KR970703432A - 헤마글루타닌의 아실화반응/팔미틸화를 저해하는 항바이러스 물질을 이용한 인플루엔자 바이러스 감염방법(treatment of influenza virus infection using antivirals that inhibit acylation/palmitylation of hemagg- lutinin) - Google Patents

헤마글루타닌의 아실화반응/팔미틸화를 저해하는 항바이러스 물질을 이용한 인플루엔자 바이러스 감염방법(treatment of influenza virus infection using antivirals that inhibit acylation/palmitylation of hemagg- lutinin) Download PDF

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Abstract

본 발명은 인플루엔자 바이러스 HA의 팔미틸화를 저해하고 바이러스 합체를 방해하는 화합물의 확인하는 검사에 관계한다. 화합물은 바이러스 합체, 감염 그리고 복제를 저해하고 이는 우수한 치료요법적 지수를 설명하여 인플루엔자 감염의 치료에 이용될 수도 있다. 본 발명은 인플루엔자 바이러스 HA의 팔미틸화 부위의 돌연변이가 바이러스 형성에 영향을 주고 HA의 팔미틸화의 저해가 감염성 인플루엔자 바이러스의 형성을 저해 한다는 출원인의 발견에 기초한다.

Description

헤마글루타닌의 아실화반응/팔미틸화를 저해하는 항바이러스 물질을 이용한 인플루엔자 바이러스 감염방법(TREATMENT OF INFLUENZA VIRUS INFECTION USING ANTIVIRALS THAT INHIBIT ACYLATION/PALMITYLATION OF HEMAGGLUTININ)
[도면의 간단한 설명]
제1도는 14개의 인플루엔자 바이러스 서브타입의 HAs의 c-단부 아미노산 서열의 비교이다(Doyle et al., 1985, J. Cell Biol, 100 : 704-714; Kawaoka etal., 1990, Virology 179 : 759-767; Nobusawa et al., 1991, Virology 182 : 475-485; Simpson & Lamb, 1992, J. Virol. 66 : 790-803). 시스테인잔기는 상자로 묶어놓고 수직막대는 막통과(TM)과 세포질 꼬리 사이에 분리는 나타낸다(reviewed in Ward, 1981, Curr, Top. Microbiol. Immunol. 94/95 : 1-74). 보존된 시스테인의 수는 H1서브타인 HA을 말한다(Hiti et al., 1981, Virology 111 : 113-124).
제2도는 야생형 인플루엔자 A/SWN/33와 돌연변이 HA단백질의 c단부의 아미노산 서열이다. 좌측 칼럼은 사용된 플라스미드의 이름이다. 예로써 구조 pC553S는 세린에 의해 교환된 위치 553에 시스테인을 가진다. 우측 칼럼에서 돌연변이는 (+)로 나타낸다. TM, 막통과 부분; Cyto, 세포질 꼬리; 야생형; 플라스미드 pT3WSN-HA/HindⅢ.
제4도는 a) 플락 적정과 b) MDBK 세포에서 TCID50-검사에 의해 결정된 MDBK 세포에서 야생형과 전이 감염 바이러스의 성장 특징이다. 돌연변이 C560Y는 뚜렷한 플랏을 형성하지 않고 따라서 TCID50검사는 바이러스 생산량의 적정에 사용되는 것을 볼수 있다.
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims (26)

