KR950025099A - 인간 알파 아트리알 나트리 우레틱 인자의 미생물학적 제조방법 - Google Patents

인간 알파 아트리알 나트리 우레틱 인자의 미생물학적 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 재조합 DNA 기술 및 단백질 공학을 이용하여 일반적으로 박테리아에서 불안정하다고 알려진 α-hANF를 높은 발현율로 박테리아 숙주내에서 생산하는 방법, 이 과정에서 발현율을 높이기 위해 요구되는 특정의 하이브리드 유전자를 함유하도록 구성된 발현 플라스미드 벡터와 이 발현 벡터에 의해 형질전환된 형질전환 세포주, 또한 그 결과 생성되는 특정의 융합 단백질에 관한 것이다.

Description

인간 알파 아트리알 나트리 우레틱 인자의 미생물학적 제조방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 Lys-C 엔도프로테이나아제(endoproteinase)에 의한 절단부위를 함유하며, 파아지 fr 외피(coat)단백질과 α-hANF로 구성된 유압 단백질의 161개 아미노산 서열 및 그에 상응하는 염기서열이다.
제2도는 파아지 fr 외피단백질 유전자의 해독 시작 부위(translation initiation region ; TiR)의 염기서열이다.
제3도는 파아지 fr 외피단박질 및 α-hANR로 구성된 융합 단백질을 클로닝하고 발현시키기 위한 재조합 DNA 단편들 및 벡터들을 나타낸 것이다.

Claims (22)

  1. 파아지 fr 외피단백질 및 α-hANF로 구성된 융합 단백질이 아미노산 서열을 코드하는 하이브리드 유전자를 삽입시킨 발현 벡터를 사용하여 미생물을 형질전환시킨 후, 형질전환된 미생물을 고밀도 배양하고, 발현된 융합 단백질을 분리, 정제하여 파아지 fr 외피단백질을 제거함으로써 α-hANF를 제조하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 파아지 fr 외피단백질 유전자가 130개 아미노산을 코드하는 유전자로 구성됨을 특징으로 하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 하이브리드 유전자가 파아지 fr 외피단백질 유전자와 α-hANF 유전사 사이에 특정의 화학적 혹은 효소적 절단부위를 암호화하는 염기서열을 함유함을 특징으로 하는 방법.
  4. 제3항에 있어서, 효소적 절단부위가 폴리펩타이드로 발현된 후 Lys-C 엔도프로테이나아제에 의해 절단되는 서열임을 특징으로 하는 방법.
  5. 제4항에 있어서, Lys-C 엔도프로테이나아제에 의해 인지되는 선택적 절단부위가 이소루이신-아스파르트산-리신의 아미노산서열로 구성된 부위임을 특징으로 하는 방법.
  6. 제1항에 있어서, 형질전환된 미생물이 박테리아임을 특징으로하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 박테리아가 엔테로박테리아임을 특징으로하는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 엔테로박테리아가 E.coli임을 특징으로하는 방법.
  9. 파아지 fr 외피단백질 유전자 및 α-hANF 유전자가 연결된 하이브리드 유전자가 삽입되어 있음을 특징으로 하여, 미생물내에서 α-hANF을 고 수율로 발현시킬 수 있는 재조합 발현 벡터.
  10. 제9항에 있어서, 파아지 fr 외피단백질의 TIR(translation initiation region) 및 유도가능한 박테리아나 박테리오파아지의 프로모터에 의해 조절됨을 특징으로 하는 재조합 발현 벡터.
  11. 제9항에 있어서, 파아지 fr 외피단백질 유전자가 130개의 아미노산을 코드하는 유전자로 구성됨을 특징으로 하는 재조합 발현 벡터.
  12. 제9항에 있어서, 하이브리드 유전자가 파아지 fr 외피단백질 유전자 α-hANF 유전자 사이에 화학적 또는 효소적 절단부위를 암호화하는 DNA 서열을 함유함을 특징으로 하는 재조합 발현 벡터.
  13. 제12항에 있어서, 효소적 절단부위가 폴리펩타이드로 발현된 후 Lys-C 엔도프로테이나아제에 의해 절단됨을 특징으로 하는 재조합 발현 벡터.
  14. 제13항에 있어서, Lys-C 엔도프로테이나아제에 의해 인지되는 선택적 절단부위가 이소루이신-아스파르트산-리신의 서열로 구성된 부위임을 특징으로 하는 재조합 발현 벡터.
  15. 제9항의 발현벡터에 의해 형질전환된 미생물 세포주.
  16. 제15항에 있어서, 형질전환된 미생물이 박테리아임을 특징으로 하는 세포주.
  17. 제16항에 있어서, 형질전환된 박테리아가 엔테로박테리아임을 특징으로하는 세포주.
  18. 제17항에 있어서, 형질전환된 엔테로박테리아가 E.coil임을 특징으로하는 세포주.
  19. 파아지 fr 외피단백질 및 α-hANF 단백질로 구성되여, 엔도프로테이나아제에의해 절단가능한 서열을 함유함을 특징으로 하는 융합 단백질.
  20. 제 19항에 있어서, 파아지 fr 외피단백질이 130개의 아미노산으로 구성됨을 특징으로 하는 융합 단백질.
  21. 제19향에 있어서, Lys-C 엔도프로테이나아제에 의해 절단 되어지는 부위를 함유함을 특징으로 하는 융합 단백질.
  22. 제21항에 있어서, Lys-C 엔도프로테이나아제에 의해 인지되는 선택적 절단부위가 이로루이신-아스파르트산-리신의 서열로 구성된 부위임을 특징으로 하는 융합 단백질.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019940003582A 1994-02-26 1994-02-26 인간 알파 아트리알 나트리 우레틱 인자(human α-arterial natriuretic factor; α-hANF)의 미생물학적 제조방법 KR970009082B1 (ko)

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