KR20240074772A

KR20240074772A - 항-pd-l1/il-10 융합 단백질을 이용한 질병 치료 방법

Info

Publication number: KR20240074772A
Application number: KR1020247009943A
Authority: KR
Inventors: 훙-카이 첸; 안드레아스 코니 판델라키스; 후이-원 시아오
Original assignee: 엘릭시론 이뮤노테라퓨틱스 (홍콩) 리미티드
Priority date: 2021-10-10
Filing date: 2022-10-07
Publication date: 2024-05-28
Also published as: AU2022358772A1; WO2023060229A1; EP4396213A1

Abstract

본 발명은, 세포 기억반응 촉진을 통한 암 및 만성 바이러스 감염 질환의 치료 및 암 재발의 예방에 있어서의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질의 이용을 제공한다.

Description

항-PD-L1/IL-10 융합 단백질을 이용한 질병 치료 방법

관련 출원에 대한 교차 참조

본 출원은 35USC§119(e)에 따라 2021년 10월 10일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 63/254,116에 대한 이익을 주장하며, 이 출원의 전체 내용은 참고문헌으로 본 명세서에 포함된다.　2022년 10월 1일에 생성되고 ST26 확장성 생성 언어(Extensible Markup Language) 형식으로 제출된 2022-10-07T_256-004PCT_SEQ_List.xml로 명명된 서열목록은 160킬로바이트이고, 그 전체가 참조로 포함된다.

기술분야

본 발명은 일반적으로 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질(fusion protein)을 사용하여 질병을 치료하는 방법에 관한 것으로, 특히 암 및 만성 바이러스 감염 질환의 치료 및 T 세포 기억반응 촉진을 통한 암 재발 예방에서 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질을 사용하는 방법에 관한 것이다.

암은 신체의 다른 부위로 침입하거나 확산될 가능성이 있는 비정상적인 세포 성장과 관련되어 사망의 주요 원인이 되는 대규모 질병 그룹을 나타낸다.　암세포는 정상 세포에서 변형(발암)되기 때문에 암세포에 의해 제시되는 항원 표면 단백질 및/또는 당단백질은 숙주 유기체에서의 정상 비종양 세포에 존재하는 항원과 동일하거나 매우 유사하다.　따라서, 숙주 유기체의 면역 체계는 암세포를 탐지하고 정상 세포와 구별하는 데 어려움을 겪을 수 있다.　또한, 암세포는 숙주 면역 체계의 탐지를 피하기 위해 또 다른 메커니즘을 채택할 수 있다.

프로그래밍된 사멸 리간드 1(PD-L1)은 억제성 관문(checkpoint) 분자인 PD1에 결합하여 임신, 자가면역 질환 및 간염과 같은 기타 질병 상태 동안에 적응성 면역 반응을 억제하는 막횡단 단백질이다.　또한, PD-L1은 암 조직에서 고도로 발현되며, 이의 발현 수준은 종양의 공격성과 강한 상관관계가 있는 것으로 밝혀졌다.　PD-L1의 과발현 및 그의 수용체 단백질인 PD1에 대한 결합은 숙주 유기체의 면역 체계에 의한 암세포의 파괴를 피하는 메커니즘에 중요한 것으로 여겨진다.

인터루킨 10 또는 "IL-10"(사이토카인 합성 억제 인자, CSIF, IL-10, IL10A, GVHDS 또는 TGIF로도 알려짐)은 면역조절 및 염증에 다양한 효과를 갖는 사이토카인이다.　IL-10은 Th1 사이토카인, MHC 클래스 II 항원 및 대식세포의 공동자극 분자의 발현을 하향조절하는 것으로 알려져 있다.　IL-10은 또한 B 세포 생존, 증식 및 항체 생산을 향상시키는 것으로 알려져 있다.　IL-10은 NF-κB 활성을 차단할 수 있으며, JAK-STAT 신호전달 경로의 조절에 관여한다.　IL-10은 대식세포 및 Th1 T 세포와 같은 세포들에 의해 생성된 IFN-γ, IL-2, IL-3, TNFα 및 GM-CSF와 같은 전염증성(pro-inflammatory) 사이토카인의 합성을 억제할 수 있다.　이는, 또한 항원 제시 세포의 항원 제시 능력을 억제하는 강력한 능력을 나타낸다;　그러나, 이는 또한 특정 T 세포(Th2)와 비만 세포를 자극하고, B 세포 성숙과 항체 생산을 자극한다.

IL-10은 종양 전이의 잠재적인 억제제 및 면역종양학 치료에 유용한 면역자극제로 인식되어 왔다.　형질전환 마우스에서 IL-10의 발현 또는 IL-10의 투여는 원발성 종양 성장을 조절하고, 전이성 부담을 감소시키는 것으로 관찰되었다.　재조합 쥐 IL-10의 PEG화된 버전은 마우스 모델에서 IFNγ 및 CD8+ T 세포 의존성 항종양 면역을 유도하는 것으로 나타났다.　PEG화된 재조합 인간 IL-10은 세포독성 분자 그랜자임 B 및 퍼포린의 CD8+ T 세포 분비를 향상시키고, T 세포 수용체 의존성 IFNγ 분비를 강화시키는 것으로 나타났다.　임상 시험에서, PEG화된 재조합 인간 IL-10(PEG-rHuIL-10, AM0010)은 상당한 항종양 효능을 나타내는 것으로 밝혀졌으며, 이는 면역자극 사이토카인 IFNγ, IL-18, IL-7, GM-CSF 및 IL-4의 용량 적정가능한 유도를 유발한다.　치료받은 환자들은 또한 PD1, 림프구 활성화 유전자 3(LAG3)+ 및 증가된 Fas 리간드(FasL)와 같은 활성화 마커들을 발현하는 말초 CD8+ T 세포들의 증가 및 혈청 TGFβ의 감소를 나타냈다.　이러한 발견들은 IL-10 치료가 인간에서 주로 면역자극 효과를 가져온다는 것을 시사한다.

항-PD-L1/IL-10 융합 단백질에 관한 당 분야의 이해와 대조적으로, 본 발명은 항-PD-L1/IL-10 융합 단백질이 T 세포 기억반응을 촉진할 수 있다는 놀라운 발견에 근거하여, 암 치료, 암 재발 예방 및 만성 바이러스 감염 질환 치료를 위한 조성물 및 이 조성물의 이용을 제공한다. 이론에 얽매이지 않고, 항-PD-L1/IL-10 융합 단백질들이 전구세포 소진 T 세포들(progenitor exhausted T cells)을 통해 지속성 기억반응을 유도하는 것으로 제안된다.　암 또는 만성 바이러스 감염 환자의 경우, 항-PD-L1/IL-10 융합 단백질이 암 또는 바이러스 감염을 치료하고 암 재발 또는 만성 바이러스 감염을 예방하는 T 세포 기억반응을 유도하는 것으로 제안된다.　따라서, 본 발명은 암 또는 만성 바이러스 감염이 있는 환자에게 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질을 투여하는 치료 방법을 제공하며, 여기서 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질은 전구세포 소진 T 세포들을 통해 지속성 기억반응을 촉진한다.

일부 구체예들에서, 본 발명은, 필요로 하는 대상(subjedct)에서 T 세포 기억반응을 촉진하기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 발명은, 필요로 하는 대상에서 T 세포 기억반응을 촉진하기 위한 의약의 제조를 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 발명은, 필요로 하는 대상에서 T 세포 기억반응을 촉진하는데 사용하기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물을 제공한다.

일부 구체예들에서, 본 발명은, 필요로 하는 대상에서 암을 치료하기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용을 제공한다.　일부 구체예들에서, 본 발명은, 필요로 하는 대상에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조를 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용을 제공한다.　일부 구체예들에서, 본 발명은, 필요로 하는 대상에서 암을 치료하는데 사용하기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물을 제공한다.

일부 구체예들에서, 본 발명은, 필요료 하는 대상에서 암 재발을 예방하기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용을 제공한다.　일부 구체예들에서, 본 발명은, 필요로 하는 대상에서 암 재발을 예방하기 위한 의약의 제조를 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 발명은, 필요로 하는 대상에서 암 재발을 예방하는데 사용하기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물을 제공한다.

일부 구체예들에서, 본 발명은, 필요로 하는 대상에서 만성 바이러스 감염 질환을 치료하기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 발명은, 필요로 하는 대상에서 만성 바이러스 감염 질환을 치료하기 위한 의약의 제조를 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 발명은, 필요로 하는 대상에서 만성 바이러스 감염 질환을 치료하는데 사용하기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물을 제공한다.

일부 구체예들에서, 상기 조성물은 적어도 하나의 추가 치료제와 함께 사용하기 위한 것이다.　다른 구체예들에서, 상기 적어도 하나의 추가 치료제는 바이러스 백신이다.　다른 구체예들에서, 상기 적어도 하나의 추가 치료제는 억제성 면역관문 분자를 표적으로 하는 항체이다.　일부 바람직한 구체예들에서, 상기 적어도 하나의 추가 치료제는 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택된다: 영상화제;　세포독성제;　혈관신생 억제제;　키나제 억제제;　공동자극 분자 차단제;　접착 분자 차단제;　항-사이토카인 항체 또는 이의 기능적 단편;　메토트렉세이트;　사이클로스포린;　라파마이신;　FK506;　검출가능한 라벨 또는 리포터;　TNF 길항제;　항류마티스제;　근육 이완제;　마약;　비스테로이드 항염증제(NSAID);　진통제;　마취제;　진정제;　국소 마취제;　신경근 차단제;　항균제;　항건선제;　코르티코스테로이드;　동화작용(anabolic) 스테로이드;　에리스로포이에틴;　예방접종;　면역글로불린;　면역억제제;　성장 호르몬;　호르몬 대체제;　방사성 의약;　항우울제;　항정신병제;　자극제;　천식제;　베타 작용제;　흡입 스테로이드;　에피네프린 또는 이의 유사체;　사이토카인;　사이토카인 길항제;　면역조절제;　HBV 진입 억제제;　바이러스 RNA 억제제;　유전자 편집제;　HBsAg 분비 억제제;　중합효소 억제제;　인터페론;　바이러스 진입 억제제; 바이러스 성숙 억제제;　뉴클레오시드 역전사효소 억제제;　캡시드 조립 억제제/조절제;　cccDNA 억제제;　FXR 작용제;　마이크로RNA;　및 TLR 작용제.

일부 구체예들에서, 상기 조성물은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 방식으로 투여되기 위한 것이다: 비경구, 피하, 근육내, 정맥내, 관절내, 기관지내, 복강내, 피막내, 연골내, 강내, 복강내, 소뇌내, 뇌실내, 대장내, 경추내, 위내, 간내, 심근내, 골내, 골반내, 심낭내, 복강내, 흉막내, 정강내, 폐내, 직장내, 신장내, 망막내, 척수내, 윤활막내, 흉부내, 자궁내, 방광내, 볼루스, 질, 직장, 협측, 설하, 비강내 및 경피.　일부 구체예들에서, 상기 조성물은 하루에 한 번 초과, 하루에 적어도 한 번, 일주일에 적어도 한 번, 또는 한 달에 적어도 한 번 사용하기 위한 것이다.

