KR900001512B1 - 미생물 살충제의 제조방법 - Google Patents

미생물 살충제의 제조방법 Download PDF

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KR900001512B1 KR1019870005788A KR870005788A KR900001512B1 KR 900001512 B1 KR900001512 B1 KR 900001512B1 KR 1019870005788 A KR1019870005788 A KR 1019870005788A KR 870005788 A KR870005788 A KR 870005788A KR 900001512 B1 KR900001512 B1 KR 900001512B1
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Abstract

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Description

미생물 살충제의 제조방법
본 발명은 바실루스 튜린지엔시스 변종 쿠르스타기(BACILLUS THURINGIENSIS VAR. KURSTAKI)에 의해 나비목 해충에 치사효과가 있는 살충성 물질을 함유하는 살충제의 제법에 관한 것이다.
일반적으로, 나비목해충은 채소류 및 산림에 발생하여 많은 피해를 끼치는 것으로 알려져 있다. 이러한 경우 광범위한 화학살충제의 사용으로 인한 해충의 저항성 증가, 2차 해충의 출현 특히 잔존 살충제의 독성에 의한 만성독성의 증가 및 생태계파괴등 많은 문제점을 가지고 있다.
바실루스 튜린지엔시스 변종 쿠르스타키는 아포를 형성하는 그람양성군으로 아포형성과 함께 여러종류의 내 독소와 외독소를 생성하는 것으로 알려져 있으며, 이는 나비목 해충에 작용하여 높은 치사 효과를 보임과 동시에 사람이나, 동식물 및 어류에 무해하여 생태계에도 안전한 것으로 알려져 있다.
지금까지 바실루스 튜린지엔시스 변종 쿠르스타키를 이용한 살충제 제조방법에 관해서는 미합중국특허 3,703,749호, 3,086,922호, 3,087,865호, 3,702,359호, 4,133,716호, 4,277,564호를 비롯하여 일본특허공보 소49-4364호, 소52-17089호등이 있다.
본 발명자들은 한국종균협회로부터 분양받은 바실루스 튜린지엔시스 변종 쿠르스타키 HD-1(KFCC11426 : 한국종균협회에 보관)의 배양에 가장 효율적인 생산배지와 배양방법을 개발하므로써 살충성 물질을 함유하는 미생물 살충제의 제법인 본 발명을 완성하였다.
본 발명에 이용한 투린지엔시스 변종 쿠르스타키 HD-1을 버지스매뉴얼에 따라 균주특성을 동정한 결과는 다음과 같다.
[표1]
HD-1(KFCC 11426)의 생리적 특성
Figure kpo00001
+ : 양성반응, - : 음성반응
한편, 배양액에 축적된 살충성 물질은 생아포의 측정 및 생물검정법으로 역가를 검정하였다. 생아포의 측정은 배양액을 65℃에서 10분간 열처리하여 영양세포를 사멸시키고 무균의 TPB(트립토오즈 포스페이트 브로스) 배지로 연속적인 희석을 시킨후 TPB 평판 배지에 0.1ml씩 분주한 다음 30℃에서 48시간 배양한후 콜로니 형성단위(Colony forming unit : CFU )를 측정하여 생아포수를 산출하였다. 한편 생물 검정은 나비목 유충인 인공 사육된 누에를 실험재료로 사용하였으며, LC50방법으로 분석 하였다.
본 발명의 생산배지 조성물로서 탄소원으로는 글루코오스, 수크로오스, 락토오스, 옥수수녹말, 감자녹말, 용해성녹말, 자일토오스, 당밀등을 이용할 수 있다.
한편, 질소원으로는 박토펩톤, 트립톤, 카사미노산, 카제인, 프로레오스 펩톤, 효모추출물, 소이펩톤, 박토오토라이즈드효모, 콘글루텐밀, 양조건조효모, 옥수수침지액, 콩가루, 황산 암모늄, 어분, 면실분등이 이용될 수 있다.
배지조성에 따라서는 생산효과에 영향을 주고 있음은 공지된 바 있으나, 본 발명자들은 가장 경제적인 탄소원, 질소원, 미량원소를 선정하여 이의 가장적합한 배양조건을 규명함으로써 생산적 여건의 경제성을 높일 수 있음이 본 발명의 특징이다. 상기한 바와 같은 방법에 의해 살충성 물질이 축적된 배양액은 분말화 하기 위하여 분무식 건조법, 동결건조법등을 사용할 수 있으나 공업적으로는 분무식 건조법이 바람직하다. 이 방법에서는 전착제, 안정제, 희석제등을 건조시에 첨가함으로써 분말을 획득할 수 있다. 이외에도 분제, 액제등으로 제제화 시킬 수 있다. 한편, 미생물 살충제를 기타 살충제, 살균제등과 혼합함으로써 상승효과를 기대할 수 있으며, 살충범위와 사용범위를 넓힐 수 있게 된다.
