KR940009958B1 - 간접 응집 면역 측정 방법 및 장치 - Google Patents

간접 응집 면역 측정 방법 및 장치 Download PDF

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Abstract

내용 없음.

Description

간접 응집 면역 측정 방법 및 장치
제 1 도는 본 발명에 의한 간접 응집 면역 측정 방법을 수행하기 위한 장치의 블럭도임.
제 2 도는 본 발명에 의한 면역 측정 방법과 종래의 정치법 있어서 각각의 역가에 관한 상관 관계를 나타내는 다이아그램임.
제 3 도는, V자형 웰 마이크로플레이트를 사용하여 관찰한 시험 샘플의 관찰 도면임.
제 4-6 도는 본 발명에 의한 면역 측정 방법과 종래 정치법에 있어서 각각의 역가에 관한 상관 관계를 나타내는 다이아그램임.
* 도면의 주요부분에 대한 부호의 설명
1 : 마이크로플레이트 공급 장치 2 : 시험 샘플 공급 장치
3 : 시약 공급 장치 4 : 교반 장치
5 : 침강 촉진 장치 6 : 경사 처리 장치
7 : 패턴 독취 장치 8 : 마이크로플레이트 회수 장치
본 발명은 간접 응집 면역 측정 방법 및 장치, 더욱 구체적으로는 항원 항체 반응과 자성 입자 또는 자성체를 함유하는 입자를 사용하는 간접 응집 면역 측정 방법 및 이 간접 응집 면역 측정 방법을 수행하기 위한 장치에 관한 것이다.
항원 항체 반응에 의한 결합 반응을 항원 또는 항체 결합 입자를 사용함으로써 감도를 높여 측정하는 면역 측정 방법에 사용되는 간접 응집 반응은 "수신(受身) 응집 반응(passive agglutination)" 또는 "역수신 응집 반응(reverse passive agglutination)이라고 불리며 다량의 시험 샘플에 대한 간이 측정법으로서 널리 실용화되고 있다.
간접 응집 반응을 이용하는 면역 측정 방법은 종래의 EIA(효소 면역 측정법)이나 RIA(방사 면역 측정법)등에 비해서 조작이 간편하고, 항원 항체 반응의 유무의 판정에도 특별한 기기를 필요로 하지 않는다는 점에서 우리하다. 그러나, 간접 응집 반응에 의한 면역 측정법은 조작의 자동화가 극히 곤란하다는 단점이 있고, 아직 부분 자동화 단계를 벗어나지 못한 상태이다.
간접 응집법의 검출 패턴 형성법에는 2가지가 있다.
첫번째 방법은, "U"자형 또는 "V"자형 웰을 갖는 마이크로플레이트에 놓인 시험 샘플의 희석 용액에 입자를 함유한 시약을 첨가하고, 혼합물을 교반시킨 다음, 정치시키고, 웰 바닥에 형성된 시약 입자들의 침강패턴으로부터 항원 항체 반응의 유무를 판정한다. 이하, 이 방법을 "정치법(standing method)"이라고 약칭한다.
두번째 방법은, "U"자형 또는 "V"자형 웰을 갖는 마이크로플레이트에 놓인 시험 샘플의 희석 용액에 입자를 함유하는 시약을 첨가하고, 혼합물을 교반시킨 다음, 원심분리시켜 웰 바닥에 입자들을 침강시킨다. 이어서, 마이크로플레이트를 기울여서 마이크로플레이트의 웰 바닥에 침강된 입자 코딩의 미끌어져 내린 상태로부터 항원 항체 반응의 유무를 판단한다. 이하, 이 방법을 "원심법(centrifugation method)"이라고 약칭한다.
정치법에 의한 침강 패턴으로부터 항원 항체 반응의 유무를 판단하는 경우에는, 정치중의 약한 진동에 의해서도 패턴이 쉽게 변형되기 때문에, 예를들면 패턴의 흐트러짐 패턴 면적의 감소 및 웰 바닥에 따른 패턴의 슬리프 현상(slippage)의 유발 때문에 패턴 판단의 자동화가 극히 곤란하다. 또한, 정치법은 측정에 적합한 형태로 패턴이 형성되기까지, 물론 사용된 입자 유형에 따라 여기에 소요되는 시간은 달라지겠지만, 약 0.5 내지 3시간의 장시간이 소요된다는 단점이 있다.
