KR960031596A - 신규의 혈전용해효소 및 이의 정제 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 망충(Tabanus falvus)으로부터 분리 정제된 신규의 혈전용해효소 및 이의 정제 방법에 관한 것으로, 본 발명의 신규의 혈전용해효소인 타바나제 I 및 Ⅱ는 세린계열 단백분해효소로서 분자량이 각각 22,000달톤 및 27,000달톤이고 룸브로키나제보다 훨씬 우수한 섬유소 분해능을 나타내며 넓은 범위의 pH에서 안정하다.

Description

신규의 혈전용해효소 및 이의 정제 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 망충 추출액을 세파크릴(Sephacryl) S-200젤 여과 크로마토 그래피로 분리한 분획의 섬유소 용해능을 나타낸 것이고,
제2도는 제1도에서 섬유소 용해능이 높은 분획들을 이온 교환 크로마토그래피로 분리한 분획의 섬유소 용해능을 나타낸 것이고,
제3도는 제2도에서 섬유소 용해능이 높은 분획을 소수성 친화 컬럼(토요펄 HW)크로마토그래피로 분리한 분획의 섬유소 용해능을 나타낸 것이다.

Claims (9)

  1. 망충(Tabanus falvus)으로부터 추출된 혈전용해효소.
  2. 제1항에 있어서, 분자량이 22,000달톤 또는 27,000 달톤임을 특징으로 하는 혈전용해효소.
  3. 제1항에 있어서, N-말단의 아미노산 서열이 N-Asp-Ile-Gly-Asn-Arg-Pro- Ile-Asp-Ile-Gln-Gln-Phe-Arg-Thr-Trp-C 또는 N-Asn-Gly-Trp-His-Arg-Ile- Asp-Ser-Gln-C임을 특징으로 하는 혈전용해효소.
  4. (가) 망충의 생리식염수 추출액에 황산 암모늄을 가하여 침전물을 수득하고; (나) 상기 침전물을 완충용액에 현탁시킨 후 동일 완충용액에서 투석시키고; (다) 투석된 용액을 음이온 교환 수지 컬럼으로 여과하고; (라) 용출된 단백질을 농축한 후 젤 여과 크로마토그래피, 음이온 교환 컬럼 크로마토그래피, 소수친화성 컬럼 크로마토그래피, 및 젤 여과 크로마토그래피를 차례로 수행하는 단계를 포함하는, 망충으로부터 혈전용해효소의 정제 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 (다)에서 DE-52 음이온 교환 컬럼을 사용하고, 0.6M NaCl을 포함하는 완충액으로 단백질을 용출시키는 방법.
  6. 제4항에 있어서, 상기 (라)의 첫 번째 젤 여과 크로마토그래피에서 세파크릴 S-200 컬럼을 사용하는 방법.
  7. 제4항에 있어서, 상기 (라)의 음이온 교환 컬럼 크로마토그래피에서 DE-52 컬럼을 사용하고 0.1M NaCl 완충용액과 0.6M NaCl 완충용액으로 농도구배를 형성하여 단백질을 용출시키는 방법.
  8. 제4항에 있어서, 상기 (라)의 소수친화성 컬럼 크로마토그래피에서 토요펄(Toyopearl HW) 컬럼을 사용하고 30% 내지 10%의 황산 암모늄 농도구배를 이용하여 단백질을 용출시키는 방법.
  9. 제4항에 있어서, 상기 (라)의 두 번째 젤 여과 크로마토그래피에서 세파덱스 G-75컬럼을 사용하고 2회의 크로마토그래피를 연속해서 수행하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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