MD145Y

MD145Y - Procedeu de obtinere a mediului nutritiv pentru cultivarea lactobacteriilor

Info

Publication number: MD145Y
Application number: MDS20090138A
Authority: MD
Inventors: Ana Leorda
Original assignee: Institutul De Fiziologie Si Sanocreatologie Al Academiei De Stiinte A Moldovei
Priority date: 2009-07-22
Filing date: 2009-07-22
Publication date: 2010-02-26
Also published as: MD145Z

Abstract

Inventia se refera la microbiologie si biotehnologie, in particular la un procedeu de obtinere a mediului nutritiv pentru cultivarea lactobacteriilor. Procedeul include pregatirea mediului ce contine, la 1 L: peptona - 10 g, citrat de amoniu - 2 g, acetat de sodiu - 5 g, glucoza - 20,0 g, sulfat de mangan cristalohidrat - 0,05 g, sulfat de magneziu cristalohidrat - 0,2 g, cisteina - 0,2 g, agar-agar - 20 g, Tvin-80 - 1 mL, autolizat de drojdii - 50 mL, extract de ficat de vita - 100 mL, lapte hidrolizat - 500 mL, apa distilata - restul, cu pH 6,2…6,6 si sterilizarea lui. In mediul obtinut se adauga infuzie de rizomi de obligeana, obtinuta prin infuzarea a 4,8…7,0 g materie prima tocata in 200 mL de apa clocotita timp de 30 min cu filtrarea si sterilizarea ulterioara a infuziei obtinute, care se adauga in cantitate de 20 mL la un litru de mediu nutritiv.

Description

Invenţia se referă la microbiologie şi biotehnologie, în particular la un procedeu de obţinere a mediului nutritiv pentru cultivarea lactobacteriilor.

Este cunoscut procedeul de obţinere a mediului de cultură pentru cultivarea lactobacteriilor care prevede adăugarea hidrolizatului de lactoproteină în calitate de supliment la un mediu de cultură iniţial, care conţine ser lactic cu un procent de substanţe uscate de 6…15%, amestecarea componentelor mediului, dezacidularea cu soluţie de amoniac, sterilizarea şi răcirea mediului [1] .

Dezavantajul acestui procedeu constă în aceea că în calitate de supliment se adaugă hidrolizat de lactoproteină, component relativ costisitor şi nu întotdeauna accesibil.

Cea mai apropiată soluţie este procedeul de pregătire a mediului de cultură care prevede adăugarea la 300 mL de apă distilată a 10,0 g peptonă, 2,0 g citrat de amoniu, 5,0 g acetat de sodiu, 20,0 g glucoză, 0,05 g sulfat de mangan cristalohidrat, 0,2 g sulfat de magneziu cristalohidrat, 0,2 g cisteină, 20,0 g agar-agar, 1 mL Tvin-80, 50 mL autolizat de drojdii şi 100 mL extract de ficat de vită. Volumul obţinut se aduce până la 500 mL cu apă distilată şi se adaugă lapte hidrolizat până la un litru. Se stabileşte pH-ul mediului în limitele 6,2…6,6 şi se sterilizează la temperatura de 112…115°C timp de 15…20 min [2].

Dezavantajul procedeului cunoscut constă în aceea că nu asigură o multiplicare efectivă a lactobacteriilor în procesul de cultivare.

Problema pe care o rezolvă invenţia constă în elaborarea unui procedeu de obţinere a mediului nutritiv pentru cultivarea lactobacteriilor accesibile, care asigură obţinerea unei biomase sporite a lactobacteriilor în procesul de cultivare.

Problema se soluţionează prin aceea că procedeul include pregătirea mediului ce conţine, la 1 L: peptonă - 10 g, citrat de amoniu - 2 g, acetat de sodiu - 5 g, glucoză - 20,0 g, sulfat de mangan cristalohidrat - 0,05 g, sulfat de magneziu cristalohidrat - 0,2 g, cisteină - 0,2 g, agar-agar - 20 g, Tvin-80 - 1 mL, autolizat de drojdii - 50 mL, extract de ficat de vită - 100 mL, lapte hidrolizat - 500 mL, apă distilată - restul, cu pH 6,2…6,6 şi sterilizarea lui. În mediul obţinut se adaugă infuzie de rizomi de obligeană, obţinută prin infuzarea a 4,8…7,0 g materie primă tocată în 200 mL de apă clocotită timp de 30 min cu filtrarea şi sterilizarea ulterioară a infuziei obţinute, care se adaugă în cantitate de 20 mL la un litru de mediu nutritiv.

Rezultatul invenţiei constă în aceea că adăugarea extractului din rizomi de obligeană are o acţiune benefică asupra lactobacteriilor, efectul stimulator asupra multiplicării acestora fiind confirmat prin datele experimentale obţinute.

Procedeul se realizează în modul următor.

