KR960015611B1 - 테크네튬으로 1가의 항체단편을 빠르게 방사성 라벨링하는 방법 - Google Patents

테크네튬으로 1가의 항체단편을 빠르게 방사성 라벨링하는 방법 Download PDF

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Abstract

내용없음

Description

테크네튬으로 1가의 항체단편을 빠르게 방사성 라벨링하는 방법
발명의 배경
본 발명은 내인성 리간드로서 하나 이상의 한쌍의 설프 하이드릴기를 이용하여 테크네튬-99m(Tc-99m)으로 1가의 항체단편을 직접적이고도 빠르게 방사성 라벨링하는 방법 및 킷트에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 방사성 면역검출을 위한 환자에게 거의 즉시 주입할 수 있는 무균의 Tc-99m-라벨링 항체단편용액을 제조하도록 Fab 또는 Fab' 항체단편을 방사성 라벨링하는 방법 및 킷트에 관한 것이다.
항체 및 항체단편에 직접적으로 Tc-99m 이온을 결합하기 위한 공지의 방법이 미국 특허출원 제07/176,421, 07/364,373 및 07/392,280호에 기술되어 있다. 이 출원들은 또한 Tc-99m 및 Re-186/188를 포함하는 다양한 방사성 동위원소로 항체 및 항체단편을 직접적으로 방사라벨링하기 위한 개선된 방법을 청구하고 있다.
네오알엑스 코포레이션(NeoRx corp)의 유럽 특허출원 제A2/0237150 및 센토코르 카르디오배스큘라 이매징 파트너스 엘피(Centocor Cardiovascular Imaging Partners. L.P.)의 PCT출원 제W088/07382호는 Tc-99m으로 항체 또는 항체단편을 방사성 라벨링하기 위한 방법이 기술되어 있지만 라벨링조건이 Fab 또는 Fab' 단편을 라벨링하는데는 좋지 않고 기술된 조건이 불편하며 정량적인 라벨링이 되지 않는다.
또한, 섬광영상화(Scintigraphic imaging)를 위한 환자에게 즉시 주입할 수 있는 용액을 제조하기 위해 수분안에 Fab 및 Fab' 항체단편을 안정하게 방사성 라벨링하기 위한 직접적인 방법이 존재하는 것이 요구된다.
발명의 목적
따라서, 본 발명의 일차목적은 빠르고 편리하며 환자에게 직접적으로 주입할 수 있는 라벨링된 단편이 되도록 1가의, 예를들면 Fab 또는 Fab' 항체단편을 직접적으로 방사성 라벨링하기 위한 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적은 장기저장에 안정하면서도 방사성 항체단편의 무균용액을 제조하기 위해 Tc-99m 발생기로부터 발생하는 무균의 식염수와 직접적으로 조합될 수 있는 Fab 또는 Fab' 항체단편을 라벨링하기 위한 "인스탄트(instant)" Tc-99m 라벨링 킷트를 제공하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적과 잇점은 명세서와 청구범위에 의해 보다 더 명백하게 될 것이다.
