LU505204B1 - Ein vogelnest-polypeptid und ein verfahren zu dessen herstellung - Google Patents
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Abstract
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Vogelnest-Polypeptid und ein Verfahren zu seiner Herstellung, umfassend die Herstellung einer Mutterlauge durch Einweichen von Vogelnest in einer Pufferlösung, die Vermeidung der thermischen Zersetzung von Sialinsäure durch Desinfektion mit ultravioletter Strahlung bei Raumtemperatur, die Herstellung eines Vogelnest- Polypeptids mit einer Molekulargewichtskonzentration bei 200-3000Da durch abgestufte enzymatische Hydrolyse und die Reinigung des hergestellten Polypeptids durch Zentrifugation, Ultrafiltration und Gefriertrocknung. Das so gewonnene Peptidpulver kann in den Bereichen Lebensmittel, Gesundheitsprodukte und Kosmetika eingesetzt werden.
Description
Ein Vogelnest-Polypeptid und ein Verfahren zu dessen Herstellung LU505204
Technischer Bereich
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf den technischen Bereich der Polypeptide, die im
Bereich der Lebensmittel, Gesundheits- und Hautpflegeprodukte eingesetzt werden können.
Technologie im Hintergrund
Vogelnest ist reich an Speichelsäuren, Proteinen, epidermalem Wachstumsfaktor und anderen bioaktiven Stoffen. Eine angemessene Aufnahme kann die Entwicklung des Gehirns und die
Zellreparatur fördern und die menschliche Immunität stärken. Untersuchungen zeigen, dass der
Proteingehalt von getrocknetem Vogelnest zwischen 66,61% und 67,97% liegt, was für die
Aufnahme durch den Menschen nicht forderlich ist, insbesondere fiir Menschen mit schwacher
Darmfunktion. Peptide, insbesondere solche mit einem Molekulargewicht von weniger als 3KDa, können vom menschlichen Körper besser aufgenommen werden und die Wirksamkeit der
Wirkstoffe in Vogelnest durch enzymatische Hydrolyse maximieren.
Inhalt der Erfindung
Auf dieser Grundlage werden ein Vogelnest-Polypeptid und ein Verfahren zu dessen
Herstellung bereitgestellt, und das hergestellte Vogelnest-Polypeptid kann in den Bereichen
Lebensmittel, Gesundheitspflegeprodukte und Kosmetika verwendet werden.
Die Herstellung des Vogelnest-Polypeptids umfasst einen enzymatischen Schritt: Entnahme einer Vorbehandlungslôsung von Vogelnest, Einstellen der Temperatur auf 40-50°C und des pH-
Werts auf 6-7, Zugabe von 3000-5000 U/g einer ersten Protease und enzymatische Reaktion für 3- 4h und anschließende Erhöhung der Temperatur auf 80-90°C zur Inaktivierung des Enzyms fur 15-20min; Stellen Sie die Temperatur 40-50°C, pH-Wert von 9-10, fügen Sie 4000-7000U / g der zweiten Protease, enzymatische Reaktion 2-3h, Erwärmung, um das Enzym zu inaktivieren, um die Enzymlôsung zu erhalten.
Die Herstellung des Vogelnestpeptids umfasst außerdem einen Vorbehandlungsschritt, der dem enzymatischen Verdauungsschritt vorausgeht, wobei der Vorbehandlungsschritt wie folgt abläuft: Die Vogelnestvorbehandlungslôsung wird durch das folgende Verfahren hergestellt: Man nimmt getrocknetes Vogelnest und zerkleinert es zu Pulver, siebt es, nimmt 80-100 mesh, lässt es in einer Pufferlôsung mit einem pH-Wert von 6-7 entsprechend dem Material-Flüssigkeits-
Verhältnis von 1g: 40-60 ml bei Raumtemperatur einweichen, sterilisiert es durch kontinuierliche
Bestrahlung mit ultraviolettem Licht bei einer Wellenlänge von 250-270nm fiir 0,5-1h und lässt es für eine Zeit von 6-8h einweichen, um die Vogelnest-Vorbehandlungslôsung zu erhalten.
Die Herstellung des Vogelnestpeptids umfasst auch einen Reinigungsschritt, wobei der
Reinigungsschritt nach dem enzymatischen Verdauungsschritt erfolgt, wobei der
Reinigungsschritt wie folgt abläuft: Nehmen Sie die enzymatische Lösung und kühlen Sie sie auf
Raumtemperatur ab, zentrifugieren Sie sie 5-10 Minuten lang unter der Bedingung von 3000-5000
U/min, nehmen Sie den Uberstand und ultrafiltrieren Sie ihn durch eine Ultrafiltrationsmembran mit einem Molekulargewichts-Cut-off von 3kDa, und gefrieren Sie ihn dann, um das
Vogelnestpeptidpulver zu erhalten.