일부 구체예들에서, 상기 PD-L1 항체는 면역글로불린 분자, Fv, 이황화물 연결된 Fv, 단클론 항체, scFv, 키메라 항체, 단일 도메인 항체, CDR 이식 항체, 디아바디, 인간 항체, 인간화 항체, 다중특이적 항체, Fab, 이중특이적 항체, Fab' 단편, 이중특이적 항체, F(ab')2 단편, 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편들을 포함하는 2가 단편;　VH 도메인 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편;　항체의 단일 팔의 VL 도메인 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편, dAb 단편, 분리된 상보성 결정영역(CDR), 또는 단일 사슬 항체이다.　일부 구체예들에서, 상기 PD-L1 항체는 링커를 통해 IL10에 융합된 중쇄(HC)를 포함하고;　임의로, 상기 링커는 서열번호: 74, 75, 76, 77, 78 및 79로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구체예들에서, (a) 상기 IL-10은 서열번호: 73, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179 또는 180의 아미노산 서열을 포함하고;　(b) 상기 IL-10은 사이토카인 활성을 보유하는 IL-10의 자연 발생 변이체 또는 조작된 변이체이며;　(c) 상기 IL-10은 사이토카인 활성을 보유하는 IL-10의 합성 변형 버전이며;　그리고/또는 (d) 상기 IL-10은 1개, 2개 또는 4개의 IL-10 폴리펩타이드를 포함한다.

일부 구체예들에서, 상기 IL-10은, 야생형 IL-10의 아미노산들에 비해 위치 104, 위치 107 및 이들의 조합 위치에서의 아미노산들에 대한 치환을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 야생형 IL-10은 서열번호: 73, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179 또는 180과 적어도 80% 이상, 바람직하게는 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 치환은 (a) R104Q;　(b) R107A, R107E, R107Q 및 R107D 중 어느 하나;　또는 (c) 이들의 조합을 포함한다.　일부 구체예들에서, 상기 치환은 R104Q/R107A, R104Q/R107E, R104Q/R107Q 또는 R104Q/R107D를 포함한다.

일부 구체예들에서, 상기 PD-L1 항체는 (i) 제1 경쇄 상보성 결정영역(CDR-L1), 제2 경쇄 상보성 결정영역(CDR-L2) 및 제3 경쇄 상보성 결정영역(CDR-L3), 및 (ii) 제1 중쇄 상보성 결정영역(CDR-H1), 제2 중쇄 상보성 결정영역(CDR-H2) 및 제3 중쇄 상보성 결정영역(CDR-H3)을 포함하고, 여기서:

(a) CDR-H1은 서열번호: 92 및 123으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고;

(b) CDR-H2는 서열번호: 109, 114 및 124로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고;

(c) CDR-H3은 서열번호: 94 및 110으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고;

(d) CDR-L1은 서열번호: 53으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고;

(e) CDR-L2는 서열번호: 54로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고;

(f) CDR-L3은 서열번호: 55, 112 및 116으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구체예들에서,

(a) CDR-H1은 서열번호: 92의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 109의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 110의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 110의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 54의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 112의 아미노산 서열을 포함하고;

(b) CDR-H1은 서열번호: 92의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 114의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 94의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 54의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 116의 아미노산 서열을 포함하고;　또는

(c) CDR-H1은 서열번호: 123의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 124의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 95의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 54의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 55의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구체예들에서, 상기 항체는 서열번호: 111, 115 및 125로부터 선택된 서열과 적어도 90%의 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 아미노산 서열;　및/또는 서열번호: 56, 113 및 117로부터 선택된 서열과 적어도 90%의 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) 아미노산 서열을 포함하고;　임의로, 여기서:

(a) 상기 항체는 서열번호: 111과 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 113과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;

(b) 상기 항체는 서열번호: 115와 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 117과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;　또는

(c) 상기 항체는 서열번호: 125와 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 56과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구체예들에서, 상기 항체는 서열번호: 157, 158 및 160으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄(HC) 아미노산 서열 및/또는 서열번호: 135, 137 및 141로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄(LC) 아미노산 서열을 포함한하고;　임의로, 상기 항체는 다음을 포함한다:

(a) 서열번호: 157의 HC 아미노산 서열, 및 서열번호: 135의 LC 아미노산 서열;

(b) 서열번호: 158의 HC 아미노산 서열, 및 서열번호: 137의 LC 아미노산 서열;

(c) 서열번호: 160의 HC 아미노산 서열, 및 서열번호: 141의 LC 아미노산 서열.

일부 구체예들에서, 상기 항체는, 링커를 통해 IL-10 폴리펩타이드에 융합된 중쇄(HC), 여기서 HC-IL-10 융합 아미노산 서열은 서열번호: 134, 136, 및 140으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 가짐;　및 서열번호: 135, 137, 및 141로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄(LC)를 포함하고;　임의로, 상기 항체는 다음을 포함한다:

(a) 서열번호: 134의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 135의 LC 아미노산 서열;

(b) 서열번호: 136의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 137의 LC 아미노산 서열;　또는

(d) 서열번호: 140의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 141의 LC 아미노산 서열.

일부 구체예들에서, 상기 PD-L1 항체는 링커를 통해 IL10에 융합된 중쇄(HC)를 포함하고, 상기 항체는 (i) 제1 경쇄 상보성 결정영역(CDR-L1), 제2 경쇄 상보성 결정영역(CDR-L2), 및 제3 경쇄 상보성 결정영역(CDR-L3), 및 (ii) 제1 중쇄 상보성 결정영역(CDR-H1), 제2 중쇄 상보성 결정영역(CDR-H2), 및 제3 중쇄 상보성 결정영역(CDR-H3)을 포함하며, 여기서:

(a) CDR-H1은 서열번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 2의 아미노산 서열을 포함하며, CDR-H3은 서열번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고;

(b) CDR-H1은 서열번호: 9의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 10의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 11의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 13의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 14의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고;

(c) CDR-H1은 서열번호: 17의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 18의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 19의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 21의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 22의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 23의 아미노산 서열을 포함하고;

(d) CDR-H1은 서열번호: 25의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 26의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 27의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 29의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 30의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 31의 아미노산 서열을 포함하고;

(e) CDR-H1은 서열번호: 33의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 34의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 35의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 37의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 38의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 39의 아미노산 서열을 포함하고;

(f) CDR-H1은 서열번호: 41의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 42의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 43의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 45의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 46의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 47의 아미노산 서열을 포함하고;

(g) CDR-H1은 서열번호: 92의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 109의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 110의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 54의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 112의 아미노산 서열을 포함하고;

(h) CDR-H1은 서열번호: 92의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 114의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 94의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 54의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 116의 아미노산 서열을 포함하고;　또는

(i) CDR-H1은 서열번호: 123의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 124의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 94의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 54의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 55의 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구체예들에서, 상기 항체는 서열번호: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 111, 115, 125로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 아미노산 서열;　및/또는 서열번호: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 113 및 117로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) 아미노산 서열을 포함하고;　여기서, 임의로:

(a) 상기 항체는 서열번호: 4와 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 8과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;

(b) 상기 항체는 서열번호: 12와 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 16과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;

(c) 상기 항체는 서열번호: 20과 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 24와 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;

(d) 상기 항체는 서열번호: 28과 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 32와 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;

(e) 상기 항체는 서열번호: 36과 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 40과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;

(f) 상기 항체는 서열번호: 44와 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 48과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;

(g) 상기 항체는 서열번호: 111과 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 113과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;

(h) 상기 항체는 서열번호: 115와 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 117과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;　또는

(i) 상기 항체는 서열번호: 125와 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 56과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구체예들에서, 상기 항체는 서열번호: 80, 81, 82, 134, 136 및 140으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 135, 137, 141, 143, 145 및 147로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄(LC) 아미노산 서열을 포함하고; 임의로 다음을 포함한다:

(a) 서열번호: 80의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 143의 LC 아미노산 서열;

(b) 서열번호: 81의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 145의 LC 아미노산 서열;

(c) 서열번호: 82의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 147의 LC 아미노산 서열;

(d) 서열번호: 134의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 135의 LC 아미노산 서열;

(e) 서열번호: 136의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 137의 LC 아미노산 서열;　또는

(f) 서열번호: 140의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 141의 LC 아미노산 서열.

일부 구체예들에서,

(a) 상기 단백질은 MC/9 세포 증식을 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 100%, 적어도 150%, 적어도 200%, 또는 그 이상으로 증가시키고;

(b) 상기 단백질은 활성화된 CD8 T 세포들로부터 IFNγ 및 그랜자임 B 생산을 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 100% 또는 그 이상으로 증가시키고;　그리고/또는

(c) 상기 항체는 28일차에 측정된 동계 마우스 종양 모델에서 종양 부피를 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 75%, 또는 그 이상으로 감소시키며, 여기서 상기 마우스 종양 모델은 CT26 결장암 및 EMT6 유방암으로부터 선택된다.