그예로서는 미합중국 특허 3,946,107호, 4,000,258호, 4,107,294호 일본특허공보 소59-19961호 등이 있다. 본 발명을 아래위 실시예에 의하여 구체적으로 설명하면 다음과 같다.
[실시예 1]
사용균주 : 바실루스 튜린지엔시스 변종 쿠르스타키
HD-1(KFCC 11426)
종배양 : 배지는 TPB(트립토오스 포스페이트 브로스)을 사용하여 500ml 삼각플라스크에 종균 HD-1을 한백금이 취하여 30℃에서 12시간 배양한후, 다시 2% 접종하여 2차 종배양액을 만들어 본 배양에 이용한다.
[생산배지조성 및 조제방법]
글루코오스 30g/1
옥수수전분 12g/1
옥수수침지액 90g/1(습중량)
황산암모늄 8g/1
미량성분 : 제1인산칼륨 1g/1
제2인산칼륨 1g/1
황산마그네슘7수화물 1.2g/1
탄산칼슘 1.2g/1
황산구리5수화물 0.02g/1
황산망간 0.04g/1
황산철7수화물 0.01g/1
황산아연7수화물 0.02g/1
열에 안정한 배지성분은 120℃에서 20분간 가압 멸균하고 열에 불안정하거나, 착화합물 생성하는 성분은 구멍 크기가 0.45㎛인 무균여과지(밀리 포어 여과지)를 통과시킨 후 무균적으로 발효조에 첨가한다.
[배양방법]
14리터 발효조에 삽입된 배지는 10리터로 하고 상기 종배양액을 200-300ml을 접종하여 28-32℃에서 초기 pH는 7.0-7.4, 통기량은 초기는 1.0v.v.m 으로 하되, 배양후기에는 0.6v.v.m 으로 조절한다.
배양초기에는 미생물이 증식하기 위하여 많은 산소 요구량을 나타내므로 산소를 충분히 공급해주어야 한다.
그러나 라이시스(LYSIS)가 완료된 이후에는(접종후 40시간경)독소의 살충력을 증강시키기 위한 과정이 필요한데 이때는 많은 양의 산소를 요구하지 않으며 오히려 통기량을 낮추므로서 살충효과의 증가를 보았다.
이는 공장규모에 적용시킬 때 원가절감의 요소가 되리라 생각된다.
[표 2]
접종후 40시간 경과한후 통기량변화에 따른 독초활성치증가
Figure kpo00002
회전교반수는 500-700r.p.m으로 배양한다.
접종후 60시간이 경과한 후 배양을 종료한다.
한편, 통기량을 변화시키지 않은 배양에 있어서 시간이 경과함에 따른 생물 검정결과는 표3과 같다.
[표 3]
배양시간에 따른 생물검정 결과
Figure kpo00003
[실시예 2-6]
실시예 1과 같은 조건과 배양방법으로 행하였으며, 생산 배지 조성은 다음과 같다. (표4참조)
[표4]
생산배지조성
Figure kpo00004
(+는 실시예 1과 동일함)
실시예 2-6에 의해 배양된 배양액의 최대 독소활성치(생물검정)는 표5와 같다.
[표5]
배양액의 최대독소 활성치
Figure kpo00005
즉, 실시예 2는 통기량 변화를 주고 생산배지를 글루코오스, 옥수수침지액 연실분으로 한정지어주며 미량성분도 그 양을 지정해 주었다.
배양은 60시간후에 종결지어주었으며 이때 누에를 실험재료로한 생물학적 검정결과는 6230X 로 기타 다른 조성의 배지에서보다 최고의 독소활성치를 나타내 주었다.

Claims (1)

  1. 바실루스 튜린지엔시스 변종 쿠르스타키 HD-1(KFCC 11426)을 이용하여 독소를 축적시킬 수 있는 배지조성은 글루코오스 30g/1, 면실분 5g/1 옥수수침지액 120g/1(습중량)에 미량성분으로서 제1인산칼륨 1g/1, 제2인산칼륨 1g/1, 황산마그네슘7수화물 1.2g/1, 탄산칼슘 1.2g/1, 황산구리5수화물 0.02g/1, 황산망간 0.04g/1, 황산철7수화물 0.01g/1, 황산아연7수화물 0.02g/1, 배양조건은 28-32℃에서 초기 pH는 7.0-7.4, 통기량은 초기 1.0v.v.m 로 하되 후기는 0.6v.v.m 으로 통기량을 조절함을 특징으로 하는 미생물 살충제의 제조방법.
KR1019870005788A 1987-06-08 1987-06-08 미생물 살충제의 제조방법 KR900001512B1 (ko)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180006870A (ko) * 2017-12-01 2018-01-19 정진욱 축사 및 피부기생 해충구제 도포재료와 이의 제조방법

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