LU84218A1 - Procede pour l'elimination totale d'acide aspartique et d'acide glutamique a partir d'hydrolysats proteiques et de melanges d'aminoacides, avec obtention consecuteve de melanes d'aminoacides de haute valeur nutritionnelle - Google Patents

Description

Procédé pour l'élimination totale d'acide aspartique et d'acide glutamique à partir d'hydrolysats protéiques et de mélanges d1 aminoacides, avec obtention consécutive de mélanges d1aminoacides de haute valeur .

5 nutritionnelle

La présente invention concerne un procédé industriel facile et peu coûteux à mettre en oeuvre pour obtenir, à partir d’hydrolysats protéiques ou de mélanges d1 aminoacides dérivés de divers procédés (hydrolyses chimique 10 et/ou enzymatique ; fermentation et autres), des produits destinés à différents usages (pharmaceutiques — de façon particulière pour la nutrition par voie parentérale, orale et entérique - vétérinaires, zootechniques et industriels), totalement exempts d'acide aspartique et d'acide glutamique, 15 ou à teneur en ces deux aminoacides inférieure à celle présente dans le produit initial et propre à satisfaire les exigences auxquelles le produit peut être destiné.

L'exigence d'éliminer l'acide aspartique et l'acide glutamique des hydrolysats protéiques ou des mélanges 20 d'aminoacides, ou d'en diminuer la teneur, est particulièrement ressentie dans le domaine pharmaceutique, surtout dans le secteur de l'alimentation par voie parentérale et entérique chez le malade se trouvant dans des conditions critiques, des conditions post-opératoires et dans tous les cas dans lesquels 25 se présentent des états cataboliques ou de dénutrition dans lesquels il est nécessaire d'effectuer un apport azoté par des substances facilement assimilables.

: - „ Certains chercheurs ont attribué aux acides } | aspartique et glutamique, des phénomènes de nausée et j ; 30 vomissement qui étaient observés chez des patients auxquels . ont été administrés des hydrolysats protéiques par voie intraveineuse (Levey, S., Marroun, J.E. et Smyth, C. J., J.

Lab. Clin. Med., ^4, 1238-1249 (1949) ; Mayer-Gross, W., et Walker, J.W., Biochem. J., 44, 92-97 (1949). j 35 Dans des études plus récentes, on a mis en évidence des dommages cérébraux chez des nouveaux-nés de certaines espèces animales à la suite de l'administration orale et parentérale d'acide aspartique et d'acide glutamique (J.W.

L

2

Olney et O.L. Ho, Nature, 227 (1970) 609-611 ; J.W. Olney, J. Neurophatol. Exp. Neurol., _30 (1971) 75-.90 ; R.M. Bürde, B. Schainker et J. Kayes, Nature, 233, 58-60 (1971) ; L.D.

Stegink, J. Tox. and Envir. Health, 2_, 215 (1976) ; V.J. Perez 5 et J.W. Olney, J. Neurochem. j[9, 1777 (1972). Des études conduites par J.E. Fischer et collaborateurs ont. également mis en évidence des niveaux plasmatiques élevés d'acide aspartique et d'acide glutamique chez des patients affectés d'altérations hépatiques graves (Surgery, 80, 77-91 (1976) ; ' IQ, J.A.M.A. 242, 347-349 (1979)).

Un nombre toujours croissant de solutions d'amino-acides à usage parentérale, commercialisées en Europe, aux i 4 Etats-Unis d'Amérique et au Japon tendent à s'aligner sur les exigences scientifiques mentionnées ci-dessus, de façon 15 particulière en pathologie hépatique et en néo-natologie.

Pour la préparation de telles solutions, on utilise les aminoacides individuels obtenus par des processus fermentatifs, enzymatiques, synthétiques, et extractifs, convenablement dosés.

-¾¾..

20 II est évident que dans la formulation'de I solutions destinées à l'application par infusion, obtenues avec des aminoacides cristallisés, on a une large possibilité de choix tant en ce qui concerne le type d ' aminoacides que de leurs rapports molaires.

25 On observe toutefois l'apparition de plus en plus fréquente de formulations qui ne répondent seulement qu'en partie aux exigences scientifiques, tout en obéissant d'autre part aux exigences économiques, étant donné l'augmentation continue du coût des aminoacides cristallisés. Ainsi, on tend 30 fréquemment à augmenter la teneur en aminoacides bon marché, I tels que la glycine, étayant une teneur en azote élevée, tels

Ique la glycine et l'alanine, de façon à faire croître la teneur globale en azote administrée par le moyen d'une telle solution.

35 Par contre, à partir de protéines d'origine naturelle, tant animales que végétales, le type et le rapport molaire des aminoacides individuels se trouvent prédéterminés. / A partir de telles protéines, il est possible d'obtenir par I ΙΛ ‘3 un procédé d'hydrolyse chimique (brevet italien n° 904.830), un mélange d'aminoacides qui, après des purifications successives (brevet italien n° 942.580) présente une pureté élevée. Aux termes de ce procédé, on obtient un mélange 5 d*aminoacides qui reflète la composition de la protéine de départ, excepté les pertes dues aux conditions de réaction sévères. Ainsi qu’on le sait, par exemple, le tryptophane est complètement détruit dans un tel traitement acide.

Dans les protéines d'origine naturelle, les acides 10 aspartique et glutamique sont toujours présents en quantités diverses. Dans le tableau qui suit, se trouve indiquées les concentrations en pourcentages des deux aminoacides, par rapport à la teneur totale en aminoacides, obtenues par hydrolyses chimiques classiques (c'est-à-dire par HCl 6 N 15 pendant 48 heures au reflux) de certaines protéines d'origine animale et végétale, choisies seulement à titre d'exemple supplémentaire, nullement limitatif.

TABLEAU

- . *** 20 -:----——--

Caséine Albumine Farine de Farine de Torula poisson soja : Acide aspartique* 6,8 10,8 10,4 12,7 9,7

Acide glutamique* 22,4 14,9 15,6 21,4 17,4 25 * en pourcentage par rapport à la teneur en aminoacides

En effet, un autre objectif de l'invention est d'obtenir, par l'intermédiaire d'un procédé économique, simple et réalisable industriellement, un produit final constitué par 30 plusieurs mélanges de L-aminoacides dans lesquels se trouvent conservés le plus possible, comme on le désire, les rapports entre les aminoacides individuels présentés par la matière protéique d'origine, à part l'élimination complète ou ! partielle des acides aspartique et glutamique. Lesdits j 35 mélanges doivent être en mesure de satisfaire les exigences j auxquelles ils peuvent être destinés, éventuellement grâce à j de petites additions d'autres aminoacides (ou d'autres mélanges 1 / d.'aminoacides provenant de protéines différentes, obtenus / 4 de la façon qui. sera décrite ci-après.) . En particulier, dans le domaine de la nutrition clinique tant parentérale périphérique que centrale, orale et/ou entérique, -l'objectif de l'invention est d'obtenir des mélanges de L-aminoacides 5 qui conservent un équilibre convenable entre les différents aminoacides essentiels et non-essentiels.

De cette façon, comme la quantité et la séquence des divers aminoacides sont prédéterminées par les protéines de départ, on a la possibilité d'obtenir différentes -10 formulations, thérapeutiquement valables, avec des aminoacides de valeur nutritive élevée, et en même temps avec un coût inférieur à celui de mélanges analogues, préparés avec des aminoacides individuels d'origine dite "synthétique".

Un autre objectif de l'invention est d'obtenir des 15 mélanges d'aminoacides exempts d'acide aspartique et d'acide glutamique, ou à niveaux contrôlés en ces deux aminoacides, dont la teneur en ammoniaque et en électrolytes soit conforme aux prescriptions requises pour l'utilisation de ces mélanges.

Le problème est très important dans le secteur de la nutrition î ' 20 clinique, en particulier dans l'alimentation parentérale.

On a attribué à la teneur élevée en ammoniaque présente dans les hydrolysats de protéines obtenus aussi bien par hydrolyse acide que par hydrolyse enzymatique [Ghadimi, H., Kumar,‘ J., Biochem. Med. 5548 (1971)], 1'hyperammoniémie 25 rencontrée chez les patients auxquels ces produits avaient été administrés. [Dudrick, S.J., MacFady, B.V., Van Buren, C.T., Ruberg, R.L., et Maynard, A.T., Ann. Surg. 176, 259 „ (1972) ; Ghadimi, H., Abali, P., Kumar, S. et Rathi, M.,

Pediatrics 48,955 (1971) ; Johnson, J.D. Albutton, W.L., et ^ 30 Sunshine, P. J. Pediatr. 81,151 (1972)].

; Pour abaisser la teneur en ammoniaque des hydrolysats de protéines et les rendre propres à l’usage en alimentation parentérale, malgré les effets mentionnés ci-dessus, on utilise normalement l'addition auxdits hydrolysats, 35 de bases inorganiques fortes (par exemple KaOH, KOH) sous | l'effet desquelles se trouve diminuée, après évaporation, la ! présence d'ions ammonium dans le produit. En conséquence de j

1 œS aadltlDnS’ °n °bSerVe enC°re äanS "S hyar°lySatS 06 J

5 protéines, outre une présence encore d'ammoniaque, une teneur, élevée, en particulier en sodium, qui a pour effet de limiter leurs applications, à 1 ' alimentation- parentérale seulement, des patients chez lesquels le besoin en- ce cation est augmenté 5 [Shenkin, A., Wretlind, A., Wld Rew. Nut.Diet., 28, 1 (1978) ; Total parenteral nutrition, Edit. Josef E. Fischer pag. 31-32 (1976) 3.

Dans la littérature sont connues des méthodes d ' isolement des acides aspartique et glutamique, et leur 10 séparation consécutive, à partir d'hydrolysats protéiques, exploitant aussi bien des précipitations fractionnées, de valeur aujourd'hui purement historique, que des méthodes chromatographiques plus récentes. En ce qui concerne les premières méthodes précitées, on peut se référer à la 15 description faite dans "Chemistry of the Amino Acids", J.P. Greenstein et M. Winitz, vol. 3, J. Wiley and Sons ed., 1961, pag. 1856-1865 et 1930-1940.

En ce qui concerne les méthodes chromatographiques actuellement de valeur, on peut se référer aussi bien à la 20 méthode de Cannan (J. Biol. Chem. 152, 401 (1944)) qui a utilisé l'Amberlite IR 4 en mode discontinu, qu'à celle de Martin et coli. (Biochem. J. 42, 443 (1948)) qui a par contre utilisé une résine de type IRA 400, en opérant sur colonne sur l'hydrolysat protéique, toutefois en milieu acide.

25 Des séparations des aminoacides sur colonne ont été décrites tant dans des travaux scientifiques (S.M. Partdrige et coll., Biochem. J., 44, 418 (1949) ; ibidem, 44, 513 (1949) ; ibidem, 44, 521 (1949)) en utilisant une résine échangeuse cationique (Zeo-Karb 215) ou anionique (Wofatit 30 M, Amberlite IR 4, De Acidité B) que dans des brevets (E.G. Donahue, cédé à Hercules Powder Co., Brevet des Etats-. Unis d'Amérique 2.937.199 ; A.A. Eisenbraun, cédé à | Ogilvie Flour Mills Co., Brevet des Etats-Unis d'Amérique • 3.045.026). Dans ces deux derniers cas, on a utilisé de nouveau j 35 des résines échangeuses de cations. Tous ces travaux ont I toutefois porté sur la séparation d'un ou plusieurs amino- I acides ou le fractionnement en divers groupes, avec des ! rendements de valeur pratique douteuse, sans aboutir à 6 l'obtention de mélanges d'aminoacides dans le but d'utiliser de tels mélanges pour matières premières convenant pour l'obtention de. formulations propres par exemple, à la nutrition clinique humaine.

5 Le procédé de l'invention· permet de séparer totalement l'acide aspartique et l'acide glutamique, à volonté, ou de réguler la diminution des deux aminoacides jusqu’à atteindre le pourcentage désiré dans le but d'obtenir des mélanges d'aminoacides, appelés intermédiaires, à partir 10 desquels on peut obtenir, par addition d * aminoacides synthétiques, des mélanges adaptés à la nutrition dans des applications variées, humaine et zootechnique.

° Le procédé industriel de l'invention, décrit dans ce qui suit, utilise des résines échangeuses d'ions (de type 15 Amberlite IRA 400, Relite, Dowex) à caractéristiques anioniques fortement basiques, sous forme OH , mises en contact d'échange ionique avec des solutions aqueuses ammoniacales d'hydrolysats protéiques ou de mélanges d 'aminoacides de nature diverse, contenant de l'acide aspartique et de l'acide 20 glutamique, provenant par exemple de fermentations. Ces solutions d'aminoacides peuvent être obtenues par hydrolyse de protéines, d'origine animale ou végétale, telles que par exemple farine de soja, farine de sang, farine de poisson, plumes, gélatine, caséine, résidu protéique d’extrait 25 hépatique, albumine, extraits d'organes, peau de bovins, torula, laine, mycélium de résidus de fermentation, ou de produits, contenant des protéines obtenues par isolement ou enrichissement de la partie protéique par traitement de matières d'origine naturelle, tant animale que végétale.