도 1은 항-PDL1/IL-10 융합 단백질이 혼합 림프구 반응(MLR)에서 T 세포 활성화를 향상시킨다는 것을 나타낸다.　인간 CD4 T 세포들을 PBMC로부터 분리하고, 항-PDL1/IL-10 융합 단백질들(Avelumab/ILIO, HSYPP411C/IL10, YP7G/IL10, YP11F/IL10, YT7A/IL10, YT7A/IL10, YT7H/IL10 및 YT10H/IL10)의 존재 하에 동종이계 성숙 DC와 함께 공동 배양되었다. 상청액 중의 IFNγ 수준은 5일차에 ELISA(Biolegend)에 의해 측정되었다.
도 2는 종양 내 항-PDL1/IL-10 융합 단백질의 축적을 도시한다.　(A) 생체내 전신 및 (B) vivoTag680-표지된 항-PDL1/IL-10(150㎍)의 정맥내 주사 24시간 후에 두경부 편평세포 암종 HNSC/Q1-luc 종양 보유 마우스로부터의 비장 및 종양의 생체외 형광이미지.
도 3은 항-PDL1/IL-10이 T 세포 반응을 향상시킨다는 것을 나타낸다.　동계 결장직장 암종 CT26 종양 보유 마우스(n=7)를 이식 후 7일차에 무작위로 추출한 후, IL10-Fc(3mg/kg), 항-PDL1/IL-10(6mg/kg) 또는 항-PDL1/TGFbR(6mg/kg)로 3주 동안 매주 2회 치료하였다. 치료 후(29일차) (A) IL-18 및 (B) CXCL9의 혈청 수준을 ELISA(Biolegend)로 측정하였다.　평균±SD가 표시된다.　*p＜ 0.05, **p＜0.01, ***p＜0.001
도 4는 종양 제어를 향상시키는 항-PDL1/IL-10의 능력이 종양-상주 세포들의 증가된 활성에 의존한다는 것을 나타낸다.　2차 림프 기관들로부터의 림프구 배출을 억제하는 FTY720과의 병용 치료는, 비록 모든 쥐는 아니지만 일부 쥐들에서 항종양 활성을 감소시키지 못하였다.　동계 유방암종 EMT6 종양 보유 마우스(n=6)를 10일차에 무작위로 분류하고 2주 동안 매일 비히클(1% 에탄올) 또는 FTY720(2mg/kg, PO)으로 치료하였다.　항-PDL1(10mg/kg) 또는 항-PDL1/IL-10(12mg/kg)을 11일차부터 4주 동안 매주 2회 투여하였다.　(A) 종양 성장을 매주 2회 측정하였다.　(B) 생존 곡선들.　평균±SEM이 표시된다.　*p＜0.05, **p＜0.01, ***p＜0.001
도 5는 항-PDL1/IL-10 치료가 1차 종양이 '치료된' 마우스에서 후속적인 2차 종양 거부를 가능하게 하여 지속적인 T 세포 기억 보호를 나타냄을 보여준다.　동계 EMT6 종양 보유 마우스(n=7)를 이식 후 7일차에 무작위화하고, 항-PDL1(5mg/kg), 항-PDL1/IL-10(6mg/kg) 또는 항-PDL1/TGFbR(6mg/kg)로 3주 동안 매주 2회 치료하였다.　(A) 원발성 종양 연구에 대한 생존 곡선들.　재투여(rechallenge) 연구를 위해, 종양 '치료' 5주 후(67일차), 치료된 미처리(naive) Balb/c 마우스(n=5)에 EMT6 종양 세포들을 이식하고, (B) 종양 성장을 4주 동안 모니터링하였다.　평균±SEM이 표시된다.　*p＜0.05, **p＜0.01, ***p＜0.001
도 6은 항-PDL1/IL-10 돌연변이가 종양 성장을 제어하고 T 세포 반응을 향상시킨다는 것을 나타낸다.　동계 결장직장 암종 CT26 종양 보유 마우스를 이식 후 7일차에 무작위화한 후, 1mg/kg 항-PDL1/IL-10 또는 항-PDL1/IL-10 돌연변이체(R107A, R104Q/R107A)로 3주 동안 매주 2회 치료하였다.　(A) 종양 성장을 매주 2회 측정하였다.　(B) 치료 후(28일차) CXCL9의 혈청 수준을 ELISA(Biolegend)로 측정하였다.　평균±SD가 표시된다.　*p＜0.05, **p＜0.01
도 7은 항-PDL1/IL10 처리된 종양 보유 마우스로부터 분리된 종양 침윤 림프구(TIL)가 더 나은 기억반응을 나타냄을 보여준다.　C57BL/6 마우스에 YUMM1.7-GP33 흑색종 세포들을 접종하고, 9일차에 초기 활성화된 Tcf7 ^GFP P14 T 세포들의 정맥내 입양세포 전달을 받은 후 10일차 및 14일차에 PBS 또는 항-PDL1/IL-10으로 처리하였다. PEX 모집단은 추가로 분류되어 LCMV-Arm 재투여를 위한 미처리 수용체들로 이전되었다.　재투여에 따라, 항-PDL1/IL-10으로 처리된 TIL들은, PBS 처리군과 비교하여, 공동억제 수용체들, (A) PD1 및 (B) TIM3, 및 (C) 감소된 PD-1⁺TIM3⁺LAG3⁺ 세포군의 발현 수준 감소와 함께 더 나은 면역 품질을 나타낸다. PEX, 전구세포 소진 T 세포들.
도 8은 항-PDL1/IL-10 치료가 PEX-의존적 지속성 종양 보호를 향상시킨다는 것을 도시한다.　C57BL/6 마우스에 0일차에 YUMM1.7-GP33 종양 세포들을 피하 접종하고, 6일차에 초기 활성화된 Tcf7 ^DTR-GFP P14 T 세포들의 정맥내 입양 전이(adoptive transfer)를 받았다. 종양 보유 마우스에게 항-PDL1/IL-10을 추가로 8일차부터 종양이 검출되지 않을 때까지 3일마다 복강내 투여하였다. 3주 후, 종양이 없는 마우스에 PBS 또는 DT를 3회 복강내 주사하여 1주 이내에 TCF1+ DTR 발현 세포들을 제거한 후 B16-GP33 세포들을 피하 접종하였다.　연령이 일치하는 미처리 마우스들에 종양 진행에 대한 양성 대조군(미처리군)으로서 B16-GP33 흑색종 세포들을 접종하였다.　(A) 종양 성장 및 (B) 종양 없는 생존을 4주 동안 모니터링하였다.　PEX를 제거하지 않은 종양 없는 마우스의 대조군(Ctrl)은 종양 없는 상태를 유지하는 반면, B16-GP33 종양 병변은 DT 처리군에서 재투여 후 14-16일차에 관찰될 수 있는데, 이는 항-PDL1/IL10에 의해 유도된 지속적 보호는 PEX에 의존적임을 나타낸다.　PEX, 전구세포 소진 T 세포들.

본 발명은 T 세포 기억반응을 촉진할 수 있는 항-PD-L1/IL-10 융합 단백질이 암 치료, 암 재발 예방 및 바이러스 감염 질환, 바람직하게는 만성 바이러스 감염의 치료에 유용하다는 놀라운 발견에 기초한 치료 방법 및 관련 조성물을 제공한다. 따라서, 본 발명은 필요로 하는 환자에게 항-PD-L1/IL-10 융합 단백질들을 투여하는, 암, 암 재발 및 바이러스 감염의 치료 방법을 제공한다.　상기 방법 및 조성물에 유용한 항-PD-L1/IL-10 융합 단백질은 T 세포 기억반응을 유도, 강화 및 촉진할 수 있다.　따라서, 하기에 더욱 상세히 설명되는 바와 같이, 상기 치료 방법 및 관련 조성물은 필요한 대상으로부터 효과적으로 암을 치료하고, 암 재발을 예방하고, 바이러스 감염을 치료할 수 있는 정상적인 면역기능을 자극 및/또는 회복시킬 수 있다.

용어 및 기술

본 명세서의 설명 및 첨부된 청구범위에 대해, 단수형 "하나" 및 "일"은 문맥상 달리 명확하게 나타내지 않는 한 복수형을 포함한다.　따라서, 예를 들어 "단백질"에 대한 언급은 하나 이상의 단백질을 포함하고, "화합물"에 대한 언급은 하나 이상의 화합물을 의미한다.　"포함한다", "포함한다", "포함하는", "함유한다" 및 "함유하는"의 사용은 상호교환 가능하며 제한하려는 의도가 아니다.　다양한 구체예들의 설명에서 "포함하는"이라는 용어를 사용하는 경우, 당 분야의 기술자는 일부 특정한 경우들에 구체예가 "본질적으로 구성되는" 또는 "구성되는"이라는 언어를 사용하여 대안적으로 설명될 수 있다는 것을 이해할 것이다.

수치의 범위가 제공되는 경우, 달리 명시하지 않는 한, 해당 수치의 각각의 사이값 정수(intervening integer), 및 달리 명시하지 않는 한, 상기 범위의 상한값과 하한값 사이의 해당 수치의 각각의 사이값 정수의 각 10분의 1, 및 상기 명시된 범위 내의 임의의 다른 언급된 값 또는 사이값은 본 발명에 포함된다는 것이 이해되어야 한다.　이들 더 작은 범위의 상한값 및 하한값은 독립적으로 작은 범위 내에 포함될 수 있고, 또한 언급된 범위에서 구체적으로 배제된 임의의 한계값도 본 발명 내에 포함된다.　명시된 범위가 이러한 한계값들 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 경우, (i) 포함된 한계값들 중 하나 또는 (ii) 둘 모두를 제외하는 범위도 본 발명에 포함된다.　예를 들어, "1 내지 50"에는 "2 내지 25", "5 내지 20", "25 내지 50", "1 내지 10" 등을 포함한다.

일반적으로, 본 명세서에 사용된 명명법과 본 명세서에 기술된 기술 및 절차는 Sambrook et al., Molecular Cloning-A Laboratory Manual (2nd Ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989 (hereinafter "Sambrook"); Current Protocols in Molecular Biology, F. M. Ausubel et al., eds., Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc. (supplemented through 2011) (hereinafter "Ausubel"); Antibody Engineering, Vols. 1 and 2, R. Kontermann and S. Dubel, eds., Springer-Verlag, Berlin and Heidelberg (2010); Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols, V. Ossipow and N. Fischer, eds., 2nd Ed., Humana Press (2014); Therapeutic Antibodies: From Bench to Clinic, Z. An, ed., J. Wiley & Sons, Hoboken, N.J. (2009); and Phage Display, Tim Clackson and Henry B. Lowman, eds., Oxford University Press, United Kingdom (2004)에 기술된 일반적인 기술 및 방법론과 같이 당 분야의 통상의 기술자가 잘 이해하고 일반적으로 사용하는 것들을 포함한다.

본 명세서에서 언급된 모든 간행물들, 특허들, 특허출원들 및 기타 문서들은 마치 각 개별 간행물, 특허, 특허출원 또는 기타 문서가 개별적으로 모든 목적을 위해 본 명세서에 참고문헌으로 포함되는 것으로 명시된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그들의 전체 내용이 참고문헌으로 포함된다.

다르게 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술들 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.　본 명세서에 사용된 용어는 단지 특정 구체예들을 설명하기 위한 것으로, 제한하려는 의도가 아니라는 점을 이해해야 한다.　본 발명을 해석할 목적으로, 용어들에 대한 하기의 설명이 적용될 것이고, 적절한 경우 단수형으로 사용된 용어는 복수형도 포함할 것이며, 그 반대도 마찬가지이다.

본 명세서에 사용된 "PD-L1"(또는 "PDL1")은 막횡단 단백질, 프로그래밍된 사멸 리간드 1을 의미하고, 본 명세서에서 사용된 바는 인간, 시노몰구스 원숭이, 마우스의 PD-L1 단백질들 및 이들의 임의의 이소형들을 포함한다. 다양한 예시적인 PD-L1 단백질들의 아미노산 서열들은 당 분야에 공지되어 있으며, 하기 표 2 및 첨부된 서열목록에 제공되어 있다.

