoză monohidrat, acid acetic glacial, lactat de sodiu, sulfat de magneziu,ß-alanină, acid pimelic, acid nicotinic, sulfat de cupru, sulfat de zinc, clorură de mangan, L-cistină, clorură de calciu dihidrat, dihidrogenofosfat de potasiu, hidrogenofosfat de potasiu, sulfat de fier şi WFI.

În conformitate cu al doilea aspect al celui de al şaptelea exemplu de realizare, toxina tetanos este produsă prin creştereaClostridium tetaniîntr-un mediu semisintetic ce constă din următorii ingredienţi la concentraţii optime în oricare dintre următoarele combinaţii:

Combinaţia 1:

Digest de cazeină, clorură de calciu, hidrogenofosfat de potasiu, dextroză anhidră, clorură de sodiu, sulfat de magneziu, riboflavina, clorohidrat de tiamină, clorohidrat de piridoxină, pantotenat de calciu, acid nicotinic, L-cistină, clorură de fier, soluţie de vitamina B12, biotină, HCl conc., NaOH, etanol absolut şi WFI.

Combinaţia 2:

Digest de cazeină, clorură de calciu,ß-alanină, hidrogenofosfat de potasiu, dextroză anhidră, clorură de sodiu, sulfat de magneziu, sulfat de fier, riboflavina, clorohidrat de tiamină, clorohidrat de piridoxină, pantotenat de calciu, acid nicotinic, L-cistină, clorură de fier, soluţie de vitamina B12, biotina, HCl conc., NaOH, etanol absolut şi WFI.

Combinaţia 3:

Digest de cazeină, clorură de calciu, hidrogenofosfat de potasiu, dextroză anhidră, clorură de sodiu, sulfat de zinc, riboflavina, clorohidrat de tiamină, clorohidrat de piridoxină, pantotenat de calciu, acid nicotinic, L-cistină, clorură de fier, soluţie de vitamina B12, biotină, HCl conc., NaOH, etanol absolut şi WFI.

Combinaţia 4:

Hidrolizat de cazeină, clorură de calciu, hidrogenofosfat de potasiu, dextroză anhidră, clorură de sodiu, sulfat de magneziu, clorură de mangan, riboflavina, clorohidrat de tiamină, clorohidrat de piridoxină, pantotenat de calciu, acid nicotinic, L-cistină, clorură de fier, soluţie de vitamina B12, biotină, HCl conc., NaOH, etanol absolut şi WFI.

Într-un alt aspect al celui de al şaptelea exemplu de realizare, toxineleledifteriei şi tetanosului au fost detoxifiate folosind o sau combinaţia următoarelor metode de inactivare care includ inactivarea termală, UV, cu formalină/formaldehidă, acetiletilenimină, etc.

În conformitate cu al optulea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, antigenul hepatitei (Hep) folosite în compoziţia de vaccin combinat include antigenii hepatitei derivaţi din tulpina de suprafaţă a hepatitei B (HBsAg).

În unul din aspectele al celui de al noulea exemplu de realizare, HBsAg poate fi pregătit prin una din următoare metode:

prin purificarea antigenului în formă de particule din plasma purtătorilor de hepatită B cronică, deoarece cantităţi mari de HBsAg sunt sintetizate în ficatul şi eliberate în sistemul sanguin pe durata unei infecţii HBV;

exprimând proteina prin metoda DNA recombinant.

În conformitate cu al nouălea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, toxoidul difteric (D), toxoidul tetanos (T), antigenul de suprafaţă a hepatitei B (HBsAg) sunt adsorbiţi individual pe un adjuvant selectat din grupul format din sare de aluminiu (Al3+) ca hidroxid de aluminiu (Al(OH)3) sau fosfat de aluminiu (AlPO4) şi aluminiu.

Totuşi, de preferinţă toxoidul difteric (D), toxoidul tetanos (T) şi antigenul de suprafaţă a hepatitei B (HBsAg) sunt adsorbiţi individual pe fosfat de aluminiu.

În unul din aspectele celui de al noulea exemplu de realizare, antigenul toxoidului difteric (D) adsorbit pe fosfat de aluminiu, având un procentaj al adsorbţiei de cel puţin 50%.

Într-un alt aspect al celui de al noulea exemplu de realizare, antigenui toxoidului titanic(T)adsorbit pe fosfat de aluminiu, având un procentaj al adsorbţiei de cel puţin 40%.

Într-un alt aspect al celui de al noulea exemplu de realizare, antigenulde suprafaţă a hepatitei B (HBsAg) adsorbit pe fosfat de aluminium, având un procentaj al adsorbţiei de cel puţin 70%.

În conformitate cu al zecelea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, antigenul Hib folosit în vaccinul combinat al prezentei dezvăluiri este derivat din polizaharida capsulară a tulpineiHaemophilus influenzae de tip B (Hib) 760705.

În conformitate cu unul din aspectele celui de al zecelea exemplu de realizare, antigenul Hib PRP este conjugat la o proteină purtătoare selectată dintr-un grup de purtători de proteine ce constă din, dar fără a se limita la, CRM197, toxoidul difteric, complexul membranei externeNeisseria meningitidis, fragmentul C al toxoidului tetanic, toxoidul pertussis, proteina D aH. influenzae, LTE. coli, STE. coli, şi exotoxina A dinPseudomonas aeruginosa, membrana externă complex c (OMPC), porine, proteinele care leagă transferina, pneumolizina, proteina A de suprafaţă pneumococică (PspA), adezina A de suprafaţă pneumococică (PsaA), PhtD pneumococic, proteina de suprafaţă pneumococică BVH-3 şi BVH-11, antigen protectiv (PA) aBacillus anthracis şi factor de edem detoxifiat (EF) şi factor letal (LF) aBacillus anthracis, ovalbumina, hemocianina de limpet gaură (KLH), albumină serică umană, albumină serică bovină (BSA), derivat proteic purificat al tuberculinei (PPD), peptide sintetice, proteine de şoc termic, proteine pertusis, citokine, limfokine, hormoni, factori de creştere, proteine artificiale care includ epitopi multipli ai celulelor T CD4 + umane din diverşi antigeni derivaţi din agenţi patogeni ca N 19, proteine de absorbţie a fierului, toxină A sau B din proteineleC. difficile şiS.agalactiae cu sau fără linker.

Totuşi, de preferinţă PRP-ul Hib este conjugatd la toxoidul tetanos (TT) prin chimia CNBr, chimia de aminare reductivă, chimia de cianilare sau orice altă chimie dezvăluită deja în (Kniskern şi colab. Conjugation: design, chemistry, and analysis., Ellis et al., Development and clinical uses ofHaemophilus influenzae type B conjugate vaccines. New York: Marcel Dekker, 1994, p. 37-69).

În conformitate cu al doilea aspect a celui de al zecelea exemplu de realizare, proteina purtătoare este prezentă în amble forme liberă şi conjugată într-o compoziţie al prezentei dezvăluiri, forma conjugată este preferabilă nu mai mult de 20% din cantitatea totală a purtătorului de proteină în întreaga compoziţie, şi mai preferabil prezentă în mai puţin de 5% din masă.

În conformitate cu al treilea aspect ale celui de al zecelea exemplu de realizare, antigenul Hib nu este adsorbit substanţial pe orice adjuvant.

În conformitate cu al patrulea aspect ale celui de al zecelea exemplu de realizare, antigenul Hib nu poate fi supus adsorbţiei la deliberate sau intenţionate pe orice adjuvant.

În conformitate cu al cincilea aspect ale celui de al zecelea exemplu de realizare, procentajul de adsorbţie a antigenului Hib pe orice adjuvant este mai mic de 20%.

În conformitate cu al unsprezecelea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, pregătirea antigenului pertussis cu celule întregi (wP) folosit în compoziţia de vaccin combinat al prezentei dezvăluiri este preferabil pregătit din tulpinile Bordetella pertussis 134, 509, 25525 şi 6229 amestecat într-un raport specific şi ulterior inactivat prin utilizarea metodei îmbunătăţite de inactivare lipsit de tiomersal prin urmare conduce la reactogenitate redusă şi potenţă crescută şi antigenii wP pot sau nu pot fi adsorbiţi pe adjuvanţi bazaţi pe aluminiu.

În conformitate cu un aspect al celui de al unsprezecelea exemplu de realizare, pregătirea antigenului pertussis cu celule întregi (wP) folosite în compoziţia de vaccin combinat al prezentei dezvăluiri este preferabil pregătit din tulpinile Bordetella pertussis 134, 509, 25525 şi 6229 amestecate într-un raport de 1:1:0,25:0,25.

În conformitate cu al doilea aspect al celui de al unsprezecelea exemplu de realizare, pregătirea antigenului pertussis cu celule întregi (wP) folosite în compoziţia de vaccin combinat o fost inactivată folosind unul sau mai multe din următoarele tratamente de inactivare care include tratamentul termal, UV, cu formalină/formaldehidă, acetiletilenimină, etc.

Totuşi, de preferinţă pregătirea antigenului pertussis cu celule întregi (wP) folosite în compoziţia de vaccin combinat o fost inactivată folosind o combinaţie de tratament termic şi chimic. Totuşi, de preferinţă este inactivarea termică la 56±2°C, de la 10 la 15 minute în prezenţă de formaldehidă în care, volumul wP rămâine neaglomerat şi uşor omogenizat, ducând uşor la reactogenitate redusă şi oferind wP potenţă mai bună pentru o durată mai lungă.

În conformitate cu al treilea aspect al celui de al unsprezecelea exemplu de realizare, pregătirea antigenului pertussis cu celule întregi (wP) folosite în compoziţia de vaccin combinat pot sau nu pot fi adsorbiţi pe un adjuvant bazat pe aluminiu ca hidroxid de aluminiu, fosfat de aluminiu sau combinaţia acestora (de ex. înainte sau după amestecare cu alte componenţi dacă sunt prezenţi). Dacă este adsorbit, una sau mai multe tulpini wP (de ex. 134, 509, 25525 şi 6229) pot fi adsorbite individual sau împreună ca un amestec.

În conformitate cu al doisprezecelea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 1

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10 - 25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02 - 10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12 - 16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBsAg 7 - 15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7 - 13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Sabin Tip 1 (unităţi de antigen D) 1 - 25 DU Preferabil unul din 5 sau 10 sau 20 DU Tip 2 (Unităţi de antigen D) 1 - 10 DU Preferabil unul din 8 sau 4 DU Tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2,5 sau 3 mg 9 Metilparaben 0,1 - 1,5 mg Preferabil unul din 0,7 sau 0,9 sau 1 mg 10 Propilparaben 0,05 - 0,2 mg Preferabil unul din 0,05 sau 0,1 sau 0,15 mg

În conformitate cu al treisprezecelea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 2

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBsAg 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Salk Mahoney de tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 7,5 sau 10 sau 20 DU MEF-1 Tip 2 (Unităţi de antigen D) 1 - 10 DU Preferabil unul din 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 DU Saukett de tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 6 sau 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2,5 sau 3 mg 9 Metilparaben 0,1 - 1,5 mg Preferabil unul din 0,7 sau 0,9 sau 1 mg 10 Propilparaben 0,05 - 0,2 mg Preferabil unul din 0,05 sau 0,1 sau 0,15 mg

În conformitate cu al paisprezecelea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 3

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Sabin Tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 5 sau 10 sau 20 DU Tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0.63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2,5 sau 3 mg 9 Metilparaben 0,1 - 1,5 mg Preferabil unul din 0,7 sau 0,9 sau 1 mg 10 Propilparaben 0,05 - 0,2 mg Preferabil unul din 0,05 sau 0,1 sau 0,15 mg

În conformitate cu al cincisprezcelea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 4

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Salk Mahoney de tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 7,5 sau 10 sau 20 DU Saukett de tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 6 sau 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0.63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2,5 sau 3 mg 9 Metilparaben 0,1 - 1,5 mg Preferabil unul din 0,7 sau 0,9 sau 1 mg 10 Propilparaben 0,05 - 0,2 mg Preferabil unul din 0,05 sau 0,1 sau 0,15 mg

În conformitate cu al şaisprezecelea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 5

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Sabin Tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 5 sau 10 sau 20 DU Tip 2 (Unităţi de antigen D) 1 - 10 DU Preferabil unul din 8 sau 4 DU Tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2,5 sau 3 mg 9 Metilparaben 0,1 - 1,5 mg Preferabil unul din 0,7 sau 0,9 sau 1 mg

În conformitate cu al şaptesprezecelea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 6

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Salk Mahoney de tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 7,5 sau 10 sau 20 DU MEF-1 Tip 2 (Unităţi de antigen D) 1 - 10 DU Preferabil unul din 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 DU Saukett de tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 6 sau 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2,5 sau 3 mg 9 Metilparaben 0,1 - 1,5 mg Preferabil unul din 0,7 sau 0,9 sau 1 mg

În conformitate cu al optsprezecelea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 7

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Sabin Tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 5 sau 10 sau 20 DU Tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 -0,6 mg Preferabil NMT 0.3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2,5 sau 3 mg 9 Metilparaben 0,1 - 1,5 mg Preferabil unul din 0,7 sau 0,9 sau 1 mg

În conformitate cu al nouăsprezecelea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 8

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Salk Mahoney de tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 7.5 sau 10 sau 20 DU Saukett de tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 6 sau 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2,5 sau 3 mg 9 Metilparaben 0,1 - 1,5 mg Preferabil unul din 0,7 sau 0,9 sau 1 mg

În conformitate cu al douăzecilea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 9

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Sabin Tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 5 sau 10 sau 20 DU Tip 2 (Unităţi de antigen D) 1 - 10 DU Preferabil unul din 8 sau 4 DU Tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2,5 sau 3 mg 9 Propilparaben 0,05 - 0,2 mg Preferabil unul din 0,05 sau 0,1 sau 0,15 mg

În conformitate cu al douăzeci şi unulea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 10

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Salk Mahoney de tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 7,5 sau 10 sau 20 DU MEF-1 Tip 2 (Unităţi de antigen D) 1 - 10 DU Preferabil unul din 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 DU Saukett de tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 6 sau 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2,5 sau 3 mg 9 Propilparaben 0,05 - 0,2 mg Preferabil unul din 0,05 sau 0,1 sau 0,15 mg

În conformitate cu al douăzeci şi doilea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 11

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Sabin Tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 5 sau 10 sau 20 DU Tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2,5 sau 3 mg 9 Propilparaben 0,05 - 0,2 mg Preferabil unul din 0,05 sau 0,1 sau 0,15 mg

În conformitate cu al douăzeci şi treilea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 12