Se pregăteşte mediul electiv pentru cultivarea lactobacteriilor, adăugând la 300 mL de apă distilată 10,0 g peptonă, 2,0 g citrat de amoniu, 5,0 g acetat de sodiu, 20,0 g glucoză, 0,05 g sulfat de mangan cristalohidrat, 0,2 g sulfat de magneziu cristalohidrat, 0,2 g cisteină, 20,0 g agar-agar, 1 mL Tvin-80, 50 mL autolizat de drojdii şi 100 mL extract de ficat de vită. Volumul obţinut se aduce până la 500 mL cu apă distilată şi se adaugă lapte hidrolizat până la un litru. Se stabileşte pH-ul mediului în limitele 6,2…6,6 şi se sterilizează mediul la temperatura de 112…115°C timp de 15…20 min. Se cântăresc rizomii de obligeană, în prima variantă 4,8 g, în a doua - 5,8 g, iar în a treia - 7,0 g, se toacă şi se umectează timp de 5 min cu apă potabilă. Se toarnă peste tocătura umectată 200 mL apă potabilă încălzită până la fierbere şi se lasă amestecul pentru o jumătate de oră. Se filtrează extractul obţinut prin filtru de vată şi tifon şi se sterilizează în autoclavă la 0,5 atm timp de 30 min. Se adaugă în condiţii aseptice câte 20 mL extract de obligeană la fiecare litru de mediu. Se amestecă minuţios componentele şi se inoculează câte 0,2 mL suspensie microbiană, diluată succesiv de la 10…1 până la 10…9, se însămânţează pe mediul de cultură agarizat şi se incubă plăcile Petri timp de 24 ore la temperatura optimală pentru fiecare specie de microorganisme. După inoculare se determină cantitatea celulelor vii de lactobacterii în loturile experimental şi martor.

Varianta 1 prevedea pregătirea extractului în conformitate cu procedeul propus din 4,8 g rizomi de obligeană, varianta II - din 5,8 g, iar varianta III - din 7,0 g.

Lotul martor l-au constituit culturile de microorganisme însămânţate pe mediul electiv pentru cultivarea lactobacteriilor [2]. Pe variantele experimentale de mediu şi pe cele din lotul martor au fost însămânţate culturi de Streptococcus thermophilus, Streptococcus lactis, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus lactis, Lactobacillus casei.

Rezultatele testării sunt incluse în tabel. Cantitatea de celule microbiene vii reprezintă logaritmul zecimal al coloniilor de microorganisme crescute pe medii de cultură agarizate.

Variantele Cantitatea de celule microbiene vii la 1 mL suspensie (lg) Streptococcus thermophilus Streptococcus lactis Lactobacillus bulgaricus Lactobacillus lactis Lactobacillus casei Martor 5,38 8,94 4,75 8,10 8,56 I 7,36 9,07 7,20 9,35 9,00 II 9,5 9,96 9,81 10,18 9,85 III 8,25 9,25 7,82 9,43 9,14

Analiza datelor obţinute denotă o multiplicare evident sporită a tuturor speciilor de lactobacterii testate pe mediul de cultură preparat conform procedeului propus comparativ cu lotul martor, mai evidentă fiind în cazul variantei a doua. Această compoziţie constituie varianta optimală a mediului preparat conform procedeului propus.

Procedeul de obţinere a mediului nutritiv propus este accesibil, uşor realizabil, permite de a cultiva eficient microorganismele din genul lactobacteriilor. Adăugarea la mediul nutritiv a extractului din rizomi de obligeană stimulează procesul de multiplicare a lactobacteriilor, ceea ce permite de a acumula biomasa necesară pentru pregătirea preparatelor microbiene.

1. RU 2324732 C2 2008.05.20

2. Timoşco M. Stresul şi flora microbiană intestinală. Chişinău, Tipografia AŞM, 2005, p. 170

Claims

Procedeu de obţinere a mediului nutritiv pentru cultivarea lactobacteriilor care include pregătirea mediului ce conţine, la 1 L: peptonă - 10 g, citrat de amoniu - 2 g, acetat de sodiu - 5 g, glucoză - 20,0 g, sulfat de mangan cristalohidrat - 0,05 g, sulfat de magneziu cristalohidrat - 0,2 g, cisteină - 0,2 g, agar-agar - 20 g, Tvin-80 - 1 mL, autolizat de drojdii - 50 mL, extract de ficat de vită - 100 mL, lapte hidrolizat - 500 mL, apă distilată - restul, cu pH 6,2…6,6 şi sterilizarea lui, caracterizat prin aceea că în mediul obţinut se adaugă suplimentar infuzie de rizomi de obligeană, obţinută prin infuzarea a 4,8…7,0 g materie primă tocată în 200 mL de apă clocotită timp de 30 min cu filtrarea şi sterilizarea ulterioară a infuziei obţinute, care se adaugă în cantitate de 20 mL la un litru de mediu nutritiv.