한편, 원심법의 경우에는, 원심 분리기를 사용함으로써 침강을 수 분내에 완료할 수 있고, 수 분 동안 마이크로플레이트를 기울인 후 패턴을 독취할 수 있다. 또한, 패턴이 형성되는 동안 패턴에 가해지는 진동에 의한 패턴의 변형에 대해 전혀 우려를 가질 필요가 없다. 그러나, 실제로 원심분리기를 사용하여 면역 측정을 자동적으로 수행하는 것은 곤란하다.
상기한 종래의 정치법 및 원심법에 사용될 수 있는 시험 샘플로서는 예를들면 혈청, 뇨 및 기타 체액을 들 수 있다. 종래의 방법에서는 통상적으로 시험 샘플을 희석해서 사용하였다. 그러나, 혈구와 혈청을 분리시키지 않고 전(全) 혈액을 사용할 경우, 침강 패턴이 마이크로플레이트의 웰 바닥의 한 점에 집중되는 경향이 있기 때문에 혈액 성분이 응집상 및 침강 패턴에 나쁜 영향을 줄 수 있으며, 이것이 면역 측정 결과를 왜곡시킬 수 있다는 것은 잘 알려져 있다.
종래의 다른 면역 측정법, 예를들면 EIA(효소 면역 측정법) 및 RIA(방사 면역 측정법)에서는 비특이 반응을 방지하기 위한 전처리 단계로서 혈구와 혈청의 분리 조작을 수행한다.
따라서, 본 발명의 첫번째 목적은 증가된 자기 침강속도를 갖는 간편하고 자동화된 간접 응집 면역 측정방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 두번째 목적은 상기 응집 면역 측정 방법을 자동적으로 수행하기 위한 장치를 제공하는 것이다.
본 발명에 의하면, 본 발명의 제1목적은(ⅰ) 시험 샘플과, 용기내에서 간접 응집 반응이 일어나게 하기 위한 자성 입자 또는 자성체를 함유하는 입자를 함유하는 시약으로 이루어진 면역 측정계를 구성하는 단계, (ⅱ) 자성 입자 또는 자성체를 함유하는 입자를 자력에 의해 침강시키는 단계, (ⅲ) 용기를 경사지게 정치시키는 단계, 및 (ⅳ) 용기 바닥에 침강된 응집 자성체 입자들이 미끌어져 내린 상태로부터 면역 반응의 유무를 판정하는 단계로 이루어진 자기 응집 면역 측정 방법에 의해 달성될 수 있다.
상기 자기 응집 면역 측정 방법에서 자성체 입자는 전자석이나 영구 자석에 의해 침강될 수 있다.
본 발명의 제2목적은 (a) 면역 분석 측정용 시험 샘플과, 면역 측정용 시약을 수용할 수 있는 자성 입자 또는 자성체 함유 입자를 함유하는 용기, (b) 자성 입자를 함유하는 성분을 자력에 의해 용기 바닥에 침강시키기 위한 자기 침강 수단, 및 (c) 용기를 경사진 상태로 정치시키기 위한 경사 정치 수단을 갖는 장치에 대해 달성될 수 있다.
본 발명에서는 자성 입자를 자기 침강 촉진대 상에 있는 용기의 바닥의 자력에 의해 강제 침강시킨다. 자기 침강 촉진대는 원심분리기에 의해 자성체 입자를 강제 침강시키는 것과 동일한 작용을 수행하며, 따라서, 면역 측정에 소요되는 시간을 종래의 정치법에서 소요되는 시간의 1/3 이하로 줄일 수 있다. 또한, 진동에 전혀 영향을 받지 않는다.
본 발명에 사용하기 위한 시약에 함유되는 자성 입자 또는 자성체 함유 입자의 예로서는 자성 입자, 일본국 공개 특허 제195161/1984호에 개시된 강자성체 함유 젤라틴 입자, 혈청 알부민 또는 중합체 물질로 피복시킨 자성체로 이루어진 자성 입자, 및 자성체 함유 중합체 입자를 들 수 있다. 자성 입자 또는 자성체 함유 입자용 재료로서는 강자성체가 바람직하다.
