LT5435B - Vakcinos kompozicijos mišinys su alkilfosfatidilcholinu - Google Patents

Vakcinos kompozicijos mišinys su alkilfosfatidilcholinu Download PDF

Info

Publication number
LT5435B
LT5435B LT2006036A LT2006036A LT5435B LT 5435 B LT5435 B LT 5435B LT 2006036 A LT2006036 A LT 2006036A LT 2006036 A LT2006036 A LT 2006036A LT 5435 B LT5435 B LT 5435B
Authority
LT
Lithuania
Prior art keywords
response
vaccine
antigen
ethyl
phosphatidylcholine
Prior art date
Application number
LT2006036A
Other languages
English (en)
Other versions
LT2006036A (lt
Inventor
Jean Haensler
Original Assignee
Sanofi Pasteur
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanofi Pasteur filed Critical Sanofi Pasteur
Publication of LT2006036A publication Critical patent/LT2006036A/lt
Publication of LT5435B publication Critical patent/LT5435B/lt

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/675—Phosphorus compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pyridoxal phosphate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/215—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16111—Cytomegalovirus, e.g. human herpesvirus 5
    • C12N2710/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16311—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV regulatory proteins
    • C12N2740/16334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Išradimas yra susijęs su farmacine kompozicija, turinčia bent vieno vakcinos antigeno. Išradimo kompozicija yra besiskirianti tuo, kad joje yra bent vieno fosfatidilcholino fosfatinio esterio darinio, kurio struktūra atitinka I formulę, kurioje R1 yra žemesnysis alkilas, o R2 ir R3 yra vienodi arbaskirtingi, ir kiekvienas iš jų gali reikšti linijinio angliavandenilio grandines, turinčias 13-21 anglies atomą.

