LU80809A1 - Procede pour mesurer le temps de regeneration de plaquettes sanguines et dispsitif de dosage pouvant eventuellement etre utilise pour cette mesure - Google Patents

Description

* . »

MEMOIRE DESCRIPTIF

3 | déposé à l'appui d'une demande de

j: BREVET D ' INVENTION

! au nom de la société anonyme dite : "Conseil et Réalisations techniques", en abrégé "C.R.T." et

Roméo RONCUCCI pour : "Procédé pour mesurer le temps de régénération de plaquettes I- sanguines et dispositif de dosage pouvant éventuellement être utilisé pour cette mesure".

Inventeurs : Aloîs, Christian MENCIK, Roméo RONCUCCI, I Jacqueline LANSEN, Patrice d1OULTREMONT.

j’ J La présente invention est relative à un procédé pour r mesurer le temps de régénération de plaquettes sanguines (TRP) par le dosage de la malondialdéhydè dans divers échantillons de i sang inhibé par une dose unique d*un agent inhibiteur de la cyclooxygénase plaquettaire, tel que l'acide acétylsalicylique. / ' » ί - 2 -

Le principe de cette méthode, basée sur l'action irréversible de l'acide acétylsalicylique sur les plaquettes sanguines,est le suivant :

Il est connu que les plaquettes sanguines sont capables de produire une quantité importante d1endoperoxydes à partir d'acide arachidonique. Cette transformation s’opère grâce à un * système enzymatique de cyclooxygénase plaquettaire inhibée de manière irréversible après contact avec l'acide acétylsalicylique. Le dosage d'un des dérivés métaboliques des endoperoxydes, j la malondialdéhyde (ou MDA) produite après induction ex vivo de l'agrégation plaquettaire et ce avant et après administration orale d'une dose unique d'acide acétylsalicylique,constitue une I possibilité d'évaluer le temps de régénération plaquettaire chez l'homme ou chez l'animal d’expérience. En effet, les pla-j guettes ayant été"touchêes" in vivo par l'acide acétylsalicylique | . perdent définitivement leur capacité de produire normalement des endoperoxydes et donc de la MDA. Ce phénomène d'inhibition n'intervient pas pour les plaquettes qui entrent dans la circulation sanguine après l'élimination de l'acide acétylsalicylique et,en ! 1 ' traçant des graphiques appropriés,on peut extrapoler le temps de régénération plaquettaire.

Un des buts essentiels de la présente invention est de ___ présenter un procédé qui peut être rendu entièrement automatique pour la mesure du temps de régénération des plaquettes sanguines par le dosage de la malondialdéhyde plaquettaire. / d * - 3 -

Le procédé suivant 1*invention est caractérisé par le fait que, pour chaque échantillon sanguin, après l'avoir anti-coagulé et après en avoir séparé essentiellement les globules 1 rouges, on effectue : | i - un comptage ou une numération des plaquettes sanguines par | une mesure turbidimétrique; î: - une séparation des plaquettes sanguines de leur milieu plas- \l matique; i1 - un dosage colorimêtrique de la MDA des plaquettes sanguines i | ij ;j après avoir induit le phénomène d'agrégation plaquettaire par ί I * ji un agent inducteur adéquat.

i, i, il L'invention vise également un dispositif de dosage |l particulier, qui permet notamment d'appliquer d'une façon automatique le procédé susdit.

j A cet.égard, suivant l'invention, ce dispositif comprend, pour chaque échantillon, au moins deux éprou-• - vettes montées excentriquement sur un rotor, des moyens pour entraîner ce rotor, des moyens de transfert de liquide pour faire passer l'échantillon d'une éprouvette à l'autre, des moyens d'introduction de liquide dans au moins une des éprouvettes et des moyens d'évacuation du contenu d'au moins une des éprouvettes éventuellement à travers un appareil de mesure.

