MD3377516T2

MD3377516T2 - Metode și compoziții pentru tratarea cancerului

Info

Publication number: MD3377516T2
Application number: MDE20180934T
Authority: MD
Inventors: David A Scheinberg
Original assignee: Memorial Sloan Kettering Cancer Center
Priority date: 2015-11-20
Filing date: 2016-11-18
Publication date: 2022-10-31
Also published as: MA43283B1; CN108431022B; SI3377516T1; SMT202200370T1; AU2016356708B2; AU2022202973A1; DK3377516T3; CA3005896A1; WO2017087857A1; PT3377516T; RS63561B1; CN115920017A; AU2016356708A1; KR102823333B1; KR20180094922A; KR20250099263A; JP2018538265A; EP3377516A1; JP6991969B2; CN108431022A

Abstract

Prezenta invenţie oferă metode de tratament, de reducere a incidenţei şi de inducere a răspunsurilor imune la un cancer care exprimă WT1, prin administrarea unei combinaţii de cel puţin o peptidă WT1 sau de celule T citotoxice (CTL) împotriva unui cancer care exprimă WT1 şi cel puţin un inhibitor al punctelor de control. Cel puţin o peptidă WT1 poate fi administrată subiectului prin administrarea unuia sau mai multor agenţi subiectului, ceea ce are ca rezultat livrarea uneia sau mai multor peptide WT1 şi inducerea unui răspuns imunitar împotriva cancerului care exprimă WT1. Exemple de aceşti agenţi de administrare a WT1 includ: (i) o peptidă WT1 izolată, (ii) un acid nucleic care codifică cel puţin o peptidă WT1 şi (iii) o celulă imunitară care cuprinde sau prezintă cel puţin o peptidă WT1 sau acidul nucleic care codifică cel puţin o peptidă WT1.

Description

DOMENIUL INVENŢIEI

Această invenţie furnizează compoziţii pentru utilizare în tratarea, reducerea incidenţei şi inducerea răspunsurilor imune împotriva unui cancer care exprimă WT1.

REZUMATUL INVENŢIEI

Invenţia este aşa cum este definită în revendicările anexate.

Prezenta invenţie furnizează combinaţia celor patru peptide WT1 YMFPNAPYL (SEQ ID NO:124), RSDELVRHHNMHQRNMTKL (SEQ ID NO:1), PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEQ ID NO: 2) şi SGQAYMFPNAPYLPSCLES (SEQ ID NO:125) şi cel puţin un inhibitor PD1, pentru utilizare în tratarea, reducerea incidenţei sau inducerea unui răspuns imun împotriva unui cancer care exprimă WT1.

Într-o variantă de realizare, peptidele WT1 sunt administrate cu un purtător, excipient sau diluant, sau un adjuvant cum ar fi QS21, Montanide, adjuvantul Freund complet sau incomplet, fosfat de aluminiu, hidroxid de aluminiu, BCG, o citokină sau alaun.

Într-o variantă de realizare, inhibitorul PD1 este nivolumab, pembrolizumab, pidilizumab sau MEDI0680 (AMP-514).

Într-o variantă de realizare, una sau mai multe dintre peptidele WT1 sunt administrate separat.

Într-o variantă de realizare, două sau mai multe dintre peptidele WT1 sunt administrate împreună în cadrul aceleiaşi formulări.

Într-o variantă de realizare, peptidele WT1 şi inhibitorul PD1 sunt prezente în aceeaşi compoziţie.

Într-o variantă de realizare, peptidele WT1 şi inhibitorul PD1 sunt administrate concomitent, sau într-un program suprapus, sau în care ultima administrare a peptidelor WT1 precede prima administrare a inhibitorului PD1.

Într-o variantă de realizare, cancerul este cancer ovarian, mezoteliom, leucemie, tumoră Wilms, leucemie mielogenă acută (LMA), leucemie mieloidă cronică (LMC), sindrom mielodisplazic (SMD), melanom, cancer de stomac, cancer de prostată, cancer biliar, cancer al sistemului urinar, glioblastom, sarcom de ţesut moale, osteosarcom sau cancer pulmonar fără celule mici (NSCLC).

Într-o variantă de realizare, una sau mai multe dintre peptide NLMNLGATL (SEQ ID NO:21), WNLMNLGATLKGVAA (SEQ ID NO:26), LVRHHNMHQRNMTKL (SEQ ID NO:3), NKRYFKLSHLQMHSR (SEQ ID NO:4), SGQARMFPNAPYLPSCLES (SEQ ID NO:5), QARMFPNAPYLPSCL (SEQ ID NO:6), RMFPNAPYL (SEQ ID NO:7), SLGEQQYSV (SEQ ID NO:8), ALLPAVPSL (SEQ ID NO:9), NLGATLKGV (SEQ ID NO:10), DLNALLPAV (SEQ ID NO:11), GVFRGIQDV (SEQ ID NO:12), KRYFKLSHL (SEQ ID NO:13), ALLLRTPYS (SEQ ID NO:14), CMTWMQMNL (SEQ ID NO:15), NMHQRNMTK (SEQ ID NO:16), QMNLGATLK (SEQ ID NO:17), FMCAYPGCNK (SEQ ID NO:18), KLSHLQMHSR (SEQ ID NO:19), QAYMFPNAPYLPSCL (SEQ ID NO:126), YLGEQQYSV (SEQ ID NO:127), YLLPAVPSL (SEQ ID NO:128), YLGATLKGV (SEQ ID NO:129), YLNALLPAV (SEQ ID NO:130), GLRRGIQDV (SEQ ID NO:131), KLYFKLSHL (SEQ ID NO:132), ALLLRTPYV (SEQ ID NO:133), YMTWNQMNL (SEQ ID NO:134), NMYQRNMTK (SEQ ID NO:135), NMHQRVMTK (SEQ ID NO:136), NMYQRVMTK (SEQ ID NO: 137), QMYLGATLK (SEQ ID NO:138), QMNLGVTLK (SEQ ID NO:139), QMYLGVTLK (SEQ ID NO: 140), FMYAYPGCNK (SEQ ID NO:141), FMCAYPFCNK (SEQ ID NO:142), FMYAYPFCNK (SEQ ID NO:143), KLYHLQMHSR (SEQ ID NO:144), KLSHLQMHSK (SEQ ID NO:145), KLYHLQMHSK (SEQ ID NO:146), NQMNLGATL (SEQ ID NO:20), NYMNLGATL (SEQ ID NO:22), CMTWNQMNLGATLKG (SEQ ID NO:23), CMTWNLMNLGATLKG (SEQ ID NO:24), WNQMNLGATLKGVAA (SEQ ID NO:25), MTWNQMNLGATLKGV (SEQ ID NO:27), TWNQMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:28), MTWNLMNLGATLKGV (SEQ ID NO:30), TWNLMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:31), MTWNYMNLGATLKGV (SEQ IDNO:33), TWNYMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:34), CMTWNQMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:35), WNQMNLGAT (SEQ ID NO:36), TWNQMNLGA (SEQ ID NO:37), MTWNQMNLG (SEQ ID NO:38), CMTWNLMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:39), WNLMNLGAT (SEQ ID NO:40), MNLGATLKG (SEQ ID NO:41), CMTWNYMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:43), GALRNPTAC (SEQ ID NO:46), GYLRNPTAC (SEQ ID NO:47), GALRNPTAL (SEQ ID NO:48), YALRNPTAC (SEQ ID NO:49), GLLRNPTAC (SEQ ID NO:50), RQRPHPGAL (SEQ ID NO:51), RYRPHPGAL (SEQ ID NO:52), YQRPHPGAL (SEQ ID NO:53), RLRPHPGAL (SEQ ID NO:54), RIRPHPGAL (SEQ ID NO:55), QFPNHSFKHEDPMGQ (SEQ ID NO:61), HSFKHEDPM (SEQ ID NO:63), HSFKHEDPY (SEQ ID NO:64), HSFKHEDPK (SEQ ID NO:65), KRPFMCAYPGCYKRY (SEQ ID NO:66), SEKRPFMCAYPGCNK (SEQ ID NO:67), KRPFMCAYPGCNK (SEQ ID NO:68), FMCAYPGCN (SEQ ID NO:69), FMCAYPGCY (SEQ ID NO:70), şi FMCAYPGCK (SEQ ID NO:71) sunt de asemenea administrate.

Într-o variantă de realizare, 200 mcg din fiecare peptidă sunt emulsionate cu Montanide ISA 51 VG şi administrate subcutanat în săptămânile 0, 2, 4, 6, 8 şi 10.

Într-o variantă de realizare, 3 mg/kg de nivolumab sunt administrate intravenos în săptămânile 0, 2, 4, 6, 8, 10 şi 12.

Într-o variantă de realizare, tratarea, reducerea incidenţei sau inducerea unui răspuns imun împotriva unui cancer care exprimă WT1 este mai mare decât se realizează prin administrarea peptidelor WT1 singure sau a cel puţin un inhibitor PD1 singur.

Prezenta invenţie oferă, de asemenea, o compoziţie care cuprinde cele patru peptide WT1 YMFPNAPYL (SEQ ID NO:124), RSDELVRHHNMHQRNMTKL (SEQ ID NO:1), PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEQ ID NO: 2) şi SGQAYMFPNAPYLPSCLES (SEQ ID NO:125) şi cel puţin un inhibitor PD1.

DESCRIEREA DETALIATĂ A INVENŢIEI

Cancerul ovarian este una dintre cele mai frecvente afecţiuni ginecologice maligne şi a cincea cea mai frecventă cauză de deces prin cancer la femeile din Statele Unite. Peste 22.000 de cazuri sunt diagnosticate anual şi există aproximativ 15.500 de decese pe an [1]. Majoritatea pacienţilor au boală larg răspândită la prezentare [2]. Supravieţuirea la 5 ani pentru boala în stadiu avansat rămâne mai mică de 30% [1]. Deşi o remisie clinică completă după chimioterapia iniţială poate fi anticipată pentru mulţi pacienţi, o revizuire a laparotomiei la o a doua privire atunci când aceasta a fost adesea efectuată ca o chestiune de îngrijire de rutină indică faptul că mai puţin de 50% dintre pacienţi nu suferă de boală [3]. În plus, aproape jumătate dintre pacienţii cu o procedură la o a doua privire negativă recidivează şi necesită tratament suplimentar [4]. Mulţi pacienţi vor obţine un al doilea răspuns clinic complet cu chimioterapie suplimentară. Cu toate acestea, aproape toţi pacienţii vor recidiva după un interval scurt de remisiune de 9-11 luni. [5]. Sunt necesare strategii eficiente de prelungire a remisiunii sau de prevenire a recidivelor, deoarece remisiile ulterioare sunt de o durată progresiv mai scurtă până când rezistenţa la chimioterapie se dezvoltă pe scară largă [2].

S-a demonstrat că atât anticorpii, cât şi efectorii celulelor T oferă beneficii în modelele de cancer ovarian. S-a observat că anticorpii reduc invazia tisulară timpurie [6]. Modelele preclinice au demonstrat, de asemenea, clearance-ul celulelor tumorale circulante şi eliminarea micrometastazelor sistemice prin utilizarea atât a anticorpilor administraţi pasiv, cât şi a anticorpilor induşi de vaccin. În ceea ce priveşte efectorii celulelor T, s-a demonstrat că un răspuns imunitar activat la nivel global este asociat cu un rezultat clinic îmbunătăţit la pacienţii cu cancer ovarian avansat. Zhang şi colab. au arătat că prezenţa celulelor T care infiltrează tumora în insulele celulelor tumorale a fost asociată cu îmbunătăţirea atât a supravieţuirii fără progresie, cât şi a supravieţuirii globale [7]. În schimb, infiltrarea celulelor T-regulatoare conferă un prognostic mai rău [8].

Datele la pacienţii cu cancer ovarian în a doua remisie sau mai mare le confirmă recidiva într-un mod previzibil [9]. În ultimii ani, cancerul ovarian a fost vizat de o varietate de abordări noi bazate pe sistemul imunitar. Terapia cu anticorpi a inclus oregovomab [10] care este o terapie cu anticorpi monoclonali care ţinteşte antigenul CA125; abagovomab [11] care este un anticorp anti-idiotipic care ţinteşte CA-125; şi trastuzumab [12] care este un anticorp monoclonal umanizat anti-HER2. Alte strategii au inclus terapia cu citokine, cum ar fi interferon-y [13, 14] şi IL-2 [15]. Au fost de asemenea evaluate imunizarea activă cu alţi antigene, cum ar fi Lewis y [16], MUC1 [17], peptida restricţionată HLA NY-ESO-1b [18] şi conjugatul KH-1-KLH. Strategiile anterioare au fost ineficiente şi sunt necesare noi modalităţi terapeutice pentru a creşte eficacitatea terapiilor pentru ovare, precum şi pentru numeroase alte tipuri de cancer care sunt tratate ineficient cu terapiile disponibile în prezent.

WT1 se referă la tumora Wilms 1 sau produsul genic al genei WT1. Gena supresoare a tumorii Wilms, WT1, a fost identificată pentru prima dată în tumorile renale în copilărie, dar WT1 este, de asemenea, foarte exprimată în mai multe alte tumori maligne hematologice şi tumori solide, inclusiv mezoteliom [19, 20]. WT1 a fost identificat iniţial prin maparea ADNc la o regiune a cromozomului 11p13. ADNc WT1 codifică o proteină care conţine patru degete de zinc Kruppel şi conţine un model complex de îmbinare alternativă, rezultând patru factori de transcripţie diferiţi. Fiecare izoformă WT1 are diferite activităţi transcripţionale şi de legare la ADN [21] şi poate regla pozitiv sau negativ diverse gene implicate în proliferarea celulară, diferenţierea, apoptoza, dezvoltarea organelor şi determinarea sexului. WT1 este exprimat în mod normal în ţesuturile de origine mezodermică în timpul embriogenezei, inclusiv rinichi, gonade, inimă, mezoteliu şi splină [22]. În ţesuturile adulte normale, expresia WT1 este limitată la niveluri scăzute în nucleele celulelor stem hematopoietice normale CD34+, celulele progenitoare mioepiteliale, podocite renale şi unele celule din testicul şi ovar [23]. WT1 este foarte omolog la şoareci şi oameni (96% la nivel de aminoacizi) şi are distribuţie şi funcţie similară în ţesut [24, 25]. Deşi iniţial descrise ca o genă supresoare de tumoră, proteinele WT1 par să fie implicate în tumorigeneză.

Expresia puternică a proteinei WT1 în cancerul ovarian, împreună cu mecanismul său de acţiune propus, o face o ţintă raţională pentru imunoterapie, printre multe alte tipuri de cancer care exprimă şi proteina WT1, cum ar fi mezoteliom, leucemie, tumoră Wilms, leucemie mielogenă acută (LMA), leucemie mieloidă cronică (LMC), sindrom mielodisplazic (SMD), melanom, cancer de stomac, cancer de prostată, cancer biliar, cancer al sistemului urinar, glioblastom, sarcom de ţesut moale, osteosarcom şi cancer pulmonar fără celule mici (NSCLC). În cancerul ovarian, expresia este atât de frecventă încât patologii folosesc în mod obişnuit coloraţii imunohistochimice pentru WT1 (cu o convenţie standardizată pentru descrierea expresiei şi determinarea ca „pozitive» sau „negative» pentru a ajuta la distingerea cancerelor ovariene epiteliale de alte tumori. WT1 este un marker deosebit de sensibil şi specific pentru cancerul ovarian seros [26]. Micro-reţelele de ţesut ovarian sugerează că 70-80% dintre cancerele ovariene seroase exprimă WT1, astfel încât majoritatea pacienţilor vor avea ţinta şi vor fi eligibile pentru participarea la studiu. S-a demonstrat că vaccinarea cu patru peptide sintetice derivate din WT1 induce răspunsuri celulelor T la pacienţii cu remisie completă din leucemia mieloidă acută [60].