본 발명에 따른 자기 응집 면역 측정 방법에 의해 시험할 수 있는 시험 샘플로서는 혈청, 뇨, 체액 및 전혈액을 들 수 있다. 전혈액을 시험하는 경우, 자성 입자 또는 자성체 함유 입자를 함유하는 성분만이 자력에 의해 용기 바닥에 침강된다. 따라서, 시험 샘플중의 혈구 성분은 용기 중의 시험 샘플 전체에 퍼지며, 오직 자성 입자 또는 자성체 함유 입자를 함유하는 성분만이 선택적으로 용기 바닥의 함 부분에 침강된다. 따라서, 전혈액을 사용하는 경우에도, 자성 입자 또는 자성체 함유 입자를 함유하는 성분에 의해 형성된 패턴은 시험 샘플중에 존재하는 다른 성분들에 의해 거의 영향을 받지 않으며, 설사 받는다 해도 그 영향은 실제로 무시할 만하다.
용기가 혈구 성분에 의해 완전히 적색으로 착색되어 침강을 판정하기가 곤란한 경우, 용기를, 예컨대 유리, 플라스틱 필름 또는 셀로판 등으로 만든 적색 필터로 가림으로써 용이하게 판정할 수 있다.
본 발명에 사용되는 시험 샘플 및 시약을 수용하기 위한 용기로서는 플라스틱 수지, 예컨대 폴리스티렌 수지, ABS 수지, 또는 유리로 만든 U자형 또는 V자형의 대형 또는 소형 용기를 사용할 수 있다.
다량의 시험 샘플을 시험하기 위해서는 형성된 패턴을 선명하게 관찰할 수 있는 폴리스티렌제 V자형 웰 마이크로플레이트를 사용하는 것이 바람직하다.
앞에서 언급한 바와 같이, 본 발명에 의한 자기 응집 면역 측정 방법을 수행하기 위한 장치는, (a) 면역 분석 측정용 시험 샘플과, 면역 측정용 시약을 수용할 수 있는 자성 입자 또는 자성체 함유 입자를 함유하기 위한 용기, (b) 자성 입자를 함유하는 성분을 자력에 의해 용기 바닥에 침강시키기 위한 자기 침강 수단, 및 (c) 용기를 경사진 상태로 정치시키기 위한 경사 정치 수단을 갖는다.
실용화를 위해 자동화한 본 발명에 의한 장치의 일례를 이하 제 1 도를 참조하여 설명한다.
제 1 도는 본 발명에 의한 장치의 일례에 대한 다이아그램이며, 본 발명을 예시하기 위해 주어진 것이지, 본 발명을 한정하고자 하는 것은 아니다.
제 1 도에서, 참조 번호(1)은 마이크로플레이트 공급 장치를 나타내는 것으로서, 예를들면 면역 측정용 시험 샘플과, 면역 측정용 시약을 수용할 수 있는 자성체 입자를 수용하기 위한 상기의 용기로서 기능하는 마이크로플레이트(도시하지 않음)상에 다수의 V자형 웰을 갖는다. 참조 번호(2)는 시험 샘플을 공급하기 위한 시험 샘플 공급 장치이고, 참조 번호(3)은 자성 입자 또는 자성체 함유 입자를 함유하는 시약을 공급하기 위한 시약 공급 장치이고, 참조 번호(4)는 시험 샘플과 시약을 교반시키기 위한 교반 장치이고, 참조 번호(5)는 자성 입자 또는 자성체 함유 입자를 마이크로플레이트 바닥에 침강시키기 위한 침강 촉진 장치이고, 참조 번호(6)은 마이크로플레이트 공급 장치(1)을 경사진 상태로 정치시키기 위한 경사 처리 장치이고, 참조 번호(7)은 마이크로플레이트 공급 장치(1)를 경사시킴으로써 바닥으로부터 침강된 입자들의 미끌어져 내린 상태를 독취 또는 판정하기 위한 패턴 독취 장치이고, 참조 번호(8)은 사용된 마이크로플레이트를 회수하기 위한 마이크로플레이트 회수 장치이다.
[실시예 1]
[항 인체 α 페토프로테인(AFT) 감작 페리콜로이드 함유 젤라틴 입자의 제조]
약 3미크론의 평균 입경을 갖는, 페리콜로이드 함유 젤라틴 입자(일본국 공개 특허 제195161/1984호 참조)에 항인체 AFP 항체(토끼, DACO)를 버나드(Barnard)등의 방법[Clin. Chem., 27(6), 832(1981)참조]에 따라 제공함으로써 항인체 AFP 감작 페리콜로이드 함유 젤라틴 입자를 제조하였다.