30 A titre d'exemples non limitatifs, on peut citer des concentrais de protéines du gluten de maïs de Turquie, des concentrais de protéines du lactosérum et autres.

Après des opérations convenables, telles qu'un passage sur colonne de résine échangeuse de cations pour 35 éliminer des substances étrangères, et une élution consécutive, et/ou un passage sur colonnes de charbon dans lesquelles certains aminoacides (par exemple aromatiques) sont fortement / adsorbés,. la solution ammoniacale, dans laquelle sont 7 solubilisés les aminoacides de départ, doit avoir un pH non-inférieur à 7, tandis qu'aucune limite n'est imposée aux pH supérieurs à 7. Etant donné les pK de l'acide aspartique } (pK^ = 2,09 - pK2 =3,86) et de l'acide glutamique (pK^ = 5 2,19 - pK2 =4,25), dans les conditions opératoires précitées, les deux aminoacides présentent un équilibre d’ionisation, tendant principalement à la forme anionique, tandis que les autres aminoacides peuvent avoir des équilibres d'ionisation notablement influencés par le pH de la solution ammoniacale 10 dans laquelle on a dissous les substances de départ".

“ L'acide aspartique et l'acide glutamique sont absorbés par la résine ensemble avec les autres aminoacides.

On peut successivement procéder à l'élution à l'aide de solutions d'ammoniaque, de tampons ammoniaque./chlorure 15 d'ammonium et ammoniaque/acétate d'ammonium, en mettant à . profit la compétition d'affinité entre l'anion contenu dans la solution ammoniacale éluante et la résine, par rapport aux aminoacides fixés sur cette dernière. Le choix convenable de l'éluant est fonction du maintien des volumes d'élution en 20 quantités pouvant être traitées industriellement.

Le pH de la solution ammoniacale de chlorure d'ammonium ou d'acétate d'ammonium ne doit pas être inférieur à 7, tandis qu'aucune limite n'est imposée aux pH supérieurs. La concentration en ions Cl" ou CH^COO peut varier de 25 valeurs très basses à des valeurs élevées. La quantité d'ions Cl ou CH-jCOO influence le volume d'éluant nécessaire pour la récupération des aminoacides et la concentration d'acides aspartique et glutamique désirée dans le mélange final.

L'acide aspartique et l'acide glutamique 30 présentent, parmi les aminoacides, la plus grande affinité vis-à-vis de la résine et sont par suite élués totalement, ou en partie, à partir de la résine avec des temps de rétention différents de ceux des autres aminoacides.

On chasse l'ammoniaque et une partie de l'eau à 35 partir de l'éluat ammoniacal par évaporation sous pression réduite. Les aminoacides obtenus, sous forme de suspension à 50 %, ou en poudre si on procède à leur dessiccation par utilisation d'un dessiccateur à pulvérisation "spray-drier" * 8 ou par d'autres systèmes peuvent être successivement élaborés suivant la destination à laquélle-le mélange ainsi obtenu est destiné.

%

Une caractéristique importante du procédé de 5 l'invention est la récupération notable des aminoacides non acidiques dans l'éluat ammoniacal, comprise entre 85 et 90' % par rapport aux aminoacides présents dans la substance de départ. Ce rendement, bien que variant en fonction des conditions opératoires, demeure assez élevé. Ces produits de 10 récupération sont destinés à servir de mélanges d'aminoacides complètement exempts d'acide aspartique et d'acide glutamique.

Lorsque dans le mélange d'aminoacides, on désire * ou tolère une présence d'acide aspartique et d'acide glutamique nettement inférieure à celle de la substance de .15 départ, le rendement du procédé est supérieur à 95 %.

Dans ce cas, il n'est pas nécessaire de procéder à l'élution avec un tampon d'ammoniaque-chlorure d'ammonium ou d'ammoniaque-acétate d'ammonium, mais il suffit d'effectuer une charge appropriée en aminoacides, de sorte que l'acide 20 aspartique et glutamique déplacent eux-mêmes, en raison d'une plus grande affinité ionique vis-à-vis de la résine dans les conditions opératoires adaptées, ceux des aminoacides qui sont plus faiblement absorbés sur ladite résine.

Un autre avantage notable du procédé de l'invention 25 est conféré par l'utilisation d'un milieu ammoniacal dilué dans toutes les phases dudit procédé. Ceci entraîne l'utilisation d'installations beaucoup moins coûteuses et vulnérables vis-à-vis de l'utilisation de milieux acides. En i second lieu, le milieu basique à l'ammoniaque est notablement 30 utile pour éviter des formations de charges bactériennes que l'on peut au contraire observer dans des conditions de pH j modérément acide et qui sont particulièrement dommageables ; pour des produits utilisés dans les domaines pharmaceutique, vétérinaire, zootechnique et diététique, i 35 Enfin, l'utilisation de l'ammoniaque pour éluer les aminoacides de la colonne de résine permet d’obtenir, par concentrations successives sous vide, une solution ou une A poudre directement utilisable dans la préparation de solution 9 destinée à être, utilisée par infusion.

Un avantage assez positif du procédé de l'invention est le facteur coût. En effet,-par ce procédé gui est assez simple du point de vue technologique, rapide, 5 dépourvu de manipulations, si bien qu’il peut être complètement automatisé, on obtient des mélanges· d'aminoacides, qui, sans aucune addition ou par des petites additions d*aminoacides synthétiques pour des ajustements convenables de la composition, ont un coût beaucoup plus bas par rapport à la 10 même formulation établie avec des aminoacides synthétiques.

“ Ceci entraîne une réduction notable des dépenses hospitalières lorsque ces solutions d'aminoacides sont utilisées comme cela se produit souvent, en thérapie nutritionnelle.

15 Les exemples qui suivent illustrent le procédé de l'invention sans nullement avoir un caractère limitatif.

Les paramètres opératoires fondamentaux suivis dans les exemples de réalisation du procédé sont résumés dans ce qui suit et, sauf indication contraire, demeurent constants dans 20 lesdits exemples. Il convient de souligner que ces paramètres ne sont également nullement destinés à limiter le procédé revendiqué.

COLONNE : diamètre intérieur = 10 cm hauteur = 250 cm 25 résine =11 litres

Type = IRA 400 sous forme OH .

SOLUTION D'ALIMENTATION : mélange d'aminoacides dissous dans ' l'ammoniaque diluée, et amené à pH d'environ 10. Les valeurs .30 effectives de la quantité totale d'aminoacides et de leur pourcentage relatif sont indiquées dans chaque exemple.

VITESSE DE PASSAGE : la vitesse de passage de la solution 35 d'alimentation est comprise entre 1 volume de solution/heure/volume de résine et 2 volumes de solution/ f{ heure/volume de résine ; 10 .(respectivement égales à 11 et. à 1/h) pour la colonne décrite dans ce qui précède.

Les valeurs réelles sont fournies 5 dans l'exemple spécifique.

SOLUTION ELUANTE : A) Tampon ammoniaque-chlorure d'ammonium.

La solution est préparée en ajoutant à 100 1 d'ammoniaque 3 N, 10 1,4 1 d’acide chlorhydrique concentré. Le pH de la solution est d'environ 11.

B) Tampon ammoniaque-acétate d ' ammonium.

15 La solution est préparée en ; ajoutant à 100 1 d'ammoniaque'3N, 1 0,850 1 d'acide acétique glacial.

Le pH résultant est d'environ 11,2.

. *«*· 20 C) Tampon ammoniaque - acétate d'ammonium.

La solution est préparée en ajoutant à 100 1 d'ammoniaque 0,3 N, 0,850 1 d'acide acétique 125 glacial. Le pH est d'environ 9,2.

Le temps d'alimentation de la solution initiale et de récolte de la solution éluée est spécifié dans les exemples individuels.

D'après le temps d'alimentation et la concentration 30 d'aminoacides, on détermine la charge de ces derniers sur la colonne et en particulier la quantité d'acide aspartique et glutamique. Les valeurs sont mentionnées dans les exemples individuels. Pendant la phase de charge, il n'y a pas de présence d'aminoacides dans la solution ayant passé à travers 35 la colonne, sauf si cela est expressément mentionné. D'une manière constante, dans les exemples décrits ci-après, on concentre l'éluat ammoniacal sous pression réduite et il fournit un produit exempt de substances pyrogènes et de i \ substances ayant une action similaire à l'histamine. En même 11 temps, la teneur en ammoniaque du mélange se trouve inférieure à 0,02 g par 100 g d'aminoacides. à l'état sec et on observe une absence de cations de bases fortes dans les formulations dépourvues d'acide aspartique et d'acide glutamique. Dans les v 5 formulations à présence partielle d'acides aspartique et glutamique, la teneur en cations est propre à leur utilisation dans la nutrition parentérale (voir les Exemples 12, 13, 14) et assez inférieure à celle de formulations actuellement utilisées en thérapie, provenant d'hydrolysats protéiques.

10' EXEMPLE 1 * La solution d'alimentation a la composition mentionnée dans le tableau suivant.

’ TABLEAU I (Exemple 1) 15 ____________ g AA/1 de solution % des AA individuels ammoniacale dans 100 g de mélange

Acide aspartique g 2,71 7,08

Thréonine g 1,64 4,28 Sérine g 2,11 5,5.}-*,.

20 Acide glutamique g 9,81 25,63

Proline g 5,33 13,92

Glycine g 1,05 2,74

Alanine g 1,70 4,44

Valine g 2,77 7,24 Méthionine. g 1,02 2,66

Isoleucine g 1,79 4,59 25 Leucine g 3,95 10,32

Tyrosine g - - • Phénylalanine g - -

Lysine g 3,54 9,25

Histidine g 0,86 2,26

Arginine g - -

Aminoacides totaux g 38,28 30 --1

La vitesse de passage est (dans le cas spécifique, sans toutefois aucun caractère limitatif) de 11 1/h, correspondant à un volume de solution/heure/volume de résine. Après 140 minutes d'alimentation on n'observe pas, sinon en 35 quantité négligeable, de présence d'aminoacides dans la solution ammoniacale percolée à travers la colonne de résine. Dans les 60 minutes suivantes d'alimentation avec la solution ammoniacale contenant des aminoacides dans les 12 concentrations mentionnées ci-dessus, on obtient 420 g d ' aminoacides dans la solution à la sortie -de la colonne de résine. Dans cette fraction, la teneur en acide aspartique » est presque nulle, tandis que l’acide glutamique est présent 5 dans la proportion de' 0,085 g/1 de. solution passée à travers la résine, correspondant à 0,935 g au total sur 420 g d'aminoacides-élués en 60 minutes. Le pourcentage d’acide glutamique est de 0,22 % par rapport au mélange d'aminoacides. Lors des 160 minutes supplémentaires d’alimentation 10 avec une solution ammoniacale contenant des aminoacides dans la proportion mentionnée ci-dessus, dans la solution percolée à travers la résine, se trouvent 52,31 g d’acide aspartique et· 99,25 g d'acide glutamique sur 984 g de mélange total d'aminoacides, correspondant à 1,78 g d'acide aspartique/1 15 et 3,38 g d’acide glutamique/1 de solution passée à travers la résine.

Dans cette fraction (de 160 minutes}, les teneurs en pourcentages d'acide aspartique et d'acide glutamique sont respectivement de 5,32 % et 10,09 %.

! . 20 En conclusion, dans les deux fractions” pour un total de 220 minutes de percolation, sont contenus globalement 52,31 'g d’acide aspartique et 100,18 g d’acide glutamique dans 1404 g de mélange d'aminoacides, correspondant à 3,73 % d'acide aspartique (dans 100 g d'aminoacides) et à 7,14 % 25 d'acide glutamique (dans 100 g d'aminoacides).

On a par suite une adsorption de quantités notables de ces deux aminoacides de nature acide sur la résine • mentionnée ci-dessus.

EXEMPLE 2 30 La solution d'alimentation est constituée par un mélange d'aminoacides ayant les caractéristiques mentionnées dans le Tableau II. Les concentrations et les quantités

Il relatives des aminoacides demeurent constantes dans les l exemples 3-6.

