KR20240099208A - EGFRvIII-표적화 화합물 및 그의 용도 - Google Patents

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마리아 자라밀로
트라이안 술래아
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Abstract

킬레이트화 모이어티 또는 그의 금속 착물, 링커 및 EGFRvIII 표적화 모이어티를 포함하는 화합물, 예를 들어 방사성면역접합체. 이러한 화합물의 제약 조성물, 및 이러한 화합물 또는 제약 조성물을 사용하는 상태, 예를 들어 암의 치료 방법.

Description

EGFRvIII-표적화 화합물 및 그의 용도
관련 출원
본 출원은 2021년 9월 29일에 출원된 국제 특허 출원 번호 PCT/CA2021/051360을 우선권 주장하며, 그의 전체 내용은 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함된다.
서열 목록
본 명세서는 서열 목록 (2022년 9월 29일에 "FPI_027_Sequence_Listing.xml"로 명명된 .xml 파일로서 전자적으로 제출됨)을 참조한다. .xml 파일은 2022년 9월 26일에 생성되었고, 크기는 263 킬로바이트이다. 서열 목록의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
표피 성장 인자 수용체 변이체 III (EGFRvIII)는 증폭되고, 고도로 발현되며, 다형성 교모세포종 (GBM)의 25-64%로 존재한다. EGFRvIII mRNA 및 단백질 발현은 다중 상보적 기술을 이용하여 유방 암종의 하위세트 뿐만 아니라 두경부 편평 세포 암종 (HNSCC)에서 검출되었다. 상피, 중간엽 및 뉴런 기원의 조직에서 발현되고 정상 세포 과정, 예컨대 증식, 분화 및 발생에서 주요 역할을 하는 야생형 (wt) 표피 성장 인자 수용체 (EGFR)와 달리, EGFRvIII는 정상 조직 상에서 발현되지 않는다.
EGFRvIII 변이체는 EGFR 유전자의 엑손 2-7의 인-프레임 결실로부터 유래되어, 세포외 도메인의 267개 아미노산 잔기를 코딩하는 서열을 제거한다. 새로이 형성된 스플라이스 접합부는 야생형 인간 EGFR에서 대응물을 갖지 않는 글리신 잔기를 코딩하고, 따라서 네오-에피토프를 형성한다. 또한, 수많은 연구는 정상 조직에 EGFRvIII가 없다는 것을 나타내었다. 따라서, EGFRvIII는 항체 표적화 요법에 활용될 수 있는 신규한 종양 특이적 세포 표면 에피토프를 함유한다. 그러나, EGFRvIII 네오-에피토프는 나머지 인간 서열과 비교해서 그다지 면역원성이지는 않으며, 지금까지 생성된 많은 항체가 EGFRvIII를 특이적으로 인식하는 것으로 나타나지 않았다.
현재 공지된 EGFRvIII 항체는 항체 13.1.2 및 ABT-806을 포함한다. ABT-806이 전임상 모델에서 종양 EGFR에 우선적으로 결합하는 것으로 나타났지만, 인간 피부에 존재하는 wt EGFR에 대한 이 항체의 결합은 일부 환자에서 ABT-806이 나타내는 피부 독성의 원인인 것으로 나타났다. EGFR-발현 세포에 부재하거나 또는 접근 가능하지 않은 EGFRvIII의 에피토프를 특이적으로 표적화하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 암 환자의 치료에 유익할 것이다.
따라서, EGFRvIII를 표적화할 수 있는 개선된 치료제 (예를 들어, 암 치료제)가 여전히 요구되고 있다.
본 개시내용은 표피 성장 인자 수용체 변이체 III (EGFRvIII)를 표적화하는 화합물, 그의 제약 조성물, 및 이러한 제약 조성물을 사용하여 암을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, 제공된 화합물은 치료 효능을 여전히 유지하면서, 일부 현재 공지된 방사선요법제와 비교하여 증가된 배출 속도 (예를 들어, 포유동물에게 투여된 후)을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 보다 빠른 배출은 화합물이 대상체에 머무르는 시간의 양을 제한함으로써 오프-타겟 독성을 제한할 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 제공된 화합물은 감소된 오프-타겟 독성을 나타낸다.
한 측면에서, 하기 구조를 포함하는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다:
Figure pct00001
여기서
A는 킬레이트화 모이어티 또는 그의 금속 착물이고,
B는 표피 성장 인자 수용체 변이체 III (EGFRvIII) 또는 그의 단편에 결합할 수 있는 표적화 모이어티이고, 여기서 EGFRvIII 또는 그의 단편은 서열식별번호: 119의 아미노산 잔기 1 내지 76으로 이루어진 펩티드를 포함하고;
L1은 결합, C=O, C=S, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
n은 1 내지 5 (경계 포함)의 정수이고;
L2는 각각 독립적으로 하기 화학식 II의 구조를 갖고:
Figure pct00002
여기서
X1은 -C(O)NR1-*, -NR1C(O)-*, -C(S)NR1-*, -NR1C(S)-*, -OC(O)NR1-*, -NR1C(O)O-*, -NR1C(O)NR1-, -CH2-Ph-C(O)NR1-*, -NR1C(O)-Ph-CH2-*, -CH2-Ph-NH-C(S)NR1-*, -NR1C(S)-NH-Ph-CH2-*, -O-, 또는 -NR1-이고, 여기서 "*"는 L3에 대한 부착 지점을 나타내고, R1은 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
L3은 임의로 치환된 C1-C50 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C50 헤테로알킬이고;
Z1은 -CH2-#, -C(O)-#, -C(S)-#, -OC(O)-#, -C(O)O-#, -NR2C(O)-#, -C(O)NR2-# 또는 -NR2-#이고, 여기서 "#"는 B에 대한 부착 지점을 나타내고, R2는 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 아릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이다.
특정 실시양태에서, 화학식 I에서 가변기 A는 DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산), DOTMA (1R,4R,7R,10R)-α, α', α", α'"-테트라메틸-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산, DOTAM (1,4,7,10-테트라키스(카르바모일메틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸), DOTPA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라 프로피온산), DO3AM-아세트산 (2-(4,7,10-트리스(2-아미노-2-옥소에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1-일)아세트산), DOTA-GA 무수물 (2,2',2"-(10-(2,6-디옥소테트라히드로-2H-피란-3-일)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-트리일)트리아세트산, DOTP (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라(메틸렌 포스폰산)), DOTMP (1,4,6,10-테트라아자시클로데칸-1,4,7,10-테트라메틸렌 포스폰산, DOTA-4AMP (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라키스(아세트아미도-메틸렌포스폰산), CB-TE2A (1,4,8,11-테트라아자비시클로[6.6.2]헥사데칸-4,11-디아세트산), NOTA (1,4,7-트리아자시클로노난-1,4,7-트리아세트산), NOTP (1,4,7-트리아자시클로노난-1,4,7-트리(메틸렌 포스폰산), TETPA (1,4,8,11-테트라아자시클로테트라데칸-1,4,8,11-테트라프로피온산), TETA (1,4,8,11-테트라아자시클로테트라데칸-1,4,8,11-테트라 아세트산), HEHA (1,4,7,10,13,16-헥사아자시클로헥사데칸-1,4,7,10,13,16-헥사아세트산), PEPA (1,4,7,10,13-펜타아자시클로펜타데칸-N,N',N",N"',N""-펜타아세트산), H4옥타파 (N,N'-비스(6-카르복시-2-피리딜메틸)-에틸렌디아민-N,N'-디아세트산), H2데드파 (1,2-[[6-(카르복시)-피리딘-2-일]-메틸아미노]에탄), H6포스파 (N,N'-(메틸렌포스포네이트)-N,N'-[6-(메톡시카르보닐)피리딘-2-일]-메틸-1,2-디아미노에탄), TTHA (트리에틸렌테트라민-N,N,N',N",N"',N"'-헥사아세트산), DO2P (테트라아자시클로도데칸 디메탄포스폰산), HP-DO3A (히드록시프로필테트라아자시클로도데칸트리아세트산), EDTA (에틸렌디아민테트라아세트산), 데페록사민, DTPA (디에틸렌트리아민펜타아세트산), DTPA-BMA (디에틸렌트리아민펜타아세트산-비스메틸아미드), 옥타덴테이트-HOPO (옥타덴테이트 히드록시피리디논) 및 포르피린으로 이루어진 군으로부터 선택된 킬레이트화 모이어티이다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 하기에 의해 나타내어진다:
Figure pct00003
여기서 Y1은 -CH2OCH2(L2)n-B, C=O(L2)n-B, 또는 C=S(L2)n-B이고, Y2는 -CH2CO2H이거나; 또는
Y1은 H이고, Y2는 L1-(L2)n-B이다. 특정 실시양태에서, Y1은 H이다.
일부 실시양태에서, L1은
Figure pct00004
이고, RL은 수소 또는 -CO2H이다.
특정 실시양태에서, X1은 -C(O)NR1-* 또는 -NR1C(O)-*이고, "*"는 L3에 대한 부착 지점을 나타내고, R1은 H이다.
특정 실시양태에서, Z1은 -CH2-이다.
일부 실시양태에서, L3은 (CH2CH2O)2-20을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 (CH2CH2O)m(CH2)w이고, 여기서 m 및 w는 각각 독립적으로 0 내지 10 (경계 포함)의 정수이고, m 및 w 중 적어도 하나는 0이 아니다.
일부 실시양태에서, 금속 착물은 Bi, Pb, Y, Mn, Cr, Fe, Co, Zn, Ni, Tc, In, Ga, Cu, Re, 란타나이드 및 악티나이드로 이루어진 군으로부터 선택된 금속을 포함한다. 일부 실시양태에서, 금속 착물은 43Sc, 44Sc, 47Sc, 55Co, 60Cu, 61Cu, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 66Ga, 67Ga, 68Ga, 82Rb, 86Y, 87Y, 89Zr, 90Y, 97Ru, 99Tc, 99mTc, 105Rh, 109Pd, 111In, 117mSn, 133La, 134Ce, 149Pm, 149Tb, 153Sm, 166Ho, 177Lu, 186Re, 188Re, 198Au, 199Au, 201Tl, 203Pb, 211At, 212Pb, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 225Ac, 227Th, 및 229Th로 이루어진 군으로부터 선택된 방사성핵종을 포함한다.
일부 실시양태에서, 가변기 A는 킬레이트화 모이어티의 금속 착물이다. 일부 이러한 실시양태에서, 금속 착물은 방사성핵종을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방사성핵종은 알파 방출체, 예를 들어 아스타틴-211 (211At), 비스무트-212 (212Bi), 비스무트-213 (213Bi), 악티늄-225 (225Ac), 라듐-223 (223Ra), 납-212 (212Pb), 토륨-227 (227Th) 및 테르븀-149 (149Tb) 또는 그의 자핵종으로 이루어진 군으로부터 선택된 알파 방출체이다. 일부 실시양태에서, 방사성핵종은 68Ga, 111In, 177Lu, 또는 225Ac이다. 일부 실시양태에서, 방사성핵종은 225Ac 또는 그의 자핵종이다.
일부 실시양태에서, 화학식 I에서의 A-L-은 하기 구조 중 하나 또는 그의 금속 착물을 포함한다:
Figure pct00005
Figure pct00006
.
일부 실시양태에서, 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 하기 구조 또는 그의 금속 착물을 포함한다:
Figure pct00007
.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 실시양태에서, EGFRvIII 또는 그의 단편과 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
a. 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 9의 CDRL2 서열 및 서열식별번호: 10의 CDRL3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 13의 CDRH1 서열, 서열식별번호: 14의 CDRH2 서열 및 서열식별번호: 15의 CDRH3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
b. 서열식별번호: 18에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 19에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 23에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 25에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
c. 서열식별번호: 28에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 29에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 30에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 33에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 34에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 35에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
d. 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 39에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 40에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 43에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 44에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 45에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
e. 서열식별번호: 48에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 49에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 50에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 53에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 54에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 55에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
f. 서열식별번호: 58에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 59에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 60에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 63에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 64에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 65에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
g. 서열식별번호: 68에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 69에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 70에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 78에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 79에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 80에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는
h. 서열식별번호: 73에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 74에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 75에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 78에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 79에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 80에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역.
일부 실시양태에서, EGFRvIII 또는 그의 단편과 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
a. 서열식별번호: 118에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 118과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 116에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 116과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
b. 서열식별번호: 115에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 115와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 116에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 116과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는
c. 서열식별번호: 118에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 118과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 62에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 62와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
a. 서열식별번호: 7에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 7과 실질적으로 동일한 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 12에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 12와 실질적으로 동일한 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
b. 서열식별번호: 17에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 17과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 22에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 22와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
c. 서열식별번호: 27에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 27과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 32에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 32와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
d. 서열식별번호: 37에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 37과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 42에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 42와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
e. 서열식별번호: 47에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 47과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 52에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 52와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
f. 서열식별번호: 57에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 57과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 62에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 62와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
g. 서열식별번호: 67에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 67과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 77에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 77과 실질적으로 동일한 아미노산 서열, 서열식별번호: 92에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 92와 실질적으로 동일한 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 102에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 102와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는
h. 서열식별번호: 72에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 72와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 77에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 77과 실질적으로 동일한 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 92에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 92와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
a. 서열식별번호: 172에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 175에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역;
b. 서열식별번호: 173에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 175에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역;
c. 서열식별번호: 174에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 175에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역;
d. 서열식별번호: 172에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 176에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역;
e. 서열식별번호: 173에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 176에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역;
f. 서열식별번호: 174에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 176에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역;
g. 서열식별번호: 172에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 177에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역;
h. 서열식별번호: 173에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 177에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 또는
i. 서열식별번호: 174에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 177에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역.
특정 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
a. 서열식별번호: 174에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 176에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 또는
b. 서열식별번호: 172에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 177에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역;
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
a. 서열식별번호: 180에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 183에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역;
b. 서열식별번호: 181에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 183에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역;
c. 서열식별번호: 182에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 183에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역;
d. 서열식별번호: 180에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 184에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역;
e. 서열식별번호: 181에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 184에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역;
f. 서열식별번호: 182에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 184에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역;
g. 서열식별번호: 180에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 185에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역;
h. 서열식별번호: 181에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 185에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역; 또는
i. 서열식별번호: 182에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 185에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역.
일부 실시양태에서, 항체는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 인간 항체, 단일 쇄 항체 또는 다중특이적 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간화 모노클로날 항체이다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간 IgG1 불변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간 IgG2 불변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간 IgG4 불변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 178에 제시된 아미노산 서열을 갖는 인간 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 인간 IgG4(S228P) 불변 영역 및 서열식별번호: 179에 제시된 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG4(S228P) 중쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
a. 서열식별번호: 108에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 108과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열식별번호: 107에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 107과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 또는
b. 서열식별번호: 110에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 110과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열식별번호: 109에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 109와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄.
일부 실시양태에서, 항원-결합 단편은 scFv, Fab, Fab' 또는 (Fab')2를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 39에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 40에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 43에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 44에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 45에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 화합물은 하기 구조를 포함한다:
여기서 은 EGFRvIII 또는 그의 단편에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 리신 잔기의 측쇄 아미노 기를 통해 A-L-에 연결된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 상기 기재된 화합물 중 1종 및 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.
암의 방사선 치료 계획 및/또는 방사선 치료를 필요로 하는 대상체에게 상기 기재된 화합물 중 1종 또는 그를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암의 방사선 치료 계획 및/또는 방사선 치료 방법이 또한 본 발명의 범주 내에 있다.
또한, EGFRvIII를 발현을 포함하는 암의 치료를 필요로 하는 대상체 (예를 들어, 인간)에게 본원에 제공된 화합물 또는 제약 조성물을 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 본 발명의 범주 내에 있다.
EGFRvIII를 발현하는 세포를 포함하는 암의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체 (예를 들어, 인간)에게 상기 제공된 화합물 또는 제약 조성물의 제1 용량을 방사선 치료 계획에 유효한 양으로 투여한 다음, 상기 제공된 화합물 또는 제약 조성물의 후속 용량을 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 암을 치료 또는 예방하는 방법이 본 발명에 추가로 포함된다.
일부 실시양태에서, 제1 용량으로 투여되는 화합물 또는 조성물 및 후속 용량으로 투여되는 화합물 또는 조성물은 동일하다.
일부 실시양태에서, 제1 용량으로 투여되는 화합물 또는 조성물 및 후속적으로 투여되는 화합물 또는 조성물은 상이하다.
일부 실시양태에서, EGFRvIII를 발현하는 세포를 포함하는 암은 다형성 교모세포종 또는 암종이다.
일부 실시양태에서, 치료 방법은 항증식제, 방사선 증감제, 면역조절제 또는 면역조정제를 이를 필요로 하는 대상체 (예를 들어, 인간)에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 치료 방법은 본원에 기재된 화합물 또는 제약 조성물을 외부 빔 방사선의 부재 또는 존재 하에 항증식제와 조합하여 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항증식제는 테모졸로미드 (TMZ)이다.
일부 실시양태에서, 치료 방법은 치료 유효량의 본원에 기재된 화합물 또는 제약 조성물을 다중 용량으로 투여 (예를 들어, 4 사이클 동안 매주 1회 투여 또는 2 사이클 동안 2주마다 1회 투여)하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 치료 방법은 치료 유효량의 본원에 기재된 화합물 또는 제약 조성물을 단일 용량으로 투여하는 것을 포함한다.
도 1a는 킬레이트, 링커 및 가교기를 포함하는 이관능성 킬레이트의 일반 구조를 도시하는 개략도이다.
도 1b는 킬레이트, 링커 및 표적화 모이어티를 포함하는 이관능성 접합체의 일반 구조를 도시하는 개략도이다.
도 1c 및 도 1d는 본원에 개시된 2종의 예시적인 EGFRvIII 방사성면역접합체인 [177Lu]-DOTA-항-EGFRvIII 및 [225Ac]-DOTA-항-EGFRvIII의 구조를 도시하는 개략도이다.
도 2는 이관능성 킬레이트, 4-{[11-옥소-11-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)운데실]카르바모일}-2-[4,7,10-트리스(카르복시메틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1-일]부탄산 (화합물 B)의 합성을 도시하는 개략도이다. 화합물 B의 합성은 실시예 2에 기재되어 있다.
도 3은 이관능성 킬레이트, 4-{[2-(2-{2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시]에톡시}에톡시)에틸]카르바모일}-2-[4,7,10-트리스(카르복시메틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1-일]부탄산 (화합물 C)의 합성을 도시하는 개략도이다. 화합물 C의 합성은 실시예 3에 기재되어 있다.
도 4는 [177Lu]-화합물 C-항-EGFRvIII 접합체의 합성을 위한 접합 및 방사성표지를 도시하는 개략도이다. 실시예 4를 참조한다.
도 5a 및 5b는 U87-EGFRvIII 세포에 결합하는 [177Lu]-화합물 C-항-EGFRvIII 접합체, 즉 접합체 A 및 B 각각에 대한 결합 곡선이다. TB는 전체 결합을 나타내고, SB는 특이적 결합을 나타내고, NSB는 비-특이적 결합을 나타낸다. 실시예 6을 참조한다.
도 6a 및 6b는 U87-EGFRvIII 세포에서의 접합체 A 및 B의 내재화의 결과를 제시한다. 실시예 7을 참조한다.
도 7a-7c는 U87-EGFRvIII 세포에서 접합체 A 및 B의 잔류화의 결과를 제시한다. 실시예 7을 참조한다.
도 8a 및 8b는 각각 접합체 A 및 B를 주사한 피하 U87-EGFRvIII 모델에서의 생체분포 연구의 결과를 나타내는 플롯을 도시한 것이다. 조직 그램당 주사 용량 백분율 (% ID/g)을 4, 24, 96 및 168시간에서의 혈액, 심장, 장, 신장, 간, 폐, 비장, 종양, 소변 및 꼬리에 대해 x-축 상에 플롯팅하여 제시한다. 실시예 8을 참조한다.
도 9는 접합체 A 및 B를 주사한 U87-EGFRvIII-GFP-Luc 동소 모델에서의 생체분포 연구 결과를 나타내는 플롯을 도시한 것이다. 조직 그램당 주사된 용량 백분율 (% ID/g)을 96시간에서의 혈액, 종양, 정상 뇌, 비장, 간, 신장, 및 꼬리에 대해 x-축 상에 플롯팅하여 제시한다. 실시예 9를 참조한다.
도 10a-10d는 [111In]-화합물 C-항-EGFRvIII (도 10a 및 10b) 또는 [111In]-화합물 C-IgG4 접합체 (도 10c 및 10d)가 주사된 동소 G39-GFP-Luc 모델에서의 생체분포 연구의 결과를 나타내는 단일 광자 방출 컴퓨터 단층촬영/컴퓨터 단층촬영 (SPECT/CT) 영상 (도 10a 및 10c) 및 플롯 (도 10b 및 10d)을 제시한다. 도 10b 및 10d에 제시된 플롯에서, 조직의 입방 센티미터당 주사된 용량 백분율 (% ID/cc)을 96시간에서의 종양, 정상 뇌, 방광, 신장, 간, 비장, 심장, 폐, GI 및 골에 대해 y-축 상에 플롯팅하여 제시한다. 실시예 10을 참조한다.
도 11a-11d는 [111In]-화합물 C-항-EGFRvIII (도 11a 및 11b) 또는 [111In]-화합물 C-IgG4 접합체 (도 11c 및 11d)가 주사된 동소 G06-GFP-Luc 모델에서의 생체분포 연구의 결과를 나타내는 단일 광자 방출 컴퓨터 단층촬영/컴퓨터 단층촬영 (SPECT/CT) 영상 (도 11a 및 11c) 및 플롯 (도 11b 및 11d)을 제시한다. 도 11b 및 11d에 제시된 플롯에서, 조직의 입방 센티미터당 주사된 용량 백분율 (% ID/cc)을 96시간에서의 종양, 정상 뇌, 방광, 신장, 간, 비장, 심장, 폐, GI, 및 골에 대해 y-축 상에 플롯팅하여 제시한다. 실시예 10을 참조한다.
도 12a-12c는 100 nCi 및 200 nCi의 단일 용량으로 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII를 주사한 U87-EGFRvIII-GFP-Luc 동소 모델에서의 생체내 효능 연구의 결과를 제시한다. 도 12a는 생물발광 (치료 후 특정 시점에서 측정된 종양의 존재를 나타냄)을 보여주는 플롯이고; 도 12b는 생존 곡선을 나타내고; 도 12c는 각각의 치료군에서의 중앙 생존기간 및 생존 이익을 도시하는 표이다. 실시예 11을 참조한다.
도 13a 및 13b는 100 nCi 및 200 nCi의 단일 용량으로 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII를 주사한 동소 G06-GFP-Luc 모델에서의 생체내 효능 연구의 결과를 제시한다. 도 13a는 생존 곡선을 나타내고, 도 13b는 각각의 치료군에서의 중앙 생존기간 및 생존 이익을 도시하는 표이다. 실시예 11을 참조한다.
도 14a 및 14b는 100, 200, 또는 400 nCi의 단일 용량 또는 하기와 같이 분획화된 400 nCi의 총 누적 방사화학적 용량: 4주 동안 매주 1회 투여되는 100 nCi (100 nCix4) 용량 또는 2주마다 2회 투여되는 200 nCi (200 nCix2) 용량으로 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII를 주사한 동소 G39-GFP-Luc 모델에서의 생체내 효능 연구의 결과를 제시한다. 도 14a는 생존 곡선을 보여주고, 도 14b는 각각의 치료군에서의 중앙 생존기간 및 생존 이익을 도시하는 표이다. 실시예 12를 참조한다.
도 15a 및 15b는 표준 관리 (테모졸로미드와 조합된 외부 빔 방사선)와 조합하여 200 nCi의 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII를 주사한 동소 G06-GFP-Luc 모델에서의 생체내 효능 연구의 결과를 제시한다. 도 15a는 생존 곡선을 보여주고, 도 15b는 각각의 치료군에서의 중앙 생존기간 및 생존 이익을 도시하는 표이다. 실시예 13을 참조한다.
방사성면역접합체는 질환 상태에서 상향조절되는 단백질 또는 수용체를 표적화하여 방사성 페이로드를 전달하여 관심 세포를 손상시키고 사멸시키도록 설계된다 (방사선면역요법). 이러한 페이로드를 전달하는 과정은 방사성 붕괴를 통해 알파, 베타 또는 감마 입자 또는 오거 전자를 생성하여 DNA에 대한 직접 효과 (예컨대 단일 또는 이중 가닥 DNA 파괴) 또는 간접 효과, 예컨대 방관자 효과 또는 십자포화 효과를 유발할 수 있다.
방사성면역접합체는 전형적으로, 인간 EGFRvIII와 특이적으로 결합할 수 있는 표적화 모이어티 (예를 들어, 생물학적 표적화 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 그의 항원 결합 단편)), 방사성동위원소, 및 이들 둘을 연결하는 분자를 함유한다. 접합체는 이관능성 킬레이트가 표적 친화도를 유지하면서 구조적 변경이 최소이도록 표적화 분자 (예를 들어, 생물학적 표적화 분자)에 부착되는 경우에 형성된다. 방사성표지가 되면, 최종 방사성면역접합체가 형성된다.
이관능성 킬레이트는 구조적으로 킬레이트, 링커 및 가교기를 함유한다 (도 1a). 신규한 이관능성 킬레이트를 개발할 때, 대부분의 노력은 분자의 킬레이트화 부분에 초점을 맞춘다. 이관능성 킬레이트의 몇몇 예는 표적화된 모이어티에 접합되는 다양한 시클릭 및 비-시클릭 구조를 갖는 것으로 기재되어 있다. [Bioconjugate Chem. 2000, 11, 510-519; Bioconjugate Chem. 2012, 23, 1029-1039; Mol Imaging Biol. 2011, 13, 215-221, Bioconjugate Chem. 2002, 13, 110-115.]