[실시예 2]
[혈청 중의 AFP의 측정]
상이한 농도의 AFP를 함유하는 일련의 혈청 시험 샘플을 각각 혈청 희석 용액으로 10배 희석시켰다.
얻어진 희석 혈청 시험 샘플을 각각 마이크로플레이트의 V자형 웰에 넣었다. 마이크로플레이트의 V자형 웰에 들어 있는 각 희석 시험 샘플에 실시예 1에서 제조한 항인체 AFP 감작 페리콜로이드 함유 젤라틴 입자의 0.09% 농도 분산액 25㎕을 첨가하였다. 혼합물을 10분간 교반시켰다.
마이크로플레이트를 자석을 사용한 침강 촉진대 위에서 5분간 정치시켰다. 이어서, 마이크로플레이트를 침강 촉지대로부터 자력의 영향이 없는 패턴 독취대로 옮겨, 약 70°의 경사로 1분간 정치시킨 다음 각 웰의 바닥에서 침강된 입자들의 미끌어져 내린 상태를 관찰함으로써 면역 반응 유무를 판단하였다. 침강된 입자의 미끌어져 내린 현상이 관찰될 경우 면역 반응이 일어나지 않는 것으로, 즉 면역 반응이 음성인 것으로 판정하였으며, 반면에 침강된 입자의 미끌어져 내린 현상이 전혀 관찰되지 않을 경우, 면역 반응이 일어난 것으로, 즉 면역 반응이 양성인 것으로 판정하였다. 제 3 도는 V자형 웰 마이크로플레이트를 사용하여 얻은 상기 시험 샘플에 대한 관찰예를 도시한 도면이다.
제 2 도는 상기 본 발명에 의한 면역 측정 방법과 시판되고 있는 α-페토프로테인 측정용 시약[상표명 : "Serodia AFP mono", 후지레비오사(Fujirebio Inc.)제품]을 사용하는 종래의 정치법에 있어서 각각의 역가에 관한 상관 관계를 도시한 도면이다.
[실시예 3]
[혈청 중의 AFP의 측정]
AFP를 함유하는 혈청 시험 샘플을 혈청 희석액으로 10배 희석시켰다. 희석시킨 혈청 시험 샘플 50㎕를 마이크로플레이트의 제1V자형 웰에 넣었다. 마이크로플레이트의 제2웰에서 제8웰까지의 각 웰에 혈청 희석액 25㎕를 넣었다. 제 1웰부터 희석시킨 혈청 시험 샘플 25㎕를 취하고, 희석시킨 혈청 시험 샘플을 사용하여 제2웰로부터 제8웰까지 순차적으로 2n배 희석시켰다. 마이크로플레이트의 V자형 웰에 있는 각각의 희석 시험 샘플에 실시예 1에서 제조한 항인체 AFP 감작 페리콜로이드를 함유하는 젤라틴 입자의 0.14% 농도 분산액 25㎕를 가하였다. 혼합물을 3분간 교반시켰다. 자석을 사용한 침강 촉진대에서 마이크로플레이트를 3분간 정치시켰다. 이어서, 마이크로플레이트를 침강 촉진대에서 자력의 영향이 없는 패턴 독취대로 옮기고, 이 독취대 상에서 약 45°경사로 1분간 정치시킨 다음, 각 웰의 바닥에 침강된 입자들의 미끌어져 내린 상태를 관찰함으로써, 실시예 2에서와 같은 방법으로 면역 반응의 유무를 판정하였다. 그 결과를 표 1에 나타낸다.
[실시예 4]
[전혈 중의 AFP의 측정]
AFP를 함유하는 혈청 시험 샘플을 혈청 희석액으로 5배 희석시켰다. 이 희석 혈청 시험 샘플에 건강한 사람에게서 채취한 전혈을 희석 혈청 시험 샘플량과 등량 첨가함으로써 시험 샘플을 제조하였다.