Dans une forme de réalisation préférentielle du dispositif suivant l'invention, le rotor est agencé de manière à tourner autour d'un axe sensiblement vertical et présente des / a

Ir, — 4 — } I logements pour au moins deux éprouvettes, les moyens de transfert, d'introduction et d'évacuation de liquide comprenant au moins une pipette montée sur un bras mobile permettant de déplacer la pipette d'une éprouvette à l'autre et pouvant être connectée ! à une source d'aspiration et/ou de soufflage, des moyens de posi- I tionnement étant prévus pour placer les éprouvettes et la pipette ; ‘ en correspondance l'une avec l'autre et pour commander les ! > ♦ ! moyens de transfert, d'introduction et d'évacuation de liquide j suivant un cycle programmé.

D'autres détails et particularités de l'invention ressortiront de la description donnée ci-après, à titre d'exemple non limitatif, avec référence aux dessins annexés, d'une j : forme de réalisation particulière d'un procédé et d'un disposi tif pour la mesure automatique du temps de régénération des pla- i ! 1 guettes sanguines, suivant l'invention.

La figure 1 montre schématiquement les différents I stades successifs de cette forme de réalisation particulière du procédé suivant l'invention.

La figure 2 est une vue schématique en coupe transversale et axiale de la forme de réalisation particulière du dispo-; sitif suivant l'invention.

i I1 La figure 3 est une vue suivant la ligne III-III de I __ la figure 2.

Dans les différentes figures, les mêmes chiffres de référence désignent des éléments analogues ou identiques. / i . - 5 - , j

La mesure automatigue du temps de régénération plaquettaire a lieu en deux phases principales, à savoir 1) l.e dosage de la malondialdéhyde sur des échantillons sanguins prélevés d'un sujet au temps t^ avant et aux temps t^, ... t^ après la prise, par un sujet, d’une dose unigue d'un agent altérant de manière irréversible le système cyclooxygénase plaquettaire et [ 2) le traitement informatique du résultat de chaque dosage, de façon à en déduire le temps de régénération plaquettaire.

La phase 1, c'est-à-dire, le dosage automatigue de la ! malondialdehyde selon cette forme de réalisation particulière ! du procédé suivant l'invention, comprend les étapes suivantes, gui sont représentées schémâtiguement par la figure 1 : ! 1°- L'échantillon de sang frais 1, par exemple de l'ordre de i j 10 ml, est anticoagulé par l'adjonction d'environ 1 ml d'une | solution de citrate trisodigue Ojl29 M et est soumis, dans une ! éprouvette 2, à une centrifugation 7 de 200 x g, pendant environ | 10 minutes, de ifaçon à obtenir, d'une part, une fraction légère

S

! 3 3 gui est le plasma sanguin riche en plaquettes (PRP), et, | d'autre part, une fraction lourde 4 contenant principalement 1 . des globules rouges.

j t j 2°- De cette fraction légère 3, dont le volume est d'environ j 5 ml, est extrait un volume constant V par pompage dans l'éprou vette 2. Cette fraction légère passe à travers un appareil photo-sensible 5 pour le comptage des plaquettes par une mesure Ü „ .

' turbidimétrigue. Le nombre N de plaguettes comptées dans ce /

!i volume V est stocké dans une mémoire. /~\J

u - 6 - • t 3°- Ce volume V ayant traversé l'appareil 5 est alors injecté dans une éprouvette 6 qui est soumise à une centrifugation 7' de 2000 xg pendant 15 minutes jusqu'à l'obtention d'une nouvelle fraction légère 8, appelée plasma pauvre en plaquettes, et une fraction lourde 9 comprenant essentiellement les plaquettes. 4°- Cette deuxième fraction légère est envoyée à nouveau vers un appareil photo-sensible. 10 à cellule de comptage.

! Cette deuxième mesure a pour but de corriger la première mesure turbidimêtrique effectuée sur la fraction légère 3 ([ou PRP^pour la turbidité éventuelle due à une forte teneur en lipides plasmatiques. Ainsi, la différence entre le résultat obtenu par la mesure dans la cellule de comptage de l'appareil 5 et celui obtenu dans la cellule de comptage de l'appareil 10 permet de déterminer, pour l'échantillon considéré, le nombr-e net de plaquettes P.

5°- On maintient le pH de cette fraction lourde à une valeur de 1*ordre de 7,4, par exemple au moyen de 2 ml d'un tampon phosphate, et on ajoute, en outre 0,1 ml d'un agent inducteur du phénomène d'agrégation plaguettaire, tel que la N-éthyl- | maléimide ou l'acide arachidonique.