(a- ; î 13 TABLEAU II (Exemple 2) . g AA/1 de % des AA indivi- solution duels dans 100 g 5 'ammoniacale de mélange

Acide aspartique g 2,65 7,07

Thréonine g 1,50 4,00 Sérine g 2,03 5,42

Acide glutamique g 9,49 25,33

Proline g 5,57 14,87 10 Glycine g 0,86 2,30 1 Alanine g 1,58 4,22

Valine g 2,78 7,42 Méthionine g 0,93 2,48 ' Isoleucine g 1,76 4,70

Leucine g 3,94 10,52

Tyrosine g - - -c Phénylalanine g - -

Lysine g 3,61 9,63

Histidine g 0,77 2,05

Arginine g - —

Aminoacides totaux g 37,47 ‘Λ··· 20 VITESSE DE PASSAGE = 1 volume de solution/heure/volume de résine TEMPS D'ALIMENTATION = 120 minutes QUANTITE D'AMINOACIDES CHARGES SUR LA COLONNE = 824,3 g 25 ACIDE ASPARTIQUE CHARGE = 58,3 g ACIDE GLUTAMIQUE CHARGE = 208,8 g

SOLUTION ELUANTE = Tampon A

TEMPS D'ELUTION = 240 minutes VOLUME RECOLTE =44 litres 30 Dans le TAbleau III, on indique les récupérations et bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne. La récupération des aminoacides après élution est de 472,1 g sur 557,3 g (qui représente la récupération théorique, si l'on soustrait la quantité d’acide aspartique et d'acide 35 glutamique de la quantité d'aminoacides chargés dans la colonne), correspondant a 84,7 % de la théorie. La teneur en chlore dans le mélange final, exempt d'acides aspartique et . glutamique, est de 0,7 %.

i 14 TABLEAU III (Exemple 2)

AA chargés AA % de ré- % des AA

sur la récupérés -cupération individuels 5 colonne dans 100 g g g de mélange

Acide aspartique 58,3 0 0 / .

Thréonine 33,0 31,1 94,2 6,6 Sérine 44,7 39,1 87,5 8,3 10 Acide glutamique 208,8 0 0 /

Proline 122,5 109,9 89,7 23,3

Glycine 18,9 17,8 94,2 3,8

Alanine 34,8 33,8 97,1 7,1

Valine 61,2 53,4 87,3 11,3 15 Méthionine 20,5 8,7 42,4 1,8

Isoleucine 38,7 27,7 71,6 5,8

Leucine 86,7 60,2 69,4 12,7

Tyrosine / /

Phénylalanine / / 20 Lysine 79,4 80,0 100,8 17,0

Histidine 16,9 10,4 61,5 2,2

Arginine / - /

Total . . 824,4 472,1 25 EXEMPLE 3

La solution d'alimentation, l'écoulement de cette * dernière, les temps de charge, le tampon utilisé (type A) sont identiques à ceux de l'Exemple 2.

30 TEMPS D’ELUTION = 300 minutes VOLUME RECOLTE = 55 litres

Dans le Tableau IV, on indique les récupérations et bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne.

Les valeurs mentionnées dans le Tableau IV

| 35 montrent une récupération de tous les aminoacides supérieurs i à 93 %, excepté pour la méthionine, avec laquelle on obtient I une récupération de 84,4 La quantité d'acide aspartique, jj λ en composition centésimale, est d'environ g de celle :¾ / / 15 présente dans le mélange initial, tandis que l’acide ' 1 glutamique est- d’environ de celui· présent" initialement.

La teneur en chlore dans le mélange, final est de 2,6 %,· par rapport aux aminoacides présents.

5 TABLEAU IV

(Exemple 3}

AA chargés AA % de ré- % des AA

sur la récupérés cupération individuels colonne dans 100 g 10 g g de mélange k " Acide aspartique 58,3 7,7 13,2 1,3

Thréonine 33,0 33,9 102,7 5,7 Sérine 44,7 46,0 102,9 7,7

Acide glutamique 208,8 44,8 21,5 7,5 15 Proline 122,5 114,7 93,6 19,3

Glycine 18,9 19,4 102,6 3,3

Alanine 34,8 35,4 101,7 6,0

Valine 61,2 61,2 100,0 j 10,3 Méthionine 20,5 17,3 84,4 n 2,9 20 i ,

Isoleucine 38,7 36,1 93,3 j 6,1

Leucine 86,7 81,0 93,4 ! 13,6

Tyrosine / · · - _

Phenylalanine /

Lysine 79,4 80,6 101,5 13,6 25 ’

Histidine 16,9 16,1 95,3 2,7

Arginine . /

Total 824,4 594,2 « — ..... - — — ' * - j * EXEMPLE 4 30 VITESSE DE PASSAGE = 1,74 volume de solution/heure/ volume de résine TEMPS D’ALIMENTATION = 120 minutes QUANTITE D'AMINOACIDES CHARGES SUR LA COLONNE = 876,8 g 35 ACIDE ASPARTIQUE CHARGE = 62 g ACIDE GLUTAMIQUE CHARGE = 222,1 g TEMPS D'ELUTION = 140 minutes VOLUME RECOLTE = environ 44,6 litres

[ SOLUTION ELUANTE = tampon A

16

Dans le Tableau V, on indique les récupérations et bilans par. rapport aux aminoacides chargés dans la colonne» La récupération des aminoacides après élution est de .511,6 g sur 592,7 g. (qui représente la récupération théorique en . 5 soustrayant l'acide aspartique et l'acide glutamique de la quantité d'aminoacides chargés dans la colonne) correspondant à 86,3 % de la théorie. La teneur en chlore dans le mélange final/ exempt d'acide aspartique et d'acide glutamique, est de 1,4 % par rapport aux aminoacides.

10 TABLEAU V

* (Exemple 4)

AA chargés AA % de ré- % des AA

sur la récupérés cupération individuels colonne dans 100 g •15 g g de mélange

Acide aspartique 62,0 0 0 /

Thréonine 35,1 33,1 94,3 6,5 Sérine 47,6 43,5 91,4 8,5

Acide glutamique 222,1 0 0 / • 20 ·

Proline 130,5 112,4 · 86,1 22,0

Glycine 20,2 19,8 98,0 3,9

Alanine 37,1 35,7 96,2 7,0

Valine 65,0 56,0 86,2 10,9 Méthionine 21,7 12,3 56,7 2,4 25 «Isoleucine 41,1 32,4 78,8 6,3

Leucine 92,1 69,9 75,9 13,7 i Tyrosine /

Phenylalanine /

Lysine 84,4 85,0 100,8 16,6 * 30

Histidine 17,9 11,5 64,4 2,2

Arginine

Total 876,8 511,6 EXEMPLE 5 ' 35 On procède comme dans l'Exemple· 4, avec la variation unique de la durée et du temps d'élution .(180 minutes) et en conséquence du volume récolté (57,5 litres).

! Dans le Tableau VI sont rassemblés les récupérations et bilans I / par rapport aux aminoacides chargés· dans la colonne.. Les valeurs mentionnées dans le Tableau VI montrent des récupérations de tous les aminoacides supérieures à- 90 %, 17 > excepté pour la méthionine et l'histidine qui présentent une 5 récupération supérieure à 80 %. La quantité d'acide aspartique, en composition centésimale, est d'environ -g- de celle présente initialement. Ces résultats sont en accord avec ceux mentionnés dans l'Exemple 3, dans lequel on utilisait des écoulements d'alimentation inférieurs. La teneur en chlore 10 dans le mélange final est de 3,1 I.

TABLEAU VI (Exemple 5)

AA chargés AA % de ré- % des AA

<1 ^ sur la récupérés cupération individuels colonne dans 100 g g g de mélange

Acide aspartique 62,0 6,7 10,8 1,1

Thréonine 35,1 35,6 101,4 5,7 Sérine 47,6 48,8 102,5 7,9 20 - ---r

Acide glutamique 222,1 42,5 19,1 6,8

Proline 130,5 124,6 95,5 20,1

Glycine 20,2 20,8 103,0 3,4

Alanine 37,1 37,45 100,9 6,0

Valine 65,0 64,8 99,7 10,4 ^ Méthionine 21,7 17,45 80,4 2,8

Isoleucine 41,1 37,7 91,7 6,1

Leucine 92,2 83,0 90,0 13,4

Tyrosine / /

Phénylalanine / / * 30

Lysine 84,4 86,0 101,9 13,9

Histidine 17,9 15,2 84,9 2,4

Arginine / /

Total 876,8 620,6 35 EXEMPLE 6

On opère comme dans les Exemples 4 et 5 en ce qui concerne les conditions de colonne, la charge d’aminoacides, les écoulements d’alimentation, le type de solution utilisée fj dans l’élution. La durée de la phase d'élution est de 150 18 minutes, correspondant à un passage d'environ 48 1 de solution ammoniacale de chlorure d'ammonium. Dans le Tableau. VII on montre les récupérations et bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne. La teneur en chlore dans le mélange 5 final est de 1,8 %. Les Exemples 4-5-6 montrent qu'il· est possible d'obtenir des mélanges d’aminoacides à teneur variable en acide aspartique et en acide glutamique, en faisant varier de manière convenable la durée du temps d'élution.

TABLEAU VII

10 (Exemple 6) » .

AA chargés AA % de ré- % des AA

sur la récupérés cupération individuels colonne dans 100 g g g de mélange 15 Acide aspartique 62,0 0,20 0,3 0,04

Thréonine 35,1 33,4 95,2 6,3 Sérine 47,6 44,6 93,9 8,4

Acide glutamique 222,1 4,1 1,8 0,8

Proline 130,5 118,9 91,2 22,4 20 Glycine 20,2 20,4 101,1 ~ 3,8

Alanine 37,1 37,3 100,6 7,0

Valine 65,0 61,2 94,2 11,5 Méthionine 21,7 12,4 57,20 2,3

Isoleucine 41,1 32,1 78,1 6,0 25 Leucine 92,2 69,6 75,5 13,1

Tyrosine /

Phénylalanine / 4 Lysine 84,4 85,0 100,8 16,0

Histidine 17,9 11,5 64,4 2,2 30 Arginine /

Total 876,8 530,7 I EXEMPLE 7

On procède comme dans l'Exemple 5, avec comme 35 variation unique l'utilisation d'un tampon B (ammoniaque - «acétate d'ammoniumj par rapport au tampon A.

La quantité d'aminoacides chargés sur la colonne est de 886,5 g et les teneurs en acide aspartique et en acide i 19 glutamique sont respectivement de. .61-,7 g et 221,4 g. Les valeurs de concentrations et compositions centésimales de la solution d'alimentation dans la phase de charge, ne varient pas d'une manière notable par rapport à- celles mentionnées dans 5 les exemples précédents, de même qu'il n'y a pas de variation du pH.

Dans le Tableau VIII, on mentionne les récupérations et bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne. La récupération des aminoacides après, élution est de 539,4 g 1 o sur 603 g (qui représente la récupération théorique en . * soustrayant l'acide aspartique et l'acide glutamique de la quantité d 'aminoacides chargés dans la colonne) correspondant .à 89,4 % de la théorie. La teneur en acétate dans le mélange final, exempt d'acides aspartique et glutamique, est de 1 %.

15 TABLEAU VIII .

(Exemple 7)

AA chargés ÄA % de ré- % des AA

sur la récupérés cupération individuels colonne v dans 100 g 20 g g de mélange

Acide aspartique 61,7 0 0 /

Thréonine 35,7 34,9" 97,9 6,5 Sérine 47,5 45,9 96,7 8,5

Acide glutamique 221,4 0 0 / 25 Proline 126,0 118,9 94,4 22,0

Glycine 21,2 20,4 96,4 3,8

Alanine 37,6 37,9 100,7 7,0

Valine 65,7 60,1 91,5 11,1 ^ Méthionine 23,4 13,2 56,5 2,45 30 Isoleucine 43,8 34,4 78,6 6,4

Leucine 96,2 73,6 76,5 13,6

Tyrosine /

Phénylalanine /

Lysine 87,1 86,2 99,0 16,0 35 Histidine 19,2 13,9 72,6 2,6

Arginine /

Total 886,5 539,4 20 EXEMPLE 8

On procède comme dans l'Exemple--7. avec la même solution de charge et les mêmes paramètres opératoires, en utilisant le tampon C (ammoniaque-acétate d'ammonium plus 5 dilué). La phase d'élution avec la solution ammoniacale d'acétate d'ammonium a une durée de 195 minutes, correspondant à un passage d'environ 62 1 de solution ammoniacale d'acétate d’ammonium.

Dans le Tableau IX, on montre les récupérations 10 et bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne. . La récupération des aminoacides après élution est de 526,9 g sur. 603 g (qui représente la récupération " théorique calculée en soustrayant la quantité d'acide aspartique et d'acide glutamique de la quantité des amino-15 acides chargés dans la colonne), correspondant à 87,4 % de la théorie.

La teneur en acétate dans le mélange final est de 1:1 %.