안전하고 효과적인 방사성면역접합체를 개발하는 주요 인자 중 하나는 정상 조직에서 오프-타겟 독성을 최소화하면서 효능을 최대화하는 것이다. 이러한 언급은 신규한 약물을 개발하는 핵심 원칙 중 하나이지만, 방사선면역치료제에 대한 적용은 새로운 도전과제를 제시한다. 방사성면역접합체는, 치료 효능을 갖기 위해, 치료 항체를 사용하는 경우에 필요한 것과 같이 수용체를 차단하거나, 또는 항체 약물 접합체 ("ADC")에 의해 요구되는 바와 같이 세포독성 페이로드를 세포내 방출할 필요가 없다. 그러나, 독성 입자의 방출은 1차 (방사성) 붕괴의 결과로서 발생하는 이벤트이고, 투여 후 신체 내부의 임의의 부위에서 무작위로 발생할 수 있다. 일단 방출이 발생하면, 방출의 범위 내에서 주변 세포에 손상이 발생하여 잠재적 오프-타겟 독성을 유발할 수 있다. 따라서, 정상 조직에 대한 이들 방출의 노출을 제한하는 것이 신규한 치료 방사성면역접합체를 개발하는 것의 핵심이다.
오프-타겟 노출을 감소시키기 위한 하나의 잠재적 방법은 신체로부터 (예를 들어, 신체 내의 정상 조직으로부터) 방사능을 보다 효과적으로 제거하는 것이다. 하나의 메카니즘은 생물학적 표적화제의 클리어런스 속도를 증가시키는 것이다. 이러한 접근법은 생물학적 표적화제의 반감기를 단축시키는 방식을 식별하는 것을 필요로 할 가능성이 높으며, 이는 생물학적 표적화제에 대해서는 널리 기재되어 있지 않다. 메카니즘에 상관없이, 약물 클리어런스를 증가시키는 것은 또한, 신체로부터의 약물의 보다 신속한 제거가 작용 부위에서의 유효 농도를 낮출 것이며, 이는 결국 보다 높은 총 용량을 필요로 할 것이고, 정상 조직에 대한 총 방사성 용량을 감소시키는 목적하는 결과를 달성할 수 없을 것이라는 점에서 약역학/효능에 부정적인 영향을 미칠 것이다.
다른 노력은 방사성 모이어티를 함유하는 분자 부분의 대사를 가속화하는 데 집중되어 왔다. 이를 위해, "절단가능한 링커"로 명명된 것을 사용하여 생물학적 표적화제로부터 방사능의 절단 속도를 증가시키기 위한 몇몇 노력이 이루어졌다. 그러나, 절단가능한 링커는 방사성면역접합체와 관련되기 때문에 상이한 의미로 받아들여져 왔다. 코넬리센(Cornelissen) 등은 이관능성 킬레이트가 환원된 시스테인을 통해 생물학적 표적화제에 부착되게 하는 것으로서 절단가능한 링커를 기재한 반면, 다른 것들은 방출을 위해 방사성면역접합체와 절단제/효소의 공-투여를 필요로 하는 효소-절단가능한 시스템의 사용을 기재하였다 [Mol Cancer Ther. 2013, 12(11), 2472-2482; Methods Mol Biol. 2009, 539, 191-211; Bioconjug Chem. 2003, 14(5), 927-33]. 이들 방법은 시스테인 연결의 경우에 생물학적 표적화 모이어티의 성질을 변화시키거나, 또는 제공된 인용의 경우에 2종의 작용제의 투여를 필요로 하기 때문에 약물 개발 관점에서 실용적이지 않다 (효소 절단가능한 시스템).
본 개시내용은 특히 이화작용 및/또는 대사 후에 치료 효능을 유지하면서 신체로부터 보다 효과적으로 제거되는 화합물, 예를 들어 방사성면역접합체를 제공한다. 개시된 면역접합체는, 일부 실시양태에서, 예를 들어 공지된 이관능성 킬레이트와 비교 시 무손상 분자의 약동학을 유지하면서 이화/대사 산물의 배출 정도를 증가시킴으로써 전신 방사능의 감소를 달성할 수 있다. 일부 실시양태에서, 방사능의 이러한 감소는 다른 시험관내 및 생체내 특성, 예컨대 결합 특이성 (시험관내 결합), 세포 체류 및 생체내 종양 흡수에 영향을 미치지 않으면서 이화/대사 부산물의 클리어런스로부터 발생한다. 따라서, 일부 실시양태에서, 제공된 화합물은 온-타겟 활성을 유지하면서 인간 신체에서 감소된 방사능을 달성한다.
정의
본원에 사용된 용어 표적화 모이어티의 "결합하다" 또는 "결합"은 표적 분자, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은, 예를 들어 인간 EGFRvIII 및/또는 EGFRvIII의 돌연변이 변이체와의 또는 그에 대한 적어도 일시적 상호작용 또는 회합을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "이관능성 킬레이트"는 킬레이트, 링커 및 가교기를 포함하는 화합물을 지칭한다. 예를 들어, 도 1a를 참조한다. "가교기"는 공유 결합에 의해 2개 이상의 분자를 연결할 수 있는, 예를 들어 이관능성 킬레이트 및 표적화 모이어티를 연결할 수 있는 반응성 기이다.
본원에 사용된 용어 "이관능성 접합체"는 킬레이트 또는 그의 금속 착물, 링커 및 표적화 모이어티, 예를 들어 항체 또는 그의 항원-결합 단편를 포함하는 화합물을 지칭한다. 예를 들어, 도 1b를 참조한다.
본원에 사용된 용어 "암"은 악성 신생물성 세포의 증식에 의해 유발된 임의의 암, 예컨대 종양, 신생물, 암종, 육종, 백혈병 및 림프종을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 암은 EGFRvIII를 발현하는 세포 (예를 들어, 종양 세포), 예컨대 비제한적으로, 다형성 교모세포종 및 암종을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "킬레이트"는 2개 이상의 지점에서 중심 금속 또는 방사성금속 원자에 결합될 수 있는 유기 화합물 또는 그의 부분을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "접합체"는 킬레이트화 기 또는 그의 금속 착물, 링커 기를 함유하고, 임의로 표적화 모이어티, 예를 들어 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 함유하는 분자를 지칭한다.
달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 어구 "불변 영역"은 항체 또는 그의 단편 (예를 들어, IgG1, IgG2 또는 IgG4 불변 영역)과 관련하여 사용되는 경우에, 야생형 불변 영역 및 변이체 (예를 들어, 야생형 불변 영역에 대한 참조 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 아미노산 서열 동일성을 갖는 불변 영역) 둘 다를 포괄하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 용어 "화합물"은 도시된 구조의 모든 입체이성질체, 기하 이성질체 및 호변이성질체를 포함하는 것으로 의도된다.
본원에 언급되거나 기재된 화합물은 비대칭일 수 있다 (예를 들어, 1개 이상의 입체중심을 가짐). 달리 나타내지 않는 한, 모든 입체이성질체, 예컨대 거울상이성질체 및 부분입체이성질체가 의도된다. 비대칭적으로 치환된 탄소 원자를 함유하는 본 개시내용에서 논의된 화합물은 광학 활성 또는 라세미 형태로 단리될 수 있다. 광학 활성 출발 물질로부터 광학 활성 형태를 제조하는 방법은, 예컨대 라세미 혼합물의 분할에 의한 또는 입체선택적 합성에 의한 방법으로 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본원에 사용된 "검출제"는 항원을 함유하는 세포를 위치시킴으로써 질환을 진단하는 데 유용한 분자 또는 원자를 지칭한다. 검출제로 폴리펩티드를 표지하는 다양한 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 검출제의 예는 방사성동위원소 및 방사성핵종, 염료 (예컨대 비오틴-스트렙타비딘 복합체를 가짐), 조영제, 발광제 (예를 들어, 플루오레세인 이소티오시아네이트 또는 FITC, 로다민, 란타나이드 인광체, 시아닌, 및 근 IR 염료), 및 자기 작용제, 예컨대 가돌리늄 킬레이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "방사성핵종"은 방사성 붕괴를 겪을 수 있는 원자 (예를 들어, 3H, 14C, 15N, 18F, 35S, 47Sc, 55Co, 60Cu, 61Cu, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 75Br, 76Br , 77Br , 89Zr, 86Y, 87Y, 90Y, 97Ru, 99Tc, 99mTc, 105Rh, 109Pd, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 149Pm, 149Tb, 153Sm, 166Ho, 177Lu, 186Re, 188Re, 198Au, 199Au, 203Pb, 211At, 212Pb , 212Bi, 213Bi, 223Ra, 225Ac, 227Th, 229Th, 66Ga, 67Ga, 68Ga, 82Rb, 117mSn, 201Tl)를 지칭한다. 용어 방사성 핵종, 방사성동위원소 또는 방사성 동위원소는 또한 방사성핵종을 기재하는 데 사용될 수 있다. 방사성핵종은 본원에 기재된 바와 같이 검출제로서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 방사성핵종은 알파-방출 방사성핵종일 수 있다.
본원에 사용된 용어 작용제 (예를 들어, 임의의 상기 접합체)의 "유효량"은 유익한 또는 목적하는 결과, 예컨대 임상 결과를 달성하기에 충분한 양이고, 따라서 "유효량"은 적용되는 문맥에 따라 달라진다. 예를 들어, 치료 용도에서, "유효량"은 장애 및 그의 합병증의 증상을 치유하거나 적어도 부분적으로 정지시키고/거나 질환 또는 의학적 상태와 연관된 적어도 1종의 증상을 실질적으로 개선시키기에 충분한 양일 수 있다. 예를 들어, 암의 치료에서, 질환 또는 상태의 임의의 증상을 감소, 예방, 지연, 억제 또는 정지시키는 작용제 또는 화합물이 치료상 유효할 것이다. 치료 유효량의 작용제 또는 화합물은 질환 또는 상태를 치유하는 데 요구되지 않지만, 예를 들어 질환 또는 상태의 발병이 지연, 방해 또는 예방되도록, 질환 또는 상태 증상이 호전되도록, 또는 질환 또는 상태의 기간이 변화되도록 질환 또는 상태에 대한 치료를 제공할 수 있다. 예를 들어, 질환 또는 상태가 보다 덜 중증이 될 수 있고/거나 개체에서 회복이 가속화된다. 유효량은 단일 용량 또는 다중 (예를 들어, 적어도 2회, 적어도 3회, 적어도 4회, 적어도 5회, 또는 적어도 6회) 용량을 투여함으로써 투여될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "면역접합체"는 표적화 모이어티, 예컨대 항체 (또는 그의 항원-결합 단편), 나노바디, 아피바디, 또는 피브로넥틴 유형 III 도메인으로부터의 컨센서스 서열을 포함하는 접합체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 면역접합체는 표적화 모이어티당 평균 적어도 0.10개의 접합체 (예를 들어, 표적화 모이어티당 평균 적어도 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개의 접합체)를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "방사성접합체"는 방사성동위원소 또는 방사성핵종, 예컨대 본원에 기재된 임의의 방사성동위원소 또는 방사성핵종을 포함하는 임의의 접합체를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "방사성면역접합체"는 방사성동위원소 또는 방사성핵종, 예컨대 본원에 기재된 임의의 방사성동위원소 또는 방사성핵종을 포함하는 임의의 면역접합체를 지칭한다. 본 개시내용에 제공된 방사성면역접합체는 전형적으로 방사성동위원소 또는 방사성핵종으로부터 형성된 금속 착물을 포함하는 이관능성 접합체를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "방사선면역요법"은 치료 효과를 생성하기 위해 방사성면역접합체를 사용하는 방법을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 방사선면역요법은 그를 필요로 하는 대상체에게 방사성면역접합체를 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 방사성면역접합체의 투여는 대상체에서 치료 효과를 생성한다. 일부 실시양태에서, 방사선면역요법은 세포에 대한 방사성면역접합체의 투여를 포함할 수 있으며, 여기서 방사성면역접합체의 투여는 세포를 사멸시킨다. 여기서 방사선면역요법은 세포의 선택적 사멸을 수반하고, 일부 실시양태에서 세포는 암을 갖는 대상체의 암 세포이다.
본원에 사용된 용어 "제약 조성물"은 제약상 허용되는 부형제와 함께 제제화된 본원에 기재된 방사성면역접합체를 함유하는 조성물을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 포유동물에서의 질환의 치료를 위한 치료 요법의 일부로서 정부 규제 기관의 승인 하에 제조 또는 판매된다. 제약 조성물은, 예를 들어 단위 투여 형태로 경구 투여를 위해 (예를 들어, 정제, 캡슐, 캐플릿, 겔캡 또는 시럽); 국소 투여를 위해 (예를 들어, 크림, 겔, 로션 또는 연고로서); 정맥내 투여를 위해 (예를 들어, 미립자 색전이 없고 정맥내 사용에 적합한 용매계 중의 멸균 용액으로서); 또는 본원에 기재된 임의의 다른 제제로 제제화될 수 있다.
본원에 사용된 "제약상 허용되는 부형제"는 본원에 기재된 화합물 이외의 임의의 성분 (예를 들어, 활성 화합물을 현탁화 또는 용해시킬 수 있는 비히클)을 지칭하며, 환자에서 비독성 및 비염증성인 특성을 갖는다. 부형제는, 예를 들어: 부착방지제, 항산화제, 결합제, 코팅, 압축 보조제, 붕해제, 염료 (착색제), 연화제, 유화제, 충전제 (희석제), 필름 형성제 또는 코팅, 향미제, 향료, 활택제 (유동 증진제), 윤활제, 보존제, 인쇄 잉크, 방사선보호제, 흡착제, 현탁화제 또는 분산제, 감미제, 또는 수화용수를 포함할 수 있다. 예시적인 부형제는 아스코르브산, 히스티딘, 포스페이트 완충제, 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 탄산칼슘, 인산칼슘 (이염기성), 스테아르산칼슘, 크로스카르멜로스, 가교 폴리비닐 피롤리돈, 시트르산, 크로스포비돈, 시스테인, 에틸셀룰로스, 젤라틴, 히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 락토스, 스테아르산마그네슘, 말티톨, 만니톨, 메티오닌, 메틸셀룰로스, 메틸 파라벤, 미세결정질 셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 피롤리돈, 포비돈, 예비젤라틴화 전분, 프로필 파라벤, 레티닐 팔미테이트, 쉘락, 이산화규소, 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 시트르산나트륨, 소듐 스타치 글리콜레이트, 소르비톨, 전분 (옥수수), 스테아르산, 스테아르산, 수크로스, 활석, 이산화티타늄, 비타민 A, 비타민 E, 비타민 C 및 크실리톨을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 염"은 타당한 의학적 판단의 범주 내에서 과도한 독성, 자극 또는 알레르기 반응 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 본원에 기재된 화합물의 염을 나타낸다. 제약상 허용되는 염은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 제약상 허용되는 염은 문헌 [Berge et al., J. Pharmaceutical Sciences 66:1-19, 1977 and in Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, (Eds. P.H. Stahl and C.G. Wermuth), Wiley-VCH, 2008]에 기재되어 있다. 염은 본원에 기재된 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 계내에서 또는 유리 염기 기를 적합한 유기 산과 반응시킴으로써 개별적으로 제조될 수 있다.
본 발명의 화합물은 제약상 허용되는 염으로서 제조될 수 있도록 이온화가능한 기를 가질 수 있다. 이들 염은 무기 또는 유기 산을 포함하는 산 부가염일 수 있거나, 또는 염은 본 발명의 화합물의 산성 형태의 경우에 무기 또는 유기 염기로부터 제조될 수 있다. 빈번하게, 화합물은 제약상 허용되는 산 또는 염기의 부가 생성물로서 제조된 제약상 허용되는 염으로서 제조되거나 사용된다. 적합한 제약상 허용되는 산 및 염기, 예컨대 산 부가염을 형성하기 위한 염산, 황산, 브로민화수소산, 아세트산, 락트산, 시트르산 또는 타르타르산, 및 염기성 염을 형성하기 위한 수산화칼륨, 수산화나트륨, 수산화암모늄, 카페인, 다양한 아민이 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 적절한 염의 제조 방법은 관련 기술분야에 널리 확립되어 있다.
대표적인 산 부가염은 특히 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤젠술포네이트, 벤조에이트, 비술페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 시트레이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵토네이트, 헥사노에이트, 히드로브로마이드, 히드로클로라이드, 히드로아이오다이드, 2-히드록시-에탄술포네이트, 락토비오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔술포네이트, 운데카노에이트, 발레레이트 염을 포함한다. 대표적인 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘 및 마그네슘, 뿐만 아니라 비독성 암모늄, 4급 암모늄 및 아민 양이온, 예컨대, 비제한적으로 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민 및 에틸아민을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "폴리펩티드"는 펩티드 결합에 의해 서로 부착된 적어도 2개의 아미노산의 스트링을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 적어도 3-5개의 아미노산을 포함할 수 있으며, 이들 각각은 적어도 1개의 펩티드 결합에 의해 다른 것에 부착된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 폴리펩티드가 1개 이상의 "비-천연" 아미노산 또는 그럼에도 불구하고 폴리펩티드 쇄 내로 통합될 수 있는 다른 실체를 포함할 수 있다는 것을 인지할 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 글리코실화될 수 있고, 예를 들어 폴리펩티드는 1개 이상의 공유 연결된 당 모이어티를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 단일 "폴리펩티드" (예를 들어, 항체 폴리펩티드)는 일부 경우에, 예를 들어 1개 이상의 디술피드 결합 또는 다른 수단에 의해 서로 연결될 수 있는 2개 이상의 개별 폴리펩티드 쇄를 포함할 수 있다.
"대상체"는 인간 또는 비-인간 동물 (예를 들어, 포유동물)을 의미한다.
"실질적 동일성" 또는 "실질적으로 동일한"은 각각 참조 서열과 동일한 폴리펩티드 서열을 갖거나, 또는 2개의 서열이 최적으로 정렬되는 경우에 각각 참조 서열 내의 상응하는 위치에 동일한 아미노산 잔기의 명시된 백분율을 갖는 폴리펩티드 서열을 의미한다. 예를 들어, 참조 서열과 "실질적으로 동일한" 아미노산 서열은 참조 아미노산 서열과 적어도 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는다. 폴리펩티드의 경우, 비교 서열의 길이는 일반적으로 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 50, 75, 90, 100, 150, 200, 250, 300 또는 350개의 인접 아미노산 (예를 들어, 전장 서열)일 것이다. 서열 동일성은 디폴트 설정으로 서열 분석 소프트웨어 (예를 들어, 제네틱스 컴퓨터 그룹 (Genetics Computer Group, 위스콘신주 53705 매디슨 유니버시티 애비뉴 1710 유니버시티 오브 위스콘신 바이오테크놀로지 센터)의 서열 분석 소프트웨어 패키지)를 사용하여 측정될 수 있다. 이러한 소프트웨어는 다양한 치환, 결실 및 다른 변형에 상동성 정도를 할당함으로써 유사한 서열을 매칭시킬 수 있다.
본원에 사용되고 관련 기술분야에서 널리 이해되는 바와 같이, 상태를 "치료하는 것" 또는 상태 (예를 들어, 본원에 기재된 상태, 예컨대 암)의 "치료"는 유익한 또는 목적하는 결과, 예컨대 임상 결과를 수득하기 위한 접근법이다. 유익한 또는 목적하는 결과는, 검출가능하든 검출불가능하든, 1종 이상의 증상 또는 상태의 완화 또는 호전; 질환, 장애 또는 상태의 정도의 감소; 질환, 장애 또는 상태의 안정화된 (즉, 악화되지 않는) 상태; 질환, 장애 또는 상태의 확산의 예방; 질환, 장애 또는 상태의 진행의 지연 또는 둔화; 질환, 장애 또는 상태의 호전 또는 완화; 및 (부분적이든 전체적이든) 차도를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 질환, 장애 또는 상태를 "완화시키는 것"은 치료 부재 하의 정도 또는 시간 경과와 비교하여, 질환, 장애 또는 상태의 정도 및/또는 바람직하지 않은 임상 징후가 감소되고/거나 진행의 시간 경과가 둔화 또는 연장되는 것을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "약" 또는 "대략"은, 정량적 값과 관련하여 사용되는 경우에, 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 언급된 정량적 값 자체를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "약" 또는 "대략"은 문맥으로부터 달리 나타내거나 추론되지 않는 한 언급된 정량적 값으로부터의 ±10% 변동을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "표적화 모이어티"는 주어진 표적에 결합할 수 있는 임의의 분자 또는 분자의 임의의 부분을 지칭한다. 용어 "EGFRvIII 표적화 모이어티"는 EGFRvIII 분자, 예를 들어 인간 EGFRvIII와 결합할 수 있는 표적화 모이어티를 지칭한다.
달리 명시되지 않는 한, 본원에 사용된 "EGFR"은 인간 EGFR을 지칭한다. 인간 EGFR은 유니프롯(UniProt) P00533에 의해 규정된 전장 단백질, 또는 그의 단편 또는 변이체를 의미한다. EGFR은 표피 성장 인자 수용체, ErbB-1, 및 HER1로도 공지되어 있다. 일부 특정 실시양태에서, 비-인간 종의 EGFR, 예를 들어, 마우스 EGFR이 사용된다. 용어 "wt EGFR", "WT EGFR", "EGFR WT", 및 "EGFR wt"는 상호교환가능하게 사용되고, 야생형 EGFR을 지칭한다.
본원에 사용된 "EGFRvIII" 또는 "vIII"은 코딩 서열의 엑손 2-7 또는 그의 단편의 인-프레임 결실로부터 생성된 EGFR 변이체를 지칭한다. EGFRvIII는 표피 성장 인자 수용체 변이체 III, de2-7EGFR, 및 ΔEGFR로서 또한 공지되어 있다.
본원에 사용된 용어 "단편"은, EGFRvIII 단편을 지칭하는 데 사용되는 경우에, N-말단 및/또는 C-말단 말단절단된 EGFRvIII 또는 EGFRvIII의 단백질 도메인을 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 기재된 실시양태에 따라 사용된 EGFRvIII의 단편은 본 개시내용에 기재된 바와 같은 EGFRvIII-표적화 모이어티에 의해 인식 및/또는 결합되는 전장 EGFRvIII의 능력을 보유한다. 예시적인 예로서, 단편은 EGFRvIII의 세포외 도메인, 예컨대 EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 76 (서열식별번호: 119), EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 18 (서열식별번호: 125), 또는 EGFRvIII의 아미노산 잔기 15 내지 37 (서열식별번호: 6)일 수 있다.
본 개시내용을 기재하는 문맥에서 (특히 청구범위의 문맥에서) 단수 용어 및 유사한 지시대상의 사용은, 본원에 달리 나타내지 않거나 문맥에 의해 명백하게 모순되지 않는 한, 단수형 및 복수형 둘 다를 포괄하는 것으로 해석되어야 한다.
구체적으로 언급되지 않거나 문맥으로부터 명백하지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "또는"은 포괄적인 것으로 이해되고, "또는" 및 "및" 둘 다를 포괄하고 포함한다.
본원에 사용된 용어 "및/또는"은 다른 것과 함께 또는 다른 것 없이 각각의 명시된 특색 또는 성분의 구체적 개시로서 해석되어야 한다.
용어 "포함하는", "갖는", "비롯한" 및 "함유하는"은 달리 나타내지 않는 한 개방형 용어 (즉, "포함하나 이에 제한되지는 않는"을 의미함)로서 해석되어야 한다. 용어 "이루어진"은 폐쇄형으로 해석되어야 한다.
EGFRvIII 또는 EGFR과 같은 단백질과 관련하여 본원에 사용된 용어 "천연"은 단백질의 천연 입체형태를 지칭하고, 적절하게 폴딩되고/거나 기능적인 단백질을 포함한다.
EGFRvIII 또는 EGFR과 같은 단백질과 관련하여 본원에 사용된 용어 "변성된"은 그의 천연 입체형태를 상실하고, 예를 들어 3차 및 2차 구조의 상실을 수반할 수 있는 단백질을 지칭한다.
본원에 사용된 표현 "EGFRvIII 단편을 포함하거나 또는 그로 이루어진 펩티드"는 이러한 펩티드가 EGFRvIII 단편 이외의 부분을 포함할 수 있거나 또는 EGFRvIII 단편으로 이루어진다는 것을 의미한다.
본원에 사용된 표적화 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 항원-결합 도메인)가 "아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다"는 것은 상기 아미노산 잔기가 에피토프의 일부이거나 또는 표적화 모이어티의 결합에 필요한 것임을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 표적화 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 항원-결합 도메인)와 관련하여 사용되는 경우에, 용어 펩티드 또는 단백질"에 결합하지 못한다"는 표적화 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편)가 a) 재조합적으로 또는 세포에서 발현되는 경우에 펩티드 또는 단백질에 유의하게 결합하지 않거나, b) 검출가능한 친화도로 펩티드 또는 단백질에 결합하지 않거나, c) 음성 대조군 분자와 유사한 결합 특성을 갖거나, d) 펩티드 또는 단백질에 특이적으로 결합하지 않거나, 또는 e) 관련 기술분야에 공지된 유동 세포측정 실험에 의해 결정 시 0% 내지 15%의 값으로 결합한다는 것을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "자가"는 동일한 개체로부터 유래된 물질을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "항원-결합 도메인"은 항원에 대한 특이적 결합을 허용하는 항체 또는 항원-결합 단편의 도메인을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "항체"는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 인간 항체, 단일 도메인 항체 (예컨대 VHH, VH, VL, 나노바디, 또는 임의의 낙타류 또는 라마 단일 도메인 항체), 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체) 등을 포괄한다. 용어 "항체"는 자연에서 발생하는 것 (예를 들어 인간 IgG 등)과 유사한 포맷을 갖는 분자를 포괄한다. 관련 기술분야에서 "이뮤노글로불린" (Ig)으로도 지칭되는 본원에 사용된 용어 "항체"는 쌍형성된 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드로부터 구축된 단백질을 지칭하며; IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM을 포함하는 다양한 Ig 이소형이 존재한다. 항체가 정확하게 폴딩되는 경우에, 각각의 쇄는 보다 선형의 폴리펩티드 서열에 의해 연결된 다수의 별개의 구상 도메인으로 폴딩된다. 예를 들어, 이뮤노글로불린 경쇄는 1개의 가변 (VL) 도메인 및 1개의 불변 (CL) 도메인으로 폴딩되는 반면, 중쇄는 1개의 가변 (VH) 도메인 및 3개의 불변 (CH1, CH2, CH3) 도메인으로 폴딩된다. 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 (VH 및 VL)의 상호작용은 항원-결합 영역 (Fv)의 형성을 유발한다. 각각의 도메인은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 친숙한 잘 확립된 구조를 갖는다.
