KR890700031A - 신규한 t-세포 억압 인자의 제조 및 그것의 용도 - Google Patents

신규한 t-세포 억압 인자의 제조 및 그것의 용도

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KR890700031A
KR890700031A KR1019880700840A KR880700840A KR890700031A KR 890700031 A KR890700031 A KR 890700031A KR 1019880700840 A KR1019880700840 A KR 1019880700840A KR 880700840 A KR880700840 A KR 880700840A KR 890700031 A KR890700031 A KR 890700031A
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폰타나 아드리아노
호퍼 얼하드
호퍼-바르비네크 레네이트
브란 미카엘
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예안 크라메르 한스 루돌프 하우스
산도즈 아.게.
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Abstract

내용 없음

Description

신규한 T-세표 억압 인자의 제조 및 그것의 용도
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 cDNA 라이브러리를 스크리닝하기 위해 사용된 올리고누클레오티드를 나타낸다. 두 개의 프로오브들은 도시한 아미노산 서열을 기초로 한 것이다. 위치 22는 후에 이소로이신인 것으로 밝혀졌다. 프로오브 A는 두 개의 올리고뉴클레오티드인 39-mer 와 42-mer가 12개의 상보누클레오티드와 그들의 3'-말단에서 중첩되어 구성된 것이다. 폴리머라제의 클레노브단편과 어니일되어 필링(filling) 된 후, 암호 본쇄(strand) 또는 비암호 분쇄에 상응하는 두 개의 69-mer들이 얻어졌다. 미리 결정된 cDNA 서열에 상응하는 누클레오티드 서열의 위치는 별표로 나타내었다. 프로오브 B는 16개의 29-mer의 혼합물이다. 불분명한 위치에서 데옥 시이노신 도는 데옥시시티딘 및 데옥시티미딘 잔기가 표시된 대로 삽입되었다.

Claims (58)