발명의 요약
상기 목적은 무균의 무균의 Tc-99m-라벨링 1가 항체단편의 주입가능한 용액을 제조하기 위한 방법을 제공하므로서 이루어지는데 이 방법은,
(1A) pH4.5-5.0의 식염수를 함유하는 약 0.04-0.06M 아세테이트 완충액에 최소한 하나의 유리 설프하이드릴기, 항체단편의 mg당 약 10-150㎍Sn의 염화제 1주석 및 약 30-40-폴드 그램분자량 초과의 염화 제1주석 이상의 타르트레이트를 갖는 1가 항체단편의 섬광영상화를 위한 단위투여량을 함유하는 무균용액, 또는
(1B) pH4.5-5.0의 식염수를 함유하고 슈크로오즈에서 약 0.08-0.1M로 만들어진 약 0.04-0.06M 아세테이트 완충액에 최소한 하나의 유리 설프하이드릴기, 항체단편의 mg당 약 10-150㎍Sn의 염화제1주석 및 약 30-40-폴드 그램분자량 초과의 염화제1주석 이상의 타르트레이트를 갖는 1가의 항체단편의 섬광영상화를 위한 단위투여량을 함유하는 무균용액의 동결 건조물과
(2) 효과적인 섬광영상화 양의 Tc-99m-과테크네튬산염(pertechnetate)을 함유하는 무균용액을 혼합하는 단계를 포함함으로서 Tc-99m으로 항체단편의 실제적이고도 정량적인 라벨링을 상온에서 약 5분안에 할 수 있으며 Tc-99m-라벨링 1가 항체단편의 최종 무균용액이 방사성 면역검출을 위한 환자에게 즉시 주입할 수 있도록 하는 것이다.
또한, 상기 방법에 사용하기 위한 킷트도 제공된다.
상세한 설명
본 발명자들은 최소한 하나, 바람직하게는 다수의 인접한 안정된 유리 설프하이드릴기를 함유하는 1가, 예를들면 Fab 또는 Fab' 항체단편의 "인스탄트" 라벨링을 위한 킷트 및 방법의 시제 및 조건들을 현저하게 개선했다.
라벨링은 항체단편의 용액과 시중 구입가능한 발생기로부터 쉽게 얻을 수 있는 과테크네튬산염을 혼합하여 상온에서 약 5분안에 실제적이고도 정량적으로 달성된다.
통상적인 시제 및 과정에 관한 상세한 사항은 본 출원에서 참조로 이용되었으나 반복되기 않은 3개의 선출원에 나타나 있다.
방사성 라벨링 되는 1가 항체단편은 종양, 감염병해, 미생물, 기생충, 심근경색증, 동맥경화증 반 또는 정상기관 또는 조직에 의해 생성되거나 그들과 회합하는 항원에 포함되지만 제한되지 않는 항원에 결합하는 단편이 될 수 있는 것으로 이해될 것이다. 또한, 본 출원에서 사용되는 용어 "1가 항체단편"은 2가 단편 또는 무상(無傷)의 면역글로블린의 분열(cleavage)에 의해 정상적으로 얻어지는 Fab 또는 Fab' 단편을 초가변성(hypervariable)의 면역글로블린의 항원결합부위를 유지하며 Fab' 단편과 유사하거나 더 작은 크기를 갖는 어떤 단편을 포함할 수 있다. 이것은 단일사슬이든지 복수사슬이든지간에 항원결합부위와 결합하고 아니면 천연면역글로불린 단편과 실제적으로 같은 방법으로 운반자(vehicles)를 타켓팅하므로서 생체내에서 작용하는 유전학적으로 만들어지거나/또는 재조합된 단백질을 포함한다.
Fab' 항체단편은 그 자체가 무상 면역글로불린의 펩신분해에 의해 정상적으로 만들어지는 F(ab')2단편의 감수분열에 의해 정상적으로 그리고 쉽게 만들어진다. 분열은 예를 들면 시스테인, 메르캅토에탄올, 디티오트레이톨(DTT), 글루타티온 등과 같은 티올환원제로 쉽게 이루어진다. 최소한 하나 이상의 유리 설프하이드릴기를 함유하는 분열된 F(ab')2단편은 본 출원에서 "Fab'-SH"로 약칭된다. Fab 항체단편은 바람직하게는 티올환원제의 존재하에서 무상 면역글로불린의 파파인 분해에 의해 정상적으로 그리고 쉽게 만들어진다. 분열된 F(ab)2는 본 출원에서 "Fab-SH"로 약칭된다.