전형적으로, 항체는 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄의 쌍형성으로부터 구성된다. IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM을 비롯한 상이한 항체 이소형이 존재한다. 인간 IgG는 4개의 별개의 하위군, 즉 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 추가로 분류된다. 치료 항체는 일반적으로 IgG1 또는 IgG2 또는 IgG4로서 개발된다.
예시적인 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항원-결합 단편은, 예를 들어 인간 IgG1 불변 영역 또는 그의 단편을 포함할 수 있다. 또 다른 예시적인 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항원-결합 단편은, 예를 들어 인간 IgG2 불변 영역 또는 그의 단편을 포함할 수 있다. 또 다른 예시적인 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항원-결합 단편은, 예를 들어 인간 IgG4 불변 영역 또는 그의 단편 또는 단편을 포함할 수 있다. 다른 항체 하위유형의 불변 영역이 또한 고려된다.
인간 항체 IgG 이소형의 경쇄 및 중쇄는 각각 상보성 결정 영역 (CDR)으로 명명된 3개의 초가변 영역을 갖는 가변 영역을 포함한다. 경쇄 CDR은 본원에서 CDRL1 또는 L1, CDRL2 또는 L2 및 CDRL3 또는 L3으로 확인된다. 중쇄 CDR은 본원에서 CDRH1 또는 H1, CDRH2 또는 H2 및 CDRH3 또는 H3으로 확인된다. 상보성 결정 영역은 프레임워크 영역 (FR)에 의해 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4의 순서로 플랭킹된다. 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 표적 항원에 결합하는 것을 담당하고, 따라서 항체 사이에 유의한 서열 다양성을 나타낼 수 있다. 불변 영역은 보다 적은 서열 다양성을 나타내고, 중요한 생화학적 사건을 도출하기 위해 다수의 천연 단백질에 결합하는 것을 담당한다. 항체의 가변 영역은 분자의 항원-결합 결정기를 함유하고, 따라서 그의 표적 항원에 대한 항체의 특이성을 결정한다. 대부분의 서열 가변성은 조합되어 항원-결합 부위를 형성하고 항원 결정기의 결합 및 인식에 기여하는 CDR에서 발생한다. 프레임워크 영역은 최적의 항원-결합을 위한 CDR의 3차원에서의 적절한 배치 및 정렬에서 역할을 할 수 있다. 그의 항원에 대한 항체의 특이성 및 친화도는 초가변 영역의 구조, 뿐만 아니라 이들이 항원에 제시하는 그의 표면의 크기, 형상 및 화학에 의해 결정된다. 초가변성 영역의 확인을 위한 다양한 체계가 존재하며, 가장 흔한 2가지는 카바트(Kabat) 및 코티아 및 레스크(Chothia and Lesk)의 것이다. 문헌 [Kabat et al. (1991)]은 VH 및 VL 도메인의 항원-결합 영역에서의 서열 가변성을 기초로 "상보성-결정 영역" (CDR)을 정의한다. 문헌 [Chothia and Lesk (1987)]은 VH 및 VL 도메인 내의 구조적 루프 영역의 위치에 기초하여 "초가변 루프" (H 또는 L)를 규정한다. 이들 개별 체계는 인접하거나 중첩되는 CDR 및 초가변 루프 영역을 규정하고, 항체 분야의 통상의 기술자는 종종 용어 "CDR" 및 "초가변 루프"를 상호교환가능하게 이용하고, 이들은 본원에서 그렇게 사용될 수 있다. CDR/루프는 카바트 및 코티아 정의를 조합함으로써 서술되는 CDRH1 루프를 제외하고 카바트 체계에 따라 본원에서 확인된다.
재조합 DNA 기술은 이제 본 개시내용에 의해 포괄되는 다양한 항체 포맷, 예컨대 단일 쇄 항체 (예를 들어, 단일 도메인), 디아바디, 미니바디, 나노바디 등의 설계를 허용한다.
본원에 언급된 "항원-결합 단편"은 관련 기술분야에 공지된 임의의 적합한 항원-결합 단편을 포함할 수 있다. 항원-결합 단편은 자연-발생 단편일 수 있거나, 또는 자연-발생 항체의 조작에 의해 또는 재조합 방법을 사용함으로써 수득될 수 있다. 예를 들어, 항체 단편은 Fv, 단일쇄 Fv (scFv; 펩티드 링커와 연결된 VL 및 VH로 이루어진 분자), Fab, F(ab')2, 단일-도메인 항체 (sdAb; 단일 VL 또는 VH로 구성된 단편), 및 이들 중 임의의 것의 다가 제시형태를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 항체 단편, 예컨대 상기 기재된 것은 단편의 상이한 부분을 연결하기 위해 링커 서열, 디술피드 결합, 또는 다른 유형의 공유 결합을 필요로 할 수 있고; 관련 기술분야의 통상의 기술자는 상이한 유형의 단편의 요건 및 그의 구축을 위한 다양한 접근법 및 다양한 접근법에 친숙할 것이다.
본 개시내용의 그의 항원-결합 단편은 항원에 대한 특이적 결합을 부여하는 아미노산 잔기 (예를 들어, 1개 이상의 CDR)를 포함하는 항원-결합 부위를 갖는 분자를 포괄한다.
따라서, 본 개시내용의 항원-결합 단편의 예시적인 실시양태는 제한 없이 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 디술피드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편 (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546); 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역 (CDR), 예를 들어, VH CDR3을 포함한다.
항원-결합 단편의 구체적 실시양태는 예를 들어 scFv, Fab, Fab' 또는 (Fab')2를 포함할 수 있다.
용어 "인간화 항체"는 완전 인간화 항체 (즉, 프레임워크는 100% 인간화됨) 및 부분 인간화 항체 (예를 들어, 적어도 1개의 가변 영역은 인간 항체로부터의 1개 이상의 아미노산을 함유하는 반면, 다른 아미노산은 비-인간 모 항체의 아미노산임)를 포괄한다. 전형적으로, "인간화 항체"는 비-인간 모 항체 (예를 들어, 마우스, 래트, 토끼, 비-인간 영장류 등)의 CDR 및 천연 인간 항체 또는 인간 항체 컨센서스의 것과 동일한 프레임워크를 함유한다. 이러한 경우에, 이들 "인간화 항체"는 완전 인간화로서 특징화된다. "인간화 항체"는 또한 인간 항체 또는 인간 항체 컨센서스에 상응하지 않는 1개 이상의 아미노산 치환을 함유할 수 있다. 이러한 치환은, 예를 들어 항체 특징 (예를 들어, 친화도, 특이성 등)을 보존할 수 있는 복귀-돌연변이 (예를 들어, 비-인간 아미노산의 재-도입)를 포함한다. 이러한 치환은 통상적으로 프레임워크 영역에 존재한다. "인간화 항체"는 통상적으로 또한 전형적으로 인간 항체의 불변 영역 (Fc)인 불변 영역을 포함한다. 전형적으로, "인간화 항체"의 불변 영역은 인간 항체의 불변 영역과 동일하다. 인간화 항체는 CDR 그라프팅에 의해 수득될 수 있다 (Tsurushita et al., 2005; Jones et al., 1986; Tempest et al., 1991; Riechmann et al., 1988; Queen et al., 1989). 이러한 항체는 완전히 인간화된 것으로 간주된다.
용어 "키메라 항체"는 모 항체의 것과는 별개의 기원으로부터의 불변 영역을 갖는 항체를 지칭한다. 용어 "키메라 항체"는 인간 불변 영역을 갖는 항체를 포괄한다. 전형적으로, "키메라 항체"는 마우스 항체로부터 기원하는 가변 영역 및 인간 불변 영역으로 구성된다.
용어 "하이브리드 항체"는 특정 유형의 항체 (예를 들어, 인간화)로부터의 그의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 중 하나 (그의 중쇄 또는 경쇄)를 포함하는 한편, 나머지 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 (중쇄 또는 경쇄)이 또 다른 유형 (예를 들어, 뮤린, 키메라)으로부터의 것인 항체를 지칭한다.
본 개시내용의 항체 및/또는 항원-결합 단편은, 예를 들어 마우스, 래트 또는 임의의 다른 포유동물로부터, 또는 다른 공급원으로부터, 예컨대 재조합 DNA 기술을 통해 유래할 수 있다. 본 개시내용의 항체 또는 항원-결합 단편은, 예를 들어 합성 항체, 비-자연 발생 항체, 비-인간 포유동물의 면역화 후에 수득된 항체 등을 포함할 수 있다.
본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 단리되고/거나 실질적으로 정제될 수 있다.
화합물, 예를 들어 방사성면역접합체
한 측면에서, 본 개시내용은 하기 구조를 포함하는 화합물, 예를 들어 방사성면역접합체 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00010
여기서
A는 킬레이트화 모이어티 또는 그의 금속 착물이고,
B는 표피 성장 인자 수용체 변이체 III (EGFRvIII)에 결합할 수 있는 표적화 모이어티이고, 여기서 EGFRvIII는 EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 76 (서열식별번호: 119)으로 이루어진 펩티드를 포함하고;
L1은 결합, C=O, C=S, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
n은 1 내지 5 (경계 포함)의 정수이고;
L2는 각각 독립적으로 하기 화학식 II의 구조를 갖고:
Figure pct00011
여기서
X1은 -C(O)NR1-*, -NR1C(O)-*, -C(S)NR1-*, -NR1C(S)-*, -OC(O)NR1-*, -NR1C(O)O-*, -NR1C(O)NR1-*, -CH2-Ph-C(O)NR1-*, -NR1C(O)-Ph-CH2-*, -CH2-Ph-NH-C(S)NR1-*, -NR1C(S)-NH-Ph-CH2-*, -O-*, 또는 -NR1-*이고; 여기서 "*"는 L3에 대한 부착 지점을 나타내고, R1은 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 또는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고;
L3은 임의로 치환된 C1-C50 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C50 헤테로알킬이고;
Z1은 -CH2-#, -C(O)-#, -C(S)-#, -OC(O)-#, -C(O)O-#, -NR2C(O)-#, -C(O)NR2-# 또는 -NR2-#이고, 여기서 "#"는 B에 대한 부착 지점을 나타내고, R2는 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 아릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이다.
알킬, 헤테로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴의 전형적인 치환기는 할로 (예를 들어, F, Cl, Br, I), OH, CN, 니트로, 아미노, C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-8 시클로알킬, C1-6 헤테로알킬, C1-6 헤테로시클로알킬, 할로알킬 (예를 들어, CF3), 알콕시 (예를 들어, OCH3), 알킬아미노 (예를 들어, NH2CH3), 술포닐, 아릴 및 헤테로아릴을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 화합물은 하기 제시된 구조를 갖거나 또는 포함한다:
Figure pct00012
여기서 B는 EGFRvIII 표적화 모이어티 (예를 들어, EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편)이다.
일부 실시양태에서, A-L-은 하기 구조 중 하나 또는 그의 금속 착물을 포함한다:
Figure pct00013
Figure pct00014
.
일부 실시양태에서, 본원에 추가로 기재된 바와 같이, 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체)은 킬레이트화 모이어티 또는 그의 금속 착물을 포함하고, 상기 금속 착물은 방사성핵종을 포함할 수 있다. 일부 이러한 화합물에서, EGFRvIII 표적화 모이어티에 대한 킬레이트화 모이어티의 평균 비 또는 중앙 비는 8 이하, 7 이하, 6 이하, 5 이하, 4 이하, 3 이하, 2 이하, 또는 약 1이다. 일부 화합물에서, EGFRvIII 표적화 모이어티에 대한 킬레이트화 모이어티의 평균 비 또는 중앙 비는 약 1이다.
일부 실시양태에서, 방사성면역접합체를 포유동물에게 투여한 후, 장 경로, 신장 경로 또는 둘 다에 의해 배출되는 방사선의 (투여되는 방사선의 총량의) 비율은 참조 방사성면역접합체를 투여받는 대등한 포유동물에 의해 배출되는 방사선의 비율보다 더 크다. "참조 면역접합체"는 적어도 (1) 상이한 링커를 가짐; (2) 상이한 크기의 표적화 모이어티를 가짐 및/또는 (3) 표적화 모이어티가 결여됨으로써 본원에 기재된 방사성면역접합체와 상이한 공지된 방사성면역접합체를 의미한다. 일부 실시양태에서, 참조 방사성면역접합체는 [90Y]-이브리투모맙 티욱세탄 (제발린(Zevalin) (90Y)) 및 [111In]-이브리투모맙 티욱세탄 (제발린 (111In))으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 주어진 경로 또는 경로의 세트에 의해 배출되는 방사선의 비율은 참조 방사성면역접합체를 투여받는 대등한 포유동물에 의한 동일한 경로(들)에 의해 배출되는 방사선의 비율보다 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 더 크다. 일부 실시양태에서, 배설된 방사선의 비율은 참조 방사성면역접합체가 투여된 대등한 포유동물에 의해 배설된 방사선의 비율보다 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 2.5배, 적어도 3배, 적어도 3.5배, 적어도 4배, 적어도 4.5배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 또는 적어도 10배 더 크다. 배출 정도는 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해, 예를 들어 소변 및/또는 분변에서의 방사능을 측정함으로써 및/또는 일정 기간에 걸쳐 전신 방사능을 측정함으로써 측정될 수 있다. 또한, 예를 들어 국제 특허 공개 WO 2018/024869를 참조한다.
일부 실시양태에서, 배출 정도는 투여 후 적어도 또는 약 12시간, 투여 후 적어도 또는 약 24시간, 투여 후 적어도 또는 약 2일, 투여 후 적어도 또는 약 3일, 투여 후 적어도 또는 약 4일, 투여 후 적어도 또는 약 5일, 투여 후 적어도 또는 약 6일, 또는 투여 후 적어도 또는 약 7일의 시간 주기에 측정된다.
일부 실시양태에서, 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체)을 포유동물에게 투여한 후에, 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체)은 참조 화합물 (예를 들어, 참조 접합체, 예를 들어 참조 면역접합체, 예컨대 참조 방사성면역접합체)과 비교하여 감소된 오프-타겟 결합 효과 (예를 들어, 독성)를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 이러한 감소된 오프-타겟 결합 효과는 또한 본원에 기재된 바와 같은 보다 큰 배출 속도를 나타내는 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체)의 특색이다.
표적화 모이어티
표적화 모이어티는 주어진 표적, 예를 들어 EGFRvIII와 결합할 수 있는 (예를 들어, 특이적으로 결합할 수 있거나, 특이적으로 결합하는 등) 임의의 분자 또는 분자의 임의의 부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 단백질 또는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 나노바디, 아피바디, 및 피브로넥틴 유형 III 도메인으로부터의 컨센서스 서열 (예를 들어, 센티린 또는 애드넥틴)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 모이어티는 표적화 모이어티 및 치료 모이어티 둘 다이며, 즉 모이어티는 주어진 표적에 결합할 수 있고, 또한 치료 이익을 부여한다. 일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 소분자를 포함한다.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 적어도 50 kDa, 적어도 75 kDa, 적어도 100 kDa, 적어도 125 kDa, 적어도 150 kDa, 적어도 175 kDa, 적어도 200 kDa, 적어도 225 kDa, 적어도 250 kDa, 적어도 275 kDa, 또는 적어도 300 kDa의 분자량을 갖는다.
전형적으로, 표적화 모이어티는 EGFRvIII, 또는 그의 단편과 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 인간 EGFRvIII, 또는 그의 단편과 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 EGFRvIII와 특이적으로 결합할 수 있다 (예를 들어, wt EGFR과 비교적 거의 또는 전혀 결합을 나타내지 않으면서 EGFRvIII와 결합할 수 있다).
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 EGFRvIII의 세포외 영역, 예를 들어 EGFRvIII의 도메인 III (L2), EGFRvIII의 도메인 IV (CRII), EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 76 (서열식별번호: 119), EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 18 (서열식별번호: 125), 또는 EGFRvIII의 아미노산 잔기 15 내지 37 (서열식별번호: 6)에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 검출가능한 친화도로 야생형 EGFR에 결합하지 않는다. "검출가능한 친화도"는 일반적으로 KD, EC50, 또는 IC50 값에 의해 보고되는, 표적화 모이어티와 그의 표적 사이의 결합 능력이 최대 약 105 M 이하임을 의미한다. 105 M보다 높은 KD, EC50, 또는 IC50 값에 의해 보고되는 결합 친화도는 일반적으로 더 이상 통상적인 방법, 예컨대 ELISA 및 유동 세포측정법으로 측정가능하지 않으며, 따라서 비교적 중요하지 않다.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 EGFRvIII를 억제한다. "억제하다"는 표적화 모이어티가 EGFRvIII (예를 들어, 인간 EGFRvIII)의 하나 이상의 기능을 적어도 부분적으로 억제한다는 것을 의미한다. 일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 EGFRvIII의 신호전달 하류를 손상시켜, 예를 들어 EGFRvIII-양성 종양 세포의 성장을 억제한다. 일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 EGFRvIII에 대한 리간드 결합 및/또는 EGFRvIII의 수용체 이량체화를 차단한다.
일반적으로, 본 개시내용의 표적화 모이어티는 EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 76 (서열식별번호: 119)으로 이루어진 EGFRvIII 단편을 포함하는 펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 18 (서열식별번호: 125)에 결합할 수 있다. 일부 다른 실시양태에서, 표적화 모이어티는 EGFRvIII의 아미노산 잔기 15 내지 37 (서열식별번호: 6)에 결합할 수 있다.
본 개시내용에 의해 포괄되는 EGFRvIII 표적화 모이어티의 실시양태는, 예를 들어 하기를 포함한다:
- EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 18 (서열식별번호: 125)로 이루어진 EGFRvIII 단편을 포함하는 펩티드에 결합할 수 있는 EGFRvIII 표적화 모이어티;
- EGFRvIII의 아미노산 잔기 3 내지 18 (서열식별번호: 129)로 이루어진 EGFRvIII 단편을 포함하는 펩티드에 결합할 수 있는 EGFRvIII 표적화 모이어티;
- EGFRvIII의 아미노산 잔기 15 내지 37 (서열식별번호: 6)로 이루어진 EGFRvIII 단편을 포함하는 펩티드에 결합할 수 있는 EGFRvIII 표적화 모이어티; 또는
- EGFRvIII의 아미노산 잔기 19 내지 37 (서열식별번호: 142)로 이루어진 EGFRvIII 단편을 포함하는 펩티드에 결합할 수 있는 EGFRvIII 표적화 모이어티.
본 개시내용에 포함되는 일부 특정한 EGFRvIII 표적화 모이어티 (예를 들어, EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 결합을 위해 EGFRvIII의 아미노산 잔기 1-2의 존재를 필요로 하지 않는 것을 포괄한다. EGFRvIII의 아미노산 잔기 19-76 (서열식별번호: 138), 아미노산 잔기 19-62 (서열식별번호: 139), 아미노산 잔기 19-49 (서열식별번호: 140), 아미노산 잔기 19-45 (서열식별번호: 141), 아미노산 잔기 28-45 (서열식별번호: 143), 아미노산 잔기 28-37 (서열식별번호: 144), 아미노산 잔기 19-37 (서열식별번호: 142), 아미노산 잔기 3-45 (서열식별번호: 127), 아미노산 잔기 3-49 (서열식별번호: 126), 아미노산 잔기 3-37 (서열식별번호: 128), 아미노산 잔기 6-49 (서열식별번호: 130), 아미노산 잔기 6-45 (서열식별번호: 131), 아미노산 잔기 6-37 (서열식별번호: 132), 아미노산 잔기 10-49 (서열식별번호: 133), 아미노산 잔기 10-45 (서열식별번호: 134), 아미노산 잔기 10-37 (서열식별번호: 135), 아미노산 잔기 15-49 (서열식별번호: 136), 아미노산 잔기 15-45 (서열식별번호: 137), 또는 아미노산 잔기 15-37 (서열식별번호: 6) 중 하나 이상의 EGFRvIII 단편에 결합할 수 있는 EGFRvIII 표적화 모이어티 (예를 들어, EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편)가 특히 고려된다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공되고/거나 본 개시내용에 따라 사용된 EGFRvIII 표적화 모이어티 (예를 들어, EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 EGFRvIII의 아미노산 잔기 3 내지 37 (서열식별번호: 128)로 이루어진 EGFRvIII 단편, 예컨대 F260-5G6 (본원에서 또한 5G6으로 지칭됨), F263-1A8 (본원에서 또한 1A8로 지칭됨), F263-4B3 (본원에서 또한 4B3으로 지칭됨), F263-4E11 (본원에서 또한 4E11로 지칭됨), F263-5D8 (본원에서 또한 5D8로 지칭됨) 및 F265-9C9 (본원에서 또한 9C9로 지칭됨) 항체를 포함하는 펩티드에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 EGFRvIII 표적화 모이어티 (예를 들어, EGFRvIII 항체 또는 항원-결합 단편)는 EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 33 (서열식별번호: 124)으로 이루어진 EGFRvIII 단편을 포함하는 펩티드에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 출원의 EGFRvIII 표적화 모이어티 (예를 들어, EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 EGFRvIII (서열식별번호: 5)과 특이적으로 결합하고, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 EGFRvIII 단편과 결합할 수 있으며:
a. EGFRvIII의 아미노산 잔기 15 내지 37 (서열식별번호: 6)로 이루어진 단편;
b. EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 76 (서열식별번호: 119)으로 이루어진 단편;
c. EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 62 (서열식별번호: 120)로 이루어진 단편;
d. EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 49 (서열식별번호: 121)로 이루어진 단편;
e. EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 45 (서열식별번호: 122)로 이루어진 단편;
f. EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 37 (서열식별번호: 123)로 이루어진 단편;
g. EGFRvIII의 아미노산 잔기 3 내지 49 (서열식별번호: 126)로 이루어진 단편;
h. EGFRvIII의 아미노산 잔기 3 내지 45 (서열식별번호: 127)로 이루어진 단편;
i. EGFRvIII의 아미노산 잔기 3 내지 37 (서열식별번호: 128)로 이루어진 단편;
j. EGFRvIII의 아미노산 잔기 6 내지 49 (서열식별번호: 130)로 이루어진 단편;
k. EGFRvIII의 아미노산 잔기 6 내지 45 (서열식별번호: 131)로 이루어진 단편;
l. EGFRvIII의 아미노산 잔기 6 내지 37 (서열식별번호: 132)로 이루어진 단편;
m. EGFRvIII의 아미노산 잔기 10 내지 49 (서열식별번호: 133)로 이루어진 단편;
n. EGFRvIII의 아미노산 잔기 10 내지 45 (서열식별번호: 134)로 이루어진 단편;
o. EGFRvIII의 아미노산 잔기 10 내지 37 (서열식별번호: 135)로 이루어진 단편;
p. EGFRvIII의 아미노산 잔기 15 내지 49 (서열식별번호: 136)로 이루어진 단편;
q. EGFRvIII의 아미노산 잔기 15 내지 45 (서열식별번호: 137)로 이루어진 단편;
r. EGFRvIII의 아미노산 잔기 19 내지 76 (서열식별번호: 138)으로 이루어진 단편;
s. EGFRvIII의 아미노산 잔기 19 내지 62 (서열식별번호: 139)로 이루어진 단편;
t. EGFRvIII의 아미노산 잔기 19 내지 49 (서열식별번호: 140)로 이루어진 단편;
u. EGFRvIII의 아미노산 잔기 19 내지 45 (서열식별번호: 141)로 이루어진 단편;
v. EGFRvIII의 아미노산 잔기 19 내지 37 (서열식별번호: 142)로 이루어진 단편; 및
w. 상기 그의 단편의 임의의 조합,
여기서 EGFRvIII 표적화 모이어티는 서열식별번호: 149에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 그로 이루어진 펩티드에는 결합하지 못한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 표적화 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 서열식별번호: 145, 서열식별번호: 146, 서열식별번호: 147, 서열식별번호: 148, 서열식별번호: 150, 서열식별번호: 151, 서열식별번호: 152, 서열식별번호: 153, 서열식별번호: 155, 서열식별번호: 156, 서열식별번호: 157, 서열식별번호: 162, 서열식별번호: 164, 서열식별번호: 165, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 그로 이루어진 펩티드에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 서열식별번호: 160에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 펩티드에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, EGFRvIII (서열식별번호: 5)에 특이적으로 결합하고, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 EGFRvIII 단편에 결합할 수 있는 표적화 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편)가 본원에 제공되며:
a. EGFRvIII의 아미노산 잔기 15 내지 37 (서열식별번호: 6)로 이루어진 단편;
b. EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 76 (서열식별번호: 119)으로 이루어진 단편;
c. EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 49 (서열식별번호: 121)로 이루어진 단편;
d. EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 37 (서열식별번호: 123)로 이루어진 단편;
e. EGFRvIII의 아미노산 잔기 3 내지 37 (서열식별번호: 128)로 이루어진 단편; 및
f. 상기 그의 단편의 임의의 조합,
여기서 표적화 모이어티는 서열식별번호: 149에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 펩티드에는 결합하지 못한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 표적화 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 서열식별번호: 145, 서열식별번호: 146, 서열식별번호: 147, 서열식별번호: 151, 서열식별번호: 152, 서열식별번호: 153, 서열식별번호: 155, 서열식별번호: 156, 서열식별번호: 157, 서열식별번호: 158, 서열식별번호: 160, 서열식별번호: 161, 서열식별번호: 162, 서열식별번호: 164, 서열식별번호: 165, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 그로 이루어진 펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 표적화 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 서열식별번호: 154에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 표적화 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 서열식별번호: 159에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 펩티드에 결합할 수 있다.