  1. 인체의 G-TsF와 유사한 활성을 나타내는 거의 순수한 형태의 단백질.
  2. 거의 순수한 인체의 G-TsF.
  3. 재조합 DNA 기법으로 제조될 때 G-TsF 유사활성을 갖는 단백질.
  4. 재조합 G-TsF.
  5. 재조합 포유류 G-TsF.
  6. 인체 재조합 G-TsF.
  7. 재조합 G-TsF 전구체.
  8. 재조합 G-TsF 전구체 일부.
  9. 재조합 성숙 G-TsF.
  10. 제2d도의 도시한 정체 아미노산 서열을 갖는 단백질.
  11. 제2d도의 화살표 앞쪽에 있는 아미노산 서열을 갖는 단백질.
  12. 제2d도에 화살표 뒷쪽에 있는 아미노산 서열을 갖는 단백질.
  13. 제1항 내지 제12항중 어느 한항의 단백질에 대한 대립형 또는 변이체형.
  14. 제1항 내지 제12항중 어느 한항의 단백질중 그 주된 기능 및 구조적 특성을 변화시키지 않고 활성 또는 생산성을 향상시키기 위해 일정지역 돌연변이 또는 광범위 변형에 의해 얻어진 대립 변이체 또는 변이체.
  15. 제1항 내지 제12항중 어느 한항의 단백질을 삭제, 삽입 또는 치환시킨 돌연변이체.
  16. 제1항 내지 제15항중 어느 한항에 있어서, 글리코실화된 형태인 단백질.
  17. 제1항 내지 제15항중 어느 한항에 있어서, 비글리코실화된 형태인 단백질.
  18. 제1항 내지 제17항중 어느 한항에 있어서, 다이머 형태인 단백질.
  19. 제10항 또는 제12항에 있어서, 성숙서열의 시작부분부터 16번째 위치에 있는 아미노산이 Cys 대신 Ile이며/또는 25번째 위치는 Lys 대신 Val인 단백질.
  20. G-TsF 전구체 일부를 사용하여 제조된 재조합 성숙 G-TsF.
  21. 메티오닌 잔기에 의해 선행되는 성숙 G-TsF 단백질.
  22. 제1항 내지 제21항중 어느 한 항에 있어서, 글리코실화를 제외하고 성숙한 모노머 단위의 분자량이 12320 달톤인 단백질.
  23. 제1항 내지 제21항중 어느 한항에 있어서, 글리코실화 위치를 제외한 분자량이 45540 달톤인 모노머전구체를 갖는 단백질.
  24. 제1항 내지 제23항중 어느 한 항에 있어서, 흉선세포증식분석시 비활성도가 최소한 5×107유니트/mg인 단백질.
  25. 제2d도에 표시된 화살표 이후의 아미노산서열과 71% 이상의 아미노산서열 유사성을 갖는 제1항 내지 제24항중 어느 한항에 의한 성숙 단백질.
  26. 제2d도에 나타낸 전체 아미노산 서열과 30% 이상의 아미노산 서열유사성을 갖는 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 의한 전구체 단백질.
  27. 제1항 내지 제26항중 어느 한항에 있어서 치료에 사용되는 것을 특징으로 하는 단백질.
  28. G-TsF와 유사한 활성을 갖는 단백질을 재조합 DNA 기법에 의해 제조하는 방법에 있어서, 이같은 단백질을 암호하는 유전자로 형질전환된 숙주세포에서 표현된 단백질을 회수하는 것으로 구성된 제조방법.
  29. 제28항에 있어서, a) 상기 단백질을 암호하는 헥산을 포함하는 벡터를 만들고, b) 이 벡터로 이질종의 숙주세포를 형질전환시키고 c) 형질전환된 숙주세포를 배양하며 d) 이 배양체에서 표현된 단백질을 회수하는 단계로 구성되는 G-TsF와 유사한 활성을 갖는 단백질의 제조방법.
  30. G-TsF 전구체 또는 G-TsF 전구체 일부를 합성하고 필수적으로 홀딩 및 단백질 가수분해 처리하여 생물학적 활성이 있는 다이머 G-TsF를 제조하는 방법.
  31. 양이온 교환 크로마토그래피단계, 바람직하게는 Mono-STM에 대한 크로마트그래피 단계를 포함하는 제1항 또는 제2항의 단백질을 제조하는 방법.
  32. 제31항에 있어서, 히드록실아파타이트 및 Pro-RPCJ M상의 크로마토그래피, MonoJ M상의 양이온 교환크로마토그래피와 Pro-RPCJ M에 대한 가역상 크로마토그래피를 포함하는 제법.
  33. 제32항에 있어서, a) 신경교아세포종 세포와 같은 G-TsF 천연원료에서 얻은 세포의 상등액을 농축 및 투석여과, b) 히드록실 아파타이트상의 크로마코그래피, c) 용출제로 트리플루오로 초산/아세토니트릴(2x)을 사용하여 Pro-RPCJ M에 대해 가역상 크로마토그래피, d) 바람직하게는 Mono-STM에 대해 양이온 교환 크로마토그래피하고, e) 용출제로 트리플루오로 초산/2-프로핀올을 사용하여 Pro-RPCTM에 대해 가역상 크로마토그래피하는 단계로 구성된 제법.
  34. 제1항 내지 제27항중 어느 한항의 단백질을 암호하는 cDNA.
  35. 제34항에 있어서, 제2d도에 나타나 있는 누클레오티드서열을 갖는 cDNA.
  36. 제35항에 있어서, 제2d도에 나타나 있는 화살표 뒷부분의 누클레오티드서열을 갖는 cDNA.
  37. 제35항에 있어서, 제2d도에 나타나 있는 화살표 뒷부분의 누클레오티드서열을 갖는 cDNA.
  38. 제34항 내지 제37항중 어느 한 항에 의한 핵산과 하이브리드 할 수 있으며 G-TsF와 유사한 활성을 갖는 단백질을 암호하거나, 또는 상기 핵산의 상보서열과 하이브리드 할 수 있는 cDNA.
  39. 제3항 내지 제27항중 어느 한항의 재조합단백질과 이를 암호하는 핵산을 표현하는 벡터.
  40. 제39항에 있어서, 진핵세포내 표현을 위한 벡터.
  41. 제39항에 있어서, CHO 세포내에서의 표현을 위한 벡터.
  42. 제39항에 있어서, p91023(B)-SUP25-1인 벡터.
  43. 제39항에 있어서, pXMT3.neo/SUp40-1인 벡터.
  44. 제39항에 있어서, 원핵세포내 표현을 위한 벡터.
  45. 제39항에 있어서, E. coli 내에서 표현을 위한 벡터.
  46. 제39항에 있어서, pPLS1-SUP25-1인 벡터.
  47. 제3항 내지 제27항중 어느 한항의 단백질을 암호하는 핵산으로 형질 전환된 셀라인.
  48. 제47항에 있어서, CHO 셀라인인 셀라인.
  49. 제47항에 있어서, CHO/SUP40-1/1OMTX인 셀라인.
  50. 약학적 허용담체 또는 희석제와 함께 제1항 내지 제27항중 어느 한항의 단백질을 함유하는 약학적 조성물.
  51. 치료를 요하는 개체에 제1항 내지 제27항중 어느 한항의 단백질을 치료학적 유효량으로 투여하는 치료하는 방법.
  52. 치료를 위해 제1항 내지 제27항중 어느 한항의 단백질을 사용하는 방법.
  53. 제52항에 있어서, 면역억제, 상처치료, 뼈형성, 또는 소염제로 사용하는 방법.
  54. 제52항에 있어서, 기관이식 또는 자동면역상태에 사용하는 방법.
  55. 제52항에 있어서, 골다공증 또는 조직손상상태에 사용하는 방법.
  56. 제52항에 있어서, 외상, 화상, 수술 또는 노쇠로 인한 피부병변 치료에 사용하는 방법.
  57. 제52항에 있어서 암치료에 사용하는 방법.
  58. G-TsF 유도체의 제조를 위해 제1항 내지 제26항중 어느 한항의 단백질 또는 제34항 내지 제38항중 어느 한항의 cDNA 또는 제39항 내지 제46항중 어느 한항의 벡터 또는 47항 내지 제49항중 어느 한항의 세포를 사용하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019880700840A 1986-11-17 1987-11-16 신규한 t-세포 억압 인자의 제조 및 그것의 용도 KR890700031A (ko)

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