Description

VAKCINOS KOMPOZICIJA, SUMAIŠYTA SU ALKILFOSFATIDILCHOLINU
Sis išradimas priklauso vakcinų sričiai, konkrečiau adjuvantinėms vakcinoms. Konkrečiau, šis išradimas yra susijęs su farmacinėmis kompozicijomis, kuriose yra bent vienas vakcininis antigenas ir bent vienas fosfatidilcholino fosfatinio esterio darinys. Pagal ankstesnį technikos lygį yra žinoma praktika vakcinoje esančių antigenų imuniniam atsakui padidinti arba orientuoti, panaudojant adjuvantus. Tai gali būti pageidautina todėl, kad antigenas, kai jis naudojamas vienas, yra nepakankamai imunogeniškas, ypatingai dėl to, kad jis yra labai didelio grynumo laipsnio, arba todėl, kad kadangi norima padidinti vakcinoje esančių antigenų kiekį arba pakartotiniems skiepams gauti, arba kitu atveju todėl, kad yra pageidaujama pailginti vakcinos suteikiamos apsaugos trukmę. Kai kuriais atvejais tai yra daugiau kokybės, o ne kiekybės klausimas modifikuojant sukeltą atsaką.
Nors pagal ankstesnį technikos lygį yra gausybė pasiūlytų produktų, kurie gali būti naudojami kaip adjuvantai, reikia pažymėti, kad dauguma adjuvantinių vakcinų, kurios yra autorizuotos su prekės ženklais žmonių medicinai, adjuvantais turi aliuminio druską arba emulsiją.
Dabartiniu metu yra nemažas pareikalavimas naujų prieinamų adjuvantų, kurių savybės duotų galimybę modifikuoti imuninį atsaką, tuo pačiu metu išlaikydamos visiškai saugaus vartojimo savybes.
Be to, kitoje srityje, kuri yra transfekcijos sritis, buvo pasiūlytas katijoninių lipidų panaudojimas. Tokiu būdu, pavyzdžiui, publikacijoje, pavadintoje “Modulation of Cellular Immune Response Against Hepatitis C Virus Nonstructural Protein 3 by Cationic Liposome Encapsulated DNA Imunization”, tirtas keleto katijoninių lipidų, sudarančių liposomas, sugebėjimas pernešti dominančią plazmidės DNR į ląsteles. Ši publikacija yra reikšminga vakcinų srityje, kadangi transfekuota DNR koduoja antigenus, prieš kuriuos norima gauti imuninės sistemos atsaką. Kad būtų gaunamas geras imuninis atsakas, pirmiausia reikia, kad būtų ekspresuojamas antigenas ir tokiu būdu DRN “paduodama” geriausiomis sąlygomis ląstelėms, galinčioms ją ekspresuoti. Transfekuojančių agentų, kurie veikia kaip DNR “transporteris”, vaidinamas vaidmuo skiriasi nuo adjuvanto vaidmens, kuris lydi vakcinos antigeną, esantį farmacinėje kompozicijoje. Šios publikacijos autorių gauti rezultatai rodo, kad gautas atsakas yra didesnis, kai DNR yra transportuojama liposomų pagalba, lyginant su tuo, kai DNR yra įleidžiama “apnuoginta”; vis dėlto, priklausomai nuo liposomoms suformuoti naudojamų lipidų prigimties, varijuoja gautų atsakų prigimtis ir intensyvumas.
Nepaisant gausios literatūros apie įvairius produktus, kurie gali būti naudojami kaip adjuvantai, vis tik išlieka poreikis produkto, kuris galėtų būti naudojamas be rizikos organizmui, į kurį jis yra įvedamas, ir kuris galėtų padidinti ir (arba) modifikuoti imuninės sistemos atsaką į vakcinos antigeną, su kuriuo jis yra įvedamas.
Vienas iš šio išradimo tikslų yra pateikti tokį produktą.
Kitas šio išradimo tikslas yra pateikti nesunkiai prieinamą vakcinos adjuvantą, kurio kaina būtų tokia, kad jį būtų galima dėti į vakcinos kompozicijas nedidinant jos savikainos uždraustu būdu.
Šiems tikslams pasiekti šio išradimo tikslas yra farmacinė kompozicija, kurioje yra bent vienas vakcinos antigenas, besiskirianti tuo, kad joje yra bent vienas fosfatidilcholino fosfatinio esterio darinys, turintis tokią struktūrą:
H2C-O-C—R3
II o
HC-o—C—R2
II o o h2c—o-p-o-ch2-ch2-n—ch3
OR! CH3 (I), kurioje:
Ri yra žemesnysis alkilas,
R2 ir R3 yra vienodi arba skirtingi ir kiekvienas gali reikšti linijinio angliavandenilio pagrindo grandines, turinčias nuo 13 iki 21 anglies atomo.
Pagal ypatingą įgyvendinimo variantą Ri reiškia etilo radikalą; taigi, šio darinio degradacija organizme, į kurį jis buvo įvestas, duos biosuderinamus produktus fosfatidilcholinus ir etanolį.
Pagal ypatingą įgyvendinimo variantą R2 ir R3 yra pasirinkti iš radikalų, atsirandančių iš tokių riebalų rūgščių: miristino rūgšties, palmitino rūgšties, stearino rūgšties ir oleino rūgšties.
@/CH3
Pagal ypatingą tinkamiausią įgyvendinimo variantą R2 ir R3 yra vienodi ir reiškia oleilo rūgšties radikalą. Toks produktas, kuris gali būti ištisai pagamintas cheminės sintezes būdu, duoda visas saugumo garantijas ir farmaciniam naudojimui pageidaujamą atkariojamumą.
Šio išradimo objektas taip pat yra fosfatidilcholino fosfatinio esterio darinio, turinčio struktūrą:
H2C—O—C—R3 II o
HCΌ—C—R2
II o o ®z'
CH, h2c—o-p-o-ch2-ch2-n—ch3
ORi \
ch3 (I), kurioje:
Ri yra žemesnysis alkilas,
R2 ir R3 yra vienodi arba skirtingi ir kiekvienas gali reikšti linijinio angliavandenilio pagrindo grandines, turinčias nuo 13 iki 21 anglies atomo, panaudojimas vakcininiaim adjuvantui gaminti.
Šio išradimo objektas taip pat yra žinduolio imunizavimo būdas pagal kurį bent vienas vakcinos antigenas yra įvedamas minėtam žinduoliui ir taip pat minėtam žinduoliui yra įvedamas fosfatidilcholino fosfatino esterio darinys, turintis struktūrą:
H2C
HC oc—R3
O
-o—c—R2 II o o ®z
CH-:
h2c—o-p-o-ch2-ch2-n—ch3
ORi \ CH-= (I), kurioje:
Ri yra žemesnysis alkilas,
R2 ir R3 yra vienodi arba skirtingi ir kiekvienas gali reikšti linijinio angliavandenilio pagrindo grandines, turinčias nuo 13 iki 21 anglies atomo.
Tokiu būdu, imuninės sistemos atsakas yra modifikuotas, lyginant su atsaku, kuris būtų gaunamas, jeigu vakcinos antigenas būtų įvedamas be fosfatidilcholino darinio.
Daug kitų šio išradimo privalumų paaiškės skaitant smulkų aprašymą kuris pateikiamas toliau.
Šis išradimas yra susijęs su farmacine kompozicija, turinčia bent vieno vakcinos antigeno. Laikoma, kad terminas “vakcinos antigenas” reiškia antigeną galintį indukuoti imuninės sistemos atsaką kai jis yra įvedamas žmonėms arba gyvūnui. Šis imuninės sistemos atsakas gali sukelti antikūnų gaminimąsi arba tam tikrų ląstelių aktyvaciją ypatingai antigeną pateikiančių ląstelių (pavyzdžiui: dendritinių ląstelių), T limfocitą B limfocitų.
Ši farmacinė kompozicija gali būti kompozicija profilaktikos tikslams arba terapiniams tikslams, arba ir tam ir tam.