Într-un aspect, prezenta invenţie furnizează combinaţia dintre (a) cele patru peptide WT1 YMFPNAPYL (SEQ ID NO:124), RSDELVRHHNMHQRNMTKL (SEQ ID NO:1), PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEQ ID NO: 2) şi SGQAYMFPNAPYLPSCLES (SEQ ID NO:125) şi (b) cel puţin un inhibitor al anticorpului PD1, pentru utilizare în tratarea, reducerea incidenţei sau inducerea unui răspuns imun împotriva unui cancer care exprimă WT1.

Peptidele WT1 RSDELVRHHNMHQRNMTKL (SEQ ID NO:1) şi PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEQ ID NO:2) sunt peptide native care sunt fragmente ale proteinei WT1.

Peptidele native WT1 sunt descrise în WO2005053618, WO2007047764 şi WO2007120673.

Peptidele WT1 YMFPNAPYL (SEQ ID NO:124) şi SGQAYMFPNAPYLPSCLES (SEQ ID NO:125) sunt fragmente de peptide WT1 modificate care conţin una sau mai multe modificări heteroclitice pentru a spori imunogenitatea împotriva secvenţei peptidice native.

Peptidele WT1 modificate sunt descrise în WO2005053618, WO2007047764 şi WO2007120673.

Într-o variantă de realizare, peptidele pot fi administrate în combinaţie cu un purtător, diluant sau excipient. Într-o variantă de realizare, peptidele sunt administrate în combinaţie cu un adjuvant. Fiecare peptidă poate fi administrată cu un adjuvant diferit sau o combinaţie de adjuvanţi sau peptidele pot fi administrate într-o combinaţie de două sau mai multe peptide, cu un adjuvant sau combinaţie de adjuvanţi. Imunogenul sau compoziţia care conţine una sau mai multe peptide poate fi denumită aici un vaccin, un vaccin peptidic, un vaccin WT1 şi altele asemenea.

Adjuvantul poate fi de orice clasă, cum ar fi săruri de alaun şi alţi adjuvanţi minerali, produse bacteriene sau adjuvanţi derivaţi de bacterii, agenţi tensoactivi (de exemplu, saponine), emulsii de ulei în apă (o/w) şi apă în ulei (w/o), adjuvanţi lipozomi, citokine (de exemplu, IL-2, GM-CSF, IL-12 şi IFN-gamma) şi analogi de alfa-galactosilceramidă. Exemple nelimitative de adjuvanţi includ emulsii Montanide, QS21, adjuvantul Freund complet sau incomplet, fosfat de aluminiu, hidroxid de aluminiu, Bacil Calmette-Guerin (BCG) şi alaun. Într-o variantă de realizare, adjuvantul este un agent care îmbunătăţeşte răspunsul CTL al sistemului imunitar împotriva peptidei WT1, cum ar fi surfactantul monooleat de manidă care conţine acid oleic de calitate vegetală (VG) derivat din ulei de măsline (emulsie w/o Montanide ISA 51 VG). Adjuvantul poate fi administrat în aceeaşi compoziţie ca una sau mai multe peptide WT1, sau în aceeaşi compoziţie ca cel puţin un inhibitor PD1, sau în aceeaşi compoziţie ca şi una sau mai multe peptide WT1 şi cel puţin un inhibitor PD1, sau într-o compoziţie separată de una sau mai multe peptide WT1 şi cel puţin un inhibitor PD1.

Într-o variantă de realizare, una sau mai multe alte peptide pot fi utilizate împreună cu combinaţia menţionată mai sus a celor patru peptide: YMFPNAPYL (SEQ ID NO:124), RSDELVRHHNMHQRNMTKL (SEQ ID NO:1), PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEQ ID NO: 2) şi SGQAYMFPNAPYLPSCLES (SEQ ID NO:125) pentru scopurile de aici.

Astfel, într-o variantă de realizare, una sau mai multe dintre peptide NLMNLGATL (SEQ ID NO:21), WNLMNLGATLKGVAA (SEQ ID NO:26), LVRHHNMHQRNMTKL (SEQ ID NO:3), NKRYFKLSHLQMHSR (SEQ ID NO:4), SGQARMFPNAPYLPSCLES (SEQ ID NO:5), QARMFPNAPYLPSCL (SEQ ID NO:6), RMFPNAPYL (SEQ ID NO:7), SLGEQQYSV (SEQ ID NO:8), ALLPAVPSL (SEQ ID NO:9), NLGATLKGV (SEQ ID NO:10), DLNALLPAV (SEQ ID NO:11), GVFRGIQDV (SEQ ID NO:12), KRYFKLSHL (SEQ ID NO:13), ALLLRTPYS (SEQ ID NO:14), CMTWMQMNL (SEQ ID NO:15), NMHQRNMTK (SEQ ID NO:16), QMNLGATLK (SEQ ID NO:17), FMCAYPGCNK (SEQ ID NO:18), KLSHLQMHSR (SEQ ID NO:19), QAYMFPNAPYLPSCL (SEQ ID NO:126), YLGEQQYSV (SEQ ID NO:127), YLLPAVPSL (SEQ ID NO:128), YLGATLKGV (SEQ ID NO:129), YLNALLPAV (SEQ ID NO:130), GLRRGIQDV (SEQ ID NO:131), KLYFKLSHL (SEQ ID NO:132), ALLLRTPYV (SEQ ID NO:133), YMTWNQMNL (SEQ ID NO:134), NMYQRNMTK (SEQ ID NO:135), NMHQRVMTK (SEQ ID NO:136), NMYQRVMTK (SEQ ID NO: 137), QMYLGATLK (SEQ ID NO:138), QMNLGVTLK (SEQ ID NO:139), QMYLGVTLK (SEQ ID NO: 140), FMYAYPGCNK (SEQ ID NO:141), FMCAYPFCNK (SEQ ID NO:142), FMYAYPFCNK (SEQ ID NO:143), KLYHLQMHSR (SEQ ID NO:144), KLSHLQMHSK (SEQ ID NO:145), KLYHLQMHSK (SEQ ID NO:146), NQMNLGATL (SEQ ID NO:20), NYMNLGATL (SEQ ID NO:22), CMTWNQMNLGATLKG (SEQ ID NO:23), CMTWNLMNLGATLKG (SEQ ID NO:24), WNQMNLGATLKGVAA (SEQ ID NO:25), MTWNQMNLGATLKGV (SEQ ID NO:27), TWNQMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:28), MTWNLMNLGATLKGV (SEQ ID NO:30), TWNLMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:31), MTWNYMNLGATLKGV (SEQ IDNO:33), TWNYMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:34), CMTWNQMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:35), WNQMNLGAT (SEQ ID NO:36), TWNQMNLGA (SEQ ID NO:37), MTWNQMNLG (SEQ ID NO:38), CMTWNLMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:39), WNLMNLGAT (SEQ ID NO:40), MNLGATLKG (SEQ ID NO:41), CMTWNYMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:43), GALRNPTAC (SEQ ID NO:46), GYLRNPTAC (SEQ ID NO:47), GALRNPTAL (SEQ ID NO:48), YALRNPTAC (SEQ ID NO:49), GLLRNPTAC (SEQ ID NO:50), RQRPHPGAL (SEQ ID NO:51), RYRPHPGAL (SEQ ID NO:52), YQRPHPGAL (SEQ ID NO:53), RLRPHPGAL (SEQ ID NO:54), RIRPHPGAL (SEQ ID NO:55), QFPNHSFKHEDPMGQ (SEQ ID NO:61), HSFKHEDPM (SEQ ID NO:63), HSFKHEDPY (SEQ ID NO:64), HSFKHEDPK (SEQ ID NO:65), KRPFMCAYPGCYKRY (SEQ ID NO:66), SEKRPFMCAYPGCNK (SEQ ID NO:67), KRPFMCAYPGCNK (SEQ ID NO:68), FMCAYPGCN (SEQ ID NO:69), FMCAYPGCY (SEQ ID NO:70), FMCAYPGCK (SEQ ID NO:71) sunt de asemenea administrate.

Într-o altă variantă de realizare, una sau mai multe peptide WT1 native sau modificate dintre cele dezvăluite în WO2014113490, cum ar fi NQMNLGATL (SEQ ID NO:147), NLMNLGATL (SEQ ID NO:148), NYMNLGATL (SEQ ID NO:149), CMTWNQMNLGATLKG (SEQ ID NO:150), CMTWNLMNLGATLKG (SEQ ID NO:151), WNQMNLGATLKGVAA (SEQ ID NO:152), WNLMNLGATLKGVAA (SEQ ID NO:153), MTWNQMNLGATLKGV (SEQ ID NO:154), TWNQMNLGATLKGVA (SEQ ID NO: 155), MTWNLMNLGATLKGV (SEQ ID NO:157), TWNLMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:158), MTWNYMNLGATLKGV (SEQ ID NO:160), TWNYMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:161), CMTWNQMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:162), WNQMNLGAT (SEQ ID NO:163), TWNQMNLGA (SEQ ID NO:164), MTWNQMNLG (SEQ ID NO:165), CMTWNLMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:166), WNLMNLGAT (SEQ ID NO:167), MNLGATLKG (SEQ ID NO:168), CMTWNYMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:170), GALRNPTAC (SEQ ID NO:173), GYLRNPTAC (SEQ ID NO:174), GALRNPTAL (SEQ ID NO:175), YALRNPTAC (SEQ ID NO:176), GLLRNPTAC (SEQ ID NO:177), RQRPHPGAL (SEQ ID NO:178), RYRPHPGAL (SEQ ID NO:179), YQRPHPGAL (SEQ ID NO:180), RLRPHPGAL (SEQ ID NO:181), RIRPHPGAL (SEQ ID NO:182), QFPNHSFKHEDPMGQ (SEQ ID NO:188), HSFKHEDPM (SEQ ID NO:190), HSFKHEDPY (SEQ ID NO:191), HSFKHEDPK (SEQ ID NO:192), KRPFMCAYPGCYKRY (SEQ ID NO:194), SEKRPFMCAYPGCNK (SEQ ID NO:194), KRPFMCAYPGCNK (SEQ ID NO:195), FMCAYPGCN (SEQ ID NO:196), FMCAYPGCY (SEQ ID NO:197) sau FMCAYPGCK (SEQ ID NO:198) sunt de asemenea administrate.

Fiecare peptidă a unei combinaţii poate fi administrată separat în cadrul propriei formulări sau două, trei, patru, cinci sau mai multe peptide ale unei combinaţii pot fi administrate împreună în cadrul aceleiaşi formulări.

Nivelul de doză sau fiecare peptidă, frecvenţa de administrare a fiecăreia sau a combinaţiilor de peptide, durata administrării şi alte aspecte ale imunizării cu peptide WT1 pot fi optimizate în conformitate cu prezentarea clinică a pacientului, durata sau cursul bolii, comorbidităţi. şi alte aspecte ale îngrijirii clinice.

Într-o variantă de realizare, vaccinul WT-1 cuprinde 280 mcg din fiecare dintre cele patru peptide menţionate mai sus (YMFPNAPYL (SEQ ID NO:124), RSDELVRHHNMHQRNMTKL (SEQ ID NO:1), PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEQ ID NO: 2) şi SGQAYMFPNAPYLPSCLES (SEQ ID NO:125)) combinate într-un volum total de 0,7 ml (0,4 mg/ml din fiecare peptidă). Într-o variantă de realizare, se administrează 200 mcg din fiecare peptidă la fiecare doză (0,5 ml). Într-o variantă de realizare, se administrează 100 până la 2000 mcg din fiecare peptidă la fiecare doză. Într-o variantă de realizare, doza de mai sus este administrată la două săptămâni pe o perioadă de 10 săptămâni (adică, 6 administrări). Într-o variantă de realizare, administrarea este subcutanată. Într-o variantă de realizare, un adjuvant este amestecat (emulsionat) cu vaccinul înainte de dozare. Într-o variantă de realizare, 0,5 ml de vaccin (adică 200 mcg din fiecare peptidă) sunt emulsionaţi cu 1,0 ml de adjuvant înainte de administrare. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este injectat în acelaşi situs ca şi vaccinul, înainte sau după ce vaccinul este injectat. Într-o variantă de realizare, adjuvantul este o emulsie. Într-o variantă de realizare, emulsia este o emulsie Montanide. Într-o variantă de realizare, emulsia Montanide este adjuvantul imunologic Montanide ISA 51 VG. În practica invenţiei, un inhibitor PD1 este de asemenea administrat la subiect cu vaccinul WT1, aşa cum este descris mai jos.

Inhibitorul PD1 este un inhibitor al checkpoint imunitar. Checkpoint imunitar reglează funcţia celulelor T în sistemul imunitar. Celulele T joacă un rol central în imunitatea mediată de celule. Proteinele checkpoint interacţionează cu liganzi specifici care trimit un semnal în celulele T şi, în esenţă, opresc sau inhibă funcţia celulelor T. Celulele canceroase profită de acest sistem conducând niveluri ridicate de exprimare a proteinelor checkpoint pe suprafaţa lor, ceea ce are ca rezultat controlul celulelor T care exprimă proteinele checkpoint pe suprafaţa celulelor T care intră în micromediul tumoral, suprimând astfel răspunsul imun anticancer. Ca atare, inhibarea proteinelor checkpoint ar avea ca rezultat restabilirea funcţiei celulelor T şi un răspuns imun la celulele canceroase. Un inhibitor al checkpoint imunitar (sau un inhibitor al checkpoint) este un compus sau un agent care blochează sau inhibă proteinele checkpoint imunitar (adică, care blochează sau inhibă receptorii checkpoint sau liganzii receptorului checkpoint). Alte proteine checkpoint includ CTLA-4, PD-L1, PD-L2, PD1, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, IDO, KIR, 2B4 (aparţine familiei CD2 de molecule şi este exprimat pe toate celulele NK şi celulele T CD8+ de memorie), CD160 (denumit şi BY55), CGEN-15049, kinazele CHK 1 şi CHK2, A2aR şi diverşi liganzi din familia B-7.

Moartea Programată-1 (PD-1) este un membru al superfamiliei imunoglobulinelor (IGSF) a moleculelor implicate în reglarea activării celulelor T. PD-1 şi-a dobândit numele de „moarte programată» când a fost identificat în 1992 ca o genă reglată pozitiv în hibridomul celulelor T care suferă moartea celulară. Structura PD-1 este compusă dintr-un domeniu IGSF, un domeniu transmembranar şi un domeniu intracelular care conţine un motiv inhibitor pe bază de tirozină imunoreceptor (ITIM) şi un motiv comutator pe bază de tirozină imunoreceptor (ITSM) [38]. PD-1 are doi parteneri obligatorii: PD-L1 (B7-H1, CD274) şi PD-L2 (B7-DC, CD273). PD-L1 este exprimat pe scară largă atât pe liniile hematopoietice, cât şi pe cele non-hematopoietice [39, 40]. Se găseşte pe celulele T, celulele B, macrofagele, celulele NK, DC şi celule mastocitare, precum şi în ţesuturile periferice. [41, 42]. Angajamentul PD-1 reprezintă un mijloc prin care tumorile eludează imunosupravegherea şi clearance-ul [43]. Blocarea căii PD-1 a fost demonstrată de nivolumab, care prezintă activitate în modelele de cancer de şoarece imunocompetenţi [44].

În această invenţie, inhibitorul checkpoint PD1 este un anticorp. Exemple de anticorpi includ nivolumab (OPDIVO), pembrolizumab (KEYTRUDA), pidilizumab (CT-011) şi MEDI0680 (AMP-514).

Nivolumab (OPDIVO) este un anticorp monoclonal IgG4 complet uman ţintit împotriva receptorului PD-1 pe limfocitele T şi B activate [47]. Pembrolizumab (KEYTRUDA) este un alt exemplu de anticorp care ţinteşte PD-1. Exemple de inhibitori PD1 sunt enumerate în Tabelul 1. Exemple de alţi inhibitori ai checkpoint sunt enumerate în Tabelul 2.