·*<*>· .20

fU

I- I· - l· i' ! î «i 21 TABLEAU ΊΧ (Exemple 8)

AA chargés. AA % de ré- % des AA

sur la récupérés cupération individuels 5 colonne dans 100 g g g de mélange

Acide aspartique 61,70 .0 /

Thréonine 35,7 33,2 93,0 6,3 Sérine 47,5 44,1 92,8 . 8,4 10 Acide glutamique 221,4 0 0 /

Proline 126,0 115,0 91,3 21,8

Glycine 21,2 20,2 95,3 3,8

Alanine 37,6 36,0 95,7 6,8

Valine 65,7 59,3 90,3 11,3 15 Méthionine 23,4 12,9 55,1 2,4

Isoleucine 43,8 34,0 77,6 . 6,5

Leucine 96,2 72,8 75,7 13,8

Tyrosine /

Phénylalanine / . - 20 Lysine 87,1 86,0 98,7 16,3

Histidine 19,2 13,4 69,8 2,5

Arginine / -

Total 4 .886,5 526,9 ...........

25 Les études conduites par Fischer et Collaborateurs ( "Pathogenesis and therapy of Hepatic Coma” - Progress in liver disease - Volume V - 1975 ; "The rôle of plasma amino acids in hepatic encephalopathy", Surgery Vol. 80 n. 1 i pag. 77-91 (1976) ; "Chronic hepatic encephalopathy - Long 30 term therapy with a branched-chain amino acids enriched elemental diet" - JAMA - Vol. 242 N. 4 pag. 347-349 (1979))

Iont mis en évidence que les patients présentant des maladies hépatiques chroniques et des cirrhoses montraient un état aminoacidémique du plasma notablement différent de celui de

Ih 35 sujets normaux : phénylalanine, thyrosine, acide glutamique, j acide aspartique et méthionine en augmentation notable, ij tandis que 1 'isoleucine, la leucine et la valine diminuaient sensiblement.

22 _ , i Λ . Val + Isöleuc + Leuc ,

En outre, le rapport phàiylaï + ifyros - des aminoacides plasmatiques montre une corrélation notable avec le degré d'encéphalopathie. Des améliorations de L'état général et neurologique de ces patients ont été observées 5 en utilisant, au cours de l'alimentation parentérale desdits I sujets, des solutions d'aminoacides à teneur élevée en isoleucine-leucine-valine (aminoacides à chaîne ramifiée) une basse teneur en méthionine-phénylalanine-tryptophane, et à teneur nulle en acide aspartique-acide glutamique-tyrosine.

T 0 Ce type de formulation peut être facilement obtenu avec les processus mis en évidence dans les divers exemples décrits ci-dessus, et surtout il est assez convenable économiquement par rapport à une formulation analogue établie avec des aminoacides d'origine "synthétique". En effet, en utilisant comme 15 matière première la caséine, après hydrolyse acide complète, on obtient un mélange d'aminoacides qui, par des traitements convenables et par passages successifs sur une résine du type décrit dans les Exemples 2, 4, 7 et 8, présente une composition en pourcentage moyenne en amino-acides, mise en évidence 20 dans les divers exemples décrits dans ce qui précède, du type représenté dans le Tableau X. (On a indiqué entre parenthèses les limites des écarts admis dans les mélanges provenant d'hydrolysats protéiques)..

TABLEAU X

25 __

Thréonine 6,5 (5,8-7,1) Sérine 8,3 (7,5 - 9,1) ’ Proline 22,3. (20,1 - 24,5)

Glycine 3,8 (3,4 - 4,2) 30 Alanine 7,0 (6,3 - 7,7)

Valine 10,9 (9,8 - 12,0) Méthionine 2,2 (2 - 2,4)

Isoleucine 6,2 (5,6 - 6,8)

Leucine 13,2 (11,9 - 14,5) 35 Lysine 17,2 (15,5 - 18,9)

Histidine 2,4 (2,2-2,6) . Une telle composition peut être amenée à des valeurs 23 optimales, dans le sens qui vient d’être souligné,· par simple intégration avec des quantités relativement petites de certains aminoacides : on obtient des "mélanges élaborés", comme le démontrent les exemples suivants, eux-mêmes non 5 limitatifs.

EXEMPLE 9 ~ i A -100 g d'un mélange ayant la composition représentée dans le Tableau X, obtenu avec le procédé décrit dans les Exemples 2, 4, 7 et 8, on ajoute 1,5 g de phénylalanine, 10 8,5 g d'arginine et 1,0 g de tryptophane (soit par··suite seulement 11 % d'aminoacides "d'intégration") .. On obtient • un mélange, élaboré ayant la composition en % d'aminoacides mentionnée dans le Tableau XI.

TABLEAU XI

15 (Exemple 9)

Thréonine 5,8 ( 5,2 - 6,4) Sérine 7,5 ( 6,7 - 8,2)

Proline 20,0 (18,0-22,0)

Glycine 3,4 (3,1- 3,7)

Alanine 6,3 ( 5,7 - 6,9)

Valine 9,8 ( 8,8 - 10,8) Méthionine 2,0 (1,8-2,2)

Isoleucine 5,6 (5,0- 6,2)

Leucine 11,9 (10,7 -13,1)

Phénylalanine 1,4 (1,3- 1,5)

Lysine 15,5 (14,0 - 17,0)

Histidine 2,2 (2,0- 2,4) 25 Arginine 7,7 (6,9- 8,5)

Tryptophane 0,9 ( 0,8 - 1,0)

On a mentionné entre parenthèses les valeurs d'écart admises dans des formulations analogues provenant d'hydrolysats protéiques.

L'addition de phénylalanine et de tryptophane est motivée par le fait que tous deux sont des aminoacides j essentiels, manquant dans la formulation précédente. L'addition ! doit être toutefois minimale pour répondre aux exigences i · * I mentionnées dans la littérature indiquée ci-dessus. L'arginine est ajoutée pour son pouvoir détoxifiant à l’égard de l'ammoniaque endogène se formant par désamination des aminoacides · (Meister, A. "Biochemistry of the Amino Acids”, 2nd j / Ed., Ac. Press, N.Y., 1965 ; "Arginine, Ornithine and ! // I · r 24

Citrulline - Urea Synthesis”, pag. 685-707 ; Najarian, J.S., Harper, H.A., Am. J. Med. 2J_, 832 (1956))...

La présence d'électrolytes dans 100 g de mélange élaboré d1aminoacides est la suivante, par rapport aux 5 mélanges obtenus dans les Exemples 2-4-7-8 de la présente invention :

Exemple 2 : Cl 0,65 % enpdsde mélange élaboré

Exemple 4 : Cl” 1,30 % enpdsde mélange élaboré

Exemple 7 : CH^COO 0,90 % enpdsde mélange élaboré 10 Exemple 8 : CH^COO 1,00 % enpdsde mélange élaboré

La composition aminoacide élaborée de même que ‘ la teneur en électrolytes (par exemple, absence de cations ; . ; NH^ < 0,02 %) présents sont parfaitement propres à l'emploi de cette formulation dans tous les cas dans lesquels ladite 15 formulation peut apporter des améliorations à l'état général des patients, en particulier aux patients présentant des dommages hépatiques graves.

Le Tableau XII mentionne les paramètres nutritionnels fondamentaux du mélange d'aminoacides élaboré de l'Exemple 9.

20 · (L· s i 25 TABLEAU XII • Comp, en % après (1} - (2} (3} (4) (5) intégrât.

5 ~ Γ"

Acide aspartique

Thréonine 5,8 0,681 5,8 381 liO

Sérine 7,5 0,999

Acide glutamique

Proline 20,0 2,434

Glycine 3,4 0,634

Alanine 6,3 0,990 10 Valine 9,8 . 1,173 9,8 9,8 644 185 Méthionine 2,0 0,188 2,0 131 38

Isoleucine 5,6 0,598 5,6 5,6 368 106 . Leucine 11,9 1,271 11,9 11,9 782 225

Tyrosine

Phénylalanine 1,4 0,093 1,4 92 26

Lysine 15,5 2,970 15,5 1018 293 -g Histidine 2,2 0,596

Arginine 7,7 2,476

Tryptophane 0,9 0,123 0,9 59 17 15,226 52,9 27,3 3475

(1) = g d'azote total dans 100 g de AA

(2) = g de AAE (aminoacides essentiels) dans 100 g de AÀ’

20 (3) = g de BCAA (aminoacides à chaîne ramifiée) dans 100 g de AA

(4) = mg de chaque ÄAE/g de N total (5) = mg de chaque AAE/g de AAE totaux

Des études récentes ont mis en évidence l'importance de la teneur en valine, isoleucine, leucine (aminoacides 25 à chaîne ramifiée, BCAA) dans les solutions d'aminoacides utilisées dans l'alimentation parentérale.

Les observations mentionnées par divers auteurs ont attribué à ces trois aminoacides, des effets anticataboliques spéciaux (Buse, M.G., Reid, M., J. Clin. Invest., 5j5, 1251 30 (1975) ; Fulks, R.M., Li, J.B., Golberg, A.L., J. Biol. Chem. 250, 280 (1975)).

Des études in vivo chez le rat ont révélé une meilleure utilisation de l'azote contenu dans les solutions d'aminoacides, pendant la période post-opératoire, lorsque 35 ces solutions étaient modifiées en augmentant leur teneur en . BCAA. (Freund, H. Yoshimura, N., Lunetta, L., Fischer, J.E., Surgery JB3, 611 (197 8) ; Tetsuya Kishi, Yasuo Iwasawa,

Hiroshi Itoh, Ichiro Chibata, J. Nutrit. 110, 710 (1980) ; 26

Erich Vinars, P. Fürst, S.O. Liljedahl, J. Larson, B. Schild, J. Parent. Enter. Nutrit., Vol. 4 n° 2, pp;· 184 (1980)) ont démontré l'effet inadéquat de deux solutions d'aminoacides, basées l'une sur les besoins selon Rose (J. Biol. Chem. 217, 5 987 (1955)) et l'autre sur le tableau aminoacidique chez l'homme (Energy and Protein Requirements, report of a joint FAO-WHO Experts Group, 1973), pendant la période postopératoire, montrant un catabolisme notable avec augmentation notable de leucine, valine et isoleucine dans le liquide 10 intracellulaire du muscle.

[ Comme on l'a mentionné dans les exemples 2, 4, 7 et 8, on obtient un mélange d'aminoacides avec la composition centésimale indiquée dans le Tableau X.

La teneur en valine + isoleucine + leucine de ce 15 mélange est de 30,3 % par rapport aux autres aminoacides et elle est par suite propre à constituer la base voulue pour obtenir un mélange à haute teneur en BCÄA. La commodité économique de l'utilisation de ce mélange est analogue à celle qui a déjà été mise en évidence dans l’Exemple 9.

"η*.· 20 On peut également dans ce cas facilement parvenir à un "mélange élaboré" par intégration avec un pourcentage relativement limité des aminoacides manquants. Les Exemples 10 et 11 qui suivent constituent une démonstration non limitative.* 25 EXEMPLE 10 A 100 g d'un mélange ayant la composition mentionnée dans le Tableau X, obtenu selon les Exemples 2, 4, 7 et 8, on 5 ajoute 1,0 g de méthionine, 6 g de phénylalanine, 5,0 g d'arginine et 2,0 g de tryptophane (l'intégration est par 30 suite limitée à 14 % par rapport au mélange initial). Le mélange élaboré présente la composition en pourcentage précisée dans le Tableau XIII.

35

/U

27

TABLEAU XIII

(Exemple 10)

Thréonine 5,7 (-5,1 - 6,3) Sérine 7,3 (' 6,6 - 8,0) 5 Proline 19,6 (17,6-21,6)

Glycine 3,3 (3,0- 3,6)

Alanine 6,1 (5,5— 6,7)

Valine 9,6 (8,6-10,6) Méthionine 2,8 (2,5-3,1)

Isoleucine 5,4 (4,9- 5,9)

Leucine 11,6 (10,4-12,8) 1o Phénylalanine 5,3 (4,8- 5,8) - Lysine 15,1 (13,6 - 16,6)

Histidine 2,1 (1,9- 2,3)

Arginine 4,4 (4,0- 4,8)

Tryptophane 1,7 (1,5- 1,9) • 15 La présence d'électrolytes dans 100 g de mélange élaboré d'aminoacides est la suivante, par comparaison aux mélanges obtenus dans les Exemples 2-4-7-8 :

Exemple 2 : Cl 0,6 % enpdsde mélange élaboré

Exemple 4 : Cl 1,23 % enpdsde mélange élaboré 20 Exemple 7 : CHgCOO 0,88 % enpdsde mélange élaboré

Exemple 8 : CHgCOO 0,95 % enpds de mélange élaboré

La composition en aminoacides du mélange élaboré, la teneur en BCAA (27,3 % par rapport au total), la teneur en électrolytes (par exemple, absence de cations ; NH3 < 0,02 %) 25 sont parfaitement adaptées aux emplois de cette formulation dans tous les cas dans lesquels ce type de formule peut apporter des améliorations à l'état général des patients, en particulier chez les patients présentant des traumatismes et des infections.

