KR940009686A - 세포 특성을 측정하기 위한 마이크로광용해-분석 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 촛점이 맞추어진 선택된 주파수와 에너지 밀도를 갖는 빛을 사용하여 세포막의 강도를 측정하는 방법을 개시하고 있다. 또한, 본 발명은 세포 특성을 변형시키는 약물에 노출시킨 세포막의 강도와 대조군의 세포막 강도를 비교함으로써 세포내의 특정 질병의 존재를 진단하는 데 유용하다.
Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도 내지 제3도는 마이크로광용해의 곡선을 나타낸다.
제4도 및 제1도 내지 제3도의 마이크로광용해의 %반응율 곡선을 나타낸다.
Claims (39)
- 약 200-약 400mOsm범위의 선택된 삼투 몰랄 농도의 생리 식염 용액에 측정하고자 하는 막 강도를 갖는 테스트 세포를 현탁시켜 세포 함유 용액을 형성시키고; 반응성이 큰 전자 결여 원자를 생성하기 위해서 약 300-약 900nm 범위내의 복사 에너지를 흡수하는 분자를 포함하는 불활성 세포 공격 화학 제제를 상기 세포 함유 용액에 첨가하여 복사 에너지에 민감한 용액을 생성하고; 상기 복사 에너지에 민감한 용액의 마이크로 샘플을 함유하는 편재된 현미경(microscopic)부위를 식별하고; 선택된 파장에서 약300-약 900nm 범위내에서 촛점을 맞춘 1차 복사에너지를 상기 복사 에너지에 민감한 용액의 상기 마이크로 샘플에 투사하여 임의의 시간에서 상기 마이크로 샘플의 상기 편재된 현미경 부위내의 무상해 세포의 수를 측정하기 위해서, 상기 복사 에너지에 민감한 용액내의 상기 세포를 선택된 시간동안 상기 복사 에너지에 노출시키고; 상기 편재된 현미경 부위내의 무상해 세포의 수를 측정하고; 상기 1차 복사에너지와 다른 선택된 파장에서 선택된 시간 간격내의 선택된 시간동안 약 300-약 900nm 범위내에서 촛점이 맞추어진 2차 복사 에너지를 투사하여 상기 세포 공격 제제를 광활성화시킴으로써 상기 세로 공격 제제에서 반응성이 큰 전자 결여 원자를 생산하여 세포 반응 매질을 형성시키고; 상기 세포 반응 매질내의 상기 반응성이 큰 전자 결여 원자를 상기 편재된 현미경 부위내에서 상기 테스트 세포와 반응시켜 상기 테스트 세포의 세포막을 파열시켜 상기 세포 함유물이 손실되게 하고, 상기 편재된 현미경 부위내에서 상기 테스트 세포에 의해 상기 1차 복사 에너지의 흡수를 변화시키고; 상기 세포 반응 매질에 노출시킨 후, 상기 마이크로 샘플내의 상기 세포의 상기 막을 파열시키는데 사용된 상기 1차 복사 에너지의 함량을 상기 2차 복사 에너지를 투사하기 전에 투사된 1차 복사 에너지의 함량과 비교하고 선택된 시간 간격에서 상기 편재된 현미경 부위내에서 무상해 세포의 수를 측정함으로써 상기 세포막의 강도를 정량적으로 분석하는 것을 포함하는 세포막의 강도를 측정하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 분석 단계가 출발 세포의 수를 파열된 세포의 최대 수, 파열된 세포의 최대 수가 1/2이 될 때의 시간 및 상기 선택된 시간간격동안의 세포 파열의 최대속도와 비교하는 것을 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 분석 단계가 출발 세포의 수를 파열된 세포의 최대 수, 파열된 세포의 최대 수가 1/2이 될 때의 시간 및 세포 파열의 최대속도와 비교하는 것을 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 적혈구 세포, 백혈구 세포, 혈소판 또는 이의 혼합물로 구성된 군에서 상기 테스트 세포를 선택하는 단계를 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 약 200-약 400mOsm범위의 선택된 삼투 몰랄 농도의 생리 용액에 측정하고자 하는 막강도를 갖는 테스트 세포를 현탁시켜 세포 함유 용액을 형성시키는 단계를 포함한 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 촛점이 맞추어진 1차 복사 에너지를 약1분-약60분 범위내의 시간간격으로 투사하는 단계를 