Tabelul 1. Exemple de inhibitori PD1

Nume Clasa de Agent Ţintă Nivolumab (cunoscut sub numele de ONO-4538; BMS-936558; MDX1106; comercializat ca Opdivo) mAb uman IgG4 Moarte programată-1 (PD-1) Pembrolizumab (cunoscut sub numele de, MK-3475; lambrolizumab; comercializat ca Keytruda) mAb umanizat IgG4 PD-1 Pidlizumab (cunoscut sub numele de CT-011) mAb umanizat IgG1 PD-1 MEDI0680 (cunoscut sub numele de AMP-514) mAb umanizat IgG4 PD-1 AMP-224 Proteina de fuziune Fc-PD-L2 PD-1 AUNP-12 Peptidă ramificată, cu 29 de aminoacizi PD-1

Tabelul 2: Exemple de Alţi Inhibitori ai Checkpoint

Nume Clasa de Agent Ţintă Ipilumumab (cunoscut sub numele de MDX-010; MDX-101; BMS-734016; comercializat ca Yervoy) mAb uman IgG1 Antigenul citotoxic al limfocitelor T 4 (CTLA-4) Tremelimumab (cunoscut sub numele de ticilimumab; CP-675-206) mAb uman IgG2 CTLA-4 BMS-936559 mAb uman IgG4 Ligand de moarte programată-1 (PD-L1) Atezolizumab (cunoscut sub numele de MPDL3280A; RG7446) mAb umanizat IgG1 PD-L1 Durvalumab (cunoscut sub numele de MEDI4736) mAb uman IgG1 PD-L1 Avelumab (cunoscut sub numele de MSB0010718C) mAb uman IgG1 PD-L1 BMS935559 (cunoscut sub numele de MDX-1105) mAb uman IgG4 PD-L1 rHIgM12B7 mAb uman IgM Ligand de moarte programată-2 (PD-L2) BMS-986016 mAB Gena de activare a limfocitelor-3 (LAG-3; cunoscut sub numele de CD223) GSK2831781 mAb afuscat umanizat LAG-3 IMP321 LAG-3 solubil LAG-3 Lirilumab (cunoscut sub numele de BMS-986015) mAb uman IgG4 Receptor asemănător imunoglobulinei celulei killer (KIR) IPH2101 (cunoscut sub numele de 1-7F9) Ab monoclonal anti-inhibitor KIR Indoximod (cunoscut sub numele de NLG 9189; CAS # 110117-83-4) Moleculă mică (Izomerul D al 1-metil-triptofanului) Indoleamin-2,3-dioxigenaza 1 (IDOl) NLG 919 (CAS # 1402836-58-1) Moleculă mică IDOl INCB024360 (CAS # 914471-09-3) Moleculă mică IDOl PF-05082566 mAB uman IgG2 4-1BB (cunoscut sub numele de CD137) Urelumab (cunoscut sub numele de BMS-663513) mAb umanizat IgG4 4-1BB MEDI6469 IgG1 antiuman de şoarece Ab OX40 (cunoscut sub numele de CD134)

Într-o variantă de realizare, subiectului i se administrează o combinaţie de doi sau mai mulţi inhibitori ai checkpoint. Într-o variantă de realizare, combinaţia de inhibitori este selectată dintre cei din Tabelele 1 şi 2. Cei doi sau mai mulţi inhibitori pot fi administraţi simultan sau consecutiv unul faţă de celălalt şi în raport cu peptidele WT1. Astfel, doi sau mai mulţi inhibitori ai checkpoint care ţinteşte două proteine checkpoint diferite, cum ar fi PD-1 (de exemplu, nivolumab sau alt inhibitor de anticorpi PD-1) şi CTLA-4 (de exemplu, ipilumumab sau alt inhibitor de CTLA-4), pot fi administraţi la subiect simultan sau consecutiv unul faţă de celălalt şi faţă de una sau mai multe peptide WT1.

Nivelul dozei, frecvenţa dozării, durata dozării şi alte aspecte ale administrării inhibitorului checkpoint pot fi optimizate în conformitate cu prezentarea clinică a pacientului, durata sau cursul bolii, comorbidităţile şi alte aspecte ale îngrijirii clinice.

Într-o variantă de realizare, se utilizează o doză de nivolumab şi o selecţie de schemă de 3 mg/kg la fiecare 2 săptămâni pe o perioadă de 12 săptămâni. Într-o variantă de realizare, administrarea este intravenoasă. Într-o variantă de realizare, cursul administrării inhibitorului PD1 este concomitent cu cel al administrării vaccinului WT1. Într-o variantă de realizare, cursul administrării inhibitorului PD1 se suprapune cu cel al administrării vaccinului WT1. Într-o variantă de realizare, cursul administrării inhibitorului PD1 începe aproximativ în acelaşi timp cu cursul administrării vaccinului WT1.

Într-o variantă de realizare, vaccinul WT1 cuprinde 200 mcg din fiecare dintre peptidele YMFPNAPYL (SEQ ID NO:124), RSDELVRHHNMHQRNMTKL (SEQ ID NO:1), PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEQ ID NO: 2) şi SGQAYMFPNAPYLPSCLES (SEQ ID NO:125) combinate într-un volum total de 0,5 ml emulsionat cu 1,0 ml Montanide ISA 51 VG şi administrat subcutanat la fiecare 2 săptămâni timp de 6 administrări; şi nivolumab, 3 mg/kg, se administrează intravenos prin perfuzie de 60 de minute la fiecare două săptămâni timp de 7 administrări, începând cu vaccinul WT1.

Într-o variantă de realizare, una sau mai multe peptide WT1 şi unul sau mai mulţi inhibitori de anticorpi PD1 sunt fiecare administrat la un subiect conform unui program care beneficiază maxim pacientul. Una sau mai multe peptide WT1 şi unul sau mai mulţi inhibitori PD1 nu sunt, prin urmare, administrate în mod necesar în acelaşi timp sau chiar în aceeaşi compoziţie sau fiecare pentru aceeaşi durată. Fiecare peptidă WT1 poate fi administrată în conformitate cu un program particular, la fel ca fiecare inhibitor PD1. Într-o variantă de realizare nelimitator, una sau mai multe peptide WT1 şi unul sau mai mulţi inhibitori PD1 sunt prezenţi în aceeaşi compoziţie.

După cum s-a menţionat aici, nivelul dozei şi programul de dozare incluzând frecvenţa şi durata peptidei sau peptidelor WT1 (separat sau administrate împreună) şi cea a unuia sau mai multor inhibitori PD1 (administraţi separat sau împreună), calea de administrare şi alte aspecte de administrare sunt optimizate pentru un beneficiu maxim pentru pacientul subiect.

Într-un alt aspect, prezenta invenţie oferă, de asemenea, o compoziţie care cuprinde cele patru peptide YMFPNAPYL (SEQ ID NO:124), RSDELVRHHNMHQRNMTKL (SEQ ID NO:1), PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEQ ID NO: 2) şi SGQAYMFPNAPYLPSCLES (SEQ ID NO:125) şi cel puţin un inhibitor al anticorpului PD1. Într-o variantă de realizare, compoziţia cuprinde nivolumab, pembrolizumab sau combinaţia acestora. Compoziţia mai poate cuprinde un excipient, diluant sau purtător. Compoziţia poate cuprinde, de asemenea, unul sau mai mulţi adjuvanţi.

Variantele de realizare de mai sus furnizează compoziţii îmbunătăţite pentru utilizare în tratarea, reducerea incidenţei şi inducerea răspunsurilor imune împotriva unui cancer care exprimă WT1.

Într-o variantă de realizare, compoziţiile menţionate mai sus pentru utilizare în tratarea unui cancer care exprimă WT1, reducerea incidenţei unui cancer care exprimă WT1 sau inducerea formării şi proliferării unui răspuns celulelor T specifice proteinei WT1, sunt obţinute cu un efect mai mare decât dacă astfel de compoziţii folosesc numai peptidele WT1 sau inhibitoru(ii) PD1 singur(i). Într-o variantă de realizare, cursul administrării vaccinului WT1 şi cursul administrării unuia sau mai multor inhibitori PD1 sunt concurente, se suprapun sau sunt simultane astfel încât răspunsul biologic la vaccin este îmbunătăţit prin administrarea unuia sau mai multor inhibitori PD1. Într-o variantă de realizare, cursul administrării vaccinului WT1 se poate termina înainte de începerea cursului terapiei cu inhibitor PD1, în măsura în care eficacitatea CTL-urilor provocate de administrarea vaccinului WT1 este îmbunătăţită de terapia cu inhibitor PD1. Într-o variantă de realizare, prima administrare a terapiei cu inhibitor PD1 are loc în aceeaşi zi cu ultima administrare de vaccin WT1. Într-o variantă de realizare, sfârşitul vaccinării WT1 şi începutul terapiei cu inhibitor PD1 sunt separate de la 1-7 zile sau de la 1-4 săptămâni.

Într-o altă variantă de realizare, o peptidă pentru utilizare în prezenta invenţie este imunogenă. Termenul "imunogen" se referă la o capacitate de a stimula, de a provoca sau de a participa la un răspuns imun. Într-o altă variantă de realizare, răspunsul imun provocat este un răspuns imun mediat de celule. Într-o altă variantă de realizare, răspunsul imun este o combinaţie de răspunsuri mediate celular şi umorale.

Aşa cum este dezvăluit aici, o întâlnire a unei celule T cu o peptidă pentru utilizare în această invenţie induce diferenţierea acesteia într-o celulă T efector şi/sau de memorie. Întâlnirile ulterioare între celulele T efector sau de memorie şi aceeaşi peptidă sau, într-o altă variantă de realizare, cu o peptidă heteroclitică, duce la un răspuns imun mai rapid şi mai intens. Astfel de răspunsuri sunt măsurate, într-o altă variantă de realizare, prin măsurarea gradului de proliferare a populaţiei de celule T expuse peptidei.

Într-o altă variantă de realizare, aşa cum este descris aici, atunci când subiectul este expus la o peptidă sau o compoziţie care cuprinde o peptidă pentru utilizare în această invenţie, care diferă de proteina nativă exprimată, ulterior se dezvoltă un răspuns imun al gazdei reactiv încrucişat cu proteina/antigenul nativ.

Într-o altă variantă de realizare, peptidele, compoziţiile şi vaccinurile pentru utilizare în această invenţie stimulează un răspuns imun care are ca rezultat liza celulelor tumorale. În toate variantele de realizare de mai sus, utilizarea concomitentă a inhibitorului PD1 îmbunătăţeşte răspunsul imun împotriva tumorii.

Într-o variantă de realizare, molecula WT1 are secvenţa:

Într-o altă variantă de realizare, molecula WT1 are secvenţa:

Într-o altă variantă de realizare, molecula WT1 cuprinde secvenţa:

În alte variante de realizare, proteina WT1 cuprinde una dintre secvenţele prezentate în una dintre următoarele intrări de secvenţă GenBank: NM_024426, NM_024425, NM_024424, NM_000378, S95530, D13624, D12496, D12497, AH003034 sau X77549.

În anumite variante de realizare, compoziţia conform prezentei invenţii este un vaccin.

Într-o altă variantă de realizare, combinaţia de agenţi de tratament pentru utilizare în prezenta invenţie poate fi pentru inducerea unui răspuns imun anti-mezoteliom la un subiect, tratarea unui subiect cu un mezoteliom sau pentru reducerea incidenţei unui mezoteliom sau a recidivei acestuia, la un subiect.

Într-o altă variantă de realizare, compoziţia care cuprinde cele patru peptide WT1 YMFPNAPYL (SEQ ID NO:124), RSDELVRHHNMHQRNMTKL (SEQ ID NO:1), PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEQ ID NO: 2) şi SGQAYMFPNAPYLPSCLES (SEQ ID NO:125) şi cel puţin un inhibitor PD1 mai cuprinde un purtător acceptabil farmaceutic. Într-o altă variantă de realizare, compoziţia cuprinde în plus un adjuvant. Într-o altă variantă de realizare, compoziţia mai cuprinde oricare dintre aditivii, compuşii sau excipienţii prezentaţi aici mai jos. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este o sare de alaun sau alt adjuvant mineral, produs bacterian sau adjuvant derivat din bacterii, agent tensoactiv (de exemplu, saponină), emulsie o/w sau w/o, adjuvant lipozomi, citokină (de exemplu, IL-2, GM-CSF, IL-12 şi IFN-gamma) sau analog de alfa-galactosilceramidă. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este QS21, adjuvantul complet sau incomplet al lui Freund, fosfat de aluminiu, hidroxid de aluminiu, BCG sau alaun. În alte variante de realizare, purtătorul este orice purtător enumerat aici. În alte variante de realizare, adjuvantul este orice adjuvant enumerat aici.

Într-o altă variantă de realizare, compoziţia poate fi o compoziţie de vaccin sau o compoziţie imunogenă.

Într-o altă variantă de realizare, termenul "vaccin" se referă la un material sau compoziţie care, atunci când este introdus într-un subiect, furnizează un răspuns profilactic sau terapeutic pentru o anumită boală, afecţiune sau simptom al acesteia. Într-o altă variantă de realizare, această invenţie cuprinde vaccinuri pe bază de peptide, opţional incluzând în plus compuşi imunomodulatori cum ar fi citokine, adjuvanţi etc.

În alte variante de realizare, compoziţia mai cuprinde un adjuvant. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este Montanide ISA 51. Montanide ISA 51 conţine un ulei natural metabolizabil şi un emulgator rafinat. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este GM-CSF. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este hemocianina de limpetă (KLH), care poate fi conjugată cu antigenul peptidic sau poate fi administrată împreună cu peptida. GM-CSF recombinant este o proteină umană cultivată, într-o altă variantă de realizare, într-un vector de drojdie (S. cerevisiae). GM-CSF promovează expansiunea clonală şi diferenţierea celulelor progenitoare hematopoietice, APC şi celulelor dendritice şi celulelor T.

Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este o citokină. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este un factor de creştere. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este o populaţie de celule. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este QS21. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este adjuvantul incomplet al lui Freund. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este fosfatul de aluminiu. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este hidroxidul de aluminiu. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este BCG. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este alaun. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este o interleukină. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este o chemokină. Într-o altă variantă de realizare, adjuvantul este orice alt tip de adjuvant cunoscut în domeniu. Într-o altă variantă de realizare, vaccinul WT1 cuprinde doi dintre adjuvanţii de mai sus. Într-o altă variantă de realizare, vaccinul WT1 cuprinde mai mult de doi dintre adjuvanţii de mai sus.

Această invenţie furnizează combinaţia de agenţi de tratament pentru utilizare în tratarea unui subiect cu un cancer care exprimă WT1. Într-o altă variantă de realizare, prezenta invenţie furnizează combinaţia de agenţi de tratament pentru utilizare în suprimarea sau oprirea progresiei unui cancer care exprimă WT1 la un subiect. Într-o altă variantă de realizare, prezenta invenţie furnizează combinaţia de agenţi de tratament pentru utilizare în reducerea incidenţei unui cancer care exprimă WT1 la un subiect. Într-o altă variantă de realizare, prezenta invenţie furnizează combinaţia de agenţi de tratament pentru utilizare în reducerea incidenţei recidivei unui cancer care exprimă WT1 la un subiect. Într-o altă variantă de realizare, prezenta invenţie furnizează combinaţia de agenţi de tratament pentru utilizare în depăşirea toleranţei celulelor T a unui subiect la un cancer care exprimă WT1.

De asemenea, este dezvăluit faptul că compoziţia prezentei invenţii poate fi utilizată într-o metodă de tratare a unui subiect care are un cancer care exprimă WT1, cuprinzând (a) inducerea într-o formare şi proliferare de donator a limfocitelor T citotoxice umane (CTL) care recunosc un celula malignă a cancerului; şi (b) iperfuzarea CTL umană la subiect, tratând astfel un subiect care are un cancer. Metodele pentru imunoterapie ex vivo sunt bine-cunoscute în domeniu şi sunt descrise, de exemplu, în Davis ID şi colab. (Blood dendritic cells generated with Flt3 ligand and CD40 ligand prime CD8+ T cells efficiently in cancer patients. J Immunother. 2006 Sep-Oct;29(5):499-511) şi Mitchell MS şi colab. (The cytotoxic T cell response to peptide analogs of the HLA-A∗0201-restricted MUC1 signal sequence epitope, M1.2. Cancer Immunol Immunother. 2006 Iul 28).