F(ab')2의 환원은 pH5.5-7.5, 바람직하게는 pH6.0-7.0, 보다 바람직하게는 pH6.4-6.8, 가장 바람직하게는 약 pH6.6에서 이루어지는데 예를들면 시트레이트, 아세테이트 또는 포스페이트 완충액, 바람직하게는 인삼염 완충식염수에서 그리고 불활성 가스 분위기 하에서 이루어지는 것이 바람직하다. 티올 환원은 주의하지 않으면 단편의 경, 중 사슬이 분리될 수 있으므로 단편의 통합성 손실을 피하기 위하여 주의깊게 조절하여야 한다는 것이 잘 알려져 있다.
이황산염 환원을 위해 시스테인이 선택되며 시스테인과 유사한 산화전위를 갖는 다른 티올이 또한 바람직하게 사용된다. 단백질에 대한 이황산염 환원제의 비율은 중쇄 이황산염 결합 안정성의 함수이며 각 케이스에 대해서 바람직하여야 한다. F(ab')2항체단편의 분열은 10-30mM 시스테인, 바람직하게는 약 20mM 시스테인 및 10mg/ml의 단백질 농도로 유리하게 이루어진다.
공지의 이황산염 결합환원제로의 F(ab')2단편의 환원은 짧은시간 전형적으로는 한시간 이하 이후에 정제를 포함하여 분석에 의해 1-3유리 설프하이드릴기를 갖는 Fab'을 만들어낸다. 설프하이드릴기는 방사성 금속결합을 좋게 하기 위해 항체단편에 도입될 수 있다. 이러한 목적을 위해 트라우트 시약(이미노티올란)을 사용하는 것은 바람직하지 못한 반면에 몇몇 근접한 설프하이드릴기를 함유하는 올리고펩타이드를 사용하는것이 바람직하다. 특히, 메탈로티오네인 또는 바람직하게는 그것의 C-말단 헥사펩타이드 단편(이하 "MCTP"라 함)을 사용하는 것이 유리하다.
Fab-SH 또는 Fab'-SH 단편은 여분의 환원제를 포함하여 저분자량 스피시즈(species)를 트랩하는 짧은 사이징 겔컬럼을 통하여 유리하게 통과된다. 그러한 적당한 크기의 겔컬럼은 예를들면 세파덱스(Sephadex) G-25, G-50(파마시아(Pharmacia))와 같은 덱스트란, 프랙토겔(Fractogel) TSK HW55(이엠 싸이언스)(EM Science)), P-4, 3P-6(바이오래드(BioRad))와 같은 폴리아크릴아미드 등을 포함한다. 분열은 Fab 또는 Fab' 단편이 최적크기로 생성되는 반면에 일반적으로 이황산염 분열에 영향을 덜받는 경, 중 사슬분열을 최소화하도록 하는 조건을 맞추기 위해 예를들면 사이징배제 HPLC로 모니터된다.
사이징 겔컬럼으로부터의 용출은 약 0.03-0.07 바람직하게는 약 0.05M 아세데이트 완충액과 약 pH4.5에서 안정화되고, 약 0.1-0.3, 바람직하게는 약 0.15M 식염수에서 이루어지며, 불활성 가스, 예를들면 아르곤으로 바람직하게 세척된다. 일반적으로, 용액 ml당 약 0.5-5mg 바람직하게는 약 1-3mg/ml 항체단편 농도에서 작업하는 것이 유리하다.
안정화된 Fab-SH 또는 Fab'-SH 단편은 다음에 주석이온, 바람직하게는 염화제1주석 및 제1주석이온 안정화제와 혼합된다. 주석이온은 주석이온의 이수산기화합물로 입수하거나 수용액산, 예를 들면 염산과의 접촉에 의해 주석금속, 예를들면 호일, 과립, 분말 및 터닝(turning)등으로부터 생성시킬 수 있다. 일반적으로 주석이온은 SnCl2의 형태로, 바람직하게는 0.01N HCl인 용액에 단편 mg당 약 10-150, 바람직하게는 123㎍Sn의 비율로 첨가된다. 주석이온용액은 6N HCl에 SnCl.2 H2O를 용해시키고 아르곤으로 세척된 무균 H2O로 그 용액을 희석하므로서 제조된다.