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 촛점이 맞추어진 1차 복사 에너지를 약1분-약10분 범위내의 시간간격으로 투사하는 단계를 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 60분에 걸쳐서 또는 상기 편재된 현미경 부위내의 무상해 세포가 5개 이하일 때까지 상기 촛점이 맞추어진 1차 복사 에너지를 약 1초-약 1분 범위내의 시간간격으로 투사하는 단계를 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 약25㎕의 상기 복사 에너지에 민감한 용액의 마이크로 샘플을 제조하는 단계를 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 선택된 다른 파장에서 약 300-약 900nm범위내의 촛점이 맞추어진 2차 복사 에너지를 투사하여 선택된 특정 불활성 세포 공격 제제에 따라서 약 1초-약 10분동안 상기 복사 에너지에 민감한 용액내의 상기 세포 공격 제제로부터 상기 반응성이 큰 전자 결여 원자를 생산하도록 상기 불활성 세포 공격 제제를 광활성시키는 단계를 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 반응성이 큰 전자 결여 원자를 생성하는 약300-약900nm 범위내의 복사 에너지를 흡수하는 분자를 포함하는 불활성 세포 공격 화학 제제를 상기 세포 함유 용액에 첨가하여 복사 에너지에 민감한 용액을 생성하는 단계를 포함하고, 분석하고자 하는 세포 유형에 특이성을 갖는 상기 세포 공격 제제를 선택하는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 반응성이 큰 전자 결여 원자를 생성하는 약300-약900nm 범위내의 복사 에너지를 흡수하는 분자를 포함하는 불활성 세포 공격 화학 제제를 상기 세포 함유 용액에 첨가하여 복사 에너지에 민감한 용액을 생성하는 단계를 포함하고, 프록신 B, 에오신-이소티오시아네이트, 페오포르비드프로토포르피린, 플루오레스세인, 이소티오시아네이트, 플루오레스세인 이소티오시아네이트 덱스트란 및 이의 혼합물로 구성된 군에서 상기 세포 공격 제제를 선택하는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 세포 함유 용액에 테스트 약물을 첨가하는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 글루타르알데히드, 글루코즈, 알부민, 클로르프로마진, 디아미드, 글루코즈, 알부민 및 펜톡시 필린으로 구성된 군으로부터 선택된 상기 세포 함유 용액에 테스트 약물을 첨가하는 단계를 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 세포 함유 용액에 세포내 결합 특이성 테스트 약물을 첨가하는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 세포막에서 단백질의 설프히드릴기를 산화시키기 위해 상기 세포 함유 용액에 디아미드를 첨가하여 세포막의 단백질 층을 저해하는 스펙트린의 가교를 증가시켜 막 취약성과 막 강성을 증가시킴으로써 세포막 보전성을 저해하는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 유구적혈구를 생성하고, 상기 세포막의 지질 이중층을 변형시키는 상기 세포 함유 용액에 클로르프로마진을 첨가하여 상기 세포막의 강성을 변화시키지 않으면서 막 취약성을 증가시킴으로써 세포막 보전성을 저해시키는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 세포 함유 용액에 글루타르알테히드를 첨가하여 상기 세포막의 막 취약성을 감소시키고, 막 강성을 증가시키는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제14항에 있어서, 단순 세포막 강성외에 세포막 취약성의 변화를 측정하고, 변형된 지질층에 의한 막 취약성의 변화와 상기 세포막의 변형된 단백질 층에 의한 막 취약성의 변화를 식별하기 위해서 글루타르알데히드, 클로로프로마진, 디아미드, 글루코즈, 알부민 및 펜톡시필린으로 구성된 군으로부터 선택된 