KR920019818A - 이황화 결합을 갖는 분비된 단백질의 수율을 증가 시키는 방법 - Google Patents

이황화 결합을 갖는 분비된 단백질의 수율을 증가 시키는 방법 Download PDF

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Abstract

내용 없음

Description

이황화 결합을 갖는 분비된 단백질의 수율을 증가 시키는 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 상이한 양의 글루타티온을 배양 비지에 부가한 후에 처리된 가용성 RBI의 검출에 대한 이뮤노블롯(immunoblot)을 표시한다.
제2도는 발현 플라즈미드 pRBIal를 표시한다.

Claims (31)

  1. 분비된 단백질을 암호화하는 재조합 DNA를 함유하며 재조합 DNA의 발현에 적당한 조건하의 적당한 배양 배지에서 배양되는 원핵 숙주생물에 의해 이황화 결합을 갖는 단백질이 분비될때 천연 단백질 구조의 형성을 증가시키는 방법에 있어서, 0.1-20㎜ol/l의 하나 또는 여러개의 티올 시약을 함유한 배양배지가 사용되는 것을 특징으로 하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 1-15㎜ol/l의 하나 또는 여러개의 티올 시약을 함유한 배양 배지가 사용되는 방법.
  3. 제2항에 있어서, 3-12㎜ol/l의 하나 또는 여러개의 티올 시약을 함유한 배양 배지가 사용되는 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, SH그룹을 갖는 환원용 티올 시약이 사용되는 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 1분자당 하나의 SH그룹을 갖는 환원용 티올 시약이 사용되는 방법.
  6. 제항에 있어서, 글루타티온(GSH), 시스테인, N-아세틸시스테인, 시스테아민, β-머캅토에탄올 또는 이것의 혼합물이 환원용 티올 시약으로서 사용되는 방법.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, SH 그룹을 갖는 환원용 티올 시약과 디설파이드 그룹을 갖는 산화용 티올 시약의 혼합물이 사용되는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 환원용 티올 시약 대 산화용 티올 시약의 몰비가 2 : 1 내지 20 : 1인 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 몰비가 5 : 1 내지 10 : 1인 방법.
  10. 제7항 내지 제9항중 어느 한 항에 있어서, 환원된 글루타티온(GSH)과 글루타티온 디설파이드(GSSG)의 혼합물이 사용되는 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 DNA의 발현이 그람-음성인 원핵 숙주생물 내에서 행해지는 방법.
  12. 제11항에 있어서, 숙주 생물로서 E. coli가 사용되는 방법.
  13. 제10항 또는 제11항에 있어서, 분비된 단백질을 암호화하는 재조합 DNA가 박테리아 내막 침투용인 신호펩티드를 암호화하는 DNA단편과의 작동 결합에 있는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 신호 펩티드가 E. coli OmpA 단백질로부터 유도되는 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 분비된 단백질을 암호화하는 재조합 DNA가 유도 가능한 발현신호의 조절하에 있는 방법.
  16. 제1항 내지 제1항중 어느 한 항에 있어서, 배양 배지로서 완전한 배지가 사용되는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 세포 추출물로 부터 얻은 물질 혼합물을 함유한 완전한 배지가 사용되는 방법.
  18. 제17항에 있어서, LB 배지가 사용되는 방법.
  19. 제1항 내지 제18항중 어느 한 항에 있어서, pH가 5-9인 배양배지가 사용되는 방법.
  20. 제19항에 있어서, pH가 6-8인 배양 배지가 사용되는 방법.
  21. 전기한 항중 어느 한 항에 있어서, 상기 숙주생물에 의해 대사 될 수 없는 하나 또는 여러개의 단당류 및/또는 올리고당류가 상기 배양배지에 부가적으로 부가되는 방법.
  22. 제21항에 있어서, 소르보스, 사카로스, 라피노스 또는 이것의 혼합물로 구성된 그룹으로 부터 선택된 하나 또는 여러개의 단당류 및/또는 올리고당류가 사용되는 방법.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서, 배양 배지내 대사가능하지 않은 단당류 및/또는 올리고당류의 농도가 0.1mol/l-1mol/l인 방법.
  24. 제23항에 있어서, 배양 배지내 대사가능하지 않은 단당류 및/또는 올리고당류의 농도가 0.3mol/l-0.7mol/l인 방법.
  25. 전기한 항중 어느 한 항에 있어서, 단백질 디설파이드 이소머라제 유전자의 과발현이 이황화결합을 갖는 분비된 단백질을 암호화하는 재조합 DNA의 발현과 함께 숙주생물내에서 행해지는 방법.
  26. 제25항에 있어서, 그람-음성 박테리아로 부터의 단백질 디설파이드 이소러마제 유전자의 과발현이 행해지는 방법.
  27. 제26항에 있어서, E. coli로 부터의 단백질 디설파이드 이소머라제 유전자의 과발현이 행해지는 방법.
  28. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질 디설파이드 이소머라제 유전자가 유도가능한 발현 신호의 조절하에 있는 방법.
  29. 제2항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 분비될 단백질을 암호화하는 재조합 DNA 및 단백질 디설파이드 이소머라제 유전자가 하나의 염색체의 발현 벡터상에 존재하는 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 재조합 DNA 및 단백질 디설파이드 이소머라제 유전자가 하나의 발현 신호의 조절하에 있는 방법.
  31. 제25항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 분비될 단백질을 암호화하는 재조합 DNA 및 단백질 디설파이드 이소머라제 유전자가 두 개의 상호 양립하는 염색체의 발현 벡터상에 존재하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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