주석이온의 안정화제는 그 용액에 존재한다. 아스코르빈산염은 환원된 과테크네튬산염과 함께 킬레이트화물(chelator)의 특정하중을 개선시킬 수 있으며 환원제가 주석이온일때 TcO2의 형성을 최소화할 수 있는 것으로 잘 알려져 있다. 다른 폴리카르복실산 예물들면, 타르트레이트, 시트레이트, 프탈레이트, 아미노디아세테이트, 에틸렌디아미네테트라아세틱산(EDTA), 디에틸렌트리아미네펜타아세틱산(DTPA)등과 같은 것들이 사용될 수도 있다. 폴리카르복실산들이 위에 지적되었지만 어떤 다양한 음이온 및/또는 수산기의 산소함유종류, 예를들면 살리실산염, 아세틸아세토네이트, 옥시산, 카테콜, 글리콜 및 다른 폴리올, 예를들면 글루코헵토네이트 등과 같은 것들이 같은 작용을 할 수 있다. 그러한 안정화제들로는 아스코르빈산염, 시트레이트 및 타르트레이트가 바람직한데 보다 바람직한 것은 타르트레이트이다.
그러한 제제들의 정확한 역할은 알려져 있지 않지만 주석이온을 킬레이트화시키고, 우연한 반응을 방지하며, 주석이온의 안정화에 의해 환원을 촉진시키고, 또한 환원된 어떤 산화상태의 과테크네튬산염을 킬레이트화시켜 안정화시키므로서 하나 이상의 티올기 및 단백질상의 다른 근접한 리간드를 갖는 아마도 보다 안정한 킬레이트화합물에 이들 테크네튬이온을 전이시키기 위한 전이킬레이트화제로 이용되는 것으로 나타나 있다. 그러한 제제들은 이하에서 "안정화제"로 표기한다. 주석이온에 대한 안정화제의 질량비는 약 30:1-40:1이다. 주석이온에 대한 언정화제의 질량비는 약 30 : 1 - 40 : 1이다.pH 약 5.5로의 완충액, 바람직하게는 소듐아세테이트에서 바람직하게는 약 0.1M의 농도로 안정화제의 용액, 예를들면 NaK 주석산염은 아르곤으로 정화된 무균 H2O로 제조된다. SnCl2용액의 양의 주석이온에 비하여 30-40 그램분자량 이상이 되도록 안정화제 용액의 충분한 양과 혼합한 후 무균여과하고 아르곤으로 세척한다.
무균의 안정화된 SnCl2용액은 단편의 mg당 약 10-150 바람직하게는 약 123㎍Sn의 최종농도가 되도록 무균의 Fab'-SH 또는 Fab-SH 용액과 혼합되며 필요한 경우 pH 약 4.5-4.8로 조정된다.
단편과 안정화된 주석이온의 용액은 바람직하게는 무균의 바이얼, 예를들면 약 1.25mg 단편/바이얼의 단위용량으로 담겨지며 그 바이얼들은 마개로 밀봉되어 저온 바람직하게는 액체질소에 저장되거나 동결 건조된다. 후자의 경우에 용액은 무균의 바이얼에 담겨지기전에 트레할로스 또는 바람직하게는 슈크로오즈당류로 약 0.09 그램분자량으로 만든다. 그후 그 바이얼의 물질을 동결 건조하여 진공이 불활성 가스 바람직하게는 아르곤으로 파괴되며 동결 건조물을 함유하는 바이얼은 마개로 밀봉되며 임의적으로 냉동기에 저장된다. 동결 건조조건은 통상적이며 통상의 지식을 가진자에게 잘 알려져 있다. 밀봉된 동결 건조물과 밀봉된 액체질소저장의 용액은 최소한 9개월 동안 안정하며 과테크네튬산염과 혼합시에 Tc-99m 이온으로 빠르고 정량적으로 라벨링될 수 있도록 그들의 능력을 유지한다.