Ji gali būti įvedama paprastai vakcinoms naudojamais arba rekomenduojamais būdais: parenteriniu keliu, per gleivinę, ir gali būti įvairių formų: leidžiamas arba purškiamas skystis, formos, gautos liofilizuojant arba džiovinant išpurškimo būdu, arba išdžiovinant ore ir t.t. Jos gali būti įvedamos švirkštu arba inžektoriumi be adatos, skirtu injekcijai į raumenis, poodinei arba intrakutaninei injekcijai. Taip pat ji gali būti įvedama sroviniu vaistų purkštuku, galinčiu paduoti sausus miltelius arba skystą purškalą į gleivinės membranas, kaip antai nosies, plaučių vaginos arba tiesiosios žarnos.
Šiose farmacinėse kompozicijose naudojami vakcinų antigenai pagal šį išradimą yra “tiesioginiai” antigenai, t.y. jie nėra šiuos antigenus koduojančios DNR, bet patys yra antigenai; jie gali būti pilnas mikroorganizmas arba tik dalis šio mikroorganizmo; taigi, iš paprastai vakcinose naudojamų antigenų galima paminėti:
polisacharidai, kur jie yra vieni arba surišti su nešiklių elementais, tokiais kaip baltymai-nešikliai, gyvi prislopinti pilni mikroorganizmai, inaktyvuoti mikroorganizmai, rekombinantiniai peptidai ir baltymai, glikoproteinai, glikolipidai, lipopeptidai, sintetiniai peptidai, suardyti mikroorganizmai atveju vakciną vadinamų “suskaldytomis” vakcinomis.
Šie antigenai yra antigenai, naudojami arba galima juos naudoti įvairių ligų gydymui arba prevencijai, tokių kaip, pavyzdžiui: difteritas, stabligė, polio, pasiutligė, kokliušas, hepatitas A, B ir C, geltonasis drugys, vidurių šiltinė, vėjaraupiai, tymai, kiaulytė, raudoniukė, japoniškas encefalitas, meningitas, plaučių uždegimo streptokokinės infekcijos, rotavirusinės infekcijos, AIDS, kai kurios vėžio formos, tuberkuliozė, Laimo liga, kvėpavimo takų infekcijos, pūslelinė, Chlamydia, Neisseria gonorrheae, Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis, Staphylococcus aureus arba Haemphilus influenza, tipas B, maliarijos, leišmaniozės, listeriozės, ir kt. sukelti negalavimai.
Šio išradimo farmacinė kompozicija gali būti kompozicija, skirta imunizacijai prieš atskirą patogeną arba vėžio rūšį, t.y. joje yra vieno patogeno arba vėžio rūšies antigenų, arba kitu atveju ji gali būti kompozicija, skirta imunizuoti prieš keletą patogenų arba vėžio rūšių (ji yra vadinama vakcininiu deriniu).
Naudojamo fosfatidilcholino fosfatinio esterio darinio veikimas yra stimuliuoti vakcinos kompoziciją, t.y. padidinti arba modifikuoti organizmo, kuriam įvedama ši vakcinos kompozicija, imuninės sistemos atsaką, lyginant su atsaku, kuris būtų gaunamas nesant tokio junginio. Ypatingai tai gali būti humoralinio atsako padidinimas, arba ląstelinio atsako padidinimas, arba abu atvejai. Poveikis taip pat gali būti ne atsako padidinimas, bet skirtinga sukelto atsako orientacija: pavyzdžiui, orientacija į ląstelinį atsaką, labiau nei į humoralinį atsaką, tam tikrų citokinų gaminimasis labiau nei kitų citokinų, tam tikrų tipų arba subtipų antikūnų gaminimasis labiau nei kitų, tam tikrų ląstelių stimuliacija labiau nei kitų ir t.t. Adjuvanto veikimas taip pat gali susidėti iš imuninio atsako trukmės didinimo laikui bėgant. Į jį taip pat gali įeiti galimybė sumažinti įvedimų skaičių, reikalingą imunizuojamam individui apsaugoti, arba, kitaip tariant, sumažinti skiriamoje dozėje esantį antigeno kiekį.
Šio išradimo darinio adjuvantinis veikimas gali būti gaunamas arba tada, kai jis yra sumaišomas su farmacinės kompozicijos antigenu(-ais) įvedant juos, t.y. kai jis yra tiesiog farmacinėje kompozicijoje, arba, kitu atveju, kai jis įvedamas atskirai nuo antigeno(-ų), kurių imunogeninę galią norima modifikuoti. Vienok yra pageidautina naudoti jį toje pačioje farmacinėje kompozicijoje kaip ir įvedamas antigenas(-ai).
Šio išradimo tikslams yra laikoma, kad terminas “fosfatidilcholinas” reiškia v
fosfolipidus, turinčius glicerolio molekulę, 2 riebalų rūgštis, fosfato grupę ir choliną. Šie junginiai, taip pat vadinami lecitinais, skiriasi savo riebalų rūgštimis.
Išradimo tikslams 2 riebalų rūgštys R2 ir R3 gali būti vienodos arba skirtingos, sočios arba nesočios; geriau, kai fosfatidilcholinai yra padaryti esterinant riebalų rūgštis, turinčias 13 anglies atomą ypatingai tokias: miristino rūgštį, palmitino rūgštį, stearino rūgštį arba oleino rūgštį.
Laikoma, kad terminas “žemesnysis alkilo radikalas Ri” reiškia alkilo radikalą turintį daugiausiai 5 anglies atomus. Tiksliau sakant, pagal šį išradimą fosfatidilcholino darinys yra fosfatidilcholino fosfatinis esteris; jis gali būti esteris, gautas fosfatidilcholino ir metanolio, etanolio, propanolio, butanolio arba pentanolio reakcijoje; ypatingai geri rezultatai buvo gauti su esteriu iš etanolio.
v
Šio išradimo tikslams tinkami junginiai gali būti gaunami grynai cheminės sintezės būdu arba, kitu atveju, esterinant gamtinius fosfatidilcholinus, tokius kaip iš sojos pupelių arba kiaušinių išekstrahuotą fosfatidilcholiną Tai yra junginiai, kurie gali būti naudojami farmaciniu požiūriu priimtinų druskų forma, ypatingai chlorido forma. Iš ypatingai tinkamų junginių gali būti paminėtini l,2-dilauroil-SH-glicero-3-etilfosfocholinas, 1,2-dimiristoil-s«glicero-3-etilfosfo-cholinas, 1,2-dipalmitoil-5«-glicero-3-etilfosfocholinas, 1,2-stereoil-srtglicero-3-etilfosfocholinas, l,2-dioleoil-sn-glicero-3-etilfosfocholinas, arba dar ir 1,2palmitoiloleoil-srt-glicero-3-etilfosfocholinas, kuris yra ypatingai lengvai gaunamas iš Avanti® Polar Lipids Ine. kompanijos. Šie junginiai yra gaunami miltelių arba tirpalų chloroforme formoje.
Pagal šį išradimą junginiai yra disperguojami vandenyje arba vandeniniame buferyje taip, kad susidarytų suspensija, kuri tada yra sumaišoma su tirpalu, turinčiu vakcinos antigenų arba, kitu atveju, fosfatidilcholino fosfatinio esterio darinio turinti suspensija yra naudojama ištirpinti liofilizatui, kuriame yra vakcinos antigenai. Kitu atveju, yra galima disperguoti arba hidratuoti fosfatidilcholino fostatinio esterio darinį vandeniu arba buferiu, jau turinčiu bent vieno vakcinos antigeno.
Naudojami fosfatidilcholino fostatinio esterio dariniai gali sudaryti lipidines pūsleles arba liposomas, geriausia, kai jų dydis yra tarp 50 ir 220 nm.
Taip pat galima naudoti šio išradimo adjuvantus emulsiją sudarančiose kompozicijose.
Toliau duodami pavyzdžiai iliustruoja (neribojančiu budu) šio išradimo įgyvendinimą.
Ί pavyzdys: Vakcinos kompozicijos, antigenu turinčios TAT baltymą
1.1. Kompozicijų paruošimas
Vakcinos kompozicijos gaminamos turinčios, kaip vakcinos antigeno, rekombinantinio baltymo, kuris gali būti naudojamas vakcinoje prieš AIDS; tai yra detoksikuotas TAT ΙΠ B baltymas, kuris yra gaunamas ekspresuojant E.coli ir jį išskiriant per įvairias chromatografijos stadijas, po to chemiškai inaktyvuojant, kaip aprašyta WO99/33346 paraiškoje, kur jam priskirtas pavadinimas “karboksimetilintas Tat”.