  1. 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌의 팔미틸화와 감염성 바이러스의 생산을 저해하는 화합물을 확인하는 방법에 있어서, a) 테스트 화합물 존재하에 헤마글루티닌의 세로질 도메인에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 단백질 또는 펩티드 기질을 팔미테이트와 팔미테이트 전이효소와 반응시키고; 그리고 b) 팔미테이트가 단백질 또는 펩티드 기질에 결합되는지를 확인하고, 이때, 팔미틸화를 저해하는 테스트물질의 능력의 테스트 물질이 없는 펩티드 기질 또는 단백질 내로 결합되는 팔미테이트양과 비교하였을 때 단백질 또는 펩티드 기질내로 팔미데이트의 결합이 감소될 때를 의미하는 것을 특징으로 하는 검사.
  2. 제1항에 있어서, 단백질 또는 펩티드 기질은 프로세스드안된 헤마글루티닌 단백질로 구성되는 것을 특징으로 하는 검사.
  3. 제1항에 있어서, 단백질 또는 펩티드 기질은 세포질 도메인을 포함하는 프로세스드안된 헤마글루티닌 단백질로 구성되는 것을 특징으로 하는 검사.
  4. 제1항에 있어서, 팔미테이트는 신호-발생화합물로 라벨되는 것을 특징으로 하는 검사.
  5. 제4항에 있어서, 신호 발생 화합물이 방사능 라벨된, 형광, 효소 또는 발색 신호 형성화합물인 것을 특징으로 하는 검사.
  6. 제1항에 있어서, 팔미테이트는 세로로부터 정제된 것을 특징으로 하는 검사.
  7. 제1항에 있어서, 팔미테이트 전이효소는 팔미테이트 전이효소를 발현하는 세포 추출물내에 포함된 것을 특징으로 하는 검사.
  8. 제7항에 있어서, 상기 팔미테이트 전이효소는 세포의 투명질 부분에 포함된 것을 특징으로 하는 검사.
  9. 제1항에 있어서, 막지질이 포함된 것을 특징으로 하는 검사.
  10. 제1항에 있어서, 반응은 반응 종료시에 반응혼합물로부터 분리되는 반응 생성물을 만들기 위해 액상에서 실행되는 것을 특징으로 하는 검사.
  11. 제10항에 있어서, 반응생성물은 고형 표면에 고정되는 것을 특징으로 하는 검사.
  12. 제11항에 있어서, 반응생성물은 단백질 또는 펩티드 기질에 특이적인 고정된 항체에 의해 포함되는 것을 특징으로 하는 검사.
  13. 제1항에 있어서, 단백질 또는 펩티드 기질은 반응전에 고정되고 반응은 고형-액상에서 실행되는 것을 특징으로 하는 검사.
  14. 인플루엔자 헤마글루티닌의 팔미틸화와 감염성 바이러스이 생산을 저해하는 화합물을 확인하는 방법에 있어서, a) 헤마글루티닌을 팔미틸화할 수 있는 인플루엔자 바이러스 감염 세포로 팔미테이트와 테스트 물질을 첨가하고; 그리고 b) 팔미테이트가 감염된 세포로부터 회수된 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌에 결합되는지를 확인하고, 이때, 팔미틸화를 저해하는 테스트물질의 능력은 테스트 물질이 없이 헤마글루틴 내로 결합되는 팔미테이트양과 비교하였을 때 헤마글루틴내로 팔미테이트의 결합이 감소될때를 의미하는 것을 특징으로 하는 검사.
  15. 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌의 팔미틸화와 감염성 바이러스의 형성을 저해하는 화합물을 확인하는 방법에 있어서 a) 헤마글루티닌을 팔미틸화 할 수 있고 헤마글루티닌의 세포질 도메인에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 단백질 또는 펩티드를 발현시킬 수 있는 유전공학적으로 조작된 숙주 세포에 팔미테이트와 테스트물질을 첨가하고; 그리고 b) 팔미테이트가 세포로부터 회수한 단백질 또는 펩티드 기질에 결합되는지를 확인하고, 이때 팔미틸화를 저해하는 테스트물질의 능력은 테스트물질이 없이 펩티드 기질 또는 단백질 내로 결합되는 팔미테이트양과 비교하였을 때 단백질 또는 펩티드 기질내로 팔미테이트의 결합이 감소될때는 의미하는 것을 특징으로 하는 검사.
  16. 제14항에 또는 제15항에 있어서, 팔미테이트는 신호-발생화합물로 라벨되는 것을 특징으로 하는 검사.
  17. 제16항에 있어서, 신호발생 화합물이 방사능라벨된, 형광, 효소 또는 발색신호 형성 화합물인 것을 특징으로 하는 검사.
  18. 제14항 또는 제15항에 있어서, 세포로부터 회수된 기질은 고형 표면에 고정되는 것을 특징으로 하는 검사.
  19. 제18항에 있어서, 기질은 헤마글루티닌, 단백질 또는 펩티드 기질에 특이적인 고정된 항체에 의해 포획되는 것을 특징으로 하는 검사.
  20. 인플루엔자 바이러스 감염 치료 방법에 있어서, 헤마글루티닌의 팔미틸화를 저해하는 치료요법적 효과량을 감염된 개체에 투여하는 것을 투여하는 것으로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 인플루엔자 헤마글루티닌의 팔미틸화와 감염성 바이러스의 생산을 저해하는 화합물을 확인하는 방법에 있어서, a) 헤마글루티닌을 팔미틸화할 수 있는 인플루엔자 바이러스 감염 세포로 팔미테이트 전구체와 테스트 물질을 첨가하고; 그리고 b) 팔미테이트 전구체가 감염된 세포로부터 회수된 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌에 결합되는지를 확인하고, 이때, 팔미틸화를 저해하는 테스트물질의 능력은 테스트물질이 없어 헤마글루틴 내로 결합되는 팔미테이트 전구체양과 비교하였을 때 헤마글루킨내로 팔미테이트 전구체의 결합이 감소될때를 의미하는 것을 특징으로 하는 검사.
  22. 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌의 팔미틸화와 감염성 바이러스의 생산을 저해하는 화합물을 확인하는 방법에 있어서, a) 헤마글루티닌을 팔미틸화할 수 있는 헤마글루티닌의 세포질 도메인에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 단백질 또는 펩티드를 발현시킬 수 있는 유전공학적으로 조작된 숙주세포에 팔미테이트 전구체와 테스트 물질을 첨가하고; 그리고 b) 팔미테이트 전구체가 감염된 세포로부터 회수한 단백질 또는 펩티드 기질에 결합되는지를 확인하고, 이때, 팔미틸화를 저해하는 테스트물질의 능력은 테스트물질이 없어 펩티드 기질 또는 단백질내로 결합되는 팔미테이트 전구체양과 비교하였을 때 단백질 또는 펩티드 기질내로 팔미테이트 전구체의 결합이 감소될때를 의미하는 것을 특징으로 하는 검사.
  23. 제21항에 또는 제23항에 있어서, 팔미테이트는 신호-발생 화합물로 라벨되는 것을 특징으로 하는 검사.
  24. 제23항에 있어서, 신호발생 화합물이 방사능 라벨된, 형광, 효소 또는 발색신호 형성 화합물인 것을 특징으로 하는 검사.
  25. 제21항에 또는 제23항에 있어서, 세포로부터 회수된 기질은 고형 표면에 고정되는 것을 특징으로 하는 검사.
  26. 제25항에 있어서, 기질은 헤마글루티닌, 단백질 또는 펩티드 기질에 특이적인 고정된 항체에 의해 포획되는 것을 특징으로 하는 검사.
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