상기 섬유 함유 용액에 하나이상의 테스트 약물을 첨가한 효과를 비교하는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제3항에 있어서, 상기 테스트 세포로서 사람의 적혈구 세포를 선택하고, 당뇨병에 의해 야기되는 세포 반응을 곡선 성분 보전성의 변화에 의해 질병을 검출하기 위해 대조용 세포와 상기 선택된 적혈구 세포를 비교하는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제3항에 있어서, 사람의 세포막에서 약물 유도된 변형을 검출하고, 상기 공지된 함량의 약물을 무처리 세포에 첨가하여 약물 치료후의 시간의 함수로서 약물 치료한 사람의 세포와 무처리한 사람의 세포를 구분하고, 말초혈류를 증가시키고, 세포막의 "유연성"을 증가시켜 혈관에 적혈구를 쉽게 통과시키는 치료 제제인 다른 테스트 약물, 펜톡시필린의 효과를 비교하여 약물 치료한 사람의 세포와 무처리한 사람의 세포를 구분하는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제2항에 있어서, 상기 공지된 함량의 ATP(아데노신 트리포스페이트)로 세포 함유 용액을 처리하여, 세포 함유 용액내의 세포의 세포막의 ATP수준을 측정하고, 무처리 세포 함유 용액내의 세포의 막 보전성을 처리 세포 함유 용액내의 사람의 적혈구 세포의 막 보전성과 비교하는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제3항에 있어서, 상기 테스트 세포로서 사람의 적혈구 세포를 선택하고, 겸상 세포 빈혈에 의해 야기된 세포막 보전성의 변화에 의한 세포 반응율 곡선에서의 변화로 성기 질병을 검출하기 위한 대조용 사람의 혈액 세포와 상기 선택된 적혈구 세포를 비교하는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제3항에 있어서, 상기 테스트 세포로서 사람의 적혈구 세포를 선택하고, 질병 유도 병변에 의해 야기된 세포막 보전성의 변화에 의한 세포 반응율 곡선에서의 변화로 사람의 세포막에서의 상기 병변 변화를 검출하기 위한 대조용 사람의 혈액 세포와 상기 선택된 적혈구 세포를 비교하는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제2항에 있어서, 상기 테스트 세포로서 사람의 적혈구 세포를 선택하고, 정상인 사람 세포와 단일 질병으로 변형된 세포를 분별하기 위해서 및 상기 정상인 사람 세포와 다수의 질병으로 변형된 세포에서 얻은 상기 단일 질병으로 변형된 세포를 식별하기 위해서 상기 선택된 적혈구 세포를 대조용 사람의 혈액 세포와 비교하는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 반응성이 큰 전자 결여 원자를 생성하는 약300-약900nm 범위내의 복사 에너지를 흡수하는 분자를 포함하는 불활성 세포 공격 화학 제제를 상기 세포 함유 용액에 첨가하여 복사 에너지에 민감한 용액을 생성하는 단계를 포함하고, 특이성 유형의 세포에 대한 상기 세포 공격 제제로서 특이성 플루오로크롬을 선택하는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 세포 함유 용액의 상기 삼투 몰랄 농도를 변화시키는 단계를 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 세포 함유 용액에서 현탁된 상기 세포의 농도를 조절하는 단계를 포함하는 방법.
- 제2항에 있어서, 상기 2차 복사 에너지를 투사하여 정상 막과 정상 대사를 갖는 무처리 정상 세포에 대한 변화 양상을 얻고, 화학 제제에 노출시켜 처리한 세포막의 강도와 상기 무처리 정상 세포막의 강도를 비교하는 단계를 포함하는 방법.
- 제29항에 있어서, 마취제, 페톡시필린, 디아미드, 글루타르알데히드 및 클로르프로마진을 포함한 세포막 변형제를 첨가하는 단계를 포함하는 방법.
- 제29항에 있어서, 중금속을 포함한 세포막을 변형시키는 환경 독성 제제를 첨가하는 단계를 포함하는 방법.
- 제29항에 있어서, 바이러스, 박테리아, 호르몬 또는 효소를 포함하는 세포막을 변형시키는 생물학 제제를 첨가하는 단계를 포함하는 방법.
