KR20240086417A - 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 전립선암 예방, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents

벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 전립선암 예방, 개선 또는 치료용 조성물 Download PDF

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김인우
반유진
최라영
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Abstract

본 발명은 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 전립선암 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 벼메뚜기 열수 추출물은 전립선암세포의 세포 성장을 억제할 뿐만 아니라, 세포막 공격 및 괴사를 유도한다는 것을 실험적으로 확인하였다. 이는 본 발명의 벼메뚜기 열수 추출물이 전립선암에 대한 항암 활성이 우수하다는 것을 의미하는 바, 전립선암의 예방, 개선 및 치료 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.

Description

벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 전립선암 예방, 개선 또는 치료용 조성물{Composition for preventing, improving or treating prostate cancer containing hot water extract of Oxya chinensis}
본 발명은 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 전립선암 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
벼메뚜기(Oxya chinensis sinuosa)는 메뚜기목 메뚜기과에 속하는 곤충으로 몸길이는 약 21 ~ 35 mm이며 성충은 8~10월 중에 나타난다. 연 1회 발생하며, 땅 속에서는 알무더기로 월동하는데, 알무더기는 아교질의 엷은 막으로 싸여 있다. 벼메뚜기는 주로 벼과 식물의 잎을 먹는 곤충으로, 대발생할 경우 배추를 비롯한 다른 농작물에도 피해를 준다. 농약의 대량 살포와 환경오염으로 보기가 힘들어졌지만 최근에는 오히려 기호 식품과 간식용으로 관심이 증대하면서 대량 사육을 시도하고 있다.
예로부터 벼메뚜기는 기침, 천식, 백일해, 기관지염에 효능이 있고 중풍과 경련을 치료하는데 도움을 주며 구황곤충으로 이용되어 왔다. 벼메뚜기에 대한 국내 연구로는 메뚜기류 추출물의 염증 조절작용 및 세포사멸보호 효과, LPS로 염증이 유도된 RAW264.7 세포에 벼메뚜기 에탄올 추출물을 처리하여 벼메뚜기의 항염증 효능에 대한 연구, 벼메뚜기 건제품중의 지질열화에 함유색소성분이 미치는 영향, 벼메뚜기 단백질의 영양가에 관한 연구 등이 있으나, 다른 활성에 대한 연구는 미흡한 실정이다.
한편, 전립선암은 서양의 남성 암환자에서 가장 흔히 진단되는 질병으로 2016년 기준 미국에서 암환자의 21%, 암으로 인한 사망의 8%를 차지하는 암이다. 우리나라의 경우 2016년 기준 11,800명에게 전립선암이 발생했고 이는 남성에서 전체 암의 9.8%를 차지하여 4번째로 높다. 2016년 기준으로 우리나라에서 전립선암의 유병자수는 77,635명으로 남성에서 전체 암의 약 10.2%를 차지하며 3번째로 높다. 전립선암의 병인론은 아직 완전히 밝혀지지 않았으며, 생물학적, 환경학적 요인 중에서 연령, 인종, 가족력, 유전적 인자, 생활양식, 사회경제학적 지위, 식이가 전립선암에 중요하다고 알려져 있다. 전립선암은 주로 40세 이상에서 발생하며 특히, 70~74세 사이에 가장 많이 발생한다.
전립선암의 치료에는 전립선 절제술, 항암요법, 방사선 요법, 호르몬 요법(Androgen deprivation therapy, ADT) 등이 있다. 그러나 이러한 치료 전략에도 불구하고 거세저항성 전립선암, 전이로 인한 사망이 발생한다. 특히, 호르몬 요법의 경우 전립선암 세포의 내성 발생으로 인한 거세저항성 전립선암으로 진행되게 된다. 이러한 단계에서의 치료로 17alpha-monooxygenase의 효소 활성을 억제하여 정소와 부신에서 남성호르몬의 생성을 억제시키는 아비라테론 아세테이트(abiraterone acetate), 미세소관(microtubule)을 안정화시켜 세포주기 정지를 유발하여 세포사를 유발하는 도세탁셀(docetaxel) 등 다양한 기전의 치료 방법이 승인되어 사용되고 있다. 이러한 약물들은 수술적 치료, 방사선 치료 등과 함께 유의미한 효과를 보여주고 있으나 아직까지 전립선암을 완전히 치료하지 못하고 있으며, 연구 결과도 일관되지 않아 일부 연구에서는 도세탁셀 항암치료의 효과가 나타나지 않음이 보고된 바도 있다.