본 명세서에 사용된 "IL10" 또는 "IL-10"은 사이토카인 합성 억제인자(CSIF)로도 알려진 사이토카인, 인터루킨 10을 의미하며, 자연 발생 변이체, 조작된 변이체, 및/또는 사이토카인 기능을 유지하는 인터루킨 10의 합성 변형 버전이다.　다양한 예시적인 IL-10 폴리펩타이드들 및 재조합 IL-10 융합 구조물들의 아미노산 서열들이 하기의 표 1 및 첨부된 서열목록에 제공되어 있다.　사이토카인 기능을 보유하는 다른 예시적인 조작된 및/또는 변형된 IL-10 폴리펩타이드들은 당 분야에 공지되어 있다(예를 들어, US 7,749,490 B2; US 2017/0015747 A1; Naing, A. et al. "PEGylated IL-10(Pegilodecakin) Induces Systemic Immune Activation, CD8+ T Cell Invigoration and Polyclonal T Cell Expansion in Cancer Patients." Cancer Cell 34, 775-791. e3 (2018); Gorby, C. et al. "Engineered IL-10 variants elicit potent immunomodulatory effects at low ligand doses." Sci Signal 13, (2020); Yoon, S. I. et al. "Epstein-Barr virus IL-10 engages IL-10R1 by a two-step mechanism leading to altered signaling properties." J Biol Chem 287, 26586-26595 (2012)).

본 명세서에 사용된 "융합 단백질"은 자연적으로 발생하지 않는 구조로 연결(또는 "융합")된 2개 이상의 단백질 및/또는 폴리펩타이드 분자들을 의미한다.　본 발명의 예시적인 융합 단백질은 C-말단에서 폴리펩타이드 링커 서열을 통해 면역글로불린 Fc 영역 폴리펩타이드에 공유연결된 IL10 폴리펩타이드를 포함하는 "ILIO-Fc" 융합 단백질을 포함한다.　본 발명의 융합 단백질들은 또한 항체가 전형적으로 항체의 경쇄(LC) 또는 중쇄(HC) 말단에 대한 링커를 통해 폴리펩타이드 또는 단백질에 공유적으로 접합(또는 융합)되는 "항체 융합체들"을 포함한다.　본 발명의 예시적인 항체 융합체는 15개 아미노산 폴리펩타이드 링커(예를 들어, 서열번호: 74)를 통해 항체 중쇄의 C-말단으로부터 IL10 폴리펩타이드의 N-말단으로 재조합 IL10 폴리펩타이드에 융합된 항-PD-L1 항체를 포함한다. 항체 융합체들은 "Ab/IL10" 또는 "항-PD-L1/IL10"과 같은 융합 성분들을 나타내기 위해 "항체/폴리펩타이드" 명명법으로 본원에서 라벨링된다.　본 명세서의 다른 곳에 기술된 바와 같이, 본 발명의 항체 융합체는 중쇄-경쇄 쌍의 이량체 복합체를 포함하는 전장 IgG 항체를 포함할 수 있으며, 여기서 각각의 중쇄 C-말단은 폴리펩타이드 링커 서열을 통해 IL10 폴리펩타이드에 연결된다. 다양한 예시적인 융합 단백질들의 아미노산 서열들이 하기의 표 2 및 첨부된 서열목록에 제공되어 있다.

본 명세서에 사용된 "폴리펩타이드 링커" 또는 "링커 서열"은 사슬의 각 말단이 서로 다른 폴리펩타이드 분자에 공유적으로 부착됨으로써 서로 다른 폴리펩타이드들을 접합시키거나 융합시키는 기능을 하는 2개 이상의 아미노산들의 사슬을 의미한다.　전형적으로, 폴리펩타이드 링커들은 5 내지 30개 아미노산들의 폴리펩타이드 사슬들을 포함한다.　광범위한 폴리펩타이드 링커들이 당 분야에 공지되어 있으며, 본 발명의 조성물 및 방법에 사용될 수 있다.　본 발명의 조성물 및 방법에 포함되는 예시적인 폴리펩타이드 링커들은 일반적으로 (GGGGS)n, (SSSSG)n, (GGGG)(SGGGG)n, (EAAAK)n, (XP)n, ENLYFQ(-GZS)를 포함하고, 여기서 n은 1 내지 6이며, 본 명세서의 다른 곳에서 개시된 바와 같은 다른 특정 링커 서열들을 포함한다.

"항-PD-L1 항체" 또는 "PD-L1에 결합하는 항체"는 PD-L1을 표적화하기 위한 치료제 및/또는 진단제로서 유용하도록 충분한 친화도로 PD-L1에 결합하는 항체를 의미한다. 일부 구체예들에서, 관련되지 않은 비-PD-L1 항원에 대한 항-PD-L1 특이적 항체의 결합 정도는, 예를 들어, 방사면역분석법(RIA) 또는 표면 플라스몬 공명(SPR)에 의해 측정된 PD-L1에 대한 상기 항체의 결합의 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 또는 약 5% 미만이다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 항-PD-L1 항체는 ＜1μM, ＜100nM, ＜10nM, ＜1nM, ＜0.1nM, ＜0.01nM, 또는 ＜1pM (예를 들어, 10^-8 M 이하, 예를 들어 10^-8 M 내지 10^-13 M, 예를 들어 10^-9 M 내지 10^-13 M)의 해리상수(KD)를 갖는다.

본 명세서에 사용된 "T 세포 기억반응"은, T 세포가 이전에 그들의 특정 항원을 접하고 그에 반응한 후, 또는 T 세포가 활성화된 T 세포로부터 분화된 후의 T 세포의 활성화를 의미한다.　예를 들어, 종양특이적 기억 T 세포들은 전체 T 세포 양의 작은 부분을 차지하지만, 개인의 전체 수명 동안 종양 세포들을 감시하는 데 중요한 기능을 수행하다.　종양특이적 기억 T 세포가 자신의 특정 종양 항원을 발현하는 종양 세포를 만나는 경우, 기억 T 세포는 즉시 활성화되어 클론 확장된다.　활성화되고 확장된 T 세포는 효과기 T 세포로 분화되어 종양 세포를 높은 효율로 죽인다.　기억 T 세포는 T 세포의 장기적인 종양 항원 특이적 반응을 확립하고 유지하는 데 중요하다.　본 발명에서는, 기억반응을 갖는 활성화된 T세포가 암세포 상의 항원을 특이적으로 인식함으로써, 이러한 T세포가 암세포의 방어기전을 회피하면서 암성 또는 종양성 질환을 치료하거나 암의 재발, 진행 또는 전이를 예방할 수 있다.

본 명세서에 사용된 "항체"는 특정 항원에 특이적으로 결합하거나 면역학적으로 반응성인 하나 이상의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 분자를 의미한다.　본 발명의 예시적인 항체들에는 천연 항체, 전체 항체, 단클론 항체, 다클론 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 다중특이적(또는 이종접합체) 항체(예를 들어, 이중특이적 항체), 1가 항체, 다가 항체, 항원-결합 항체 단편(예를 들어, Fab', F(ab')2, Fab, Fv, rIgG 및 scFv 단편), 항체 융합체 및 합성 항체(또는 항체 모방체)가 포함된다.

"전장 항체", "온전한 항체" 또는 "전체 항체"는 본 명세서에서 천연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖는 항체 또는 본 명세서에서 정의된 바와 같은 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하기 위해 상호교환적으로 사용된다.

"항체 단편" 또는 "항원 결합 단편"은 전장 항체와 동일한 항원에 결합할 수 있는 전장 항체의 일부분을 의미한다.　항체 단편의 예는, 제한되지는 않지만, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2;　디아바디;　선형 항체;　단일 사슬 항체 분자(예로서, scFv);　및 항체 단편들로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.　

항체의 '클래스(class)'는 항체의 중쇄가 보유하는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 의미한다.　항체에는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM의 5가지 주요 클래스가 있으며, 이들 중 일부는 하위 클래스(아이소타입), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가로 나뉜다.　다양한 클래스의 면역글로불린에 해당하는 중쇄 불변 도메인들을 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 지칭된다.

'가변 영역' 또는 '가변 도메인'은 항체를 항원에 결합시키는 데 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 의미한다.　천연 항체의 중쇄 및 경쇄(각각 VH 및 VE)의 가변 도메인들은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(FR) 및 3개의 초가변 영역(HVR)을 포함한다(예를 들어, Kindt et al., Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 참조).　단일 VH 또는 VL 도메인은 항원 결합 특이성을 부여하는데 충분할 수 있다.　또한, 특정 항원에 결합하는 항체들은 각각 상보적인 VL 도메인 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다(예를 들어, Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991) 참조).

본 명세서에 사용된 "상보성 결정영역" 또는 "CDR"은 가장 높은 서열가변성을 갖고/갖거나 항원 인식에 관여하는 가변 도메인의 초가변 영역들 내의 영역들을 의미한다.　일반적으로, 천연 항체는 6개의 CDR;　중쇄 가변 도메인들에서 3개, VH(H1, H2, H3), 및 경쇄 가변 도메인들에서 3개, VL(LI, L2, L3)을 갖는 4개의 사슬을 포함한다.　예시적인 CDR들(CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3)은 L1의 24-34, L2의 50-56, L3의 89-97, H1의 31-35, H2의 50-65, 및 H3의 95-102의 아미노산 잔기들에서 발생한다.(Kabat 등, 상기 참조).　VH에서의 CDR-H1을 제외하고, CDR들은 일반적으로 초가변 루프들을 형성하는 아미노산 잔기들을 포함한다.

'프레임워크' 또는 "FR"은 초가변 영역(HVR) 잔기들 이외의 가변 도메인 잔기들을 의미한다.　가변 도메인의 FR은 일반적으로 FR1, FR2, FR3 및 FR4의 네 가지 FR 도메인들로 구성된다.　따라서, HVR 서열 및 FR 서열은 일반적으로 VH(또는 VL)에서 다음의 서열로 나타난다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.

본 명세서에 사용된 '단클론 항체'는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 얻은 항체를 의미하고, 즉 상기 항체 집단을 구성하는 개별 항체들은 동일하고, 그리고/또는 가능한 변이체 항체들(예로서, 변이체 항체들은 자연적으로 발생하거나 단클론 항체 생산 중에 발생하는 돌연변이가 포함되어 있으며, 일반적으로 소량으로 존재한다)을 제외하고, 동일한 에피토프에 결합한다.　일반적으로 다양한 결정인자들(에피토프들)에 대한 다양한 항체들을 포함하는 다클론 항체 제제와 달리, 단클론 항체 제제의 각 단클론 항체는 항원의 단일 결정인자에 대한 것이다.　따라서, 용어 "단클론성"은 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 얻어지는 항체의 특성을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 요구하는 것으로 해석되어서는 안된다.　예를 들어, 사용되는 단클론 항체는, 제한되지는 않지만, 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파지-디스플레이 방법 및 인간 면역글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유하는 형질전환 동물을 이용하는 방법을 포함하는 다양한 기술들에 의해 제조될 수 있고, 단클론성 항체를 제조하기 위한 이러한 방법들 및 다른 예시적인 방법들이 본 명세서에 기술되어 있다.