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Salk Mahoney de tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 7.5 sau 10 sau 20 DU Saukett de tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 6 sau 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2.5 sau 3 mg 9 Propilparaben 0,05 - 0,2 mg Preferabil unul din 0,05 sau 0,1 sau 0,15 mg

În conformitate cu al douăzeci şi patrulea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 13

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Sabin Tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 - 25 DU Preferabil unul din 5 sau 10 sau 20 DU Tip 2 (Unităţi de antigen D) 1 - 10 DU Preferabil unul din 8 sau 4 DU Tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 Metilparaben 0,1 - 1,5 mg Preferabil unul din 0,7 sau 0,9 sau 1 mg 9 Propilparaben 0,05 - 0,2 mg Preferabil unul din 0,05 sau 0,1 sau 0,15 mg

În conformitate cu al douăzeci şi cincilea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 14

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Salk Mahoney de tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 7,5 sau 10 sau 20 DU MEF-1 Tip 2 (Unităţi de antigen D) 1 - 10 DU Preferabil unul din 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 DU Saukett de tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 6 sau 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 Metilparaben 0,1 - 1,5 mg Preferabil unul din 0,7 sau 0,9 sau 1 mg 9 Propilparaben 0,05 - 0,2 mg Preferabil unul din 0,05 sau 0,1 sau 0,15 mg

În conformitate cu al douăzeci şi şaselea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 15

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Sabin Tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 5 sau 10 sau 20 DU Tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 Metilparaben 0,1 - 1,5 mg Preferabil unul din 0,7 sau 0,9 sau 1 mg 9 Propilparaben 0,05 - 0,2 mg Preferabil unul din 0,05 sau 0,1 sau 0,15 mg

În conformitate cu al douăzeci şi şaptelea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 16

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Salk Mahoney de tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 7,5 sau 10 sau 20 DU Saukett de tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 6 sau 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 Metilparaben 0,1 - 1,5 mg Preferabil unul din 0,7 sau 0,9 sau 1 mg 9 Propilparaben 0,05 - 0,2 mg Preferabil unul din 0,05 sau 0,1 sau 0,15 mg

În conformitate cu al douăzeci şi optulea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 17

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Sabin Tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 5 sau 10 sau 20 DU Tip 2 (Unităţi de antigen D) 1 - 10 DU Preferabil unul din 8 sau 4 DU Tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2,5 sau 3 mg

În conformitate cu al douăzeci şi nouălea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 18

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Salk Mahoney de tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 7,5 sau 10 sau 20 DU MEF-1 Tip 2 (Unităţi de antigen D) 1 - 10 DU Preferabil unul din 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 DU Saukett de tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 6 sau 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2,5 sau 3 mg

În conformitate cu al treizecilea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 19

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Sabin Tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 5 sau 10 sau 20 DU Tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2,5 sau 3 mg

În conformitate cu al treizeci şi unulea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţie de vaccin combinat cu doze multiple include:

Tabelul 20

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Salk Mahoney de tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 7,5 sau 10 sau 20 DU Saukett de tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 6 sau 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63 8 2-Fenoxietanol 1 - 6 mg Preferabil unul din 2 sau 2,5 sau 3 mg

În conformitate cu al treizeci şi doilea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţiei de vaccin combinat cu o singură doză include:

Tabelul 21

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Sabin Tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 5 sau 10 sau 20 DU Tip 2 (Unităţi de antigen D) 1 - 10 DU Preferabil unul din 8 sau 4 DU Tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63

În conformitate cu al treizeci şi treilea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţiei de vaccin combinat cu o singură doză include:

Tabelul 22

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Salk Mahoney de tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 7,5 sau 10 sau 20 DU MEF-1 Tip 2 (Unităţi de antigen D) 1 - 10 DU Preferabil unul din 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 DU Saukett de tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 6 sau 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63

În conformitate cu al treizeci şi patrulea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţiei de vaccin combinat cu o singură doză include:

Tabelul 23

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Sabin Tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 5 sau 10 sau 20 DU Tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63

În conformitate cu al treizeci şi cincilea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, formularea compoziţiei de vaccin combinat cu o singură doză include:

Tabelul 24

Sr. No. Componenţi ai formulării Unitate de antigen/doză de 0,5 mL Unitatea de antigen preferată/doză de 0,5 mL (în orice combinaţie) 1 Toxoid difteric (D) 10-25 Lf Preferabil unul din 10 sau 20 sau 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02-10 Lf Preferabil unul din 2 sau 4 sau 10 Lf 3 AntigenB. pertussis inactivat (wP) 12-16 IOU Preferabil unul din 12 sau 14 sau 16 IOU 4 Antigen HBs 7-15 µg Preferabil unul din 8 sau 10 sau 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 7-13 µg de PRP Preferabil unul din 8 sau 10 sau 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) serotip Salk Mahoney de tip 1 (Unităţi de antigen D) 1 -25 DU Preferabil unul din 7,5 sau 10 sau 20 DU Saukett de tip 3 (Unităţi de antigen D) 1 - 20 DU Preferabil unul din 6 sau 10 sau 16 DU 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) 0,1 - 0,6 mg Preferabil NMT 0,3 sau NMT 0,55 sau NMT 0,63

În conformitate cu al treizeci şi şaselea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, unul sau mai mulţi antigeni ai compoziţiei finale de vaccin combinat nu pot fi adsorbit substanţial pe orice adjuvant.

În conformitate cu al treizeci şi şaptelea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, pH-ul compoziţiei imunogenice poate fi în limitele de la pH 6,0 la pH 8,0; mai preferabil în limitele de la pH 6,0 la pH 7,5; şi mai preferabil în limitele de la pH 6,2 la pH 7,2; şi cel mai preferabil în limitele de la pH 6,3 la pH 6,8.

În conformitate cu treizeci şi optulea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, compoziţia imunogenică poate include în plus un agent tampon selectat din grupul ce constă din carbonat, fosfat, acetat, succinat, borat, citrat, lactat, gluconat şi tartrat, precum şi mai mulţi agenţi de tamponare organici complecşi inclusiv o soluţie a agentului de tamponare fosfat care conţine fosfat de sodiu şi/sau fosfat de potasiu într-un raport selectat pentru a atinge pH-ul dorit. Într-un alt exemplu, agentul de tamponare conţine Tris (hidroximetil)aminometan, sau "Tris", formulată pentru a atinge pH-ul dorit. Dar într-un alt exemplu, agentul de tamponare ar putea fi mediul esenţial minim cu săruri Hanks. Alţi agenţi de tamponare, ca HEPES, N-piperazin, N′-bis (PIPES), şi acid 2-etansulfonic (MES) sunt de asemenea prevăzuţi de prezenta dezvăluire. Agentul de tamponare ajută în stabilizarea compoziţiei imunogenice al prezentei dezvăluiri. Cantitate agentului de tamponare poate fi în limitele de la 0.1 mM până la 100 mM, preferabil selectat din 5 mM, 6 mM, 7 mM, 22 mM, 23 mM, 24 mM, 25 mM, 26 mM, 27 mM, 28 mM, 29 mM şi 30 mM.

Încă într-un aspect al exemplului de realizare, compoziţia imunogenică poate include în plus excipienţi farmaceutic acceptabili selectaţi din grupul ce constă din surfactanţi, polimeri şi săruri. Examplele de surfactanţi poate include surfactanţi neionici ca polisorbat 20, polisorbat 80, etc. Exemplele de polimeri poate include dextran, carboximetil celuloza, acid hialuronic, ciclodextrina, etc. Exemplele de săruri poate include NaCl, KCl, KH2PO4, Na2HPO4 .2H2O, CaC12, MgC12, etc. Preferabil, sărurile pot fi NaCl. De obicei cantitatea de săruri poate fi în limitele de la 100 mM la 200 mM.

Amino acizii, ca histidina, glicina, arginina şi lizina pot fi adăugaţi să stabilizeze compoziţia imunogenică.

În conformitate cu al treizeci şi nouălea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, compoziţia imunogenică poate în plus include unul sau mai mulţi adjuvanţi selectaţi din grupul format din sare de aluminiu (Al3+) ca hidroxid de aluminiu (Al(OH)3) sau fosfat de aluminiu (AlPO4), aluminiu, fosfat de calciu, MPLA, 3D-MPL, QS21, un adjuvant ce conţine oligodeoxinucleotide-CpG, liposom, sau emulsie ulei-în-apă.

Totuşi, de preferinţă compoziţia include fosfat de aluminiu (AlPO4) ca adjuvant.

Totuşi, de preferinţă compoziţia include hidroxid de aluminiu (Al(OH)3) ca adjuvant.

În unul din aspectele al treizeci şi nouălea exemplu de realizare, antigeni formulării finale pot fi adsorbiţiin situ pe gel de fosfat de aluminiu sau gel de fosfat de aluminiu gata pregătit sau o combinaţie a acestora.

În unul din aspectelele preferate al treizeci şi nouălea exemplu de realizare, compoziţia din prezenta dezvăluire poate conţine adjuvantul într-o cantitate de 2,5 mg/0,5 mL sau mai puţin, şi în mod specific, într-o cantitate de la 1,5 mg/0,5 mL până la 0,1 mg/0,5 mL.

În conformitate cu al patruzecilea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, compoziţia imunogenică poate include în plus un component imunostimulator selectat din grupul ce constă dintr-o emulsie din ulei şi apă, MF-59, un liposom, o lipopolizaharidă, o saponină, lipidă A, derivaţi ai lipidei A, lipida A monofosforil, lipida A monofosforil 3-deacilată, AS01, AS03, o oligonucleotidă, o oligonucleotidă care include cel puţin un CpG nemetilat şi/sau un liposom, adjuvant Freund, adjuvant complet Freund, adjuvant incomplet Freund, polimeri, co-polimeri precum copolimeri polioxdarhilene-polioxipropilen, inclusiv block co-polimeri, polimer p 1005, adjuvant CRL-8300, muramil dipeptida, agonişti TLR-4, flagelin, flageline derivat din bacterii Gram negative, agonişti TLR-5, fragmente de flageline capabile să se lege la receptorii TLR-5, alfa-C-galactoslceramidă, chitosan, interleukin-2, QS-21, ISCOMS, amestecuri de scualen (SAF-1), Quil A, sububutatea toxinei holerei B, polifosfazena şi derivaţi, preparate din perete celular de micobacterium, derivaţi ai acidului micolic, surfactanţi block copolimer neionici, OMV, fHbp, combinaţie de saponină cu steroli şi lipide.

În conformitate cu al patruzeci şi primului exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, compoziţia imunogenică poate include în plus un conservant selectat din grupul ce constă din clorură de benzetoniu (Phemerol), fenol,m-crezol, Thiomersal, formaldehidă, clorură de benzalconiu, alcool benzilic, clorobutanol,p-cloro-m-crezol, sau alcool benzilic sau o combinaţie a acestora. O compoziţie de vaccin poate include conservant pentru a singura imunizarea, sau poate include conservant pentru imunizări multiple (de ex. un set "multidoza"). Incluziunea unui conservant este preferată în aranjamentele multidoză. Ca o alternativă (sau în plus) la includerea unui consevant în compoziţiile multidoză, compoziţiile pot fi păstrate într-un container având un adaptor aseptic pentru îndepărtarea materialului. De obicei cantitatea de conservant poate fi în lmitele de la 0,1 mg la 50 mg.

În conformitate cu al patruzeci şi doilea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, compoziţia imunogenică poate include în plus substanţe auxiliare ca agenţi de umezire sau emulgatori, agenţi de tamponare a pH-lui, aditivi de sporire a gelifierii sau vâscozităţii, agenţi de aromatizare, coloranţi, şi alte asemenea, în funcţie de ruta de administrare şi preparare dorită.

În conformitate cu al patruzeci şi treilea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, compoziţia imunogenică poate fi complet lichidă dar nu se limitează la aceasta. Formele potrivite de preparat lichid pot include soluţii, suspenzii, emulsii, siropuri, soluţii apoase izotonice, compoziţii vâscoase şi elixiruri care sunt tamponate la un pH dorit.

Compoziţia imunogenică al prezentei dezvăluiri poate fi în forma de preparate transdermale inclusiv loţiuni, geluri, spray-uri, unguiente sau alte tehnici potrivite. Dacă este dorită administrarea nazală sau respiratorie (mucozal) (de ex., inhalarea aerosolului sau insuflare), compoziţiile pot fi într-o formă şi dispersate prin-un dozator de pulverizare prin stoarcere, dozator de pompă sau dozator de aerosoli. Aerosolii sunt de obicei sub presiune prin intermediul unei hidrocarburi. Dozatorii de pompă pot preferabil dispensa o doză contorizată sau a doza având o anumită dimensiune a particulelor. Când sunt în forma de soluţii, suspenzii şi geluri, în unele exemple de realizare, compoziţiile imunogenice conţin o cantitate majoră de apă (preferabil apă purificată) pe lângă ingredientul(ţii) activi.

În conformitate cu al patruzeci şi patrulea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, vaccinul combinat menţionat poate fi stabil la temperatura de 2…8°C de la 12 până la 36 luni; la 25°C de la 2 până la 6 luni; la 37°C de la 1 săptămână până la 4 săptămâni.

În conformitate cu al patruzeci şi cincilea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, compoziţia imunogenică poate fi formulată pentru utilizare într-o metodă pentru reducere a debutului sau prevenire a unei stări de sănătate care include difteria, tetanos, pertussis, virusul hepatitei B,Haemophilus influenzae de tip b, infecţia cu virusul de poliomielită care implică administrarea unei cantităţi imunogenic efective de compoziţie imunogenică la un subiect uman prin intermediul administrării parenterale sau subcutanate sau intradermale, intramusculare sau intraperitoneale sau intravenoasă sau administrare injectabilă sau eliberare susţinută din implanturi sau administrare prin picături pentru ochi sau nazal sau rectal sau bucal sau vaginal, peroral sau intragastric sau mucozal sau perlingual, alveolar sau gingival sau alfactiv sau administrarea prin mucoasa respiratorie sau orice alte căi de imunizare.

În conformitate cu al patruzeci şi şaselea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, compoziţia imunogenică ar putea fi formulată în formă de fiole cu doză unică sau fiole cu doze multiple (fiole cu 2 doze sau 5 doze sau 10 doze) sau set de doze sau în formă de seringi preumplute în care compoziţia imunogenică menţionată poate fi administrată printr-un program de doză unică, sau preferabil printr-un program de doză multiplă în care cursul primar de vaccinare este urmat de 1…3 doze separate administrate la intervale de timp ulterioare după 1…3 ani dacă este nevoie. Regimul de dozare asemenea, cel puţin în parte, va fi determinat la necesitatea unei doze de rapel necesare pentru a conferi imunitate protectivă.