Kompozicija pagaminama žemiau aprašytu būdu. Yra gaunamas miltelių pavidalo 1,2dioleoil-sn-glicero-3-etilfosfocholino (etil-PC) chloridas, kurį tiekia Avanti® Polar Lipids Ine. kompanija, ir soliubilizuojamas 4/1 chloroformo/metanolio mišinyje, kad koncentracija būtų 2 mg/ml.
3,18 ml gauto tirpalo, t.y. 6,36 mg etil-PC įpilama į stiklinę apvaliadugnę kolbą tirpiklis garinamas rotoriniu garintuvu, kol ant apvaliadugnės kolbos sienelių yra gaunama lygi lipido plėvelė. Tada ši plėvelė yra džiovinama stipriame vakuume, kad būtų pašalinami bet kokie likusio tirpiklio pėdsakai.
Po to plėvelė rehidratuojama 4 ml distiliuoto vandens 40 °C temperatūroje, naudojant ultragarsinę vonią Tokiu būdu gauta pūslelių dispersija išspaudžiama per keletą polikarbonatinių membranų (0,8 pm; 0,4 pm ir 0,2 pm), uždėtų ant preso (Lipex Biomembranes, Ine.), termostatuoto 50 °C temperatūroje spaudžiant azotu.
Tada gauta liposomų suspensija, turinti 1,59 mg/ml koncentraciją yra sumaišoma pagal tūrį su koncentruotu Tat tirpalu, gaunant 200 pg/ml buferyje, susidedančiame iš 100 mmol/1 TRIS, 200 mmol/1 NaCl, pH 7,4.
Taip pat yra pagaminama kompozicija, turinti tik TAT antigeno, be adjuvanto.
Tokiu būdu gautos 200 pi dozės turi tokį komponentų kiekį:
1) 20pgTAT
2) 20 pg TAT ir 159 pg etil-PC.
1.2. Imunizavimas
Dviem grupėms 8 savaičių amžiaus BALB/c pelių patelių buvo suleidžiama viena iš 1.1 paragrafe pagamintų kompozicijų poodiniu būdu, imant vieną 200 μΐ dozę pelei; injekcijos leidžiamos nulinę dieną (D0) ir 21 -ą dieną (D21).
Norint įvertinti pirminį atsaką, iš retroakiduobinės ertmės imami kraujo mėginiai D14, o D35 - norint įvertinti antrinį atsaką. Būdingi IgGl ir IgG2a titrai nustatomi naudojant standartizuotus ELISA testus.
D37 pelės numarinamos; išimama jų blužnis ir išskiriamos blužnies ląstelės.
Gauti rezultatai apie humoralinius atsakus suvesti žemiau duodamoje lentelėje, kurioje IgG titrai yra išreikšti sutartiniais ELISA vienetais (loglO).
Kiekvienai pelių grupei nurodyta reikšmė yra titrų, gautų iš kiekvienos pelės reikšmių, geometrinis vidurkis
Pelių grupė IgGl titras D14 IgG2a titras D14 IgGl titras D35 IgG2a titras D35
tik Tat 1,943 1,045 3,950 2,437
Tat + etil-PC 2,931 2,429 4,889 4,368
Gauti rezultatai rodo, kad šio išradimo kompozicijos duoda galimybę gauti humoralinį atsaką kuris yra aiškiai didesnis nei atsakas, gaunamas kai naudojamas vienas antigenas.
Pastebėta, kad adjuvanto poveikis yra aiškiai išreikštas IgG2a atsako atžvilgiu, kas rodo, kad imuninis atsakas yra orientuotas labiau į THl-tipo atsaką.
Norint įvertinti šio išradimo farmacinių kompozicijų poveikį į ląstelinį atsaką buvo atlikti blužnies ląstelių, galinčių gaminti γ-interferoną skaičiavimai, naudojant ELISPOT testą. Šis testas buvo atliktas ir su šviežiomis ląstelėmis, ir su restimuliuotomis ląstelėmis.
Bandymui atlikti blužnies ląstelės auginamos auginimo lėkštelėse 200000 ląstelių duobutėje greičiu, esant arba vienai terpei, arba rekombinantiniam TAT antigenui. Paauginus 16 valandą išryškinama ELISPOT, t.y. suskaičiuojamas kiekis taškelią atitinkančių γinterferoną išskiriančias ląsteles. Gauti rezultatai susumuoti toliau duodamose lentelėse; nurodytos reikšmės yra vidurkiai (pelių grupei) skirtumą apskaičiuotų kiekvienai pelei, tarp taškelių skaičiaus, skaičiuojamo milijonui ląstelių duobutėse su rekombinantiniu TAT ir taškelių skaičiaus, skaičiuojamo milijonui ląstelių duobutėse vien tik su terpe.
Žemiau duodamoje lentelėje susumuoti rezultatai, gauti su šviežiomis ląstelėmis.
Tirtoji farmacinė kompozicija Taškelių skaičius milijonui ląstelių
TAT 20 pg 31,67
TAT 20 pg + etil-PC 129,17
Žemiau duodamoje lentelėje susumuota rezultatai, gauti su restimuliuotomis ląstelėmis su rekombinantinių TAT, esant IL2.
Tirtoji farmacinė kompozicija Taškelių skaičius milijonui ląstelių
TAT 20 pg 44,16
TAT 20 pg + etil-PC 411,66
Šie rezultatai rodo teigiamą poveikį, gautą naudojant šio išradimo farmacinę kompoziciją į CD4+ ląstelių stimuliavimą.
pavyzdys: Vakcinos kompozicijos, antigenu turinčios citomegaloviruso glikoproteiną gB
2.1. Kompozicij u paruošimas
Buvo pagaminta vakcinos kompozicija, į kurią kaip vakcininis antigenas įeina rekombinantinis baltymas, išvestas iš Towne kamieno citomegaloviruso (CMV) apvalkalo glikoproteino, gB, kurio nukleotidinė ir baltyminė sekos yra aprašytos USP 5,834,307 patente. Šis rekombinantinis baltymas yra produkuojamas panaudojant rekombinantinę CHO liniją, transfekuotą plazmidė, vadinama pPRgB27clv4, kuri turi modifikuotą gB geną. Faktiškai norint palengvinti šio rekombinantinio baltymo gaminimąsi CHO linijoje, gB genas buvo modifikuotas iš anksto, iškerpant dalį geno, kuris koduoja gB baltymo transmembraninę sritį, atitinkančią aminorūgščių seką tarp valino 677 ir arginino 752 ir įvedant 3 taškines mutacijas tokiu būdu, kad gamtiniame gB baltyme esanti skaldymo vieta yra pašalinama. Faktiškai rekombinantinės CHO linijos produkuojamas rekombinantinis baltymas atitinka sutrumpintą gB baltymą, nebeturintį skaldymo vietos ir transmembraninės srities, vadinamas gBdTM.
Plazmidės pPRgB27clv4 sukonstravimas ir sutrumpinto gB baltymo (gBdTM) produkavimas CHO linijoje yra aprašyti US 6,100,064. Sutrumpintas gB baltymas gryninamas leidžiant per imunoafininę kolonėlę, naudojant 15D8 monokloninį antikūną, aprašytą L. Rasmussen et ai. (J. Virol. (1985) 55:274-280).
K
Yra gaunamas miltelių pavidalo l,2-distearoil-s«-glicero-3-etilfosfocholino (etil-DSPC) chloridas ir l,2-dioleoil-s«-glicero-3-etilfosfocholino (etil-DOPC) chloridas, kuriuos tiekia Avanti® Polar Lipids Ine. kompanija. Su kiekvienu iš šių produktų yra atliekamos tokios operacijos: 5 mg miltelių yra soliubilizuojami 5 ml 4:1 (tūris/tūris) chloroforme/metanolyje. Tirpalas džiovinamas stiklinėje apvaliadugnėje kolboje panaudojant rotorinį garintuvą taip, kad ant apvaliadugnės kolbos sienelių susidarytų lipido plėvelė. Tada ši plėvelė yra džiovinama stipriame vakuume, kad būtų pašalinami bet kokie likusio tirpiklio pėdsakai, ir po to ji tirpinama 2,5 ml vandens 60 °C temperatūroje, kad galutinė koncentracija būtų 2 mg/ml. Susidariusi liposominė suspensija homogenizuojama purtant 10 minučių ir veikiama ultragarsu ultragarsinėje vonioje 5 minutes, po to išspaudžiama per presą panaudojant Lipex presą (Northern Lipids Ine. Vancuver, CA), termostatuotą 50 °C temperatūroje penkis kartus, naudojant polikarbonatinę membraną kurios porėtumas 0,2 pm.
