KR890701765A - 바람직하지 못한 교차반응을 제거하기 위한 올리고뉴클레오티드를 사용하는 폴리뉴클레오티드에 대한 측정방법 - Google Patents
바람직하지 못한 교차반응을 제거하기 위한 올리고뉴클레오티드를 사용하는 폴리뉴클레오티드에 대한 측정방법Info
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Abstract
내용 없음
Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
발명의 구체예를 제1도 및 2도와 관련하여 설명하기로 한다. 제1도는 하기의 실험에서 형성된 혼성체의 열안정성을 예시하는 그래프이다. 제2도는 각종 가능한 혼성체에 대한 Tm의 관계를 예시하는 도표이다.
Claims (32)
- 밀접하게 관련된 비표적 뉴클레오티드 서열 또는 서열들을 함유할 수 있는 피검샘플중의 표적뉴클레오티드 서열에 대한 측정방법으로서, (a) 표적프로브 및 적어도 하나의 비표적 프로브와 어떠한 피검색플을 표적프로브와 상기 표적뉴클레오티드 서열간의 혼성화를 허용하고 한편으로 표적프로브와 상기 비표적 뉴클레오티드 서열사이의 어떠한 바람직하지 못한 혼성화를 최소화하는 조건하에서 접촉시키는 단계, 이 단계에서 어떠한 상기 후자의 바람직하지 못한 혼성화는 측정의 적어도 한단계에서 존재하는 어떠한 비표적 뉴클레오티드 서열과도 혼성될 수 있는 비표적 프로브의 존재에 의하여 감소되어 표적프로브/비표적 뉴클레오티드 서열에 대한 표적프로브/표적뉴클레오티드 서열 혼성화 비율이 증가하는 것이 특징이며 ; 와, (b) 어떠한 피검샘플 뉴클레오티드 서열에 대한 상기 표적프로브의 혼성화에 대하여 측정하는 단계로 이루어지는 방법.
- 제1항에 있어서, 프로브는 비표적 프로브/비표적 서열 혼성체의 용융온도가 표적프로브/비표적 서열 혼성체의 용융온도보다 크도록 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 또는 2항에 있어서, 혼성화 조건은 먼저 배지를 적어도 프로브와 어떠한 표적 서열존재를 변성시키기 위하여 가열한 다음, 외부 열교환 배지로 배지를 냉각하여 그의 온도가 표적프로브가 표적서열과 혼성될 수 있는 온도로 점차 감도됨으로써 정립되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 또는 2항에 있어서, 혼성화가 고정된 온도에서 일어나는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 내지 제4항중 어느 하나에 있어서, 혼성화 조건이 액 배지중에는 모든 뉴클레오티드 다량체가 존재하면서 어떠한 고상지지체도 없는 것으로 정립되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 내지 4항중 어느 하나에 있어서, 표적 및 비표적 뉴클레오티드서열이 혼성화와 동시에 고체지지체에 결합되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 내지 4항중 어느 하나에 있어서, 표적프로브는 표지되고, 표지된 프로브에 대한 미표지 프로브의 몰비율은 1대 9보다 크지 않으며 혼성화 조건은 액 배지중에서 모든 뉴클레오티드 다량체가 존재하면서 그위에 액 배지가 흡수되어 있는 어떠한 고상지지체도 없는 것으로 정립되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 내지 4항중 어느 하나에 있어서, 표적프로브는 표지되고 표지된 프로브에 대한 미표지 비표적 프로브의 몰비율은 1대 9보다 크지 않으며 혼성화 조건은 고체지지체에 결합된 표적 및 비표적 서열로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 내지 4항중 어느 하나에 있어서, 표적프로브에 대한 비표적 프로브의 몰비율이 1:4 이하인 것을 특징으로 하는 방법.
- 밀접하게 관련된 비표적 뉴클레오티드 서열을 함유할 수 있는 피검샘플중의 표적 뉴클레오티드 서열에 대한 액 배지중에서의 측정방법으로서, (a) 표적프로브 및 적어도 하나의 비표적 프로브와 액 배지중의 어떠한 피검샘플을 표적프로브 및 상기 표적 뉴클레오티드 서열사이의 혼성화를 허용하는 한편 표적프로브와 상기 비표적 뉴클레오티드 서열 사이의 어떠한 바람직하지 못한 혼성화를 최소화하는 조건하에서 접촉시키는 단계, 이 단계에서 어떠한 상기 후자의 바람직하지 못한 혼성화는 측정의 적어도 한단계에서 존재하는 어떠한 비표적 뉴클레오티드 서열과도 혼성될 수 있는 비표적 프로브의 존재에 의하여 감소되어 표적프로브/비표적 뉴클레오티드 서열에 대한 표적프로브/표적뉴클레오티드 서열 혼성화 비율이 증가하는 것이 특징이며 ; 와(b) 어떠한 피검샘플 뉴클레오티드 서열에 대한 상기 표적프로브의 혼성화에 대하여 측정하는 단계로 이루어지는 방법.