9 30 Le Tableau XIV rassemble les paramètres nutritionnels fondamentaux de la formulation mentionnée dans le Tableau XIII.

L· i 28 TABLEAU XIV (Exemple 10)

Comp, en 5 % après (1) (2) (3) (4) (5) intégrât.

Acide aspartique

Thréonine 5,7 0,600 5,7 401 98 Sérine 7,3 0,858

Acide glutamique

Proline 19,6 2,385 10 Glycine' 3,3 0,616

Alanine 6,1 0,959

Valine 9,6 1,148 9,6 9,6 676 166 Méthionine 2,8 0,263 2,8 197 48

Isoleucine 5,4 0,577 5,4 5,4 380 93

Leucine 11,6 1,239 11,6 11,6 817 200

Tyrosine -r Phénylalanine 5,3 0,449 6,0 422 104 j Lysine 15,1 2,893 15,1 1063 261

Histidine 2,1 0,569

Arginine 4,4 1,415

Tryptophane 1,7 0,233 1,7 120 29 14,200 5779 2776 4076 20 Pour les significations de (1) (2) (3) (4) et (5) voir le tableau XII EXEMPLE 11

En ajoutant par exemple, mais non limitativement, à 100 g du mélange ayant la composition mentionnée dans le Tableau X, -1 g de méthionine, 0,8 g de tyrosine, 3,4 g de 25 phénylalanine, 5 g d'arginine et 1,9 g de tryptophane, on _ obtient la composition suivante en aminoacides du mélange réélaboré.

TABLEAU XV (Exemple 11) ; 30 ________

Thréonine 5,8% (5,2- 6,4) Sérine 7,4% (6,6- 8,2)

Proline 19,9% (17,9-21,9)

Glycine 3,4% ( 3,0 - 3,7)

Alanine 6,2% (5,5- 6,9)

Valine 9,7 % ( 8,7 - 10,7) 35 Méthionine 2,8% (2,5— 3,1)

Isoleucine 5,5% (4,9- 6,1)

Leucine 11,8% (10,6-13,0)

Tyrosine 0,7% (0,67 0,8) i i . --:-- ] i ! f 29

Phenylalanine 3,0 % (· 2,7 - 3,3)

Tryptophane 1,7 % ( 1,5 - . 1,9)

Lysine 15,3 % (13,7 - 16,9)

Histidine 2,1 % ( 1,8 - 2,3) 5 Arginine 4,5 % ( 4,0 - 5,0)

La présence d'électrolytes dans 100 g de mélange élaboré d'aminoacides est la suivante, par comparaison aux mélanges obtenus dans les Exemples 2, 4, î et 8 : 10 Exemple 2 : Cl ^ 0,6 î enpdsde mélange élaboré

Exemple 4: Cl ^ 1,2 % enpdsde mélange élaboré

Exemple 7 : CH^COO ^ 0,9 % enpdsde mélange élaboré

Exemple 8 : CHgCOO . ^ 1,0 % enpdsde mélange élaboré

La composition en aminoacides du mélange élaboré, 15 la teneur en aminoacides à chaîne ramifiée (27,0 % par rapport au total), la teneur en aminoacides essentiels (55,6 % par rapport au total), et la basse teneur en anions, rendent cette formulation propre à tous les cas dans lesquels elle peut apporter des améliorations à l’état général des patients, 20 en particulier aux patients présentant des traumatismes et des infections.

Le tableau suivant résume les paramètres fondamentaux de cette formulation : * - .

» Ί 30

TABLEAU ’XVI

(Exemple 11)

Comp, en % après (1) (2) (3) (4) (5) ^ intégrât.

Acide aspartique /

Thréonine 5,8 0,682 5,8 401 104 Sérine 7,4 0,986

Acide glutamique /

Proline 19,9 2,422 1q Glycine 3,4 0,634

Alanine 6,2 0,975 ' Valine 9,7 1,160 9,7 9,7 671 174 Méthionine 2,8 0,263 2,8 194 50

Isoleucine 5,5 0,587 5,5 5,5 380 99

Leucine 11,8 1,260 11,8 11,8 816 212

Tyrosine 0,7 0,054 | Phénylalanine 3,0 0,254 3,0 208 54 I 15 Tryptophane 1,7 0,233 1,7 118 31 j Lysine 15,3 2,931 15,3 1058 275

Histidine 2,1 0,569

Arginine 4,5 1,447 14,457 55,6 27,0 3846 - *. ^ 20 Pour les significations de (1), (2), (3), (4) et (5), voir le Tableau XII EXEMPLE 12

On emploie une colonne ayant les mêmes caractéristiques que celles mentionnées avant les exemples.

La vitesse de passage ou percolation est, dans le 25 cas spécifique mais non limitatif, de 1,74 volume de solution par heure, et par volume de résine. La solution d * alimentation est constituée par un mélange d1aminoacides ayant les caractéristiques indiquées ci-dessous, dissous dans l’ammoniaque diluée avec un pH final d’environ 10.

ÎL· i/’ ' ii 31 TABLEAU XVII (Exemple 12) g de ΆΑ/1 1 g de ΆΑ/100 g de solution de mélange 5 d'aminoacides

Acide aspartique 2,92 7,29

Thréonine 1,63 4,07 .

Sérine 2,09 5,22

Acide glutamique 10,29 25,71

Proline 5,17 12,92 •jO Glycine 0,93 2,32 ; Alanine 1,61 4,02

Valine 2,97 7,42 Méthionine 1,17 2,92

Isoleucine 1,91 4,77

Leucine 4,01 10,02

Tyrosine 0,10 0,25

Phénylalanine 0,06 0,15 15 Lysine 3,98 9,94

Histidine 1,10 2,75

Arginine 0,09 0,22

Aminoacides totaux g 40,03

On alimente pendant 210 minutes la colonne avec la 20 solution ammoniacale ayant les caractéristiques mentionnées ci-dessus. A la fin de l’alimentation avec la solution ammoniacale d1aminoacides on fait percoler E^O pendant 60 minutes.

Pendant les 90 premières minutes, la solution 25 passée à travers la colonne ne contient pas d'aminoacides.

Après ce temps, on commence la phase de récolte qui se poursuit jusqu'à la fin du passage de E^O. La phase de collecte a par la suite une durée de 180 minutes.

; . Dans le Tableau XVIII, on a mis en évidence les 30 récupérations et bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne. La récupération des aminoacides est de 1,869 g sur 2,009 g (qui représente la récupération théorique en soustrayant de la quantité d'aminoacides chargés dans la colonne, 142 g d'acide aspartique et 455 g d'acide glutamique 35 qui sont adsorbés par la résine), correspondant à 93 % par rapport à la théorie.

Le mélange d'aminoacides obtenu présente un a équilibre entre des aminoacides ayant des caractéristiques 32 acides et des aminoacides ayant des caractéristiques basiques, presque parfait, si bien que -l’addition de petites quantités de bases inorganiques ou organiques· permet d’obtenir, après concentration sous pression réduite, un produit dont la 5 teneur en ammoniaque est inférieure à 0,02 % enpdsd'amino-acides, et à basse quantité de cations présents, si l'on utilise une base inorganique, ou tout simplement exempt de cations et d'anions lorsqu'on utilise une base organique.

Le choix des bases inorganiques ou organiques est dicté par 10 le type d’application auquel le produit est destiné.

* Pour un mélange destiné à l’application parentérale ' , ' . ou entérique, les bases inorganiques utilisées peuvent contenir des cations en quantités physiologiquement utiles ou non dommageables vis-à-vis des états pathologiques auxquels · 15 le produit est destiné, comme par exemple, mais non limitativement, NaOH-KOH-Mg(OH)2_Ca(OH)2 et autres.

En ce qui concerne les bases organiques, on peut citer, mais de façon non limitative, l'arginine qui est lui-même un aminoacide et dont la présence dans les mélanges 20 d'aminoacides destinés aux utilisations mentionnées ci-dessus, est utile, en ce qu'il rentre dans le cycle de Krebs-Henseleit de la formation de l'urée (Meister, A. "Biochemistry of the amino acids” 2nd Ed., Ac press, N.Y., 1965 "Arginine,

Ornithine and Citrulline ; Urea Synthesis", pg. 685-707 ; 25 Najaran, J.S. , Harpey, H.A. , Am. J. Med. 2l_, 832 (1956). A titre d'exemple, on indique que l'addition de 5 méq de NaOH ou de 5 mmoles d'arginine par litre d'éluat collecté après passage sur résine, suivant le procédé décrit ci-dessus, permet d'obtenir, après concentration sous pression réduite, 30 un produit dans lequel l'ammoniaque est inférieur à 0,02 % I enpdsd'aminoacides et à teneur respective en sodium d'environ 0,3 % enpdsd'aminoacides de caractère acide (par l’utilisation de NaOH) ou en arginine devu3 % enpdsd'aminoacides (en utilisant comme base organique, l'arginine).

h 33

TABLEAU XVIII

(Exemple 12) ·· AA .chargés AA récu- Reçu- Comp. '% | sur la .pérés pérat. --—— j colonne % AA en g ^ g g dans 100 g de mélange

Acide aspartique 190 48 25,3 2,6

Thréonine 106 98 92,5 5,3 Sérine 136 126 92,6 6,7

Acide glutamique 670 215 32,1 11,5 Ί0 Proline 337 327 97,0 17,5 i Glycine 61 56 91,8 3,0

Alanine 105 102 97,1 5,5

Valine 193 177 91,7 9,5 * Méthionine 76 56 73,7 3,0 | . Isoleucine 124 114 91,9 6,1

Leucine 261 234 89,7 12,5 ! Tyrosine 6 / j T 5 Phénylalanine 4 / | Lysine 259 252 97,3 13,5 j Histidine 72 58 80,6 3,1 j Arginine 6 6 100,0 0,3

Total 2606 1869 j 20 EXEMPLE 13 ' ~ ‘ | D’après l’Exemple 12, on peut obtenir un mélange d’aminoacides ayant la composition centésimale suivante après passage sur IRA 400 :

TABLEAU XIX

25 (Exemple 13)

Acide aspartique 2,55 % ( 2,2 - 2,8) „ Thréonine 5,26 % { 4,7 - 5,8) I Sérine 6,72 % ( 6,0 - 7,4)

Acide glutamique 11,50 % (10,3 - 12,7)

Proline 17,50 % (15,7 - 19,3) 30 Glycine 2,99 % ( 2,6 - 3,3)

Alanine 5,48 % ( 4,9 - 6,1)

Valine 9,49 % ( 8,5 - 10,5) Méthionine 3,01 % ( 2,7 - 3,3)

Isoleucine 6,11 % ( 5,4 - 6,7)

Leucine 12,55 % (11,2 - 13,8)

Lysine 13,49 % (12,1 - 14,8) 25 Histidine 3,10 % ( 2,7 - 3,4)

Arginine — ( 0 - 8,3)

La teneur en valine + isoleucine + leucine de ces fj mélanges est de 28,15 % par rapport aux autres aminoacides et 34 elle est par suite propre à constituer la base pour obtenir des mélanges, à teneur, élevée an aminoacides à chaîne ramifiée, suivant les études et les expériences déjà signalées dans les Exemples 10-11. La commodité économique 5 d'utilisation de ce mélange est analogue à celle qui a déjà été signalée dans l'Exemple 9.

En ajoutant par exemple, mais non limitativement, à 100 g du mélange mentionné ci-dessus, 3 g de méthionine, 6 g de phénylalanine, 9 g d'arginine et 1,8 g de tryptophane, 10 on obtient la composition suivante en aminoacides du mélange 4 réélaboré : . TABLEAU XX (Exemple 13)

Acide aspartique 2,1 % ( 1,8 - 2,3)

Thréonine 4,4 % ( 3,9 - 4,9) Sérine 5,6 % ( 5,0 - 6,2)

Acide glutamique 9,6 % ( 8,6 - 10,6)

Proline 14,6 % (13,1 - 16,1)

Glycine 2,5 % ( 2,2 - 2,8)

Alanine 4,6 % ( 4,1 - 5,1)

Valine 7,9 % { 7,1 - 8^7) > 20 Méthionine 5,0 % ( 4,5 - 5,5)

Isoleucine 5,1 % ( 4,5 - 5,6)

Leucine 10,5 % ( 9,4 - 11,6)

Phénylalanine 5,0 % ( 4,5 - 5,5)

Lysine 11,3 % (10,1 - 12,5)

Histidine 2,6 % ( 2,3 - 2,9)

Arginine 7,5 % ( 6,7 - 8,2) 25 Tryptophane 1,5 % ( 1,3 - 1,6)

La teneur en électrolytes dans 100 g du mélange élaboré peut être nulle, lorsque dans la préparation du * mélange de base, on se trouve en présence de quantités d'arginine supérieures à 3 % en compositions centésimales 30dàminoacides ou inférieures à 15 méq de cations/g d ' aminoacides si dans le mélange il y a absence d'arginine. La composition en aminoacides du mélange élaboré, la teneur en aminoacides à chaîne ramifiée (23,5 % par rapport au total), la présence éventuelle de petites quantités 35 de cations sont parfaitement propres aux applications de cette formulation dans tous les cas dans lesquels ce type de formule peut apporter des améliorations à l'état général des λ patients, en particulier aux patients présentant des 35 traumatismes et des infections.

