KR960701892A - 단백질 합성을 위한 세포 비함유 시스템 및 이러한 시스템내에서의 카페론 단백질의 용도(Cell free system for protein synthesis and use of chaperone proteins therein) - Google Patents

단백질 합성을 위한 세포 비함유 시스템 및 이러한 시스템내에서의 카페론 단백질의 용도(Cell free system for protein synthesis and use of chaperone proteins therein)

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Abstract

본 발명은 신규하고도 고 효율적인 단백질의 세포 비함유 가공 방법 및 합성 방법에 관한 것이다. 본 발명의 신규한 방법은 세포 비함유 추출물을 제조하는 단계; 추출물로부터 라이보좀 분획을 분리하는 단계; 전사/해독배지의 존재하에서 라이보좀 분획을 배양하는 단계; 및 합성된 단백질의 양을 측정하는 단계를 포함한다. 본 발명의 방법은 커플링된 전사/해독 시스템, 단지 해독 시스템만 또는 세포 비함유 연속 유동 시스템으로서사 용가능하다. 또한 본 발명은 단백질의 합성 및 카페론 단백질을 사용한 이의 정확한 중첩 방법을 제공한다.

Description

단백질 합성을 위한 세포 비함유 시스템 및 이러한 시스템내에서의 카페론 단백질의 용도(Cell free system for protein synthesis and use of chaperone proteins therein)
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 디하이드로폴레이트 리덕타제 생성물의 효소활성을 나타낸다.
제2도는 연속-유동 세포-없는 시스템내에서 디하이드로 플레이트로 리덕타제의 합성을 나타낸다.

Claims (18)

  1. 세포 비함유 추출물을 제조하는 단계; 이 추출물로부터 라이보좀 분획을 분리하는 단계; 이러한 라이보좀 분획을 전사/해독 배지의 존재하에서 배양하는 단계; 및 합성된 단백질의 양을 측청하는 단계를 포함하는, 고 효율적인 단백질의 세포 비함유 합성 방법.
  2. 제1항에 있어서, 세포 비함유 추출물을 에스케리카아 콜라이(Escherichia coli), 맥아 및 망상적혈구로 이루어진 그룹중에서 선택된 세포로부터 제조하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 라이보좀 분획을, 원심분리 및 겔 여과 크로마토그래피로 이루어진 방법 중에서 선택된 방법에 의해 세포 비함유 추출물로부터 분리하는 방법.
  4. 제1항에 있어서, 배지가 커플링된 전사/해독 배지인 방법.
  5. 제4항에 있어서, 전사/해독 배지가 완충염 용액중 플라스미드 DNA, RNA 폴리머라제, 뉴클레오사이드트리포스페이트 에너지 생성 시스템 및 아미노산을 함유하는 방법.
  6. 제5항에 있어서, 플라스미드 DNA가 비-선형화된 것인 방법.
  7. 제1항에 있어서, 배양을 약 37℃에서 약 30분간 수행하는 방법.
  8. 제1항에 있어서, 배지가 해독 배지인 방법.
  9. 제8항에 있어서, 해독 배지가 완충염 용액중 mRNA, ATP, GTP, 에너지 생성 시스템 및 아미노산을 함유하는 방법.
  10. 제1항에 있어서, 단백질을, 트리클로로아세트산 침전에 이어서 단백질내에 혼입된 아미노산 양을 정량하는 방법 및 나트륨 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동에 이어서 자동방사성 사진법 중에서 선택된 방법에 의해 측정하는 방법.
  11. 제1항에 있어서, 단백질의 천연 형태를, 단백질의 생물학적 활성을 측정함으로써 측정하는 방법.
  12. 제1항에 있어서, 세포 비함유 추출물을 초기 대수기 상태에서 수확한 세포로부터 제조하는 방법.
  13. 제1항에 있어서, 배양 혼합물이 연속 유동 시스템의 일부인 방법.
  14. 에스케리키아 콜라이로부터 세포 비함유 추출물을 제조하는 단계; 추출물로부터 원심분리에 의해 라이보좀 분획을 분리하는 단계; 이러한 라이보좀 분획을 55mM 트리스-아세테이트(pH 7.8), 14mM Mg(OAC)2, 36mM NH4OAc,72mM KOAc, 2mM Ca(OAc)2, 0.5mM EDTA, 2% 폴리에틸렌 글리콜-6000, 2mM DTT, 1.2mM ATP, 0.8mM GTP, 0.8mM UTP, 0.8mM CTP, 0.4mM cAMP, 27mM 포스포에놀 피루베이트, 0.35㎍ 피루베이트 키나제, 1㎍ 폴린산, 83㎍14C-루이신, 330μM의 각각의 다른 19개 아미노산, 20㎍이, 콜라이 tRNA, 0.5㎍ 리팜피신, 0.3mM 글루코즈-6-포스페이트, 1.2A260단위의 이. 콜라이 라이보좀 분획: 0.5㎍ 플라스미드 DNA 및 0.5㎍ SP6 RNA 폴리머라제를 포함하는 배지의 존재하에서 배양하는 단계; 합성된 단백질의 양 및 이의 생물학적 활성을 측정하는 단계를 포함하는, 고 효율적인 단백질의 세포 비함유 합성 방법.
  15. 세포 비함유 추출물을 제조하는 단계; 이 추출물로부터 라이보좀 분획을 분리하는 단계; 카페론 단백질을 함유하는 전사/해독 배지의 존재하에 라이보좀 분획을 배양하는 단계; 및 합성된 단백질의 양을 측정하는 단계를 포함하는, 고 효율적인 단백질의 세포 비함유 합성 방법.
  16. 제15항에 있어서, 카페론이 DnaJ, DnaK, GrpE, GroEl 및 GroES로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
  17. 제9항에 있어서, 해독 배지가 카페론 단백질을 추가로 함유하는 방법
  18. 제17항에 있어서, 카페론이 DnaJ, DnaK, GrpE, GroEl 및 GroES로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019950704388A 1993-04-08 1994-04-08 단백질 합성을 위한 세포 비함유 시스템 및 이러한 시스템내에서의 카페론 단백질의 용도(Cell free system for protein synthesis and use of chaperone proteins therein) KR960701892A (ko)

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