단위투여량의 항체단편을 라벨링하기 위하여 한 바이얼의 액체질소에 저장된 냉동용액을 천천히 덥혀서 실온에서 녹이고 또는 한 바이얼의 동결 건조물을 필요한 경우 상온으로 되게 하며 밀봉은 불활성 가스, 바람직하게는 아르곤하에서 연다. 과테크네튬산염의 적절한 영상화량의 무균식염수 용액은 그 바이얼에 첨가되어 혼합된다. 상기 단위투여량의 항체단편을 라벨링할때 과테크네튬산염의 양은 일반적으로 항체단편의 mg당 1-100mCi이며 반응시간은 약 0.1-10분이다. 위에 기술된 단백질과 주석이온의 바람직한 농도에서 과테크네튬산염의 양은 약 5-20mCi/mg이며 반응시간은 약 1-5분이다. 이것은 일반적으로 30분에서 수시간의 배양이 요구되고 어떤 경우에 있어서는 상승된 온도에서 그리고/또는 추가적인 정제가 요구되는 선행기술 공정에 대하여 효과적인 "인스탄트" 라벨링 공정이다. 과테크네튬산염은 일반적으로 식염수 용액중에서 대부분의 경우 NaTcO4형태로 시중에서 구입할 수 있는 발생기로부터 얻어진다. 새로운 형태의 발생기의 공급자에 의해 제시되거나 본 기술분야에서 통상의 기술을 가진자가 알 수 있듯이 이 방법을 적절히 변형함으로써 다른 형태의 과테크네튬산염이 사용될 수 있다. 과테크네튬산염은 일반적으로 식염수, 예를들면 pH 약 3-7, 바람직하게는 3.5-5.5 더욱 바람직하게는 약 4.5-5.0에서 완충된 0.9%(물리적 농도) 식염수 중에서 약 0.2-20mCi/ml의 활성으로 사용된다. 적당한 완충제로는 예를들면, 아세테이트, 타르트레이트, 시트레이트, 포스페이트 등이 있다.
본 발명에 의한 방법은 산화에 매우 안정하고 식염수 및 세륨에서의 트랜스킬레이션에 내성인 형태로 항체단편에 라벨을 실제적이고 정량적으로 간단하게 도입할 수 있다. 본 발명의 방법에 의해 Tc-99m으로 라벨링하였을때 Fab'에 Tc-99m의 100% 도입이 면역반응도의 95% 이상 유지와 함께(분석적인 모니터의 검출의 제한내에서)나타난다. 상기에서 제조된 것과 같은 방사성 항체용액은 적절하게 무균처리되고 발열성 물질이 없는 바이얼에서 제조된 경우에는 즉시 주사될 수 있다. 또한, 과테크네튬 결합후에 유리 설프하이드릴기의 블록킹은 안정화를 위해 필요하지 않다. 또한, 라벨링된 단편의 면역반응성은 이 혈청배양후 거의 감소되지 않는데, 이는 콘쥬게이트가 적어도 24시간까지 완전히 살아있는 영상화제라는 것을 보여준다.