일부 다른 실시양태에서, 제공된 표적화 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 EGFRvIII (서열식별번호: 5)에 특이적으로 결합하고, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 EGFRvIII 단편에 결합할 수 있다:
a. EGFRvIII의 아미노산 잔기 15 내지 37 (서열식별번호: 6)로 이루어진 단편;
b. EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 76 (서열식별번호: 119)으로 이루어진 단편;
c. EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 62 (서열식별번호: 120)로 이루어진 단편;
d. EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 49 (서열식별번호: 121)로 이루어진 단편;
e. EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 45 (서열식별번호: 122)로 이루어진 단편;
f. EGFRvIII의 아미노산 잔기 1 내지 37 (서열식별번호: 123)로 이루어진 단편;
g. EGFRvIII의 아미노산 잔기 3 내지 49 (서열식별번호: 126)로 이루어진 단편;
h. EGFRvIII의 아미노산 잔기 3 내지 45 (서열식별번호: 127)로 이루어진 단편;
i. EGFRvIII의 아미노산 잔기 3 내지 37 (서열식별번호: 128)로 이루어진 단편;
j. EGFRvIII의 아미노산 잔기 6 내지 49 (서열식별번호: 130)로 이루어진 단편;
k. EGFRvIII의 아미노산 잔기 6 내지 45 (서열식별번호: 131)로 이루어진 단편;
l. EGFRvIII의 아미노산 잔기 6 내지 37 (서열식별번호: 132)로 이루어진 단편;
m. EGFRvIII의 아미노산 잔기 10 내지 49 (서열식별번호: 133)로 이루어진 단편;
n. EGFRvIII의 아미노산 잔기 10 내지 45 (서열식별번호: 134)로 이루어진 단편;
o. EGFRvIII의 아미노산 잔기 10 내지 37 (서열식별번호: 135)로 이루어진 단편;
p. EGFRvIII의 아미노산 잔기 15 내지 49 (서열식별번호: 136)로 이루어진 단편;
q. EGFRvIII의 아미노산 잔기 15 내지 45 (서열식별번호: 137)로 이루어진 단편; 및
r. 상기 그의 단편의 임의의 조합.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 하기에 결합할 수 있다:
a. EGFRvIII의 아미노산 잔기 19 내지 49 (서열식별번호: 140)로 이루어진 단편;
b. EGFRvIII의 아미노산 잔기 19 내지 37 (서열식별번호: 142)로 이루어진 단편;
c. EGFRvIII의 아미노산 잔기 28 내지 45 (서열식별번호: 143)로 이루어진 단편;
d. EGFRvIII의 아미노산 잔기 28 내지 37 (서열식별번호: 144)로 이루어진 단편;
또는 상기 그의 단편의 임의의 조합.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 서열식별번호: 145, 서열식별번호: 147, 서열식별번호: 148, 서열식별번호: 150, 서열식별번호: 151, 서열식별번호: 152, 서열식별번호: 153, 서열식별번호: 155, 서열식별번호: 156, 서열식별번호: 157, 서열식별번호: 165, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 그로 이루어진 펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 표적화 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 서열식별번호: 149에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 펩티드에 결합할 수 있다.
또한, 상기 펩티드 내의 아미노산 잔기 Cys20을 포함하거나 또는 이를 수반하는 에피토프에 결합할 수 있는 EGFRvIII 표적화 모이어티 (예를 들어, EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편)가 제공된다. 이들은, 예를 들어 EGFRvIII 및/또는 서열식별번호: 6에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 EGFRvIII 단편을 포함하는 펩티드에 결합하지만, 아미노산 서열 SCVRAAGADSYEMEEDGVRKCKK (서열식별번호: 149)를 포함하거나 그로 이루어진 펩티드에는 결합할 수 없는 EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 이러한 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 예를 들어 4B3, 5D8, 및 4E11 항체를 포괄한다.
또한, 상기 펩티드 내의 아미노산 잔기 Cys35를 포함하거나 또는 이를 수반하는 에피토프에 결합할 수 있는 EGFRvIII 표적화 모이어티 (예를 들어, EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편)가 본 개시내용에 의해 구체적으로 포괄된다. 이들은, 예를 들어 EGFRvIII 및/또는 서열식별번호: 6에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 EGFRvIII 단편을 포함하는 펩티드에 결합하지만, 아미노산 서열 SCVRACGADSYEMEEDGVRKAKK (서열식별번호: 163)를 포함하거나 그로 이루어진 펩티드에는 결합할 수 없는 EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 이러한 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 예를 들어 4B3, 5D8, 9C9 및 4E11 항체를 포괄한다.
상기 펩티드 내의 아미노산 잔기 Cys20 및 Cys35를 포함하거나 또는 이를 수반하는 펩티드 내의 에피토프에 결합할 수 있는 EGFRvIII 표적화 모이어티 (예를 들어, EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편)가 본 개시내용에 의해 추가로 포괄된다. 이들은, 예를 들어 EGFRvIII 및/또는 서열식별번호: 6에 제시된 EGFRvIII 단편을 포함하거나 또는 그로 이루어진 펩티드에 결합하지만, SCVRAAGADSYEMEEDGVRKCKK (서열식별번호: 149) 또는 SCVRACGADSYEMEEDGVRKAKK (서열식별번호: 163)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 펩티드에는 결합할 수 없는 EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 이러한 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, 예를 들어 4B3, 5D8 및 4E11 항체를 포괄한다.
일부 실시양태에서, 아미노산 잔기 Cys20 및/또는 Cys35 이외에도, 본 개시내용의 EGFRvIII 표적화 모이어티 (예를 들어, EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편)와 결합하거나 또는 그의 결합에 관여하는 에피토프는 아미노산 잔기 Glu26, Asp30, Gly31, 및/또는 Arg33을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 Asp23 및/또는 Val32를 추가로 포함할 수 있다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 EGFRvIII 표적화 모이어티 (예를 들어, EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 하기를 포함하거나 또는 이를 수반하는 에피토프와 결합한다:
- Cys20, Glu26, Asp30, Gly31, Arg33, 및 Cys35; 또는
- Cys20, Asp23, Glu26, Asp30, Gly31, Val32, Arg33, 및 Cys35.
일부 실시양태에서, 아미노산 잔기 Cys20 및/또는 Cys35 이외에도, EGFRvIII 표적화 모이어티 (예를 들어, EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편)와 결합하거나 또는 그의 결합에 관여하는 에피토프는 Arg18 및/또는 Gly21을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 Glu26 및/또는 Gly31을 추가로 포함할 수 있다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 EGFRvIII 표적화 모이어티 (예를 들어, EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 하기를 포함하거나 또는 이를 수반하는 에피토프와 결합한다:
- Arg18, Cys20, Gly21 및 Cys35; 또는
- Arg18, Cys20, Gly21, Glu26, Gly31 및 Cys35.
일부 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 EGFRvIII 표적화 모이어티 (예를 들어, EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 하기를 포함하거나 또는 이를 수반하는 에피토프에 결합한다:
- Cys16, Glu26, Gly31, Val32, Arg33, Lys34, Cys35 및 Lys36; 또는
- Cys16, Cys20, Glu26, Asp30, Gly31, Val32, Arg33, Lys34, Cys35 및 Lys36.
항체 및 항원-결합 모이어티
항체는 전형적으로 디술피드 결합에 의해 함께 연결된 2개의 동일한 경쇄 폴리펩티드 및 2개의 동일한 중쇄 폴리펩티드 쇄를 포함한다. 각 쇄의 아미노 말단에 위치한 첫 번째 도메인은 아미노산 서열이 가변적이며, 그에 따라 각 개별 항체의 항체-결합 특이성을 제공한다. 이들은 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄 (VL) 영역으로 공지되어 있다. 각각의 쇄의 나머지 도메인은 아미노산 서열이 비교적 불변이고, 불변 중쇄 (CH) 및 불변 경쇄 (CL) 영역으로 공지되어 있다. 경쇄는 전형적으로 1개의 가변 영역 (VL) 및 1개의 불변 영역 (CL)을 포함한다. IgG 중쇄는 가변 영역 (VH), 제1 불변 영역 (CH1), 힌지 영역, 제2 불변 영역 (CH2) 및 제3 불변 영역 (CH3)을 포함한다. IgE 및 IgM 항체에서, 중쇄는 추가의 불변 영역 (CH4)을 포함한다.
본 개시내용에 사용하기에 적합한 항체는, 예를 들어 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 낙타류 항체, 키메라 항체, 단일쇄 Fv (scFv), 디술피드-연결된 Fv (sdFv), 및 항-이디오타입 (항-Id) 항체, 및 상기 중 임의의 것의 항원-결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간화된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 키메라이다. 항체는 임의의 유형 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 부류 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위부류의 것일 수 있다.
본원에 사용된 용어 항체의 "항원 결합 단편"은 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 1개 이상의 단편을 지칭한다. 용어 항체의 "항원 결합 단편" 내에 포괄되는 결합 단편의 예는 Fab 단편, F(ab')2 단편, Fd 단편, Fv 단편, scFv 단편, dAb 단편 (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), 및 단리된 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함한다. 일부 실시양태에서, "항원 결합 단편"은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 이들 항체 단편은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술을 사용하여 수득될 수 있고, 단편은 무손상 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝될 수 있다.
본원에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편은 항체의 합성을 위해 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 생산될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods 182:41-50]; WO 92/22324; WO 98/46645 참조). 키메라 항체는 예를 들어 문헌 [Morrison, 1985, Science 229:1202]에 기재된 방법을 이용하여 생산할 수 있고, 인간화 항체는 예를 들어 미국 특허 번호 6,180,370에 기재된 방법에 의해 생산할 수 있다.
본원에 기재된 추가의 항체는 예를 들어 문헌 [Segal et al., J. Immunol. Methods 248:1-6 (2001); and Tutt et al., J. Immunol. 147: 60 (1991)]에 기재된 바와 같은 이중특이적 항체 및 다가 항체, 또는 본원에 기재된 임의의 분자이다.
"아비머"는, 예를 들어 시험관내 엑손 셔플링 및 파지 디스플레이를 사용하여 조작된 다량체 결합 단백질 또는 펩티드에 관한 것이다. 다중 결합 도메인이 연결되어, 단일 에피토프 이뮤노글로빈 도메인에 비해 더 큰 친화도 및 특이성을 초래한다.
"나노바디"는 단일 단량체 가변 항체 도메인으로 이루어진 항체 단편이다. 나노바디는 또한 단일-도메인 항체로 지칭될 수 있다. 항체와 같이, 나노바디는 특이적 항원에 선택적으로 결합할 수 있다. 나노바디는 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 도메인일 수 있다. 나노바디는 자연적으로 발생할 수 있거나 또는 생물학적 조작의 생성물일 수 있다. 나노바디는 부위-지정 돌연변이유발 또는 돌연변이유발 스크리닝 (예를 들어, 파지 디스플레이, 효모 디스플레이, 박테리아 디스플레이, mRNA 디스플레이, 리보솜 디스플레이)에 의해 생물학적으로 조작될 수 있다. "아피바디"는 특이적 항원에 결합하도록 조작된 폴리펩티드 또는 단백질이다. 따라서, 아피바디는 항체의 특정 기능을 모방하는 것으로 간주될 수 있다.
아피바디는 스타필로코쿠스 단백질 A의 이뮤노글로불린-결합 영역 내의 B-도메인의 조작된 변이체일 수 있다. 아피바디는 Fab 영역에 대해 보다 낮은 친화도를 갖는 B-도메인인 Z-도메인의 조작된 변이체일 수 있다. 아피바디는 부위-지정 돌연변이유발 또는 돌연변이유발 스크리닝 (예를 들어, 파지 디스플레이, 효모 디스플레이, 박테리아 디스플레이, mRNA 디스플레이, 리보솜 디스플레이)에 의해 생물학적으로 조작될 수 있다.
다양한 상이한 단백질 (예를 들어 인슐린, 피브리노겐, 트랜스페린, 종양 괴사 인자-α, IL-8, gp120, CD28, 인간 혈청 알부민, IgA, IgE, IgM, HER2 및 EGFR)에 대한 특이적 결합을 나타내는 아피바디 분자가 생성되었으며, 이는 μM 내지 pM 범위의 친화도 (Kd)를 나타낸다. "디아바디"는 2가 또는 이중특이적일 수 있는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 예를 들어, 문헌 [Hudson et al., (2003)]을 참조한다. 단일쇄 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 항체 단편은 무손상 항체의 단백질분해적 소화 뿐만 아니라 본원에 기재된 바와 같은 재조합 숙주 (예를 들어, 이. 콜라이 또는 파지)에 의한 생산을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 다중특이적, 예를 들어 이중특이적이다. 다중특이적 항체 (또는 그의 항원-결합 단편)는 적어도 2개의 상이한 부위에 대한 결합 특이성을 갖는 모노클로날 항체 (또는 그의 항원-결합 단편)를 포함한다.
EGFRvIII와 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 WO2020191485A1 (이는 그 전문이 참조로 포함된다)에 기재된 EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편일 수 있다.
일부 실시양태에서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 본원에 제공된다:
4E11 항체의 CDRL1 (서열식별번호: 38), CDRL2 (서열식별번호: 39), CDRL3 (서열식별번호: 40), CDRH1 (서열식별번호: 43), CDRH2 (서열식별번호: 44) 및 CDRH3 (서열식별번호: 45)을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
5G6 항체의 CDRL1 (서열식별번호: 8), CDRL2 (서열식별번호: 9), CDR L3 (서열식별번호: 10), CDRH1 (서열식별번호: 13), CDRH2 (서열식별번호: 14) 및 CDRH3 (서열식별번호: 15)을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
1A8 항체의 CDRL1 (서열식별번호: 18), CDRL2 (서열식별번호: 19), CDRL3 (서열식별번호: 20), CDRH1 (서열식별번호: 23), CDRH2 (서열식별번호: 24) 및 CDRH3 (서열식별번호: 25)을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
4B3 항체의 CDRL1 (서열식별번호: 28), CDRL2 (서열식별번호: 29), CDRL3 (서열식별번호: 30), CDRH1 (서열식별번호: 33), CDRH2 (서열식별번호: 34) 및 CDRH3 (서열식별번호: 35)을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
5D8 항체의 CDRL1 (서열식별번호: 48), CDRL2 (서열식별번호: 49), CDRL3 (서열식별번호: 50), CDRH1 (서열식별번호: 53), CDRH2 (서열식별번호: 54) 및 CDRH3 (서열식별번호: 55)을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
9C9 항체의 CDRL1 (서열식별번호: 58), CDRL2 (서열식별번호: 59), CDRL3 (서열식별번호: 60), CDRH1 (서열식별번호: 63), CDRH2 (서열식별번호: 64), CDRH3 (서열식별번호: 65)을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편; 및
F266-11B1 (본원에서 11B1로 지칭됨), F266-11C8 (본원에서 11C8로 지칭됨), F266-11H5 (본원에서 11H5로 지칭됨) 및/또는 F266-11H3 (본원에서 11H3으로 지칭됨) 항체의 CDRL1 (서열식별번호: 68 또는 73), CDRL2 (서열식별번호: 69 또는 74), CDRL3 (서열식별번호: 70 또는 75), CDRH1 (서열식별번호: 78), CDRH2 (서열식별번호: 79) 및 CDRH3 (서열식별번호: 80)을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 4E11 항체의 CDR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 5G6 항체의 CDR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 1A8 항체의 CDR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 4B3 항체의 CDR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 5D8 항체의 CDR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 9C9 항체의 CDR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 11B1 또는 11C8 항체의 CDR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다:
CDRL1 (서열식별번호: 8), CDRL2 (서열식별번호: 9), CDRL3 (서열식별번호: 10), CDRH1 (서열식별번호: 13), CDRH2 (서열식별번호: 14), CDRH3 (서열식별번호: 15)으로 이루어진 CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
CDRL1 (서열식별번호: 18), CDRL2 (서열식별번호: 19), CDRL3 (서열식별번호: 20), CDRH1 (서열식별번호: 23), CDRH2 (서열식별번호: 24), CDRH3 (서열식별번호: 25)으로 이루어진 CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
CDRL1 (서열식별번호: 28), CDRL2 (서열식별번호: 29), CDRL3 (서열식별번호: 30), CDRH1 (서열식별번호: 33), CDRH2 (서열식별번호: 34), CDRH3 (서열식별번호: 35)으로 이루어진 CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
CDRL1 (서열식별번호: 38), CDRL2 (서열식별번호: 39), CDRL3 (서열식별번호: 40), CDRH1 (서열식별번호: 43), CDRH2 (서열식별번호: 44), CDRH3 (서열식별번호: 45)으로 이루어진 CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
CDRL1 (서열식별번호: 48), CDRL2 (서열식별번호: 49), CDRL3 (서열식별번호: 50), CDRH1 (서열식별번호: 53), CDRH2 (서열식별번호: 54), CDRH3 (서열식별번호: 55)으로 이루어진 CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
CDRL1 (서열식별번호: 58), CDRL2 (서열식별번호: 59), CDRL3 (서열식별번호: 60), CDRH1 (서열식별번호: 63), CDRH2 (서열식별번호: 64), CDRH3 (서열식별번호: 65)으로 이루어진 CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
CDRL1 (서열식별번호: 68), CDRL2 (서열식별번호: 69), CDRL3 (서열식별번호: 70), CDRH1 (서열식별번호: 78), CDRH2 (서열식별번호: 79), CDRH3 (서열식별번호: 80)으로 이루어진 CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 단편; 및
CDRL1 (서열식별번호: 73), CDRL2 (서열식별번호: 74), CDRL3 (서열식별번호: 75), CDRH1 (서열식별번호: 78), CDRH2 (서열식별번호: 79), CDRH3 (서열식별번호: 80)으로 이루어진 CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 EGFRvIII와 특이적으로 결합하고, 예를 들어 하기를 포함할 수 있는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다:
서열식별번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 10에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 13에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 14에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 15에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역;
서열식별번호: 18에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 19에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 23에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 25에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역;
서열식별번호: 28에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 29에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 30에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 33에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 34에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 35에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역;
서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 39에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 40에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 43에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 44에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 45에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역;
서열식별번호: 48에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 49에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 50에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 53에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 54에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 55에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역;
서열식별번호: 58에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 59에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 60에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 63에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 64에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 65에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역;
서열식별번호: 68에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 69에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 70에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 78에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 79에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 80에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역; 또는
서열식별번호: 73에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 74에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 75에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 78에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 79에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 80에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 EGFRvIII와 특이적으로 결합하고, 하기를 포함할 수 있는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다:
서열식별번호: 118에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 118과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역 및/또는 서열식별번호: 116에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 116과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역;
서열식별번호: 115에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 115와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 116에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 116과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역; 또는
서열식별번호: 118에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 118과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 62에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 62와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역.
특정 실시양태에서, 서열식별번호: 115 또는 서열식별번호: 118에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄를 갖는 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 각각 서열식별번호: 115 또는 서열식별번호: 118의 것과 동일한 CDR을 가질 수 있다.
특정 실시양태에서, 서열식별번호: 62 또는 서열식별번호: 116에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄를 갖는 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 각각 서열식별번호: 62 또는 서열식별번호: 116의 것과 동일한 CDR을 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 EGFRvIII와 특이적으로 결합하고, 하기를 포함할 수 있는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다:
서열식별번호: 7에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 7과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 12에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 12와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역;
서열식별번호: 17에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 17과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 22에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 22와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역;
서열식별번호: 27에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 27과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 32에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 32와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역;
서열식별번호: 37에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일하거나 서열식별번호: 37과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 42에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일하거나 서열식별번호: 42와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역;
서열식별번호: 47에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일하거나 서열식별번호: 47과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 52에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일하거나 서열식별번호: 52와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역;
서열식별번호: 57에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 57과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 62에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 62와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역;
서열식별번호: 67에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 67과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 77에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 77과 실질적으로 동일한 아미노산 서열, 서열식별번호: 92에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 92와 실질적으로 동일한 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 102에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 서열식별번호: 102와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역; 또는
서열식별번호: 72에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 서열식별번호: 72와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 77에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 서열식별번호: 77과 실질적으로 동일한 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 92에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 서열식별번호: 92와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역.
다양한 실시양태에서, 주어진 항체와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역, 경쇄, 중쇄 가변 영역 또는 중쇄는 그 항체와 동일한 CDR을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용에 제공된 항체 및 항원-결합 단편의 VL 및 VH 서열은 본원에 제공된 VL 및 VH 서열과 실질적으로 동일한 서열을 포함할 수 있거나, 또는 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 서열 변이는 바람직하게는 제공된 VL 및 VH 서열의 CDR 외부에 있다.
추가 실시양태에서, 본 개시내용은 EGFRvIII에 특이적으로 결합하고, 하기를 포함할 수 있는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다:
서열식별번호: 108에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 108과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 및 서열식별번호: 107에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 107과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄; 또는
서열식별번호: 110에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 110과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 및 서열식별번호: 109에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 서열식별번호: 109와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기를 포함할 수 있는 항-EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다:
서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 39에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 40에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3, 서열식별번호: 43에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 44에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 45에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3;
서열식별번호: 37에 제시된 아미노산 서열과 동일하거나 또는 그와 적어도 80% 동일하거나, 적어도 85% 동일하거나, 적어도 90% 동일하거나, 적어도 92% 동일하거나, 적어도 94% 동일하거나, 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 42에 제시된 아미노산 서열과 동일하거나 또는 그와 적어도 80% 동일하거나, 적어도 85% 동일하거나, 적어도 90% 동일하거나, 적어도 92% 동일하거나, 적어도 94% 동일하거나, 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역; 또는
서열식별번호: 108에 제시된 아미노산 서열과 동일하거나 또는 그와 적어도 80% 동일하거나, 적어도 85% 동일하거나, 적어도 90% 동일하거나, 적어도 92% 동일하거나, 적어도 94% 동일하거나, 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 경쇄 및 서열식별번호: 107에 제시된 아미노산 서열과 동일하거나 또는 그와 적어도 80% 동일하거나, 적어도 85% 동일하거나, 적어도 90% 동일하거나, 적어도 92% 동일하거나, 적어도 94% 동일하거나, 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있는 중쇄.
본 개시내용에 따르면, 상기 제시된 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 38, 39, 40, 43, 44 및 45에 제시된 것과 동일하거나 실질적으로 동일한 CDR을 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 또한, N-말단에 신호 서열 MVLQTQVFISLLLWISGAYG (서열식별번호: 113)를 포함하는 경쇄 서열, 및 N-말단에 신호 서열 MDWTWRILFLVAAATGTHA (서열식별번호: 114)를 포함하는 중쇄 서열을 포함하는 EGFRvIII 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 180, 181 및 182에 제시된 각각의 경쇄 서열은 N-말단에 신호 서열 MVLQTQVFISLLLWISGAYG (서열식별번호: 113)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 183, 184 및 185에 제시된 각각의 중쇄 서열은 N-말단에 신호 서열 MDWTWRILFLVAAATGTHA (서열식별번호: 114)를 포함한다.
본 개시내용에 따르면, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은, 예를 들어, EGFRvIII에 대해 100 nM 미만의 친화도, 예컨대 EGFRvIII에 대해 50 nM 이하, 20 nM 이하, 10 nM 이하, 또는 5 nM 이하의 친화도를 가질 수 있다.
본 개시내용의 예시적인 실시양태는 인간 IgG 불변 영역을 포함할 수 있는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 본 개시내용의 항체 또는 항원-결합 단편은, 예를 들어 및 비제한적으로, 인간 IgG1 불변 영역 또는 인간 IgG2 불변 영역 또는 인간 IgG4 불변 영역, 또는 그의 돌연변이 변이체를 포함할 수 있다.
예시적인 실시양태에서, 본원에 개시된 항원-결합제는 인간화 프레임워크 영역을 포함할 수 있다.
본 개시내용에 따르면, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 인간 항체, 단일 쇄 항체, 또는 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체)일 수 있다.
본 개시내용의 이중특이적 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 제1 인간 EGFRvIII 에피토프에 특이적으로 결합하는 제1 표적화 모이어티 및 제2 (비-중첩) 인간 EGFRvIII 에피토프에 특이적으로 결합하는 제2 표적화 모이어티를 포함할 수 있는 것 (예를 들어, 이중파라토프성 항체)을 포함한다.
본 개시내용의 이중특이적 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 추가의 실시양태는 제1 인간 EGFRvIII 에피토프와 특이적으로 결합하는 제1 표적화 모이어티 및 또 다른 항원과 특이적으로 결합하는 제2 표적화 모이어티를 포함할 수 있는 것을 포함한다.
본 개시내용의 이중특이적 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 이중특이적 면역 세포 연관체, 예컨대 인간 EGFRvIII에 특이적으로 결합하는 제1 표적화 모이어티 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 표적화 모이어티를 포함하는 것들을 포함한다.
본 개시내용에 따라서, EGFRvIII 항체의 항원-결합 단편은, 예를 들어 scFv, Fab, Fab' 또는 (Fab')2를 포함할 수 있다.