제조한 시험 샘플 50㎕를 마이크로플레이트의 제1V자형 웰에 넣었다. 혈청 희석액 25㎕를 마이크로플레이트의 제2웰 내지 제8웰의 각각에 넣었다. 제1웰로부터 시험 샘플 25㎕를 취하고, 희석 시험 샘플을 사용하여 순차적으로 제2웰 내지 제8웰을 2n배 희석시켰다. 마이크로플레이트의 V자형 웰에 있는 각 희석 시험 샘플에 실시예 1에서 제조한 항인체 AFP 감작 페리콜로이드를 함유하는 젤라틴 입자의 0.14% 농도의 분산액 25㎕를 가하였다. 혼합물을 3분간 교반시켰다.
마이크로플레이트를 자석을 사용한 침강 촉진대에서 3분간 정치시켰다. 이어서, 마이크로플레이트를 침강촉진대에서 자력의 영향이 없는 패턴 독취대로 옮기고, 그 위에서 45°경사로 1분간 정치시킨 다음, 각 웰의 바닥으로부터 침강된 입자의 미끌어져 내린 상태를 관찰함으로써 면역 반응의 유무를 판단하였다. 결과를 표 1에 나타내었다.
[표 1]
+ : 양성
- : 음성
-* : 판정하기 어려움
[실시예 5]
[혈청 중의 AFP의 측정]
AFP를 상이한 농도로 함유하는 일련의 혈청 시험 샘플을 각각 혈청 희석액으로 10배 희석시켰다.
희석시킨 혈청 시험 샘플 각각을 마이크로플레이트의 V자형 웰에 넣었다. 마이크로플레이트의 V자형 웰에 있는 각각의 희석 시험 샘플에 실시예 1에서 제조한 항인체 AFP 감작 페리콜로이드를 함유하는 젤라틴 입자의 0.14% 농도 분산액 25㎕를 가하였다. 혼합물을 5분간 교반시켰다.
자석을 사용한 침강 촉진대에서 마이크로플레이트를 5분간 정치시켰다. 이어서, 마이크로플레이트를 침강 촉진대에서 자력의 영향이 없는 패턴 독취대로 옮기고, 이 독취대 상에서 약 45°경사로 1분간 정치시킨 다음, 각 웰의 바닥에 침강된 입자 코팅의 미끌어져 내린 상태를 관찰하였다. 1분 후 면역 반응의 유무를 판정하였다. 상기한 바와 같이, 침강된 입자 코팅의 미끌어져 내림이 관찰되면 면역 반응이 일어나지 않은 것으로, 즉 면역 반응이 음성인 것으로 판정하였다. 반면에, 침강된 입자 코팅의 미끌어져 내림이 관찰되지 않을 경우에는 면역 반응이 일어난 것으로, 즉 면역 반응이 양성인 것으로 판정하였다.
[실시예 6]
[혈청 중의 AFP의 측정]
AFP를 함유하는 혈청 시험 샘플을 혈청 희석액으로 10배 희석시켰다. 희석시킨 혈청 시험 샘플 50㎕를 마이크로플레이트의 제1V자형 웰에 넣었다. 마이크로플레이트의 제2웰에서 제8웰까지 각 웰에 혈청 희석액 25㎕를 넣었다. 제1웰로부터 희석된 혈청 시험 샘플 25㎕를 취하고, 희석된 혈청 시험 샘플을 사용하여 제2웰로부터 제8웰까지 순차적으로 2n배 희석시켰다. 마이크로플레이트의 V자형 웰에 있는 각각의 희석 시험 샘플에 실시예 1에서 제조한 항인체 AFP 감작 페리콜로이드를 함유하는 젤라틴 입자의 0.14% 농도 분산액 25㎕를 가하였다. 혼합물을 5분간 교반시켰다.
자석을 사용한 침강 촉진대에서 마이크로플레이트를 5분간 정치시켰다. 이어서, 마이크로플레이트를 침강 촉진대에서 자력의 영향이 없는 패턴 독취대로 옮기고, 이 독취대 상에서 약 45°경사로 1분산 정치시킨 다음, 각 웰의 바닥에 침강된 입자 코딩의 미끌어져 내린 상태를 관찰함으로써, 실시예 5에서와 같은 방법으로 면역 반응의 유무를 판정하였다. 그 결과는 표 1에 나타낸 실시예 3의 결과와 동일하였다.
