KR900017463A - 트랜스제닉 식물 및 그의 제조방법 - Google Patents

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랠프 휘터
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
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Abstract

내용 없음

Description

트랜스제닉 식물 및 그의 제조방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims (35)

  1. 묘목의 노출된 정단 및/ 또는 축 분열 조직 세포로 DNA함유 용액을 미량 주입하고 또 상기 미량 주입된 묘목 또는 그의 부분으로 부터 전체 시물을 생장시키며 또 1회 이상의 유성 또는 무성 증식, 단계후, 이종 형질전환된 출발 식물의 동종 형질전환된 무성 또는 유성 후대를 공지된 방법으로 선별하는 것을 포함하는 유전 물질을 실물에 삽입시키는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 식물이 자엽 발달 초기에서 부터 2차 잎 발달단계에 있는 묘목이 방법.
  3. 제1항에 있어서, a)특정 표적 식물의 종자를 발아시키고 또 발아의 적합한 단계를 선택하고, b)뒤 이온 미량 주입을 위해 정단 및/ 또는 축 분열 조직을 분열시키며, c)1개 이상의 DNA단편을 갖는 DNA함유 용액을 b)하에서 노출된 분열 조직 세포로 미량 주입하고, d)미량 주입된 묘목을 완전한 이종 형질 전환된 식물로 생장시키며, e)d)하에서 수득한 이종 형질 전환된 식물의 유성 또는 무성 휴대를 생산하고 또 동종 형질전환된 후대를 선별하는 특정 방법 단계를 포함한는 방법.
  4. 제1항에 있어서, a)특정 표적 식물의 종자를 발아시키고 또 발아의 적절한 단계를 선택하며, b)뒤 이온 미량 주입을 위해 정단 및/ 또는 축 분열 조직을 노출시키고 c)b)하에서 노출된 분열 조직 세포에 1개 이상의 DNA단편을갖는 DNA함유 용액을 미량 주입하고, d)미량 주입된 정단 및/ 또는 축 분열 조직이 시험관내에서 이종 형질 전환된 완전식물로 재분화한 것을 선택압 없이 단리하거나 또는 d2)미량 주입된 정단 및/ 또는 축 분열 조직이 시험관내에서 동종 형질 전환된 완전식물로 재분화한 것을 선택압 하에서 단리하며, e)d1)하에서 수득한 이종형질 전환된 식물의 유성 또는 무성 후대를 생산하고 또 동종 형질 전환된 휴대를 선별하는 특정 방법 단계를포함하는 방법.
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 미량 주입 작업이 a)특수 지지 장치를 이용하여 묘목을 일정 위치로 고정시키고, b)DNA함유 용액을 미량 주입 모세관을 이용하여 정단 및/ 또는 축 분열 조직 세포로 주입하며 또 c) 묘목을 회전시킨 다음 다시 주입하는 단계로 진행되는 방법.
  6. 제5항에 있어서, 미량 주입 모세관이 붕소규산염의 봉인 유리 필란멘트를 갖는 미세전극인 방법.
  7. 제5항에 있어서, 미량주입 작업이 분열조직당 1내지 1000회 실행되는 방법.
  8. 제5항에 있어서, 주사 부피사 주입되는 세포당 1ｐ1내지 100ｐ1인 방법.
  9. 제5항에 있어서, 주입되는 DNA함유 용액의 DNA농도가 0.1㎍/㎕ 내지 10㎍/㎕인 방법.
  10. 제5항에 있어서, 상기 DNA함유 주입 용액이 선형의 형질 전환성 DNA를 함유하는 방법.
  11. 제5항에 있어서, 상기DNA함유 주입 용액이 슈퍼 코일드(Supercoiled)형태의 형질 전환성 DNA를 함유하는 방법.
  12. 제5항에 있어서, 상기 DNA함유 용액이 선형 및 슈퍼 코일드 DNA의 혼합물 형태의 형질 전환성 DNA를 함유하는 방법.
  13. 제5항에 있어서, 상기 DNA함유 주입 용액이 유용하고 소망스런 특성을 코딩하고 또 식물 세포에서 활성인 발현 시그널에 작용가능한 방식으로 연결된 구조 유전자로 구성된 재조함 DNA분자를 함유하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 구조 유전자가 병원체, 제초제, 살충제 또는 기타 살균제에 대해 향상된 내성을 형질전환된 식물에 부여하는 방법.