폴리펩티드
폴리펩티드는, 예를 들어 임의의 다양한 혈액 작용제 (예를 들어, 에리트로포이에틴, 혈액-응고 인자 등 포함), 인터페론, 콜로니 자극 인자, 항체, 효소 및 호르몬을 포함한다. 특정한 폴리펩티드의 정체는 본 개시내용을 제한하는 것으로 의도되지 않고, 임의의 관심 폴리펩티드가 본 방법에서 폴리펩티드일 수 있다.
본원에 기재된 참조 폴리펩티드는 관심 표적에 결합할 수 있는 (예를 들어, 항원, 예를 들어 EGFRvIII에 결합할 수 있는) 표적-결합 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드, 예컨대 항체는 막횡단 폴리펩티드 (예를 들어, 수용체) 또는 리간드 (예를 들어, 성장 인자)에 결합할 수 있다.
변형된 폴리펩티드
본 개시내용의 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 폴리펩티드는 변형된 아미노산 서열을 가질 수 있다. 변형된 폴리펩티드는 상응하는 참조 폴리펩티드와 실질적으로 동일할 수 있다 (예를 들어, 변형된 폴리펩티드의 아미노산 서열은 참조 폴리펩티드의 아미노산 서열과 적어도 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 가질 수 있음). 특정 실시양태에서, 변형은 목적하는 생물학적 활성 (예를 들어, EGFRvIII과의 결합)을 유의하게 파괴하지 않는다. 변형은 원래 폴리펩티드의 생물학적 활성을 감소시킬 수 있거나 (예를 들어, 적어도 5%, 10%, 20%, 25%, 35%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 또는 95%만큼), 효과를 갖지 않을 수 있거나, 또는 증가시킬 수 있다 (예를 들어, 적어도 5%, 10%, 25%, 50%, 100%, 200%, 500%, 또는 1000%만큼). 변형된 폴리펩티드는 폴리펩티드의 특징, 예컨대 생체내 안정성, 생체이용률, 독성, 면역학적 활성, 면역학적 동일성 및 접합 특성을 가질 수 있거나 또는 그를 최적화할 수 있다.
변형은 자연 과정, 예컨대 번역후 프로세싱에 의한 것, 또는 관련 기술분야에 공지된 화학적 변형 기술에 의한 것을 포함한다. 변형은 폴리펩티드 백본, 아미노산 측쇄 및 아미노- 또는 카르복시-말단을 포함하는 폴리펩티드 내의 임의의 위치에서 발생할 수 있다. 동일한 유형의 변형은 주어진 폴리펩티드 내의 여러 부위에서 동일하거나 다양한 정도로 존재할 수 있고, 폴리펩티드는 1종 초과의 유형의 변형을 함유할 수 있다. 폴리펩티드는 유비퀴틴화의 결과로서 분지화될 수 있고, 이들은 분지를 갖거나 갖지 않는 시클릭일 수 있다. 시클릭, 분지형 및 분지형 시클릭 폴리펩티드는 번역후 자연 과정으로부터 생성될 수 있거나 또는 합성적으로 제조될 수 있다. 다른 변형은 PEG화, 아세틸화, 아실화, 아세트아미도메틸 (Acm) 기의 부가, ADP-리보실화, 알킬화, 아미드화, 비오티닐화, 카르바모일화, 카르복시에틸화, 에스테르화, 플라빈에 대한 공유 부착, 헴 모이어티에 대한 공유 부착, 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유도체의 공유 부착, 약물의 공유 부착, 마커 (예를 들어, 형광 또는 방사성)의 공유 부착, 지질 또는 지질 유도체의 공유 부착, 포스파티딜이노시톨의 공유 부착, 가교, 고리화, 디술피드 결합 형성, 탈메틸화, 공유 가교의 형성, 시스틴의 형성, 피로글루타메이트의 형성, 포르밀화, 감마-카르복실화, 글리코실화, GPI 앵커 형성, 히드록실화, 아이오딘화, 메틸화, 미리스토일화, 산화, 단백질분해 프로세싱, 인산화, 프레닐화, 라세미화, 셀레노일화, 황산화, 단백질에 대한 아미노산의 전달-RNA 매개 부가, 예컨대 아르기닐화 및 유비퀴틴화를 포함한다.
변형된 폴리펩티드는 또한 폴리펩티드 서열 내에 보존적 또는 비-보존적 (예를 들어, D-아미노산, 데스아미노산) 아미노산 삽입, 결실 또는 치환을 포함할 수 있다 (예를 들어, 이러한 변화가 폴리펩티드의 생물학적 활성을 실질적으로 변경시키지 않는 경우). 특히, 본원의 폴리펩티드의 아미노 또는 카르복시-말단에 대한 1개 이상의 시스테인 잔기의 부가는, 예를 들어 디술피드 결합에 의한 이들 폴리펩티드의 접합을 용이하게 할 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드는 아미노-말단에 단일 시스테인 잔기 또는 카르복시-말단에 단일 시스테인 잔기를 포함하도록 변형될 수 있다. 아미노산 치환은 보존적 (즉, 여기서 잔기는 동일한 일반적 유형 또는 군의 또 다른 것에 의해 대체됨) 또는 비-보존적 (즉, 여기서 잔기는 또 다른 유형의 아미노산에 의해 대체됨)일 수 있다. 또한, 비-자연 발생 아미노산에 대해 자연 발생 아미노산이 치환될 수 있다 (즉, 비-자연 발생 보존적 아미노산 치환 또는 비-자연 발생 비-보존적 아미노산 치환).
합성적으로 제조된 폴리펩티드는 DNA에 의해 자연적으로 코딩되지 않는 아미노산 (예를 들어, 비-자연 발생 또는 비천연 아미노산)의 치환을 포함할 수 있다. 비-자연 발생 아미노산의 예는 D-아미노산, N-보호된 아미노산, 시스테인의 황 원자에 부착된 아세틸아미노메틸 기를 갖는 아미노산, PEG화 아미노산, 화학식 NH2(CH2)nCOOH (여기서, n은 2-6임)의 오메가 아미노산, 중성 비극성 아미노산, 예컨대 사르코신, t-부틸 알라닌, t-부틸 글리신, N-메틸 이소류신 및 노르류신을 포함한다. 페닐글리신은 Trp, Tyr, 또는 Phe를 대체할 수 있고; 시트룰린 및 메티오닌 술폭시드는 중성 비극성이고, 시스테산은 산성이고, 오르니틴은 염기성이다. 프롤린은 히드록시프롤린으로 치환될 수 있고, 입체형태 부여 특성을 보유할 수 있다.
유사체는 치환 돌연변이유발에 의해 생성될 수 있고, 원래 폴리펩티드의 생물학적 활성을 보유할 수 있다. "보존적 치환"으로서 확인된 치환의 예는 표 1에 제시된다. 이러한 치환이 바람직하지 않은 변화를 유발하는 경우에, 표 1에 "예시적인 치환"으로 명명되거나 또는 아미노산 부류와 관련하여 본원에 추가로 기재된 바와 같은 다른 유형의 치환이 도입되고, 생성물이 스크리닝된다.
표 1. 아미노산 치환
Figure pct00015
기능적 또는 면역학적 동일성의 실질적인 변형은 (a) 예를 들어 시트 또는 나선 입체형태로서의 치환 영역 내의 폴리펩티드 백본의 구조, (b) 표적 부위에서의 분자의 전하 또는 소수성, 및/또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지하는 것에 대한 그의 효과가 유의하게 상이한 치환을 선택함으로써 달성된다.
킬레이트화 모이어티 또는 그의 금속 착물
킬레이트화 모이어티
적합한 킬레이트화 모이어티의 예는 DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산), DOTMA (1R,4R,7R,10R)-α, α', α", α'"-테트라메틸-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산, DOTAM (1,4,7,10-테트라키스(카르바모일메틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸), DOTPA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라 프로피온산), DO3AM-아세트산 (2-(4,7,10-트리스(2-아미노-2-옥소에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1-일)아세트산), DOTA-GA 무수물 (2,2',2"-(10-(2,6-디옥소테트라히드로-2H-피란-3-일)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-트리일)트리아세트산, DOTP (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라(메틸렌 포스폰산)), DOTMP (1,4,6,10-테트라아자시클로데칸-1,4,7,10-테트라메틸렌 포스폰산, DOTA-4AMP (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라키스(아세트아미도-메틸렌포스폰산), CB-TE2A (1,4,8,11-테트라아자비시클로[6.6.2]헥사데칸-4,11-디아세트산), NOTA (1,4,7-트리아자시클로노난-1,4,7-트리아세트산), NOTP (1,4,7-트리아자시클로노난-1,4,7-트리(메틸렌 포스폰산), TETPA (1,4,8,11-테트라아자시클로테트라데칸-1,4,8,11-테트라프로피온산), TETA (1,4,8,11-테트라아자시클로테트라데칸-1,4,8,11-테트라 아세트산), HEHA (1,4,7,10,13,16-헥사아자시클로헥사데칸-1,4,7,10,13,16-헥사아세트산), PEPA (1,4,7,10,13-펜타아자시클로펜타데칸-N,N',N",N"',N""-펜타아세트산), H4옥타파 (N,N'-비스(6-카르복시-2-피리딜메틸)-에틸렌디아민-N,N'-디아세트산), H2데드파 (1,2-[[6-(카르복시)-피리딘-2-일]-메틸아미노]에탄), H6포스파 (N,N'-(메틸렌포스포네이트)-N,N'-[6-(메톡시카르보닐)피리딘-2-일]-메틸-1,2-디아미노에탄), TTHA (트리에틸렌테트라민-N,N,N',N",N"',N"'-헥사아세트산), DO2P (테트라아자시클로도데칸 디메탄포스폰산), HP-DO3A (히드록시프로필테트라아자시클로도데칸트리아세트산), EDTA (에틸렌디아민테트라아세트산), 데페록사민, DTPA (디에틸렌트리아민펜타아세트산), DTPA-BMA (디에틸렌트리아민펜타아세트산-비스메틸아미드), 옥타덴테이트-HOPO (옥타덴테이트 히드록시피리디논) 또는 포르피린을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
바람직하게는, 킬레이트화 모이어티는 DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산), DOTMA (1R,4R,7R,10R)-α, α', α", α'"-테트라메틸-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산, DOTAM (1,4,7,10-테트라키스(카르바모일메틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸), DO3AM-아세트산 (2-(4,7,10-트리스(2-아미노-2-옥소에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1-일)아세트산), DOTP (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라(메틸렌 포스폰산)), DOTA-4AMP (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라키스(아세트아미도-메틸렌포스폰산), NOTA (1,4,7-트리아자시클로노난-1,4,7-트리아세트산), 및 HP-DO3A (10-(2-히드록시프로필)-1,4,7-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-트리아세트산)로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 킬레이트화 모이어티는 DOTA이다.
일부 실시양태에서, 화합물은 킬레이트화 모이어티의 금속 착물을 포함한다. 예를 들어, 킬레이트화 기는 금속, 예컨대 망가니즈, 철 및 가돌리늄 및 동위원소 (예를 들어, 60 내지 10,000 keV의 일반적 에너지 범위의 동위원소), 예컨대 본원에 논의된 임의의 방사성동위원소 및 방사성핵종과의 금속 킬레이트 조합에 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 킬레이트화 모이어티는 검출제로서 유용하고, 따라서 이러한 검출가능한 킬레이트화 모이어티를 포함하는 화합물은 진단제 또는 치료진단제로서 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 가변기 A는 1개 이상의 헤테로아릴 기를 포함하는 마크로시클릭 킬레이트화 모이어티 (예를 들어, 6-원 질소-함유 헤테로아릴)이다. 이러한 마크로시클릭 킬레이트화 모이어티의 예는 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다:
Figure pct00016
.
방사성동위원소 및 방사성핵종
일부 실시양태에서, 금속 착물은 방사성핵종을 포함한다. 적합한 방사성동위원소 및 방사성핵종의 예는 3H, 14C, 15N, 18F, 35S, 43Sc, 44Sc, 47Sc, 55Co, 60Cu, 61Cu, 62Cu, 64Cu, 66Ga, 67Ga, 67Cu, 68Ga, 75Br, 76Br , 77Br , 82Rb, 89Zr, 86Y, 87Y, 90Y, 97Ru, 99Tc, 99mTc, 105Rh, 109Pd, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 133La, 134Ce, 149Pm, 149Tb, 153Sm, 166Ho, 177Lu, 117mSn, 186Re, 188Re, 198Au, 199Au, 201Tl, 203Pb, 211At, 212Pb , 212Bi, 213Bi, 223Ra, 225Ac, 227Th, 및 229Th를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 금속 착물은 43Sc, 44Sc, 47Sc, 55Co, 60Cu, 61Cu, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 66Ga, 67Ga, 68Ga, 82Rb, 86Y, 87Y, 89Zr, 90Y, 97Ru, 99Tc, 99mTc, 105Rh, 109Pd, 111In, 117mSn, 133La, 134Ce, 149Pm, 149Tb, 153Sm, 166Ho, 177Lu, 186Re, 188Re, 198Au, 199Au, 201Tl, 203Pb, 211At, 212Pb, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 225Ac, 227Th, 및 229Th로부터 선택된 방사성핵종을 포함한다. 특정 실시양태에서, 금속 착물은 68Ga, 89Zr, 90Y, 111In, 177Lu, 및 225Ac로부터 선택된 방사성핵종을 포함한다. 특정 실시양태에서, 금속 착물은 177Lu 또는 225Ac인 방사성핵종을 포함한다.
일부 실시양태에서, 방사성핵종은 알파 방출체, 예를 들어 아스타틴-211 (211At), 비스무트-212 (212Bi), 비스무트-213 (213Bi), 악티늄-225 (225Ac), 라듐-223 (223Ra), 납-212 (212Pb), 토륨-227 (227Th) 또는 테르븀-149 (149Tb) 또는 그의 자핵종이다. 일부 실시양태에서, 알파-방출체는 악티늄-225 (225Ac) 또는 그의 자핵종이다.
링커
본 발명의 화합물은 일반적으로 하기 화학식 I의 구조를 포함한다:
Figure pct00017
여기서 각각의 변수는 상기 발명의 내용 섹션에 정의되어 있다.
화학식 I의 각각의 화합물은 -L1-(L2)n-로서 링커 모이어티를 포함하며, 여기서
L1은 결합, C=O, C=S, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
n은 1 내지 5 (경계 포함)의 정수이고;
각각의 L2는 독립적으로 하기 구조를 갖고:
Figure pct00018
여기서:
X1은 -C(O)NR1-*, -NR1C(O)-*, -C(S)NR1-*, -NR1C(S)-*, -OC(O)NR1-*, -NR1C(O)O-*, -NR1C(O)NR1-*, -CH2-Ph-C(O)NR1-*, -NR1C(O)-Ph-CH2-*, -CH2-Ph-NH-C(S)NR1-*, -NR1C(S)-NH-Ph-CH2-*, -O-*, 또는 -NR1-*이고; 여기서 "*"는 L3에 대한 부착 지점을 나타내고, R1은 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 또는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고;
L3은 임의로 치환된 C1-C50 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C50 헤테로알킬 (예를 들어, (CH2CH2O)2-20)이고;
Z1은 -CH2-#, -C(O)-#, -C(S)-#, -OC(O)-#, -C(O)O-#, -NR2C(O)-#, -C(O)NR2-# 또는 -NR2-#이고, 여기서 "#"는 B에 대한 부착 지점을 나타내고, R2는 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 아릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이다.
일부 실시양태에서, L1은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬이다. 특정 실시양태에서, L1은 치환된 C1-C6 알킬 또는 치환된 C1-C6 헤테로알킬이고, 치환기는 헤테로아릴 기 (예를 들어, 6-원 질소-함유 헤테로아릴)를 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 C1-C6 알킬이다. 예를 들어, L1은 -CH2CH2-이다. 일부 실시양태에서, L1은 결합이다. 일부 실시양태에서, L1은
Figure pct00019
이고, 여기서 RL은 수소 또는 -CO2H이다.
일부 실시양태에서, X1은 -C(O)NR1-*, -NR1C(O)-* 또는 -NR1-이고, "*"는 L3에 대한 부착 지점을 나타내고, R1은 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 아릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이다. 일부 실시양태에서, X1은 -C(O)NR1-*이고, "*"는 L3에 대한 부착 지점을 나타내고, R1은 수소이다.
일부 실시양태에서, L3은 임의로 치환된 C1-C50 알킬 (예를 들어, C3-C30 알킬, C3-C25 알킬, C3-C20 알킬, C3-C15 알킬, C3-C10 알킬, C5-C30 알킬, C5-C25 알킬, C5-C20 알킬, C5-C15 알킬, 및 C5-C10 알킬) 또는 임의로 치환된 C1-C50 헤테로알킬 (예를 들어, C3-C30 헤테로알킬, C3-C25 헤테로알킬, C3-C20 헤테로알킬, C3-C15 헤테로알킬, C3-C10 헤테로알킬, C5-C30 헤테로알킬, C5-C25 헤테로알킬, C5-C20 헤테로알킬, C5-C15 헤테로알킬, 및 C5-C10 헤테로알킬)이다. 예시적인 C1-C50 헤테로알킬은 C5-C30 폴리에틸렌 글리콜 (예를 들어, C5-C25 폴리에틸렌 글리콜, C5-C20 폴리에틸렌 글리콜, C5-C15 폴리에틸렌 글리콜)이다. 특정 실시양태에서, L3은 C5-C25 폴리에틸렌 글리콜, C5-C20 폴리에틸렌 글리콜, 또는 C5-C15 폴리에틸렌 글리콜이다.
일부 실시양태에서, L3은 임의로 치환된 C1-C50 헤테로알킬 (예를 들어, C1-C40 헤테로알킬, C1-C30 헤테로알킬, C1-C20 헤테로알킬, C2-C18 헤테로알킬, C3-C16 헤테로알킬, C4-C14 헤테로알킬, C5-C12 헤테로알킬, C6-C10 헤테로알킬, C8-C10 헤테로알킬, C4 헤테로알킬, C6 헤테로알킬, C8 헤테로알킬, C10 헤테로알킬, C12 헤테로알킬, C16 헤테로알킬, C20 헤테로알킬, 또는 C24 헤테로알킬)이다.
일부 실시양태에서, L3은 1-20개의 옥시에틸렌 (-O-CH2-CH2-) 단위, 예를 들어, 2개의 옥시에틸렌 단위 (PEG2), 3개의 옥시에틸렌 단위 (PEG3), 4개의 옥시에틸렌 단위 (PEG4), 5개의 옥시에틸렌 단위 (PEG5), 6개의 옥시에틸렌 단위 (PEG6), 7개의 옥시에틸렌 단위 (PEG7), 8개의 옥시에틸렌 단위 (PEG8), 9개의 옥시에틸렌 단위 (PEG9), 10개의 옥시에틸렌 단위 (PEG10), 12개의 옥시에틸렌 단위 (PEG12), 14개의 옥시에틸렌 단위 (PEG14), 16개의 옥시에틸렌 단위 (PEG16), 또는 18개의 옥시에틸렌 단위 (PEG18)를 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 모이어티를 포함하는 임의로 치환된 C1-C50 헤테로알킬이다.
특정 실시양태에서, L3은 1-20개의 옥시에틸렌 (-O-CH2-CH2-) 단위 또는 그의 부분을 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 모이어티를 포함하는 임의로 치환된 C1-50 헤테로알킬이다. 예를 들어, L3은 하기 제시된 바와 같은 PEG3을 포함한다:
.
일부 실시양태에서, L3은 (CH2CH2O)m(CH2)w이고, m 및 w는 각각 독립적으로 0 내지 10 (경계 포함)의 정수이고, m 및 w 중 적어도 하나는 0이 아니다.
일부 실시양태에서, L3은 치환된 C1-C50 알킬 또는 치환된 C1-C50 헤테로알킬이고, 치환기는 헤테로아릴 기 (예를 들어, 6-원 질소-함유 헤테로아릴)를 포함한다.
일부 실시양태에서, Z1은 CH2, C=O, 또는 NR1이고; 여기서 R1은 H, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이다.
특정 실시양태에서, A-L1-(L2)n-B는 하기 구조에 의해 나타내어질 수 있다:
Figure pct00021
여기서 Y1은 -CH2OCH2(L2)n-B, C=O(L2)n-B, 또는 C=S(L2)n-B이고, Y2는 -CH2CO2H이거나; 또는 Y1은 H이고, Y2는 L1-(L2)n-B이다.
가교기
일부 실시양태에서, 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체)은 킬레이트, 링커 및 가교기를 포함하는 이관능성 킬레이트를 사용하여 합성된다. 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체)이 형성되면, 가교기가 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체)에 부재할 수 있다.
일부 실시양태에서, 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체)은 표적화 모이어티 대신에 또는 그에 더하여 가교기를 포함한다 (예를 들어, 일부 실시양태에서, 화학식 I의 B는 가교기를 포함함).
가교기는 공유 결합에 의해 2개 이상의 분자를 연결할 수 있는 반응성 기이다. 가교기는 링커 및 킬레이트화 모이어티를 치료 또는 표적화 모이어티에 부착시키는 데 사용될 수 있다. 가교기는 또한 생체내에서 표적에 링커 및 킬레이트화 모이어티를 부착시키는 데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 가교기는 아미노-반응성, 메티오닌 반응성 또는 티올-반응성 가교기이거나, 또는 소르타제 인식 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아미노-반응성 또는 티올-반응성 가교기는 활성화된 에스테르, 예컨대 히드록시숙신이미드 에스테르, 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 에스테르, 4-니트로페놀 에스테르 또는 이미데이트, 무수물, 티올, 디술피드, 말레이미드, 아지드, 알킨, 변형 알킨, 변형 알켄, 할로겐, 술포네이트, 할로아세틸, 아민, 히드라지드, 디아지린, 포스핀, 테트라진, 이소티오시아네이트 또는 옥사지리딘을 포함한다. 일부 실시양태에서, 소르타제 인식 서열은 말단 글리신-글리신-글리신 (GGG) 및/또는 LPTXG 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 X는 임의의 아미노산이다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 가교기의 사용이 본원에 개시된 구체적 구축물에 제한되지 않고, 오히려 다른 공지된 가교기를 포함할 수 있음을 이해할 것이다.
제약 조성물
한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 화합물을 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 이러한 제약 조성물은 다양한 약물 전달 시스템에 사용하기 위해 제제화될 수 있다. 1종 이상의 생리학상 허용되는 부형제 또는 담체가 또한 적절한 제제를 위한 제약 조성물에 포함될 수 있다. 본 개시내용과 함께 사용하기에 적합한 제제의 비제한적 예는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed., 1985]에 기재된 것을 포함한다. 약물 전달 방법의 간단한 검토를 위해, 예를 들어 문헌 [Langer (Science. 249:1527-1533, 1990)]을 참조한다.
제약 조성물은 본원에 논의된 임의의 다양한 투여 경로를 위해 제제화될 수 있고 (예를 들어, 본원의 "투여 및 투여량" 하위섹션 참조), 지속 방출 투여는 데포 주사 또는 침식성 이식물 또는 성분과 같은 수단에 의해 고려된다. 따라서, 본 개시내용은 허용되는 담체, 바람직하게는 수성 담체, 예를 들어 특히 물, 완충수, 염수 또는 PBS 중에 용해 또는 현탁된 본원에 개시된 작용제 (예를 들어, 방사성면역접합체)를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 생리학적 조건에 근접하는 제약상 허용되는 보조 물질, 예컨대 특히 pH 조정제 및 완충제, 장성 조정제, 습윤제 또는 세제를 함유한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 경구 전달을 위해 제제화되고, 임의로 단위 투여 형태, 예컨대 정제 또는 캡슐의 제제를 위한 불활성 성분, 예컨대 결합제 또는 충전제를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 국부 투여를 위해 제제화되고, 크림, 연고, 겔, 페이스트 또는 점안제의 제제를 위한 불활성 성분, 예컨대 용매 또는 유화제를 임의로 함유할 수 있다.
일부 실시양태에서, 제공된 제약 조성물은 통상적인 멸균 기술에 의해 멸균되고, 예를 들어 멸균 여과될 수 있다. 생성된 수용액은 사용을 위해 그대로 또는 동결건조되어 포장될 수 있다. 동결건조된 제제는, 예를 들어 투여 전에 멸균 수성 담체와 조합될 수 있다. 제제의 pH는 전형적으로 3 내지 11, 보다 바람직하게는 5 내지 9 또는 6 내지 8, 가장 바람직하게는 6 내지 7, 예컨대 6 내지 6.5일 것이다. 고체 형태의 생성된 조성물은, 예를 들어 각각 고정된 양의 상기 언급된 작용제 또는 작용제들을 함유하는 다중 단일 용량 단위로, 예컨대 정제 또는 캡슐의 밀봉된 패키지로 포장될 수 있다. 고체 형태의 제약 조성물은 또한 유연한 양을 위한 용기, 예컨대 국소로 적용가능한 크림 또는 연고용으로 설계된 압착가능한 튜브에 포장될 수 있다.
치료 방법
한 측면에서, 본 개시내용은 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 바와 같은 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체)을 투여하는 것을 포함하는 치료 방법을 제공한다.
대상체
일부 개시된 방법에서, 요법 (예를 들어, 치료제를 포함함)이 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 포유동물, 예를 들어 인간이다.
일부 실시양태에서, 대상체는 암을 갖거나 또는 암 발병 위험이 있다. 예를 들어, 대상체는 암으로 진단되었을 수 있다. 예를 들어, 암은 원발성 암 또는 전이성 암일 수 있다. 대상체는 림프절 침범이 있거나 없고 전이가 있거나 없는 임의의 병기의 암, 예를 들어, I기, II기, III기, 또는 IV기를 가질 수 있다. 제공된 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체) 및 조성물은 암의 추가의 성장을 예방 또는 감소시키고/거나 달리 암을 개선시킬 수 있다 (예를 들어, 전이를 예방 또는 감소시킴). 일부 실시양태에서, 대상체는 암을 갖지 않지만, 예를 들어 환경적 노출, 하나 이상의 유전자 돌연변이 또는 변이체의 존재, 가족력 등과 같은 하나 이상의 위험 인자의 존재 때문에 암 발병 위험이 있는 것으로 결정되었다. 일부 실시양태에서, 대상체는 암으로 진단되지 않았다.