제 4 도는 상기의 본 발명에 의한 면역 측정 방법과 시판되고 있는 α-페토프로테인 측정용 시약(상표명 : Serodia AFP mono, 후지레비오사 제품)을 사용하는 종래의 정치법에 있어서 각각의 역가에 대한 상관 관계를 보여준다.
[실시예 7]
[전혈 중의 AFP의 측정]
AFP를 함유하는 혈청 시험 샘플을 혈청 희석액으로 5배 희석시켰다. 이 희석 혈청 시험 샘플에 건강한 사람에게서 채취한 전혈을 희석 혈청 시험 샘플량과 등량으로 첨가함으로써 시험 샘플을 제조하였다.
제조한 시험 샘플 50㎕를 마이크로플레이트의 제1V자형 웰에 넣었다. 혈청 희석액 25㎕를 마이크로플레이트의 제2웰 내지 제8웰의 각각에 넣었다. 제1웰로부터 시험 샘플 25㎕를 취하고, 희석 시험 샘플을 사용하여 순차적으로 제2웰 내지 제8웰을 2n배 희석시켰다.
마이크로플레이트의 V자형 웰에 있는 각 희석 시험 샘플에 실시예 1에서 제조한 항인체 AFP 감작 페리콜로이드를 함유하는 젤라틴 입자의 0.14% 농도 분산액 25㎕를 가하였다. 혼합물을 5분간 교반시켰다.
마이크로플레이트를 자석을 사용한 침강 촉진대에서 5분간 정치시켰다. 이어서, 이크로플레이트를 침강 촉진대에서 자력의 영향이 없는 패턴 독취대로 옮기고, 그 위에서 45°경사로 1분간 정치시킨 다음, 각 웰의 바닥에 침강된 입자 코팅의 미끌어져 내린 상태를 관찰함으로써 실시예 5에서와 같은 방법으로 면역 반응의 유무를 판단하였다. 그 결과는 표 1에 나타낸 실시예 4의 결과와 동일하였다.
[실시예 8]
[ATLV 항원 감작 페리콜로이드 함유 젤라틴 입자의 제조]
일본국 공개 특허 제195161/1984호에 개시된 약 2.5미크론의 평균 입경을 갖는, 페리콜로이드 함유 젤라틴 입자에 일본국 공개 특허 제44870/1985호에 개시된 통상의 방법에 따라 ATLV 항원을 가함으로써 ATLV 항원 감작 페리콜로이드 함유 젤라틴 입자를 제조하였다.
[실시예 9]
[혈청 중의 ATLV 항체의 측정]
혈청 희석액 25㎕를 마이크로플레이트의 각 V자형 웰에 넣었다. 혈청 시험 샘플 25㎕를 마이크로플레이트의 제1V자형 웰에 있는 혈청 희석액에 가하였다. 제1웰로부터 희석시킨 혈청 시험 샘플 25㎕를 취하고, 희석 혈청 시험 샘플을 사용하여 제2웰로부터 제 12웰까지 순차적으로 2n배 희석시켰다. 마이크로플레이트의 V자형 웰에 있는 각각의 희석 시험 샘플에 실시예 8에서 제조한 ATLV 항원 감작 페리콜로이드를 함유하는 젤라틴 입자 0.2% 농도의 분산액 25㎕를 가하였다. 혼합물을 5분간 교반시켰다.
자석을 사용한 침강 촉진대에서 마이크로플레이트를 30초간 정치시켰다. 이어서, 마이트로플레이트를 침강 촉진대에서 자력의 영향이 없는 패턴 독취대로 옮기고, 이 독취대 상에서 약 60°경사로 1분간 정치시킨 다음, 각 웰의 바닥에 침강된 입자 코팅의 미끌어져 내린 상태를 관찰함으로써, 실시예 5에서와 같은 방법으로 면역 반응의 유무를 판정하였다.
제 5 도는 상기의 본 발명에 의한 면역 측정 방법과, 시판되고 있는 ATLV 항체 측정용 시약(상표명 : "Serodia ATLV antibody detection agent", 후지레비오사 제품)을 사용하는 종래의 정치법에 있어서 각각의 역가에 대한 상관 관계를 보여준다.
[실시예 10]
[HIV 항원 감작 페리콜로이드 함유 젤라틴 입자의 제조]
일본국 공개 특허 제195161/1984호에 개시된 약 2.5미크론의 평균 입경을 갖는, 페리콜로이드 함유 젤라틴 입자에 일본국 공개 특허 제182662/1987호에 개시된 통상의 방법에 따라 HIV 항원을 가함으로써 HIV 항원 감작 페리콜로이드 함유 젤라틴 입자를 제조하였다.