Detaillierte Beschreibung
Um das Verständnis der vorliegenden Erfindung zu erleichtern, wird sie im Folgenden unter
Bezugnahme auf Ausführungsbeispiele ausführlicher beschrieben. Die vorliegende Erfindung kann jedoch in vielen verschiedenen Formen umgesetzt werden und ist nicht auf die hier beschriebenen Ausführungsformen beschränkt. Vielmehr dienen diese Ausführungsformen dazu,
ein gründlicheres und umfassenderes Verständnis der Offenbarung der vorliegenden Erfindung A 505204 ermöglichen.
Sofern nicht anders definiert, haben alle hierin verwendeten technischen und wissenschaftlichen Begriffe die gleiche Bedeutung, wie sie dem Fachmann im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung geläufig ist. Begriffe, die hier in der Beschreibung der vorliegenden
Erfindung verwendet werden, werden nur zum Zweck der Beschreibung bestimmter
Ausführungsformen verwendet und sollen die Erfindung nicht einschränken.
Ausführungsform 1
Ein Vogelnest-Polypeptid wird nachfolgendem Verfahren hergestellt: 1, Vorbehandlung.
Nehmen Sie 50ml einer 0,1 mol-L* KH2PO4-Losung, fügen Sie 15,2ml einer 0,1 mol-L™!
NaOH-Lôsung hinzu und verdünnen Sie sie mit Wasser auf 100ml, um eine Pufferlôsung mit einem pH-Wert von 6,5 für die Reserve herzustellen. lg Vogelnest (Bubble Bio-technology Co., Ltd.) wird entsprechend dem Material-
Flussigkeits-Verhéltnis von 1 : 40 (g : mL) in den obigen Puffer eingewogen, durch kontinuierliche
Bestrahlung mit UV-Strahlung von 250-270nm Wellenlänge fiir 0,5h sterilisiert und dann für 12h bei Raumtemperatur gelagert, um das Masterbatch (d.h. die Vorbehandlungslôsung des Vogelnests) als Reserve zu erhalten. 2, Enzymatische Verdauung.
Die obige Vogelnest-Mutterlauge wurde in ein Wasserbad bei 55°C gestellt, Puffer wurde hinzugefügt, um den pH-Wert auf 6,5 einzustellen, 25 mg Papain (200 U/mg, Shanghai McLean
Biochemical Science and Technology Co., Ltd.) wurde hinzugefiigt, und die enzymatische
Reaktion wurde für 4h durchgeführt. Nachdem das Enzym inaktiviert wurde, wurde die
Temperatur für 15 min auf 90°C erhöht; Die Temperatur wurde auf 50°C gesenkt, der pH-Wert auf 9,5 eingestellt, 35 mg alkalische Protease (200 U/mg, Shanghai McLean Biochemical Technology
Co., Ltd.) und 80mg neutrale Protease (50 U/mg, Shanghai McLean Biochemical Technology Co.,
Ltd.) zugegeben und dann erwärmt, um das Enzym nach der Reaktion fiir 3h zu inaktivieren. 3, Die Reinigung.
Nach dem Abkühlen 5 Minuten lang bei 4500 U/min zentrifugieren, den Uberstand durch eine Ultrafiltrationsmembran mit einem Molekulargewichts-Cut-off von 3kDa ultrafiltrieren und gefriertrocknen, um 0,86g Vogelnest-Peptidpulver zu erhalten.
Ausführungsform 2
Ein Vogelnest-Polypeptid wird nachfolgendem Verfahren hergestellt: 1, Vorbehandlung.
Man nimmt 50mL einer 0,1 mol-L' KH2PO-Losung, fügt 15,2mL einer 0,1 mol-L* NaOH-
Lösung hinzu und verdünnt mit Wasser auf 100mL, um eine Pufferlôsung mit einem pH-Wert von 6,5 fiir die Reserve herzustellen.
Ig Vogelnest entsprechend dem Material-Flüssigkeits-Verhältnis von 1 : 40 (g : mL) in destilliertes Wasser einwiegen, durch kontinuierliche Bestrahlung mit ultraviolettem Licht der
Wellenlänge 250-270nm für 0,5h sterilisieren und für 12h bei Raumtemperatur eintauchen, um die
Vogelnest-Mutterlauge (d.h. die Vogelnest-Vorbehandlungslôsung) für die Reserve zu erhalten. 2, Enzymatische Verdauung.