; Cet agent agrégant favorise la production par les '' plaquettes, de la malondiadéhyde.

' L'addition du tampon phosphate et de l'agent agrégant est représentée schématiquement par la flèche 11.

6°- Le mélange est incubé à 37°C et est soumis à l'action d'ultra-sons,comme montré schématiguement par les flèches 12, / f $ - 7 - i ! î | afin de favoriser l'agrégation des plaquettes.

7°- On précipite les protéines en suspension en ajoutant au mélange contenant la malondialdéhyde, ainsi libérée, un acide, par exemple de l'acide perchlorique, comme montré par la flèche 13. Pour favoriser une précipitation complète des protéines, ce mélange est de préférence chauffé à environ 82 °C pendant 10 minutes.

8°- Les protéines précipitées sont éliminées par une troisième centrifugation 15, à 2000x g pendant environ 10 minutes, jusqu'à obtenir à nouveau une fraction légère 16 et une fraction lourde 17.

9°- On ajoute ensuite un réactif colorigène, de préférence une solution d'acide 2-thiobarbiturique à 0,8% (P/V), comme montré par la flèche 14, à la fraction légère 16. Ce réactif de colorimétrie pourrait éventuellement être additionné avant la troisième centrifugation.

10°- Après l'addition de l'acide thiobarbiturique à la fraction légère, le mélange est incubé pendant 10 minutes à 82°C, afin de former un complexe coloré entre la MDA et l'acide thiobarbiturique.

; 11°- Après cette période d'incubation, la solution est aspirée i à travers la cellule d'un colorimètre 19 et la valeur C mesurée dans ce dernier est également stockée en mémoire.

Comme déjà signalé ci-dessus, le dosage automatique de la malondialdéhyde est une opération gui doit être répétée aux temps t , t , t , ... t de façon à obtenir les résultats / i .

I . - 8 -

Le taux de MDA déterminé dans chaque échantillon de PRP est corrigé pour le nombre de plaquettes sanguines présentes dans ce même échantillon. En comparant les taux de MDA ! plaquettaire,après'une. prise unique d'acide acétylsalicylique^ chez un sujet à ceux obtenus avant la prise de cet acide, on peut quantifier le pourcentage d'inhibition de la production j en MDA plaquettaire.

<j Une relation linéaire ou exponentielle entre ce pour-

J

j centage d'inhibition et le temps permet de calculer le temps il de régénération plaquettaire.

i Comme déjà signalé ci-dessus, l'invention concerne également un dispositif de dosage qui peut en particulier être utilisé pour la mise en oeuvre d'une façon automatique du pro- ! cédé décrit ci-dessus.

j

Une forme de réalisation préférentielle d'un tel ! j dispositif a été illustrée par les figures 2 et 3 annexées.

I ’ Cette forme de réalisation du dispositif suivant l'in- ! vention a été construit pour traiter simultanément dix échan- I tillons différents.

! Pour cette raison, il comprend dix groupes, a, b, c, d, ; e, f, g, h, i et j d'éprouvettes montées excentriquement sur un | j rotor 21 tournant autour d'un axe vertical 22.

; Dans le présent cas, chaque groupe est constitué de trois éprouvettes 23,24 et 25 qui sont placées librement dans des logements correspondants prévus dans des supports 26 répartis unifor- j mément sur la périphérie du rotor 21 et pivotant chacun autour/ - 9 - % d'un axe 27 croisant perpendiculairement l'axe 22.

Les éprouvettes d'un même groupe sont décalés radia-j lement les unes par rapport aux autres.

j !

Le rotor 1 peut être entraîné par un moteur 28 à des vitesses et accélérations différentes.

Le dispositif suivant l'invention comprend en outre des moyens de transfert de liquide pour faire passer un échantillon d'une éprouvette déterminée à une autre du même groupe, des moyens d'introduction de liquide dans au moins une des éprouvette et des moyens d'évacuation du contenu d'au moins une des éprouvettes, éventuellement à travers un appareil de mesure, tel qu'un appareil à cellule photo-sensible dnnt question ci-dessus,mais non représenté aux figures 2 et 3.