Totuşi, de preferinţă compoziţia imunogenică poate fi formulată pentru administrare la un subiect uman sau la copiii cu vârsta de 2 ani sau în conformitate cu regimurile cu două doze ce constă dintr-o primă doză, şi o a doua doză la intervale de timp ulterioare după 1…3 ani.

Totuşi, de preferinţă compoziţia imunogenică poate fi administrată concomitent cu alte medicamente sau orice alt vaccin.

În conformitate cu al patruzeci şi şaptelea exemplu de realizare al prezentei dezvăluiri, solicitantul a găsit că un vaccin combinat cu doze multiple complet lichide cu imunogenicitate îmbunătăţită şi reactogenitate redusă poate fi obţinut când vaccinul este fabricat prin procedeul dezvăluit mai jos luând în considerare i) procesul de producere a antigenilor individuali ii) secvenţa de adiţie a antigenilor iii) utilizarea adjuvanţilor specifici într-o cantitate specifică pentru anumiţi antigeni, iv) adsorbţia individuală sau absorbţia combinată a antigenilor pe adjuvanţi v) gradul de adsorbţie a antigenilor pe adjuvanţi vi) folosind concentraţia minimă de aluminiu vii) folosind concentraţia optimă şi tipul de conservanţi viii) utilizarea diferitor parametri inclusiv agitarea, temperatura şi pH-ul.

Surse biologice de tulpini folosite în vaccinul combinat SIIPL.

Toxoid difteric

TulpinaCorynebacterium diphtheriaePW8 CN2000 a fost obţinută din the Wellcome Research Laboratory, London, United Kingdom by the National Control Authority Central Research Institute (C.R.I.) Kasauli, Himachal Pradesh, India în forma liofilizată în anul 1973. Tulpina a fost reînviată şi în continuare liofilizată sub Lotul de inseminare principal -C. diphtheriae CN2000 A1 la C.R.I. Kasauli.

Toxoid tetanos

TulpinaClostridium tetani Harvard Tulpină No. 49205 a fost obţinută de Institutul Rijks Voor de Volksgezondheid (Olanda) de către National Control Authority C.R.I. Kasauli, în forma liofilizată.

Pertussis

Fabricarea în masă a vaccinului contra pertussis la SIIPL implică utilizarea a patru tulpini deBordetella pertussis anume tulpinile 134, 509, 6229 şi 25525. Seminţele de bază ale tulpinilor 134 şi 509 sunt originare din Rijks Institute, Olanda, obţinute prin National Control Authority, Central Research Institute, Kasauli, Himachal Pradesh, India. Seminţele de bază ale tulpinilor 6229 şi 25525 sunt originare din Lister Institute, Anglia.

Hepatita B

Rhein Biotech (Germany) a construit tulpina recombinantăHansenula polymorphace conţine gena antigenului de suprafaţă HBsAg. Rhein Biotech de asemenea a pregătit banca de celule de referinţă (MCBHansenula polymorphaK3/8-1 tulpina ADW, 12/94) şi efectuat toate testele de caracterizare asupra acestui banc.

Haemophilus influenzaede tip b

Organismul sursă pentru generarea de substrat celular esteHaemophilus influenzae de tip b, tulpina 760705. Tulpina a fost iniţial izolată dintr-un băieţel de 2 ani şi 2 luni (născut la 14-8-74) în Noiembrie 1976. Trei pasaje ale tulpinii au avut loc înainte depozitare la -70°C la Centrul Medical Academic (AMC), Universitatea din Amsterdam. Această tulpină a fost transferată la SIIPL ca o parte a colaborării între SIIPL şi Institutul de Vaccinuri Oladez (NVI, Olanda).

IPV

Tulpina şi sursa virusului de poliomielită Salk sunt prezentate mai jos.

Poliovirus de tip 1

Tulpina: Mahoney,

Sursa: Bilthoven Biologicals, Olanda.

Poliovirus de tip 2

Tulpina: MEF1,

Sursa: Bilthoven Biologicals, Olanda.

Poliovirus de tip 3

Tulpina: Saukett,

Sursa: Bilthoven Biologicals, Olanda.

În toată acesastă specificare cuvântul “include”, sau variaţii ca “include” sau “care include”, va fi înţeles să implice incluziunea unui element stabilit, număr întreg sau etapă, sau grup de elemente, numere întregi sau etape, dar nu excluderea oricărui alt element, număr întreg sau etapă, sau grup de elemente, numere întregi sau etape.

Utilizarea expresiei “cel puţin” sau “cel puţin un” sugerează utilizarea unuia sau mai multor elemente sau ingredienţi sau cantităţi, precum pot fi utilizaţi în exemplul de realizare conform invenţiei pentru a atinge unul sau mai multe din obiectele sau rezultatele dorite. În timp ce anumite exemple de realizare conform invenţiilor au fost descrise, aceste exemple de realizare au fost prezentate doar cu titlu de exemplu, şi nu intenţionează să limiteze scopul invenţiilor. Variaţiile sau modificările formulării acestei invenţii, în conformitate cu scopul invenţiei, pot fi clare pentru persoanele din domeniu după examinarea prezentei dezvăluiri. Aceste variaţii sau modificări sunt în corespundere cu spiritul acestei invenţii.

Valorile numerice administrate pentru diverşi parametri fizici, dimensiuni şi cantităţi sunt doar valori aproximative şi se prevede că valorile superioare decât valoarea numerică atribuită la paramerii fizici, dimensiuni şi cantităţi intră în domeniul de aplicare a invenţiei cu excepţia cazului în care există o declaraţie contrară.

În timp ce un accent considerabil a fost pus aici pe caracteristicile specifice ale exemplului de realizare preferat, va fi apreciat că multe caracteristici suplimentare pot fi adăugate şi că multe schimbări pot fi pregătite în exemplul de realizare preferat fără a pleca de la principiile dezvăluirii. Aceste şi alte schimbări în exemplul de realizare preferat al dezvăluirii va fi evident pentru pesoanele din domeniu din prezenta dezvăluire, prin care trebuie să fie înţeles clar că materialul descris mai sus trebuie interpretat doar ca o ilustrare al dezvăluirii şi nu ca o limitare a acesteia.

Prezenta dezvăluire descrisă mai sus are câteva avantaje tehnice şi avantaje inclusiv, dar fără a se limita la, realizarea unei compoziţii de vaccin combinat care include D, T, wP, HBsAg, PRP-TT Hib conjugat şi IPV şi metoda de fabricare a acesteia.

În comparaţie cu alte compoziţii de vaccin combinat, prezenta dezvăluire oferă următoarele avantaje:

Vaccin combinat complet lichid.

Doză redusă a antigenului IPV în comparaţie cu doza standard care prezintă eficacitate comparabilă în comparaţie cu doza standard (40-8-32 DU).

Imunogenicitate îmbunătăţită a antigenului D, T, wP, HepB, Hib, IPV.

Stabilitate îmbunătăţită la temperatura de 2…8°C şi temperatura camerei de testare într-o perioadă de 12 luni.

Toxoizii difteriei (D) şi toxoiziitetanos (T) de puritate superioară au fost produşi folosind mediu semisintetic liber de encefalopatia spongiformă transmisibilă (TSE) sau encifalopatia spongiformă bovină (BSE).

AntigenulB. pertussis cu celule întregi (wP) include tulpinile Bordetella pertussis 134, 509, 25525 şi 6229 într-un raport de 1:1:0,25:0,25astfel îmbunătăţind potenţa şi imunogenicitatea împotrivaB. pertussis.

Metoda îmbunătăţită de inactivare a componentuluiB. pertussis cu celule întregi (wP) folosind combinaţia inactivării termale şi cu formaldehidă. Procesul este lipsit de Thiomersal şi antigenul pertussis cu celule întregi inactivat rămâine neaglomerat şi omogen ducând uşor la reactogenitate redusă şi dând o potenţă mai bună pentru o durată mai lungă.

PRP-ul liber scăzut (mai mic de 7%) în volumul total deHaemophilus influenzae de tip b PRP-TT conjugat.

Procentajul de adsorbţie a antigenului Hib pe orice adjuvant este mai mic de 20%.

Profilul de adsorbţie îmbunătăţit a antigenului toxoid difteric (D), antigenului toxoid tetanos (T) şi antigenului de suprafaţă a hepatitei B (HepB) adsorbit individual pe adjuvantul fosfat de aluminiu astfel îmbunătăţind potenţa şi imunogenicitatea.

Conţinut minim total de aluminiu (Al3+) astfel asigurând reactogenitate redusă.

Concentrarea optimizată de 2-fenoxietanol (2-PE) şi cel puţin un ester paraben (metilparaben sau propilparaben) ca conservant prin urmare menţinerea abilitatea antimicrobiană vaccin combinat cu doze multiple complet lichid în mod eficient.

Exemple

Următoarele example sunt incluse pentru a demonstra exemplele preferate de realizare conform invenţiei. Ar trebui apreciat de specialiştii din domeniu că compoziţiile şi tehnicile dezvăluite în exemplele care urmează tehnicile descoperite de inventator pentru o bună funcţionare a invenţiei în practica şi, prin urmare, şi astfel poate fi văzut ca o modalitate preferată de a o practica. Totuşi, persoanele calificate din domeniu ar trebui, în lumina prezentei dezvăluiri, apprecia că multe schimbări pot fi realizate în exemplele specifice de realizare care sunt dezvăluite şi de a obţine un rezultat identic sau similar fără se îndepărta de la spiritul şi scopul invenţiei.

Exemplul 1

Diverse combinaţii ale compoziţiilor de vaccin în corespundere cu prezenta dezvăluire.

Vaccin combinat care include IPV (Tulpina Salk de tip 1 (Mahoney) sau de tip 2 (MEF) sau de tip 3 (Saukett))

Tabelul 25

S. No. Componenţi ai formulării Compoziţia combinaţiei în corespundere cu prezenta dezvăluireperdoză de 0,5 mL 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1 Toxoid difteric (D) 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 20 Lf 20 Lf 20 Lf 20 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02 Lf 02 Lf 02 Lf 02 Lf 02 Lf 02 Lf 02 Lf 02 Lf 4 Lf 4 Lf 4 Lf 4 Lf 3 Antigen B. pertussis inactivat (wP) 12 IOU 12 IOU 12 IOU 12 IOU 12 IOU 12 IOU 12 IOU 12 IOU 14 IOU 14 IOU 14 IOU 14 IOU 4 Antigen HBs 8 µg 8 µg 8 µg 8 µg 8 µg 8 µg 8 µg 8 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 8 µg de PRP 8 µg de PRP 8 µg de PRP 8 µg de PRP 8 µg de PRP 8 µg de PRP 8 µg de PRP 8 µg de PRP 10 µg de PRP 10 µg de PRP 10 µg de PRP 10 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) Tip 1 (Unităţi de antigen D) 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 Tip 2 (Unităţi de antigen D) 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 -- 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 -- 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 -- 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 -- 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 -- 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 -- Tip 3 (Unităţi de antigen D) 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg 8 2-Fenoxi-etanol 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 9 Metilparaben 0,9 mg 0,9 mg 0,9 mg 0,9 mg -- -- -- -- 0,9 mg 0,9 mg 0,9 mg 0,9 mg 10 Propilparaben 0,1 mg 0,1 mg -- -- 0,1 mg 0,1 mg -- -- 0,1 mg 0,1 mg -- --

Tabelul 25 (continuare)

S. No. Componenţi ai formulării Compoziţia combinaţiei în corespundere cu prezenta dezvăluireperdoză de 0,5 mL 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 1 Toxoid difteric (D) 20 Lf 20 Lf 20 Lf 20 Lf 25 Lf 25 Lf 25 Lf 25 Lf 25 Lf 25 Lf 25 Lf 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 4 Lf 4 Lf 4 Lf 4 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 3 Antigen B. pertussis inactivat (wP) 14 IOU 14 IOU 14 IOU 14 IOU 16 IOU 16 IOU 16 IOU 16 IOU 16 IOU 16 IOU 16 IOU 16 IOU 4 Antigen HBs 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 10 µg de PRP 10 µg de PRP 10 µg de PRP 10 µg de PRP 13 µg de PRP 13 µg de PRP 13 µg de PRP 13 µg de PRP 13 µg de PRP 13 µg de PRP 13 µg de PRP 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) Tip 1 (Unităţi de antigen D) 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 7,5 sau 10 sau 20 sau 40 Tip 2 (Unităţi de antigen D) 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 -- 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 -- 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 -- 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 -- 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 -- 1,5 sau 2 sau 4 sau 8 -- Tip 3 (Unităţi de antigen D) 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 6 sau 10 sau 16 sau 32 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg 8 2-Fenoxietanol 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 9 Metilparaben -- -- -- -- 0,9 mg 0,9 mg 0,9 mg 0,9 mg -- -- -- -- 10 Propilparaben 0,1 mg 0,1 mg -- -- 0,1 mg 0,1 mg -- -- 0,1 mg 0,1 mg -- --

Ajustarea suplimentară a pH-lui compoziţiei precum este dezvăluit mai sus de la 6,0 până la 7,0 cu hidroxid de sodiu/carbonat de sodiu şi formarea volumului prin adăugarea de ser fiziologic normal (0,9%). Vaccinul poate conţine urme de glutaraldehidă, formaldehidă, neomicină, streptomicină şi polimixină B care sunt folosite pe durata procesului de fabricare.