Tc-99m-방사성 라벨링 항체단편은 종양 및 병해의 비침해적인 섬광영상화의 방법에 적절하고 특히 편리하고 효과적이라는 것이 통상의 기술을 가진 사람에게 잘 공지되어 있다. 특히, 종양, 감염병해, 미생물, 기생충, 심근경색, 응집물, 동맥경화증 반 또는 정상기관 또는 조직에 의해 제조되거나 또는 그와 결합된 항원에 특이적으로 결합하고 또 외부로 검출가능한 약제학적으로 허용되는 불활성 방사성 동위원소로 방사성 라벨링된 항체단편을 환자에게 비경구적으로 주사하며, 또 방사성 라벨링된 항체 또는 항체단편이 자리를 잡고 또 라벨링되지 않은 것이 정돈되기에 충분한 시간후에 방사성 라벨링된 항체단편의 증대부위를 외부영상화 카메라로 측정함으로써 종양, 감염병해, 미생물, 기생충, 심근경색, 응집물, 동맥경화증 반 또는 정상기관 또는 조직을 영상화하는 방법에서, 본 발명의 방법에 따라 제조된 Tc-99m 라벨링된 항체단편을 방사성 라벨링된 항체단편으로서 사용하는 것이 진보될 것이다. 그러한 영상화방법은 기술적으로 잘 알려져 있다.
라벨링된 단편은 공지의 방법, 예를들면 마틴주니어 등(Marti, Jr., et al)의 미국 특허 제4,782,840호, 또는 골든버그(Goldenberg)의 미국 특허출원 제06/943,561호에 기술된 것과 같은 방법에 의한 내부작동적이고 또는 내시경검출 방법으로 종양 및 병해를 검출하고 그들의 한계를 한정하는데 유용하다. 상기 섬광, 내부작동 및 내시경방법은 한계 면역검출에 의해 모두 포함된다.
발생기로부터 제조된 과테크네튬산염을 사용하여 1가의 항체단편, 예컨대 Fab'-SH 또는 Fab-SH 단편을 Tc-99m으로 방사성 라벨링하기 위한 킷트(통상의 지식을 가진자에 의한 변형과 함께 본 출원에서 청구된 것과 같은 일반적 킷트)는 종양, 감염병해, 응집물, 동맥경화증 반 또는 정상기관 또는 조직과 관련된 항원에 특이적으로 결합하고 또 최소한 하나, 바람직하게는 다수의 인접하는 유리 설프하이드릴기를 함유하는 항체단편의 단위투여량당 약 0.01-10㎎, 바람직하게는 1-2㎎; 단편의 ㎎당 약 10-150㎍ 주석이온 및 주석이온에 비례하여 30-40 그램분자량 이상의 타르트레이트와 같은 안정제를 포함한다. 상기 킷트의 성분은 용액 또는 동결 건조물의 형태로 단일의 밀봉된 무균바이얼에 제공되며 사용되기 바로전에 항체 또는 항체단편 ㎎당 약 2-100mCi의 Tc-99m 과테크네튬산염과 혼합된다. 정상적으로 상기 킷트는 방사성 라벨링 단계를 달성하기 위해 하나 이상의 보조제, 완충제, 필터, 바이얼, 컬럼 등과 조합하여 사용되거나 또는 제공된다.
상기 설명은 단순히 예시적인 것이며 많은 변형이 상기 설명된 본 발명 방법의 변형과 함께 설계될 수 있다.
더 이상의 설명없이도 통상의 지식을 가진자라면 상술한 설명을 이용하여 본 발명을 최대한 이용할 수 있다. 따라서, 하기의 바람직한 특수실시예는 단순히 예시적인 것이며, 어떤 의미로든지 본 발명을 제한하지 않는다. 하기 실시예에서 모든 온도는 달리 기술하지 않는 한 섭씨로 나타내며 모든 부 및 퍼센트는 중량부 및 중량퍼센트이다.
Tc-99m-항-CEA-Fab'의 제조
A. 라벨링 킷트
하기의 용액을 제조한다.
(Ⅰ) 1ml의 6N HCl에 3350㎎의 SnCl 2 H2O를 용해시키고 그 용액을 아르곤으로 세정된 무균 H2O로 희석시켜 0.075M SnCl2용액을 제조한다.
(Ⅱ) 아르곤으로 세정된 무균의 H2O로 0.05M NaAc에서 pH5.5의 0.1M Nak 타르트레이트 용액을 제조한다.