[실시예 11]
[혈청 중의 HIV 항체의 측정]
혈청 희석액 75㎕를 마이크로플레이트의 각 웰에 넣었다. 혈청 시험 샘플 25㎕를 마이크로플레이트의 제1V자형 웰에 있는 혈청 희석액에 넣었다. 마이크로플레이트의 제2웰에서 제12웰까지 각 웰에 혈청 희석액 25㎕를 넣었다. 제1웰로부터 희석 혈청 시험 샘플 25㎕를 취하였다. 희석 혈액 시험 샘플을 사용하여 제2웰로부터 제12웰까지 순차적으로 2n배 희석시켰다. 마이크로플레이트의 V자형 웰에 있는 각각의 희석 시험 샘플에 실시예 10에서 제조한 HIV 항원 감작 페리콜로이드 함유 젤라틴 입자의 0.2% 농도 분산액 25㎕를 가하였다. 혼합물을 5분간 교반시켰다. 자석을 사용한 침강 촉진대에서 마이크로플레이트를 30초간 정치시켰다. 이어서, 마이크로플레이트를 침강 촉진대에서 자력의 영향이 없는 패턴 독취대로 옮기고, 이 독취대 상에서 약 60°경사로 1분간 정치시킨 다음, 각 웰의 바닥에 침강된 입자 코딩의 미끌어져 내린 상태를 관찰함으로써, 실시예 5에서와 같은 방법으로 면역 반응의 유무를 판정하였다.
제 6 도는 상기의 본 발명에 의한 면역 측정 방법과 시판되고 있는 HIV 항체 측정용 시약(상표명 : "Serodia HIV antibody detection agent", 후지레비오사 제품)을 사용하는 종래의 정치법에 있어서 각각의 역가에 대한 상관관계를 보여준다.
따라서, 본 발명에 의하면, 원심분리기를 사용하는 종래의 방법과는 달리 간접 응집 면역 측정 방법의 자동화를 용이하게 달성할 수 있다. 또한, 본 발명에 의한 간접 응집 면역 측정 방법은 종래의 정치법에 비해서 진동과 같은 환경적인 조건에 영향을 받지 않고 보다 짧은 시간내에 수행할 수 있다. 또한, 본 발명에 의하면, 원심분리기를 사용하는 종래의 방법에서는 불가능하였던 전혈을 시험 샘플로 사용하는데 아무런 문제가 없다. 끝으로, 본 발명에 의한 간접 응집 면역 측정 방법과 종래의 정치법 간에는 현저한 상관관계가 있으며, 본 발명의 면역 측정 방법은 혈청, 뇨 및 기타 체액 뿐만 아니라 전혈에도 적용가능하기 때문에, 종래의 정치법을 본 발명에 의한 간접 응집 면역 측정 방법으로 얼마든지 대체 가능하며, 본 발명은 보다 간편한 면역 측정 방법을 제공한다.

Claims (2)

  1. (ⅰ) 시험 샘플과, 용기내에서 간접 응집 반응이 일어나게 하기 위한 자성 입자 또는 자성체를 함유하는 입자를 함유하는 시약으로 이루어진 면역 측정계를 구성하는 단계, (ⅱ) 상기 자성 입자 또는 자성체를 함유하는 입자를 자력에 의해 침강시키는 단계, (ⅲ) 상기 용기를 경사지게 정치시키는 단계, 및 (ⅳ) 침강된 응집 자성 입자들이 용기 바닥으로부터 미끌어져 내린 상태로부터 면역 반응의 유무를 판정하는 단계로 이루어진 간접 응집 면역 측정방법.
  2. (a) 면역 분석 측정용 시험 샘플과, 면역 측정용 시약을 수용할 수 있는 자성 입자 또는 자성체 함유 입자를 함유하는 용기, (b) 상기 자성 입자를 함유하는 성분을 자력에 의해 상기 용기 바닥에 침강시키기 위한 자기 침강 수단, 및 (c) 용기를 경사진 상태로 정치시키기 위한 경사 수단을 갖는 간접 응집 면역 분석 측정용 장치.
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