Vaccin combinat care include IPV (Tulpina Sabin: Tip 1, Tip 2 şi Tip 3)

Tabelul 26

S. No Componenţi ai formulării Compoziţia combinaţiei în corespundere cu prezenta dezvăluireper doză de 0,5 mL 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1 Toxoid difteric (D) 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 20 Lf 20 Lf 20 Lf 20 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 02 Lf 02 Lf 02 Lf 02 Lf 02 Lf 02 Lf 02 Lf 02 Lf 4 Lf 4 Lf 4 Lf 4 Lf 3 Antigen B. pertussis inactivat (wP) 12 IOU 12 IOU 12 IOU 12 IOU 12 IOU 12 IOU 12 IOU 12 IOU 14 IOU 14 IOU 14 IOU 14 IOU 4 Antigen HBs 8 µg 8 µg 8 µg 8 µg 8 µg 8 µg 8 µg 8 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 8 µg de PRP 8 µg de PRP 8 µg de PRP 8 µg de PRP 8 µg de PRP 8 µg de PRP 8 µg de PRP 8 µg de PRP 10 µg de PRP 10 µg de PRP 10 µg de PRP 10 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) Tip 1 (Unităţi de antigen D) 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 Tip 2 (Unităţi de antigen D) 4 sau 8 sau 16 -- 4 sau 8 sau 16 -- 4 sau 8 sau 16 -- 4 sau 8 sau 16 -- 4 sau 8 sau 16 -- 4 sau 8 sau 16 -- Tip 3 (Unităţi de antigen D) 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg 8 2-Fenoxietanol 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 9 Metilparaben 0,9 mg 0,9 mg 0,9 mg 0,9 mg -- -- -- -- 0,9 mg 0,9 mg 0,9 mg 0,9 mg 10 Propilparaben 0,1 mg 0,1 mg -- -- 0,1 mg 0,1 mg -- -- 0,1 mg 0,1 mg -- -

Tabelul 26 (continuare)

S. No. Componenţi ai formulării Compoziţia combinaţiei în corespundere cu prezenta dezvăluire per doză de 0,5 mL 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 1 Toxoid difteric (D) 20 Lf 20 Lf 20 Lf 20 Lf 25 Lf 25 Lf 25 Lf 25 Lf 25 Lf 25 Lf 25 Lf 25 Lf 2 Toxoid tetanos (T) 4 Lf 4 Lf 4 Lf 4 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 10 Lf 3 Antigen B. pertussis inactivat (wP) 14 IOU 14 IOU 14 IOU 14 IOU 16 IOU 16 IOU 16 IOU 16 IOU 16 IOU 16 IOU 16 IOU 16 IOU 4 Antigen HBs 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 15 µg 5 Antigen conjugat PRP-TT Hib 10 µg de PRP 10 µg de PRP 10 µg de PRP 10 µg de PRP 13 µg de PRP 13 µg de PRP 13 µg de PRP 13 µg de PRP 13 µg de PRP 13 µg de PRP 13 µg de PRP 13 µg de PRP 6 Virus de poliomelită inactivat (IPV) Tip 1 (Unităţi de antigen D) 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 5 sau 10 sau 20 Tip 2 (Unităţi de antigen D) 4 sau 8 sau 16 -- 4 sau 8 sau 16 -- 4 sau 8 sau 16 -- 4 sau 8 sau 16 -- 4 sau 8 sau 16 -- 4 sau 8 sau 16 -- Tip 3 (Unităţi de antigen D) 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 10 sau 16 sau 32 7 Conţinut total de aluminiu (Al3+) (ca fosfat de aluminiu) Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg Nu mai mult de 0,55 mg 8 2-Fenoxietanol 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 2,5 mg 9 Metilparaben -- -- -- -- 0,9 mg 0,9 mg 0,9 mg 0,9 mg -- -- -- -- 10 Propilparaben 0,1 mg 0,1 mg -- -- 0,1 mg 0,1 mg -- -- 0,1 mg 0,1 mg -- --

Ajustarea suplimentară a pH-lui compoziţiei precum este dezvăluit mai sus de la 6,0 la 7,0 cu hidroxid de sodiu/carbonat de sodiu şi formarea volumului prin adăugarea de ser fiziologic normal (0,9%). Vaccinul poate conţine urme de glutaraldehidă, formaldehidă, neomicină, streptomicină şi polimixină B care sunt folosite pe durata procesului de fabricare.

Exemplul 2

Proces de producere a volumului deHaemophilus influenzae de tip b conjugat.

O viziune largă a etapelor de producere. Fiecare din cele 53 de etape ale procesului sunt descrise sumar mai jos:

Etapa 1: Etapa de inoculare I cu agitarea balonului (S1).

O fiolă cu lotul de înseminare de lucru este folosită pentru a inocula stadiul de inoculare I cu agitarea balonului, care conţine mediu de înseminare filtrate prin 0,22 µm. Un balon PETG de unică folosinţă de 125 mL cu un volum de lucru de 25 mL este folosit. Această etapă este realizată într-un agitator al incubatorului cu agitare controlată (200 ± 50 rpm) şi temperatura (36 ± 2°C). După realizarea unei creşteri bacteriene dorite (OD590≥ 1,0), cultura este transferată la următoarea etapă de inoculare (Etapa S2), care este descrisă în etapa 2. Colorarea Gram este efectuată ca un proces de control pentru a asigura puritatea culturii (cocobacili Gram-negativi).

Etapa 2: Etapa de inoculare II cu agitarea balonului (S2).

Etapa de inoculare S2 constă din baloane Fernbach de 2 L (S2A şi S2B) cu un volum de lucru de 800 mL. Balonul S2A este folosit pentru măsurarea OD590, până când OD590 este în criteriile acceptate şi balonul S2B este folosit pentru etapa de inoculare S3. Ambele baloane sunt încărcat cu mediu sterilizat prin filtrare, care este identic cu etapa de inoculare S1. Balonul etapei S1 este folosit pentru a inocula ambele baloane de agitare a etapei II. Această etapă este realizată într-un agitator al incubatorului cu agitare controlată (200 ± 50 rpm) şi temperatura (36 ± 2 °C). După realizarea unei creşteri bacteriene dorite (OD590 ≥ 1,0), cultura este transferată la următoarea etapă de inoculare (etape S3), care este descrisă în etapa 3. Colorarea Gram este efectuată ca un proces de control pentru a asigura puritatea culturii (cocobacili Gram-negativi).

Etapa 3: Fermentarea la etapa de inoculare III.

Etapa de inoculare S3 constă dintr-un fermentator de 120 L cu un volum de lucru de 35 L. Fermentatorul este încărcat cu un mediu care este identic cu etapele de inoculare anterioare. Balonul etapei S2 este folosit pentru a inocula fermentatorul de inoculare. Creşterea este realizată la temperatura (36 ± 2°C), DO (10% punct de setare), agitare (300…600 rpm), aerare (1…5 LPM) şi contrapresiune (0,2 bar) în fermentatorul de inoculare. După realizarea unei creşteri bacteriene dorite (OD590 ≥ 1,0), cultura este transferată la etapa de producere următoare (Etapa S4), care este descris în etapa 4. Colorarea Gram este efectuat ca un proces de control pentru a asigura puritatea culturii (cocobacili Gram-negativi).

Etapa 4: Producerea prin fermentare la scara de 1200 L.

Fermentatorul de producere de 1200 L are un volum de lucru de 800 L. El este încărcat cu componentele de bază ale mediului şi sterilizate cu vaporiîn situ. Ulterior, diverse suplimente ale mediului sunt adăugate după trecerea prin-un filtru de 0,22 µm. Fermentatorul este inoculat cu cultura etapei S3 obţinută din etapă 3. Fermentarea este efectuată în oxigen dizolvat controlat (20% - punct de setare), temperatura (36 ± 2°C), pH (7,1-7,4), agitare (40…400 rpm), aerare (50…300 LPM) şi contrapresiune (0,2 bar). Două maxime discrete de nutrienţi sunt adăugate pe durata cursului de fermentare. Creşterea este monitorizată de măsurarea OD590 (OD590 ≥ 3,5) şi fermentarea este considerată completă după atingerea etapei staţionare. Pe durata creşterii şi fazei staţionare, produsul polizaharidic este secretat şi se acumulează în bulionul de cultivare. Colorarea Gram este efectuat ca un proces de control pentru a asigura puritatea culturii (cocobacili Gram-negativi).

Etapa 5: Tratamentul cu formalină.

Reducerea supraîncărcării este realizată în această etapă folosind agentul chimic (formalina). Formalina de 0,1% este adăugată şi bulionul fermentat este incubat pentru NLT 2 ore la temperatura de 37°C. După tratament cu formalină, vesela este răcită rapid la <15°C. Adiţia formalinei este validată pentru a atinge reducerea supraîncărcării. Acest lucru este verificat de plăcile de cultură după perioada de incubare. Bulionul cu supraîncărcarea redusă este gata pentru colectare aşa cum este descris în etapa 6.

Etapa 6: Recoltarea continuă prin centrifugare.

Centrifugarea continuie este implicată ca o etapă primară a recoltării. Această etapă este efectuată pentru a separa bulion crud ce conţine polizaharide din biomasa inactivată. O centrifugare continuie este folosită cu scopul de a înlătura >90% din biomasă, precum a fost măsurat măsurat de reducerea OD590. Centrifugarea este operată la aproximativ 15000 rpm şi la o rată de curgere a lichidului de 200…500 L/oră. Supernatantul centrifugat este în continuare procesat aşa cum este descris în etapa 7.

Etapa 7: Filtrare profundă 50LP.

Supernatantul centrifugat este trecut printr-un filtru profund 50LP pentru a înlătura materialul grosier precum resturile celulare. Etapa permite ca produsul că treacă prin filtru, şi este în-linie cu un filtru profund suplimentar, aşa cum este descris în etapa 8.

Etapa 8: Filtrare profundă 90LP.

Filtratul din filtrarea profundă 50LP este în continuare trecut printr-un filtru profund 90LP (capacitatea nominală 0,22 µm) pentru a elimina în continuare orice material insolubil care n-a fost reţinut anterior de filtrul profund. Această etapă asigură ca filtratul este în esenţă lipsit de resturi celulare, şi poate trece printr-un filtru de 0,22 µm uşor. Etapa ulterioară de filtrare este descrisă în etapa 9.

Etapele 9 şi 10: Filtrarea cu 0,22 µm.

Filtratul din filtrarea profundă de 90 LP este în continuare trecut printr-un filtru de 0,22 µm, şi filtratul este colectat în rezervorul de păstrare.

Etapele 11 şi 12: Concentrarea şi diafiltrarea cu 100kD.

Această etapă este realizată pentru a înlătura componentele mediului şi impurităţile cu masă moleculară mică. În plus, concentrarea este efectuată pentru a reduce volumul de lucru. Înlăturarea greutăţii moleculare de 100 kD este realizată deoarece masa moleculară a polozaharidei Hib (PRP) este ≥ 500 kD. Bulionul este concentrat de aproximativ 10 ori şi ulterior diafiltrat până la 5 volume NLT folosind tampon PBS de 0,01 M (pH 7,2). Produsul rezultat în rămăşiţă este menţionat ca “PRP crud” şi este în continuare procesat aşa cum este descris în etapa 13. Bulionul concentrat este transferat către zona DSP prin portul de transfer prin intermediul filtrului 0,22 µm pentru a se asigura că nici o bacterie nu este trasportată în zona DSP.

Etapa 13: Precipitarea CTAB.

CTAB (bromură de cetil-trimetil amoniu) este un detergent cationic, care este folosit pentru precipitarea polizaharidelor. CTAB constă dintr-o regiune hidrofilică precum şi o parte hidrofobă, şi precipită proteinele, acizii nucleici şi polizaharidele. PRP-ul crud obţinut din etapă 12 este precipitat la o concentrarea CTAB de 1% şi incubat pentru > 2 ore. Colectarea peletelor CTAB este descrisă în etapa 14.

Etapele 14, 15 şi 16: Centrifugarea, colectarea şi depozitarea peletelor CTAB.

Peletele SEZ-3, FF, CTAB sunt centrifugate folosind centrifugarea continuie la 15000 rpm. Pelete CTAB sunt colectate, cântărite, alicotate şi sunt depozitate la ≤ -20°C pentru procesarea ulterioară. Aceasta este prima etapă de reţinere a procesului.

Etapele 17 şi 18: Dezgheţarea şi dizolvarea pastei CTAB.

Pasta CTAB îngheţată este dezgheţată la temperatura camerei. Peletele dezgheţată sunt dizolvate în soluţie de NaCl de 5,85%. Dizolvarea este realizată într-un rezervor pentru agitare şi produsul polizaharidic este solubilizat în faza apoasă. Rezervorul conţine ceva material nedizolvat, care vine din proteina şi acizii nucleici precipitaţi. Această suspensie este în continuare procesată aşa cum este descris în etapa 19.

Etapa 19: Centrifugarea.

Materialul obţinut din etapă 18 este centrifugat la 2…8 °C, cu 5000…6500 rpm, timp de 20…30 minute pentru a înlătura materialul nedizolvat. Supernatantul centrifugat este colectat, şi în continuare procesat aşa cum este descris în etapa 20.

Etapa 20: Precipitarea cu etanol de 72%.

Etanolul de 72% este folosit pentru precipitarea PRP. Etanolul de 96% este folosit să genereze o concentrarea a etanolului de 72% în raport cu supernatantul obţinut în etapa 19. Această precipitare este realizată la 2…8 °C peste noapte. Precipitatul rezultat este colectat aşa cum este descris în etapa 21.

Etapele 21 şi 22: Centrifugarea şi dizolvarea peletelor.

Precipitatul obţinut după tratare cu etanolul de 72% este colectat prin centrifugare la 2…8°C, cu 5000…6500 rpm, timp de pentru 20…30 minute. Peletele rezultate sunt dizolvate în W.F.I. până când se obţine o claritate vizuală. Prelucrarea ulerioară a peletelor solubilizate este descrisă în etapa 23.

Etapa 23: Precipitarea cu etanol de 32% şi DOC.

La materialul obţinut din etapă 22,6% acetat de sodiu şi 1% deoxicolat de sodiu (DOC) este adăugat. Etanolul de 96% este folosit să genereze o concentrarea finală a etanolului de 32%. Ambele DOC şi alcoolul de 32% conduc la precipitarea impurităţilor proteice, în timp ce permite polizaharidelor să rămână faza lichidă. Această precipitare este realizată la 2…8 °C peste noapte (NLT 8 ore).

Etapa 24: Centrifugarea.

Materialul obţinut din etapă 23 este centrifugat la 2…8oC, cu 5000…6500 rpm, timp de 20…30 minute pentru a înlătura precipitarea. Supernatantul centrifugat este colectat şi în continuare procesat aşa cum este descris în etapa 25.

Etapa 25: Filtrarea profundă şi pe carbon.

Soluţia supernatantă obţinută în etapa 24 conţine PRP solubil şi este supus la filtrării profunde urmată de filtrare pe carbon pentru a înlătura acizii nucleici şi coloranţii. Înlăturarea acizilor nucleici este monitorizată de măsurarea absorbanţei intermitente la 260 nm (A260). După ce obiectivul A260 este atins soluţia este filtrată printr-un filtru de 0,22 µm şi această soluţie filtrată în continuare procesată aşa cum este descris în etapa 26.

Etapa 26: Precipitarea cu etanol de 64%.