(Ⅲ) 용액(Ⅰ)의 한 투여량을 용액(Ⅱ) 26투여량과 혼합한 후 그 용액을 무균여과하고 아르곤으로 세정한다.
(Ⅳ) F(ab)2단편에 대하여 펩신분해에 의하여 암태아성 항원(CEA)에 특이적으로 결합하는 뮤린 모노클로날 IgG1항체로부터 제조된 항-CEA-Fab'-SH를 20mM 시스테인으로 Fab'-SH로 환원시켜 Fab'-SH를 식염수에서 0.15M인 0.05M NaOAc 완충액에서 pH4.5로 안정화시킨다(2㎎/㎖); 최종 용액을 무균여과하고 아르곤으로 세정시킨다.
(V) 용액 Ⅳ와 충반한 양의 용액 Ⅲ을 혼합하여 Fab'-SH ㎎당 123㎍Sn의 최종농도를 얻었고 pH를 4.5-4.8로 조정한다.
용액 V를 아르곤하에서 무균바이얼에 채우고(바이얼당 1.25㎎ Fab'-SH) 마개를 하며 마개를 주름지게 밀봉한 후 액체질소에 그 바이얼을 저장한다.
선택적으로, 슈크로오즈 0.09M의 용액 V를 제조하고 그 용액을 아르곤하에서 무균 바이얼에 채우고(바이얼당 1.25mg Fab'-SH) 동결 건조한다. 아르곤으로 진공을 빼고 동결 건조물을 함유하는 바이얼에 마개를 하고 마개를 주름지게 밀봉한다.
B. 라벨링된 단편
한 바이얼의 액체질소에 저장된 단면을 서서히 따뜻하게 하거나 상기 A에 의해 제조된 한 바이얼의 동결 건조물을 선택한다. 발생기로부터 무균식염수에 10mCi의 소듐 퍼테크네테이트를 넣은 무균용액을 한 바이얼의 Fab'-SH 및 안정화된 주석이온에 주입하고 서서히 교반하여 혼합한다. 라벨링은 5분에서의 양이며 Tc-99m-라벨링 단편의 최종용액은 환자에게 즉시 주입할 수 있다.
실시예 2
종양영상화
실시예 1에 의해 제조된 (액체질소에 저장된 Fab'-SH 용액으로) 단위투여량의 Tc-99m-라벨링 항 CEA-Fab'의 무균용액은 3년 이전에 결장암의 "치료"수술을 받은 환자에게 점진적으로 증가시킨 CEA 양으로 정맥에 주입될 수 있다. 주입후 2시간 후의 섬광영상은 일차종양의 제거부위에서는 신우(pelvis)에 항체단편의 정위(localization)를 증명한다. 이어지는 수술은 성공적으로 제거된 1.0×0.5cm 암의 존재를 확인한다.
실시예 3
종양영상화
실시예 1에 의해 제조된(동결 건조물로부터) 단위투여량의 Tc-99m-라벨링항 CEA-Fab'은 암이 될 수 있는 것으로 생검에 의해 입증된 3×2㎝ 직장폴립을 갖는 환자에게 정맥주입된다. 주입 2시간 후의 영상은 일차종양, 간의 우엽(right lobe) 및 좌측폐의 저엽에서 항체단편이 자리를 잡았음을 증명한다. 천자생검은 간 및 폐 모두에서 종양의 존재를 확인한다. 수술을 실행하기 위한 원계획 및 보조적인 방사선 요법이 필요없으며 완화시키는 화학요법이 시작된다.
상기 실시예들은 일반적으로 또는 특별히 설명된 반응체들을 구성하고 상기 실시예에서 사용된 반응체들을 위한 본 발명의 조건들을 시행하므로서 성공적으로 반복될 수 있다.