일부 실시양태에서, 암은 EGFRvIII를 발현하는 세포를 포함하는 임의의 암이다. 특정 실시양태에서, 암은 다형성 교모세포종 또는 암종이다.
투여 및 투여량
본원에 개시된 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체) 및 그의 제약 조성물은 전신 및 국부 투여 경로를 비롯한 임의의 다양한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다.
전신 투여 경로는 비경구 경로 및 장 경로를 포함한다. 일부 실시양태에서, 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체) 또는 그의 제약 조성물은 비경구 경로에 의해, 예를 들어 정맥내로, 동맥내로, 복강내로, 피하로, 두개내로 또는 피내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체) 또는 그의 제약 조성물은 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체) 또는 그의 제약 조성물은 경장 투여 경로, 예를 들어 경-위장으로 또는 경구로 투여된다.
국소 투여 경로는 종양주위 주사 및 종양내 주사를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
제약 조성물은 방사선 치료 계획, 진단 및/또는 치유적 치료를 위해 투여될 수 있다. 방사선 치료 계획 또는 진단 목적을 위해 투여되는 경우에, 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체)은 진단 유효 용량 및/또는 치료 유효 용량을 결정하는 데 효과적인 양으로 대상체에게 투여될 수 있다. 치료 용도에서, 제약 조성물은 이미 상태 (예를 들어, 암)를 앓고 있는 대상체 (예를 들어, 인간)에게 장애 및 그의 합병증의 증상을 치유하거나 또는 적어도 부분적으로 정지시키기에 충분한 양으로 투여될 수 있다. 이러한 목적을 달성하기에 적절한 양은 질환 또는 의학적 상태와 연관된 적어도 1종의 증상을 실질적으로 개선시키기에 충분한 화합물의 양인 "치료 유효량"으로서 정의된다. 예를 들어, 암의 치료에서, 질환 또는 상태의 임의의 증상을 감소, 예방, 지연, 억제 또는 정지시키는 작용제 또는 화합물이 치료상 유효할 것이다. 치료 유효량의 작용제 또는 화합물은 질환 또는 상태를 치유하는 데 요구되지 않지만, 예를 들어 질환 또는 상태의 발병이 지연, 방해 또는 예방되도록, 질환 또는 상태 증상이 호전되도록, 또는 질환 또는 상태의 기간이 변화되도록 질환 또는 상태에 대한 치료를 제공할 수 있다. 예를 들어, 질환 또는 상태가 보다 덜 중증이 될 수 있고/거나 개체에서 회복이 가속화된다. 일부 실시양태에서, 대상체에게 방사선 치료 계획에 유효한 양의 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체) 또는 조성물의 제1 용량을 투여한 다음, 치료 유효량의 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체) 또는 조성물의 제2 용량 또는 용량 세트를 투여한다.
EGFRvIII를 발현하는 세포를 포함하는 암의 치료 또는 예방을 위해, 상기 방법은 전형적으로, 이를 필요로 하는 대상체 (예를 들어, 인간)에게 상기 제공된 화합물 또는 조성물의 제1 용량을 방사선 치료 계획에 유효한 양으로 투여한 다음, 상기 제공된 화합물 또는 조성물의 후속 용량을 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제1 용량으로 투여되는 화합물 또는 조성물 및 제2 용량으로 투여되는 화합물 또는 조성물은 동일하다.
일부 실시양태에서, 제1 용량으로 투여되는 화합물 또는 조성물 및 제2 용량으로 투여되는 화합물 또는 조성물은 상이하다.
치료 유효량은 질환 또는 상태의 중증도 및 대상체의 다른 특징 (예를 들어, 체중)에 좌우될 수 있다. 대상체 (예를 들어, 포유동물, 예컨대 인간)에 대한 개시된 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체) 및 조성물의 치료 유효량은 개별 차이 (예를 들어, 대상체의 연령, 체중 및 상태의 차이)를 고려하여 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 개시된 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체)은 암 세포를 표적화하는 증진된 능력을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 개시된 화합물 (예를 들어, 방사성면역접합체)의 유효량은 비접합 및/또는 비-방사성표지된 표적화 모이어티의 치료 효과에 대한 등가 용량보다 적다 (예를 들어, 약 90%, 75%, 50%, 40%, 30%, 20%, 15%, 12%, 10%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 이하).
유효량을 포함하는 본원에 개시된 화합물 또는 제약 조성물의 단일 또는 다중 투여는 치료 의사에 의해 선택되는 용량 수준 및 패턴으로 수행될 수 있다. 용량 및 투여 스케줄은 대상체에서의 질환 또는 상태의 중증도에 기초하여 결정되고 조정될 수 있으며, 이는 임상의에 의해 통상적으로 실시되는 방법 또는 본원에 기재된 것에 따라 치료 과정 전반에 걸쳐 모니터링될 수 있다.
다른 작용제
일부 실시양태에서, 개시된 방법은 항증식제, 방사선 증감제, 또는 면역조절제 또는 면역조정제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
본원에서 상호교환가능하게 사용된 "항증식제" 또는 "항증식 작용제"는 표 2에 열거된 항증식 작용제를 비롯한 임의의 항암제를 의미하며, 이들 중 임의의 것은 상태 또는 장애를 치료하기 위해 본원에 기재된 바와 같은 방사성면역접합체와 조합되어 사용될 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용되는 예시적인 항증식제는 테모졸로미드 (TMZ)이며, 이는 외부 빔 방사선의 존재 또는 부재 하에 상기 제시된 방사성면역접합체와 조합되어 투여될 수 있다. 항증식제는 또한 유기-백금 유도체, 나프토퀴논 및 벤조퀴논 유도체, 크리소판산 및 그의 안트라퀴논 유도체를 포함한다.
본원에서 상호교환가능하게 사용된 "면역조절제" 또는 "면역조정제"는 표 2에 열거된 것들을 포함한 임의의 면역-조정제를 의미하며, 이들 중 임의의 것은 방사성면역접합체와 조합되어 사용될 수 있다.
본원에 사용된 "방사선 증감제"는 방사선 요법에 대한 암 세포의 감수성을 증가시키는 임의의 작용제를 포함한다. 방사선 증감제는 5-플루오로우라실, 백금의 유사체 (예를 들어, 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴), 겜시타빈, EGFR 길항제 (예를 들어, 세툭시맙, 게피티닙), 파르네실트랜스퍼라제 억제제, COX-2 억제제, bFGF 길항제 및 VEGF 길항제를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
하기 구체적 실시예는 단지 예시적이며, 어떠한 방식으로도 본 개시내용의 나머지를 제한하지 않는 것으로 해석되어야 한다.
실시예
실시예 1. 일반적 물질 및 방법
루테튬-177은 0.05 N 염산 용액 중 루테튬 트리클로라이드로서 ITM 메디칼 이소토프스(ITM Medical Isotopes)로부터 입수할 수 있고; 인듐-111은 0.05 N 염산 용액 중 인듐 트리클로라이드로서 BWXT로부터 입수할 수 있고; 악티늄-225는 악티늄-225 트리니트레이트로서 오크 리지 내셔널 래보러토리즈(Oak Ridge National Laboratories)로부터 입수할 수 있다.
분석용 HPLC-MS는 워터스 액퀴티(Waters Acquity) 바이너리 솔벤트 매니저, 워터스 액퀴티 샘플 매니저 (10℃로 냉각된 샘플), 워터스 액퀴티 칼럼 매니저 (칼럼 온도 30℃), 워터스 액퀴티 포토다이오드 어레이 검출기 (254 nm 및 214 nm에서 모니터링함), 워터스 액퀴티 TQD (전기분무 이온화 포함) 및 워터스 액퀴티 BEH C18, 2.1x50 (1.7 μm) 칼럼으로 구성된 워터스 액퀴티 HPLC-MS 시스템을 사용하여 수행될 수 있다. 정제용 HPLC는 워터스 1525 바이너리 HPLC 펌프, 워터스 2489 UV/가시광 검출기 (254 nm 및 214 nm에서 모니터링함) 및 워터스 엑스브리지(Waters XBridge) Prep 페닐 또는 C18 19x100 mm (5 μm) 칼럼으로 구성된 워터스 HPLC 시스템을 사용하여 수행할 수 있다.
HPLC 용리 방법 1: 워터스 액퀴티 BEH C18 2.1x50 mm (1.7 μm) 칼럼; 이동상 A: H2O (0.1% v/v TFA); 이동상 B: 아세토니트릴 (0.1% v/v TFA); 유량 = 0.3 mL/분; 초기 = 90% A, 3-3.5분 = 0% A, 4분 = 90% A, 5분 = 90% A.
HPLC 용리 방법 2: 워터스 엑스브리지 Prep 페닐 19x100 mm (5 μm) 칼럼; 이동상 A: H2O (0.1% v/v TFA); 이동상 B: 아세토니트릴 (0.1% v/v TFA); 유량: 10 mL/분; 초기 = 80% A, 13분 = 0% A.
HPLC 용리 방법 3: 워터스 액퀴티 BEH C18 2.1x50 mm (1.7 μm) 칼럼; 이동상 A: H2O (0.1% v/v TFA); 이동상 B: 아세토니트릴 (0.1% v/v TFA); 유량 = 0.3 mL/분; 초기 = 90% A, 8분 = 0% A, 10분 = 0% A, 11분 = 90% A, 12분 = 90% A.
HPLC 용리 방법 4: 워터스 엑스브리지 Prep C18 OBD 19x100 mm (5 μm) 칼럼; 이동상 A: H2O (0.1% v/v TFA); 이동상 B: 아세토니트릴 (0.1% v/v TFA); 유량: 10 mL/분; 초기 = 80% A, 3분 = 80% A, 13분 = 20% A, 18분 = 0% A.
HPLC 용리 방법 5: 워터스 엑스브리지 Prep C18 OBD 19x100 mm (5 μm) 칼럼; 이동상 A: H2O (0.1% v/v TFA); 이동상 B: 아세토니트릴 (0.1% v/v TFA); 유량: 10 mL/분; 초기 = 90% A, 3분 = 90% A, 13분 = 0% A, 20분 = 0% A.
HPLC 용리 방법 6: 워터스 엑스브리지 Prep C18 OBD 19x100 mm (5 μm) 칼럼; 이동상 A: H2O (0.1% v/v TFA); 이동상 B: 아세토니트릴 (0.1% v/v TFA); 유량: 10 mL/분; 초기 = 75% A, 13분 = 0% A, 15분 = 0% A.
HPLC 용리 방법 7: 워터스 엑스브리지 Prep C18 OBD 19x100 mm (5 μm) 칼럼; 이동상 A: H2O (0.1% v/v TFA); 이동상 B: 아세토니트릴 (0.1% v/v TFA); 유량: 10 mL/분; 초기 = 80% A, 12분 = 0% A, 15분 = 0% A.
HPLC 용리 방법 8: 워터스 엑스브리지 Prep C18 OBD 19x100 mm (5 μm) 칼럼; 이동상 A: H2O (0.1% v/v TFA); 이동상 B: 아세토니트릴 (0.1% v/v TFA); 유량: 10 mL/분; 초기 = 90% A, 12분 = 0% A, 15분 = 0% A.
분석용 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)는 워터스 1525 바이너리 HPLC 펌프, 워터스 2489 UV/가시광 검출기 (280 nm에서 모니터링), 바이오스캔 플로우 카운트(Bioscan Flow Count) 방사선검출기 (FC-3300) 및 토소(TOSOH) TSK겔 G3000SWxl, 7.8x300 mm 칼럼으로 구성된 워터스 시스템을 사용하여 수행될 수 있다. 등용매 SEC 방법은 0.1 M 포스페이트, 0.6 M NaCl, 0.025% 아지드화나트륨, pH = 7의 이동상으로, 예를 들어 mL/분의 유량을 가질 수 있다.
MALDI-MS (양이온)는 MALDI 브루커 울트라플렉스트림(Bruker Ultraflextreme) 분광계를 사용하여 수행될 수 있다.
방사성 박층 크로마토그래피 (방사성-TLC)는 바이오스캔(Bioscan) AR-2000 이미징 스캐너(Imaging Scanner)로 수행될 수 있고, 시트레이트 완충제 (0.1 M, pH 5.5)를 사용하여 iTLC-SG 유리 마이크로섬유 크로마토그래피 페이퍼 (애질런트 테크놀로지스(Agilent Technologies), SGI0001) 플레이트 상에서 수행될 수 있다.
특정 EGFRvIII 모노클로날 항체의 생성 및 평가는 WO2020191485A1 (이는 그 전문이 참조로 포함됨)을 참조할 수 있다.
실시예 2. 4-{[11-옥소-11-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)운데실]카르바모일}-2-[4,7,10-트리스(카르복시메틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1-일]부탄산 (화합물 B)의 합성
이관능성 킬레이트, 4-{[11-옥소-11-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)운데실]카르바모일}-2-[4,7,10-트리스(카르복시메틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1-일]부탄산 (화합물 B)은 도 2에 제공된 반응식에 따라 합성될 수 있다. ACN (2.0 mL) 중 5-(tert-부톡시)-5-옥소-4-(4,7,10-트리스(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1-일)펜탄산 (DOTA-GA-(tBu)4, 50 mg, 0.07 mmol)의 용액에, DSC (50 mg, 0.21 mmol)에 이어서 피리딘 (0.20 mL, 2.48 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 11-아미노운데칸산 (70 mg, 0.36 mmol)에 이어서 PBS 용액 (1.0 mL)을 실온에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 72시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 시린지 필터로 여과하고, 방법 6을 이용하여 정제용 HPLC에 의해 직접 정제하여 중간체 2-A를 수득하였다.
ACN (1.0 mL) 중 중간체 2-A (40 mg, 0.03 mmol), TFP (90 mg, 0.54 mmol) 및 EDC (40 mg, 0.27 mmol)의 용액에 피리딘 (0.05 mL, 50 mg, 0.62 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 용액을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응물을 방법 7을 사용하여 정제용 HPLC에 의해 직접 정제하여, 바이오타지(Biotage) V10 급속 증발기를 사용하여 농축시킨 후에 중간체 2-B를 왁스로서 수득하였다.
중간체 2-B를 DCM / TFA (1.0 mL / 2.0 mL) 중에 용해시키고, 실온에서 24시간 동안 교반되도록 하였다. 반응물을 공기 스트림에 의해 농축시키고, 방법 8을 사용하여 정제용 HPLC에 의해 직접 정제하여, 농축 후에 화합물 B를 투명한 왁스로서 수득하였다. 분취물을 HPLC-MS 용리 방법 3에 의해 분석하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 - 7.88 (m, 1H), 7.82 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 3.78 (넓은 s, 4H), 3.43 (넓은 s, 12H), 3.08 (넓은 s, 4H), 3.00 (m, 3H), 2.93 (넓은 s, 3H), 2.77 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.30 (넓은 s, 2H), 1.88 (넓은 s, 2H), 1.66 (p, J = 7.3 Hz, 2H), 1.36 (m, 4H), 1.32 - 1.20 (m, 9H).
실시예 3. 4-{[2-(2-{2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시]에톡시}에톡시)에틸]카르바모일}-2-[4,7,10-트리스(카르복시메틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1-일]부탄산 (화합물 C)의 합성
이관능성 킬레이트, 4-{[2-(2-{2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시]에톡시}에톡시)에틸]카르바모일}-2-[4,7,10-트리스(카르복시메틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1-일]부탄산 (화합물 C)을 도 3에 제공된 반응식에 따라 합성하였다.
ACN (8.0 mL) 중 5-(tert-부톡시)-5-옥소-4-(4,7,10-트리스(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1-일)펜탄산 (DOTA-GA(tBu)4, 100 mg, 0.143 mmol)의 용액에 DSC (73 mg, 0.285 mmol) 및 피리딘 (0.80 mL, 9.89 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 90분 동안 교반하였다. 이 용액을 100 mL 둥근 바닥 플라스크 내의 아미노-PEG3-산 (63 mg, 1.2 mL의 DMF 중 0.285 mmol)의 반-용액에 첨가하였다. 주위 온도에서 4시간 후, 반응물을 공기 스트림 하에 농축 건조시킴으로써 후처리하였다. 조 물질을 HPLC 용리 방법 2 (20% ACN/H2O 6 mL 중에 조 물질을 용해시킴)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 풀링하고, 진공 하에 농축시킨 다음, ACN (3 x 2 mL)과 공증발시켰다.
중간체 1-A (82 mg, 60 μmol)가 들은 바이알에 ACN (2 mL), NEt3 (50 μL, 360 μmol, 6 당량), HBTU (23 mg, 60 μmol, 1 당량) 및 TFP 용액 (50 mg, 300 μmol, 5 당량, ACN 250 μL 중에 용해됨)을 첨가하였다. 생성된 투명한 용액을 주위 온도에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 용액을 공기 스트림하에 농축 건조시킨 다음, ACN/H2O (1:1, 총 3 mL)로 희석하고, 용리 방법 4를 이용하여 정제용 HPLC 상에서 정제함으로써 후처리하였다. 생성물을 함유하는 분획을 풀링하고, 진공 하에 농축시킨 다음, ACN (3 x 2 mL)과 공증발시켰다. 중간체 1-B를 투명한 잔류물로서 수득하였다.
중간체 1-B (67 mg, 64 μmol)가 들은 바이알에 DCM (2 mL) 및 TFA (2 mL)를 첨가하였다. 생성된 용액을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 추가의 TFA (2 mL)를 첨가하고, 반응물을 주위 온도에서 6시간 동안 교반하였다. 반응물을 공기 스트림 하에 농축 건조시키고, 조 생성물을 최종적으로 ACN/H2O (10% ACN/H2O 1 mL) 중에 용해시켰다. 이어서 조 반응 용액을 용리 방법 5를 이용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 풀링하고, 동결시키고, 동결건조시켰다. 화합물 C를 백색 고체로서 수득하였다. 분취물을 HPLC-MS 용리 방법 3에 의해 분석하였다.
1H NMR(DMSO-d6, 600 MHz) δ 7.97-7.91 (m, 2H), 3.77 (t, 2H, J = 6.0 Hz), 3.58-3.55 (m, 2H), 3.53-3.48 (m, 8H), 3.44-3.38 (m, 10H), 3.23-3.08 (m, 11H), 3.02 (t, 2H, J = 6.0 Hz), 2.93 (넓은 s, 4H), 2.30 (넓은 s, 2H), 1.87 (넓은 s, 2H).
실시예 4. [177Lu]-화합물 C-항-EGFRvIII 접합체 (접합체 A 및 접합체 B)의 합성을 위한 접합 및 방사성표지
117Lu-방사성표지된 화합물 C-항-EGFRvIII 접합체를 하기와 같이 제조할 수 있다: 화합물 C (1.4 μmol)를 염산 용액 (0.001 M) 중에 용해시켰다. 화합물 C 용액의 분취물 (19 μL, 90 nmol)을 카르보네이트 완충제 (pH 9.5) 중 항-EGFRvIII 항체 (1.8 nmol)를 함유하는 용액에 첨가하였다. 주위 온도에서 1시간 후, 생성된 면역접합체를 세파덱스(Sephadex) G-50 수지 패킹된 칼럼을 통해 정제하였다. 면역접합체 화합물 C-항-EGFRvIII를 아세테이트 완충제 (pH 6.5)로 칼럼으로부터 용리시켰다. 용리액의 정체는, 예를 들어 MALDI-TOF에 의해 확인될 수 있으며, 여기서 3-4의 전형적인 킬레이트 대 항체 비 (CAR)가 수득된다.
177Lu (1.6 mCi, 3.9 μL)를 화합물 C-항-EGFRvIII의 용액 (아세테이트 완충제 (pH 6.5) 중 150 μg)에 첨가하였다. 주위 온도에서 40분 후, 조 생성물, [177Lu]-화합물 C-항-EGFRvIII를 세파덱스 G-50 수지 패킹된 칼럼을 통해 아세테이트 완충제로 용리시키면서 정제하였다.
2종의 [177Lu]-화합물 C-항-EGFRvIII 접합체, 즉 접합체 A 및 B를 2종의 항-EGFRvIII 항체를 사용하여 제조하였다. 보다 구체적으로, 접합체 A는 서열식별번호: 182에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 184에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역을 포함하는 EGFRvIII 항체 hH2-hL3을 사용하여 제조하였고; 접합체 B는 서열식별번호: 180에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 185에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역을 포함하는 EGFRvIII 항체 hH3-hL1을 사용하여 제조하였다. 접합체 A 및 B를 화학적 순도 > 99%, 방사화학적 순도 > 99%, 및 비활성 7-10 mCi/mg으로 제조하였다.
실시예 5. [111In]- 및 [225Ac]-방사성면역접합체의 방사성합성
방사성면역접합체 [111In]-화합물 C-항-EGFRvIII의 방사성합성
1.5 mL 에펜도르프(Eppendorf) 튜브에 화합물 C-항-EGFRvIII 면역접합체의 SABST 용액 (3.05 mg/mL의 0.0492 mL, 즉 0.150 mg; 상기 실시예 4에 기재된 것과 유사한 프로토콜에 따라 EGFRvIII 항체 hH3-hL1로부터 제조됨), 2.0 mg/mL 용액을 제조하기 위한 추가의 SABST, 및 [111In]Cl3 (2.0 mCi)의 0.05 ± 0.01 M HCl 용액을 채웠다. 37℃에서 60분 후, 반응 혼합물의 방사성-TLC 분석 (iTLC-SG 플레이트, 이동상으로서 0.02 M 시트레이트 완충제 중 5% 메탄올)은 97%의 방사화학적 전환 (RCC)을 나타내었다. 세파덱스 G50 수지 (SABST로 수화됨)로 패킹된 1 mL 칼럼을 사용하여 정제를 수행하였다. 생성물 분획을 SABST를 사용하여 용리시키고, 합하였다. 나트륨 L-아스코르베이트 및 디에틸렌트리아민-펜타아세트산 칼슘 삼나트륨 염 수화물 (DTPA)의 SABST 용액을 첨가하여 10 mM 아스코르베이트 및 1 mM DTPA의 최종 제제를 수득하였다. 합성 종료시 (EOS) 방사성-TLC 및 SEC-HPLC에 의한 생성된 제제의 분석은 [111In]-화합물 C-항-EGFRvIII (364 μL, 0.299 mg/mL, 8.9 mCi/mg 비활성, 99% 방사화학적 순도, 및 >95% 화학적 순도)의 형성을 나타내었다.
방사성면역접합체 [111In]-화합물 C-IgG4의 방사성합성
1.5 mL 에펜도르프 튜브에 화합물 C-IgG4 면역접합체의 SABST 용액 (4.72 mg/mL의 0.0318 mL, 즉 0.150 mg; 상기 실시예 4에 기재된 것과 유사한 프로토콜에 따라 이소형 IgG4 항체 S228P (바이오 엑스 셀(Bio X Cell)로부터 구입함, Cat# BE0349-5MG-R)로부터 제조됨), 2.0 mg/mL 용액을 제조하기 위한 추가의 SABST 및 [111In]Cl3 (2.25 mCi)의 0.05 ± 0.01 M HCl 용액을 채웠다. 실온에서 60분 후, 반응 혼합물의 방사성-TLC 분석 (iTLC-SG 플레이트, 이동상으로서 0.02 M 시트레이트 완충제 중 5% 메탄올)은 99%의 방사화학적 전환 (RCC)을 나타내었다. 세파덱스 G50 수지 (SABST로 수화됨)로 패킹된 1 mL 칼럼을 사용하여 정제를 수행하였다. 생성물 분획을 SABST를 사용하여 용리시키고, 합하였다. 나트륨 L-아스코르베이트 및 디에틸렌트리아민-펜타아세트산 칼슘 삼나트륨 염 수화물 (DTPA)의 SABST 용액을 첨가하여 10 mM 아스코르베이트 및 1 mM DTPA의 최종 제제를 수득하였다. 합성 종료시 (EOS) 방사성-TLC 및 SEC-HPLC에 의한 생성된 제제의 분석은 [111In]-화합물 C-IgG4 (364 μL, 0.362 mg/mL, 9.3 mCi/mg 비활성, 99% 방사화학적 순도, 및 >95% 화학적 순도)의 형성을 나타내었다.
방사성면역접합체 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII의 방사성합성
1.5 mL 에펜도르프 튜브에 화합물 C-항-EGFRvIII 면역접합체의 SABST 용액 (3.05 mg/mL의 0.0656 mL, 즉 0.200 mg; 상기 실시예 4에서의 프로토콜에 따라 항-EGFRvIII 항체 hH3-hL1로부터 제조됨), 2.0 mg/mL 용액을 제조하기 위한 추가의 SABST 및 [225Ac]Cl3 (10.9 μCi)의 0.001 M HCl 용액을 채웠다. 37℃에서 2시간 후, 반응 혼합물의 방사성-TLC 분석 (iTLC-SG 플레이트, 이동상으로서 0.02 M 시트레이트 완충제 중 5% 메탄올)은 99%의 방사화학적 전환 (RCC)을 나타내었다 (플레이트를 다음 날 방사성-TLC 스캐너 상에서 스캐닝함). 세파덱스 G50 수지 (SABST로 수화됨)로 패킹된 1 mL 칼럼을 사용하여 정제를 수행하였다. 생성물 분획을 SABST를 사용하여 용리시키고, 합하였다. 나트륨 L-아스코르베이트 및 디에틸렌트리아민-펜타아세트산 칼슘 삼나트륨 염 수화물 (DTPA)의 SABST 용액을 첨가하여 10 mM 아스코르베이트 및 1 mM DTPA의 최종 제제를 수득하였다. 합성 종료시 (EOS) 방사성-TLC 및 SEC-HPLC에 의한 생성된 제제의 분석은 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII (461 μL, 0.406 mg/mL, 0.0454 mCi/mg 비활성, 99% 방사화학적 순도, 및 >95% 화학적 순도)의 형성을 나타내었다.