Materialul filtrat obţinut în etapa 25 este în continuare precipitat cu etanol de 96% până la o concentrarea finală a etanolului de 64%. Această precipitare este realizată la 2…8oC peste noapte. Precipitatul rezultat este colectat prin centrifugare, şi în continuare procesat aşa cum este descris în etapa 27.

Etapa 27: Colectarea şi dizolvarea peletelor.

Supernatantul este decantat şi aruncat pentru a colecta peletele. Peletele sunt dizolvate în W.F.I. la temperatura camerei.

Etapa 28: Concentrarea şi diafiltrare de 300 kD.

Soluţia peletelor dizolvate este concentrată folosind membrana NMWCO de 300 kD. Aceasta este în continuare diafiltrată nu mai puţin decât 8X (NLT) folosind W.F.I. Rămăşiţa rezultată este procesată în continuare aşa cum este descris în etapa 29.

Etapele 29 şi 30: Filtrarea prin 0,22 µm şi depozitarea PRP-ului purificat.

Rămăşiţa UF de 300 kD este trecută prin-un filtru de 0,22 µm ca o etapă de clarificare pentru a evita încărcarea biologică. PRP-ul purificat rezultat este alicotat şi este depozitat la ≤ -20oC până la utilizarea ulterioară aşa cum este descris în etapa 31. Proba de PRP purificat este trimis la analiza.

Etapa 31: Dezgheţarea şi unificarea.

Pe baza dimensiunii lotului conjugat cantitatea necesară de polizaharidă nativă obţinută în etapă 30 este dezgheţată. Materialul unificat este analizat pentru conţinutul PRP, care este necesar pentru prelucrarea ulterioară aşa cum este descris în etapa 32.

Etapa 32: Concentrarea de 100 kD.

Polizaharidele purificate unificate trebuie să fie de o concentrarea minimă (8…12 mg/mL) pentru prelucrarea ulterioară. Dacă concentraţia polizaharidelor unificate este de mai joasă decât cea dorită, soluţia polizaharidelor unificate este concentrată folosind o membrana NMWCO UF de 100 kD.

Proba este extrasă după concentrare pentru a asigura că concentraţia minimă este atinsă pentru etapele ulterioare (etapă 33).

Etapa 33: Depolimerizarea alcalină.

Polizaharida concentrată (echivalent la 74g/110g) obţinută din etapă 32 este depolimerizată în condiţii alcaline moi folosind tamponul carbonat-bicarbonat. După ce dimensiunile dorite ale polizaharidei sunt atinse, polizaharida depolimerizată este activată aşa cum este descris în etapa 34.

Etapa 34: Activarea polizaharidelor.

Polizaharida depolimerizată obţinută în etapa 33 este activată folosind bromură de cianogen. Această activare este făcută în mediu de azot. Bromură de cianogen este un reagent foarte toxic şi măsurile speciale sunt respectate în timp lucrului cu acest reagent.

Etapa 35: Anexarea linkerului.

Soluţia dihidrazidei acidului adipic proaspăt preparată (ADH) este adăugat în 6…10 minute la amestecul de reacţie obţinut din etapă 34. Reacţia este realizată pentru NLT 16 ore la 2…10°C. Rolul linker-ului ADH este de a oferi grupe amine în polizaharida necesare pentru reacţia de conjugare.

Etapa 36: Concentrarea şi diafiltrarea.

Amestecul de reacţie obţinut din etapă 35 este concentrat şi diafiltrat volum cu volum cu soluţie tampon fosfat salin (PBS) folosind membrana NMWCO UF de 10 kD pentru a înlătura ADH-ul liber. Înlăturarea ADH-lui este monitorizată prin HPLC şi diafiltrarea este continuată până când nivelul ADH liber atinge valoarea de mai jos 5%. Rămăşiţa rezultată este în continuare diafiltrată cu tampon MES-NaCl NLT 5X. Aceasta este în continuare concentrată pentru a atinge o concentraţie de NLT de 20 mg/mL. Acest PRP-ul procesat concentrat este păstrat la temperatura de 2…8oC până la utilizarea ulterioară aşa cum este descris în etapa 37.

Etapele 37 şi 38: filtrarea prin 0,22 µm şi depozitarea PRP-ul procesat.

Rămăşiţă din etapă 36 este trecută printr-un filtru de 0.22 µm, care serveşte ca o etapă de clarificare. Aceasta de asemenea asigură că nivelurile biosarcinelor sunt controlate pe durata procesul, care este efectuat în domeniul de grade C. Polizaharida activată filtrată este colectată, eşantionată, alicotată şi este depozitată la temperatura de 2…8°C până la prelucrarea ulterioară. O probă este extrasă din rezerva de polizaharidă procesată pentru analiza, care include mărimea moleculară PRP (kD), conţinutul PRP, şi gradul de activare PRP. Prelucrarea ulterioară a PRP-ului procesat este descris în etapa 40.

Etapa 39: Concentrarea şi diafiltrarea TT de 10 kD.

Reacţia de conjugare necesită doi componenţi anume polizaharida procesată şi proteina purtătoare (TT). Proteina purtătoare este concentrată şi diafiltrată cu tamponul MES-NaCl folosind membrana NMWCO UF de 10 kD. Această proteină purtătoare diafiltrată este apoi concentrată în continuare la NLT de 20 mg/mL folosind aceeaşi membrană.

Etapa 40: Conjugarea.

Reacţia de conjugare necesită doi componenţi, anume polizaharida procesată şi proteina purtătoare (TT). Componentul polizaharidei activate este obţinut din etapă 38. Proteina purtătoare este obţinut din etapă 39. Doi componenţi sunt amestecaţi în cantităţi corespunzătoare în raport de PRP: TT = 1:1 (w/w) în prezenţă de EDC la agitare. Reacţia de conjugare este monitorizată prin HPLC şi este continuată până conversia de ≥ 85% a proteinei (bazată pe conversia proteinei libere în conjugate) este atinsă.

Etapa 41: Întreruperea.

După reacţia de conjugare a continuat la criteriile sale de acceptare pentru conversia (etapă 40), reacţia este terminată prin întrerupere. Reacţia de conjugare este întreruptă folosind tampon fosfat EDTA. Această reacţie de conjugare este ulterior procesată aşa cum este descris în etapa 42.

Etapa 42: 30 SP şi filtrarea de 0,22 µm.

Conjugatul obţinut din etapă 41 este filtrat printr-un filtru 30 SP urmată de filtrarea prin 0,22 µm. Aceasta asigură înlăturarea oricăror agregate mari. Filtratul conjugat este procesat aşa cum este descris în etapa 43.

Etapa 43: Ultrafiltrarea şi diafiltrarea de 300 kD.

Amestecul reacţiei de conjugare obţinut din etapă 42 este diafiltrat cu ser fiziologic normal de 0,05% folosind membrana NMWCO UF 300 kD. Diafiltrarea este efectuată pentru a înlătura reagenţii de conjugare şi TT nereacţionat. Rămăşiţa rezultată este în continuare procesată aşa cum este descris în etapa 44.

Etapele 44 şi 45: Filtrarea prin 0,22 µm şi depozitarea conjugatului crud.

Rămăşiţă din etapă 43 este trecută printr-un filtru prin 0,22 µm, care serveşte ca o etapă de clarificare. Aceasta de asemenea asigură că nivelurile biosarcinelor sunt controlate pe durata procesului, care este efectuat în domeniul de grade C. Conjugatul crud filtrat este colectat, eşantionat şi este depozitat la temperatura de 2…8oC până la prelucrarea ulterioară. Prelucrarea ulterioară a conjugatului crud este descris în etapa 46.

Etapa 46: Diluarea conjgatului crud.

Un conjugat crud din etapă 45 este diluat cu W.F.I. la o concentraţie dorită de 4±1 mg/mL, dacă este necesar şi în continuare procesat prin precipitare precum este descris în etapa 47.

Etapa 47: Precipitarea cu sulfat de amoniu.

Amestecul de reacţie conjugat diluat este în continuare procesat pentru a înlătura PRP-ul liber folosind sulfatul de amoniu (50% m/v soluţie stoc). Etapa de precipitare este realizată la mai puţin de 15°C la agitare. Etapa de precipitare conduce la precipitarea conjugatului, şi lasă PRP-ul liber în supernatant. După adăugarea sulfatului de amoniu suspensia rezultată este depozitată la mai puţin de 15°C fără agitare pentru NLT 12 ore.

Etapa 48: Colectarea şi dizolvarea peletelor.

Suspensia obţinută din etapă 47 este centrifugată la ~7000 g la temperatura de 2…8°C, timp de 40±10 minute. Supernatantul este aruncat prin decantare şi peletele obţinut sunt dizolvate în Tris-ser fiziologic normal.

Etapa 49: Diafiltrarea de 300 kD.

Soluţia rezultată din etapă 48 este filtrată printr-un filtru profund 30 SP şi diafiltrat cu Tris-ser fiziologic normal de 20 mM folosind membrana NMWCO kD 300.

Etapa 50: Purificarea prin cromatografie GPC.

Soluţia rezultată din etapă 49 este încărcată pe o coloană GPC de aproximativ 70 L ce conţine gel granulat din polimer metacrilic hidroxilat Toyopearl HW-65F pentru cromatografia de excludere a mărimii. Utilizarea cromatografiei GPC pentru conjugatul procesat (post-sulfat de amoniu) reduce nivelurile PRP-ului liber în materialul rezultat. Coloana este eluată cu NaCl de 0,9% Tris de 20 mM, şi fracţiile sunt colectate pe bază de A280. Fracţiile corespunzătoare bazate pe criteriile de acceptare cu referire la PRP-ul liber, raportul şi dimensiunea moleculară sunt unificate, şi unificatul este în continuare procesat, aşa cum este descris în etapa 51.

Etapa 51: Diafiltrarea de 300 kD.

Conjugatul unificat rezultat eluat din etapă 50 este diafiltrat cu Tris de 20 mMs folosind membrana NMWCO UF 300 kD. Acest volum rămas este vizat astfel încât conţinutul PRP în el este de aproximativ 1 mg/mL.

Etapele 52 şi 53: Filtrarea prin 0,22 µm.

Volumul conjugatului obţinut din etapă 51 este filtrat printr-un filtru de 0,22 µm în condiţiile mediului de grad A pentru a asigura sterilitatea. Filtrul de 0,22 µm este testat pentru integritate. O probă din volumul filtrat conjugat este trimis la Q.C. pentru analiză completă. Filtratul conjugat este etichetat ca “Volum de conjugat steril Hib” şi este depozitat la temperatura de 2…8°C. Volum conjugatului va fi depozitat la temperatura de 2…8°C pentru maximum 3 luni şi ulterior dacă nu este utilizat, el poate fi este depozitat la temperatura de -70°C pentru o durată totală de până la 1 an.

Caracteristice calitative ale antigenului conjugat PRP-TT Hibobţinute după cum urmează:

Conţinutul PRP (µg/0,5ml) 8,1 Raport (PRP:TT) : 0,5 PRP-ul liber (%) : 4,8% PMW (kD) : 983 Avg MW (kD) : 752.

Exemplul 3

Procesul de fabricare a antigenului inactivat wP

Metodă de inactivare a antigenului pertussis cu celule întregi (wP).

Optimizarea metodei de inactivare este făcută după realizarea diferitor experimente care includ inactivarea la temperatura de 56°C pentru 10 min în prezenţă de formaldehidă, la temperatura de 56°C, pentru 15 min în prezenţă de formaldehidă, la temperatura de 56°C pentru 10 min în prezenţa himinei, la temperatura de 56°C pentru 15 min în prezenţa himinei şi doar încălzirea la temperatura de 56°C pentru 30 min. Nici o diferenţă semnificativă în potenţa se observă cu aceste metode. În afara acestor metode, la temperatura de 56°C pentru 10 min în prezenţa formaldehidei este selectat deoarece masa de celule pertussis produsă folosind această metodă este mai mult omogenă în comparaţie cu alte metode menţionate mai sus.

Procesul de fabricare a antigenului inactivat wP include următoarele etape

a) inactivarea la temperatura de 56°C, timp de 10…15 minute în prezenţă de formaldehidă a tulpinii Bordetella pertussis 134;

b) inactivarea la temperatura de 56°C, timp de 10…15 minute în prezenţă de formaldehidă a tulpinii Bordetella pertussis 509;

c) inactivarea la temperatura de 56°C, timp de 10…15 minute în prezenţă de formaldehidă a tulpinilor Bordetella pertussis 25525 şi 6229;

d) inactivarea la temperatura de 56°C, timp de 10…15 minute în prezenţă de formaldehidă atulpinii Bordetella pertussis6229;

e) amestecarea ulterioară a tulpinilor inactivate deBordetella pertussis134, 509, 25525 şi 6229 într-un raport de 1:1:0,25:0,25;

f) absorbţia opţională pe un adjuvant bazat pe aluminiu.

Procesul este lipsit de Thiomersal şi antigenul pertussis cu celule întregi inactivat rămâine neaglomerat şi omogen ducând uşor la reactogenitate redusă şi dând o potenţă mai bună pentru o durată mai lungă.

Exemplul 4

Proces de fabricare a virusului de poliomielită inactivată (IPV)

Virusul de poliomielită poate fi crescut prin metoda următoare.

Filtratul a fost supus filtrării tangenţiale în flux cu caseta de 100 KDa; diafiltrat folosind soluţie tampon fosfat şi purificat folosind cromatografia de schimb ionic.

Înainte de administrare la pacienţi, virusul poate fi inactivată folosind metode de inactivare potrivite.

Inactivarea cu formalină include următoarele etape.

a) Setul de virus purificat o fost supus schimbului de la soluţia tampon fosfat la soluţia tampon Tris în limitele de la (30 la 50 mM), având pH între 7 la 7,5.

b) La amestecul de mai sus s-a adăugat mediul M-199 ce conţine glicină (5 gm/L).

c) Formaldehida de 0,025% s-a adăugat şi s-a amestecat ulterior.

d) Amestecul a fost ulterior incubat la temperatura de 37°C, timp de 5…13 zile cu agitare continuă a masei virale pe un agitator magnetic.

e) Amestecul după incubare a fost supus sistemului intermediar TFF (100 KDa, 0,1 m2) în ziua a 7-a şi filtrării finale după inactivarea.

f) Ulterior volumul filtrat o fost depozitat la temperatura de 2…8°C.

g) Realizarea ELISA D-Ag pentru determinare unităţii D-Ag.

h) Volumul setului monovalent al IPV de tip 1, tip 2 şi tip 3 s-a amestecat ulterior pentru a forma IPV trivalent sau bivalent (serotip Salk sau Sabin).

i) Ajustarea pH-lui formulării finale şi obţinerea formulării finale cu pH-ul între 6 şi 6,8.

j) Antigenul IPV (tulpinile Sabin sau Salk) ulterior adăugat la compoziţia finală de vaccin combinat odsorbit pe adjuvant (sare de aluminiu sau fosfat) prezent în vaccinul combinat în care procentul de adsorbţie al antigenului IPV pentru IPV de tip 1 s-a dovedit a fi în limitele de la 10…100 %, IPV de tip 2 în limitele de la 60…100% şi IPV de tip 3 în limitele de la 10…100 %.