상기 설명으로부터 통상의 지식을 가진자는 본 발명의 범위와 정신을 벗어나지 않고 본 발명의 기본적인 특징을 쉽게 확인할 수 있으며 다양한 용도 및 조건에 본 발명을 응용하기 위해 본 발명의 많은 변화와 변형을 가져올 수 있다.

Claims (9)

  1. pH4.5-5.0의, 식염수를 함유하는 약 0.04-0.06M 아세테이트 완충액에 최소한 하나의 유리 설프하이드릴기, 항체단편의 ㎎당 약 10-150㎍Sn의 양으로의 염화제1주석, 및 약 30-40-폴드 그램분자량 초과의 염화제1주석 이상의 타르트레이트를 갖는 1가 항체단편의 섬광영상화를 위한 단위투여량을 함유하는데 이 시제들이 불활성 가스로 세정된, 제1무균용액을 제조하고 불활성 가스 분위기하에서 제1무균용액을 유지시키거나, 제1무균용액을 슈크로오즈에서 약 0.08-1.0M로 만들어 그 당 함유용액을 동결 건조시키고, 상기 제1무균용액 또는 그 동결 건조물을 효과적인 섬광영상화양의 Tc-99m-과테크네튬산염을 함유하는 제2 무균용액과 혼합하는 단계를 포함하므로서 Tc-99m으로 항체단편의 실제적이고도 정량적인 라벨링을 상온에서 약 5분에 달성할 수 있는 Tc-99m-라벨링 1가 항체단편의 무균의 주입가능용액 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 1가 항체단편이 Fab-SH 또는 Fab'-SH 단편임을 특징으로 하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 항체단편이 종양반(tumor marker)을 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 항체단편이 감염병해, 미생물 또는 기생충과 회합된 항원을 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 항체단편이 심근경색증, 응집물 또는 동맥경화증 반과 회합된 항원을 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 항체단편이 정상기관 또는 조직과 회합된 항원을 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 상기 항중 어느 항에 있어서, 상기 불활성 가스가 아르곤인 것을 특징으로 하는 방법.
  8. pH4.5-5.0의, 식염수를 함유하는 약 0.04-0.06M 아세테이트 완충액에 최소한 하나의 유리 설프하이드릴기, 항체단편의 ㎎당 10-150㎍Sn 양으로의 염화제1주석, 및 30-40-폴드 그램분자량 초과의 염화제1 주석 이상의 타르트레이트를 갖는 1가 항체단편의 섬광영상화를 위한 단위 투여량을 함유하는 무균용액으로 상기 시제들이 불활성 가스로 세정되고, 상기 1가의 항체단편이 종양, 감염성 병해, 미생물, 기생충, 심근경색증, 응집물, 동맥경화증 반 또는 정상기관 또는 조직에 의해 생성되거나 관련된 항원에 특이적으로 결합하며, 상기 무균용액이 불활성 가스 분위기하에서 무균 콘테이너에 밀봉된, 제1항의 방법에 사용하기 위한 무균용액.
  9. pH4.5-5.0의 식염수를 함유하는 약 0.04-0.06M 아세테이트 완충액에 최소한 하나의 유리 설프하이드릴기, 항체단편의 ㎎당 10-150㎍Sn 양으로의 염화제1주석 및 30-40-폴드 그램분자량 초과의 염화제1주석 이상의 타르트레이트를 갖는 1가 항체단편의 섬광영상화를 위한 단위 투여량을 함유하는 무균용액을 동결 건조시켜 제조된 동결 건조물로서 상기 시제들이 불활성 가스로 세정되고, 상기 1가의 항체단편이 종양, 감염성 병해, 미생물, 기생충, 심근경색증, 응집물, 동맥경화증 반 또는 정상기관 또는 조직에 의해 생성되거나 관련된 항원에 특이적으로 결합하며, 상기 동결 건조물이 불활성 가스 분위기하에서 무균 콘테이너에 밀봉된, 제1항의 방법에 사용하기 위한 동결 건조물.
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