- 제32항에 있어서, 당뇨병, 고혈압, 빈혈, 패혈증 및 변형된 면역 시스템을 포함하는 질병이 세포막을 변형시키는 생물학 제제를 첨가하는 단계를 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 세포내 막 결합 특이성을 갖는 테스트 약물을 상기 세포 함유 용액에 첨가하는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 세포의 막 결합 특이성을 갖는 테스트 약물을 상기 세포 함유 용액에 첨가하는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 마개가 덮힌 웰 장치내에서 약25㎕의 상기 복사 에너지에 민감한 용액의 마이크로 샘플을 만들고, 상기 복사 에너지에 민감한 용액의 상기 마이크로 샘플의 탈수를 방지하기 위해 상기 마이크로 샘플에 근접한 상기 웰 장치내에서 하나이상의 물 포화된 심지를 놓는 단계를 부가로 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서, 세포 강도 측정의 상기 선택된 시간간격동안 세포막 보전성의 4가지 이상의 다른 정량적인 측정을 나타낸 세포 반응율 곡선을 얻는 단계를 포함하는 방법.
- 막 강도를 측정하고자 하는 테스트 세포를 분리하고; 약200-약400mOsm범위의 선택된 삼투 몰랄 농도의 생리 용액에 상기 테스트 세포를 현탁시켜 세포 함유 용액을 형성시키고; 반응성이 큰 전자 결여 원자를 생성하는 약300-900nm 범위내의 복사 에너지를 흡수하는 불활성 세포 공격 플로오로크롬 제제를 상기 세포 함유 용액에 첨가하여 복사 에너지에 민감한 용액을 생성하고; 편재된 현미경 부위에서 상기 세포를 함유하는 상기 복사 에너지에 민감한 용액의 마이크로 샘플을 만들고, 선택된 시간에서 상기 마이크로 샘플의 상기 편재된 현미경 부위내의 무상해 세포의 수를 측정하기 위해서 상기 복사 에너지에 민감한 용액내 상기 세포에 약300-약900nm 범위내의 선택된 파장에서 촛점을 맞춘 1차 복사 에너지를 투사하고; 상기 마이크로 샘플의 편재된 현미경 부위내의 무상해 막을 갖는 세포의 수를 측정하고; 상기 1차 복사 에너지와 다른 선택된 파장에서 선택된 시간간격내의 선택된 시간동안 선택된 파장에서 상기 복사 에너지에 민감한 용액내의 상기 불활성 세포 공격 플루오로크롬 제제에 약300-900nm 범위내의 선택된 파장에서 촛점이 맞추어진 2차 복사 에너지를 투사하여, 상기 세포 공격 플루로로크롬 제제를 광활성화시킴으로써 상기 복사 에너지에 민감한 용액에서 상기 세포공격 플루오로크롬 제제에서 반응성이 큰 전자 결여 원자를 생성하고; 상기 세포 공격 플루오로크롬 제제에서의 상기 반응성이 큰 전자 결여 원자를 상기 마이크로 샘플의 상기 편재된 현미경 부위내에서 상기 세포막과 반응시켜 세포막을 파열시켜 상기 세포 함유물이 손실되게 하고, 상기 촛점이 맞추어진 1차 복사 에너지의 세포 흡수를 변화시키고; 선택된 시간 간격 동안 상기 촛점이 맞추어진 2차 복사 에너지에 노출시킨 후, 선택된 시간 동안 상기 편재된 현미경 부위내에서의 세포에 의해 흡수된 상기 촛점이 맞추어진 1차 복사 에너지 함량을 상기 촛점이 맞추어진2차 복사 에너지를 투사하기 전, 투사 동안 및 투사 후에 투사된 상기촛점이 맞추어진 1차 복사 에너진 함량과 비교하여 상기 세포막의 강도를 정량적으로 분석하고; 상기 출발 세포의 수를 파열된 세포의 최대수, 과열된 세포의 최대수가 1/2의 파열이 되는데 걸리는 시간 및 세포 파열의 최대 속도와 비교하고, 세포막 보전성의 4가지 이상의 다른 정량적 측정으로 세포 반응 곡선을 얻는 것을 포함하는 세포막의 강도를 측정하는 방법.
- 제2항에 있어서, 상기 세포 함유 용액을 공지된 함량의 상기 글루코즈로 처리하여 세포 함유 용액내의 세포의 세포막에서의 글루코즈 수준을 측정하고, 무처리 세포 함유 용액내의 세포의 막 보전성을 처리 세포 함유 용액내의 사람의 적혈구 세포의 막 보전성과 비교하는 단계를 부가로 포함하는 방법.※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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