Le tableau suivant résume les paramètres . fondamentaux de cette formulation :

TABLEAU XXI

5 (Exemple 13)

Comp. en % après (1) (2) (3) (4) (5) intégrât.

Acide aspartique 2,1 0,221 10 Thréonine 4,4 0,517 4,4 307 87 s Sérine 5,6 0,746

Acide glutamique 9,6 0,914

Proline 14,6 1,777

Glycine 2,5 0,466

Alanine 4,6 0,723

Valine 7,9 0,945 7,9 7,9 550 156 Méthionine 5,0 0,469 5,0 348 99 15 Isoleucine 5,1 0,545 5,1 5,1 355. 101

Leucine 10,5 1,121 10,5 10,5 731 207

Tyrosine - - - - - -

Phénylalanine 5,0 0,424 5,0 348 99

Tryptophane 1,5 0,206 1,5 104 29

Lysine 11,3 2,165 11,3 787 223

Histidine 2,6 0,704 ..·*» 20 Arginine 7,5 2,412 14,355 50,7 23,5 3530

Pour les significations de (1), (2), (3), (4) et (5), voir le Tableau XII - 25 EXEMPLE 14 D'après l'Exemple 12, on peut obtenir un mélange d'aminoacides ayant la composition centésimale suivante après passage sur IRA 400 :

A

36

TABLEAU XXII

• (Exemple 14)

Acide aspartique 2,55 % ( 2,2 - 2,8)

Thréonine 5,26 % ( 4,7 - 5,8) 5 Sérine 6,72 % ( 6,0 - 7,4)

Acide glutamique .11,50 % (10,3 - 12,7)

Proline 17,50 % (15,7 - 19,3)

Glycine 2,99% (2,6-3,3)

Alanine 5,48% (4,9-6,1)

Valine 9,49 % ( 8,5 - 10,5) Méthionine 3,01 % ( 2,7 - 3,3) q Isoleucine 6,11 % ( 5,4 - 6/7)

Leucine 12,55 % (11,2 - 13,8)

Lysine 13,49 % (12,1 - 14,8)

Histidine 3,10 % ( 2,7 - 3,4) ’ Arginine - (0-5,0) 15 En ce qui concerne la teneur en aminoacides à chaîne ramifiée et à commodité économique, s'appliquent les mêmes considérations que celles qui sont mentionnées dans l'Exemple 13.

. En ajoutant, par exemple, mais non limitativement, i 20 à 100 g du mélange mentionné ci-dessus, 1 g de méthionine, j 0,8 g de tyrosine, 3,4 g de phénylalanine, 5 g d'arginine et 1,9 g de tryptophane, on obtient la composition suivante en aminoacides du mélange réélaboré : 25 /k » r 37

TABLEAU - XXIII

(Exemple 14)

Acide aspartique 2,3 % ( 2,0 - 2,5)

Thréonine 4,7 % ( 4,2 - 5,2) ^ Sérine 6,0 % ( 5,4 - 6,6)

Acide glutamique 10,3 % . ( 9,2 - 11,4)

Proline 15,6 % (14,0 - 17,2)

Glycine 2,7 % (2,4 - 3,0)

Alanine 4,9 % ( 4,4 - 5,4)

Valine 8,5 % ( 7,6 - 9,4) Méthionine 3,6 % ( 3,2 - 4,0) •j q Isoleucine 5,5 % ( 4,9 - 6,1) ; Leucine 11,2 % (10,0 - 12,3)

Tyrosine 0,7 % ( 0,6 - 0,8)

Phénylalanine 3,0 % ( 2,7 - 3,3)

Lysine 12,0 % (10,8 — 13,2)

Histidine 2,8 % ( 2,5 - 3,1)

Arginine 4,5 % ( 4,0 - 5,0)

Tryptophane 1,7 % ( 1,5 - 1,9) 15 ---J-

La teneur en électrolytes dans 100 g du mélange élaboré peut être nulle, lorsque dans la préparation du ί mélange de base on se trouve en présence de quantités d'arginine supérieures à 3 % en composition centésimale 20d'aminoacides, ou inférieures à 15 méq de cations/g d'amino-acides si, dans le mélange final, on note une absence d'arginine. La composition en aminoacides du mélange élaboré, la teneur en aminoacides à chaîne ramifiée (25,2 % par rapport au total), la présence éventuelle de petites quantités de 25 cations sont parfaitement propres aux applications de cette formulation dans tous les cas dans lesquels ce type de formule peut apporter des améliorations à l'état général des patients, en particulier aux patients présentant des traumatismes et des infections. Le Tableau XXIV rassemble les paramètres 30 fondamentaux de cette formulation : y : 38

TABLEAU XXIV

(Exemple-14) "

Comp, en % après (1) (2) (3) (4) (5) 5 intégrât.

Acide aspartique 2,3 0,242

Thréonine 4,7 0,552 4,7 337 94 Sérine 6,0 0,799

Acide glutamique 10,3 0,981

Proline 15,6 1,899

Glycine 2,7 0,504 10 Alanine 4,9 0,770

Valine 8,5 1,017 8,5 8,5 610 169 Méthionine 3,6 0,338 3,6 258 72

Isoleucine 5,5 0,587 5,5 5,5 395 110

Leucine 11,2 1,196 11,2 11,2 804 223

Tyrosine 0,7 0,054

Phénylalanine 3,0 0,254 3,0 215 60 - c Tryptophane 1,7 0,233 1,7 122 34

Lysine 12,0 2,299 12,0 861 239

Histidine 2,8 0,759

Arginine 4,5 1,447 13,931 50,2 25,2 3702

20 Pour-les significations de (1), (2), (3), (4) et (5) voir le Tableau ·. XII

EXEMPLE 15

Les conditions opératoires sont identiques à celles mentionnées dans l’Exemple 8, à la seule exception de la 25 concentration et de la composition des aminoacides de la solution de charge (voir Tableau N° XXV).

La quantité d’aminoacides chargée dans la colonne est de 1271,3 g et les teneurs en acide aspartique et en acide glutamique sont respectivement de 79,4 g et 275,0 g.

30 Comme on peut le remarquer dans le Tableau XXV, dans cet exemple la solution d’alimentation, bien qu’elle soit toujours dérivée de la purification d’aminoacides provenant de la caséine, contient de la tyrosine, phénylalanine, arginine qui ne sont pas présentes dans les solutions 35 utilisées dans les autres exemples, si bien qu’il est possible de procéder à l’élimination de ces trois aminoacides par d’autres systèmes.

/] Dans le Tableau XXVI, on mentionne les récupérations 39 et les bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne. Dans les conditions opératoires utilisées dans l'Exemple 15, la tyrosine et la phéhylalanine sont ! , complètement adsorbées à l'égalité de l'acide aspartique et 5 de l'acide glutamique, tandis que l'arginine est élué à partir de la résine conjointement avec d'autres aminoacides. De'la même façon que celle suivie dans les Exemples ’9, 10, 11, 13 et 14, on peut obtenir des formulations adaptées à la nutrition parentérale et entérique.

10 TABLEAU XXV

(Exemple 15) g de AA/1 de g de AA/100 g solution de mélange ammoniacale d1aminoacides 15 -------:-

Acide aspartique 3,2 g 6,24

Thréonine 1,74 g 3,39 Sérine 2,06 g 4,02

Acide glutamique 11,09 g 21,63

Proline 6,12 g 11,94

Glycine 1,20 g 2,34

Alanine 2,05 g 4,00 20 Valine 3,66 g 7,14 Méthionine 1,46g 2,85

Isoleucine 2,67 g 5,21

Leucine 5,22 g ‘ 10,18

Tyrosine 1,5 g 2,93

Phenylalanine 1,5 g 2,93

Lysine 5,03 g 9,81 25 Histidine 1,51 g 2,95

Arginine 1,25 g 2,44

Aminoacides totaux 51,26 g

A

I * * 40

TABLEAU XXVI

(Exemple 15} î

AA chargés AA récu- Récupé- % des AA

2 sur la pérés ration individuels colonne % dans 100 g g g de mélange

Acide aspartique 79,4 0 0 -

Thréonine 43,2 41,6 96,2 5,6 Sérine 51,1 48,8 95,5 6,5

Acide glutamique 275,0 0 0 - 10 Proline 151,8 144,2 95,0 19,4

Glycine 29,8 28,5 95,7 3,8

Alanine 50,8 50,4 99,2 6,8

Valine 90,8 81,7 90,0 11,0 Méthionine 36,2 20,5 56,5 2,7

Isoleucine 66,2 49,8 75,2 6,7

Leucine 129,5 96,9 74,8 13,0 -c Tyrosine 37,2 0 0 -

Phénylalanine 37,2 0 0 -

Lysine 124,7 123,8 99,3 16,6

Histidine 37,4 27,7 74 3,7

Arginine 31,0 30,7 99,0 4,1

Total 1271,3 744,6 20 EXEMPLE 16

La colonne, le type de résine, le volume et la forme ionique sont identiques à ceux mentionnés dans l’Exemple 1. La vitesse de passage est maintenue à 1 volume de solution/ heure/volume de résine. La solution d'alimentation est 25 constituée par un mélange d'aminoacides ayant les caractéristiques mentionnées dans le Tableau XXVII, provenant d'une hydrolyse de farine de soja après des traitements de purification convenables.

' Λ- i g de AA/l de g de AA/100 g solution de mélange 5 ammoniacale d'aminoacides 41

TABLEAU XXVII

(Exemple 16))

Acide aspartique 5,25g 13,8

Thréonine 1,43 g 3,76 Sérine 2,15 g 5,65

Acide glutamique 9,31 g 24,48

Proline 2,75 g 7,23 10 Glycine 2,35 g 6,1

Alanine 2,73 g 7,81

Valine 2,51 g 6,6 Méthionine 0,38 g 0,99

Isoleucine 1,76 g 4,63

Leucine 3,12 g 8,2

Tyrosine j 5 Phénylalanine - -

Lysine 3,51 g 9,23

Histidine 0,77 g 2,02

Arginine - -

Aminoacides totaux 38,02 g 20 On alimente pendant 120 minutes la colonne avec la solution ammoniacale ayant les caractéristiques mentionnées ci-dessus. La quantité d'aminoacides chargée sur la colonne est de 836,44 g et les teneurs en acide aspartique et en acide glutamique sont respectivement de 115,4 g et 204,7 g.

25 A la fin de la phase de charge commence la phase d'élution en utilisant une solution diluée de tampon ammoniacal-chlorure d'ammonium (tampon A).

^ La phase d'élution est de 240 minutes, correspondant à un passage de 44 1 de solution ammoniacale de chlorure 30 d'ammonium. On réunit tout l'éluat. Dans le Tableau XXVIII, on montre les récupérations et les bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne.

La récupération des aminoacides après élution est de 460,2 g sur 516,14 g (cette dernière valeur étant la 35 récupération théorique calculée en soustrayant la quantité des acides aspartique et glutamique de la quantité des aminoacides chargée dans la colonne), correspondant à 89,2 % de la théorie. La teneur en chlore dans le mélange final, exempt 42 d'acides aspartique et glutamique, est de 0,7 %. De la même façon que dans les Exemples 9, 10, 11, 13 et 14, décrits dans ce qui précède, on peut obtenir des. formulations adaptées·’ à 11 application à la nutrition clinique ou également à 5 l'application zootechnique ou vétérinaire, par des additions convenables d ' aminoacides manquants, dans la formulation ' intermédiaire.