Dans la forme de réalisation montrée dans ces deux figures, ces moyens de transfert, d'introduction et d'évacuation comprennent une pipette 29 montée sur un bras mobile 30 articulé autour d'un axe 31 sur un bâti fixe 32 par l'intermédiaire d'un montant télescopique 33. Ainsi, ce bras 30 peut se déplacer dans un plan horizontal, comme montré par la flèche 34,et subir un mouvement montant et descendant, comme montré par les flèches 35.

De plus, ce bras est connecté à une source d'aspiration, non représentée, par exemple par une conduite souple 36 ou à une source de soufflage, non plus représentée, par une conduite souple 37.

Le rotor 21 est monté dans une cuve 38 pouvant contenir j S - 10 -

Ce fluide est de préférence constitué par un liquide, tel que de l'eau,et peut être introduit dans la cuve par une canalisation 40 aboutissant dans la paroi latérale de la cuve; une canalisation 21 partant du fond incliné de la cuve permet l'évacuation de ce liquide.

Des têtes émettrices d'ultra-sons 42 sont montées dans le fond de la cuve 38 et permettent d'agir, par l'intermédiaire du liquide 39, sur le contenu des éprouvettes 23 à 25.

Grâce au bras 30, il est possible de transférer des volumes calibrés de liquide d'une éprouvette vers une autre éprouvette du même groupe ou d'un autre groupe,d1 introduire des volumes calibrés de réactif dans dès éprouvettes bien déterminées et d'en extraire des volumes calibrés de solution.

Ce système de pipetage est rendu entièrement automatique grâce à la commande du moteur 28 et du moteur d'entrainement du bras 30 incorporé par exemple dans le bâti 32 mais non représenté aux figures, par l'intermédiaire d'un ordinateur approprié, notamment d'un'mini processeur".

Grâce à cet ordinateur, l'accélération et la décélération de la rotation du rotor peuvent être contrôlées d'une manière entièrement programmée, de même que les séquences de positionnement des groupes d'éprouvettes par rapport au bras 30.

Le moteur 28 est donc programmé de manière à permettre de régler la position angulaire à l'arrêt du rotor par rapport / à la pipette 29. / - 11 - 11 j L'utilisation du dispositif de dosage suivant 11in- i || vention ne se limite donc pas nécessairement à la mesure du j temps de régénération des plaquettes sanguines suivant le pro- ! cédé décrit ci-dessus mais peut avantageusement être employé pour toute opération de dosage ou autres. Il suffit à cet égard d'adapter le programme de l'ordinateur pour la commande ' du cycle des opérations du moteur 28, du bras 30, des têtes i émettrices d'ultra-sons 42, du chauffage ou du refroidissement i | du liquide 39, etc.

i C'est ainsi gue le dispositif suivant l'invention pour rait avantageusement être utilisé pour le dosage automatique d'aldéhydes en général.Dans un tel cas,le procédé à appliquer pourrait se limiter à la mesure turbidimétrigue dans l'appareil photo-sensible 10 montré à la figure 1,1a précipitation des protéines en sus-! pension par l'addition d'un acide comme montré par la flèche 13 dans la figure 1 et au dosage colorimétrique de l'aldéhyde avec addition d'un réactif colorigène approprié comme indiqué par la flèche 14.

Les stades antérieurs à la mesure turbimétrique dans l'appareil 10 étant destinés en particulier à un échantillon ; de sang, pourraient donc être omis pour cette application.

| | Un autre cas qui pourrait encore se présenter est une | numération plaquettaire dans des échantillons de plasma humain î ou animal d'expérience. Dans un tel cas, les opérations illus- i trêes par la figure 1 peuvent être·arrêtées après la première ' mesure turbimétrique dans l'appareil 5 ou éventuellement après I la deuxième mesure turbimétrique dans l'appareil 10 qui pourrait . . - 12 -

Une autre possibilité encore gu'offre le dispositif i suivant l'invention est le dosage de la malondialdéhyde dans le plasme pauvre en plaquettes sans induction au préalable de l'agrégation plaquettaire. Cette méthode contribue en effet » également à l'évaluation d'un état prothrombotique du sujet donneur d'échantillon. Pour un tel dosage le programme de commande du dispositif suivant l'invention pourrait être adapté pour soumettre la fraction légère 8,après la mesure turbimétrigue dans l'appareil 10,à un dosage par colorimétrie de la malon-I dialdéhyde des plaquettes de cette fraction légère après avoir ? induit le phénomène d'agrégation plaquettaire par un agent adé- guat.