Procedura de formulare a IPV-ului (tulpinile Sabin şi Salk) când este adsorbit individual pe o sare de aluminiu.

Luând volumul dorit de AlPO4 autoclavat pentru a obţine concentraţia finală de aluminiu (Al3+) între 0,1…0,8 mg/doza într-un container de 50 mL.

Adăugând volumul IPV cu unitate D-Ag ajustată şi pregătind volumul cu diluant (10x M-199+ 0,5% glicină.

Ajustarea pH-lui formulării finale şi obţinerea formulării finale cu pH între 6,0 şi 6,8.

4. Setul monovalent adsorbit pe aluminiu formulat corespunzător în IPV trivalent sau bivalent (serotip Salk sau Sabin).

Rezultă.

În care procentul adsorbţiei IPV de tip 1, 2, şi 3 (Sabin şi Salk) pe sarea de fosfat de aluminiu (AlPO4) s-a dovedit a fi cel puţin 90 %.

Solicitantul a fost capabil să atingă reducerea dozei pentru antigenii virusului de poliomielită de 2 ori (întrucât doza standard de antigeni ai virusului de poliomielită este de tip 1…40 DU, tip 2…8 DU, tip 3…32 DU).

Studii de adsorbţie a IPV Sabin pe fosfat de aluminiu

Tabelul 27

Proba Titru (perdoza) Particule de virus (în K) % de SUP liber % Adsorbit pe gel Tip 1, AlPO4 Control 5,84 691 NA Al3+ 125 µg/doză 3,49 3 0,43 99,57 Al3+ 250 µg/doză 3,09 1,2 0,17 99,83 Al3+ 500 µg/doză 2,94 0,87 0,12 99,87 Tip 2, AlPO4 Control 5,49 309 Al3+ 125 µg/doza 3,15 1,41 0,45 99,5 Al3+ 250 µg/doză 3,09 1,23 0,39 99,6 Al3+ 500 µg/doză 3,09 1,23 0,39 99,6 Tip 3, AlPO4 Control 5,59 389 NA Al3+ 125 µg/doză 5,34 218 56,04 43,94 Al3+ 250 µg/doză 5,24 173 44,47 55,53 Al3+ 500 µg/doză 5,16 144 37,01 63,9

Exemplul 5

Procesul de fabricare a unui vaccin combinat

Acest exemplu oferă un rezumat ale procesului de fabricare a unei compoziţii de vaccin combinat care include D, T, wP, HBsAg, PRP-TT Hib conjugat, IPV şi conservant:

Componentul I - toxoid difteric adsorbit pe aluminiu;

Componentul II - toxoid tetanos adsorbit pe aluminiu;

Componentul III -antigen wP (precum este dezvăluit în Exemplul 3);

Component ulIV - antigenul de suprafaţă a hepatitei B adsorbit pe aluminiu;

Componentul V - PRP conjugat Hib (precum este dezvăluit în Exemplul 2);

Componentul VI - antigen IPV (precum este dezvăluit în Exemplul 4).

Pregătirea componentului I, care include toxoid difteric adsorbit pe aluminiu:

a) transferul fosfatului de aluminiu în container/vas;

b) adiţia toxoidului difteric;

c) ajustarea pH-lui de la 4,5 până la 5,5 cu acid acetic/hidroxid de sodiu;

d) se aşteaptă stabilizarea;

e) ajustarea pH-lui la 5,5 până la 6,5 cu hidroxid de sodiu/carbonat de sodiu;

f) se aşteaptă stabilizarea.

Pregătirea componentului II, care include aluminiu adsorbit toxoid tetanos:

a) transferul fosfatului de aluminiu în container/vas;

b) adiţia toxoidului tetanos;

c) ajustarea pH-lui la 4,5 până la 5,5 cu acid acetic/hidroxid de sodiu;

d) se aşteaptă stabilizarea;

e) ajustarea pH-lui de la 5,5 până la 6,5 cu hidroxid de sodiu/carbonat de sodiu;

f) se aşteaptă stabilizarea.

Pregătirea componentului IV, care include antigenul de suprafaţă a hepatitei B adsorbit pe aluminiu:

a) transferul fosfatului de aluminiu în container/vas;

b) adiţia antigenului de suprafaţă a hepatitei B;

c) ajustarea pH-lui de la 4,5 până la 5,5 cu acid acetic/hidroxid de sodiu;

d) se aşteaptă stabilizarea;

f) se aşteaptă stabilizarea.

Procesul de fabricare a unei compoziţii de vaccin combinat, care include D, T, wP, HBsAg, PRP-TT Hib conjugat, IPV şi conservant:

adiţia serului fiziologic normal într-o veselă de amestecare/container;

adiţia componentului I;

amestecarea componentului II în componentul I şi agitare la RT pentru 30…45 minute;

adiţia componentului III în amestecul de mai sus, urmată de agitare la RT pentru 30…60 minute;

componentul IV se adăugă la amestecul obţinut în etapa 4 urmat de agitare la RT pentru 30…60 minute;

componentul V se adăugă la amestecul obţinut în etapa 5 urmat de agitare la temperatura de 6…16°C, timp de 30…60 minute;

componentul VI se adăugă la amestecul obţinut în etapa 6 urmat de agitare la temperatura de 6…16°C;

adiţia unei din combinaţiile de conservant dezvăluită mai jos la amestecul obţinut în etapa 7 la temperatura de 6…16 °C:

2-Fenoxietanol într-o cantitate de la 1 mgper 0,5 mL la 6 mgper 0,5 mL (v/v); sau

2-Fenoxietanol într-o cantitate de la 1 mgper 0,5 mL la 6 mgper 0,5 mL (v/v) şi metilparaben folosit într-o concentraţie de 0,1…1,5 mgper 0.5 mL (m/v); sau

2-Fenoxietanol într-o cantitate de la 1 mgper 0,5 mL la 6 mgper 0,5 mL (v/v) şi propilparaben folosit într-o concentraţie de 0,05…0,2 mgper 0.5 mL (m/v); sau

2-Fenoxietanol într-o cantitate de la 1 mgper 0,5 mL la 6 mgper 0,5 mL (v/v), metilparaben folosit într-o concentraţie de 0,1…1,5 mgper 0,5 mL (m/v) şi propilparaben folosit într-o concentraţie de 0,05…0,2 mgper 0,5 mL (m/v);

verificarea pH-ului, dacă este necesar adjustarea pH-ul de la 6,0 până la 7,5 cu hidroxid de sodi/carbonat de sodiu;

formarea volumului cu ser fiziologic normal (0.9%) obţinut în etapa 9, urmată de agitare pentru 3 ore.

Exemplul 6

Adsorbţia, potenţa şi profilul stabilităţii antigenilor

Acest tabel oferă un rezumat cu privire la procentul de adsorbţie a antigenilor individuali, potenţa şi profilul stabilităţii antigenilor individuali în vaccinul combinat SIIPL la 2-8ºC într-o perioadă de 12 luni.

Tabelul 28

Test Limite/Specificaţie 0 Zile 6 Luni 12 Luni Hepatita B potenţain vivo R.P (95% CL) (0,61-1,12) 0,83 NA Corespunde Conţinutul PRP Hib (µg/0,5 mL) (Total PRP) Valoarea actuală 9,3 µg/0,5ml 8,46 µg/0,5ml 10,03 PRP-ul liber (%) 8 NA NA Potenţa componentului difteric (IU/doză) NLT 30 IU/doză 98,5120 IU/doză (69,9650-137,247) NA 95,8463 IU/doză Potenţa componentului tetanos (IU/doză) NLT 40 IU/doză 139,030 IU/doză (88,2850-208,688) NA 382.079 IU/doză Potenţa componentului pertussis (IU/doză) NLT 4 IU/doză 4,6749 IU/doză (2,6492-8,2763) 4,8410 IU/doza (2,7331-8,6081) 5,131 Adsorbţia: hepatita B (%) Valoarea actuală 89,44 82,65 75,52 Adsorbţia: component tetanos (%) Valoarea actuală 63,0 59,0 NA Adsorbţia: component difteric (%) Valoarea actuală 81,0 72,0 NA Antigen D (DU/0,5 mL) (= 75 % din valoarea nominală este acceptabil) Tip 1= 20 DU/0,5 mL 22,414 Corespunde Corespunde Tip 2= 4 DU/0,5 mL 4,692 Corespunde Corespunde Tip 3= 16 DU/0,5 mL 22,084 Corespunde Corespunde Conţinut total de aluminiu Nu mai mult de 0,6 mg/0,5 mL 0,2768 NA NA

NA - Nu este disponibil.

Rezumat privind procentul de adsorbţie a antigenilor individuali, potenţa şi profilul stabilităţii antigenilor individuali în vaccinul combinat la 25±2ºC într-o perioadă de 12 luniTabelul 29

Test Limite/Specificaţie 0 Zile 6 Luni 12 Luni Hepatita B potenţain vivo R.P (95% CL) NLT 1,0 Corespunde NA Corespunde Conţinutul PRP Hib (µg/0,5 mL) (Total PRP) Valoarea actuală 8,6 µg/0,5 mL 8,20 µg/0,5 mL NA Potenţa componentului difteric (IU/doza) NLT 30 IU/doză 98,5120 IU/doză (69,9650-137,247) NA 96,5482 IU/doză (65,9292-137,687) Potenţa componentului tetanos (IU/doza) NLT 40 IU/doză 139,030 IU/doză (88,2850-208,688) NA NA Potenţa componentului pertussis (IU/doza) NLT 4 IU/doză 4,6749 IU/doză (2,6492-8,2763) 4,5170 IU/doză (2,4894-8,2672) 3,4899 IU/doză (1,8699-6,4750) Adsorbţia: hepatita B (%) Valoarea actuală 89,44 83,92 83,00 Adsorbţia: component tetanos (%) Valoarea actuală 59,0 31,0 40,0 Adsorbţia: component difteric (%) Valoarea actuală 79,0 72,0 69,0 Antigen D (DU/0,5 mL) (= 75% din valoarea nominală este acceptabil) Tip 1= 20 DU/0,5 mL 22,414 Corespunde Corespunde Tip 2= 4 DU/0,5 mL 4,692 Corespunde Corespunde Tip 3= 16 DU/0,5 mL 22,082 Corespunde Corespunde Conţinut total de aluminiu Nu mai mult de 0,6 mg/0,5 mL 0,2846 NA NA

NA - Nu este disponibil

Eficacitateain vitro a vaccinului combinat cu doză redusă şi standard IPV

Tabelul 30

SSr. No Descriere Poliovirus de tip 1 Poliovirus de tip 3 Rezultat Eficacitate Limita inferioară Limita superioară Eficacitate Limita inferioară Limita superioară 1 IPV hexavalent cu 40-8-32 DU 253,3% 124,9% 705,6% 212,2% 95,3% 755,5% Conform 2 IPV hexavalent cu 20-4-16 DU 164,4% 63,9% 571,3% 143,2% 64,3% 418,6% Conform 3 IPV hexavalent cu 20-4-16 DU 170,0% 76,4% 472,5% 132,3% 62,6% 340,5% Conform 4 Poliovaccin cu doză întreagă IPV 98,5% 30,9% 279,4% 122,8% 57,3% 269,8% Conform

Observaţie:

Loturi de vaccinuri hexavalente fabricate cu concentraţie IPV la jumătate de doză au arătat rezultate promiţătoare ale testelor.

Eficacitatea IPVin vitro a vaccinului hexavalent fabricat cu concentraţie IPV la jumătate de doză s-a dovedit a fi comparabilă cu vaccinul disponibil în prezent (Polivac de pe piaţă fabricat de SIIPL) cu doză completă de IPV.

Exemplul 7

Testarea proficienţei antimicrobiene

Inventatorii prezenţi, în timp ce dezvoltau vaccinurile combinate cu doze multiple ce conţin D, T, wP, Hib, HBsAg, şi vaccin IPV, au efectuat teste asupre abilităţilor lor antimicrobiene prin adăugarea mai întâi a 2-fenoxietanolului (2-PE), care a fost convenţional folosit ca un conservant din stadiul anterior, într-o concentraţie de 2,5 mg/0,5 mL doză. Totuşi, s-a constatat că 2-PE are activitate antimicrobiană mai slabă decât Thiomersal-ul împotriva drojdiile şi fungii în vaccinul combinat bazat pe DPT.

O creştere a cantităţii de 2-PE (un consevant) pentru a atinge criteriile necesare poate elimina problemele de siguranţă la copii mici, care sunt subiecţii care trebuie să primească vaccinul şi pot de asemenea afecta stabilitatea produsului final. În continuare, cantitatea de conservant(s) care trebuie sa fie conţinut în vacinuri ar trebui să întrunească cerinţele definite în Pharmacopeia US, Pharmacopeia Europeană, Pharmacopeia WHO, sau o combinaţie a acestora cu referire la siguranţa vaccinului.

În această privinţă, inventatorii prezenţi au efectuat experimente într-un efort de a dezvolta o compoziţie nouă care poate satisface cerinţele de abilitate antimicrobiană prin combinarea 2-PE-ului cu alţi conservanţi precum parabenii în vaccinul combinat cu doze multiple care îndeplineşte condiţiile ambelor abilităţi de siguranţă şi antimicrobiană. În prezenta dezvăluire, testul de abilitate antimicrobiană a fost efectuat în conformitate cu Pharmacopeia Europeană Categoria B (EP-B) criteriile solicitate de WHO pentru produsele de vaccinare.