Taip pat yra pagaminama kompozicija, turinti etil-PC emulsijoje.
Tam tikslui 25 mg l,2-dioleoil-s«-glicero-3-etilfosfocholino chlorido (etil-DOPC Avanti Polar Lipids) soliubilizuojama stiklinėje apvaliadugnėje kolboje, panaudojant 10 ml 4:1 (tūris/tūris) chloroformo/metanolio. Gautas tirpalas yra džiovinamas rotoriniu garintuvu taip, kad ant apvaliadugnės kolbos sienelių liktų lipido plėvelė. Tada ši plėvelė yra džiovinama stipriame vakuume, kad būtų pašalinami bet kokie likusio tirpiklio pėdsakai.
375 mg industrinio Tween® 80, kurį tiekia Merck kompanija, atsveriama į stiklinėlę, į jį pridedama 29,29 g vandens, ir mišinys maišomas tol, kol paviršinio aktyvumo medžiaga visiškai ištirpsta. Ankstesnėje stadijoje gauta lipido plėvelė tirpinamma šiame Tween® 80 tirpale. Į šią suspensiją pridedama 1475 mg skvaleno (Fluka), ir gauta emulsija homogenizuojama Ultraturrax (8000-9500 aps./min), o po to M110 mikroskystintuvu (Microfluidics, Newton MA), 20 perėjimų esant 414 kPa slėgiui.
Galutinė skvaleno koncentracija šioje emulsijoje yra 5 %.
Imunizavimo dozės yra pagaminamos sumaišant aukščiau aprašytas adjuvanto kompozicijas arba vandenį su vandeniniais antigeno pradiniais tirpalais, turinčiais 160 pg/ml gB baltymo ir su PBS buferiu taip, kad būtų gaunamos 50 μΐ dozės, turinčios tokias kompozicijas:
1) 2pggB
2) 2 pg gB ir 50 pg etil-DOPC u
3) 2 pg gB ir 50 pg etil-DSPC
4) 2 pg gB ir 50 pg etil-DOPC, 1,25 mg skvaleno ir 0,3 mg Tween® 80.
2.2. Imunizavimas
Gaunamos 4 grupės 8 savaičių amžiaus OFM nelinijinių pelių ir joms suleidžiama viena iš 2.1 paragrafe pagamintų kompozicijų poodiniu būdu, imant 50 pi pelei; injekcijos atliktos D0 irD21.
Norint įvertinti pirminį atsaką imami kraujo mėginiai iš retroakiduobinės ertmės D20, ir D34 - norint įvertinti antrinį atsaką Būdingi IgGl ir IgG2a titrai nustatomi naudojant standartizuotus ELISA testus.
D37 pelės numarinamos; išimama jų blužnis, išskiriamos blužnies ląstelės ir stimuliuojamos rekombinantinių gB baltymu arba nestimuliuojamos.
Tada išmatuojama citokinų (IL5, γ-IFN ir TNF-α) koncentracija nuopiluose nuo blužnies ląstelių, stimuliuotų 5 dienas gB baltymu, ir taip pat nuopile nuo nestimuliuotų ląstelių, panaudojant ELISA testus, kad lyginant būtų galima iš to nustatyti specifinį citokinų gaminimąsi.
Gauti rezultatai humoralinių atsakų požiūriu surinkti žemiau duodamoje lentelėje, kur joje IgG titrai yra išreikšti sutartiniais ELISA vienetais (loglO).
Kiekvienai pelių grupei nurodytos reikšmės yra titrų reikšmių, gautų kiekvienai pelei, geometrinis vidurkis.
Pelių grupės IgGl titras D21 IgG2a titras D21 IgGl titras D35 IgG2a titras D35
vien tik gB 2,703±0,773 l,624±0,572 4,409±0,564 3,187±0,595
gB+etil-DOPC 3,673±0,521 3,763±0,371 4,472±0,453 4,741±0,260
gB+etil-DSPC 3,708±0,545 3,869±0,303 4,388±0,393 4,600±0,246
gB+etil-DSPC +emulsija 4,205±0,388 2,944±0,445 5,294±0,416 4,272±0,348
Žemiau duodamoje lentelėje pateikti citokinų rezultatai; nurodytos reikšmės kiekvienam citokinui yra skirtumas pg/ml tarp citokinų, išmatuotų restimuliuotoms gB baltymu ląstelėms kiekių vidurkio ir citokinų, išmatuotų ląstelėms, augintoms vien tik terpėje (laikoma foniniu testo triukšmu); todėl gali būti laikoma, kad šie nurodyti kiekiai yra kiekiai, specifiškai produkuoti kaip atsakas į stimuliavimą gB baltymu.
Pelių grupės γ-IFN IL5 TNF-a
vien tik gB 2193 399 61
GB+etil-DOPC 56338 416 310
GB+etil-DSPC 28756 32 93
gB+etil-DSPC +emulsija 3432 4054 134
Visi šiame bandyme pateikti rezultati rodo gerą fosfatidilcholino fosfatinių esterių adjuvantinį efektą kuris turi didelę gebą didinti Thl-tipo imuninį atsaką (didina IgG2a ir γinterferoną), tačiau neinhibuoja jau antigeno sukelto Th2-tipo atsako.
pavyzdys: Intradermiškai vartojamos vakcinos kompozicijos
3.1. Kompozicijų paruošimas
Yra gaunamas miltelių pavidalo l,2-dioleoil-s«-glicero-3-etilfosfocholino (etil-DOPC) chloridas, kurį tiekia Avanti® Polar Lipids Ine. kompanija. 5 mg šių miltelių yra soliubilizuojami 10 ml 4:1 (tūris/tūris) chloroforme/metanolyje. Gautas tirpalas džiovinamas stiklinėje apvaliadugnėje kolboje panaudojant rotorinį garintuvą taip, kad ant apvaliadugnės kolbos sienelių susidarytų lipido plėvelė. Tada ši plėvelė yra džiovinama stipriame vakuume, kad būtų pašalinami bet kokie likusio tirpiklio pėdsakai, ir po to ji tirpinama 2,5 ml vandens 60 °C temperatūroje, kad galutinė koncentracija būtų 2 mg/ml. Susidariusi liposominė suspensija homogenizuojama, purtant 10 minučių ir veikiant ultragarsu ultragarsinėje vonioje 5 minutes, po to išspaudžiama per Lipex presą (Northern Lipids Ine. Vancuver, CA), termostatuotą 50 °C temperatūroje vienąkart per 0,8 pm polikarbonatinę membraną po to vienąkart per 0,4 pm polikarbonatinę membraną ir pagaliau penkis kartus per polikarbonatinę membraną kurios porėtumas 0,2 pm.
Taip pat yra paruošiamas antigeno, susidedančio iš gB baltymo, pradinis tirpalas, gautas kaip aprašyta ankstesniame pavyzdyje, kurio koncentracija yra 160 pg/ml.
Antigeno tirpalas sumaišomas su adjuvanto suspensija 2 mg/ml proporcijomis, skaičiuojant, kad eksperimentinės vakcinos turėtų 50 pi dozėje tokias kompozicijas:
1) 2pggB
2) 2 pg gB ir 50 pg etil-DOPC
3) 0,2pggB
4) 0,2 pg gB ir 50 pg etil-DOPC.
3.2, Imunizavimas
Gaunamos 4 grupės 8 savaičių amžiaus OF1 pelių.
Kiekvienai pelių grupei buvo suleista po oda viena iš aukščiau nurodytų kompozicijų. Imunizacija atlikta D0 ir D20.
Norint įvertinti pirminį atsaką kraujo mėginiai buvo paimti iš retroakiduobinės ertmės D20 prieš 2-ją imunizaciją ir D35 - norint įvertinti antrinį atsaką
Specifiniai IgGl ir IgG2a titrai buvo nustatyti standartizuotais ELISA bandymais.
Pelės buvo numarintos D35; išimtos jų blužnys, išskirtos blužnies ląstelės ir stimuliuotos rekombinantinių gB baltymu, arba nestimuliuotos.
Citokinų (IL5, γ-IFN ir TNF-α) koncentracijos nuopiluose nuo blužnies ląstelią stimuliuotų 5 dienas gB baltymu, bei nuopiluose nuo nestimuliuotų ląstelią buvo nustatomos ELISA testais, norint palyginimo būdu iš to nustatyti specifinę citokinų produkciją
Gauti rezultatai, ryšium su humoraliniais atsakais susumuoti žemiau duodamoje lentelėje, kurioje IgG titrai yra išreikšti sutartiniais ELISA vienetais (loglO).