Une autre possibilité encore qu'offre le dispositif suivant l'invention est la numération différentielle des plaquettes sanguines dans des échantillons dé plasma d'un même sujet « préparé avec deux mélanges de conservation différents.

Un tel comptage permet d'estimer la présence d'un micro agrégat circulant. Dans ce cas, par le dispositif suivant la forme de réalisation montrée aux figures 2 et 3, on pourrait traiter l * simultanément des échantillons de cinq sujets différents, { (puisque les éprouvettes d'un groupe devraient servir à l'e- chantillon préparé avec un premier mélange de conservation et 1 un autre groupe d'éprouvettes devraient servir pour traiter I _ 5 l'échantillon préparé avec le deuxième mélange de conservation | pour deux échantillons de sang d'un même sujet,prélevés au même ? ï moment. Un tel dosage ne nécessitera donc pas une mesure coloriir/é - * /7 / I - 13 -

'S

trique de plaquettes vivantes, de sorte que l'opération pourrait être arrêtée après le comptage du nombre total des plaquettes par la mesure turbidimétrique. r

Enfin, le dispositif suivant l'invention pourrait en-j core être utilisé pour la préparation de suspensions de plaquet- | tes lavées devant servir à des fins expérimentales ou autres.

I Ceci ne nécessiterait donc pas de mesure turbidimétrique ou !<| colorimé trique.

J1

Il est bien entendu que 1'invention n'est pas limitée à la forme de réalisation particulière du procédé et du disposi-i tif décrits ci-dessus et illustrés par les figures annexées et j que bien des variantes pourraient encore être envisagées sans , 1 | sortir du cadre de la'présente invention.

L.e micro-processeur dont question ci-dessus et qui commande le cyèle des opérations du dispositif suivant l'invention sert avantageusement au traitement informatique des résultats de mesure par les appareils photo-sensibles et par le colo- * rimètre et peut être branché en plus à l'entrée d'appareils j imprimants, à bande ou disgue d'enregistrement magnétique, etc.

1 . .

!Par ailleurs,le nombre de logements ou d’eprouvettes par support peut être très variable. Ainsi, pour la mise en oeuvre du | procédé pour mesurer le temps de régénération de plaquettes san- ] guines,le nombre d'éprouvettes par support 26 pourrait être limité ï Ί à deux. Dans ce cas,l'éprouvette 23 des figures 2 et 3 pourrait * i correspondre à l'éprouvette 2 de la figure 1 et l'éprouvette 24 à î * l'éprouvette 6 de cette dernière figure. On pourrait même prévoir une seule éprouvette par support 26, de sorte gue dans un tel cas

Claims (19)

1. Procédé pour mesurer le temps de régénération de plaguettes sanguines pour le dosage de la malondialdéhyde plaquettaire dans divers échantillons de sang provenant d'un sujet préalablement traité par une dose unique d'un agent inhibiteur de la cyclooxygénase plaquettaire,tel que l'acide acétylsalicylique, caractérisé en ce que, pour chacun des échan-tilbns, après les avoir anticoagulés et en avoir séparé essentiellement les globules rouges, on effectue un comptage du nombre total de plaquettes par mesure turbidimétrique, en ce qu'on sépare les plaquettes sanguines de leur milieu plasmatique et en ce qu'on dose, par colorimétrie, la malondialdéhyde de ces plaquettes après avoir induit le phénomène d'agrégation plaguet-taire par un agent adéquat.