방사성면역접합체 [225Ac]-화합물 C-IgG4의 방사성합성
1.5 mL 에펜도르프 튜브에 IgG4 면역접합체의 SABST 용액 (4.72 mg/mL의 0.0847 mL, 즉 0.400 mg; 상기 실시예 4에 기재된 것과 유사한 프로토콜에 따라 이소형 IgG4 항체 S228P로부터 제조됨), 2.0 mg/mL 용액을 제조하기 위한 추가의 SABST 및 [225Ac]Cl3의 0.001 M HCl 용액 (21.1 μCi)을 채웠다. 37℃에서 2시간 후, 반응 혼합물 (iTLC-SG 플레이트, 이동상으로서 0.02 M 시트레이트 완충제 중 5% 메탄올)의 방사성-TLC 분석은 68%의 방사화학적 전환 (RCC)을 나타내었다 (플레이트를 다음 날 방사성-TLC 스캐너 상에서 스캐닝함). 세파덱스 G50 수지 (SABST로 수화됨)로 패킹된 1 mL 칼럼을 사용하여 정제를 수행하였다. 생성물 분획을 SABST를 사용하여 용리시키고, 합하였다. 나트륨 L-아스코르베이트 및 디에틸렌트리아민-펜타아세트산 칼슘 삼나트륨 염 수화물 (DTPA)의 SABST 용액을 첨가하여 10 mM 아스코르베이트 및 1 mM DTPA의 최종 제제를 수득하였다. 합성 종료시 (EOS) 방사성-TLC 및 SEC-HPLC에 의한 생성된 제제의 분석은 [225Ac]-화합물 C-IgG4 (463 μL, 0.773 mg/mL, 0.0427 mCi/mg 비활성, 99% 방사화학적 순도, 및 95% 화학적 순도)의 형성을 나타내었다.
실시예 6. [177Lu]-화합물 C-항-EGFRvIII 접합체의 시험관내 결합
[177Lu]-화합물 C-항-EGFRvIII 접합체, 즉 접합체 A 및 B의 수용체 결합 친화도를 평가하기 위해, EGFRvIII를 과다-발현하는 U87-EGFRvIII 교모세포종 세포주 (캐나다 국립 연구 협의회로부터 입수함)를 사용하여 연구를 수행하였다.
본 연구에 사용된 물질을 하기 표 3에 요약하였다.
표 3. 물질
Figure pct00030
완충제:
1. 세포 용해물 완충제를 1% 트리톤 X-100을 함유하는 PBS를 사용하여 제조하였다.
2. 세포 결합 완충제를 0.5% BSA를 함유하는 PBS를 사용하여 제조하였다.
이 연구는 하기 기재된 절차를 따랐다:
1. 세포 제조:
a. 부착된 세포 수거: 트립신/EDTA를 이용하여 T225 플라스크로부터 충분한 U87-EGFRvIII 세포를 회수하고, 50 ml 배양 튜브로 옮겼다. 재현탁된 세포의 50 μl 샘플을 에펜도르프 마이크로-튜브 내로 분배하고, 50 μl의 트리판 블루로 희석하였다. 혈구계 (10 μl) 챔버를 채우고, 존재하는 세포의 수를 계수하였다.
i. 계수 영역의 4개의 사분면에서 세포를 계수하였다.
ii. 세포/mL 계산: 수/4 사분면 x 희석 배율 x 104 = 세포 /mL.
b. 세포를 배지 중에 3x105개 세포/ml의 최종 농도로 재현탁시켰다.
c. 3x105/1 mL U87-EGFRvIII를 24-웰 플레이트의 지정된 웰 내로 플레이팅하고, 부드럽게 두드려 세포를 고르게 분포시켰다 (총 6개의 플레이트 제조 - 4개의 U87-EGFRvIII, 2개의 블랭크).
d. 플레이트를 37℃ 및 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다.
2. 결합 검정:
블로킹제를 하기와 같이 제조하였다: 4 μM의 농도로서 4500 μl; 블로킹제의 최종 농도 2 μM.
접합체 A의 경우
o 원액 = 7.58 mg/mL
o mg/ml = 52.64 μM, 342 μl 첨가
o 결합 완충제: 4158 μl
접합체 B의 경우
o 원액 = 6.7 mg/mL
o mg/ml = 46.53 μM, 387 μl 첨가
o 결합 완충제: 4113 μl
a. 2개의 플레이트로부터 배지를 제거하였다.
b. 플레이트를 1 mL PBS로 1회 세척하였다.
c. 200 μl 결합 완충제를 TB 웰 및 블랭크 웰에 첨가하였다.
d. 200 μl 블로킹제를 NSB 웰에 첨가하고, 얼음 상에서 1시간 동안 인큐베이션하였다.
고온 물품 제조:
i. 결합 완충제를 사용하여 원액 (0.390 mg/ml = 2.71 μM)으로부터 4000 μl 160 nM 접합체 A (튜브 1)를 제조하였다.
o 접합체 A: 236.2 μl
o 결합 완충제: 3763.8 μl
o 튜브 1의 2x-희석 (총 8개 희석물)
ii. 결합 완충제를 사용하여 원액 (0.341 mg/ml = 2.37 μM)으로부터 4000 μl 160 nM 접합체 B (튜브 1)를 제조하였다.
o 접합체 B: 270 μl
o 결합 완충제: 3730 μl
o 튜브 1의 2x-희석 (총 8개 희석물)
e. 200 μl 다양한 농도의 접합체 A 또는 접합체 B (총 8개 농도)를 TB, NSB 및 블랭크 웰에 첨가하였다.
f. 얼음 상에서 2시간 동안 인큐베이션하였다.
g. 160, 80, 40, 및 20 nM 농도에 대한 표준물 - 200 μL의 원액 (튜브 1, 2, 3, 4를 이중으로)을 제조하여 또 다른 감마 계수 튜브에 첨가하였다.
h. 플레이트를 두드려 플레이트로부터 세포를 제거하고, 플레이트의 각 웰에 세포를 재현탁시켰다.
i. 각 웰로부터의 결합 용액 및 세포를 1.5 mL 튜브로 옮겼다.
j. 플레이트를 1 mL 차가운 PBS로 세척하고, 튜브로 옮겼다.
k. 15초 동안 최대 속도로 회전시켰다.
l. 용액을 흡인하고, 차가운 1x PBS 1 mL을 튜브에 첨가하였다.
m. 총 (2) PBS 세척을 위해 세척을 반복하였다.
n. 원심분리 및 흡인
o. 세포를 300 μl 1% 트리톤 X-100으로 용해시켰다. 부드럽게 흔들면서 튜브를 실온에서 30초 동안 인큐베이션하였다.
p. 250 μl 용해물 세포를 지정된 감마 계수 튜브로 옮겼다.
q. 용량 보정기 상에서 표준물을 계수하였다.
r. 감마 계수기 상에서 샘플 및 표준물을 계수하였다.
s. 나머지 용해물 (25 μL)을 사용하여 단백질 농도 (BCA 검정)를 결정하였다.
t. 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 소프트웨어를 사용하여 Kd를 계산하였다. 1-부위 결합 모델로의 비-선형 곡선 피팅을 사용하여 직접 결합 곡선을 분석하였다.
시험관내 결합 연구로부터의 결과를 도 5a 및 5b에 제시하였다. 2개의 EGFRvIII 방사성면역접합체, 즉 접합체 A 및 B가 각각 6.78 nM 및 2.75 nM의 높은 결합 친화도를 나타낸 것으로 관찰되었다.
실시예 7. [177Lu]-화합물 C-항-EGFRvIII 접합체의 내재화 평가
[177Lu]-화합물 C-항-EGFRvIII 접합체, 즉 접합체 A 및 B의 내재화를 평가하기 위해, EGFRvIII를 과다-발현하는 U87-EGFRvIII 교모세포종 세포주 (캐나다 국립 연구 협의회로부터 입수함)를 사용하여 하기 기재된 프로토콜에 따라 연구를 수행하였다.
본 연구의 주요 목적은 1) 세포 표면 및 세포 내부에서 방사성표지된 시험 물품, 즉 EGFRvIII 방사성면역접합체의 양을 정량적으로 측정하는 것; 및 2) 배지에서 회수되거나, 세포에서 보유되거나, 또는 세포 표면 상에서 다시 재순환되는 내재화된 시험 물품의 양을 결정하는 것이다.
본 연구에 사용된 물질을 하기 표 4에 요약하였다.
표 4. 물질
Figure pct00031
완충제:
3. 약산 세척 완충제 (pH 4.6)를 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2 및 20 mM NaAc로 제조하였다.
4. 산 세척 완충제 (pH 2.5)를 500 mM NaCl 및 200 mM NaAc로 제조하였다.
5. 1.0% 트리톤 X-100을 사용하여 세포 용해물 완충제 트리톤을 제조하였다.
이 연구는 하기 절차를 따랐다:
1. 세포 제조:
a. 검정을 시작하기 16-24시간 전에, U87-EGFRvIII 세포를 수거하였다: T75에서 세포로부터 배지를 제거하고, PBS로 세척하고, 세포를 성장 배지 1 mL 중에 재현탁시키고, 상하로 피펫팅하여 재현탁시켰다. 혈구계 (10 μL) 챔버를 채우고, 존재하는 세포의 수를 계수하였다.
b. 세포를 배지에 3x105개 세포/ml의 최종 농도로 재현탁시켰다.
c. 3x105개 세포를 24-웰 플레이트의 지정된 웰에 플레이팅하고, 부드럽게 두드려 세포를 고르게 분포시켰다.
d. 1 mL DMEM 배지/웰로 충전된 3개의 블랭크 (세포 무함유) 웰을 플레이팅하였다.
e. 37℃ 및 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다.
각각의 항체에 대해 플레이트 0 h, 2 h, 24 h (6개 플레이트):
2. 시험 물품 및 표준물 제조:
a. FBS가 없는 배지 (DMEM)를 사용하여 원액으로부터 15 mL의 10 nM (약 2x Kd) 방사성표지된 시험 물품을 제조하였다:
접합체 A 원액 = 0.421 mg/ml = 2.8 μM
15000 uL x 10 nM = 2.8 μM (x μL)
15 mL DMEM (FBS 없음) 중 53.6 μL의 접합체 A 스톡 항체
접합체 B 원액 = 0.448 mg/ml = 2.99 μM
15000 uL x 10 nM = 2.99 μM (x μL)
15 mL DMEM (FBS 없음) 중 50.2 μL의 접합체 B 스톡 항체
b. 튜브당 각각 800 μL의 3개의 표준 분취물을 제조하였다 (다음 날 용량 보정기 상에서 판독하였음).
3. 절차:
a. 플레이트로부터 배지를 제거하였다.
b. 혈청 고갈: FBS가 없는 신선한 배지 1 mL을 37℃에서 1시간 동안 각각의 웰에 첨가하였다.
c. 플레이트를 1 mL PBS로 1회 세척하였다 (멸균됨).
d. 시험 물품 500 μL을 모든 웰에 로딩하였다. 시험 물품을 첨가 15분 미만 전에 매질 중에서 제조하였다.
e. 플레이트를 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다.
f. 인큐베이션 후, 즉시 플레이트를 인큐베이터로부터 제거하고, 얼음 상에 두었다.
g. 플레이트를 하기와 같이 처리하였다:
1) 플레이트 2h 및 24h:
o 배지를 사전-표지된 감마-계수 튜브 (비-결합)로 옮겼다.
o 세포를 차가운 PBS (1 mL)로 1회 세척하고, 비-결합 튜브에 첨가하였다.
o 약산 세척 완충제 (pH = 4.6) (500 μL)를 모든 웰에 첨가하였다.
o 4℃에서 15초 인큐베이션하고, 용액을 사전-표지된 감마-계수 튜브 (막-결합) 내로 제거하였다.
o 1 mL 가온된 배지를 모든 웰에 첨가하고, 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 지정된 시간 (2시간 및 24시간) 동안 인큐베이션하였다.
2) 플레이트 0 h:
o 배지를 사전-표지된 감마-계수 튜브 (비-결합)로 옮겼다.
o 플레이트를 1 ml 차가운 PBS로 1회 세척하고, 비-결합 튜브에 첨가하였다.
o 500 μL 강산 세척 완충제 (pH = 2.5)를 웰에 첨가하였다.
o 얼음 상에서 5초 동안 인큐베이션하였다.
o 산 세척 완충제를 사전-표지된 감마-계수 튜브 (막-결합)로 수집하였다.
o 세포를 300 μL 1% 트리톤 X-100 완충제로 30초 동안 실온에서 가볍게 진탕시키면서 용해시켰다.
o 용해물 250 μL을 지정된 감마 계수 튜브 (내재화) 내로 옮겼다.
o 다음 날 감마 계수기 상에서 샘플 및 표준물을 계수하였다.
h. 인큐베이션 후
1) 플레이트 2h 및 24h:
o 플레이트를 얼음 상에 놓음으로써 다양한 시점에 인큐베이션을 중단하였다.
o 배지를 사전-표지된 감마-계수 튜브 (유출) 내로 옮겼다.
o 플레이트를 1 mL 차가운 PBS로 1회 세척하고, 유출 튜브에 첨가하였다.
o 500 μL 강산 세척 완충제 (pH = 2.5)를 웰에 첨가하였다.
o 얼음 상에서 5초 동안 인큐베이션하였다.
o 산 세척 완충제를 사전-표지된 감마-계수 튜브 (재순환)에 수집하였다.
o 세포를 300 μL 1% 트리톤 X-100으로 30초 동안 실온에서 가볍게 진탕시키면서 용해시켰다.
o 250 μL 용해물 세포를 지정된 감마 계수 튜브 (보유)로 옮겼다.
o 다음 날 감마 계수기 상에서 샘플 및 표준물을 계수하였다.
4. 분석
a. 이에 따라 비-결합, 막-결합, 내재화, 유출, 재순환 또는 보유 시험 물품의 백분율을 계산하였다.
i. 총 활성 계산:
· 유리 퍼센트 (비-결합; F) = CPM (비-결합)/CPM(비-결합 + 막-결합 + 내재화)
· 세포-회합 퍼센트 = 100 - 유리 퍼센트
· 내재화 퍼센트 = CPM (내재화)/CPM(비-결합 + 막-결합 + 내재화)
ii. 세포-연관 활성 계산:
0h (t=0) 플레이트의 경우
· 막-결합 퍼센트 = CPM (막-결합)/CPM(막-결합 + 내재화)
· 내재화 퍼센트 = CPM (내재화)/CPM(막-결합 + 내재화)
2, 24h 플레이트의 경우
· 막-결합 퍼센트 (t=0에서) = CPM (막-결합)/CPM(막-결합 + 유출 + 재순환 + 보유)
· 내재화 퍼센트 (t= 0에서) = CPM (유출 + 재순환 + 보유)/CPM(막-결합 + 유출 + 재순환 + 보유)
iii. 내재화 활성 계산 (t=2h 또는 24h):
· 유출 퍼센트 = CPM (유출)/CPM(유출 + 재순환 + 보유)
· 재순환 퍼센트 = CPM (재순환)/CPM(유출 + 재순환 + 보유)
· 보유 퍼센트 = CPM (보유)/CPM(유출 + 재순환 + 보유)
b. CPM (내재화) 및 CPM (보유)은 부피 (300/250)에 대해 조정될 필요가 있고, 24h 카운트는 표준을 사용하여 붕괴에 대해 조정될 필요가 있다.
c. 그래프패드 프리즘® 소프트웨어를 사용하여 세포-회합된 내재화 시험 물품 (ii; t=0) 및 보유 시험 물품 (iii; t=2 및 24시간)의 퍼센트를 인큐베이션 시간에 대해 플롯팅하였다.
내재화 연구로부터의 결과를 도 6a-6b 및 7a-7c에 제시하였다. 도 6a 및 6b에 제시된 바와 같이, 접합체 A 및 B 둘 다는 24시간에 약 70% 막-결합되었고, 약 30% 내재화되었으며, 2개의 접합체 사이에 유의한 차이는 없었다.
도 7a-7c에 나타난 바와 같이, 접합체 A 및 B 둘 다는 유사한 동역학을 나타내었다. 접합체 A와 비교하여, 접합체 B는 약간 더 높은 유출을 가졌다 (24시간에서 42% 대 26%). 보유 %는 24시간에 접합체 A (66%)와 비교하여 접합체 B (51%)에서 약간 더 낮았으며, 이는 접합체 B에 의한 더 높은 유출에 기인했을 수 있다.
실시예 8. 피하 U87-EGFRvIII 모델에서의 [177Lu]-화합물 C-항-EGFRvIII 접합체의 생체내 생체분포
U87-EGFRvIII 세포주 이종이식 마우스 모델을 사용하여 [177Lu]-DOTA-항-EGFRvIII 접합체의 생체내 생체분포를 평가하였다. 2종의 [177Lu]-DOTA-항-EGFRvIII 접합체, 즉 접합체 A 및 B를 화합물 C의 순수한 R 거울상이성질체 (실시예 4 참조), 항-EGFRvIII 항체 4E11의 2종의 인간화 변이체, 및 루테튬-177을 사용하여 합성하였다.
종양-보유 동물의 군에 [177Lu]-DOTA-항-EGFRvIII 접합체를 정맥내로 주사하였다. 용량은 2 μg (0.1 mg/kg)의 항체에 대해 약 9.6-9.8 마이크로퀴리 (μCi)/μg의 활성을 함유하였다. 주사 후 4시간, 24시간, 96시간 및 168시간에 동물을 안락사시켜 혈액, 심장, 장, 신장, 간, 폐, 비장, 종양, 소변 및 꼬리에서의 방사능의 수준을 결정하였다 (시점당 n = 3).
결과를 조직 그램당 주사된 용량의 백분율 (% ID/g)로서 표현하고, 도 8a 및 8b에 도시하였다 (각각 접합체 A 및 접합체 B에 대해). 두 접합체는 168시간에 걸친 혈액으로부터 방사능의 클리어런스, 정상 조직에서의 [177Lu]-DOTA-항-EGFRvIII의 낮은 흡수, 및 종양에서의 [177Lu]-DOTA-항-EGFRvIII의 높은 흡수를 나타내었다. 96시간에서의 우수한 종양 흡수가 접합체 둘 다에 대해 입증되었다. 예를 들어, 접합체 A 및 B는 피하 U87-EGFRvIII 모델에서 투여 후 96시간에 각각 약 88.6 ± 9.5% ID/g 및 약 85.5 ± 9.9% ID/g의 탁월한 종양 흡수를 나타내었다.
실시예 9. U87-EGFRvIII-GFP-Luc 동소 모델에서의 [177Lu]-화합물 C-항-EGFRvIII 접합체의 생체내 생체분포
U87-EGFRvIII-GFP-Luc 동소 모델을 사용하여, 방사성표지된 항-EGFRvIII 접합체, 즉 접합체 A 및 B의 생체내 생체분포를 평가하였다.
종양-보유 동물의 군에 [177Lu]-DOTA-항-EGFRvIII를 정맥내로 주사하였다. 용량은 2 μg (0.1 mg/kg)의 항체에 대해 약 9.6-9.8 마이크로퀴리 (μCi)/μg의 활성을 함유하였다. 주사 후 96시간에 동물을 안락사시켜 혈액, 종양, 정상 뇌, 비장, 간, 신장 및 꼬리에서의 방사능의 수준을 결정하였다 (접합체 A의 경우에 시점당 n = 10이고, 접합체 B의 경우에 시점당 n = 10임).
결과를 조직 그램당 주사된 용량의 백분율 (% ID/g)로서 표현하고, 도 9에 도시하였다. 두 접합체는 96시간에 [177Lu]-DOTA-항-EGFRvIII의 양호한 혈액 흡수, 정상 조직에서의 [177Lu]-DOTA-항-EGFRvIII의 낮은 흡수, 및 뇌 종양에서의 [177Lu]-DOTA-항-EGFRvIII의 높은 흡수를 나타내었다. 예를 들어, 접합체 A 및 B는 U87-EGFRvIII-GFP-Luc 동소 모델에서 투여 후 96시간에 각각 약 52.4 ± 2.9% ID/g 및 약 49.1 ± 2.6% ID/g의 탁월한 뇌 종양 흡수를 나타내었다. 높은 뇌 종양 흡수는 우수한 혈액-뇌 장벽 (BBB) 침투도를 나타내고, 이는 누출성 혈관계로 인한 것일 수 있다.
실시예 10. 동소 환자-유래 이종이식 (PDX) 모델에서의 [111In]-화합물 C-항-EGFRvIII 및 [111In]-화합물 C-IgG4의 생체내 생체분포
[111In]-화합물 C-항-EGFRvIII (상기 실시예 5 참조)의 표적 특이성 및 종양 흡수를 다양한 정도의 혈액-뇌 장벽 (BBB) 투과성을 갖는 동소 다형성 교모세포종 (GBM) PDX 모델을 사용하는 영상화 생체분포 연구에서 조사하였다. 모든 GBM 종양이 질환의 특징으로서 어느 정도의 BBB 투과성을 갖지만, 이는 종양 사이에서 및 심지어 동일한 종양 내에서도 상당히 달라질 수 있다. 큰 크기의 항체 (약 150 kDa)는 이들이 무손상 BBB를 가로지르는 것을 방해하고, 방사성표지된 항-EGFRvIII 면역접합체의 정맥내 투여는 GBM 종양으로의 전달을 위한 BBB 투과성에 좌우될 수 있다. [111In]-화합물 C-항-EGFRvIII의 정맥내 투여 후 종양 흡수의 정도를 특징화하기 위해, 영상화 생체분포 연구를 비교적 무손상 BBB를 갖는 GBM PDX 모델 (G06-GFP-Luc) 및 완전히 파괴된 BBB를 갖는 또 다른 모델 (G39-GFP-Luc)에서 수행하였다. 또한, 표적 특이성을 검증하기 위해, 비-표적화된 [111In]-화합물 C-IgG4 (상기 실시예 5 참조)의 생체분포를 또한 비교를 위해 평가하였다.
3 μL PBS 중 3x105 G06-GFP-Luc 또는 2.5x105 G39-GFP-Luc 세포의 두개내 주사에 의해 7-8주령 암컷 Balb/c 무흉선 누드 마우스에서 동소 GBM PDX 종양을 확립하였다. 세포를 정수리점으로부터 1 mm 후방, 시상 봉합사의 우측 1.5 mm, 및 2.5 mm의 깊이로 우측 뇌 반구 내로 주사하였다. 두개내 주사 후 13일에 생물발광 3D 단층촬영 (BLT)을 수행하여 종양의 존재를 확인하고 종양 부피를 결정하였다. PBS 중 150 mg/kg D-루시페린을 영상화 15분 전에 마우스에 복강내로 주사하였다. 마우스를 이소플루란으로 마취시키고, 영상화 베드 상에 놓았다. VECTor6CT SPECT/PET/CT/OI 영상화 시스템의 광학 영상화 (OI) 모듈을 사용하여 영상을 획득하고, MiLabs BLT Recon 1.0 소프트웨어를 사용하여 재구성하였다. 종양 부피를 이말리틱스(Imalytics) 소프트웨어 및 관심 영역 (ROI) 분석을 사용하여 정량화하였다. 각각의 군이 비교적 동등한 분포의 종양 부피를 갖도록 마우스를 종양 크기에 기초하여 군으로 분류하였다.
종양-보유 마우스에게 20 mM 시트르산나트륨 pH 5.5, 0.82% NaCl, 0.01% 트윈(Tween) 80 중에 제제화된 100 μCi의 방사능 (10.8-11.8 μg의 항체)을 함유하는 0.2 mL의 [111In]-화합물 C-항-EGFRvIII 또는 [111In]-화합물 C-IgG4를 외측 꼬리 정맥을 통해 정맥내로 주사하였다 (n= 4마리 마우스/화합물). 주사 후 96시간에 VECTor6CT SPECT/PET/CT/OI 영상화 시스템을 사용하여 BLT 및 SPECT/CT 영상화를 수행하여 조직 생체분포를 결정하였다. 영상을 MiLabs BLT Recon 1.0 소프트웨어를 사용하여 재구성하고, 종양/정상 조직 흡수를 PMOD 소프트웨어를 사용하여 결정하였다. 흡수는 조직의 입방 센티미터당 주사된 용량의 백분율 (%ID/cc)로서 계산하였다.
파괴된 BBB를 수반한 G39-GFP-Luc PDX 모델에서, [111In]-화합물 C-항-EGFRvIII 생체분포 데이터는 96시간에서 50.2 ± 13.6 %ID/cc의 높은 종양 흡수를 입증하였다. 그와 비교하여, 비-표적화 [111In]-화합물 C-IgG4는 96시간에서 17.4 ± 1.2 %ID/cc의 종양 흡수를 가졌으며, 이는 대부분의 [111In]-화합물 C-항-EGFRvIII 종양 흡수가 표적 특이적임을 확인시켜 준다. 중요하게는, 정상 뇌는 [111In]-화합물 C-항-EGFRvIII의 종양-특이적 흡수의 추가의 증거를 제공하는 매우 낮은 흡수 (1.6-2.1% ID/cc)를 나타내었다 (도 10b 및 11d). 평가된 모든 다른 정상 기관은 혈액 풀의 대부분을 나타내는 고도로 관류된 기관, 예컨대 간 및 심장을 제외하고는 흡수 ≤10%ID/cc를 가졌다.