Detalii despre diferite combinaţii şi concentraţii ale conservanţilor testaţi cu vaccin combinat

Tabelul 31

Combinaţii 1 2 3 4 5 6 Metilparaben (MP) -- 0,18% 0,18% 0,18% -- 0,18% Propilparaben (PP) -- 0,02% 0,02% -- 0,02% 0,02% 2-Fenoxietanol (PE) 0,5% 0,5% 0,4% 0,5% 0,5% --

Screening-ul competenţei antimicrobiene

Vaccinul hexavalent combinat preparat precum este dezvăluit în Exemplul 1 a fost inoculat cu un total de şase microorganisme inclusiv patru feluri diferite de bacterii -Staphylococcus aureus(ATCC NO - 6538),Pseudomonas aeruginosa(ATCC NO - 9027),Escherichia coli (ATCC NO.- 8739) şiStaphylococcus arlettae (izolat din mediu EMI); o drojdie -Candida albicans (ATCC NO - 10231), şi o drojdie -Aspergillus brasiliensis (ATCC NO - 16404) într-o cantitate de 105 la 106 CFU/mL în vaccinul preparat la 0 ore, respectiv. Apoi, probele de bacterii, fungi, drojdii au fost colectate la 0 ore, 24 ore, 7 zile, 14 zile şi 28 zile, cultivate pe medii solide, şi numărul de colonii a fost calculat între 3 zile şi 5 zile şi jurnalul de reducere a coloniilor a fost calculat. Rezultatele sunt afişate în Tabelul 38 de mai jos.

Rezultatele testarii proficienţei antimicrobiene

Tabelul 32

Sr.No Cultura CFU recuperate/mL ale control pozitiv (0 ore) No CFUlor recuperate/mL Rezultate 24 ore Ziua 7-a Ziua 14-a Ziua 28-a Formulare 1 0.5% 2-PE S. aureus 2,0 x 105/mL 87000 900 0 - Conform P. aeruginosa 1,8 x 105/mL 28000 100 0 - E. coli 10 x 105/mL 9000 0 - - S. arlettae (EMI) 2,8 x 105/mL 114000 1600 100 0 C. albicans 1,9 x 105/mL NA 400 0 - A. brasiliensis 2,4 x 105/mL NA 1600 100 0 Formulare 2 0.5% 2-PE+0.18%MP+0.02%PP S. aureus 2,0 x 105/mL 0 - - - Conform P. aeruginosa 1,8 x 105/mL 0 - - - E. coli 10 x 105/mL 0 - - - S. arlettae (EMI) 2,8 x 105/mL 0 0 - - C. albicans 1,9 x 105/mL NA 0 - - A. brasiliensis 2,4 x 105/mL NA 0 - - Formulare 3 0.4% 2-PE+0.18%MP+0.02%PP S. aureus 2,0 x 105/mL 10 0 - - Conform P. aeruginosa 1,8 x 105/mL 0 - - - E. coli 10 x 105/mL 0 - - - S. arlettae (EMI) 2,8 x 105/mL 10 0 - - C. albicans 1,9 x 105/mL NA 0 - - A. brasiliensis 2,4 x 105/mL NA 0 - - Formularea 4 0.5% 2-PE+0.18%MP S. aureus 2,0 x 105/mL 10 0 - - Conform P. aeruginosa 1,8 x 105/mL 170 10 0 - E. coli 10 x 105/mL 0 - - - S. arlettae (EMI) 2,8 x 105/mL 20 0 - - C. albicans 1,9 x 105/mL NA 0 - - A. brasiliensis 2,4 x 105/mL NA 0 - - Formulare 5 0.5% 2-PE+0.02%PP S. aureus 2,0 x 105/mL 20 0 - - Conform P. aeruginosa 1,8 x 105/mL 0 - - - E. coli 10 x 105/mL 10 0 - - S. arlettae (EMI) 2,8 x 105/mL 100 0 - - C. albicans 1,9 x 105/mL NA 0 - - A. brasiliensis 2,4 x 105/mL NA 10 0 - Formularea 6 0.18%MP+0.02%PP S. aureus 2,0 x 105/mL 70000 700 0 - Conform P. aeruginosa 1,8 x 105/mL 21000 0 0 - E. coli 10 x 105/mL 6000 0 0 - S. arlettae (EMI) 2,8 x 105/mL 101000 900 0 - C. albicans 1,9 x 105/mL NA 100 0 - A. brasiliensis 2,4 x 105/mL NA 700 0 -

NA - Nu este disponibil; 0,5% 2-PE - 2,5 mg/0,5 mL doză; 0,4% 2-PE - 2 mg/0,5 mL doză; 0,18%MP - 0,9 mg/0,5 mL doză; 0,02%PP - 0,1mg/0,5 mL doză; CFU- unitate de formare a coloniei.

Observaţie:

S-a observat că toate vaccinurile hexavalente fabricate la diferite combinaţii au fost găsite corespunzătoare cu eficacitatea de conservare în conformitate cu Pharmacopeia Europeană Categoria B. Totuşi, eficacitatea s-a dovedit a fi variată când diferite combinaţii au fost folosite.

Eficacitatea de conservare a vaccinului hexavalent ce conţine 2-PE, MP şi PP s-a dovedit a fi foarte eficientă în comparaţie cu alte combinaţii de conservant anume doar 2-PE, 2-PE cu PP, 2-PE cu MP şi PP cu MP.

De remarcat de asemenea că eficacitatea conservantului vaccinului hexavalent ce conţine 0,5% 2-PE cu PP şi MP s-a dovedit a fi mai mult efectivă în comparaţie cu asemenea combinaţii, dar cu 0,4% 2-PE.

Exemplul 8

Vaccin combinat cu doză redusă SIIPL's contra Easy Six (Panacea)

Acest tabel oferă o comparaţie a procentajului de adsorbţiei a antigenilor individuali, potenţa, conţinutul PRP liber între vaccin combinat cu doză redusă SIIPL's şi Easy Six (Panacea).

Tabelul 33

Descrierea testelor SIIPL Vaccin hexavalent cu doza redus IPV Panacea Easy Six TMvaccin combinat cu doză completă de IPV Potenţa HBin vitro (µg/mL) 46,969 23,167 Adsorbţia HB (%) 91,8 Mai mult decât 90,0 Potenţain vivo HB 1,18 0,71(0,42-1,13) Total PRP (µg/0,5 mL) 9,18 13,20 PRP-ul liber (%) 9,0 19,45 Formaldehidă liberă (% M/V) 0,0011 0,0011 2-PE (% M/V) 0,499 0,660 Adsorbţia difterică (%) 82 38 Adsorbţia tetanos (%) 63 30 Tip 1 (DU/0,5 mL) 22,414 43,504 Tip 2 (DU/0,5 mL) 4,692 8,056 Tip 3 (DU/0,5 mL) 22,084 39,84 Aluminiu (mg/doză) 0,2846 0,6034 Eficacitateain vitro IPV de tip-1 170,0% Netestat IPV de tip-3 132,3% Potenţa difterică 98,5120 IU/doză (69,9650-137,247) Mai mult decât 40 Potenţa tetanos 139,030 IU/doză (88,2850-208,688) Mai mult decât 50 Potenţa pertussis 4,6749 IU/doză (2,6492-8,2763) 3,2221(1,8032-5,7706)

1. EP 1028750 B1 2006.02.01

2. Kurosky, et. al. Effects of Combination Vaccines on hepatitis B Vaccine Compliance in children in the United States; The Pediatric Infectious Disease Journal. 2017, vol. 36(7), e 189-e196