Este dezvăluit că tratamentul prezentei invenţii poate acţiona prin inducerea la un subiect a formării şi proliferării unui CTL specific proteinei WT1. Într-o altă variantă de realizare, compoziţia imunogenă poate cuprinde în plus o celulă prezentatoare de antigen (APC).

Este dezvăluit că tratamentul prezentei invenţii poate acţiona prin generarea unui răspuns imun heteroclitic la un subiect, în care răspunsul imun heteroclitic este îndreptat împotriva unui cancer care exprimă WT1.

Într-o variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este o leucemie mielogenă acută (LMA). Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este o leucemie mielogenă cronică (CML). Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este asociat cu un sindrom mielodisplazic (SMD). Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un SMD. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un cancer pulmonar fără celule mici (NSCLC). Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un carcinom esofagian cu celule scuamoase. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este o leucemie limfoblastică acută (LLA). Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un sarcom osos sau de ţesut moale. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este o tumoare Wilms. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este o leucemie. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un cancer hematologic. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un limfom. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este o tumoare cu celule rotunde mici desmoplazice. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un mezoteliom. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un mezoteliom malign. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un cancer gastric. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un cancer de colon. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un cancer pulmonar. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un cancer de sân. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este o tumoare cu celule germinale. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un mezoteliom pleural malign. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este mielom multiplu. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este leucemie mieloidă. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un cancer astrocitar. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un glioblastom (de exemplu, glioblastom multiform). Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un adenocarcinom colorectal. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un cancer ovarian (de exemplu, seros, epitelial sau endometrial). Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este cancer de sân. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este melanom. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este carcinom cu celule scuamoase de cap şi gât. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este carcinom pancreatic cu celule ductale. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un neuroblastom. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un cancer uterin. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un cancer tiroidian. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un carcinom hepatocelular. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un cancer tiroidian. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un cancer de ficat. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un cancer renal (de exemplu, carcinom cu celule renale). Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este sarcomul Kaposi. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este un sarcom. Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este orice alt carcinom sau sarcom.

Într-o altă variantă de realizare, cancerul care exprimă WT1 este o tumoare solidă. Într-o altă variantă de realizare, tumoarea solidă este asociată cu un cancer care exprimă WT1. Într-o altă variantă de realizare, tumoarea solidă este asociată cu un sindrom mielodisplazic (SMD). Într-o altă variantă de realizare, tumoarea solidă este asociată cu un cancer pulmonar cu celule mici (NSCLC). Într-o altă variantă de realizare, tumoarea solidă este asociată cu un cancer pulmonar. Într-o altă variantă de realizare, tumoarea solidă este asociată cu un cancer de sân. Într-o altă variantă de realizare, tumoarea solidă este asociată cu un cancer colorectal. Într-o altă variantă de realizare, tumoarea solidă este asociată cu un cancer de prostată. Într-o altă variantă de realizare, tumoarea solidă este asociată cu un cancer ovarian. Într-o altă variantă de realizare, tumoarea solidă este asociată cu un cancer renal. Într-o altă variantă de realizare, tumoarea solidă este asociată cu un cancer pancreatic. Într-o altă variantă de realizare, tumoarea solidă este asociată cu un cancer cerebral. Într-o altă variantă de realizare, tumoarea solidă este asociată cu un cancer gastro-intestinal. Într-o altă variantă de realizare, tumoarea solidă este asociată cu un cancer de piele. Într-o altă variantă de realizare, tumoarea solidă este asociată cu un melanom.

Într-o altă variantă de realizare, cancerul sau tumora tratată prin prezenta invenţie este suspectată că exprimă WT 1. Într-o altă variantă de realizare, expresia WT1 nu a fost verificată prin testarea probei tumorale reale. Într-o altă variantă de realizare, cancerul sau tumoarea este de un tip cunoscut pentru a exprima WT1 în multe cazuri. Într-o altă variantă de realizare, tipul exprimă WT1 în majoritatea cazurilor.

O listă neexhaustivă de tipuri de cancer care exprimă WT1 care pot fi tratate folosind compoziţiile invenţiei este prezentată în Tabelul 3.

Tabelul 3. Exemple de tipuri de cancer

Leucemie Limfoblastică Acută, Leucemie Limfoblastică Acută La Adulţi, Leucemie Mieloidă Acută în Copilărie, Leucemie Mieloidă Acută La Adulţi, Carcinom Corticosuprarenal în Copilărie, Carcinom Corticosuprarenal, Cancere Legate De SIDA în Copilărie, Limfom Legat De SIDA, Cancer Anal, Astrocitom, Astrocitom Cerebelos În Copilărie, Carcinom Bazocelular Cerebral În Copilărie, Cancer De Căi Biliare, Cancer De Vezică Extrahepatică, Cancer De Vezică Urinară, Cancer Osos În Copilărie, Osteosarcom/Histiocitom Fibros Malign, Gliom al Trunchiului Cerebral, Tumoare Cerebrală În Copilărie, Tumoare Cerebrală La Adulţi, Gliom Trunchi Cerebral, Tumoare Cerebrală În Copilărie, Astrocitom Cerebelos, Tumoare Cerebrală În Copilărie, Astrocitom Cerebral/Gliom Malign, Tumoare Cerebrală În Copilărie, Ependimom, Tumoare Cerebrală În Copilărie, Meduloblastom, Tumoare Cerebrală În Copilărie, Tumori Neuroectodermice Primitive Supratentoriale, Tumora Cerebrală În Copilărie, Cale Vizuală Şi Gliom Hipotalamic, Tumoră Cerebrală În Copilărie, Cancer De Sân În Copilărie, Cancer De Sân, Cancer De Sân În Copilărie, Adenoame Bronşice/Carcinoide Masculine, Limfom Burkitt În Copilărie, Tumora Carcinoidă, Tumora Carcinoidă În Copilărie, Carcinom Gastrointestinal Cu Limfom Primar Necunoscut, Limfom Al Sistemului Nervos Central, Astrocitom Cerebelos Primar, Astrocitom Cerebral/Gliom Malign În Copilărie, Cancer De Col Uterin În Copilărie, Cancer În Copilărie, Leucemie Limfocitară Cronică, Leucemie Mielogenă Cronică, Tulburări Mieloproliferative Cronice, Cancer De Colon, Cancer Colorectal, Limfom Cutanat Cu Celule T În Copilărie, Vezi Micoza Fungoide Şi Sindromul Sezary, Ependimom De Cancer Endometrial, Cancer Esofagian În Copilărie, Cancer Esofagian, Familia De Tumori Ewing În Copilărie, Tumori Celulare Extracraniene, Tumora Cu Celule Germinale Extragonadale În Copilărie, Cancerul Căilor Biliare Extrahepatice, Cancerul Ocular, Melanomul Intraocular Cancerul Ocular, Retinoblastom, Cancerul Vezicii Biliare, Cancer Gastric (De Stomac), Cancer Gastric (De Stomac), Tumoră Carcinoidă Gastrointestinală În Copilărie, Tumoră Cu Celule Germinale, Tumoră Cu Celule Germinale Extracraniene În Copilărie, Tumora Cu Celule Germinale Extragonadale, Tumora Trofoblastică Gestaţională Ovariană, Gliom, Gliom La Adult, Gliom al Trunchiului Cerebral În Copilărie, Gliom Astrocitom Cerebral În Copilărie, Cale Vizuală În Copilărie Şi Cancer De Piele Hipotalamic (Melanom), Carcinom Cutanat, Cancer Pulmonar Cu Celule Mici Cu Celule Merkel, Cancer De Intestin Subţire, Sarcomul Ţesuturilor Moi, Sarcom De Ţesut Moale La Adulţi, Carcinom Cu Celule Scuamoase În Copilărie, vezi Cancer De Piele (Non-Melanom) Cancer Scuamos De Gât Cu Cancer Primar Ocult, Cancer De Stomac (Gastric) Metastatic, Cancer De Stomac (Gastric), Tumori Neuroectodermice Primitive Supratentoriale În Copilărie, Limfom Cu Celule T În Copilărie, Cutanat, vezi Micoză, Fungoide Şi Sindrom Sezary, Cancer Testicular, Timom, Timom Şi Carcinom Timic În Copilărie, Cancer Tiroidian, Cancer Tiroidian, Cancer Cu Celule Tranziţionale În Copilărie Al Pelvisului Renal Şi Al Tumora Trofoblastică Uretrară, Situs Primar Gestaţional Necunoscut, Carcinomul La Situsul Primar Necunoscut La Adulţi, Cancerul, Cancerele Neobişnuite Ale Copilăriei Ale Ureterului Şi Pelvisului Renal În Copilărie, Cancerul Cu Celule Tranziţionale, Cancer Uretral, Cancer Uterin, Sarcom Uterin Endometrial, Cancer Vaginal, Cale Vizuală Şi Gliom Hipotalamic, Cancer Vulvar În Copilărie, Macroglobulinemie Waldenström, Tumoră Wilms Leucemie Cu Celule Păroase, Cancer La Cap Şi Gât, Cancer Hepatocelular (Ficat), Cancer Hepatocelular (Primar) La Adulţi, Limfom Hodgkin În Copilărie (Primar), Limfom Hodgkin La Adulţi, Limfom Hodgkin În Copilărie În Timpul Sarcinii, Cancer Hipofaringian, Gliom Hipotalamic Şi al Căii Vizuale, Melanom Intraocular În Copilărie, Carcinom Cu Celule Insulare (Pancreas Endocrin), Sarcom Kaposi, Cancer Renal (Celule Renale), Cancer Renal, Cancer Laringian În Copilărie, Cancer Laringian, Leucemie În Copilărie, Limfoblastică Acută, Leucemie La Adulţi, Limfoblastică Acută, Leucemie În Copilărie, Mieloidă Acută, Leucemie La Adulţi, Mieloidă Acută, Leucemie În Copilărie, Leucemie Limfocitară Cronică, Leucemie Mielogenă Cronică, Cancer La Nivelul Buzelor Şi Cavităţii Bucale Cu Celule Păroase Cancer Hepatic, Cancer Hepatic (Primar) La Adulţi, Cancer Pulmonar (Primar) În Copilărie, Cancer Pulmonar Fără Celule Mici, Limfom Cu Celule Mici, Limfom Asociat SIDA, Limfom Burkitt, Limfom Cutanat Cu Celule T, Vezi Micoză Fungoide Şi Limfom Cu Sindrom Sezary, Limfom Hodgkin La Adulţi, Limfom Hodgkin În Copilărie, Limfomul Hodgkin În Timpul Sarcinii, Limfomul Non-Hodgkin, Limfomul La Adulţi, Limfomul Non-Hodgkin, Limfomul În Copilărie, Limfomul Non-Hodgkin În Timpul Sarcinii, Macroglobulinemia Primară A Sistemului Nervos Central, Histiocitom Fibros Malign Waldenström De Os/Osteosarcom, Meduloblastom, Melanom În Copilărie, Carcinom Intraocular (Ochi) Cu Celule Merkel, Mezoteliom, Mezoteliom Malign Pentru Adulţi, Cancer De Gât Scuamos Metastatic În Copilărie Cu Sindrom Primar Ocult, Neoplazie Endocrină Multiplă, Mielom Multiplu/Neoplasm Cu Celule Plasmatice În Copilărie, Micoză Fungoide, Sindrome Mielodisplazice, Boli Mielodisplazice/Mieloproliferative, Leucemie Mielogenă, Leucemie Mieloidă Cronică, Leucemie Mieloidă Acută La Adulţi, Mielom Acut în Copilărie, Tulburări Mieloproliferative Multiple, Cancer Cronic Al Cavităţii Nazale Şi Sinusurilor Paranazale, Cancer Nazofaringian, Cancer Nazofaringian, Neuroblastom Infantil, Limfom Non-Hodgkin, Limfom Non-Hodgkin Pentru Adulţi, Limfom Non-Hodgkin În Copilărie În Timpul Sarcinii, Cancer Pulmonar Fără Celule Mici, Cancer Oral, Cancer Al Cavităţii Bucale în Copilărie, Cancer De Buză Şi Orofaringian, Osteosarcom/Histiocitom Fibros Malign Al Osului, Cancer Ovarian, Cancer Epitelial Ovarian în Copilărie, Tumoră Cu Celule Germinale Ovariene, Tumoră Ovariană Cu Potenţial Malign Scăzut, Cancer Pancreatic Mic, Cancer Pancreatic, Cancer Pancreatic în Copilărie, Cancerul Sinusului Paranazal şi Al Cavităţii Nazale Cu Celule Insulare, Cancerul Paratiroidian, Cancerul Penian, Feocromocitomul Pineoblastom şi Tumorile Neuroectodermice Primitive Supratentoriale, Tumora Hipofizară În Copilărie, Neoplasm Cu Celule Plasmatice/Mielom Multiplu, Blastom Pleuropulmonar, Sarcină Şi Cancer De Sân, Sarcină Şi Limfom Hodgkin, Sarcină Şi Limfom Non-Hodgkin, Limfom Primar Al Sistemului Nervos Central, Cancer De Prostată, Cancer Rectal, Cancer la Celule Renale (Rinichi), Cancer la Celule Renale (Rinichi), Cancer Cu Celule Tranziţionale De Pelvis Şi Ureter Renal În Copilărie, Retinoblastom, Rabdomiosarcom, Cancer Al Glandei Salivare În Copilărie, Cancer de Glandă Salivară, Sarcom În Copilărie, Sarcom Al Tumorilor Din Familia Ewing, Sarcom Kaposi, Ţesut Moale, Sarcom Adult, Ţesut Moale, Sarcom În Copilărie, Sindrom Sezary Uterin, Cancer Cutanat, Cancer De Piele (Non-Melanom), Cancer de Stomac În Copilărie

Aşa cum se prevede aici, peptidele heteroclitice pentru utilizare în invenţie provoacă răspunsuri ale celulelor T CD8+ specifice antigenului. Într-o altă variantă de realizare, răspunsurile celulelor T CD4+ specifice antigenului ajută la inducerea şi menţinerea răspunsurilor celulelor T citotoxice CD8+ (CTL).

Este dezvăluit că, într-o altă variantă de realizare, peptidele WT1 pentru utilizare în prezenta invenţie, împreună cu cel puţin un inhibitor PD1, prezintă o capacitate îmbunătăţită de a provoca răspunsuri CTL, datorită capacităţii lor de a lega atât molecule HLA clasa I cât şi HLA clasa II. Acest lucru s-ar putea datora capacităţii inhibitorului PD1 de a creşte supravieţuirea şi proliferarea CTL-urilor specifice WT1. Într-o altă variantă de realizare, vaccinurile din prezenta invenţie cu cel puţin un inhibitor PD1 au avantajul de a activa sau de a provoca atât celulele T CD4+ cât şi CD8+ care recunosc antigenele WT1. Într-o altă variantă de realizare, activarea sau declanşarea ambelor celule T CD4+ şi CD8+ furnizează un răspuns imun anti-WTl sinergic, în raport cu activarea fiecărei populaţii în monoterapie. Într-o altă variantă de realizare, imunogenitatea îmbunătăţită a peptidelor WT1 pentru utilizare în prezenta invenţie este prezentată la indivizi cu mai multe subtipuri HLA clasa II, datorită capacităţii peptidelor de a lega mai multe subtipuri HLA clasa II.

Este de asemenea dezvăluit că, într-o altă variantă de realizare, celulele CD4+ activate îmbunătăţesc imunitatea prin licenţierea celulelor dendritice, susţinând astfel activarea şi supravieţuirea celulelor T citotoxice. Într-o altă variantă de realizare, celulele T CD4+ activate induc moartea celulară tumorală prin contact direct cu celula tumorală sau prin activarea căii de apoptoză. Celulele tumorale mezoteliom, de exemplu, sunt capabile să proceseze şi să prezinte antigene în contextul moleculelor HLA clasa I şi clasa II.