따라서 새로운 전립선암 치료 후보 물질에 대한 요구가 점점 증가하는 실정이다.
이에 본 발명자들은 새로운 전립선암 치료 후보 물질을 탐색하던 중 벼메뚜기 열수 추출물의 전립선암에 대한 우수한 항암 활성을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은, 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 전립선암 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은, 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 항암 보조제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 전립선암세포 괴사 유도용 시약 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 전립선암 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 전립선암 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 항암 보조제 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 전립선암세포 괴사 유도용 시약 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 벼메뚜기 열수 추출물은 전립선암세포의 세포 성장을 억제할 뿐만 아니라, 세포막 공격 및 괴사를 유도한다는 것을 실험적으로 확인하였다. 이는 본 발명의 벼메뚜기 열수 추출물이 전립선암에 대한 항암 활성이 우수하다는 것을 의미하는 바, 전립선암의 예방, 개선 및 치료 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.
도 1은 MTS assay를 통해 본 발명의 벼메뚜기 열수 추출물의 전립선암세포 성장 억제 효과를 확인한 결과를 나타내는 도이다.
도 2는 Acridine orange/ethidium bromide staining을 통해 전립선암세포에서 벼메뚜기 열수 추출물의 작용기작을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 유세포 분석을 통해 전립선암세포에서 벼메뚜기 열수 추출물의 작용기작을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 양태에 따르면, 본 발명은 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 전립선암 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 약학적 조성물, 식품 조성물 또는 건강기능식품 조성물일 수 있다.
본 발명에 있어서, 추출물은 적절한 용매를 이용하여 벼메뚜기로부터 추출한 것이며, 예를 들어 벼메뚜기의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함한다. 또한, 상기 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.
본 발명의 조성물의 유효성분인 벼메뚜기 열수 추출물은 통상적인 추출 방법에 의해 얻을 수 있고 또는 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있다.
상기 벼메뚜기 열수 추출물은 당업계에서 알려진 통상의 방법으로 가열 및 여과하여 액상물을 얻을 수 있으며, 또는 추가로 용매를 증발, 분무건조 또는 동결건조 할 수도 있다. 또한 상기 벼메뚜기 열수 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조할 수도 있다. 또한 상기 추출물 또는 분획물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획으로도 얻을 수 있다.
따라서 본 발명에서 사용되는 상기 벼메뚜기 열수 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출물, 분획물 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.
본 발명의 구체예에서, 상기 벼메뚜기 열수 추출물은 농도가 1 내지 10000 μg/ml인 것이 바람직하고, 더 바람직하게는 100 내지 7000 μg/ml, 더욱 바람직하게는 1000 내지 4000 μg/ml일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 구체예에서, 상기 벼메뚜기 열수 추출물은 40 내지 100℃ 조건으로 추출된 것이 바람직하고, 50 내지 70℃ 조건으로 추출된 것이 더 바람직하고, 가장 바람직하게는 60℃로 추출된 것일 수 있다.
본 발명의 실시예에서는 벼메뚜기 성충 분말을 물을 용매로 하여, 60℃에서 24시간 동안 추출하였다.
본 발명의 구체예에서, 상기 벼메뚜기 열수 추출물은 건조된 것일 수 있고, 더 바람직하게는 감압건조된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 조성물이 약학적 조성물로 이용되는 경우, 본 발명의 약학적 조성물은 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예컨대, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형으로 제형화할 수 있고, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 벼메뚜기 열수 추출물과 함께 전립선암 예방 또는 치료 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용 가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용 가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1 ~ 90 중량부 포함되는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 실제 임상투여 시에 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제할 수 있으며, 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌에 개시되어 있는 것을 이용하는 것이 바람직하다.