3. WO 99/48525 A1 1999.11.11

4. WO 93/24148 A11993.12.09

5. WO 9700697 A1 1997.01.09

6. WO 0030678 A1 2000.06.02

7. WO 2008028956 A1 2008.03.13

8. WO 2005089794 A2 2005.09.29

9. US 6013264 A 2000.01.11

10. WO 2010046934 A1 2010.04.29

11. WO 2008020322 A2 2008.02.21

12. WO 2012093406 A2 2012.07.12

Claims

l. Compoziţie imunogenică cu doze multiple complet lichidă, în care 0,5 ml de compoziţie include oricare din următorii: (i) un toxoid difteric (D), într-o cantitate de la 10 Lf până la 25 Lf, adsorbit pe un adjuvant din sare de aluminiu, având un procent de adsorbţie de cel puţin 50%; (ii) un toxoid tetanos (T), într-o cantitate de la 2 Lf până la 10 Lf, adsorbit pe un adjuvant din sare de aluminiu, având un procent de adsorbţie de cel puţin 40%; (iii) celule întregi inactivate de pertussis (wP), ce conţineBordetella pertussis inactivat, tulpinile 134, 509, 25525 şi 6225 într-un raport de 1:1:0,25:0,25, într-o cantitate de la 12 IOU până la 16 IOU; (iv) un antigen de suprafaţă al virusului hepatitei B (HBsAg), într-o cantitate de la 7 µg până la 15 µg, adsorbit pe un adjuvant din sare de aluminiu, având un procent de adsorbţie de cel puţin 50%; (v) un antigenHaemophilus influenzae de tip b (Hib), într-o cantitate de la 7 µg până la 13 µg; (vi) un antigen al virusului de poliomielită inactivat (IPV), ce conţine IPV de tip 1 într-o cantitate de 1…25 DU, IPV de tip 2 într-o cantitate de 1…10 DU şi IPV de tip 3 într-o cantitate de 1…20 DU; şi (vii) un continut total de aluminiu (Al3+) în intervalul de la 0,1 mg până la 0,6 mg; şi (viii) conservant ca 2-fenoxietanol într-o cantitate de 1…6 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,1…1,5 mg (m/v) şi propilparaben într-o cantitate de 0,05…0,2 mg (m/v); sau 2-fenoxietanol într-o cantitate de 1…6 mg (v/v) şi metilparaben într-o cantitate de 0,l…1,5 mg (m/v); sau 2-fenoxietanol într-o cantitate de 1…6 mg (v/v) şi propilparaben într-o cantitate de 0,05…0,2 mg (m/v).
2. Compoziţie imunogenică, conform revendicării 1, în care antigenul Hib este o zaharidă poliribosilribitol fosfat (PRP) Hib conjugată la o proteină purtătoare folosind o chimie de conjugare prin cianilare sau o chimie de conjugare prin aminare reductivă, în care reagentul de cianilare menţionat este selectat din bromură de cianogen, 1-ciano-4-dimetilaminopiridiniu tetrafluoroborat (CDAP), 1-ciano-4-pirolidinopiridiniu tetrafluorborat (CPPT), 1-cianoimidazol, şi anume (1-Cl), 1-cianobenzotriazol (1-CBT) sau 2-cianopiridazin-3(2H)-ona (2-CPO); şi proteina purtătoare este selectată dintr-un grup, care include toxoid tetanos, CRM197, toxoid difteric, complex al membranei externeNeisseria meningitidis, fragmentul C al toxoidului titanos, toxoid pertussis, proteina D aH. influenzae,E. coli LT, STE. coli, şi exotoxina A dinPseudomonas aeruginosa, membrana externă a complexului c (OMPC), porine, proteinele care leagă transferina, pneumolizina, proteina A de suprafaţă pneumococică (PspA), adezina A de suprafaţă pneumococică (PsaA), PhtD pneumococic, proteina de suprafaţă pneumococică BVH-3 şi BVH-11, antigen protectiv (PA) alBacillus anthracis şi factor de edem detoxifiat (EF) şi factor letal (LF) alBacillus anthracis, ovalbumina, hemocianina de limpet gaură (KLH), albumină serică umană, albumină serică bovină (BSA), derivat proteic purificat al tuberculinei (PPD), peptide sintetice, proteine de şoc termic, proteine pertussis, citokine, limfokine, hormoni, factori de creştere, proteine artificiale care includ epitopi multipli ai celulelor T CD4+ umane din diverşi antigeni derivaţi din agenţi patogeni ca N19, proteine de absorbţie a fierului, toxină A sau B din proteineleC. difficile şiS. agalactiae cu sau fără linker.
3. Compoziţie imunogenică, conform revendicării 1, în care antigenii IPV sunt tulpini Salk selectate din grupul Mahoney, MEF-1, Saukett, sau tulpini Sabin selectate din grupul Sabin de tip 1, Sabin de tip 2 sau Sabin de tip 3.
4. Compoziţie immunogenică, conform revendicării 1, în care D, T şi HBsAg sunt adsorbiţi individual pe un adjuvant selectat din grupul format din sare de aluminiu (Al3+) ca hidroxid de aluminiu (Al(OH)3) sau fosfat de aluminiu (AlPO4).
5. Compoziţie imunogenică, conform revendicării 1, în care antigenii IPV sunt adsorbiţi pe sare de fosfat de aluminiu (AlPO4), având un procent de adsorbţie al IPV de tip 1 într-un interval de 10…100%, IPV de tip 2 într-un interval de 60…100% şi IPV de tip 3 într-un interval de 10…100%.
6. Compoziţie imunogenică, conform revendicării 1, în care procentajul de adsorbţie a antigenului Hib pe orice adjuvant este mai mic de 20%.
7. Compoziţie imunogenică, conform revendicării 1, în care compoziţia conţine suplimentar un mediu de diluţie sau un tampon selectat din clorură de sodiu sau soluţie tampon fosfat salin.
8. Compoziţie imunogenică, conform revendicării 7, în care compoziţia include clorură de sodiu ca mediu de diluţie sau tampon într-o concentraţie de la 0,5% până la 1,5%.
9. Compoziţie imunogenică, conform revendicării l, în care 0,5 mL de compoziţie include oricare din următorii: a) antigen D într-o cantitate de 10 Lf; antigen T într-o cantitate de 2 Lf; antigen wP într-o cantitate de 12 IOU; HBsAg într-o cantitate de 8 µg; antigen Hib într-o cantitate de 8 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); sau b) antigen D într-o cantitate de 20 Lf; antigen T într-o cantitate de 4 Lf; antigen wP într-o cantitate de 14 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 10 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); sau c) antigen D într-o cantitate de 25 Lf; antigen T într-o cantitate de 10 Lf; antigen wP într-o cantitate de 16 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 13 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v).
10. Compoziţie imunogenică, conform revendicării l, în care 0,5 mL de compoziţie include oricare din următorii: a) antigen D într-o cantitate de 10 Lf; antigen T într-o cantitate de 2 Lf; antigen wP într-o cantitate de 12 IOU; HBsAg într-o cantitate de 8 µg; antigen Hib într-o cantitate de 8 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 4 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); sau b) antigen D într-o cantitate de 20 Lf; antigen T într-o cantitate de 4 Lf; antigen wP într-o cantitate de 14 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 10 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 4 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); sau c) antigen D într-o cantitate de 25 Lf; antigen T într-o cantitate de 10 Lf; antigen wP într-o cantitate de 16 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 13 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 4 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v).
11. Compoziţie imunogenică, conform revendicării l, în care 0,5 mL de compoziţie include oricare dintre următorii: a) antigen D într-o cantitate de 10 Lf; antigen T într-o cantitate de 2 Lf; antigen wP într-o cantitate de 12 IOU; HBsAg într-o cantitate de 8 µg; antigen Hib într-o cantitate de 8 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau b) antigen D într-o cantitate de 20 Lf; antigen T într-o cantitate de 4 Lf; antigen wP într-o cantitate de 14 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 10 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau c) antigen D într-o cantitate de 25 Lf; antigen T într-o cantitate de 10 Lf; antigen wP într-o cantitate de 16 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 13 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v).
12. Compoziţie imunogenică, conform revendicării 1, în care 0,5 mL de compoziţie include oricare din următorii: a) antigen D într-o cantitate de 10 Lf; antigen T într-o cantitate de 2 Lf; antigen wP într-o cantitate de 12 IOU; HBsAg într-o cantitate de 8 µg; antigen Hib într-o cantitate de 8 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 4 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau b) antigen D într-o cantitate de 20 Lf; antigen T într-o cantitate de 4 Lf; antigen wP într-o cantitate de 14 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 10 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 4 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau c) antigen D într-o cantitate de 25 Lf; antigen T într-o cantitate de 10 Lf; antigen wP într-o cantitate de 16 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 13 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 4 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v).
13. Compoziţie imunogenică, conform revendicării 1, în care 0,5 mL de compoziţie include oricare dintre următorii: a) antigen D într-o cantitate de 10 Lf; antigen T într-o cantitate de 2 Lf; antigen wP într-o cantitate de 12 IOU; HBsAg într-o cantitate de 8 µg; antigen Hib într-o cantitate de 8 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau b) antigen D într-o cantitate de 20 Lf; antigen T într-o cantitate de 4 Lf; antigen wP într-o cantitate de 14 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 10 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau c) antigen D într-o cantitate de 25 Lf; antigen T într-o cantitate de 10 Lf; antigen wP într-o cantitate de 16 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 13 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v).
14. Compoziţie imunogenică, conform revendicării 1, în care 0,5 mL de compoziţie include oricare dintre următorii: a) antigen D într-o cantitate de 10 Lf; antigen T într-o cantitate de 2 Lf; antigen wP într-o cantitate de 12 IOU; HBsAg într-o cantitate de 8 µg; antigen Hib într-o cantitate de 8 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 4 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau b) antigen D într-o cantitate de 20 Lf; antigen T într-o cantitate de 4 Lf; antigen wP într-o cantitate de 14 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 10 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 4 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau c) antigen D într-o cantitate de 25 Lf; antigen T într-o cantitate de 10 Lf; antigen wP într-o cantitate de 16 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 13 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 20 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 4 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 16 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v).
15. Compoziţie imunogenică, conform revendicării 1, în care 0,5 mL de compoziţie include oricare dintre următorii: a) antigen D într-o cantitate de 10 Lf; antigen T într-o cantitate de 2 Lf; antigen wP într-o cantitate de 12 IOU; HBsAg într-o cantitate de 8 µg; antigen Hib într-o cantitate de 8 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); sau b) antigen D într-o cantitate de 20 Lf; antigen T într-o cantitate de 4 Lf; antigen wP într-o cantitate de 14 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 10 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); sau c) antigen D într-o cantitate de 25 Lf; antigen T într-o cantitate de 10 Lf; antigen wP într-o cantitate de 16 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 13 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v).
16. Compoziţie imunogenică, conform revendicării l, în care 0,5 mL de compoziţie include oricare dintre următorii: a) antigen D într-o cantitate de 10 Lf; antigen T într-o cantitate de 2 Lf; antigen wP într-o cantitate de 12 IOU; HBsAg într-o cantitate de 8 µg; antigen Hib într-o cantitate de 8 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 1,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (A13+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); sau b) antigen D într-o cantitate de 20 Lf; antigen T într-o cantitate de 4 Lf; antigen wP într-o cantitate de 14 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 10 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 1,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); sau c) antigen D într-o cantitate de 25 Lf; antigen T într-o cantitate de 10 Lf; antigen wP într-o cantitate de 16 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 13 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 1,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v).
17. Compoziţie imunogenică, conform revendicării l, în care 0,5 mL de compozitie include oricare dintre următorii: a) antigen D într-o cantitate de 10 Lf; antigen T într-o cantitate de 2 Lf; antigen wP într-o cantitate de 12 IOU; HBsAg într-o cantitate de 8 µg; antigen Hib într-o cantitate de 8 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau b) antigen D într-o cantitate de 20 Lf; antigen T într-o cantitate de 4 Lf; antigen wP într-o cantitate de 14 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 10 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau c) antigen D într-o cantitate de 25 Lf; antigen T într-o cantitate de 10 Lf; antigen wP într-o cantitate de 16 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 13 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v).
18. Compoziţie imunogenică, conform oricărei din revendicările precedente, în care 0,5 mL de compoziţie include oricare dintre următorii: a) antigen D într-o cantitate de 10 Lf; antigen T într-o cantitate de 2 Lf; antigen wP într-o cantitate de 12 IOU; HBsAg într-o cantitate de 8 µg; antigen Hib într-o cantitate de 8 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 1,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (A13+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau b) antigen D într-o cantitate de 20 Lf; antigen T într-o cantitate de 4 Lf; antigen wP într-o cantitate de 14 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 10 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 1,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau c) antigen D într-o cantitate de 25 Lf; antigen T într-o cantitate de 10 Lf; antigen wP într-o cantitate de 16 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 13 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 1,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v).
19. Compoziţie imunogenică, conform revendicării l, în care 0,5 mL de compozitie include oricare dintre următorii: a) antigen D într-o cantitate de 10 Lf; antigen T într-o cantitate de 2 Lf; antigen wP într-o cantitate de 12 IOU; HBsAg într-o cantitate de 8 µg; antigen Hib într-o cantitate de 8 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau b) antigen D într-o cantitate de 20 Lf; antigen T într-o cantitate de 4 Lf; antigen wP într-o cantitate de 14 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 10 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau c) antigen D într-o cantitate de 25 Lf; antigen T într-o cantitate de 10 Lf; antigen wP într-o cantitate de 16 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 13 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v).
20. Compoziţie imunogenică, conform revendicării l, în care 0,5 mL de compoziţie include oricare dintre următorii: a) antigen D într-o cantitate de 10 Lf; antigen T într-o cantitate de 2 Lf; antigen wP într-o cantitate de 12 IOU; HBsAg într-o cantitate de 8 µg; antigen Hib într-o cantitate de 8 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 1,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (A13+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau b) antigen D într-o cantitate de 20 Lf; antigen T într-o cantitate de 4 Lf; antigen wP într-o cantitate de 14 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 10 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 1,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v); sau c) antigen D într-o cantitate de 25 Lf; antigen T într-o cantitate de 10 Lf; antigen wP într-o cantitate de 16 IOU; HBsAg într-o cantitate de 15 µg; antigen Hib într-o cantitate de 13 µg; antigen IPV, tip 1 (tulpina Mahoney) într-o cantitate de 7,5 DU, tip 2 (tulpina MEF-1) într-o cantitate de 1,5 DU, şi tip 3 (tulpina Saukett) într-o cantitate de 6 DU, respectiv; conţinutul total de aluminiu (Al3+) nu mai mult de 0,55 mg; 2-fenoxietanol într-o cantitate de 2,5 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,9 mg (m/v); propilparaben într-o cantitate de 0,1 mg (m/v).
21. Procedeu de fabricare a compoziţiei imunogenice cu doze multiple complet lichidă în care 0,5 mL de compoziţie include: (i) un toxoid difteric (D), într-o cantitate de la 10 Lf până la 25 Lf, adsorbit pe sare de aluminiu, având un procent de adsorbţie de cel puţin 50%; (ii) un toxoid tetanos (T), într-o cantitate de la 2 Lf până la 10 Lf, adsorbit pe sare de aluminiu, având un procent de adsorbţie de cel puţin 40%; (iii) celule întregi inactivate de pertussis (wP), ce conţineBordetella pertussis inactivat, tulpinile 134, 509, 25525 şi 6225 într-un raport de 1:1:0,25:0,25, într-o cantitate de la 12 IOU până la 16 IOU; (iv) un antigen de suprafată al virusului hepatitei B (HBsAg), într-o cantitate de la 7 µg până la 15 µg, adsorbit pe sare de aluminiu, având un procent de adsorbţie de cel puţin 50%; (v) un antigenHaemophilus influenzae de tip b (Hib), într-o cantitate de la 7 µg până la 13 µg; (vi) un antigen al virusului de poliomielită inactivat (IPV), ce conţine IPV de tip 1 într-o cantitate de 1…25 DU, IPV de tip 2 într-o cantitate de 1…10 DU şi IPV de tip 3 într-o cantitate de 1…20 DU; (vii) conţinut total al adjuvantului de aluminiu într-un interval de la 0,1 mg până la 0,6 mg; şi (viii) conservant ca 2-fenoxietanol într-o cantitate de 1…6 mg (v/v); metilparaben într-o cantitate de 0,1…1,5 mg (m/v) şi propilparaben într-o cantitate de 0,05…0,2 mg (m/v); sau 2-fenoxietanol într-o cantitate de 1…6 mg (v/v) şi metilparaben într-o cantitate de 0,l…1,5 mg (m/v); sau 2-fenoxietanol într-o cantitate de 1…6 mg (v/v) şi propilparaben într-o cantitate de 0,05…0,2 mg (m/v); în procedeul, care include umătoarele etape: a) adiţia serului fiziologic normal de 80% din total într-un vas de amestecare/container; b) adiţia componentului I care include toxoid difteric într-un vas de amestecare/container; c) adiţia componentului II care include toxoid tetanos la componentul I din etapa (b) cu agitare la temperatura camerei; d) adiţia componentului III care include antigenul cu celule întregi inactivate de pertussis la amestecul obţinut la etapa (c) cu agitare la temperatura camerei; e) adiţia componentului IV care include antigenul de suprafaţă a hepatitei B la amestecul obţinut la etapa (d) la temperatura camerei; f) adiţia componentului V care include antigenul Hib la amestecul obţinut la etapa (e) la 6…16°C; g) adiţia componentului VI care include antigenul IPV la amestecul obţinut la etapa (f) la 6…16°C; h) adiţia unei combinaţii de conservanţi la amestecul obţinut la etapa (g) la 6…16°C selectată din: 2-fenoxietanol într-o cantitate de la 1 până la 6 mgper 0,5 mL (v/v) şi metilparaben într-o cantitate de 0,1…1,5 mgper 0,5 mL (m/v); sau 2-fenoxietanol într-o cantitate de la 1 până la 6 mgper 0,5 mL (v/v) şi propilparaben într-o cantitate de 0,05…0,2 mgper 0,5 mL (m/v); sau 2-fenoxietanol într-o cantitate de la 1 până la 6 mgper 0,5 mL (v/v), metilparaben într-o cantitate de 0,1…1,5 mgper 0,5 mL (m/v) şi propilparaben într-o cantitate de 0,05… 0,2 mgper 0,5 mL (m/v); i) ajustarea pH-lui amestecului obţinut la etapa (h) de la 6,0 până la 7,0 cu hidroxid de sodiu/carbonat de sodiu; şi j) adăugarea serului fiziologic normal, cele 20% rămase pentru a forma volumul la agitare.
22. Procedeu, conform revendicării 21, în care prepararea componentului I include următoarele etape: a) transferul fosfatului de aluminiu în container/vas; b) adiţia toxoidului difteric; c) ajustarea pH-lui de la 4,5 până la 5,5 cu acid acetic/hidroxid de sodiu; d) stabilizarea; e) ajustarea pH-lui de la 5,5 până la 6,5 cu hidroxid de sodiu/carbonat de sodiu; şi f) stabilizarea cu tampon histidinic.
23. Procedeu, conform revendicării 21, în care prepararea componentului II include următoarele etape: a) transferul fosfatului de aluminiu în container/vas; b) adiţia toxoidului tetanos; c) ajustarea pH-lui de la 4,5 până la 5,5 cu acid acetic/hidroxid de sodiu; d) stabilizarea; e) ajustarea pH-lui de la 5,5 până la 6,5 cu hidroxid de sodiu/carbonat de sodiu; şi f) stabilizarea cu tampon histidinic.
24. Procedeu, conform revendicării 21, în care prepararea componentului III include următoarele etape: a) inactivarea tulpiniiBordetella pertussis 134 la 56°C, pentru 10…15 minute în prezenţă de formaldehidă; b) inactivarea tulpiniiBordetella pertussis 509 la 56°C pentru 10…15 minute în prezenţă de formaldehidă; c) inactivarea tulpinilorBordetella pertussis 25525 şi 6229 la 56°C pentru 10…15 minute în prezenţă de formaldehidă; d) inactivarea tulpiniiBordetella pertussis 6229 la 56°C pentru 10…15 minute în prezenţă de formaldehidă; e) amestecarea ulterioară a tulpinilor deBordetella pertussis 134, 509, 25525 şi 6229 inactivate într-un raport de 1:1:0,25:0,25; şi f) adsorbţia opţională pe adjuvant bazat pe aluminiu; în care procesul este lipsit de Thiomersal, antigenul pertussis cu celule întregi inactivate rămâne neaglomerat şi omogen, conducând la reactogenitate redusă şi dând o potenţă mai bună pentru o durată mai lungă.
25. Procedeu, conform revendicării 21, în care prepararea componentului IV include următoarele etape: a) transferul fosfatului de aluminiu în container/vas; b) adiţia antigenului de suprafaţă a hepatitei B; c) ajustarea pH-lui de la 4,5 până la 5,5 cu acid acetic/hidroxid de sodiu; d) stabilizarea; e) ajustarea pH-lui de la 5,8 până la 6,8 cu hidroxid de sodiu/carbonat de sodiu; şi f) stabilizarea.
26. Procedeu, conform revendicării 21, în care prepararea componentului V include următoarele etape: a) fermentareaHaemophilus influenzae de tip b; b) inactivarea la temperatura de 37°C pentru 2 ore în prezenţă de formaldehidă de 0,1%; c) purificarea polizaharidei poliribosilribitol fosfat (PRP) Hib; d) conjugarea produsului purificat la etapa (c) la toxoidul tetanos (TT) prin chimia de conjugare prin cianilare, folosind bromura de cianogen în prezenţa linkerului dihidrazida acidului adipic (ADH); e) purificarea conjugatului din etapa (d); şi f) filtrarea conjugatului purificat preferabil prin filtru de 0,22 µm; în care procentul de PRP liber nu este mai mare de 5% în volumul total de conjugat purificat Hib.