비교적 무손상 BBB를 갖는 G06-GFP-Luc PDX 모델에서, [111In]-화합물 C-항-EGFRvIII 생체분포 데이터는 96시간에서 10.4 ± 1.6% ID/cc의 종양 흡수를 입증한 반면, 비-표적화 [111In]-화합물 C-IgG4는 96시간에서 9.4 ± 1.7% ID/cc의 종양 흡수를 가졌다 (도 11b 및 11d). 이들 결과는 상기 모델에서 항체가 무손상 BBB를 통과할 수 없다는 것과 일치한다. 정상 조직 흡수는 혈액 풀의 대부분을 나타내는 간 및 심장과 같은 고도로 관류된 기관을 제외하고는 종양의 흡수와 유사하였다 (<10 %ID/cc).
영상화 생체분포 연구의 결과는 [111In]-화합물 C-항-EGFRvIII의 흡수가 정상 조직에서 최소 오프-타겟 흡수와 함께 고도로 종양-특이적이라는 것을 확인시켜 준다. [111In]-화합물 C-항-EGFRvIII의 높은 종양 흡수는 고도로 파괴된 BBB를 갖는 종양에서 정맥내 투여를 통해 달성될 수 있지만, 흡수는 무손상 BBB에 의해 제한된다는 것이 추가로 입증되었다.
실시예 11. 동소 교모세포종 마우스 모델에서의 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII의 단일-용량 방사선요법 효능
세포주 U87-EGFRvIII-GFP-Luc로 생성된 동소 다형성 교모세포종 (GBM) 모델 또는 환자-유래 이종이식 (PDX) 모델, G06-GFP-Luc을 사용하여 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII (상기 실시예 5 참조)의 단일-용량 방사선요법 효능을 결정하였다. GBM 세포주 및 PDX 세포 둘 다를 생체내 및 생체외 영상화 목적을 위해 녹색 형광 단백질 (GFP) 및 루시페라제 (Luc)를 발현하는 렌티바이러스 입자로 형질도입하였다. 3 μL PBS 중 2x104 U87-EGFRvIII-GFP-Luc 세포 또는 3x105 G06-GFP-Luc의 두개내 주사에 의해 7-8주령 암컷 Balb/c 무흉선 누드 마우스에서 GBM 뇌 종양을 확립하였다. 세포를 정수리점으로부터 1 mm 후방, 시상 봉합사의 우측 1.5 mm, 및 2.5 mm의 깊이로 우측 뇌 반구 내로 주사하였다. 두개내 주사 후 8-10일에 생물발광 영상화 (BLI)를 수행하여 종양의 존재를 확인하고 종양 부담을 정량화하였다. PBS 중 150 mg/kg D-루시페린을 영상화 15분 전에 마우스에 복강내로 주사하였다. BLI 신호를 종양 주위에 그려진 관심 영역 (ROI)에서 정량화하고, 면적 평균 신호로서 표현하였다. 면적 평균 신호는 종양 부담의 측정을 나타내고, 평균 BLI 종양 신호가 군에 걸쳐 동등하도록 마우스를 군으로 분류하였다.
요법을 두개내 주사 후 10-13일에 개시하고, 종양을 영상화에 의해 확인하였다. 종양-보유 마우스에게 20 mM 시트르산나트륨 pH5.5, 0.82% NaCl, 0.01% 트윈 80 중에 제제화된 0.2 mL [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII 또는 대조군 마우스에 대한 비히클 단독을 외측 꼬리 정맥을 통해 정맥내로 (IV) 주사하였다 (n=5/군). 악티늄-225 방사성표지된 시험 물품은 100-200 nCi의 활성 (최대 4 μg의 항체 단백질/용량)을 함유하였다. 마우스를 1주에 3회 칭량하고, 뇌 종양 발생의 징후, 예컨대 구부린 자세, 기면, 발작, 운동성 장애, 마비 또는 두개골 비대에 대해 매일 모니터링하였다. U87-EGFRvIII-GFP-Luc 세포주 모델의 경우, BLI를 사용하여 종양 부담 및 시간 경과에 따른 요법에 대한 반응을 모니터링하였다. 마우스를 상기 기재된 바와 같이 1주에 1회 영상화하고, BLI 신호를 치료전 면적 평균 종양 신호로부터의 배수 변화로서 플롯팅하여 치료 반응을 결정하였다. 인간 종점에 도달하거나 (>20% 체중 감소, BC2) 또는 뇌 종양의 징후 (상기 기재된 바와 같음)가 발생한 경우에 동물을 안락사시켰다. 전체 생존을 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 생존 곡선 상에 플롯팅하였다. 로그 순위 (만텔-콕스(Mantel-Cox)) 시험을 사용하여 군들 사이의 생존을 통계적으로 비교하고 p-값을 결정하였다. 모델들 사이의 치료 반응의 해석을 용이하게 하기 위해, 주어진 치료에 대한 생존 이익을 비히클 대조군 대비 치료를 받는 마우스에 대한 중앙 생존기간의 비를 결정함으로써 계산하였다.
U87-EGFRvIII-GFP-Luc 세포주 모델에서의 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII의 방사선요법 연구는 100 nCi 및 200 nCi 용량 둘 다에서 유의한 치료 효능을 입증하였다. BLI 분석은 종양 성장이 비히클 대조군과 비교하여 유의하게 억제되었음을 나타내었다 (도 12a). 200 nCi 용량 군에서, 종양은 제28일까지 거의 완전한 종양 억제를 나타내었다. 치료에 반응하는 종양 성장의 억제는 유의한 생존 이익을 유발하였다. 비히클 대조군의 중앙 생존기간은 100 nCi 군에서의 43일 및 200 nCi 군에서의 55일과 대비하여 17일이었고, 이는 각각 2.5 및 3.2의 생존 이익으로 해석된다. 이들 생존 차이는 통계적으로 유의하였다 (p<0.05, 만텔-콕스 시험) (도 12b; 도 12c). 유사하게, G06-GFP-Luc PDX 모델은 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII를 사용한 치료에 반응하여 유의한 생존 이익을 나타내었다. 비히클 대조군의 중앙 생존기간은 26일인 반면, 100 nCi 및 200 nCi 용량 군은 각각 39일 및 80일의 중앙 생존기간을 가졌다. 비히클 대조군과 비교하여, 200 nCi 용량 군은 3.1의 유의한 생존 이익을 나타낸 반면, 100 nCi 군은 1.5의 보다 보통의 생존 이익을 나타내었다 (도 13a 및 13b). 집합적으로, 이들 결과는 단일-용량 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII가 다중 동소 GBM 이종이식 모델에서 종양 성장을 용량-의존성 방식으로 유의하게 늦추고 생존을 연장시킨다는 것을 입증한다.
실시예 12. 동소 교모세포종 마우스 모델에서의 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII의 분획화된 다중-용량 방사선요법 효능
[225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII의 방사선요법 효능을 동소 GBM 환자-유래 이종이식 (PDX) 모델을 사용하여 검사하였다. [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII (상기 실시예 5 참조) 또는 [225Ac]-화합물 C-IgG4의 다중 분획화된 용량을 단일 용량 투여와 비교하여 치료 효능을 최대화하기 위한 최적 투여 요법을 결정하였다. 투여 스케줄 이외에, 단일 용량 방사선요법 효능 연구에 대해 상기 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
동소 G39-GFP-Luc 종양을 보유하는 마우스에게 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII를 100, 200, 또는 400 nCi의 단일 용량 또는 하기와 같이 분획화된 400 nCi의 총 누적 방사화학적 용량: 4주 동안 매주 1회 투여되는 100 nCi (100 nCix4) 또는 2주마다 2회 투여되는 200 nCi (200 nCix2) 용량으로 투여하였다. 각각의 용량은 8.6 μg의 항체 단백질을 함유하였다. 대조군에게 200 nCi 또는 400 nCi의 방사능을 함유하는 [225Ac]-화합물 C-IgG4의 단일 용량 (9.4 μg 항체 단백질/용량) 또는 비히클 단독을 투여하였다 (n=5마리 마우스/군).
생존 분석은 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII를 사용한 치료에 반응하여 생존의 용량-의존성 증가를 나타내었다. 400 nCi [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII 단일-용량 또는 분획화된 용량 군의 생존 이익은 각각 400 nCi 단일 용량, 분획화된 200 nCix2, 및 분획화된 100 nCix4 용량 군에 대해 3.1, 3.2 및 3.1의 생존 이익 비와 대등하였다. 이들 결과는 효능이 투여 스케줄에 관계없이 총 방사능 용량과 관련되었음을 추가로 입증하였다. 또한, 400 nCi 단일-용량 [225Ac]-화합물 C-IgG4의 생존 이익은 유의하게 더 낮았으며 (1.9), 이는 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII의 치료 효능의 적어도 일부가 표적-매개된다는 것을 확인시켜 준다 (도 14a 및 14b).
실시예 13. 표준 관리와 조합된 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII의 치료 효능
GBM 환자에 대한 표준 관리 (SoC)는 최대 외과적 절제, 이어서 화학요법제 테모졸로미드 (TMZ)와 조합된 외부 빔 방사선 요법 (EBRT)이다. 단일-작용제와 비교하여 조합된 SoC 및 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII의 치료 효능을 동소 G06-GFP-Luc GBM PDX 모델을 사용하여 시험하였다. 종양을 이식하고, 상기 기재된 바와 같이 BLT 영상화에 의해 확인하였다. 종양 보유 마우스를 단일 정맥내 용량 (0.2 mL)의 비히클 단독, 200 nCi 용량 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII, 또는 TMZ (25 mg/kg가 경구 위관영양을 통해 5일 동안 매일 투여됨)와 조합된 200 nCi 용량 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII으로 치료하였다. 2개의 추가의 치료군 (SoC 단독 및 조합군)은 25 mg/kg 테모졸로미드 (EBRT 1시간 전에 경구 위관영양을 통해 5일 동안 매일 투여됨)와 조합하여 연속 5일 동안 1일 1회 2 Gy EBRT를 받았다. 이어서 조합물 군은 후속적으로 EBRT/TMZ 치료의 완료 6일 후에 200 nCi [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII의 단일 용량을 받았다 (n=5마리 마우스/군).
생존 분석은 SoC 단독 (2 Gyx5 EBRT+ 25 mg/kg TMZ), 200 nCi [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII, 및 TMZ와 조합된 200 nCi [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII가 모두 비히클 대조군과 비교하여 생존을 유의하게 연장시켰으며, 모두 대략 2의 생존 이익을 가짐을 입증하였다. 그러나, SoC (2 Gyx5 EBRT + 25 mg/kg TMZ)에 이어서 200 nCi [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII를 사용한 조합 치료는 SoC 단독, [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII, 또는 TMZ와 조합된 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII (대략 2의 생존 이익)과 비교하여 생존에서 유의한 연장 (3.6의 생존 이익)을 유발하였다 (도 15a 및 15b). 이들 결과는 [225Ac]-화합물 C-항-EGFRvIII 및 SoC의 조합 치료가 GBM에 대한 통상적인 SoC 단독 치료와 비교하여 유의한 생존 이익을 제공할 수 있음을 시사한다.
다른 실시양태
본 발명은 그의 구체적 실시양태와 관련하여 기재되었지만, 추가의 변형이 가능하며, 본 출원은 일반적으로 본 발명의 원리를 따르고, 본 발명이 속하는 기술분야 내의 공지되거나 통상의 실시 내에 있으며 상기 본원에 제시된 본질적인 특색에 적용될 수 있는 본 개시내용으로부터의 이러한 일탈을 포함하는 본 발명의 임의의 변형, 사용 또는 적합화를 포괄하는 것으로 의도된다는 것이 이해될 것이다.
표 5. 아미노산 서열.
일부 서열에서, CDR은 밑줄표시되고, 볼드체로 표시된다.
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
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Figure pct00048
서열목록 전자파일 첨부

Claims (47)

  1. 화학식 I의 구조를 포함하는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00049

    여기서
    A는 킬레이트화 모이어티 또는 그의 금속 착물이고,
    B는 표피 성장 인자 수용체 변이체 III (EGFRvIII) 또는 그의 단편에 결합할 수 있는 표적화 모이어티이고, 여기서 EGFRvIII 또는 그의 단편은 서열식별번호: 119의 아미노산 잔기 1 내지 76으로 이루어진 펩티드를 포함하고;
    L1은 결합, C=O, C=S, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
    n은 1 내지 5 (경계 포함)의 정수이고;
    L2는 각각 독립적으로 하기 화학식 II의 구조를 갖고:
    Figure pct00050

    여기서
    X1은 -C(O)NR1-*, -NR1C(O)-*, -C(S)NR1-*, -NR1C(S)-*, -OC(O)NR1-*, -NR1C(O)O-*, -NR1C(O)NR1-, -CH2-Ph-C(O)NR1-*, -NR1C(O)-Ph-CH2-*, -CH2-Ph-NH-C(S)NR1-*, -NR1C(S)-NH-Ph-CH2-*, -O-, 또는 -NR1-이고, 여기서 "*"는 L3에 대한 부착 지점을 나타내고, R1은 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
    L3은 임의로 치환된 C1-C50 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C50 헤테로알킬이고;
    Z1은 -CH2-#, -C(O)-#, -C(S)-#, -OC(O)-#, -C(O)O-#, -NR2C(O)-#, -C(O)NR2-# 또는 -NR2-#이고, 여기서 "#"는 B에 대한 부착 지점을 나타내고, R2는 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 아릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이다.
  2. 제1항에 있어서, 상기 킬레이트화 모이어티가 DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산), DOTMA (1R,4R,7R,10R)-α, α', α", α'"-테트라메틸-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산, DOTAM (1,4,7,10-테트라키스(카르바모일메틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸), DOTPA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라 프로피온산), DO3AM-아세트산 (2-(4,7,10-트리스(2-아미노-2-옥소에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1-일)아세트산), DOTA-GA 무수물 (2,2',2"-(10-(2,6-디옥소테트라히드로-2H-피란-3-일)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-트리일)트리아세트산, DOTP (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라(메틸렌 포스폰산)), DOTMP (1,4,6,10-테트라아자시클로데칸-1,4,7,10-테트라메틸렌 포스폰산, DOTA-4AMP (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라키스(아세트아미도-메틸렌포스폰산), CB-TE2A (1,4,8,11-테트라아자비시클로[6.6.2]헥사데칸-4,11-디아세트산), NOTA (1,4,7-트리아자시클로노난-1,4,7-트리아세트산), NOTP (1,4,7-트리아자시클로노난-1,4,7-트리(메틸렌 포스폰산), TETPA (1,4,8,11-테트라아자시클로테트라데칸-1,4,8,11-테트라프로피온산), TETA (1,4,8,11-테트라아자시클로테트라데칸-1,4,8,11-테트라 아세트산), HEHA (1,4,7,10,13,16-헥사아자시클로헥사데칸-1,4,7,10,13,16-헥사아세트산), PEPA (1,4,7,10,13-펜타아자시클로펜타데칸-N,N',N",N"',N""-펜타아세트산), H4옥타파 (N,N'-비스(6-카르복시-2-피리딜메틸)-에틸렌디아민-N,N'-디아세트산), H2데드파 (1,2-[[6-(카르복시)-피리딘-2-일]-메틸아미노]에탄), H6포스파 (N,N'-(메틸렌포스포네이트)-N,N'-[6-(메톡시카르보닐)피리딘-2-일]-메틸-1,2-디아미노에탄), TTHA (트리에틸렌테트라민-N,N,N',N",N"',N"'-헥사아세트산), DO2P (테트라아자시클로도데칸 디메탄포스폰산), HP-DO3A (히드록시프로필테트라아자시클로도데칸트리아세트산), EDTA (에틸렌디아민테트라아세트산), 데페록사민, DTPA (디에틸렌트리아민펜타아세트산), DTPA-BMA (디에틸렌트리아민펜타아세트산-비스메틸아미드), 옥타덴테이트-HOPO (옥타덴테이트 히드록시피리디논) 및 포르피린으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물.
  3. 제2항에 있어서, 하기 화학식에 의해 나타내어지는 화합물:
    Figure pct00051

    여기서 Y1은 -CH2OCH2(L2)n-B, C=O(L2)n-B, 또는 C=S(L2)n-B이고, Y2는 -CH2CO2H이거나; 또는
    Y1은 H이고, Y2는 L1-(L2)n-B이다.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, L1이
    Figure pct00052
    이고,
    여기서 RL은 수소 또는 -CO2H인 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    금속 착물이 Bi, Pb, Y, Mn, Cr, Fe, Co, Zn, Ni, Tc, In, Ga, Cu, Re, 란타나이드 및 악티나이드로 이루어진 군으로부터 선택된 금속을 포함하거나; 또는
    금속 착물이 43Sc, 44Sc, 47Sc, 55Co, 60Cu, 61Cu, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 66Ga, 67Ga, 68Ga, 82Rb, 86Y, 87Y, 89Zr, 90Y, 97Ru, 99Tc, 99mTc, 105Rh, 109Pd, 111In, 117mSn, 133La, 134Ce, 149Pm, 149Tb, 153Sm, 166Ho, 177Lu, 186Re, 188Re, 198Au, 199Au, 201Tl, 203Pb, 211At, 212Pb, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 225Ac, 227Th, 및 229Th로 이루어진 군으로부터 선택된 방사성핵종을 포함하는 것인 화합물.
  6. 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, Y1이 H인 화합물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, X1이 -C(O)NR1-* 또는 -NR1C(O)-*이고, "*"가 L3에 대한 부착 지점을 나타내고, R1이 H인 화합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, Z1이 -CH2-인 화합물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, n이 1이고, L3이 (CH2CH2O)2-20을 포함하는 것인 화합물.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, n이 1이고, L3이 (CH2CH2O)m(CH2)w이고, 여기서 m 및 w는 각각 독립적으로 0 내지 10 (경계 포함)의 정수이고, m 및 w 중 적어도 하나는 0이 아닌 것인 화합물.
  11. 제1항에 있어서, A-L-이 하기 구조 중 하나 또는 그의 금속 착물을 포함하는 것인 화합물:
    Figure pct00053

    Figure pct00054
  12. 제1항에 있어서, 방사성면역접합체가 하기 구조, 또는 그의 금속 착물을 포함하는 것인 화합물:
    Figure pct00055
    .
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, A가 킬레이트화 모이어티의 금속 착물이고, 금속 착물이 방사성핵종을 포함하는 것인 화합물.
  14. 제13항에 있어서, 방사성핵종이 68Ga, 111In, 177Lu 또는 225Ac인 화합물.
  15. 제13항에 있어서, 방사성핵종이 225Ac인 화합물.
  16. 제13항에 있어서, 방사성핵종이 아스타틴-211 (211At), 비스무트-212 (212Bi), 비스무트-213 (213Bi), 악티늄-225 (225Ac), 라듐-223 (223Ra), 납-212 (212Pb), 토륨-227 (227Th) 및 테르븀-149 (149Tb) 또는 그의 자핵종으로 이루어진 군으로부터 선택된 알파 방출체인 화합물.
  17. 제16항에 있어서, 알파 방출체가 225Ac 또는 그의 자핵종인 화합물.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 모이어티가 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 것인 화합물.
  19. 제18항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 하기를 포함하는 것인 화합물:
    a. 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 9의 CDRL2 서열 및 서열식별번호: 10의 CDRL3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 13의 CDRH1 서열, 서열식별번호: 14의 CDRH2 서열 및 서열식별번호: 15의 CDRH3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    b. 서열식별번호: 18에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 19에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 23에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 25에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    c. 서열식별번호: 28에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 29에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 30에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 33에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 34에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 35에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    d. 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 39에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 40에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 43에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 44에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 45에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    e. 서열식별번호: 48에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 49에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 50에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 53에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 54에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 55에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    f. 서열식별번호: 58에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 59에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 60에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 63에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 64에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 65에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    g. 서열식별번호: 68에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 69에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 70에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 78에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 79에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 80에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는
    h. 서열식별번호: 73에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 74에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 75에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 78에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 79에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 80에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역.
  20. 제18항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 하기를 포함하는 것인 화합물:
    a. 서열식별번호: 118에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 118과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 116에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 116과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    b. 서열식별번호: 115에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 115와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 116에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 116과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는
    c. 서열식별번호: 118에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 118과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 62에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 62와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역.
  21. 제18항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 하기를 포함하는 것인 화합물:
    a. 서열식별번호: 7에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 7과 실질적으로 동일한 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 12에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 12와 실질적으로 동일한 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    b. 서열식별번호: 17에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 17과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 22에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 22와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    c. 서열식별번호: 27에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 27과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 32에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 32와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    d. 서열식별번호: 37에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 37과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 42에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 42와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    e. 서열식별번호: 47에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 47과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 52에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 52와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    f. 서열식별번호: 57에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 57과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 62에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 62와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    g. 서열식별번호: 67에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 67과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 77에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 77과 실질적으로 동일한 아미노산 서열, 서열식별번호: 92에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 92와 실질적으로 동일한 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 102에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 102와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는
    h. 서열식별번호: 72에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 72와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 77에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 77과 실질적으로 동일한 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 92에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 92와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역.
  22. 제18항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 하기를 포함하는 것인 화합물:
    a. 서열식별번호: 108에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 108과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열식별번호: 107에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 또는 서열식별번호: 107과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 또는
    b. 서열식별번호: 110에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 110과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열식별번호: 109에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나 서열식별번호: 109와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄.
  23. 제19항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL1, 서열식별번호: 39에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL2 및 서열식별번호: 40에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 43에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, 서열식별번호: 44에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH2 및 서열식별번호: 45에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 화합물.
  24. 제23항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 하기를 포함하는 것인 화합물:
    a. 서열식별번호: 172에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 175에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역;
    b. 서열식별번호: 173에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 175에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역;
    c. 서열식별번호: 174에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 175에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역;
    d. 서열식별번호: 172에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 176에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역;
    e. 서열식별번호: 173에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 176에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역;
    f. 서열식별번호: 174에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 176에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역;
    g. 서열식별번호: 172에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 177에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역;
    h. 서열식별번호: 173에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 177에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 또는
    i. 서열식별번호: 174에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 177에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역.
  25. 제24항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 하기를 포함하는 것인 화합물:
    a. 서열식별번호: 174에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 176에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 또는
    b. 서열식별번호: 172에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 177에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역.
  26. 제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 하기를 포함하는 것인 화합물:
    a. 서열식별번호: 180에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 183에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역;
    b. 서열식별번호: 181에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 183에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역;
    c. 서열식별번호: 182에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 183에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역;
    d. 서열식별번호: 180에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 184에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역;
    e. 서열식별번호: 181에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 184에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역;
    f. 서열식별번호: 182에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 184에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역;
    g. 서열식별번호: 180에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 185에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역;
    h. 서열식별번호: 181에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 185에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역; 또는
    i. 서열식별번호: 182에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역 및 서열식별번호: 185에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역.
  27. 제18항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 인간 항체, 단일 쇄 항체, 다중특이적 항체 또는 그의 항원-결합 단편인 화합물.
  28. 제18항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 인간화 모노클로날 항체인 화합물.
  29. 제1항 내지 제25항, 제27항 및 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 인간 IgG1 불변 영역을 포함하는 것인 화합물.
  30. 제1항 내지 제21항, 제23항 내지 제25항, 제27항 및 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 인간 IgG2 불변 영역을 포함하는 것인 화합물.
  31. 제1항 내지 제22항 및 제24항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 인간 IgG4 불변 영역을 포함하는 것인 화합물.
  32. 제26항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 인간 IgG4(S228P) 불변 영역을 포함하는 것인 화합물.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 항원-결합 단편이 scFv, Fab, Fab' 또는 (Fab')2를 포함하는 것인 화합물.
  34. 제1항에 있어서, 하기 구조를 포함하는 화합물:

    여기서 은 EGFRvIII 또는 그의 단편에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.
  35. 제34항에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 리신 잔기의 측쇄 아미노 기를 통해 A-L-에 연결되는 것인 화합물.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 화합물 및 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  37. 암의 방사선 치료 계획 및/또는 방사선 치료를 필요로 하는 대상체에게 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제36항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암의 방사선 치료 계획 및/또는 방사선 치료 방법.
  38. EGFRvIII를 발현하는 세포를 포함하는 암의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제36항의 제약 조성물을 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, EGFRvIII를 발현하는 세포를 포함하는 암을 치료 또는 예방하는 방법.
  39. EGFRvIII를 발현하는 세포를 포함하는 암의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제36항의 제약 조성물의 제1 용량을 방사선 치료 계획에 유효한 양으로 투여한 다음, 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제36항의 제약 조성물의 후속 용량을 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, EGFRvIII를 발현하는 세포를 포함하는 암을 치료 또는 예방하는 방법.
  40. 제39항에 있어서, 제1 용량으로 투여되는 화합물 또는 제약 조성물 및 후속 용량으로 투여되는 화합물 또는 제약 조성물이 동일한 것인 방법.
  41. 제39항에 있어서, 제1 용량으로 투여되는 화합물 또는 제약 조성물 및 후속 용량으로 투여되는 화합물 또는 제약 조성물이 상이한 것인 방법.
  42. 제37항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 다형성 교모세포종 또는 암종인 방법.
  43. 제37항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 항증식제, 방사선 증감제 또는 면역조정제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  44. 제43항에 있어서, 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제36항의 제약 조성물을 외부 빔 방사선의 부재 또는 존재 하에 항증식제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는 방법.
  45. 제44항에 있어서, 항증식제가 테모졸로미드 (TMZ)인 방법.
  46. 제38항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 치료 유효량의 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제36항의 제약 조성물을 다중 용량으로 투여하는 것인 방법.
  47. 제38항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 치료 유효량의 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제36항의 제약 조성물을 단일 용량으로 투여하는 것인 방법.
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JP2022511471A (ja) * 2018-12-03 2022-01-31 フュージョン ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 放射性免疫複合体とｄｎａの損傷および修復阻害剤の併用療法
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MX2022008557A (es) * 2020-01-10 2022-08-08 Fusion Pharmaceuticals Inc Inmunoterapia sostenida.
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