2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'on effectue, sur un même échantillon, le comptage du nombre total de plaquettes par une double mesure turbidimétrique, une première mesure ayant lieu sur la fraction de l'échantillon i ! - essentiellement exempte de globules rouges, la deuxieme mesure turbidimétrique ayant lieu sur la partie de cette fraction essentiellement exempte de lipides plasmatiques, le résultat de cette deuxième mesure étant soustrait du résultat de la première mesure de manière à obtenir une valeur correspondant au nombre net de plaquettes contenues dans l'échantillon considéré/ ! · I - 15 -

3,- Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que, pour séparer les globules rouges d'un échantillon, on soumet ce dernier à une centrifugation I en formant une fraction légère contenant le plasma sanguin ri- i ehe en plaquettes et une fraction lourde contenant principale ment les globules rouges et en ce qu'on effectue le comptage \ I susdit sur cette fraction légère.

4. Procédé suivant la revendication 3, caractérisé H |i en ce que, pour le comptage susdit, on fait passer en continu j: j; la fraction légère à travers le champ d'un appareil photo-sen sible, et en ce qu'on soumet ensuite cette fraction à une nouvelle centrifugation plus poussée qui est telle à former une deuxième fraction légère ou plasma pauvre en plaquettes et une deuxième fraction lourde contenant essentiellement les plaquettes, en ce qu'on fait passer cette deuxième fraction légère à ! travers le champ d'un appareil photo-sensible et en ce qu'on détermine la différence entre les deux valeurs enregistrées par l'appareil photo-sensible pour obtenir le nombre net total de plaquettes.

5.- Procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce qu'on ajoute à la deuxième fraction lourde un tampon phosphate, pour maintenir le pH à 7,4, et l'agent d'agrégation sus- Γ dit pour favoriser la production de la malondialdéhyde, en ce ï * j' qù'on libère la malondialdéhyde régénérée par les plaquettes, en ce qu'on précipite les protéines en solution par l'addition d'un acide, en ce qu'on sépare, par centrifugation, les I !.. - 16 - ί protéines précipitées, en ce qü'on ajoute un réactif colorigène à la fraction légère résultant de cette centrifugation, en ce qu'on chauffe ce mélange pour favoriser la réaction entre la malondialdéhyde et le réactif colorigène et en ce qu'on fait r passer ensuite la solution dans un colorimètre.

6. Procédé suivant la revendication 5, caractérisé en ce qu'on libère la malondialdehyde en soumettant la solution \ j à l’action d'ultra-sons, en ce qu'on précipite les protéines par l'addition d'acide perchloriqae, en ce qu'on utilise de l'acide thiobarbiturique comme réactif colorigène et en ce qu'on soumet la fraction légère résultant de la centrifugation et l'acide thiobarbiturique à une incubation à environ 82°C pendant environ 10 minutes avant de la passer au colorimètre.

7. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 4 à 6, caractérisé en ce qu'on centrifuge 1'échantillon,pour en séparer les globules rouges,à une force centrifuge comprise entre 150 x g et 250 xg, de préférence de l'ordre de 200 xg, . pendant une durée comprise entre 15 et 5 minutes, de préférence de l'ordre de lO minutes, et en ce qu'on centrifuge la fraction légère résultant de cette première centrifugation à une force comprise entre 1500 xg et 2500xg, de préférence de l'ordre de —- 2000x g pendant une durée comprise entre 20 et 10 minutes, de préférence de l'ordre de 15 minutes, dans chacune de ces deux centrifugations,les durées les plus courtes correspondant/ aux forces centrifuges les plus grandes. /" / { • · - 17 - j

8,- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 5 à 7/ caractérisé en ce qu'on centrifuge la solution contenant les protéines précipitées à une force compri-se entre 1500X g et 2500x g, de préférence de l’ordre de 2000X.g, ] pendant une durée comprise entre 15 et 5 minutes, de préférence de l'ordre de 10 minutes, les durées les plus courtes corres- r pondant aux forces centrifuges les plus grandes.