- 제10항에 있어서, 프로브는 비표적 프로브/비표적 다량체 혼성체의 용융온도가 표적프로브 비표적 다량체 혼성체의 용융온도보다 크도록 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제10항에 있어서, 프로브는 비표적 프로브/비표적 다량체 혼성체가 표적프로브//비표적 다량체 혼성체 보다 더 많은 수의 상보 뉴클레오티드를 가지도록 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제10항에 있어서, 혼성화 조건은 먼저 액 배지를 적어도 프로브와 어떠한 표적 다량체 존재를 변성시키기 위하여 가열한 다음, 표적 프로브가 표적다량체와 혼성될 수 있도록 액 배지를 점차로 냉각시킴으로써 정립되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제13항에 있어서, 혼성화 조건은 액 배지중에는 모든 뉴클레오티드 다량체가 존재하면서 액 배지가 흡수되어 있는 어떠한 고상지지체도 없는 것으로 정립되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제10항에 있어서, 혼성화 조건은 먼저 배지를 적어도 표적프로브와 어떠한 표적 다량체를 변성시킬 온도로 가열한 후, 표적프로브가 표적서열과 혼성될 수 있는 온도로 점차 감소되는 온도의 외부 열교환 배지로 배지를 냉각시킴으로써 정립되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제13항에 있어서, 표적프로브에 대한 비표적 프로브의 몰비율은 1 : 9 이하이고, 혼성화 조건은 액 배지중에는 모든 뉴클레오티드 다량체가 존재하면서 액 배지가 흡수되어 있는 어떠한 고상지지체도 없는 것으로 정립되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제10항, 11항, 12항, 13항 또는 15항에 있어서, 표적프로브에 대한 비표적 프로브의 몰비율이 1 : 4 이하인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제13항에 있어서, 프로브는 공통적으로 약간의 영역의 올리고뉴클레오티드인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제10항에 있어서, 표적다량체는 RNA와 DNA로 이루어지는 군으로부터인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제10항, 11항 또는 15항에 있어서, 측정단계는 먼저 혼성체를 혼성되지 않은 표지프로브로부터 분리한후 혼성체의 표지의 존재를 확인하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제10항, 11항 또는 15항에 있어서, 프로브는 올리고뉴클레오티드이고, 표적 및 비표적 다량체는 실질적으로 프로브보다 긴길이의 폴리뉴클레오티드이며, 측정단계는 : (a) 액 배지를 길이에 있어 100뉴클레오티드 미만의 어떠한 올리고뉴클레오티드와의 상당량의 결합없이 폴리뉴클레오티드 및 그의 혼성체와 비공유적으로 결합할 수 있는 적당한 다가 양이온성 고체지지체와 접촉시켜 그렇게 혼성되지 않은 어떠한 표적프로브로부터 어떠한 폴리뉴클레오티드와 혼성된 표적프로브를 분리하는 단계 ; (b) 그렇게 혼성되지 않은 표적프로브를 함유하는 액 배지로부터 고체 지지체를 분리하는 단계 ; 그리고 (c) 고체지지체에 결합된 어떠한 표지의 존재를 검출하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 비표적 다량체를 함유할 수도 있는 피검샘플중의 표적다량체 측정에 유용한 키트로서, (a) 혼성화 조건하에서 표적프로브/표적서열 혼성체를 형성할 수 있지만 또한 동시에 표적프로브/비표적 서열 혼성체도 형성할 수 있도록 선택된 표지된 뉴클레오티드 다량체 프로브 ; (b) 혼성화 조건하에서 비표적 프로브/비표적 다량체 혼성체를 형성할 수 있어서 비표적 프로브의 부재하에서 형성될 수 있는 표적프로브/비표적 다량체 혼성체의 양을 감소시킬수 있는 한편, 형성될 수 있는 표적프로브/표적다량체 혼성체의 양을 부당하게 감소시키지 않도록 선택된, 표적프로브와는 구별되는 미표지의 뉴클레오티드 다량체 비표적 프로브를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
- 제22항에 있어서, 표적 및 비표적 프로브는 각각 공통적으로 약간의 영역의 뉴클레오티드를 가지는 것을 특징으로 하는 키트.
- 제22항에 있어서, 프로브는 비표적 프로브/비표적 서열 혼성체의 용융온도가 표적프로브/비표적 서열혼성체의 용융온도보다 크도록 선택되는 것을 특징으로 하는 키트.
- 제22항에 있어서, 프로브는 미표지 비표적 프로브/비표적 다량체 혼성체가 표지된 표적프로브/비표적 다량체 혼성체보다 더 큰 상보 뉴클레오티드수를 가질 수 있도록 선택되는 것을 특징으로 하는 키트.
- 제25항에 있어서, 프로브는 단지 1 내지 3뉴클레오티드만이 다른 올리고뉴클레오티드 인 것을 것을 특징으로 하는 키트.
- 제24항, 25항 또는 26항에 있어서, 표적프로브에 대한 비표적 프로브의 몰비율리 1 : 9 이하인 것을 특징으로 하는 키트.
- 제24항, 25항 또는 26항에 있어서, 표적프로브에 대한 비표적 프로브의 몰비율이 1:4 이하인 것을 특징으로 하는 키트.
- 제24항, 25항 또는 26항에 있어서, 프로브는 RNA와 DNA로 이루어지는 군으로부터의 폴리뉴클레오티드와 혼성될 수 있어서, 키트가 그런 폴리뉴클레오티드중 하나의 측정에 유용한 것을 특징으로 하는 키트.
- 제24항, 25항 또는 26항에 있어서, 표지된 프로브의 표지는 방사성 표지, 효소, 화학발광표지, 발색표지, 및 형광표지로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 키트.
- 제1항에 있어서, 표적프로브는 혼성화될 때에 고체지지체상에 고정되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제10항에 있어서, 혼성화는 고정된 온도에서 일어나는 것을 특징으로 하는 방법.※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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