Kiekvienai pelių grupei nurodyta reikšmė yra titrų reikšmią gautų kiekvienai pelei, geometrinis vidurkis..
Pelių grupė IgGl titras D20 IgG2a titras D20 IgGl titras D35 IgG2a titras D35
2pggB 2,095 1,097 4,478 2,829
2 pg gB + etil-DOPC 4,111 3,574 5,023 4,766
0,2 pg gB 1,351 1,185 2,738 1,647
0,2 pg gB + etil-DOPC 3,621 2,607 4,698 4,087
Citokinų rezultatai duoti žemiau esančioje lentelėje; kiekvienam citokinui pateiktos reikšmės yra skirtumas pg/ml tarp citokiną išmatuotų restimuliuotoms gB baltymu ląstelėms, ir citokiną išmatuotų vien tik terpėje augintoms ląstelėms (laikoma testo foniniu triukšmu), kiekių vidurkio; todėl galima laikyti, kad nurodyti kiekiai yra specifiškai produkuoti kiekiai kaip atsakas į stimuliavimą gB baltymu.
Pelių grupė γ-IFN IL5 TNF-a
2pggB 3295 1891 65
2 pg gB + etil-DOPC 49716 1373 638
0,2 pg gB 2892 102 135
0,2 pg gB + etil-DOPC 37877 690 533
Iš šio bandymo matoma, kad šio išradimo adjuvantas yra veiksmingas, kai jis vartojamas intraderminiu būdu, ir jis gali tiek padidinti imuninį atsaką tam pačiam antigenų kiekiui, tiek ir sumažinti esančių antigenų kiekį, esančių suleistoje dozėje.
Čia adjuvantinis efektas yra matomas ir dėl Th2-tipo atsako (IgG 1) ir taip pat, o tai labai efektinga, dėl Thl-tipo atsako (IgG2a, γ-interferonas).
pavyzdys: Vakcinos kompozicija, turinti SARS antigeno
4.1. Kompozicijų pagaminimas
Pagaminta inaktyvuoto žmogaus koronaviruso, šiuo atveju SARS (sunkus ūmus respiratorinis sindromas) viruso, gauto auginant ląstelių liniją ir tada inaktyvuojant, suspensija; naudojamos suspensijos koncentracija prieš inaktyvaciją yra 7,56 log CCID50; ji praskiedžiama 1/10, norint gauti suspensiją turinčią 6,56 log CCID50 koncentraciją
Yra gaunamas miltelių pavidalo l,2-dioleoil-s«-glicero-3-etilfosfocholino (etil-DOPC) chloridas, kurį tiekia Avanti® Polar Lipids Ine., kompanija; 30 mg šių miltelių yra soliubilizuojama 10 ml 4:1 (tūris/tūris) chloroforme/metanolyje. Gautas tirpalas džiovinamas stiklinėje apvaliadugnėje kolboje panaudojant rotorinį garintuvą taip, kad ant apvaliadugnės kolbos sienelių liktų lipido plėvelė. Tada ši plėvelė yra džiovinama stipriame vakuume, kad būtų pašalinami bet kokie likusio tirpiklio pėdsakai, ir po to ji tirpinama 5 ml vandens 60 °C temperatūroje, kad galutinė koncentracija būtų 6 mg/ml. Susidariusi liposominė suspensija homogenizuojama, purtant 10 minučių ir veikiant ultragarsu ultragarsinėje vonioje 5 minutes, po to išspaudžiama per Lipex presą (Northern Lipids Ine. Vancuver, CA), termostatuotą 50 °C temperatūroje vieną kartą per polikarbonatinę membraną kurios porėtumas 0,2 pm.
200 μΐ imunizacijos dozės gaunamos pagaminant žemiau duodamoje lentelėje nurodytus mišinius:
Vanduo 6,56 log CCID50 viruso suspensija Adjuvantas Fosfatinis buferis Viruso kiekis dozėje
1,418 ml 110 μΐ skiedž. 1/10 - 472 μΐ 104’6 CCID50
1,151 ml 110 μΐ skiedž. 1/10 267 μΐ etilDOPC 472 μΐ 104’6 CCID50
1,418 ml 110 μΐ skiedž. 1 - 472 μΐ 105’6 CCID50
1,151 ml 110 μΐ skiedž. 1 267 μΐ etilDOPC 472 μΐ 105’6 CCID50
4,2. Imunizavimas
Sudaromos 4 grupės po 8 BALB/c peles ir imunizuojamos 3 savaičių intervalais viena iš aukščiau nurodytų kompozicijų; daromos poodinės injekcijos; kiekvieną kartą suleidžiamos 200 μΐ dozės.
Praėjus 2 savaitėms po kiekvienos injekcijos, imami kraujo mėginiai, norint įvertinti bendrą poveikį prieš (inaktyvuoto) SARS viruso antikūninį atsaką pagal ELISA testą t.y. D14 pirminiam atsakui ir D33 - antriniam atsakui.
Blužnies ląstelės paimamos D33.
SARS specifinis ląstelinis atsakas buvo vertinamas panaudojant ląstelių, išskiriančių γinterferoną ELISPOT testą arba ex vivo, arba po in vitro stimuliacijos inaktyvuotu pilnu virusu 7 dienas. Kiekvienu atveju blužnies ląstelės (ex vivo arba restimuliuotos in vitro) yra inkubuojamos 16 valandų arba su inaktyvuotu pilnu virusu, arba su sumaišytais 18-meriniais peptidais, kurių sekos persikloja (daugiau nei 10 aminorūgščių) ir atitinka įvairius SARS viruso antigenus.
Be to, yra įvertinama indukuoto T-helperio ląstelinio atsako poliarizacija panaudojant citokiną kuriuos išskyrė blužnies ląstelės, stimuliuotos pilnai inaktyvuotu virusu arba peptidų mišiniu, ELISA testą.
Gauti rezultatai, ryšium su humoraliniu atsaku yra duoti žemiau pateiktoje lentelėje; jie yra išreikšti ELISA testo sutartiniais loglO vienetais ir atitinka kiekvienos pelių grupės titrų geometrinius vidurkius.
Imunizavimo kompozicija IgG titras D14 IgG titras D33
104’6 CCID50 1 1,191
1O40CCID5o + etil-DOPC 1,246 2,424
105’6 CCID50 1,776 3,122
105’6 CCID50 + etil-DOPC 2,621 4,387
v
Šie rezultatai rodo, kad šio išradimo adjuvantas duoda galimybę padidinti humoralinį atsaką prieš virusinį antigeną.
Kai dėl ląstelinio atsako, gauti rezultatai, naudojant ELISPOT skaičiavimą su šviežiomis ląstelėmis (ex vivo), stimuliuotomis pilnu virusu, yra pateikti žemiau esančioje lentelėje, kurioje parodyti geometriniai vidurkiai kiekvienai pelių grupei.
Imunizavimo kompozicija Taškelių skaičius/ 10b blužnies ląstelių
104’6 CCID50 2
104’6 CCID50 + etil-DOPC 18
105’6 CCID50 17
105’6 CCID50 + etil-DOPC 132
O dėl rezultatų apie atsaką į peptidų mišinius, atsakai kinta priklausomai nuo naudojamų peptidų mišinių.
ELISPOT rezultatai, gauti po restimuliavimo su inaktyvuotu SARS virusu, taip pat rodo, kad γ-interferono gaminimasis buvo padidintas esant etil-DOPC, priklausomai nuo naudojamų peptidų.
Šie rezultatai rodo, kad šio išradimo adjuvantas duoda galimybę padidinti CD4+ Tląstelių atsaką prieš virusinį antigeną.
Kai dėl γ-IFN (Thl citokinas) ir IL-5 (Th2 citokinas) citokinų ELISA testų, buvo pastebėta, kad po stimuliacijos inaktyvuotu virusu, γ-IFN gaminimasis žymiai padidėjo pelėms, kurios prie antigeno buvo gavę etil-DOPC; antra vertus, IL-5 gaminimasis aiškiai nepasikeitė.
Gauti rezultatai yra pateikti žemiau duodamoje lentelėje; jie išreikšti pg/ml ir atitinka geometrinius vidurkius pelių grupėms.
Imunizavimo kompozicija Stimuliacija inaktyvuotu pilnu virusu
γ-IFN (pg/ml) IL-5 (pg/ml)
104’6 CCID50 4910 2793
104>b CCID50 + etil-DOPC 9262 3037
105'6 CCID50 7223 3649
10i>6 CCID50 + etil-DOPC 51453 5270
Šie rezultatai rodo, kad šio išradimo adjuvantas duoda galimybę padidinti Thl-tipo ląstelinį atsaką.
Taigi, visi šie rezultatai rodo, kad šio išradimo adjuvantas duoda galimybę žymiai padidinti ir ląstelinį (Thl), ir humoralinį atsaką sukeliamą tada, kai yra įvedamas antigenas, susidedantis iš inaktyvuoto viruso.