상기 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 또한, 상기 경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
상기 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 상기 약학적 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여 시간 및/또는 투여 경로 등에 의해 다양해질 수 있으며, 상기 약학적 조성물의 투여로 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 투여 대상이 되는 개체의 종류, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 질병의 증세나 정도, 성별, 식이, 배설, 해당 개체에 동시 또는 이시에 함께 사용되는 약물 기타 조성물의 성분 등을 비롯한 여러 인자 및 의약 분야에서 잘 알려진 유사 인자에 따라 다양해질 수 있으며, 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 예를 들어, 0.05 내지 5 mg/kg의 농도로 투여되는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 0.1 내지 0.4 mg/kg, 더욱 바람직하게는 0.2 내지 0.35 mg/kg, 더더욱 바람직하게는 0.25 mg/kg일 수 있으나, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로 및 투여 방식은 각각 독립적일 수 있으며, 그 방식에 있어 특별히 제한되지 아니하며, 목적하는 해당 부위에 상기 약학적 조성물이 도달할 수 있는 한 임의의 투여 경로 및 투여 방식에 따를 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구 투여 또는 비경구 투여 방식으로 투여할 수 있다. 상기 비경구 투여 방식으로는 예를 들어 정맥 내 투여, 복강 내 투여, 근육 내 투여, 경피 투여 또는 피하 투여 등이 포함된다.
본 발명의 약학적 조성물은 전립선암 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 식품 조성물 또는 건강기능식품 조성물일 수 있다.
본 발명에 있어서, 건강기능식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병 방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 본 발명의 목적상 상기 건강기능식품은 전립선암 예방 또는 치료 활성을 증진시키기 위한 것이다.
본 발명에 있어서 식품 조성물은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 상기 식품 조성물의 제형 또한 식품 조성물로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다.
본 발명에 따른 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 또한 식품에는 특수영양식품 (예, 조제유류, 영, 유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류 (예, 라면류, 국수류 등), 빵류, 건강보조식품, 조미식품 (예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류 (예, 스넥류), 캔디류, 쵸코렛류, 껌류, 아이스크림류, 유가공품 (예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품 (각종 김치류, 장아찌 등), 음료 (예, 과실 음료, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료 (예, 라면 스프 등), 식품첨가제 등이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.
본 발명의 조성물을 건강기능식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 건강기능식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 바람직하게는 50 중량부 이하, 보다 바람직하게는 25 중량부 이하의 양으로 첨가할 수 있다. 그러나, 건강 조절 및 위생을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안정성 면에서 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용할 수 있다.
본 발명의 식품 또는 건강기능식품 조성물은 유효성분인 벼메뚜기 열수 추출물을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알코올이다. 상술한 향미제는 천연 향미제 (타우마틴), 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
또한, 상기 식품 조성물은 벼메뚜기 열수 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 항암 보조제 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 항암 보조제는 약학적 조성물 또는 식품 조성물의 형태일 수 있으며, 보다 구체적으로는 항암 약학적 보조제 또는 항암 식품 보조제일 수 있다.
본 발명에 있어서, “항암 보조제”는 당업계에서 일반적으로 사용되는 암치료제의 효과를 증진시키기 위하여 보조적으로 사용될 수 있는 제제를 말하며, 본 발명에 의한 보조제를 사용함으로써 암 치료제 또는 항암치료의 효과를 증진시킬 수 있다.
상기 용어 "식품"은 사람이 일상적으로 섭취하는 음식물을 통틀어 이르는 말로, 건강기능식품을 포함하는 개념이다.
본 발명의 벼메뚜기 열수 추출물은 항암 보조제로 식품 조성물에 첨가될 수 있으며, 본 발명의 벼메뚜기 열수 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 유효성분을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 본 발명의 항암 보조제와 함께 사용될 수 있는 항암제의 종류는 특별히 한정되지 않는다. 항암제는 암세포의 종류, 항암제의 흡수 속도(치료기간과 항암제 투여 경로), 종양의 위치, 종양의 크기 등의 항암제 선택 시 고려하는 일반적인 원칙하에 선택될 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 전립선암세포 괴사(necrosis) 유도용 시약 조성물을 제공한다.
