KR970006495A - 유로키나제를 이용한 융합단백질로부터 목적단백질의 제조방법 - Google Patents

유로키나제를 이용한 융합단백질로부터 목적단백질의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 유로키나제(urokinase)에 의해 절단되는 특이적인 아미노산 서열을 융합단백질(fusion protein)의 목적단백질과 융합파트너 사이에서 발현시키고, 발현된 융합단백질을 유로키나제로 절단함으로써, 융합단백질로부터 목적단백질을 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에서는 융합단백질의 목적단백질과 융합파트너 사이에 위치한 유로키나제 절단부위의 아미노산 서열이 -X-Gly-Arg(X는 Pro, Thr, Ile, Phe 또는 Leu이다)일때 절단효율이 우수하며, 이들 절단부위를 포함한 융합단백질의 발현도 우수함을 알아내고, 본 발명에서 결정된 유로키나제 절단부위의 아미노산 서열을 이용함으로써, 경제적이고도 용이하게 융합단백질로부터 목적단백질을 대량 제조할 수 있음을 확인하였다.

Description

유로키나제를 이용한 융합단백질로부터 목적단백질의 제조방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 본 발명에서 부위특이적 돌연변이에 사용된 혼합 올리고뉴클레오티드의 염기서열 및 그로부터 번역되는 아미노산을 나타낸다, 제2도는 플라스미드 △pLEK-2-UP를 구축하는 과정을 도식적으로 나타낸 그림이다, 제3도는 발현벡터 △pMA의 유전자 지도를 나타낸다.

Claims (5)

  1. 하기와 같은 아미노산 서열로부터 유추되는 DNA 서열을 융합단백질의 목적단백질과 융합파트너 사이에서 발현시키고, 발현된 융합단백질을 유로키나제로 절단하는 단계를 포함하는, 융합단백질로부터 목적단백질을 제조하는 방법:
    -X-Gly-Arg
    상기에서, X는 Pro, Thr, Ile, Phe 또는 Leu이다.
  2. -Thr-Gly-Arg의 서열로부터 유추되는 DNA 서열을 융합단백질의 목적단백질과 융합파트너 사이에서 발현시키고, 발현된 융합단백질을 유로키나제로 절단하는 단계를 포함하는, 융합단백질로보터 목적단백질을 제조하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 융합단백질의 목적단백질과 융합파트너의 유전자 사이에 위치하는 DNA 서열은 부위특이적 돌연변이에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제3항에 있어서, 부위특이적 돌연변이는 하기와 같은 혼합 올리고뉴클레오티드를 사용하여 야기되는 것을 특징으로 하는 방법:
    -N1N2TGGAAGA
    상기에서, N1은 A, C 또는 T이고; 및, N2는 C 또는 T이다.
  5. 하기와 같은 아미노산 서열로부터 유추되는 DNA 서열을 융합단백질의 목적단백질과 융합파트너 사이에서 발현시키고, 발현된 융합단백질을 유로키나제로 절단함으로써 제조된 목적단백질:
    -X-Gly-Arg
    상기에서, X는 Pro, Thr, Ile, Phe 또는 Leu이다.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019950019208A 1995-07-01 1995-07-01 유로키나제를 이용한 융합단백질로 부터 목적단백질의 제조방법 KR0166424B1 (ko)

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