Claims (10)

  1. CH3
    Išradimo apibrėžtis
    1. Farmacinė kompozicija, apimanti bent vieną tiesioginį vakcinos antigeną b e s i s k i r i a n t i tuo, kad ji taip pat apima bent vieną fosfatidilcholino fosfatinio esterio darinį, turintį struktūrą:
    H2C—O—C—R3 II o
    HC-O—C—R2
    II o o h2c—o-p-o-ch2-ch2-n—ch3
    OR! CH3 (I), kurioje:
    Ri yra žemesnysis alkilas,
    R2 ir R3 yra vienodi arba skirtingi ir kiekvienas gali reikšti linijinio angliavandenilio grandines, turinčias nuo 13 iki 21 anglies atomo.
  2. 2. Kompozicija pagal ankstesnįjį punktą besiskirianti tuo, kad Rj reiškia etilo radikalą
  3. 3. Kompozicija pagal bet kurį iš ankstesniųjų punktą besiskirianti tuo, kad R2 ir R3 yra pasirinkti iš radikalą gaunamų iš tokių riebalų rūgščių: miristino rūgšties, palmitino rūgšties, stearino rūgšties ir oleino rūgšties.
  4. 4. Kompozicija pagal vieną iš ankstesniųjų punktą besiskirianti tuo, kad R2 ir R3 yra vienodi ir reiškia oleino rūgšties radikalą
  5. 5. Kompozicija pagal vieną iš ankstesniųjų punktą besiskirianti tuo, kad ji taip pat apima emulsiją
  6. 6. Fosfatidilcholino darinio, turinčio struktūrą:
    CH<
    h2c—o—c—r3 o
    HC-o—C—R2
    II o o h2c—o-p-o-ch2-ch2-n—ch3
    OR! CH3 (I), kurioje:
    Ri yra žemesnysis alkilas,
    R2 ir R3 yra vienodi arba skirtingi ir kiekvienas gali reikšti linijinio angliavandenilio grandines, turinčias nuo 13 iki 21 anglies atomo, panaudojimas vakcinos adjuvantui paruošti.
  7. 7. Panaudojimas pagal 6 punktą, besiskiriantis tuo, kad Ri reiškia etilo radikalą.
  8. 8. Panaudojimas pagal bet kurį iš 6 ir 7 punktų, besiskiriantis tuo, kad R2 ir R3 yra pasirinkti iš radikalų, gaunamų iš tokių riebalų rūgščių: miristino rūgšties, palmitino rūgšties, stearino rūgšties ir oleino rūgšties.
  9. 9. Panaudojimas pagal vieną iš 6-8 punktų, besiskirianti tuo, kad R2 ir R3 yra vienodi ir reiškia oleino rūgšties radikalą.
  10. 10. Farmacinės kompozicijos pagal 1 punktą panaudojimas vakcinos, skirtos žinduolio imunizavimui, gamyboje, kai minėtam žinduoliui yra įvedamas bent vienas tiesioginis vakcinos antigenas ir taip pat minėtam žinduoliui yra įvedamas fosfatidilcholino fosfatinio esterio darinys, turintis struktūrą:
    h2c
    HC
    O-C—R3
    II o
    Ό—C—R2 II o o ©/
    CH, h2c—o-p-o-ch2-ch2-n—ch3
    OR1 \ CH, (I), kurioje:
    Ri yra žemesnysis alkilas,
    R2 ir R3 yra vienodi arba skirtingi ir kiekvienas gali reikšti linijinio angliavandenilio pagrindo grandines, turinčias nuo 13 iki 21 anglies atomo.
LT2006036A 2003-11-17 2006-05-17 Vakcinos kompozicijos mišinys su alkilfosfatidilcholinu LT5435B (lt)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0313406A FR2862306B1 (fr) 2003-11-17 2003-11-17 Composition vaccinale