De asemenea, este dezvăluit faptul că peptidele, vaccinurile şi/sau compoziţiile imunogene administrate împreună cu cel puţin un inhibitor PD1 au avantajul de a activa sau de a produce celule T CD4+ specifice WT1 care conţin multiple alele diferite HLA clasa II. Într-o altă variantă de realizare, vaccinurile au avantajul de a activa sau de a produce celule T CD4+ specifice WT1 într-o proporţie substanţială a populaţiei. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 10% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 15% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 20% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 25% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 30% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 35% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 40% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 45% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 50% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 55% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 60% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 70% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 75% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 80% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 85% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 90% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 95% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, peptidele activează celulele T CD4+ specifice WT1 la 95% din populaţie. Într-o altă variantă de realizare, vaccinurile activează sau provoacă celule T CD4+ specifice WT1 într-o proporţie substanţială dintr-o anumită populaţie (de exemplu, Caucazieni Americani).

De asemenea, este dezvăluit faptul că, într-o altă variantă de realizare, compoziţiile pentru utilizare în prezenta invenţie asigură o îmbunătăţire a unui răspuns imun care a fost deja montat de către un subiect. Într-o altă variantă de realizare, compoziţiile pot fi administrate încă o dată sau încă de două ori. Într-o altă variantă de realizare, combinaţia de agenţi de tratament asigură iniţierea unui răspuns imun împotriva unui antigen de interes la un subiect la care un răspuns imun împotriva antigenului de interes nu a fost deja iniţiat. Într-o altă variantă de realizare, CTL care sunt induse proliferează ca răspuns la prezentarea peptidei pe APC sau celula canceroasă. În alte variante de realizare, referirea la modularea răspunsului imun implică, fie ambele braţe umorale, cât şi braţele mediate de celule ale sistemului imunitar, care sunt însoţite de prezenţa celulelor helper T Th2 şi respectiv Th1, sau într-o altă variantă de realizare, fiecare braţ individual.

De asemenea, este dezvăluit că, în alte variante de realizare, afectarea creşterii unei tumori au ca rezultat (1) inhibarea directă a diviziunii celulare tumorale sau (2) liza celulei tumorale mediată de celule imune, sau ambele, ceea ce duce la o supresie a expansiunii nete a celulelor tumorale. Utilizarea peptidelor WT1 împreună cu cel puţin un inhibitor PD1 măreşte inhibarea directă a diviziunii celulelor tumorale, liza celulară mediată de celulele imune sau ambele, mai mult decât fără utilizarea inhibitorului PD1.

Inhibarea creşterii tumorii prin oricare dintre aceste două mecanisme poate fi uşor determinată de către un specialist în domeniu pe baza unui număr de metode bine-cunoscute. Într-o altă variantă de realizare, inhibarea tumorii este determinată prin măsurarea dimensiunii reale a tumorii pe o perioadă de timp. Într-o altă variantă de realizare, inhibarea tumorii poate fi determinată prin estimarea dimensiunii unei tumori (pe o perioadă de timp) utilizând metode bine-cunoscute specialiştilor în domeniu. Mai precis, o varietate de metode de imagistică radiologică (de exemplu, tomografie computerizată cu emisie de fotoni unici şi pozitroni; vezi, în general, „Nuclear Medicine in Clinical Oncology», Winkler, C. (ed.) Springer-Verilog, New York, 1986), poate fi utilizat pentru a estima dimensiunea tumorii. Astfel de metode pot utiliza, de asemenea, o varietate de agenţi imagistici, incluzând, de exemplu, agenţi imagistici convenţionali (de exemplu, citrat de Galiu-67), precum şi reactivi specializaţi pentru imagistica metabolitului, imagistica receptorului sau imagistica imunologică (de exemplu, markeri tumorali specifici pentru anticorp monoclonal radiomarcat). În plus, metode non-radioactive, cum ar fi ultrasunetele (a se vedea „Ultrasonic Differential Diagnosis of Tumors», Kossoff şi Fukuda, (eds.), Igaku-Shoin, New York, 1984), pot fi, de asemenea, utilizate pentru a estima dimensiunea unei tumori.

În plus faţă de metodele in vivo pentru determinarea inhibiţiei tumorale discutate mai sus, o varietate de metode in vitro pot fi utilizate pentru a determina inhibarea tumorii in vivo. Exemplele reprezentative includ activitatea citolitică antitumorală mediată de limfocite determinată, de exemplu, printr-un test de eliberare a 51Cr, proliferarea limfocitelor dependente de tumoră (Ioannides, şi colab., J. Immunol. 146(5):1700-1707, 1991), generarea in vitro de anticorpi specifici tumorii (Herlyn, şi colab., J. Immunol. Meth. 73:157-167, 1984), inhibarea creşterii celulare in vitro (Gazit, şi colab., Cancer Immunol Immunother 35: 135-144, 1992) mediată de celule (de exemplu, CTL, celulă T helper) sau umoral (de exemplu, anticorp) şi, pentru oricare dintre aceste teste, determinarea frecvenţei precursorului celular (Vose, Int. J. Cancer 30: 135-142 (1982) şi altele.

Într-o altă variantă de realizare, suprimarea creşterii tumorale indică o stare de creştere care este redusă în comparaţie cu creşterea fără contact cu sau expunerea la o peptidă administrată împreună cu cel puţin un inhibitor al checkpoint al acestei invenţii. Creşterea celulelor tumorale poate fi evaluată prin orice mijloace cunoscute în domeniu, inclusiv măsurarea dimensiunii tumorii, determinarea dacă celulele tumorale proliferează utilizând un test de încorporare 3H-timidină sau numărarea celulelor tumorale. „Suprimarea» creşterii celulelor tumorale se referă, în alte variante de realizare, la încetinirea, întârzierea sau oprirea creşterii tumorii sau la micşorarea tumorii.

Într-o altă variantă de realizare, expresia WT1 este măsurată înainte de administrarea tratamentului, după administrarea tratamentului sau atât înainte cât şi după administrarea tratamentului. Într-o altă variantă de realizare, se măsoară expresia transcripţiei WT1. Într-o altă variantă de realizare, nivelurile de proteină WT1 în celulele tumorale sau canceroase sunt măsurate. Într-o altă variantă de realizare, proteina WT1 sau peptidele aruncate din celulele canceroase sau celulele tumorale în circulaţie sau în alte fluide corporale cum ar fi urina sunt măsurate.

Într-o altă variantă de realizare, expresia proteinei checkpoint PD1 vizată de unul sau mai mulţi inhibitori PD1 este măsurată (la nivel de transcripţie sau la nivel de proteină) în celulele tumorale sau canceroase sau în sânge integral, ser sau plasmă, înainte de administrarea tratamentului (de referinţă), după administrarea tratamentului sau atât înainte, cât şi după administrarea tratamentului. Într-o variantă de realizare, expresia a două sau mai multe dintre PD1, PD2 şi CTLA4 este măsurată înainte de administrarea tratamentului, după administrarea tratamentului sau ambele înainte şi după administrarea tratamentului. Într-o variantă de realizare, expresia proteinei este măsurată la un situs primar al tumorii. Într-o altă variantă de realizare, cancerul este metastatic şi expresia proteinei este măsurată la un situs metastatic, sau la locul tumorii primare, sau ambele.

Într-o altă variantă de realizare, unul sau mai mulţi dintre următorii markeri sunt măsuraţi înainte de administrarea tratamentului (de referinţă), după administrarea tratamentului sau atât înainte, cât şi după administrarea tratamentului: celule supresoare derivate din mieloid monocitar (m-MDSC), Proteina C reactivă (CRP), limfocite absolute, limfocite absolute şi lactat dehidrogenază (LDH). Într-o altă variantă de realizare, utilizarea unuia sau mai multor markeri pentru prezicerea sau identificarea receptivităţii la modularea checkpoint este cuprinsă aici.

Metodele de determinare a prezenţei şi amplorii unui răspuns imun sunt bine-cunoscute în domeniu. Într-o altă variantă de realizare, testele de proliferare a limfocitelor, în care absorbţia celulelor T a unei substanţe radioactive, de exemplu 3H-timidină este măsurată ca o funcţie a proliferării celulare. În alte variante de realizare, detectarea proliferării celulelor T se realizează prin măsurarea creşterilor producţiei de interleukină-2 (IL-2), a fluxului de Ca2+ sau a absorbţiei coloranţilor, cum ar fi 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil-tetrazoliu. Fiecare posibilitate reprezintă o variantă de realizare separată a prezentei invenţii.

Într-o altă variantă de realizare, stimularea CTL este determinată prin mijloace cunoscute specialiştilor în domeniu, inclusiv, detectarea proliferării celulare, producerea de citokine şi altele. Analiza tipurilor şi cantităţilor de citokine secretate de celulele T la punerea în contact ţintelor pulsate de ligand poate fi o măsură a activităţii funcţionale. Citokinele pot fi măsurate prin ELISA, teste ELISPOT sau sortare celulară activată prin fluorescenţă (FACS) pentru a determina rata şi cantitatea totală de producţie de citokine. (Fujihashi K. şi colab. (1993) J. Immunol. Meth. 160:181; Tanguay S. şi Killion JJ (1994) Lymphokine Cytokine Res. 13:259).

Într-o altă variantă de realizare, activitatea CTL este determinată de test de eliberare liza 51Cr. Liza ţintelor marcate cu 51Cr pulsate de peptidă de către celulele T specifice antigenului poate fi comparată pentru celulele ţintă pulsate cu peptida martor. Într-o altă variantă de realizare, celulele T sunt stimulate cu o peptidă conform acestei invenţii şi se poate determina liza celulelor ţintă care exprimă peptida nativă în contextul MHC. Cinetica lizei, precum şi liza ţintă generală la un punct de timp fixat (de exemplu, 4 ore) sunt utilizate, într-o altă variantă de realizare, pentru a evalua performanţa ligandului. (Ware CF şi colab. (1983) J Immunol 131: 1312).

În alte variante de realizare, o peptidă pentru utilizare în invenţie este conjugată cu una dintre diferitele alte molecule, aşa cum este descris aici mai jos, care poate fi printr-o legătură covalentă sau necovalentă (complexată), a cărei natură variază, într-o altă variantă de realizare, în funcţie de particularitatea scopului. Într-o altă variantă de realizare, peptida este complexată covalent sau necovalent la un purtător macromolecular, (de exemplu un purtător imunogen), incluzând polimeri naturali şi sintetici, proteine, polizaharide, polipeptide (aminoacizi), alcool polivinilic, polivinil pirolidonă şi lipide. Într-o altă variantă de realizare, o peptidă pentru utilizare în această invenţie este legată de un substrat. Într-o altă variantă de realizare, peptida este conjugată cu un acid gras, pentru introducerea într-un lipozom (Brevetul SUA Nr. 5.837.249). Într-o altă variantă de realizare, o peptidă pentru utilizare în invenţie este complexată covalent sau necovalent cu un suport solid, o varietate dintre care sunt cunoscute în domeniu. Într-o altă variantă de realizare, legătura peptidei cu purtătorul, substratul, acidul gras sau suportul solid serveşte la creşterea unui răspuns imun provocat.

În alte variante de realizare, purtătorul este tiroglobulina, o albumină (de exemplu, albumina serică umană), toxoid tetanic, poliaminoacizi cum ar fi poli (lizină: acid glutamic), o proteină gripală, proteina de bază a virusului hepatitei B, hemocianină din Megathura crenulata, o albumină, sau o altă proteină purtătoare sau peptidă purtătoare; vaccin recombinant împotriva virusului hepatitei B sau un APC.

Într-o altă variantă de realizare, termenii „cancer», „neoplasm», „neoplazic» sau „tumoră» sunt folosiţi în mod interschimbabil şi se referă la celule care au suferit o transformare malignă care le face patologice pentru organismul gazdă. Cancerul poate fi de orice stadiu în cadrul sistemului de stadializare numerotat (de exemplu, stadiul 0, stadiul 1, stadiul 2, stadiul 3 sau stadiul 4) şi orice stadiu al sistemului de stadializare TNM. Celulele canceroase primare (adică celulele obţinute din apropierea situsului de transformare malignă) pot fi uşor distinse de celulele necanceroase prin tehnici bine stabilite, în special examen histologic. Definiţia unei celule canceroase, aşa cum este utilizată aici, include nu numai o celulă canceroasă primară, ci şi orice celulă derivată dintr-un părinte al celulelor canceroase. Aceasta include celulele canceroase metastazate şi culturile in vitro şi liniile celulare derivate din celulele canceroase. Într-o altă variantă de realizare, o tumoare este detectabilă pe baza masei tumorale; de exemplu, prin proceduri precum scanarea CAT, imagistica prin rezonanţă magnetică (RMN), raze X, ultrasunete sau palpare şi, într-o altă variantă de realizare, este identificată prin descoperiri biochimice sau imunologice, aceasta din urmă fiind utilizată şi pentru identificarea celulelor canceroase, în alte variante de realizare. O tumoare poate fi o tumoare solidă sau nesolidă.

Metodele de sintetizare a peptidelor sunt bine-cunoscute în domeniu. Într-o altă variantă de realizare, peptidele pentru utilizare în această invenţie sunt sintetizate folosind un procedeu de sinteză adecvat în stare solidă (vezi de exemplu, Steward şi Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Freemantle, San Francisco, California (1968); Merrifield (1967) Recent Progress în Hormone Res 23: 451). Activitatea acestor peptide este testată, în alte variante de realizare, utilizând teste aşa cum este descris aici.

Într-o altă variantă de realizare, peptidele sunt purificate prin metode standard, inclusiv cromatografie (de exemplu, schimb de ioni, afinitate şi cromatografie pe coloană de excluziune sterică), centrifugare, solubilitate diferenţială sau prin orice altă tehnică standard pentru purificarea proteinelor. Într-o altă variantă de realizare, se utilizează cromatografia de imuno-afinitate, prin care un epitop este izolat prin legarea acestuia la o coloană de afinitate cuprinzând anticorpi care au fost ridicaţi împotriva acelei peptide sau a unei peptide înrudite conform invenţiei şi care au fost fixaţi pe un suport staţionar.

Într-o altă variantă de realizare, etichete de afinitate, cum ar fi hexa-His (Invitrogen), domeniul de legare a maltozei (New England Biolabs), secvenţa de acoperire a gripei (Kolodziej şi colab. (1991) Meth. Enzymol. 194: 508-509), glutation-S-transferaza sau altele, sunt ataşate la peptidele din această invenţie pentru a permite purificarea uşoară prin trecerea pe o coloană de afinitate adecvată. Peptidele izolate pot fi, de asemenea, caracterizate fizic, în alte variante de realizare, utilizând tehnici precum proteoliza, rezonanţa magnetică nucleară şi cristalografia cu raze X.

Într-o altă variantă de realizare, peptidele sunt produse prin translaţie in vitro, prin tehnici cunoscute, aşa cum va fi evident pentru un specialist în domeniu. Într-o altă variantă de realizare, peptidele sunt modificate diferenţial în timpul sau după translaţie, de exemplu, prin fosforilare, glicozilare, reticulare, acilare, clivaj proteolitic, legătură cu o moleculă de anticorp, moleculă de membrană sau alt ligand (Ferguson şi colab. (1988) Ann. Rev. Biochem. 57:285-320).

Într-o altă variantă de realizare, peptidele pot cuprinde în plus o etichetă detectabilă, care într-o altă variantă de realizare, este fluorescentă, sau într-o altă variantă de realizare, luminescentă, sau într-o altă variantă de realizare, radioactivă sau într-o altă variantă de realizare, densă cu electroni. În alte variante de realizare, eticheta detectabil cuprinde, de exemplu, proteină fluorescentă verde (GFP), DS-Red (proteină fluorescentă roşie), fosfatază alcalină secretată (SEAP), beta-galactozidază, luciferază, 32P, 125I, 3H şi 14C, fluoresceină şi derivaţii săi, rodamina şi derivaţii săi, dansil şi umbelliferonă, luciferină sau orice alt număr de astfel de etichete cunoscute de un specialist în domeniu. Eticheta particulară utilizată va depinde de tipul de imuno-test utilizat.