본 발명의 실시예에서, 벼메뚜기 열수 추출물은 전립선암세포의 세포막을 공격하며, 괴사를 유도한다는 것을 실험적으로 확인하였다.
상기 전립선암세포 괴사 유도용 시약 조성물은 전립선암세포 괴사 유도를 위한 시약을 더 포함할 수 있다.
중복되는 내용은 본 명세서의 복잡성을 고려하여 생략하며, 본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1. 벼메뚜기 열수 추출물 제조
벼메뚜기 열수 추출물 제조를 위하여, 건조된 벼메뚜기 성충을 준비하였다. 건조된 벼메뚜기 성충을 분쇄하여 분말을 제조하였고, 60℃ shaking incubator에서 24시간 동안 열수추출하였다. 열수추출 후 탈지면을 이용하여 여과하고 추가로 0.45 μm 필터로 여과하였다. 여과물은 1.5 ml 튜브에 분주하여 감압건조하여 벼메뚜기 열수 추출물을 최종 수득하였다. 최종산물인 벼메뚜기 열수 추출물은 실험 전까지 -70℃에 보관하였다.
실시예 2. 벼메뚜기 열수 추출물의 항암 활성 검정
2-1. 벼메뚜기 열수 추출물의 전립선암세포에 대한 성장 억제 효과
본 실시예에서는 인간 유래 전립선암 세포주인 LNCaP를 사용하였다. 상기 LNCaP은 37℃, 5％ CO2 배양기에서 항생제 (100 units/㎖ penicillin, 100 ㎍/㎖ streptomycin)와 10 ％ fetal bovine serum (FBS)이 함유된 RPMI1640 배지에 배양하였다.
MTS assay를 통해 상기 실시예 1에서 제조된 벼메뚜기 열수 추출물의 전립선암세포 성장 억제 효과를 확인하였다. 구체적으로, 96-well 배양용기에 2 × 104 cells/well 세포를 200 μl씩 분주하였다. 각 웰에 벼메뚜기 열수 추출물 0, 250, 500, 1000, 2000 및 4000 μg/ml 농도로 24시간 동안 처리하였다. 이후 20 μl CellTiter 96 AQueous One Solution Reagent (MTS) (Promega, USA)를 첨가하였고, 2 내지 3시간 동안 반응시켰다. 세포 생존율은 multi detecter (Beckman DTX8800)를 이용하여 450 nm 파장에서 흡광도 측정을 통해 확인하였으며, 그 결과는 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타낸 바와 같이, 상기 실시예 1에서 제조된 벼메뚜기 열수 추출물 처리군은 미처리군에 비해 전립선암 세포주인 LNCaP의 생존율이 농도의존적으로 감소된 것을 확인하였다.
2-2. Acridine orange (AO) /ethidium bromide (EB) staining을 통한 벼메뚜기 열수 추출물의 작용기작 확인
LNCaP 세포를 6-well 배양용기에 1 × 106 cells/well 세포를 분주하였다. 각 웰에 벼메뚜기 열수 추출물을 0, 250, 500, 1000, 2000, 4000 μg/ml 농도로 24시간 동안 처리하였다. 처리 후 PBS 완충용액으로 세포를 세척한 후 acridine orange (3 μg/ml) 및 ethidium bromide (10 μg/ml)로 염색하고 바로 형광 현미경(Carl Zeiss, Germany)을 이용해 관찰하였다. 형광 현미경 관찰 결과는 도 2에 나타내었다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 미처리군은 대부분 AO에 의해서만 세포가 염색이 되어 전체적으로 녹색 형광을 띤다. 이와 달리, 상기 실시예 1에서 제조된 벼메뚜기 열수 추출물 처리군은 적색 형광이 관찰되었다. 특히, 벼메뚜기 열수 추출물을 1000 μg/ml 이상 처리한 그룹은 농도 의존적으로 적색 형광이 증가된 것을 확인하였다. 상기 결과는 벼메뚜기 열수 추출물이 세포막을 공격한다는 것(즉, 항암 활성)을 나타낸다는 것을 의미한다.