'키메라 항체'는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 공급원 또는 종으로부터 유래되고, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지 부분은 다른 공급원 또는 종으로부터 유래된 항체를 의미한다.

'인간화 항체'는 비인간 HVR들 유래의 아미노산 서열들 및 인간 FR들 유래의 아미노산 서열들을 포함하는 키메라 항체를 의미한다.　특정 구체예들에서, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이고, FTVR들(예를 들어, CDR들)의 전부 또는 실질적으로 전부는 비인간 항체의 것들에 상응하고, FR들의 전부 또는 또는 실질적으로 전부는 인간 항체의 것들에 해당한다.　인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체, 예를 들어, 비인간 항체의 "인간화 형태"는 인간화를 거친 항체를 의미한다.

본 명세서에 사용된 '인간 항체'는 프레임워크 및 CDR 영역 둘 모두가 인간 생식선 면역글로불린 서열들로부터 유래된 가변 영역들을 갖는 항체들을 포함하는 것으로 의도된다.　또한, 상기 항체가 불변 영역을 포함하는 경우, 상기 불변 영역은 또한 인간 생식선 면역글로불린 서열들로부터 유래된다.　본 발명의 인간 항체는 인간 생식선 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기들(예를 들어, 시험관 내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이 유발에 의해 또는 생체 내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이들)을 포함할 수 있다. 그러나, 본 명세서에서 사용된 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 다른 포유동물 종의 생식선으로부터 유래된 CDR 서열들이 인간 프레임워크 서열들에 이식된 항체들을 포함하려는 의도는 아니다.

"친화도"는 분자(예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호작용의 총합의 강도를 의미한다.　"결합 친화도"는 결합 쌍의 구성원들(예를 들어, 항체와 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유한 결합 친화도를 의미한다.　파트너 Y에 대한 분자 X의 친화도는 일반적으로 평형해리상수(KD)로 표시될 수 있다.　친화도는 본 명세서에 기술된 방법들을 포함하여 당 분야에 공지된 일반적인 방법들에 의해 측정될 수 있다.　결합 친화도를 측정하기 위한 특정의 구체적이고 예시적인 구체예들은 하기에 기재되어 있다.

'특이적으로 결합한다' 또는 '특이적 결합'은 약 1×10^-7M 이하의 친화도 값으로 항체가 항원에 결합하는 것을 의미한다.

"치료", "치료하다" 또는 "치료하는"은 치료되는 대상에서 장애의 자연 경과를 변경하려는 시도에서의 임상적 개입을 의미하고, 예방을 위해 또는 임상병리학 과정 동안에 수행될 수 있다.　치료의 바람직한 결과에는 장애의 발생 또는 재발 방지, 증상의 완화, 장애의 직간접적인 병리학적 결과의 감소, 전이 방지, 진행률 감소, 질병 상태의 개선 또는 완화, 및 차도 또는 개선된 예후가 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 암 또는 바이러스 감염의 치료는, 암 또는 바이러스 감염을 예방하거나, 발병을 지연시키거나, 진행을 늦추거나, 근절하기 위해 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질을 포함하는 치료 유효량의 약학적 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함할 수 있다.

"약학적 조성물" 또는 "조성물" 또는 "제제"는, 활성성분(들)의 생물학적 활성이 효과적이게 하고 상기 제제가 투여되는 대상들에게 독성이 되는 추가 성분을 함유하지 않는 형태의 제제를 의미한다.

본 명세서에 사용된 "단일 활성제"는, 치료되는 상태에 대해 대상을 치료하기 위한 관련된 약리학적 효과를 제공하거나 제공할 것으로 예상되는, 제제에 존재하는 유일한 활성제인 약학적 제제 중의 활성제를 의미한다. 단일 활성제를 포함하는 약학적 제제는 상기 제제 중의 약학적으로 허용가능한 담체와 같은 하나 이상의 비활성제의 존재를 배제하지 않는다.　"비활성제(non-active agent)"는 대상의 상태를 치료하기 위한 관련 약리학적 효과를 제공하거나 크게 기여할 것으로 예상되지 않는 첨가제이다.

"약학적으로 허용가능한 담체"는 활성 성분 이외의 약학적 제제 내 성분을 의미하며, 이는 투여 대상에게 무독성이다.　약학적으로 허용가능한 담체에는 완충제, 부형제, 안정화제 또는 보존제가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다.

본 명세서에 사용된 "치료 유효량"은 원하는 치료 또는 예방 결과를 달성하기 위한, 예를 들어 대상의 질병, 장애 또는 상태를 치료 또는 예방하기 위한 활성 성분 또는 제제(예로서, 약학적 조성물)의 양을 의미한다. 암 또는 바이러스 감염이 있는 대상의 경우, 상기 치료제의 치료 유효량은, 바이러스 양 및/또는 대상에서 검출가능한 바이러스 Ag의 양을 포함하는, 암 또는 바이러스 감염과 관련된 증상들 중 하나 이상을 감소, 예방, 억제 및/또는 어느 정도 완화시키는 양이다. 암 또는 바이러스 감염의 치료학적 치료의 경우, 생체내 효능은, 예를 들어 증상의 기간, 중증도 및/또는 재발, 반응률(RR), 반응 기간 및/또는 삶의 질을 평가함으로써 측정될 수 있다.

"대상(subject)"은 영장류(예로서, 인간 및 원숭이와 같은 비인간 영장류), 설치류(예로서, 마우스 및 쥐), 토끼 및 가축(예로서, 소, 양, 고양이, 개, 말)을 포함하지만 이에 제한되지 않는 포유동물을 의미한다.

본 명세서에서 언급된 "필요로 하는 대상(subject in need)"은 HBV 보균자와 같은 HBV 감염 환자, 만성 HBV 감염 환자, HBV 지속성 환자 또는 HBV 감염 위험이 있는 환자를 포함한다.

본 명세서에 사용된 '면역관문 분자'는 면역계 경로를 조절하여 불필요하게 세포를 공격하는 것을 방지하는 기능을 하는 분자를 의미한다.　많은 면역관문 분자들은 암 및 바이러스 감염의 치료에서 면역요법(예로서, 차단 항체 사용)의 표적들이다.　현재 면역요법을 위해 표적화된 예시적인 면역관문 분자에는 PD1, PD-L1, CTLA-4, TIGIT, LAG3, PVRIG, KIR, TIM-3, CRTAM, BTLA, CD244, CD160, LIGHT, GITR, 4-1BB, 0X40, CD27이 포함된다. , TMIGD2, ICOS, CD40, CD47, SIRPa, NKG2D, NKG2A, TNFRSF25, CD33, CEA, Epcam, GPC3, CD200, CD200R, CD73, CD83, CD39, TRAIL, CD226 및 VISTA가 포함된다.

다양한 구체예들의 상세한 설명

I. IL-10

인간 IL-10 사이토카인은 2개의 178개 아미노산 폴리펩타이드 서브유닛으로 구성된 동종이량체 단백질이다.　IL-10은 2개의 IL-10 수용체-1(IL-1ORα 서브유닛)및 2개의 IL-10 수용체-2(IL-10Rβ 서브유닛) 단백질들로 구성된 수용체 복합체를 통해 신호를 보낸다.　결과적으로, 상기 기능성 수용체는 4개의 IL-10 수용체 분자들로 구성된다.　IL-1ORα에 대한 IL-10의 결합은 JAK1 및 Tyk2에 의한 IL-10 수용체의 세포질 꼬리의 인산화를 통해 STAT3 신호전달을 유도한다.　IL-10은 주로 단핵구들, 그리고 보다 적은 정도로 림프구들, 즉 Ⅱ형 T 보조 세포(T_H2), 비만 세포, CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ 조절 T 세포, 및 활성화된 T 세포들과 B 세포들의 특정 하위집합(subset)에서 생산된다. IL-10은 PD1 유발에 따라 단핵구들에 의해 생산될 수 있다.　하기 표 1은 본 발명의 실시예들에서 사용된 인간 IL-10 폴리펩타이드의 아미노산 서열들 및 이들의 서열 식별자들에 대한 요약 설명을 제공한다.　또한, 상기 서열들은 첨부된 서열목록에도 포함되어 있다.

표 1: 재조합 IL-10 폴리펩타이드 및 폴리펩타이드 링커

표시	서열	서열번호
IL-10	SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRRCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN	73
IL-10 R104Q	SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLQLRRCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN	172
IL-10 R107A	SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRACHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN	173
IL-10 R107E	SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRECHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN	174
IL-10 R107Q	SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRQCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN	175
IL-10 R107D	SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRDCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN	176
IL-10 R104Q/R107A (QA)	SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLQLRACHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN	177
IL-10 R104Q/R107E	SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLQLRECHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN	178
IL-10 R104Q/R107Q	SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLQLRQCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN	179
IL-10 R104Q/R107D	SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLQLRDCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN	180
링커	LGGGGSGGGGSGGGG	74
링커	GGGGSGGGGSGGGG	75
링커	GGGGSGGGGSGGGGS	76
링커	GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS	77
링커	GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS	78
링커	GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS	79

자연 발생 인간 IL-10에 더하여, IL-10의 사이토카인 기능을 보유하는 다양한 조작된 및/또는 합성 변형된 IL-10 폴리펩타이드들이 당 분야에 공지되어 있다.　PEG화된 IL-10인 페길로데카킨(Pegilodecakin)은 자연 발생 인간 IL-10의 항종양 면역 감시 기능을 보유하는 것으로 나타났다.　Naing, A. et al. "PEGylated IL-10 (Pegilodecakin) Induces Systemic Immune Activation, CD8+ T Cell Invigoration and Polyclonal T Cell Expansion in Cancer Patients." Cancer Cell 34, 775-791. (2018) 참조.　조작된 IL-10 변이체 R5A11은 IL10R2에 대해 더 높은 친화성을 갖고, 인간 CD8+ T 세포에서 향상된 신호 활성을 나타내며, CAR-T 세포의 항종양 기능을 향상시키는 것으로 나타났다.　Gorby, C. et al. "Engineered IL-10 variants elicit potent immunomodulatory effects at low ligand doses." Sci Signal 13, (2020) 참조.　엡스타인-바(Epstein-Barr) 바이러스 유래의 IL-10은 IL-10R1에 대한 결합이 약하지만 인간 IL10의 면역억제 사이토카인 활성을 보유하는 반면, 일부 세포들에서는 면역자극 활성을 유도하는 능력을 상실하였다.　Yoon, S. I. et al. "Epstein-Barr virus IL-10 engages IL-10R1 by a two-step mechanism leading to altered signaling properties." J Biol Chem 287, 26586-26595 (2012) 참조. US 7,749,490 B2 및 US 2017/0015747 A1은 MC/9 세포 증식 검정에서 더 낮은 면역자극 활성을 나타내는 조작된 IL-10 돌연변이체(예를 들어, F129S-IL10)를 기재하고 있다.　일반적으로, 일부 IL-10 사이토카인 기능을 유지하는 임의의 조작되거나 변형된 버전의 IL-10 폴리펩타이드가 본 발명의 임의의 항-PD-L1/IL10 융합 단백질 조성물 및 방법에 사용될 수 있는 것으로 고려된다.