Într-o altă variantă de realizare, o peptidă pentru utilizare în această invenţie este legată de un substrat, care, într-o altă variantă de realizare, serveşte ca purtător. Într-o altă variantă de realizare, legătura peptidei cu un substrat serveşte la creşterea unui răspuns imun provocat.

Într-o altă variantă de realizare, peptidele sunt legate de alte molecule, aşa cum este descris aici, folosind agenţi de reticulare convenţionali, cum ar fi carbodimidele. Exemple de carbodiimide sunt 1-ciclohexil-3-(2-morfolinil-(4-etil)carbodiimidă (CMC), 1-etil-3-(3-dimetiaminopropil)carbodiimidă (EDC) şi 1-etil-3-(4-azonia-44-dimetilpentil)carbodiimidă.

În alte variante de realizare, agenţii de reticulare cuprind bromură de cianogen, glutaraldehidă şi anhidridă succinică. În general, oricare dintre un număr de agenţi homo-bifuncţionali, inclusiv o aldehidă homo-bifuncţională, un epoxid homo-bifuncţional, un imido-ester homo-bifuncţional, un ester N-hidroxisuccinimidă homo-bifuncţional, un maleimid homo-bifuncţional, un homo-bifuncţional pot fi utilizate halogenură de alchil, o piridil disulfură homo-bifuncţională, o halogenură de aril homo-bifuncţională, o hidrazidă homo-bifuncţională, un derivat de diazoniu homo-bifuncţional şi un compus fotoreactiv homo-bifuncţional. De asemenea, sunt prevăzute, în alte variante de realizare, compuşi hetero-bifuncţionali, de exemplu, compuşi care au o grupă reactivă la amină şi o grupare reactivă la sulfhidril, compuşi cu o grupare reactivă la amină şi o grupare fotoreactivă şi compuşi cu o grupare reactivă la carbonil şi o grupare reactivă la sulfhidril.

În alte variante de realizare, agenţii de reticulare homo-bifuncţionali includ esteri bifuncţionali de N-hidroxisuccinimidă dimiobis (succinimidilpropionat), suberat de disuccinimidil şi tartarat de disuccinimidil; imidoesterii bifuncţionali dimetil adipimidat, dimetil pimelimidat şi dimetil suberimidat; reticulanţi bifuncţionali reactivi cu sulfhidril 1,4-di-[3'-(2'-piridilditio)propionamido]butan, bismaleimidohexan şi bis-N-maleimido-1,8-octan; halogenurile de aril bifuncţionale 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzen şi 4,4'-difluoro-3,3'-dinitrofenilsulfonă; agenţi fotoreactivi bifuncţionali cum ar fi bis-[b-(4-azidosalicilamido)etil]disulfură; aldehidele bifuncţionale formaldehidă, malondialdehidă, succinaldehidă, glutaraldehidă şi adipaldehidă; un epoxid bifuncţional precum 1,4-butaneodiol diglicidil eter; hidrazidele bifuncţionale dihidrazidă a acidului adipic, carbohidrazidă şi dihidrazidă a acidului succinic; diazoniile bifuncţionale o-tolidină, benzidina diazotizată şi bis-diazotizată; alchilhalidele bifuncţionale N1N'-etilen-bis (iodoacetamidă), N1N'-hexametilen-bis(iodoacetamidă), N1N'-undecametilen-bis(iodoacetamidă), precum şi benzilhalidele şi halomustardele, cum ar fi acid ala'-diiodo-p-xilen sulfonic şi, respectiv, tri(2-cloretil)amină,

În alte variante de realizare, agenţii de reticulare hetero-bifuncţionali utilizaţi pentru a lega peptidele de alte molecule, aşa cum este descris aici, includ SMCC (succinimidil-4-(N-rnaleimidometil)ciclohexan-1-carboxilat), MB S (ester m-maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimidă), SIAB (N-succinimidil (4-iodoacteil)aminobenzoat), SMPB (succinimidil-4-(p-maleimidofenil)butirat), GMBS ester (N -(.gamma.-maleimidobutiliroxi)succmimidic), MPBH (hidrazida acidului 4-(4-N-maleimidopohenil)butiric), M2C2H (4-(N-maleimidometil) ciclohexan-1-carboxil-hidrazidă), SMPT (succinimidiloxicarbonil-a-metil-a-(2-piridilditio)toluen) şi SPDP (N-succinimidil 3-(2-piridilditio)propionat).

Într-o altă variantă de realizare, peptidele invenţiei sunt formulate ca ataşare non-covalentă a monomerilor prin interacţiuni ionice, adsorptive sau biospecifice. Complexe de peptide cu molecule încărcate puternic pozitiv sau negativ pot fi realizate, într-o altă variantă de realizare, prin formarea podului de sare în medii cu rezistenţă ionică redusă, cum ar fi în apa deionizată. Complexe mari pot fi create, într-o altă variantă de realizare, folosind polimeri încărcaţi, cum ar fi poli-(acid L-glutamic) sau poli-(L-lizina), care conţin numeroase sarcini negative şi, respectiv, pozitive. Într-o altă variantă de realizare, peptidele sunt adsorbite pe suprafeţe cum ar fi mărgele de latex de microparticule sau către alţi polimeri hidrofobi, formând complexe peptidă-superantigen asociate non-covalent care imită în mod eficient proteina reticulată sau polimerizată chimic, în alte variante de realizare. Într-o altă variantă de realizare, peptidele sunt legate non-covalent prin utilizarea interacţiunilor biospecifice între alte molecule. De exemplu, utilizarea afinităţii puternice a biotinei pentru proteine precum avidina sau streptavidina sau derivaţii acestora ar putea fi utilizată pentru a forma complexe peptidice. Peptidele, în conformitate cu acest aspect, şi într-o altă variantă de realizare, pot fi modificate pentru a poseda grupări de biotină utilizând reactivi de biotinilare obişnuiţi, cum ar fi esterul N-hidroxisuccinimidilic al D-biotinei (NHS-biotina), care reacţionează cu grupările de amină disponibile.

Într-o altă variantă de realizare, o peptidă pentru utilizare în prezenta invenţie este legată de un purtător. Într-o altă variantă de realizare, purtătorul este KLH. În alte variante de realizare, purtătorul este orice alt purtător cunoscut în domeniu, incluzând, de exemplu, tiroglobulina, albumine precum albumina serică umană, toxoidul tetanic, poliaminoacizii precum poli (lizină: acid glutamic), gripă, nucleul virusului hepatitei B proteine, vaccin recombinant împotriva virusului hepatitei B şi altele asemenea.

Într-o altă variantă de realizare, peptidele sunt conjugate la o lipidă, cum ar fi P3 CSS. Într-o altă variantă de realizare, peptidele sunt conjugate la o mărgea.

Într-o altă variantă de realizare, compuşii imunomodulatori pot fi, de asemenea, administraţi pacientului. În alte variante de realizare, compusul imunomodulator este o componentă de citokină, chimiochină sau complement care îmbunătăţeşte expresia moleculelor accesorii sau de aderenţă ale sistemului imunitar, receptorii lor sau combinaţii ale acestora. În unele variante de realizare, compusul imunomodulator include interleukine, de exemplu interleukine de la 1 până la 15, interferoni alfa, beta sau gamma, factor de necroză tumorală, factor de stimulare a coloniei de granulocite-macrofage (GM-CSF), factor de stimulare a coloniei de macrofage (M-CSF), factor de stimulare a coloniei de granulocite (G-CSF), chemokine cum ar fi proteina de activare a neutrofilelor (NAP), macrofag chimioatractoare şi factorul de activare (MCAF), RANTES, peptidele inflamatorii macrofage MIP-1a şi MIP-1b, componente complementare sau combinaţii ale acestora. În alte variante de realizare, compusul imunomodulator stimulează exprimarea sau expresia îmbunătăţită a OX40, OX40L (gp34), limfotactină, CD40, CD40L, B7.1, B7.2, TRAP, ICAM-1, 2 sau 3, receptori de citokine sau combinaţie a acestuia.

Într-o altă variantă de realizare, compusul imunomodulator induce sau îmbunătăţeşte expresia moleculelor co-stimulatoare care participă la răspunsul imun.

Într-o variantă de realizare, pacienţilor cărora li s-a administrat combinaţia de agenţi conform invenţiei li se administrează de asemenea GM-CSF înainte de sau în ziua primei vaccinări sau combinaţia acestora. Într-o variantă de realizare, unui pacient i se administrează 70 mcg de GM-CSF subcutanat cu două zile înainte şi în ziua primului vaccin.

Într-o altă variantă de realizare, compoziţia cuprinde un solvent, incluzând apă, medii de dispersie, medii de cultură celulară, agenţi izotonici şi altele asemenea. Într-o altă variantă de realizare, solventul este o soluţie apoasă tamponată izotonică cu un pH de aproximativ 7,0. Într-o altă variantă de realizare, compoziţia cuprinde un diluant cum ar fi apă, soluţie salină tamponată cu fosfat sau soluţie salină. Într-o altă variantă de realizare, compoziţia cuprinde un solvent, care este neapos, cum ar fi propil etilen glicol, polietilen glicol şi uleiuri vegetale.

Într-o altă variantă de realizare, compoziţia este formulată pentru administrare prin oricare dintre numeroasele tehnici cunoscute de specialiştii în domeniu. De exemplu, această invenţie prevede administrarea compoziţiei farmaceutice parenteral, intravenos, subcutanat, intradermic, intramucoasă, local, oral sau prin inhalare.

Într-o altă variantă de realizare, vaccinul poate cuprinde în plus o populaţie de celule, care, într-o altă variantă de realizare, cuprinde limfocite, monocite, macrofage, celule dendritice, celule endoteliale, celule stem sau combinaţii ale acestora, care, într-o altă variantă de realizare sunt autologe, simgenice sau alogene, unul faţă de celălalt. Într-o altă variantă de realizare, populaţia de celule preia peptida. Într-o variantă de realizare, celula este o celulă prezentatoare de antigen (APC). Într-o altă variantă de realizare, APC este un APC profesional.

Într-o altă variantă de realizare, populaţiile de celule sunt obţinute din surse in vivo, cum ar fi, de exemplu, sânge periferic, produs din sânge de leucofereză, produs din sânge de afereză, ganglioni limfatici periferici, ţesut limfoid asociat intestinului, splină, timus, sânge din cordonul ombilical, ganglionii limfatici mezenterici, ficatul, situsurile leziunilor imunologice, de exemplu, lichid sinovial, pancreas, lichid cefalorahidian, probe tumorale, ţesut granulomatos sau orice altă sursă în care pot fi obţinute astfel de celule. Într-o altă variantă de realizare, populaţiile de celule sunt obţinute din surse umane, care sunt, în alte variante de realizare, din surse umane fetale, neonatale, copil sau adult. Într-o altă variantă de realizare, populaţiile de celule sunt obţinute din surse animale, cum ar fi, de exemplu, porcine sau simiene, sau orice alt animal de interes. Într-o altă variantă de realizare, populaţiile de celule sunt obţinute de la subiecţi care sunt normali, sau într-o altă variantă de realizare, bolnav, sau într-o altă variantă de realizare, susceptibil de o boală de interes.

Într-o altă variantă de realizare, populaţiile de celule sunt separate prin metode de separare bazate pe afinitate. Tehnicile pentru separarea afinităţii includ, în alte variante de realizare, separarea magnetică, folosind mărgele magnetice acoperite cu anticorpi, cromatografie de afinitate, agenţi citotoxici uniţi la un anticorp monoclonal sau utilizaţi împreună cu un anticorp monoclonal, de exemplu, complement şi citotoxine şi "panoramare" cu un anticorp ataşat la o matrice solidă, cum ar fi o placă, sau orice altă tehnică convenabilă. În alte variante de realizare, tehnicile de separare includ utilizarea sortatoarelor de celule activate cu fluorescenţă, care pot avea grade diferite de sofisticare, cum ar fi canale de culoare multiple, canale de detectare a dispersiei luminii cu unghi redus şi obtuz, canale de impedanţă etc.

Într-o altă variantă de realizare, celulele dendritice provin din populaţia diversă de tipuri de celule morfologic similare găsite într-o varietate de ţesuturi limfoide şi nelimfoide, calificate ca atare (Steinman (1991) Ann. Rev. Immunol. 9:271-296). Într-o altă variantă de realizare, celulele dendritice sunt izolate din măduva osoasă, sau într-o altă variantă de realizare, derivate din celule progenitoare ale măduvei osoase, sau, într-o altă variantă de realizare, din izolate din/derivate din sânge periferic, sau într-o altă variantă de realizare, derivate din sau sunt o linie celulară.

Într-o altă variantă de realizare, populaţiile de celule sunt izolate din fracţia de leucocite a unui mamifer, cum ar fi un murin, simian sau un om (vezi, de exemplu, WO 96/23060). Fracţia de leucocite poate fi, într-o altă variantă de realizare, izolată de sângele periferic al mamiferului.

Metodele de izolare a celulelor dendritice sunt bine-cunoscute în domeniu. Într-o altă variantă de realizare, DC sunt izolate printr-o metodă care include următoarele etape: (a) furnizarea unei fracţii de leucocite obţinute dintr-o sursă de mamifer prin metode cunoscute în domeniu, cum ar fi leucoforeza; (b) separarea fracţiei de leucocite din etapa (a) în patru sau mai multe subfracţiuni prin elutriere centrifugă contracurentă; (c) stimularea conversiei monocitelor într-una sau mai multe fracţii de la etapa (b) la celule dendritice prin punerea în contact a celulelor cu ionofor de calciu, GM-CSF şi IL-13 sau GM-CSF şi IL-4, (d) identificarea fracţiei îmbogăţite cu celule dendritice din etapa (c); şi (e) colectarea fracţiei îmbogăţite din etapa (d), de preferinţă la aproximativ 4°C.

Într-o altă variantă de realizare, fracţia îmbogăţită cu celule dendritice este identificată prin sortarea celulelor activate de fluorescenţă, care identifică, într-o altă variantă, cel puţin unul dintre următorii markeri: HLA-DR, HLA-DQ sau B7.2 şi absenţa simultană a următorilor markeri: CD3, CD14, CD16, 56, 57 şi CD 19, 20.

Într-o altă variantă de realizare, populaţia de celule cuprinde limfocite, care sunt, într-o altă variantă de realizare, celule T, sau într-o altă variantă de realizare, celule B. Celulele T sunt, în alte variante de realizare, caracterizate ca celule NK, celule T helper, limfocite T citotoxice (CTL), TIL, celule T naive sau combinaţii ale acestora. Trebuie înţeles că celulele T care sunt primare, sau linii celulare, clone etc., pot fi utilizate. Într-o altă variantă de realizare, celulele T sunt linii CTL sau CTL, clone CTL sau CTL-uri izolate de infiltrate tumorale, inflamatorii sau de altă natură.

Într-o altă variantă de realizare, populaţiile de celule pot cuprinde celule stem hematopoietice sau celule progenitoare timpurii. Într-o altă variantă de realizare, astfel de populaţii sunt izolate sau derivate, prin leucafereză. Într-o altă variantă de realizare, leucafereza urmează administrarea de citokine, din măduva osoasă, sânge periferic (PB) sau sânge neonatal din cordonul ombilical. Într-o altă variantă de realizare, celulele stem sau progenitoare sunt caracterizate prin expresia lor de suprafaţă a markerului antigen de suprafaţă cunoscut sub numele de CD34+ şi excluderea expresiei markerilor de antigen de linie de suprafaţă, Lin-.

Într-o altă variantă de realizare, subiectului i se administrează combinaţia de agenţi în combinaţie cu celulele măduvei osoase. Într-o altă variantă de realizare, administrarea împreună cu celule ale măduvei osoase urmează iradierea anterioară a subiectului, ca parte a cursului terapiei, pentru a suprima, inhiba sau trata cancerul la subiect.