9. Procédé suivant l'une quelconque des revendica- ] tions 5 à 8, caractérisé en ce que, après l'addition de l'agent |j d'agrégation, on soumet le mélange simultanément à l'action Λ I d'ultra-sons et à une incubation à une température comprise entre !« ij 36 et 38°C, et de préférence de l'ordre de 37°C, pendant environ j! 15 minutes. !;

10. Procédé pour mesurer le temps de régénération jj j| de plaquettes sanguines tel que décrit ci-dessus ou résultant 13 | des dessins annexés. π * lïj J] 11,- Dispositif de dosage, notamment pour mesurer le ! temps de régénération de plaquettes sanguines par le dosage j de la malondiadéhyde des plaquettes sanguines avant et après j l'administration orale d'un agent capable d'inhiber irréversi- !; | blement le système de cyclooxygénases plaquettaires, tel que j l'acide acétylsalicylique, caractérisé en ce qu'il comprend, pour chaque échantillon, au moins deux éprouvettes montées* 1 excentriquement sur un rotor, des moyens pour entraîner le ro tor, des moyens de transfert de liquide pour faire passer l'é- - 18 - de liquide dans au moins une des éprouvettes et des moyens d'ê-I vacuation du contenu d'au moins une des éprouvettes éventuel lement à travers un appareil de mesure.

12. Dispositif suivant la revendication 11, carac- ! térisé en ce que le rotor est agencé de manière à tourner j I autour d'un axe sensiblement vertical et présente des logements pour au moins deux éprouvettes, les moyens de transfert, d'introduction et d'évacuation de liquide comprenant au moins une pi- t ; pette montée sur un bras mobile permettant de déplacer la pipette d'une éprouvette à l'autre et pouvant être connecté à une i- source d'aspiration et/ou de soufflage, des moyens de position-i nement étant prévus pour placer les éprouvettes et la pipette | en correspondance l'une avec l'autre et pour commander les ! moyens de transfert, d'introduction et d'évacuation de liquides ! suivant un cycle programmé.

13. Dispositif suivant la revendication 12, caracté- I . risé en ce qu'il comprend un moteur permettant d'entraîner le i rotor autour de l'axe vertical susdit et programmé d'une maniè- I * re telle à permettre, d'une part, de régler la position angulaire ; à l'arrêt du rotor par rapport à la pipette et, d'autre part, j de soumettre le rotor, et par conséquent les éprouvettes placées | dans les logements précités, à des vitesses et accélérations prédéterminées pèndant des temps prédéterminés.

14.- Dispositif suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comprend des moyens de chauffage et/ou de refroidissement pour amener et maintenir / \ * * — 19 — 3 ϊ j i la température des échantillons à une température déterminée.

15. Dispositif suivant la revendication 14, caractérisé en ce que les moyens de chauffage et/ou de refroidissement !| comprennent un bain d'un fluide de chauffage ou de refroidis sement entourant au moins partiellement les éprouvettes susdites.

16. Dispositif suivant la revendication 13, caractérisé en ce que le rotor est monté dans une cuve pouvant contenir le bain susdit formé- d'un liquide, au moins une tête émettrice d'ultra-sons étant prévue pour agir, par l'intermédiaire du liquide, sur le contenu des éprouvettes.

17. Dispositif suivant l'une quelconque des revendications 11 à 16, caractérisé en ce que les moyens d'évacuation susdits comprennent, pour la solution à faire passer dans le colorimètre, une conduite dont une des extrémités peut plonger dans une éprouvette, à une certaine distance du fond de ce dernier, et dont l'autre extrémité est raccordée à la cellule du a colorimètre, cette cellule étant branchée sur une source d'aspiration .

18. Dispositif suivant l'une quelconque des revendications 11 à 17, caractéris’é en ce que les moyens de transfert du liquide sont branchés sur au moins un appareil photo-sensible de mesure pour faire passer l'échantillon d'une éprouvette à î ; l'autre à travers cet appareil.

19. Dispositif suivant l'une quelconque des revendications 12 à 18, caractérisé en ce que les logements sont prévus dans un support pivotant autour d'un axe croisant sensiblement^/ perpendiculairement l'axe de rotation du rotor.

20.- Dispositif de dosage tel que décrit ci-dessus ou montré aux dessins annexés. ! “ -;n' :—1 Γ-'::Πγ^3 f i 3Ö r.' -VU /---pane da G3rt- | 2 ' ......pacte JC description j! 3 P^ss de revendications I 17 abrégé descriptif LuxernboitpJe 0Λ. i. Le j( ^—<iiaries München i: i [ j A