일부 구체예들에서, IL-10은 야생형 IL-10의 아미노산들에 비해 위치 104, 위치 107 및 이들의 조합 위치에서의 아미노산들에 대한 하나 이상의 치환을 포함하는 IL-10 무테인(mutein)일 수 있다.　일 구체예에서, 상기 치환은 R104Q;　R107A, R107E, R107Q 및 R107D 중 어느 하나;　또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.　일부 구체예들에서, 본 발명의 IL-10 무테인은 서열번호: 73, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179 또는 180과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열동일성을 가지고, 다음의 아미노산 치환들에 상응하는 아미노산 치환들을 더 포함한다: (a) R104Q;　(b) R107A;　(c) R107E;　(d) R107Q;　(e) R107D;　(f) R104Q/R107A;　(g) R104Q/R107E;　(h) R104Q/R107Q;　및 (i) R104Q/R107D.

III.　항-PD-L1 항체 및 항-PD-L1/IL-10 융합 단백질

일부 구체예들에서, 본 발명은 아미노산 및 다양한 공지의 면역글로불린 특징부들(예를 들어, CDR, FR, V_H, V_L 도메인들 및 전장 중쇄 및 경쇄)의 뉴클레오타이드 서열들을 암호화하는 관점에서 항-PD-L1 항체들의 구조물들을 제공한다. 하기의 표 2는, 항체 융합체를 포함하는 본 발명의 항-PD-L1 항체 서열들 및 이들의 서열 식별자들에 대한 요약 설명을 제공한다.　해당 서열들은 첨부된 서열목록에 포함되어 있다.

표 2: 항-PD-L1 항체 융합 서열

단백질명	설명	서열	서열번호
아테졸리주맙/ IL10	중쇄	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqyastyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk LGGGGSGGGGSGGGG SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRRCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN	80
아테졸리주맙/ IL10	경쇄	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec	143
아벨루맙/IL10	중쇄	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSSastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk LGGGGSGGGGSGGGG SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRRCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN	81
아벨루맙/IL10	경쇄	QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVLgqpkanptvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadgspvkagvettkpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs	145
두르발루맙/ IL10	중쇄	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGWFGELAFDYWGQGTLVTVSSastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfppvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqyastyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk LGGGGSGGGGSGGGG SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRRCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN	82
두르발루맙/ IL10	경쇄	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAWYYCQQYGSLPWTFGQGTKVEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec	147
PHS102/IL10	중쇄	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTITDSFIHWVRQAPGKGLEWVARIDPYGGTTNYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARAYSWFSDYWGQGTLVTVSSastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqyastyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk LGGGGSGGGGSGGGG SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRRCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN	83
PHS102/IL10	경쇄	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAGQDVYKAVAWYQQKPGKAPKLLIYWSTNLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGSTWPLTFGQGTKVEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec	141
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가변도메인: 대문자 불변도메인: 소문자 링커: 대문자 이탤릭체 IL-10: 대문자 밑줄 인간 IgG1 Fc 단편: 소문자 볼드체

항-PD-L1 항체들의 약학적 조성물 및 제제들

본 발명은 또한 항-PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질을 포함하는 약학적 조성물 및 약학적 제제를 제공한다.　일부 구체예들에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 항-PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 제제를 제공한다.　일부 구체예들에서, 상기 항-PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질은 상기 약학적 조성물의 유일한 활성제이다.　이러한 약학적 제제는 원하는 정도의 순도를 갖는 항-PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질을 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합함으로써 제조될 수 있다.　전형적으로, 그러한 항체 제제는 수용액(예를 들어, 미국특허 제6,171,586호 및 WO2006/044908 참조) 또는 동결건조 제제(예를 들어, 미국특허 제6,267,958호 참조)로서 제조될 수 있다.

약학적으로 허용가능한 담체는 일반적으로 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성이다.　이러한 약학적으로 허용가능한 광범위한 담체는 당 분야에 잘 알려져 있다(예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980) 참조).　본 발명의 제제에 유용한 예시적인 약학적으로 허용가능한 담체는 다음을 포함하지만, 이들에 제한되지는 않는다: 인산염, 구연산염 및 기타 유기산들과 같은 완충제;　아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제;　보존제(예로서, 옥타데실디메틸벤질암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질알코올; 메틸파라벤 또는 프로필파라벤과 같은 알킬파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥사놀; 3-펜탄올 및 m-크레졸);　저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩타이드;　혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질;　폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 폴리머;　글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 라이신과 같은 아미노산;　단당류, 이당류, 및 글루코오스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 기타 탄수화물;　EDTA와 같은 킬레이트제;　수크로스, 만니톨, 트레할로스, 또는 소르비톨과 같은 당류;　나트륨과 같은 염-형성 반대 이온;　금속 복합체(예로서, Zn-단백질 복합체);　및/또는 폴리에틸렌글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제.

또한, 본 발명의 제제에 유용한 약학적으로 허용가능한 담체는, 인간 가용성 PH-20 히알루로니다제 당단백질(예로서, rHuPH20 또는 HYLENEX^®, Baxter International, Inc.)과 같은 가용성 중성-활성 히알루로니다제 당단백질(sHASEGP)과 같은 간질성 약물 분산제를 포함할 수 있다(예를 들어, 미국특허 제2005/0260186호 및 제2006/0104968호 참조).

또한, 본 명세서에 개시된 제제는, 해당 제제가 투여되는 대상에서 치료되는 특정 적응증에 필요한 경우, 상기 항-PD-L1-IL-10 융합 단백질 외에 활성 성분들을 함유할 수 있는 것으로 고려된다.　바람직하게는, 임의의 추가 활성 성분들은 항-PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 활성에 상보적인 활성을 가지며, 상기 활성은 서로 악영향을 미치지 않는다.

실시예들을 포함하여 본 명세서의 다른 곳에 개시된 바와 같이, 본 발명의 항-PD-L1 항체는 IL10 폴리펩타이드와 조합하여 사용되어 암 치료에서 개선된 치료 효과를 제공할 수 있음이 밝혀졌다.　따라서, 일부 구체예들에서, 본 발명은 PD-L1 길항제(예를 들어, 항-PD-L1) 및 IL10 작용제(예를 들어, IL10)를 포함하는, 암 치료에 유용한 약학적 조성물 또는 제제를 제공한다.　또한, 상기한 약학적 제제 또는 조성물에서 PD-L1 길항제로서 본 발명의 항-PD-L1 항체의 사용에 대해, shRNA, siRNA, miRNA, PD-L1의 소분자 억제제, 또는 이들의 조합를 포함하지만 이에 제한되지는 않는 다른 길항제들이 사용될 수 있다는 것도 고려된다. 이러한 약학적 조성물 또는 제제에 유용한 PD-L1의 소분자 억제제는, 제한되지는 않지만, AUNP12(Aurigene), CA-170(Aurigene/Curis) 및 BMS-986189(Bristol-Myers Squibb)를 포함하는 임상 개발 중인 공지된 화합물들이 포함될 수 있다. 본 발명의 항-PD-L1 항체들 외에, IL10과 조합된 약학적 조성물 또는 제제에 유용한 다른 공지된 항-PD-L1 항체들은, 본 명세서의 다른 곳에 기재된, 아테졸리주맙(Atezolizumab), 아벨루맙(Avelumab), 두르발루맙(Durvalumab), 로다폴리맙(Lodapolimab), FAZ053(BAP058-huml3) 및 MDX-1105와 같은, 암 치료를 위해 임상 개발 중인 항체들을 포함하여, PD-L1에 결합하는 임의의 공지된 항체들을 포함할 수 있다.

본 명세서의 다른 곳에 기재된 바와 같이, 일부 구체예들에서, 본 발명은 PD-L1 길항제 및 IL10 작용제를 포함하는 병용 요법에 사용하기 위한 약학적 조성물 또는 제제를 제공한다.　일부 구체예들에서, 이 조합은 서열번호: 74, 75, 76, 77, 78, 또는 79의 링커 서열과 같은 폴리펩타이드 링커를 통해 IL10에 공유 융합된 항-PD-L1 항체를 갖는 항-PD-L1 항체 융합체를 포함하는 단일 약학적 조성물 또는 제제로서 제공될 수 있다. 이러한 항-PD-L1 항체 융합체들(예를 들어, PHS102/IL10) 및 다양한 동계 마우스 암 모델에서 종양 부피를 감소시키기 위한 약학적 조성물에서의 그들의 이용을 입증하는 실시예들은 상기 실시예들들 포함하여 본 명세서의 다른 곳에서 제공된다.　항-PD-L1 항체 융합체의 생성, 친화도 성숙 및 특성 규명에 대한 세부사항은 본 명세서에 참고문헌으로서 통합되는 PCT 공개공보 WO2021231741 A2에 포함된 실시예들에서 찾을 수 있다.　

일부 구체예들에서, 상기 약학적 조성물은 항-PD-L1 항체 및 면역관문 억제제와 같은 암 치료를 위한 추가 활성제를 포함한다.　이러한 구체예들에 유용한 관문 억제제는 면역관문 분자인 항원에 대한 특이성을 포함하는 제2 항체를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.　일부 구체예들에서, 상기 제2 항체는 PD1, LAG3, CTLA-4, A2AR, TIM-3, BTLA, CD276, CD328, VTCN1, IDO, KIR, NOX2, VISTA, 0X40, CD27, CD28, CD40, CD122, CD137, GITR, ICOS로부터 선택된 면역관문 분자에 대한 특이성을 포함한다.　적어도 하나의 구체예에서, 상기 약학적 조성물은 항-PD-L1 항체 및 추가 활성제를 포함하고, 상기 추가 활성제는 면역관문 분자 PD1에 대한 특이성을 포함하는 항체이다.　본 명세서에 개시된 약학적 조성물 구체예들에 유용한, PD1에 대한 특이성을 포함하는 예시적인 항체들은 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 세미플리맙, 피딜리주맙, 도스타리맙 및 HX008을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.　

활성 성분들은, 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 콜로이드 약물 전달 시스템(예로서, 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 매크로에멀젼 중의 히드록시메틸셀루로오스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 내에 캡슐화될 수 있다.　이러한 기술들은 Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed.　(1980)에 개시되어 있다.