Într-o altă variantă de realizare, combinaţia de agenţi de tratament pentru utilizare în această invenţie este administrată la un subiect în combinaţie cu alţi compuşi anticancerigeni şi chimioterapice, inclusiv anticorpi monoclonali direcţionaţi împotriva antigenelor alternative de cancer sau, într-o altă variantă de realizare, epitopii care constau dintr-o secvenţă AA care corespunde la sau parţial acelei din care derivă peptidele acestei invenţii.

Aşa cum sunt utilizaţi aici, termenii "pacient", "subiect" şi "individ" sunt utilizaţi interschimbabil şi sunt destinate să includă specii de animale umane şi non-umane. De exemplu, subiectul poate fi un mamifer uman sau non-uman. În unele variante de realizare, subiectul este un model animal non-uman sau un pacient veterinar. Subiectul poate fi de orice vârstă sau sex.

O compoziţie imunogenă a prezentei invenţii cuprinde, într-o altă variantă de realizare, un APC asociat cu amestecul de peptide WT1.

O compoziţie a prezentei invenţii este, într-o altă variantă de realizare, o compoziţie imunogenă. Într-o altă variantă de realizare, compoziţia este o compoziţie farmaceutică.

Diverse variante de realizare a intervalelor de dozare sunt avute în vedere prin această invenţie. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 20 µg per peptidă pe zi. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 10 µg/peptidă/zi. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 30 µg/peptidă/zi. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 40 µg/peptidă/zi. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 60 µg/peptidă/zi. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 80 µg/peptidă/zi. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 100 µg/peptidă/zi. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 150 µg/peptidă/zi. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 200 µg/peptidă/zi. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 300 µg/peptidă/zi. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 400 µg/peptidă/zi. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 600 µg/peptidă/zi. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 800 µg/peptidă/zi. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 1000 µg/peptidă/zi.

Într-o altă variantă de realizare, doza este de 10 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 30 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 40 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 60 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 80 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 100 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 150 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 200 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 300 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 400 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 600 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 800 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 1000 µg/peptidă/doză.

Într-o altă variantă de realizare, doza este de 10-20 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 20-30 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 20-40 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 30-60 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 40-80 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 50-100 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 50-150 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 100-200 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 200-300 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 300-400 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 400-600 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 500-800 µg/peptidă/doză. Într-o altă variantă de realizare, doza este de 800-1000 µg/peptidă/doză.

Într-o altă variantă de realizare, cantitatea totală de peptidă pe doză sau pe zi este una dintre cantităţile de mai sus. Într-o altă variantă de realizare, doza totală de peptidă pe doză este una dintre cantităţile de mai sus.

EXEMPLU

Evaluarea eficacităţii vaccinului cu peptida WT1 administrat împreună cu nivolumab la pacienţii cu cancer ovarian

Pacienţii eligibili diagnosticaţi cu cancer ovarian vor începe programul de vaccinare în termen de 4 luni de la finalizarea chimioterapiei. Pacienţii vor primi iniţial 6 vaccinări cu peptide WT1 timp de 12 săptămâni şi 7 perfuzii cu inhibitorul de checkpoint imunitar nivolumab timp de 14 săptămâni. Evaluările de toxicitate vor fi efectuate cu fiecare doză de vaccin şi la 3 săptămâni după terminarea terapiei în săptămâna 15. Pacienţii vor fi observaţi de către personalul studiului timp de până la 30 de minute după tratament. Nu este planificată o creştere a dozei. Evaluările de rutină ale toxicităţii vor continua pe tot parcursul studiului.

Pacienţilor care nu au progresia bolii la evaluarea săptămânii 15 li se permite să primească 4 vaccinuri suplimentare administrate aproximativ la fiecare 8 săptămâni. Acest curs de vaccinare de întreţinere va începe în săptămâna 19.

Răspunsurile imune vor fi evaluate din probe de sânge heparinizat de 40 ml la 6 momente separate: valoarea de referinţă (la consimţământ şi înainte de prima doză pentru a determina variaţiile iniţiale), înaintea vaccinurilor 5 şi 6, precum şi la 3 săptămâni după ultima perfuzie cu nivolumab. Dacă este fezabil, se va obţine o prelevare suplimentară de sânge la urmărirea de 3 luni.

Folosind ELISA, vor fi măsurate nivelurile de anticorpi generate împotriva celor 4 peptide WT1 din vaccin. Anticorpii sunt în general prezenţi la finalizarea celei de-a patra vaccinări. Testele de răspuns proliferativ al celulelor T vor fi efectuate pe limfocite din sângele periferic, inclusiv: citometrie în flux pentru analiza fenotipică cu FACS, inclusiv analiza subgrupului de leucocite, testul celulelor T reglatoare (inclusiv CD3, CD4, CD8, FOXP3, ICOS şi PD1) şi celule supresoare derivate mieloide (MDSC, celule CD14+HLA-DRlow) în sângele periferic şi, de asemenea, în tumoră (dacă se obţine biopsie opţională). Răspunsul proliferativ CD4 şi CD8 specific celulelor T WT1 va fi măsurat utilizând colorarea polifuncţională cu citokine intracelulare (ICS) şi teste de citotoxicitate bazate pe citometrie în flux utilizând Sistemul Meso Scale Discovery cu funcţionalitatea măsurată prin producţia de IFN-gamma. Procedurile detaliate pentru prelucrarea probelor de sânge, monitorizarea celulelor T, ELISA anticorpilor şi analiza celulelor T polifuncţionale sunt descrise în [29].

Valorile de referinţă şi rezultatele răspunsului celulelor T vor fi corelate cu durata remisiunii clinice.

Dacă un pacient este scos din studiu înainte de săptămâna 15, se va obţine sânge pentru studii imunologice post-studiu. O scanare CT va fi efectuată la momentul iniţial şi în săptămâna 15 (sau mai devreme dacă se consideră că este necesar din punct de vedere medical) şi ulterior la fiecare 3 luni timp de până la 1 an până la progresia bolii. RMN-ul abdomenului şi al pelvisului pot fi utilizate în locul CT-ului abdomenului şi al pelvisului. Radiologul de referinţă va folosi criterii de răspuns imun pentru a determina progresia bolii [57]. CA125 va fi obţinut la momentul iniţial, în săptămânile 6 şi 15 şi apoi la fiecare 3 luni, timp de până la 1 an, până la progresia bolii. CA125 nu va fi utilizat pentru a determina progresia bolii din cauza posibilităţii confuze de inflamaţie la pacienţii vaccinaţi. Pacienţii vor rămâne în studiu până la momentul progresiei, dezvoltării toxicităţii inacceptabile, încheierii secvenţei vaccinului sau retragerii pacientului.

Vaccin WT1: Vaccinul care va fi utilizat în acest studiu conţine patru peptide WT1 separate:

• YMFPNAPYL (SEQ ID NO:124; WT1-A1): Peptidă HLA clasa I cu un aminoacid mutant R126Y pentru a stimula răspunsurile CD8+. • SGQAYMFPNAPYLPSCLES (SEQ ID NO:125; WT1-122A1 long): Peptidă HLA clasa II care conţine o secvenţă heteroclitică WT1-A1 încorporată în peptida mai lungă pentru a stimula atât răspunsurile CD4+ cât şi CD8+ conform datelor din studiile preclinice şi de fază 1. • RSDELVRHHNMHQRNMTKL (SEQ ID NO:1; WT1-427 long) şi PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEQ ID NO:2; WT1-331 long): Peptide HLA clasa II care induc răspunsuri CD4+ care ar putea oferi ajutor pentru răspunsuri de lungă durată a celulelor T CD8+. Produs Medicamentos: Cele patru peptide sunt furnizate într-o soluţie sterilă cu soluţie salină tamponată cu fosfat pentru a produce produsul vaccin ("WT1 Vax"). Fiecare flacon conţine 280 mcg din fiecare peptidă într-un volum total de 0,7 ml (0,4 mg/ml din fiecare peptidă, supraumplere de 40%). Au fost efectuate umplerea flacoanelor în condiţii GMP şi teste de sterilitate. Emulsia de vaccin va fi preparată individual înainte de utilizare. Acest lucru va necesita amestecul soluţiei de peptide cu adjuvantul imunologic Montanide ISA 51 VG. Doza intenţionată: Doza de 200 mcg pentru fiecare peptidă este aleasă deoarece se află în intervalul de doze sigure şi active utilizate de alţii. Vaccinurile cu peptide au generat răspunsuri imune şi clinice într-o gamă largă de doze (100-2000 mcg injectate) fără dovezi clare ale relaţiilor doză-răspuns. Dozele mai mari au posibilitatea teoretică de a stimula TCR cu afinitate mai mică pe celulele T şi de a produce un răspuns redus [30, 33, 34]. Dimensiune flacon: Fiecare flacon cu doză unică conţine 0,7 ml Cale de Administrare: Subcutanat Nivolumab: Doza intenţionată: 3mg/kg; Dimensiune flacon: 10 ml; Calea de administrare: Intravenos. Nivolumab va fi dozat la 3 mg/kg şi administrat intravenos sub formă de perfuzie IV de 60 de minute o dată la 2 săptămâni. La sfârşitul perfuziei, clătiţi linia cu o cantitate suficientă de ser fiziologic normal. Dacă greutatea subiectului diferă > 10% faţă de greutatea anterioară utilizată pentru a calcula doza necesară, trebuie calculată o doză necesară, o doză corectată. Nu vor fi permise creşteri sau reduceri ale dozei de nivolumab. Nu există premedicaţii recomandate pentru primul tratament cu nivolumab. Subiecţii pot fi administraţi la cel puţin 12 zile între dozele de nivolumab şi la cel mult 3 zile după data programată de administrare. Doza administrată după intervalul de 3 zile este considerată o întârziere a dozei. Tratamentul poate fi amânat cu maximum 6 săptămâni de la doza anterioară. Evaluările tumorii prin CT sau RMN trebuie să continue conform protocolului, chiar dacă dozarea este întârziată. PLAN DE TRATAMENT/INTERVENŢIE • Pacienţii vor fi trataţi ca ambulatori. • Vaccinurile WT1 vor fi administrate în săptămânile 0, 2, 4, 6, 8 şi 10. • Toate injecţiile vor fi administrate subcutanat cu situsuri care se rotesc între extremităţi. • Toţi pacienţii vor primi Sargramostim (GM-CSF) 70 mcg injectat subcutanat în zilele 0 şi -2. Pacienţii se pot administra singuri GM-CSF dacă au fost instruiţi în mod corespunzător cu privire la administrarea injecţiei SQ. Pacienţii vor fi informaţi cu privire la reacţiile aşteptate, cum ar fi iritaţia la situsul injectării. Pacienţii vor ţine un jurnal în care notează ora şi locul injectării. • Pacienţii vor primi, de asemenea, 1,0 ml de emulsie de peptide WT1 cu Montanide. Va fi administrat de o asistentă (poate să nu fie autoadministrat) subcutanat, în acelaşi situs anatomic cu GM-CSF. • Pacienţii vor fi observaţi aproximativ 30 de minute după vaccinare. • Nivolumab va fi administrat intravenos sub formă de perfuzie de 60 de minute în săptămânile 0, 2, 4, 6, 8, 10 şi 12. Subiecţii pot fi administraţi la cel puţin 12 zile între dozele de nivolumab şi la cel mult 3 zile după data programată de administrare. Doza administrată după intervalul de 3 zile este considerată o întârziere a dozei. Tratamentul poate fi amânat cu maximum 6 săptămâni de la doza anterioară. Tratamentul combinat al vaccinului WT1 şi nivolumab este de aşteptat să crească populaţia de CTL specifică WT1 la pacient şi să permită o activitate crescută împotriva tumorii care exprimă WT1, în comparaţie cu vaccinarea WT1 în monoterapie sau tratamentul cu nivolumab în monoterapie.