Publications (2)

Publication Number Publication Date
LT2006036A LT2006036A (lt) 2007-05-25
LT5435B true LT5435B (lt) 2007-07-25

Family

ID=34508504

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
LT2006036A LT5435B (lt) 2003-11-17 2006-05-17 Vakcinos kompozicijos mišinys su alkilfosfatidilcholinu

Country Status (23)

Country Link
US (2) US7344720B2 (lt)
EP (1) EP1696954B1 (lt)
JP (1) JP4638880B2 (lt)
KR (1) KR101136107B1 (lt)
CN (1) CN1882358B (lt)
AT (1) ATE412429T1 (lt)
AU (1) AU2004290943B2 (lt)
BR (1) BRPI0416670A (lt)
CA (1) CA2545086C (lt)
CY (1) CY1108498T1 (lt)
DE (1) DE602004017504D1 (lt)
DK (1) DK1696954T3 (lt)
ES (1) ES2311875T3 (lt)
FR (1) FR2862306B1 (lt)
IL (1) IL175573A (lt)
LT (1) LT5435B (lt)
LV (1) LV13457B (lt)
NO (1) NO20062779L (lt)
PL (1) PL1696954T3 (lt)
PT (1) PT1696954E (lt)
SI (1) SI1696954T1 (lt)
WO (1) WO2005049080A1 (lt)
ZA (1) ZA200603522B (lt)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100752990B1 (ko) * 2006-08-02 2007-08-30 주식회사 대웅 나노리포좀 및 천연 추출물을 포함하는 피부 질환의 예방또는 치료용 조성물
TWI444384B (zh) * 2008-02-20 2014-07-11 Gilead Sciences Inc 核苷酸類似物及其在治療惡性腫瘤上的用途
CN105944095B (zh) 2008-03-05 2021-04-02 赛诺菲巴斯德有限公司 一种使含佐剂的疫苗组合物稳定的方法
WO2010130897A1 (fr) * 2009-05-14 2010-11-18 Sanofi Pasteur Procédé de détoxification du lipopolysaccharide (lps) ou du lipide a des bactéries à gram-négatif
DK2430151T3 (da) 2009-05-14 2014-09-15 Sanofi Pasteur Meningokokvaccine på basis af lipooligosaccharid (los) fra modificerede stammer af neisseria meningitidis med immuntype l6
AU2010247252A1 (en) 2009-05-14 2012-01-12 Sanofi Pasteur Method for admixing the lipopolysaccharide (LPS) of gram-negative bacteria
EP2578974A1 (en) 2011-10-05 2013-04-10 Sanofi Pasteur Sa Process line for the production of freeze-dried particles
JP5761143B2 (ja) * 2011-11-02 2015-08-12 株式会社リコー 撮像ユニット、撮像ユニットを搭載した車両
US20140147475A1 (en) * 2012-11-29 2014-05-29 Antonius Arnoldus Christiaan Jacobs Vaccine to protect a ruminant against pneumonia caused by pasteurella multocida
HUE048344T2 (hu) 2013-03-18 2020-08-28 Intervet Int Bv Vakcina kérõdzõ védelmére Mannheimia haemolytica okozta tüdõgyulladás ellen
EP3171954B1 (en) 2014-07-21 2018-06-27 Sanofi Pasteur SA Liquid feeding device for the generation of droplets and its use for producing a vaccine composition

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999033346A1 (en) 1997-12-26 1999-07-08 Biovacs. Inc. Anti-retroviral immunogens, preparation and use
US6100064A (en) 1984-04-06 2000-08-08 Chiron Corporation Secreted viral proteins useful for vaccines and diagnostics

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE60118228T2 (de) * 2000-09-28 2006-12-14 Chiron Corp. (N.D.Ges.D. Staates Delaware), Emeryville Mikropartikel zur verabreichung von heterologen nukleinsäure
CA2428103C (en) * 2000-11-07 2015-06-09 Immunovaccine Technologies Inc. Vaccines with enhanced immune response and methods for their preparation
US7303881B2 (en) * 2004-04-30 2007-12-04 Pds Biotechnology Corporation Antigen delivery compositions and methods of use

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6100064A (en) 1984-04-06 2000-08-08 Chiron Corporation Secreted viral proteins useful for vaccines and diagnostics
WO1999033346A1 (en) 1997-12-26 1999-07-08 Biovacs. Inc. Anti-retroviral immunogens, preparation and use

Also Published As

Publication number Publication date
CN1882358B (zh) 2011-02-02
US7767658B2 (en) 2010-08-03
NO20062779L (no) 2006-08-15
US20050208060A1 (en) 2005-09-22
LV13457B (en) 2007-01-20
PL1696954T3 (pl) 2009-04-30
ATE412429T1 (de) 2008-11-15
ZA200603522B (en) 2007-07-25
LT2006036A (lt) 2007-05-25
CY1108498T1 (el) 2014-04-09
US7344720B2 (en) 2008-03-18
KR101136107B1 (ko) 2012-04-17
CN1882358A (zh) 2006-12-20
BRPI0416670A (pt) 2007-02-13
FR2862306A1 (fr) 2005-05-20
EP1696954A1 (fr) 2006-09-06
FR2862306B1 (fr) 2008-05-30
US20080131446A1 (en) 2008-06-05
WO2005049080A1 (fr) 2005-06-02
EP1696954B1 (fr) 2008-10-29
CA2545086C (en) 2011-11-08
ES2311875T3 (es) 2009-02-16
WO2005049080B1 (fr) 2005-09-01
JP4638880B2 (ja) 2011-02-23
IL175573A (en) 2010-06-30
SI1696954T1 (sl) 2009-04-30
AU2004290943B2 (en) 2009-08-27
CA2545086A1 (en) 2005-06-02
AU2004290943A1 (en) 2005-06-02
PT1696954E (pt) 2008-11-25
JP2007511585A (ja) 2007-05-10
IL175573A0 (en) 2006-09-05
DK1696954T3 (da) 2009-02-23
DE602004017504D1 (de) 2008-12-11
KR20060127385A (ko) 2006-12-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
LT5435B (lt) Vakcinos kompozicijos mišinys su alkilfosfatidilcholinu
JP3755890B2 (ja) アジュバント含有ワクチン組成物
US5919480A (en) Liposomal influenza vaccine composition and method
ES2140076T5 (es) Vacunas que contienen una saponina y un esterol.
US20070298093A1 (en) Synergistic Liposomal Adjuvants
US5643574A (en) Protein- or peptide-cochleate vaccines and methods of immunizing using the same
JP2007197465A (ja) 薬物送達におけるコクリエートリン脂質
ES2180703T5 (es) Composiciones de vacunas para mamiferos que comprenden escualeno o escualano, un fosfolipido y un tensioactivo como adyuvante.
JP2007514725A (ja) 少なくとも１つのトール様受容体７またはトール様受容体８アゴニストおよびトール様受容体４アゴニストを含む免疫賦活性組成物
MXPA06005486A (es) Composicion de vacuna mezclada con una alquilfosfatidilcolina

Legal Events

Date Code Title Description
MM9A Lapsed patents

Effective date: 20131115