TABLEAU XXVIII (Exemple 16) ; 10 ___

AA chargés AA récu- Récupé- % des AA

sur la pérés ration individuels colonne % dans 100 g g g de mélange

Acide aspartique 115,5 0 0 - 15 Thréonine 31,5 31,1 98,7 6,75 Sérine 47,3 42 88,8 9,13

Acide glutamique 204,8 0 0 -

Proline 60,5 55 90,9 11,95

Glycine 51,7 49,2 95,1 10,7

Alanine 60,1 58,6 97,5 12,7

Valine. 55,2 50,3 91,1 10,9 2q Méthionine 8,3 3,6 43,3 0,78

Isoleucine 38,72 31,2 80,6 6,78

Leucine 68,6 52,3 76,2 11/4

Tyrosine - - - -

Phenylalanine - - - -

Lysine. 77,2 76,5 99,1 16,6

Histidine 16,9 10,4 61,5 2,26

Arginine - - - 25 - -

Total 836,44 460,2 EXEMPLE 17

Les conditions de colonne sont identiques à celles 30 utilisées dans les exemples précédents. La phase de charge des aminoacides est effectuée avec une solution de concentration et composition mentionnées dans le Tableau XXIX.

A ; V

0 g de AA/1 de g de AA/100 g j- solution de mélange ammoniacale d'aminoacides 43

TABLEAU XXIX

(Exemple 17)

Acide aspartique 3,15 g 8,34

Thréonine 1,47 g 3,89 Sérine 1/33 g 3,52

Acide glutamique 6,12g 16,2

Proline 2,71 g 7,17 10 Glycine 3,56 g 9,43 i Alanine 3,40 g 9,00

Valine 2,72 g 7,2 Méthionine 1,46 g 3,86

Isoleucine 1,76 g 4,66

Leucine 3,88 g 10,27

Tyrosine - - -j ^ Phénylalanine - - .

Lysine 5,43 g 14,3

Histidine 0,77 g 2,04

Arginine - -

Aminoacides totaux 37,76 g

Le mélange d'aminoacides est obtenu par hydrolyses 20 de farine de poisson, après les passages habituels de purification et décoloration.

La quantité d'aminoacides chargée sur la colonne est de 883,6 g et les teneurs en acide aspartique et en acide glutamique sont respectivement de 73,7 g et 143,2 g. La 25 vitesse de percolation au passage est augmentée à 1,74 volume de solution/heure/volume de résine. Pendant la phase de charge, on n'observe pas la présence d'aminoacides dans la solution passée à travers la colonne.

L'élution est effectuée avec une solution » 30 ammoniacale de chlorure d'ammonium (tampon A). La phase d'élution a une durée de 140 minutes, correspondant à environ 44,6 1 de solution ammoniacale de chlorure d'ammonium. On réunit tout l'éluat.

Dans le Tableau XXX, on met en évidence les 35 récupérations et bilans par rapport aux aminoacides chargés sur la colonne. La récupération des aminoacides après élution est de 585 g sur 666,7 g (qui représente la récupération /] théorique calculée en soustrayant, de la quantité d'amino- 44 acides chargés dans la colonne, les acides aspartique et glutamique), correspondant à 87,7 % de la théorie. La teneur en chlore dans le mélange final exempt d1acide aspartique et d'acide glutamique, est de 1,4 I.

5 De la même façon que dans les Exemples 9, 10, 11, 13 et 14 décrits ci-dessus, on peut obtenir des formulations i .

adaptées à l'application zootechnique vétérinaire et en nutrition clinique, par des additions convenables d'araino-acides manquants dans la formulation intermédiaire.

1° TABLEAU XXX

(Exemple 17)

AA chargés AA récu- Récupé- % des AA

sur la pérés ration individuels colonne % dans 100 g -J5 g Ç de mélange

Acide aspartique 73,7 0 0 - .

Thréonine 34,4 32,2 93,6 5,5 Sérine 31,1 28,3 90,9 4,83

Acide glutamique 143,2 0 0 -

Proline 63,4 55,1 86,9 9,41

Glycine 83,3 80,2 96,2 . .. 13,7 20 Alanine 79,6 77,3 97,1 13,2

Valine 63,6 56 88 9,57 Méthionine 34,2 15,9 · 46,5 2,72

Isoleucine 41,2 32,4 __ 78,6 5,54

Leucine 90,8 69,9 76,9 11,9

Tyrosine - - -

Phénylalanine - - - 25 Lysine 127,1 125,8 98,9 21,5

Histidine 18,0 11,9 66,1 2,03 I Arginine - - - . -

Total 883,6 585,0 30 EXEMPLE 18

Les conditions de colonne sont identiques à celles utilisées dans les exemples précédents. La vitesse de percolation est de 1,74 volume de solution/heure/volume de résine. La quantité d1aminoacides chargée sur la colonne 135 est de 871,0 g et les teneurs en acide aspartique et en acide glutamique respectivement de 107,6 g et 147,2 g. Les valeurs de concentration et de composition centésimale , de la solution d'alimentation dans la phase de charge sont 45 mentionnées dans le Tableau XXXI ci-après. La solution utilisée pour l'élution est le tampon C.

La phase d‘élution par la solution ammoniacale, d'acétate d'ammonium a une durée de 195 minutes, correspondant 5 à un passage d’environ 60 1 de solution ammoniacale d'acétate d'ammonium.

Dans le Tableau XXXII, on montre les récupérations et les bilans par rapport aux aminoacides chargés sur la colonne. La composition en aminoacides mentionnée dans le 10 Tableau XXXI dérive de l'hydrolyse complète, et de la i purification consécutive, d'albumen d'oeuf. De la même façon que dans les Exemples décrits dans ce qui précède, 9, 10, 11, 13 et 14, on peut obtenir des formulations adaptées à la nutrition clinique.

15 TABLEAU XXXI

(Exemple 18) g de AA/1 de g de AA/100 g solution de mélange ammoniacale d'aminoacides 20----

Acide aspartique 4,60 g 12,36

Thréonine 1,87 g 5,02 Sérine 2,69 g 7,23

Acide glutamique 6,29 g 16,90

Proline 1,69 g 4,54

Glycine 1,78 g 4,78 2c Alanine 3,06 g 8,22

Valine 2,83 g 7,60 Méthionine 1,87 g 5,02

Isoleucine 2,28 g 6,13

Leucine 3,83 g 10,29 - ' . Tyrosine - -

Phenylalanine - -

Lysine 3,29 g 8,84 g 30 Histidine 1,14 g 3,06

Arginine - -

Aminoacides totaux 37,22 g . h 46

TABLEAU XXXII

(Exemple 18)

AA chargés AA récu- Récupé- % des AA

sur la pérés ration individuels 5 colonne % dans 100 g g g de mélange

Acide aspartique 107,6 0 0 -

Thréonine 43,8 42,1 96,1 7,8 Sérine 62,9 59,6 * 94,8 11,0

Acide glutamique 147,2 00-

Proline 39,5 37,7 95,5 6,9 1° Glycine 41,7 40,9 95,9 7,4

Alanine 71,6 71,0 99,1 13,1

Valine 66,2 60,9 92,0 11,2 Méthionine 43,8 23,8 54,3 4,4

Isoleucine 53,4 41,6 77,9 7,7

Leucine 89,6 69,7 77,8 12,8

Tyrosine - - - Ί 5 Phénylalanine - - - -

Lysine 77,0 76,6 99,5 14,1

Histidine 26,7 19,6 73,4 3,6

Arginine - - - -

Total 871,0 542,6 i ; 20 EXEMPLE 19

Les conditions de colonne sont identiques à celles utilisées dans les Exemples précédents, bien qu'elles ne soient pas limitatives. La phase de charge est effectuée avec une solution ammoniacale d'aminoacides de concentration et 25 composition indiquées dans ce qui suit.

; /U

.

47

TABLEAU XXXIII

(Exemple 19) g de AA/1 de g de AA/100 g solution de mélange 5 ammoniacale d'aminoacides r

Acide aspartique 5,56 13,9

Thréonine 2,44 6/1 Sérine 1,96 4,9

Acide glutamique 5,52 13,8

Proline 2,76 6,9 - Q Glycine 2,68 6,7

Alanine 2,88 7,2

Valine 3,32 8,3 Méthionine 1,12 2,8

Isoleucine 2,28 5,7

Leucine 4,08 10,2

Tyrosine 0,04 0,1

Phénylalanine 0,04 0,1 15 Lysine 4,32 10,8

Histidine 0,92 2,3

Arginine 0,08 0,2

Aminoacides totaux 40,00

Le mélange d'aminoacides est obtenu par hydrolyses 20 d'un concentrât de protéines dérivé de pommes de terre après les passages habituels de purification et décoloration. Les valeurs mentionnées dans le Tableau XXXIII sont indicatives et non limitatives, et peuvent présenter des écarts qui, de toute façon, permettent toujours l'identification de la source 25 protéique d'origine.

La vitesse de passage ou percolation, le temps de charge de la solution, les temps de traitements et la solution éluante sont similaires à ceux mentionnés dans l'Exemple 8. Dans le Tableau XXXIV, on indique les 30 récupérations et bilans par rapport aux aminoacides chargés sur la colonne.

De la même façon que dans les Exemples décrits dans ce qui précède, on peut obtenir des formulations adaptées à la nutrition clinique ou à d'autres applications, par des 35 additions appropriées d'autres aminoacides (arginine, tryptophane, phénylalanine, tyrosine).

r 48

TABLEAU XXXIV

(Exemple 19) AA chargés AA récu- Récupé- Comp. %

sur pérés ration g de AA

5 colonne * dans 100 g g g de mélange

Acide aspartique 139 0

Thréonine 61 56,7 93,0 8,9 Sérine 49 45,6 93,0 7,2

Acide glutamique 138 0 0 1Q Proline 69 63,5 92,0 10,0

Glycine 67 64,2 95,8 10,1

Alanine 72 69,2 96,1 10,9

Valine 83 74,8 90,1 11,7 Méthionine 28 15,4 54,9 2,4

Isoleucine 57 44,6 78,2 7,0

Leucine 102 78,6 77,1 12,3

Tyrosine 1 1 5 Phénylalanine 1

Lysine 108 107 99,0 16,7

Histidine 23 16,1 70,1 2,5.

Arginine 2 1,9 95,0 0,3

Total 1000 637,6 20 EXEMPLE 20

Les conditions de traitement sont identiques à celles correspondant à l'Exemple 12, bien que n'étant pas limitatives. La phase de charge est effectuée avec une solution ammoniacale 25 d'aminoacides de concentration et composition identiques à ; celles de l'exemple précédent.. Le mélange d'aminoacides est obtenu par hydrolyse d'un concentrât de protéines dérivées de pommes de terre après les passages habituels de purification et décoloration. Les valeurs indiquées dans le 30 Tableau XXXV sont indicatives et non limitatives, et peuvent présenter des écarts qui, de toute façon, permettent toujours l'identification de la source protéique d'origine.

La vitesse de passage ou percolation, le temps de charge de la solution, les temps de traitement sont similaires 35 à ceux mentionnés dans l'Exemple 12.

Dans le Tableau XXXV, on indique les récupérations et bilans par rapport aux aminoacides chargés sur la colonne. λ De· la même façon que dans les exemples décrits ♦ 49 dans ce qui précède, on peut obtenir des formulations adaptées à la nutrition clinique ou à d'autïres applications, par des additions appropriées d'autres aminoacides (arginine, tryptophane, phénylalanine, tyrosine).

5 TABLEAU XXXV

(Exemple 20) AA chargés AA reçu- Récupé- Comp. %

sur la pérés ration g âe AA

colonne % dans 100 g 10. g g de mélange

Acide aspartique 417 108,8 26,1 4,8

Thréonine 183 170,7 93,0 7,5 Sérine 147 162,0 93,1 7,1

Acide glutamique 414 137,4 33,2 6,0

Proline 207 202,8 98,0 8,9

Glycine 201 185,0 92,1 8,1 ^ Alanine 216 209,7 97,1 9,2

Valine 249. 228,8 91,9 10,1 Méthionine 84 61,1 72,8 2,7

Isoleucine 171 159 93,0 7,0

Leucine 306 281,8 92,1 12,3

Tyrosine 0,3

Phénylalanine .0,3 . -=*.

20 Lysine 324 314,3 97,0 13,8

Histidine 69 54,5 79,1 2,4

Arginine 6 6 100,0 0,03

Total 3000 2282,5 __J________ 25 '/''Λ

Claims (10)

50

1. Procédé pour l'élimination totale ou partielle ; des acides aspartique et glutamique à partir d’hydrolysats protéiques ou de mélanges d'aminoacides obtenus par divers 5 traitements, caractérisé en ce qu'il consiste à faire adsorber une solution d'aminoacides sur une résine échangeuse d'ions de type anionique puis à effectuer l'élution'.