REFERINŢE

1. Siegel, R., D. Naishadham, şi A. Jemal, Cancer statistics, 2012. CA Cancer J Clin, 2012. 62(1): p. 10-29. 2. Hoskins, W.J., C.A. Perez, şi R.C. Young, Principles and practice of gynecologic oncology. 3rd ed. 2000, Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins. xxi, 1268 p. 3. Barnhill, D.R., şi colab., The second-look surgical reassessment for epithelial ovarian carcinoma. Gynecol Oncol, 1984. 19(2): p. 148-54. 4. Rubin, S.C., şi colab., Recurrence after negative second-look laparotomy for ovarian cancer: analysis of risk factors. Am J Obstet Gynecol, 1988. 159(5): p. 1094-8. 5. Markman, M., şi colab., Second-line platinum therapy in patients with ovarian cancer previously treated with cisplatin. J Clin Oncol, 1991. 9(3): p. 389-93. 6. Zhang, H., şi colab., Antibodies against GD2 ganglioside can eradicate syngeneic cancer micrometastases. Cancer Res, 1998. 58(13): p. 2844-9. 7. Zhang, L., şi colab., Intratumoral T cells, recurrence, and survival in epithelial ovarian cancer. N Engl J Med, 2003. 348(3): p. 203-13. 8. Curiel, T.J., şi colab., Specific recruitment of regulatory T cells in ovarian carcinoma fosters immune privilege and predicts reduced survival. Nat Med, 2004. 10(9): p. 942-9. 9. Iasonos, A., şi colab., Identifying clinical improvement in consolidation single-arm phase 2 trials in patients with ovarian cancer in second or greater clinical remission. Int J Gynecol Cancer, 2012. 22(1): p. 63-9. 10. Berek, J.S., şi colab., Randomized, placebo-controlled study of oregovomab for consolidation of clinical remission in patients with advanced ovarian cancer. J Clin Oncol, 2004. 22(17): p. 3507-16. 11. Reinartz, S., şi colab., Vaccination of patients with advanced ovarian carcinoma with the anti-idiotype ACA125: immunological response and survival (phase Ib/II). Clin Cancer Res, 2004. 10(5): p. 1580-7. 12. Bookman, M.A., şi colab., Evaluation of monoclonal humanized anti-HER2 antibody, trastuzumab, in patients with recurrent or refractory ovarian or primary peritoneal carcinoma with overexpression of HER2: a phase II trial of the Gynecologic Oncology Group. J Clin Oncol, 2003. 21(2): p. 283-90. 13. Allavena, P., şi colab., Intraperitoneal recombinant gamma-interferon in patients with recurrent ascitic ovarian carcinoma: modulation of cytotoxicity and cytokine production in tumor-associated effectors and of major histocompatibility antigen expression on tumor cells. Cancer Res, 1990. 50(22): p. 7318-23. 14. Pujade-Lauraine, E., şi colab., Intraperitoneal recombinant interferon gamma in ovarian cancer patients with residual disease at second-look laparotomy. J Clin Oncol, 1996. 14(2): p. 343-50. 15. Recchia, F., şi colab., Interleukin-2 and 13-cis retinoic acid as maintenance therapy in advanced ovarian cancer. Int J Oncol, 2005. 27(4): p. 1039-46. 16. Sabbatini, P.J., şi colab., Immunization of ovarian cancer patients with a synthetic Lewis(y)-protein conjugate vaccine: a phase 1 trial. Int J Cancer, 2000. 87(1): p. 79-85. 17. Nicholson, S., şi colab., A phase I trial of idiotypic vaccination with HMFG1 in ovarian cancer. Cancer Immunol Immunother, 2004. 53(9): p. 809-16. 18. Diefenbach, C.S., şi colab., Safety and immunogenicity study of NY-ESO-1b peptide and montanide ISA-51 vaccination of patients with epithelial ovarian cancer in high-risk first remission. Clin Cancer Res, 2008. 14(9): p. 2740-8. 19. Keilholz, U., şi colab., Wilms' tumour gene 1 (WT1) in human neoplasia. Leukemia, 2005. 19(8): p. 1318-23. 20. Oji, Y., şi colab., Expression of the Wilms' tumor gene WT1 in solid tumors and its involvement in tumor cell growth. Jpn J Cancer Res, 1999. 90(2): p. 194-204. 21. Scharnhorst, V., şi colab., Internal translation initiation generates novel WT1 protein isoforms with distinct biological properties. J Biol Chem, 1999. 274(33): p. 23456-62. 22. Haber, D.A., şi colab., Alternative splicing and genomic structure of the Wilms tumor gene WT1. Proc Natl Acad Sci U S A, 1991. 88(21): p. 9618-22. 23. Mundlos, S., şi colab., Nuclear localization of the protein encoded by the Wilms' tumor gene WT1 in embryonic and adult tissues. Development, 1993. 119(4): p. 1329-41. 24. Buckler, A.J., şi colab., Isolation, characterization, and expression of the murine Wilms' tumor gene (WT1) during kidney development. Mol Cell Biol, 1991. 11(3): p. 1707-12. 25. Fraizer, G.C., şi colab., Expression of the tumor suppressor gene WT1 in both human and mouse bone marrow. Blood, 1995. 86(12): p. 4704-6. 26. Al-Hussaini, M., şi colab., WT1 assists in distinguishing ovarian from uterine serous carcinoma and in distinguishing between serous and endometrioid ovarian carcinoma. Histopathology, 2004. 44(2): p. 109-15. 27. Pinilla-Ibarz, J., şi colab., Improved human T-cell responses against synthetic HLA-0201 analog peptides derived from the WT1 oncoprotein. Leukemia, 2006. 20(11): p. 2025-33. 28. May, R.J., şi colab., Peptide epitopes from the Wilms' tumor 1 oncoprotein stimulate CD4+ and CD8+ T cells that recognize and kill human malignant mesothelioma tumor cells. Clin Cancer Res, 2007. 13(15 Pt 1): p. 4547-55. 29. Krug, L.M., şi colab., WT1 peptide vaccinations induce CD4 and CD8 T cell immune responses in patients with mesothelioma and non-small cell lung cancer. Cancer Immunol Immunother, 2010. 59(10): p. 1467-79. 30. Oka, Y., şi colab., Induction of WT1 (Wilms' tumor gene)-specific cytotoxic T lymphocytes by WT1 peptide vaccine and the resultant cancer regression. Proc Natl Acad Sci U S A, 2004. 101(38): p. 13885-90. 31. Letsch, A., şi colab., Effect of vaccination of leukemia patients with a MHC class I peptide of Wilms tumor gene 1 (WT1) peptide with unspecific T helper stimulation on WT1-specific IgM responses and on IgG responses. J Clin Oncol, 2008. 26: p. Abstr 3054. 32. Ohno, S., şi colab., Wilms' tumor 1 (WT1) peptide immunotherapy for gynecological malignancy. Anticancer Res, 2009. 29(11): p. 4779-84. 33. Schaed, S.G., şi colab., T-cell responses against tyrosinase 368-376(370D) peptide in HLA∗A0201+ melanoma patients: randomized trial comparing incomplete Freund's adjuvant, granulocyte macrophage colony-stimulating factor, and QS-21 as immunological adjuvants. Clin Cancer Res, 2002. 8(5): p. 967-72. 34. Slingluff, C.L., Jr., şi colab., Clinical and immunologic results of a randomized phase II trial of vaccination using four melanoma peptides either administered in granulocyte-macrophage colony-stimulating factor in adjuvant or pulsed on dendritic cells. J Clin Oncol, 2003. 21(21): p. 4016-26. 35. Faries, M.B., şi colab., Effect of granulocyte/macrophage colony-stimulating factor on vaccination with an allogeneic whole-cell melanoma vaccine. Clin Cancer Res, 2009. 15(22): p. 7029-35. 36. Keilholz, U., şi colab., A clinical and immunologic phase 2 trial of Wilms tumor gene product 1 (WT1) peptide vaccination in patients with LMA and MDS. Blood, 2009. 113(26): p. 6541-8. 37. Weber, J., şi colab., Granulocyte-macrophage-colony-stimulating factor added to a multipeptide vaccine for resected Stage II melanoma. Cancer, 2003. 97(1): p. 186-200. 38. Keir, M.E., şi colab., PD-1 and its ligands in tolerance and immunity. Annu Rev Immunol, 2008. 26: p. 677-704. 39. Freeman, G.J., şi colab., Engagement of the PD-1 immunoinhibitory receptor by a novel B7 family member leads to negative regulation of lymphocyte activation. J Exp Med, 2000. 192(7): p. 1027-34. 40. Latchman, Y., şi colab., PD-L2 is a second ligand for PD-1 and inhibits T cell activation. Nat Immunol, 2001. 2(3): p. 261-8. 41. Hamanishi, J., şi colab., Programmed cell death 1 ligand 1 and tumor-infiltrating CD8+ T lymphocytes are prognostic factors of human ovarian cancer. Proc Natl Acad Sci U S A, 2007. 104(9): p. 3360-5. 42. Mu, C.Y., şi colab., High expression of PD-L1 in lung cancer may contribute to poor prognosis and tumor cells immune escape through suppressing tumor infiltrating dendritic cells maturation. Med Oncol, 2011. 28(3): p. 682-8. 43. Pardoll, D.M., The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy. Nat Rev Cancer, 2012. 12(4): p. 252-64. 44. Nivolumab (BMS-936558) Investigator Brochure, Version 12. 2013. 45. Hwang, W.T., şi colab., Prognostic significance of tumor-infiltrating T cells in ovarian cancer: a meta-analysis. Gynecol Oncol, 2012. 124(2): p. 192-8. 46. Matsuzaki, J., şi colab., Tumor-infiltrating NY-ESO-1-specific CD8+ T cells are negatively regulated by LAG-3 and PD-1 in human ovarian cancer. Proc Natl Acad Sci USA, 2010. 107(17): p. 7875-80. 47. Brahmer, J.R., şi colab., Safety and activity of anti-PD-L1 antibody in patients with advanced cancer. N Engl J Med, 2012. 366(26): p. 2455-65. 48. Page, D.B., şi colab., Immune modulation in cancer with antibodies. Annu Rev Med, 2014. 65: p. 185-202. 49. Harrison, M.L., şi colab., Duration of second or greater complete clinical remission in ovarian cancer: exploring potential endpoints for clinical trials. Gynecol Oncol, 2007. 106(3): p. 469-75. 50. Juretzka, M., şi colab., A phase 2 trial of oral imatinib in patients with epithelial ovarian, fallopian tube, or peritoneal carcinoma in second or greater remission. Eur J Gynaecol Oncol, 2008. 29(6): p. 568-72. 51. Levine, D., şi colab., A phase II evaluation of goserelin and bicalutamide in patients with ovarian cancer in second or higher complete clinical disease remission. Cancer, 2007. 110(11): p. 2448-56. 52. Walter, S., şi colab., Multipeptide immune response to cancer vaccine IMA901 after single-dose cyclophosphamide associates with longer patient survival. Nat Med, 2012. 53. Wolchok, J.D., şi colab., Development of ipilimumab: a novel immunotherapeutic approach for the treatment of advanced melanoma. Ann N Y Acad Sci, 2013. 1291(1): p. 1-13. 54. Hodi, F.S., şi colab., Immunologic and clinical effects of antibody blockade of cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4 in previously vaccinated cancer patients. Proc Natl Acad Sci U S A, 2008. 105(8): p. 3005-10. 55. Quezada, S.A., şi colab., CTLA4 blockade and GM-CSF combination immunotherapy alters the intratumor balance of effector and regulatory T cells. J Clin Invest, 2006. 116(7): p. 1935-45. 56. Duraiswamy, J., şi colab., Dual blockade of PD-1 and CTLA-4 combined with tumor vaccine effectively restores T-cell rejection function in tumors. Cancer Res, 2013. 73(12): p. 3591-603. 57. Wolchok, J.D., şi colab., Guidelines for the evaluation of immune therapy activity in solid tumors: immune-related response criteria. Clin Cancer Res, 2009. 15(23): p. 7412-20. 58. Dupont, J., şi colab., Wilms Tumor Gene (WT1) and p53 expression in endometrial carcinomas: a study of 130 cases using a tissue microarray. Gynecol Oncol, 2004. 94(2): p. 449-55. 59. Eisenhauer, E.A., şi colab., New response evaluation criteria in solid tumours: revised RECIST guideline (version 1.1). Eur J Cancer, 2009. 45(2): p. 228-47. 60. Maslak, P.G., şi colab., Vaccination with synthetic analog peptides derived from WT1 oncoprotein induces T-cell responses in patients with complete remission from acute myeloid leukemia. Blood, 2010. 116(2): p. 171-179.

Claims

1. Combinaţia de (a) cele patru peptide WT1 YMFPNAPYL (SEQ ID NO:124), RSDELVRHHNMHQRNMTKL (SEQ ID NO:1), PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEQ ID NO: 2) and SGQAYMFPNAPYLPSCLES (SEQ ID NO: 125) şi (b) cel puţin un inhibitor de anticorpi PD1, pentru utilizare în tratarea, reducerea incidenţei sau inducerea unui răspuns imun împotriva unui cancer care exprimă WT1.

2. Combinaţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 1 în care peptidele WT1 sunt administrate cu un purtător, excipient sau diluant, sau un adjuvant cum ar fi QS21, Montanide, adjuvantul Freund complet sau incomplet, fosfat de aluminiu, hidroxid de aluminiu, BCG, o citokină sau alaun.

3. Combinaţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 1 în care inhibitorul PD1 este nivolumab, pembrolizumab, pidilizumab sau MEDI0680 (AMP-514).

4. Combinaţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 1 în care una sau mai multe dintre peptidele WT1 sunt administrate separat.

5. Combinaţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 1 în care două sau mai multe dintre peptidele WT1 sunt administrate împreună în cadrul aceleiaşi formulări.

6. Combinaţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 1 în care peptidele WT1 şi inhibitorul PD1 sunt prezente în aceeaşi compoziţie.

7. Combinaţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 1 în care peptidele WT1 şi inhibitorul PD1 sunt administrate concomitent, sau într-un program suprapus, sau în care ultima administrare a peptidelor WT1 precede prima administrare a inhibitorului PD1.

8. Combinaţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 1 în care cancerul este cancer ovarian, mezoteliom, leucemie, tumoră Wilms, leucemie mielogenă acută (LMA), leucemie mieloidă cronică (LMC), sindrom mielodisplazic (SMD), melanom, cancer de stomac, cancer de prostată, cancer biliar, cancer al sistemului urinar, glioblastom, sarcom de ţesut moale, osteosarcom sau cancer pulmonar fără celule mici (NSCLC).

9. Combinaţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 1 în care una sau mai multe dintre peptidele NLMNLGATL (SEQ ID NO:21), WNLMNLGATLKGVAA (SEQ ID NO:26), LVRHHNMHQRNMTKL (SEQ ID NO:3), NKRYFKLSHLQMHSR (SEQ ID NO:4), SGQARMFPNAPYLPSCLES (SEQ ID NO:5), QARMFPNAPYLPSCL (SEQ ID NO:6), RMFPNAPYL (SEQ ID NO:7), SLGEQQYSV (SEQ ID NO:8), ALLPAVPSL (SEQ ID NO:9), NLGATLKGV (SEQ ID NO:10), DLNALLPAV (SEQ ID NO:11), GVFRGIQDV (SEQ ID NO:12), KRYFKLSHL (SEQ ID NO:13), ALLLRTPYS (SEQ ID NO:14), CMTWMQMNL (SEQ ID NO:15), NMHQRNMTK (SEQ ID NO:16), QMNLGATLK (SEQ ID NO:17), FMCAYPGCNK (SEQ ID NO:18), KLSHLQMHSR (SEQ ID NO:19), QAYMFPNAPYLPSCL (SEQ ID NO:126), YLGEQQYSV (SEQ ID NO:127), YLLPAVPSL (SEQ ID NO:128), YLGATLKGV (SEQ ID NO:129), YLNALLPAV (SEQ ID NO:130), GLRRGIQDV (SEQ ID NO:131), KLYFKLSHL (SEQ ID NO:132), ALLLRTPYV (SEQ ID NO:133), YMTWNQMNL (SEQ ID NO:134), NMYQRNMTK (SEQ ID NO:135), NMHQRVMTK (SEQ ID NO:136), NMYQRVMTK (SEQ ID NO: 137), QMYLGATLK (SEQ ID NO:138), QMNLGVTLK (SEQ ID NO:139), QMYLGVTLK (SEQ ID NO: 140), FMYAYPGCNK (SEQ ID NO:141), FMCAYPFCNK (SEQ ID NO:142), FMYAYPFCNK (SEQ ID NO:143), KLYHLQMHSR (SEQ ID NO:144), KLSHLQMHSK (SEQ ID NO:145), KLYHLQMHSK (SEQ ID NO:146), NQMNLGATL (SEQ ID NO:20), NYMNLGATL (SEQ ID NO:22), CMTWNQMNLGATLKG (SEQ ID NO:23), CMTWNLMNLGATLKG (SEQ ID NO:24), WNQMNLGATLKGVAA (SEQ ID NO:25), MTWNQMNLGATLKGV (SEQ ID NO:27), TWNQMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:28), MTWNLMNLGATLKGV (SEQ ID NO:30), TWNLMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:31), MTWNYMNLGATLKGV (SEQ IDNO:33), TWNYMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:34), CMTWNQMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:35), WNQMNLGAT (SEQ ID NO:36), TWNQMNLGA (SEQ ID NO:37), MTWNQMNLG (SEQ ID NO:38), CMTWNLMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:39), WNLMNLGAT (SEQ ID NO:40), MNLGATLKG (SEQ ID NO:41), CMTWNYMNLGATLKGVA (SEQ ID NO:43), GALRNPTAC (SEQ ID NO:46), GYLRNPTAC (SEQ ID NO:47), GALRNPTAL (SEQ ID NO:48), YALRNPTAC (SEQ ID NO:49), GLLRNPTAC (SEQ ID NO:50), RQRPHPGAL (SEQ ID NO:51), RYRPHPGAL (SEQ ID NO:52), YQRPHPGAL (SEQ ID NO:53), RLRPHPGAL (SEQ ID NO:54), RIRPHPGAL (SEQ ID NO:55), QFPNHSFKHEDPMGQ (SEQ ID NO:61), HSFKHEDPM (SEQ ID NO:63), HSFKHEDPY (SEQ ID NO:64), HSFKHEDPK (SEQ ID NO:65), KRPFMCAYPGCYKRY (SEQ ID NO:66), SEKRPFMCAYPGCNK (SEQ ID NO:67), KRPFMCAYPGCNK (SEQ ID NO:68), FMCAYPGCN (SEQ ID NO:69), FMCAYPGCY (SEQ ID NO:70), şi FMCAYPGCK (SEQ ID NO:71) sunt de asemenea administrate.

10. Combinaţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 1 în care 200 mcg din fiecare peptidă sunt emulsionate cu Montanide ISA 51 VG şi administrate subcutanat în săptămânile 0, 2, 4, 6, 8 şi 10.

11. Combinaţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 10 în care 3 mg/kg de nivolumab este administrat intravenos în săptămânile 0, 2, 4, 6, 8, 10 şi 12.

12. Combinaţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 1 în care tratarea, reducerea incidenţei sau inducerea unui răspuns imun împotriva unui cancer care exprimă WT1 este mai mare decât se realizează prin administrarea peptidelor WT1 singure sau a cel puţin un inhibitor PD1 singur.

13. O compoziţie care cuprinde cele patru peptide WT1 YMFPNAPYL (SEQ ID NO:124), RSDELVRHHNMHQRNMTKL (SEQ ID NO:1), PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEQ ID NO: 2) şi SGQAYMFPNAPYLPSCLES (SEQ ID NO:125) şi cel puţin un inhibitor PD1.

14. Compoziţia în conformitate cu revendicarea 13 în care inhibitorul PD1 este nivolumab, pembrolizumab, pidilizumab sau MEDI0680 (AMP-514).