일부 구체예들에서, 상기 제제는 항체 및/또는 다른 활성 성분들의 서방형 제제일 수 있다.　서방형 제제의 적합한 예로는 항체를 함유하는 고체 소수성 폴리머의 반투과성 매트릭스가 포함되며, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다.

전형적으로, 대상에게 투여될 본 발명의 제제는 멸균되어 있다.　멸균 제제는 잘 알려진 기술, 예를 들어 멸균 여과막을 통한 여과를 사용하여 쉽게 제조될 수 있다.

항-PD-L1 항체-IL-10 융합체의 투여 방식

치료 방법에 따라 항-PD-L1 항체-IL-10 융합체를 포함하는 조성물 또는 제제를 필요로 하는 대상에게 투여하면, T 세포 기억반응 촉진을 통해 암, 암 재발 또는 바이러스 감염으로부터 상기 대상을 보호 및/또는 치료하는 치료 효과를 제공한다.

본 발명의 치료 방법의 일부 구체예들에서, 상기 항-PD-L1 항체-IL-10 융합 조성물 또는 항-PD-L1 항체-IL-10 융합체를 포함하는 제제는, 상기 제제를 전신적으로 전달하거나 원하는 표적 조직에 전달하는 임의의 투여 방식에 의해 대상에게 투여된다. 일반적으로 전신 투여는, 상기 항체 또는 그의 제제가 직접적으로 원하는 표적 부위, 조직 또는 기관 내로 투여되는 것이 아니라, 상기 항체 또는 그의 제제가 대상의 순환계 내로 들어가서 신진대사 및 다른 유사한 과정들에 관여되도록 대상에게 항체를 투여하는 임의의 방식을 의미한다.

따라서, 본 발명의 T 세포 기억반응 촉진을 통한 암, 암 재발 또는 바이러스 감염의 치료 방법에 유용한 투여 방식은 주사, 주입, 점적 및 흡입을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.　주사에 의한 투여로는 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 뇌실내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 기관경관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 거미막하, 척수내, 뇌척수내 및 흉골내 주사 및 주입이 포함될 수 있다.

본 발명의 방법에 따른 일 구체예에서, 상기 항-PD-L1 항체-IL-10 융합체는, 비경구, 피하, 근육내, 정맥내, 관절내, 기관지내, 복강내, 피막내, 연골내, 강내, 복강내, 소뇌내, 뇌실내, 복강내, 경추내, 위내, 간내, 심근내, 골내, 골반내, 심낭내, 복강내, 흉막내, 전립선내, 폐내, 직장내, 신장내, 망막내, 척수내, 윤활막내, 흉강내, 자궁내, 방광내, 볼루스, 질, 직장, 협측, 설하, 비강내 및 경피로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 경로에 의해 이를 필요로 하는 대상에게 투여될 수 있다. 일 구체예에서, 상기 항-PD-L1 항체-IL-10은 필요로 하는 대상에게 정맥내로 투여될 수 있다.

일부 구체예들에서, 상기 항-PD-L1 항체-IL-10의 제제는 상기 항체가 장 내에서 불활성화되지 않게 보호되도록 제제화된다.　따라서, 상기 치료 방법은 상기 제제의 경구 투여를 포함할 수 있다.

일부 구체예들에서, 본 발명은 T 세포 기억반응의 촉진을 통해 암, 암 재발 또는 바이러스 감염을 치료하기 위한 의약으로서 항-PD-L1 항체-IL-10을 포함하는 조성물 또는 제제의 이용을 제공한다.　추가로, 일부 구체예들에서, 본 발명은 또한 T 세포 기억반응 촉진을 통한 암, 암 재발 또는 바이러스 감염의 치료를 위한 의약의 제조 또는 조제에 있어서 항-PD-L1 항체-IL-10을 포함하는 조성물 또는 제제의 이용을 제공한다.　추가의 일 구체예에서, 상기 의약은, 유효량의 상기 의약을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, T 세포 기억반응의 촉진을 통해 암, 암 재발 또는 바이러스 감염을 치료하는 방법에 사용하기 위한 것이다.　특정 구체예들에서, 상기 의약은 유효량의 적어도 하나의 추가 치료 약제 또는 치료제를 더 포함한다.

추가의 일 구체예에서, 상기 의약은, T 세포 기억반응의 촉진을 통해 암, 암 재발 또는 바이러스 감염을 치료하기 위해 대상에게 유효량의 상기 의약을 투여하는 것을 포함하는, 대상에서 T 세포 기억반응을 촉진함으로써 암, 암 재발 또는 바이러스 감염을 치료하는데 사용하기 위한 것이다.

T 세포 기억반응 촉진을 통한 암, 암 재발 또는 바이러스 감염의 치료를 위해, 본 발명의 조성물 및 제제에 함유된 항-PD-L1 항체-IL-10의 적절한 용량(단독으로 사용되거나 하나 이상의 다른 추가 치료제와 병용하는 경우)은 질병의 중증도 및 경과, 항체가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 환자에게 투여된 이전의 치료법, 환자의 임상 이력 및 항체에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 따라 결정될 것이다.

일반적으로, 본 발명의 방법에 유용한 치료 요법은 이를 필요로 하는 대상의 의료진에 의해 결정될 수 있다.　본 발명의 항-PD-L1 항체-IL-10은 본 명세서에 기재된 조성물 및 제제에 포함될 때, 환자에게 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 적합하게 투여될 수 있다.　다양한 시점에 걸친 단일 또는 다중 투여, 일시 투여 및 펄스 주입을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 다양한 투여 일정이 본 발명에서 고려된다.

상기 방법의 일부 구체예들에서, 상기 항-PD-L1 항체-IL-10을 포함하는 조성물은 필요로 하는 대상에게 1일 1회 초과, 적어도 1일 1회, 적어도 1주 1회 또는 적어도 1개월에 1회 투여될 수 있다.

암, 암 재발 또는 바이러스 감염의 유형 및 중증도에 따라, 본 발명의 제제 중의 약 1㎍/kg 내지 15mg/kg의 항-PD-L1 항체-IL-10이, 예를 들어 1회 이상의 개별 투여 또는 연속 주입에 의해 인간 대상에게 투여하기 위한 초기 투여량이다. 일반적으로, 상기 항체의 투여 용량은 약 0.05mg/kg 내지 약 10mg/kg의 범위일 것이다.　일부 구체예들에서, 약 0.5mg/kg, 2.0mg/kg, 4.0mg/kg 또는 10mg/kg(또는 이들의 임의의 조합)의 하나 이상의 용량이 환자에게 투여될 수 있다.

투여량 투여는 대상의 상태에 따라 수일 이상 유지될 수 있으며, 예를 들어 당 분야에 공지된 방법들에 따라 결정되는 바와 같이 암, 암 재발 또는 바이러스 감염이 충분히 치료될 때까지 투여를 계속할 수 있다.　일부 구체예들에서, 초기에 더 높은 용량이 투여된 후, 하나 이상의 더 낮은 용량이 투여될 수 있다.　그러나, 다른 용량 요법이 유용할 수 있다.　투여량 투여의 치료 효과의 진행은 통상적인 기술들 및 분석들에 의해 모니터링될 수 있다.

따라서, 본 발명의 방법의 일부 구체예들에서, 상기 항-PD-L1 항체-IL-10의 투여는 약 1mg/kg 내지 약 100mg/kg의 1일 투여량을 포함한다.　일부 구체예들에서, 상기 항-PD-L1 항체-IL-10의 용량은 적어도 약 1mg/kg, 적어도 약 5mg/kg, 적어도 약 10mg/kg, 적어도 약 20mg/kg, 또는 적어도 약 30mg/kg의 일일 용량을 포함한다.

다른 치료제와의 병용 치료 방법

본 발명에 따른 일 구체예에서, 상기 방법은 적어도 하나의 추가 치료제를 투여하는 단계를 더 포함할 수 있다.　예를 들어, 상기 추가 치료제는 항-PD-L1 항체-IL-10 조성물과 조합하여 이를 필요로 하는 대상에게 투여될 수 있다 - 예를 들어, 항-PD-L1 항체-IL-10 조성물로서 동시에;　항-PD-L1 항체-IL-10 조성물의 투여 전에;　또는 항-PD-L1 항체-IL-10 조성물 투여 후에 투여될 수 있다.　일부 구체예들에서, 상기 추가 치료제는 암, 암 재발 또는 바이러스 감염에 대한 추가 치료, 또는 암, 암 재발 또는 바이러스 감염과 연관된 질병 또는 상태에 대한 치료를 포함할 수 있다.　상기 병용 치료법에서는 항-PD-L1 항체-IL-10 조성물을 치료제와 조합하여 투여함으로써 상기 치료제의 효능이 개선될 수 있는 것으로 고려된다.　이론에 구애됨이 없이, 치료 유효량의 항-PD-L1 항체-IL-10 조성물 및 선택적 추가 치료제를 투여한 후에, 암, 암 재발 또는 바이러스 감염에 대한 면역 반응이 이를 필요로 하는 대상에서 유도 또는 강화될 수 있고; 암의 크기나 중증도가 감소될 수 있으며;　바이러스에 대한 혈청전환이 유도될 수 있고;　또는 필요로 하는 대상에서 바이러스의 양이 검출할 수 없는 수준까지 감소될 수도 있다.　추가로, 강화된 면역 반응은 면역체계의 활성을 추가로 조절하는 항체들 또는 사이토카인들의 생성을 포함할 수 있다.

일 구체예에서, 적어도 하나의 추가 치료제를 투여하는 것을 포함하는 방법이 수행되며, 상기 추가 치료제는 바이러스 백신이다.　본 명세서의 다른 곳에 기재된 바와 같이, 병용 치료법에 유용한 상기 바이러스 백신은 이미 해당 바이러스에 감염된 대상의 치료를 위한 치료 백신뿐만 아니라 예방을 위한 바이러스 백신을 포함할 수 있다.　일부 구체예들에서, 상기 치료 백신은 DNA 백신, 바이러스 벡터 백신, 단백질 백신 및 다중-펩타이드 백신으로부터 선택된다.

본 명세서의 다른 곳에 설명된 바와 같이, 억제성 면역관문 분자는 암뿐만 아니라 일부 바이러스 감염의 치료를 위한 표적이다.　따라서, 일 구체예에서, 적어도 하나의 추가 치료제를 투여하는 것을 포함하는 방법이 수행되며, 상기 추가 치료제는 억제성 면역관문 분자를 표적으로 하는 항체이다.　일부 구체예들에서, 상기 억제성 면역관문 분자는 PD1, PD-L1 및 CTLA-4로부터 선택된다.　일부 구체예들에서, 억제성 면역관문 분자를 표적으로 하는 상기 항체는 항-PD1, 항-PD-L1 및 항-CTLA-4로부터 선택된다.