  15. a)순계주를생성하기 위해 자가 수분될 수 있는 이종 형질전환된 식물 즉 자가 불화합성이 없는 식물을반복해서 자가 교배 시키거나 또는 b)순계주를 생성하기 위해, 직접 자가 수분될 수 없는 이종형질 전환된 식물을관련이 깊은 식물과 반복해서 교배시켜 제3항에 따른 순수한 동형접합성 형질 전환체를 생산하는 방법.
  16. 제3항에 있어서, 미량 주입한 후 묘목을 직접 토양에 심고 또 정상 묘목과 동일한 방식으로 전체 식물로 생장시키는 방법.
  17. 제3항에 있어서, 미량 주입후, 묘목이 전체 식물로 생장하는데 적합한 조성을 갖는특수 배양 배지로 묘목을 옮기는 방법.
  18. 제4항에 있어서, 미량 주입 즉시 또는 원하는 나중 시기에, 미량 주입된 정단 및/또는 축 분열 조직을 선택압 존재하 또는 부재하에서 단리 분열 조직으로 부터 재분화될 수 있는 식물로 부터 단리하고 또 미량 주입된 정단 및/또는분열 조직을 시험관내에서 공지방법을 이용하여 전체 식물로 재분화될 수 있는 형태 형성 배양물로 생장시키는 방법.
  19. 제18항에 있어서, 단리 미량 주입된 정단 및/ 또는 축 분열 조직의 배양을, 부정아 또는 부정배 형성을 자극하고 또 중성 중점제 또는 겔화제가 부가된 배지에서 실행하는 방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 중점제가 분자량이 70000내지 400000인 사카로스 및 에피클로히드린의 공중합체인 방법.
  21. 제19항에 있어서, 상기 겔화제가 한천, 아가로스, 알긴산염, 펙틴산염, Gelrite및 젤라틴으로 구성된 군으로부터 선정되는 방법.
  22. 제19항에 있어서, 배지가 형태 형성성 배양물의 생장 단계에 따라서 오옥신 및 시토키닌류의 식물호르몬을 0.1㎎/1 내지 20.0㎎/1농도로 함유하는 방법.
  23. 제19항에 있어서, 배지의 pH가 pH5.2내지 pH6.5인 방법.
  24. 제19항에 있어서, 분열 조직의 배양 밀도가 1개 분열 조직/μ1배지 내지 50개 분열 조직/μ1배지 인 방법.
  25. 제19항에 있어서, 분열조직의 배양을 2실 시스템에서 적어도 1회 실행하는 방법.
  26. 제4항에 있어서, 특성 생장 단계에 도달한 분열조직 배양물을, 어린 싹 및 뿌리 정단을 분화시키기 위해, 식물의 재분화에 통상 사용되는 고체 배지로 옮기는 방법.
  27. 제4항에 있어서, 배지가 트랜스제닉 세포의 양성 선별을 허용하는 선별 물질을 함유하는 방법.
  28. 제4항에 있어서, 재분화된 어린 식물을 토양에 심고 또 정상 묘목에서와 동일한 방식으로 처리시키는 방법.
  29. 제1항에 따라 트랜스제닉 식물을 제조하는 방법.
  30. 식물 및 그의 후대의 체세포 및/ 또는 생식 세포의 대부분이 형질전환된, 제1항에 따른 방법에 따라 제조된 트랜스제닉 식물 및 그이 유성 및 무성 후대.
  31. 제30항에 따라 제조된 식물의 트랜스제닉 종자.
  32. 제30항 또는 제31항에 있어서, 원형질, 세포, 세포 클론, 세포응집물, 캘러스 및/ 또는 조직 배양물, 종차, 화분, 난자, 접합자, 배로 구성된 군으로 부터 선정된, 식물의 형질전환된 생존가능 부위 및 그로부터 유도된 후대.
  33. 삽입된 유전 물질을 그대로 함유하는, 제30항 내지 제32항중 어느 하나에는 정의된 형질 전환된 식물 물질을 갖는 모든 혼성 및 융합 산물.
  34. 삽입된 유전 물질을 그대로 함유하는, 제30항 내지 제32항중 어느 하나에 따른 트랜스제닉 식물 또는 그의 생존 가능한 부위 및 그의 유성 및 무성 후대의 변종 및 돌연 변이체.
  35. 본 발명에 따른 방법을 이용하여 형질 전환된 트랜스제닉 식물 또는 그의 후대로 부터 유래하고 또 적어도 부분적으로 트랜스제닉 세포로 구성된, 꽃, 줄기, 열매, 잎 및 뿌리와 같은 식물 부위.
    ※ 참고사항 : 최초출원내용에 의하여 공개하는 것임.
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