2-3. 유세포 분석을 통한 벼메뚜기 열수 추출물의 작용기작 확인
LNCaP 세포를 6-well 배양용기에 1 × 106 cells/well 세포를 분주하고 벼메뚜기 열수 추출물을 0, 250, 500, 1000, 2000, 4000 μg/ml 농도로 4시간 동안 처리하였다. 배지를 제거하고 PBS 완충용액으로 세척 후 trypsin-EDTA 용액을 처리하여 세포들을 모은 후 PBS 완충용액으로 2번 세척하였다. 세척한 세포들은 1× binding buffer (0.01 M Hepes/NaOH (pH 7.4), 0.14 M NaCl, 2.5 mM CaCl2)에 세포들이 1 × 105 cells이 되도록 1.5 ml 튜브로 옮겼다. 상기 튜브에 FITC가 결합된 Annexin V (BD Bioscience, USA)와 propidium iodide (PI) 시약(BD Bioscience, USA)을 각각 5 μl씩 첨가하여 암조건에서 15분간 반응시켰다. 반응시킨 후 1× binding buffer 400 μl를 첨가한 후 유세포분석기(BECKMAN COULTER, USA)를 이용하여 측정하였다. 유세포 분석 결과는 도 3에 나타내었다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 실시예 1에서 제조된 벼메뚜기 열수 추출물 2000 μg/ml 처리군 및 4000 μg/ml 처리군은 PI positive 세포가 각각 22.11%와 26.10%임을 확인하였다. 상기 결과는 벼메뚜기 열수 추출물의 경우 추출물의 농도가 증가됨에 따라 암세포의 괴사(necrosis)를 유도한다는 것을 의미한다.
종합적으로 본 발명자들은 벼메뚜기를 특정 조건으로 추출하여 벼메뚜기 열수 추출물을 제조하였다. 또한 실험을 통해 벼메뚜기 열수 추출물이 전립선암세포의 세포 성장을 억제하고, 세포막을 공격하며, 나아가 세포 괴사를 유도한다는 것을 확인하였다. 이는 본 발명의 벼메뚜기 열수 추출물이 전립선암에 대한 항암 활성이 우수하다는 것을 의미하는 바, 전립선암의 예방, 개선 및 치료 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.
이하, 제제예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 제제예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 제제예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는다.
제제예 1. 약학적 조성물의 제조
1-1. 산제의 제조
벼메뚜기 열수 추출물 20 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
1-2. 정제의 제조
벼메뚜기 열수 추출물 10 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
1-3. 캡슐제의 제조
벼메뚜기 열수 추출물 10 mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
1-4. 주사제의 제조
벼메뚜기 열수 추출물 10 mg
만니톨 180 mg
주사용 멸균 증류수 2974 mg
인산이나트륨 이수화물 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ml) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
1-5. 액제의 제조
벼메뚜기 열수 추출물 20 mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100ml로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예 2. 식품 제제의 제조
2-1. 건강식품의 제조
벼메뚜기 열수 추출물 100 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 g
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 g
비타민 C 10 mg
비오틴 10 g
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 g
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
2-2. 건강음료의 제조
벼메뚜기 열수 추출물 100 mg
비타민 C 15 g
비타민 E(분말) 100 g
젖산철 19.75 g
산화아연 3.5 g
니코틴산아미드 3.5 g
비타민 A 0.2 g
비타민 B1 0.25 g
비타민 B2 0.3 g
물 정량
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85 ℃ 에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
이상, 본 발명내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.

Claims (9)

  1. 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는, 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 벼메뚜기 열수 추출물은 농도가 1 내지 10000 μg/ml인, 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 벼메뚜기 열수 추출물은 40 내지 100℃ 조건으로 추출된 것인, 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 벼메뚜기 열수 추출물은 건조된 것인, 조성물.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 벼메뚜기 열수 추출물은 감압건조된 것인, 조성물.
  6. 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는, 전립선암 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  7. 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는, 전립선암 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  8. 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는, 항암 보조제 조성물.
  9. 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는, 전립선암세포 괴사(necrosis) 유도용 시약 조성물.
KR1020220171947A 2022-12-09 벼메뚜기 열수 추출물을 포함하는 전립선암 예방, 개선 또는 치료용 조성물 KR20240086417A (ko)

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