2. Leucine 11,8% (10,6-13,0) Tyrosine 0,7% (0,6- 0,8) Phénylalanine 3,0% (2,7- 3,3) Tryptophane 1,7% (1,5-1,9) Lysine 15,3% (13,7—16,9)

25 Histidine 2,1% (1,8-2,3) Arginine 4,5% (4,0- 5,0)

26. Formulation d1aminoacides à teneur en acide aspartique et en acide glutamique inférieure à celle présente dans la protéine de départ, obtenue par le procédé selon l'une 30 quelconque des revendications précédentes, à partir de la caséine, et ayant la composition moyenne suivante : Acide aspartique 2,55% (2,2- 2,8) ! Thréonine 5,26% (4,7- 5,8) | Sérine 6,72% (6,0- 7,4) } 35 Acide glutamique 11,50 (10,3-12,7) Proline 17,50 % (15,7 - 19,3) Glycine 2,99% (2,6- 3,3) i Alanine 5,48% (4,9- 6,1) 55 Valine 9,49 % ( 8,5 - 10,5) Méthionine 3,01 % {2,7-3,3) Isoleucine 6,11 % ( 5,4 - 6,7) Leucine 12,55% (11,2-13,8)

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé 'par le fait que l'on dissout la solution d'aminoacides dans 10 un milieu ammoniacal présentant une valeur de pH supérieure . à 7.

3. .Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé par le fait que la résine échangeuse d'ions . utilisée pour l'adsorption est une résine de type anionique 15 fort.

4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que la solution d'élution des aminoacides est constituée par.une solution ammoniacale. - 20 ' 5. Procédé selon l'une quelconque des . revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que la solution éluante est constituée par un tampon ammoniaque-chlorure d'ammonium.

5 Méthionine 2,16-3,24 Isoleucine 5,6-8,4 Leucine 9,84-14,8 Lysine 11,04-16,6 Histidine 1,92 - 2,88

5 Isoleucine 5,5% (4,9- 6,1) Leucine 11,2% (10,0-12,3)' Tyrosine 0,7% (0,6-0,8) Phénylalanine 3,0% (2,7-3,3) Lysine 12,0% (10,8-13,2)

10 Histidine 2,8 % ( 2,5 - 3,1) t Arginine 4,5% (4,0- 5,0) Tryptophane 1,7% (1,5- 1,9)

29. Formulation d1aminoacides exempte d'acide aspartique et d'acide glutamique, obtenue par le procédé seldh 15 l'une quelconque des revendications précédentes, à partir d'^h concentrât de protéines de pommes de terre, et ayant la composition en pourcentage moyenne suivante : Thréonine 7,12-10,68 Sérine 5,76-8,64

20 Proline 8,0-12,0 Glycine 8,1-12,1 Alanine 8,72-13,1 Valine 9,36-14,04 Méthionine 1,92-2,88

25 Isoleucine 5,6-8,4 Leucine 9,84-14,76 B Lysine 13,36-20,04 .* Histidine 2,0 - 3 Arginine 0 - 0,4

30. Formulation d'aminoacides à teneur réduite eh acide aspartique et en acide glutamique, obtenue par le procédé selon l'une quelconque des revendications précédente®· à partir d'un concentrât de protéines de pommes de terre, ei ayant la composition en pourcentage moyenne suivante ;

35 Acide aspartique 3,84-5,76 il Thréonine 6,0-9,0 ! Sérine 5,7 - 8,52 | . Acide glutamique 4,8-7,2 ! // * 57 Proline 7,12-10,7 Glycine 6.,5-9,72 Alanine 7,36-11,0 Valine 8,1-12,1

5 Lysine 13,49 % (12,1 - 14,8) Histidine 3,10 % { 2,7 - 3,4) . Arginine - ( 0 - 8,3)

27. Formulation d'aminoacides adaptée à l'utilisation en nutrition clinique, caractérisée par le fait 10 qu'elle est obtenue à partir de la formulation suivant la revendication 26 par addition d'autres aminoacides, et ayant la composition moyenne suivante : Acide aspartique 2,1% (1,8-2,3) Thréonine 4,4% (3,9-4,9)

15 Sérine 5,6% (5,0- 6,2) Acide glutamique 9,6% (8,6-10,6) Proline 14,6% (13,1-16,1) Glycine 2,5% (2,2-2,8) Alanine 4,6% (4,1- 5,1)

20 Valine 7,9 % ( 7,1 - 8,7) Méthionine 5,0% (4,5— 5,5) Isoleucine 5,1% ( 4,5 - . 5,6) Leucine 10,5% (9,4-11,6) Phénylalanine 5,0% (4,5- 5,5)

25 Lysine 11,3 % (10,1-12,5) Histidine 2,6 % ( 2,3 - 2,9) Arginine 7,5% ( 6,7 - .8,2) » Tryptophane 1,5% (1,3- 1,6) ·-- 28. Formulation d1 aminoacides adaptée à 30 l'utilisation en nutrition clinique, caractérisée par le fait qu'elle est obtenue à partir de la formulation selon la revendication 26; additionnée d'autres aminoacides, et ayant la composition moyenne suivante : Acide aspartique 2,3% (2,0- 2,5)

35 Thréonine 4,7% (4,2- 5,2) Sérine 6,0 % ( 5,4 - 6,6) Acide glutamique 10,3% (9,2-11,4) Proline 15,6 % (14,0-17,2) » 56 Glycine 2,7 % ( 2,4 - 3,0) Alanine 4,9% (4,4-5,4) Valine 8,5 % ( 7,6 - 9,4) > . Méthionine 3,6% (3,2-4,0)

5 Arginine 4,4% -(4,0 -4,8) Tryptophane 1,7 % ( 1,5 - 1,9) ·

25. Formulation d1aminoacides adaptée à l'utilisation en nutrition clinique, caractérisée par le fait qu'elle est obtenue à partir de la formulation selon la 10 revendication 22, par addition d'autres aminoacides', et ayant la composition moyenne suivante : Thréonine 5,8% (5,2-6,4) Sérine 7,4% (6,6-8,2) Proline 19,9 % (17,9 - 21,9)

15 Glycine 3,4% (3,0- 2,7). Alanine 6,2% (5,5- 6,9). Valine 9,7 % ( 8,7 - 10,7) Méthionine 2,8% (2,5- 3,1) Isoleucine 5,5% (4,9- 6,1)

5 Histidine 2,4% (2,2-2,6)

23. Formulation d'aminoacides adaptée à l'utilisation en nutrition clinique de patients souffrant d'hépatopathie, caractérisée par le fait qu'elle est obtenue à partir de la formulation selon la revendication 22 par 10 addition d'autres aminoacides, et ayant la composition moyenne suivante ; Thréonine ' 5,8% (5,2- 6,4) Sérine 7,5 % ( 6,7 - 8,2) Proline 20,0 % (18,0 - 22,0)

15 Glycine 3,4 % ( 3,1 - 3,7) Alanine 6,3% (5,7- 6,9) Valine 9,8 % { 8,8 - 10,8) Méthionine 2,0% (1,8-2,2) Isoleucine 5,6 % ( 5,0 - 6,2)

20 Leucine 11,9 % (10,7 - 13,1) Phenylalanine 1,4% (1,3- 1,5) Lysine 15,5% (14,0-17,0) Histidine 2,2% (2,0- 2,4) Arginine 7,7 % ( 6,9 - 8,5)

25 Tryptophane 0,9% (0,8- 1,0)

24. Formulation d'aminoacides adaptée à l'utilisation en nutrition clinique, caractérisée par le fait qu'elle est obtenue à partir de la formulation selon la « revendication 22 par addition d'autres aminoacides, et ayant 30 la composition moyenne suivante : Thréonine 5,7% (5,1- 6,3) | Sérine 7,3% (6,6- 8,0) Proline 19,6 % (17,6 - 21,6) Glycine 3,3 % ( 3,0 - 3,6)

35 Alanine 6,1 % ( 5,5 - 6,7) Valine 9,6 % (8,6-10,6) Méthionine 2,8% (2,5- 3,1) λ Isoleucine 5,4 % ( 4,9 — 5,9) k » 54 Leucine 11/6% (10,4-12/8) Phénylalanine 5,3 % "( 4#8 - · 5,8) Lysine .15,1% (13,6-16,6), Histidine 2,1% (1,9-2,3).

6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 25 1 à 3, caractérisé par le fait que la solution éluante est constituée par un tampon ammoniaque-acétate d'ammonium.

7. Procédé pour l'élimination partielle des acides aspartique et glutamique à partir d’hydrolysats protéiques ou de mélanges d'aminoacides obtenus par divers 30 traitements, caractérisé en ce qu'il consiste à faire adsorber une solution d'aminoacides sur une résine échangeuse d'ions de type anionique et à la déplacer ensuite par de l'eau.

8. procédé selon l'une quelconque des 35 revendications 1à.7, caractérisé par le fait que l'on concentre la solution éluée contenant les aminoacides jusqu'à t c obtention d'une suspension par évaporation de la solution aqueuse ou jusqu’à .siccité au moyen d'un dessiccateur à pulvérisation ou par j /) d'autres systèmes. J O '· ! 51

9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1-8, caractérisé par le fait que la substance de départ est constituée par un mélange d'aminoacides obtenus par hydrolyse chimique et/ou enzymatique, de protéines 5 d'origine naturelle, animale ou végétale.

10. Procédé selon la revendication 9, caractérisé par le fait que la protéine d'origine naturelle est la caséine.

11. Procédé selon la revendication 9, caractérisé 10 par le fait que la protéine d'origine naturelle est choisie parmi la farine de poisson, la farine de soja, la farine de sang, les plumes, la gélatine, la peau des bovins, torula, la laine, un résidu protéique d'extrait hépatique, l'albumine, des extraits d'organes, des produits contenant des protéines 15 obtenus par isolement ou enrichissement de la partie protéique par traitement de substances d'origine naturelle tant animale que végétale, tels que des concentrats de protéines de pommes de terre, des concentrats de protéines de gluten, de maïs ou blé de Turquie, des concentrats de 20 protéines du lactosérum et analogues.

12. Procédé selon la revendication 9, caractérisé par le fait que la protéine utilisée est constituée par des rebuts ou déchets d'origine industrielle et/ou agricole présentant une teneur appropriée en protéines.

13. Procédé selon la revendication 9, caractérisé par le fait que le mélange d'aminoacides provient de fermentations industrielles.

14. Formulations d'aminoacides exemptes d'acide aspartique et d'acide glutamique, obtenues par le procédé 30 selon l'une quelconque des revendications précédentes.

15. Formulations d'aminoacides à teneur en acides aspartique et glutamique inférieure à la teneur correspondante dans les protéines de départ, obtenues par le procédé selon | l'une quelconque des revendications précédentes.

16. Formulations d'aminoacides adaptées à l'utilisation en nutrition clinique, caractérisées par le r fait qu'elles sont obtenues à partir des formulations selon la revendication 14 ou 15, auxquelles sont additionnés » m 52

17. Formulations d1aminoaciâes adaptées à l'utilisation en nutrition clinique de patients souffrant d'hépatopathies et d’enfants prématurés, caractérisées par le fait qu'elles sont obtenues à partir des formulations selon 5 la revendication 14 ou 15, auxquelles ont été additionnés d'autres aminoaciâes.

18. Procédé pour l'élimination ou la diminution de l'acide aspartique, l'acide glutamique, la tyrosine, la phénylalanine, dans des hydrolysats protéiques ou dss mélanges 10 d'aminoacides provenant de traitements divers, caractérisé par le fait que l'on opère conformément à l'une quelconque des revendications 1 à 13. .

19. Formulations d'aminoacides exemptes de, ou à teneur réduite en, acide aspartique, acide glutamique, 15 phénylalanine et tyrosine, obtenues par le procédé selon la | revendication 18.

20. Formulations d'aminoacides adaptées à l'utilisation en nutrition clinique, caractérisées par le fait qu'elles sont obtenues à partir des formulations selon la 20 revendication 18 auxquelles ont été additionnés d’autres aminoacides.

21. Formulations d'aminoacides adaptées à l'utilisation en nutrition clinique de patients souffrant d'hépatopathies et d'enfants prématurés, caractérisées par le 25 fait qu'elles sont obtenues à partir des formulations selon la revendication 18 auxquelles ont été ajoutés d'autres aminoacides.

22. Formulation d'aminoacides exempte d'acide aspartique et d'acide glutamique, obtenue par le procédé selon 30 l'une quelconque des revendications précédentes, en utilisant la caséine comme substance de départ, et ayant la composition moyenne suivante : Thréonine 6,5% (5,8-7,1) Sérine 8,3% (7,5- 9,1)

35 Proline 22,3 % (20,1 - 24,5) Glycine 3,8 % (3,4 - 4,2) Alanine 7,0% (6,3-7,7) j Valine 10,9% (9,8-12,0) 53 Méthionine 2,2 % ( 2 - 2,4) Isoleucine 6,2 % ( 5,6 - 6,8) Leucine 13,2% (11,9-14,5)- Lysine 17,2 % (15,5 - 18,9)

10 Arginine 0 -0,4 * VAAJjUv, « i *