Legen Sie die oben genannten Vogelnest-Mutterlauge in einem Wasserbad bei 40°C, stellen
Sie den pH-Wert auf 6,5, fügen Sie 20mg Ananas-Protease (300 U/mg, Shanghai McLean
Biochemical Science and Technology Co., Ltd.), die enzymatische Reaktion für 4h, und erhöhen
Sie dann die Temperatur auf 65°C, um das Enzym für 8 min zu inaktivieren; Die Temperatur witd/505204 auf 50°C gesenkt, der pH-Wert auf 9,5 eingestellt, 100 mg neutrale Protease (50 U/mg, Shanghai
McLean Biochemical Technology Co., Ltd.) zugegeben, die Reaktion wird 8 Minuten lang auf 65°C erwärmt, nachdem das Enzym inaktiviert wurde. 3, Die Reinigung.
Nach dem Abkühlen 5 Minuten lang bei 4500 U/min zentrifugieren, den Überstand durch die
Ultrafiltrationsmembran mit einem Molekulargewichts-Cut-off von 3kDa ultrafiltrieren und gefriertrocknen, um 0,74 g Vogelnest-Peptidpulver zu erhalten.
Claims (7)
1. Das Vogelnest-Polypeptid, wobei der Gehalt des Polypeptids mit einem Molekulargewicht zwischen 200-3000 Da 70-90% (w/w) und der Gehalt an Speichelsäure 10-15% (w/w) beträgt.
2. Die Herstellung des Vogelnest-Polypeptids nach Anspruch 1 umfasst den enzymatischen Schritt: Nehmen der Vogelnest-Vorbehandlungslösung, Einstellen der Temperatur auf 40-50°C, Einstellen des pH-Werts auf 6-7, Zugeben von 3000-5000U/g der ersten Protease, die enzymatische Reaktion für 3-4h, und dann Erhöhen der Temperatur auf 80-90°C, um das Enzym für 15-20min zu inaktivieren; Passen Sie die Temperatur 40-50°C, stellen Sie den pH-Wert von 9- 10, fügen Sie 4000-7000U/g der zweiten Protease, enzymatische Reaktion 2-3h; Temperatur Inaktivierung, das Enzym-Lösung.
3. Ein Vogelnest-Polypeptid nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass die erste Protease aus einer oder zwei der folgenden ausgewählt ist: Papain, Ananasprotease; die zweite Protease aus einer oder zwei der folgenden ausgewählt ist: alkalische Protease, neutrale Protease, Trypsin.
4. Ein Vogelnest-Polypeptid nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Herstellung des Vogelnestpeptids außerdem einen Vorbehandlungsschritt umfasst, wobei der Vorbehandlungsschritt vor dem enzymatischen Verdauungsschritt stattfindet und der Vorbehandlungsschritt darin besteht, dass die Vogelnestvorbehandlungslôsung durch das folgende Verfahren hergestellt und erhalten wird: Man nimmt trockenes Vogelnest und zerkleinert es zu Pulver, siebt es, nimmt 80-100 mesh, weicht es in einer Pufferlôsung mit einem pH-Wert von 6-7 bei Raumtemperatur entsprechend dem Material-Flüssigkeits-Verhältnis von 1g: 40-60mL ein, sterilisiert es durch kontinuierliche Bestrahlung mit ultraviolettem Licht mit einer Wellenlänge von 250-270nm für 0,5-1h und weicht es für eine Zeit von 6-8h ein, d.h., um die Vogelnest- Vorbehandlungslôsung zu erhalten.
5. Ein Vogelnest-Polypeptid nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Herstellung des Vogelnest-Peptids ferner einen Reinigungsschritt umfasst, wobei der Reinigungsschritt nach dem enzymatischen Hydrolyseschritt erfolgt, wobei der Reinigungsschritt darin besteht: die enzymatische Hydrolyselésung zu nehmen und sie auf Raumtemperatur abzukühlen, sie 5-10 Minuten lang bei 3000-5000 U/min zu zentrifugieren, den Uberstand zu nehmen und ihn durch eine Molekulargewichts-Cut-off-Membran mit einem Molekulargewicht von 3kDa zu ultrafiltrieren und ihn gefrierzutrocknen, um das Vogelnest-Polypeptidpulver zu erhalten.
6. Die Vogelnest-Vorbehandlungslôsung nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Herstellung der Vogelnest-Vorbehandlungslôsung ferner die Herstellung einer Pufferlôsung mit einem pH-Wert von 6-7 umfasst, wobei die Pufferlôsung in den folgenden Schritten hergestellt wird: Man nimmt 50mL einer 0,1 mol-L' KH:PO4-Lôsung, fügt 5,7-29,63mL einer 0,1 mol-L* NaOH-Lôsung hinzu und verdünnt sie mit Wasser auf 100mL.
7. Die Vogelnest-Vorbehandlungslôsung nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Herstellung der Vogelnest-Vorbehandlungslôsung ferner eine Niedrigtemperatur-Sterilisation umfasst, wobei die Niedrigtemperatur-Sterilisation Folgendes umfasst: kontinuierliche Bestrahlung mit ultraviolettem Licht bei einer Wellenlänge von 250-270nm für 0,5-1h.
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Effective date: 20240328 |