본 발명에 따른 다른 구체예들에서, 상기 추가 치료제는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다: 치료제;　영상화제;　세포독성제;　혈관신생 억제제;　키나제 억제제;　공동자극 분자 차단제;　접착 분자 차단제;　항-사이토카인 항체 또는 이의 기능적 단편;　메토트렉세이트;　사이클로스포린;　라파마이신;　FK506;　검출가능한 라벨 또는 리포터;　TNF 길항제;　항-류마티스제;　근육 이완제;　마약;　비스테로이드 항염증제(NSAID);　진통제;　마취제;　진정제;　국소 마취제;　신경근 차단제;　항균제;　항건선제;　코르티코스테로이드;　동화작용 스테로이드;　에리스로포이에틴;　예방접종;　면역글로불린;　면역억제제;　성장 호르몬;　호르몬 대체제;　방사성 의약;　항우울제;　항정신병제;　자극제;　천식제;　베타 작용제;　흡입 스테로이드;　에피네프린 또는 이의 유사체;　사이토카인;　및 사이토카인 길항제;　면역조절제.

일부 구체예들에서, 상기 추가 치료제는 바이러스 진입 억제제, 바이러스 RNA 억제제, 유전자 편집제, 바이러스 항원 분비억제제, 폴리머라제 억제제, 인터페론, 바이러스 성숙 억제제, 뉴클레오시드 역전사효소 억제제, 캡시드 조립 억제제/조절제, cccDNA 억제제, FXR 작용제, 마이크로RNA, TLR 작용제 및 면역 조절제로부터 선택된다.　

실시예

본 발명의 다양한 특징들 및 구체예들은 하기의 대표적인 실시예들에 예시되어 있고, 이들은 예시를 위한 것이지 제한하려는 것이 아니다.　당 분야의 기술자들은 특정 실시예들이 이후에 이어지는 청구범위에서 더욱 완전하게 설명되는 본 발명을 단지 예시하는 것임을 쉽게 이해할 수 있을 것이다.　본 출원에 설명된 모든 구체예와 특징은 그 안에 포함된 모든 구체예와 상호교환 및 결합이 가능한 것으로 이해되어야 한다.

실시예 1: 이중기능성 항-PDL1/IL-10 융합 단백질의 생성

A. 재조합 항-PDL1/IL-10 융합 단백질 생산

재조합 ILIO-Fc 융합 단백질은 14개 아미노산 링커에 의해 분리된 인간 IgG1-Fc의 N-말단에 인간 IL-10을 유전적으로 융합시킴으로써 설계되었다.　재조합 항-PDL1/IL-10 융합 단백질은 인간 IL-10(WT, R107A 또는 R104Q/R107A)을 14개 아미노산 링커에 의해 분리된 항-PDL1(아테졸리주맙, 아벨루맙, 두르발루맙, PHS102, HSYPP31F, HSYPP411C, YP7G, YP1IF, YT6D, YT7A, YT7H 또는 YT10H)IgG1 항체 단편의 C-말단에 유전적으로 융합시켜 설계되었다. 앞에 재조합 단백질들의 분비에 필요한 IL-2 분비 서열이 붙은 원하는 유전자 세그먼트들을 Thermo gene 합성 서비스를 사용하여 획득하고, 포유동물 발현 벡터 내에 클로닝하였다.　상기 융합 단백질들은 형질감염된 ExpiCHO 세포들에서 발현되었다.

B. 재조합 항체 정제

항체들은 ExpiCHO-S 세포들(Thermo Scientific)에서 일시적으로 발현되었다.　파지(phage)가 기하급수적으로 성장하는 동안, 6×10⁶ ExpiCHO-S 세포들을 ExpiFectamine CHO Transfection Kit(Thermo Scientific)에 의해 ILIO-Fc 또는 항-PDL1/IL-10 융합 단백질들을 코딩하는 20㎍의 벡터들로 일시적으로 형질감염시켰다.　형질감염 18-22시간 후, ExpiFectamine CHO Enhancer 및 ExpiCHO Feed를 플라스크에 첨가하였다.　세포들을 8일 동안 배양하였다.　각 배양물의 상층액을 원심분리한 후 0.45㎛ 필터를 통해 여과하였다.

단백질 A 세파로스 패스트 플로우 비드(GE Healthcare)를 사용하여 형질감염된 세포 상청액으로부터 항체들을 정제하였다.　항체가 로딩된 컬럼들을 PBS로 세척한 후 0.1M Glycine(pH 2.5)을 사용하여 1/10 부피의 1M 트리스 완충액(pH 9.0) 내로 직접 용출시켰다.　항체 함유 분획들을 모아서 PBS에 대해 투석하였다.　정제된 항체들의 품질은 환원제의 존재 및 부재 하에서 SDS-PAGE로 검사되었다.

항-PD-L1 항체 융합체의 생성, 친화도 성숙 및 특성 규명에 대한 세부사항은 본 명세서에 참고문헌으로 포함되는 PCT 공개공보　WO2021231741A2에 포함된 실시예들에서 찾아볼 수 있다.　

실시예 2: 항-PDL1/IL-10 융합 단백질은 혼합 림프구 반응(MLR)에서 항원 제시 세포(APC)-매개 T 세포 활성화를 향상시킨다

본 실시예는 MLR에서 T 세포 활성화를 향상시키기 위한 항-PDL1/IL-10의 능력에 대한 연구를 예시한다.　IFNγ의 생산 증가는 T 세포 이펙터 기능과 연관되어 있는 것으로 알려져 있다.

재료 및 방법: 건강한 기증자로부터 인간 말초혈액을 얻었다.　말초혈액 단핵 세포(PBMC)는 Ficoll-Paque Plus(GE Healthcare)를 사용하여 밀도 구배 원심분리에 의해 즉시 분리되었다.　동종이계 APC 역할을 하기 위해 CD14+ 단핵구들은 먼저 기증자 A의 항인간 CD14 접합 자기 비드(Miltenyi Biotec)를 사용하여 분리되었다. 미성숙 수지상 세포(DC) 생성을 위해, 단핵구들은 10% FBS가 보충된 RPMI1640 중의GM-CSF(20ng/mL) 및 IL-4(20ng/mL)와 함께 6일 동안 배양되었다.　성숙한 DC 생성을 위해, 미성숙 DC를 LPS(500ng/mL)로 24시간 동안 처리하였다.　성숙한 DC를 37℃에서 30분 동안 40㎍/mL 미토마이신 C로 처리한 후 T 세포들과 공동 배양하였다.

CD4+ T 세포들은 기증자 B의 항-인간 CD4 접합 자기 비드(Miltenyi Biotec)를 사용하여 분리하였다. 응답자 CD4 T 세포들을 배양 배지에 4×10⁶개 세포/mL로 재현탁시키고, 50μL의 T 세포들을 DC 전용 웰들을 제외한 모든 웰들에 첨가하였다. 자극자 DC를 배양 배지에 4×10⁶개 세포/mL로 재현탁시키고, 50μL의 DC를 CD4 T 전용 웰을 제외한 모든 웰에 첨가하였다.　0.1-2㎍ ILIO-Fc 또는 항-PDL1/IL-10(아벨루맙/ILIO, HSYPP411C/IL10, YP7G/IL10, YP11F/IL10, YT7A/IL10, YT7H/IL10 또는 YT10H/IL10)융합 단백질을 함유하는 추가 100μL 배양 배지를 96-웰 U-바닥 플레이트 내의 CD4 T-DC 배양물에 첨가하였다.　공동 배양물을 37℃에서 배양하였다.　상청액들에서 방출된 IFN-γ 수준은 제조사의 지침에 따라 ELISA(Biolegend)에 의해 5일 후에 측정된다.

결과: 도 1에 도시된 바와 같이, 예시적인 항-PDL1/IL-10 융합 단백질들은 MLR 검정에서 ILIO-Fc 대조군들에 비해 T 세포 활성화를 향상시킬 수 있다.

실시예 3: 종양 내 항-PDL1/IL-10 융합 단백질의 축적

본 실시예는 HNSC 모델에서 종양 조직 내에 축적되는 항-PDL1/IL-10의 능력에 대한 연구를 예시한다.

재료 및 방법: 정제된 항-PDL1/IL-10 융합 단백질(아벨루맙/ILIO)을 제조사의 지침에 따라 근적외선(NIR) 형광 색소 표지 키트(VivoTag 680XL, PerkinElmer)를 사용하여 표지하였다.　HNSC/Q1-2^Lucfenease는 Kuo-Wei Chang 박사(국립 양밍 치아오퉁 대학교 치과학과)가 친절하게 제공한 부모 MTC-Q1(마우스 구강암 세포주) 유래의 루시퍼라제 발현 서브라인이다.　HNSC/Q1-2^Lucfenease 종양 세포들을 종양 성장을 위해 동계 C56BL/6 마우스에 피하 접종하였다.　2주간의 성장 기간 후, HNSC/Q1-2^Lucfenease 종양 보유 마우스에 150㎍ VivoTag680-표지된 항-PDL1/IL-10(아벨루맙/IL10)을 24시간 동안 정맥내 주사한 후, Xenogen IVIS 100 이미징 시스템을 사용하여 생체 발광 및 형광을 검출하였다. 항-PDL1/IL10의 생체분포를 위해, 종양 및 비장을 포함하는 VivoTag680 신호를 갖는 마우스 조직을 분리하여, Vectra Polaris 이미징 시스템(Akoya Biosciences)을 사용한 형광 검사를 통해 항-PDL1/IL-10의 존재를 확인하였다.　

결과: 도 2에 도시된 바와 같이, 항-PDL1/IL-10은 정맥내 투여 후 종양에 특이적으로 축적되지만, 비장이나 다른 조직에는 축적되지 않는다.

실시예 4: 항-PDL1/IL-10은 생체내에서 T 세포 반응을 향상시킨다

본 실시예는 T 세포 반응과 관련된 사이토카인의 혈청 수준을 증가시키는 항-PDL1/IL-10 치료의 능력에 대한 연구를 예시한다.

재료 및 방법: BALB/c 마우스들(6-8주령)에 5×10⁵개의CT26 세포들(ATCC CRL-2638)을 피하 이식하였다.　8일 후, 종양 부피가 50-100mm³에 도달했을 때, 마우스들을 치료 그룹들로 무작위 배정하였다.　그런 다음, 마우스들에게 PBS 대조군, 3mg/kg ILIO-Fc(92kDa), 6mg/kg 항-PDL1/TGFbR(아벨루맙/TGFβR2, M7824, 177kDa) 또는 6mg/kg 항-PDL1/IL-10(아벨루맙/ILIO, 185.5 kDa)을 3주 동안 매주 2회 복강내(i.p.) 주사하였다.　혈액 샘플들은 29일차에 수집되었다. 마우스 CXCL9 및 IL-18의 혈청 수준은 ELISA 키트(Biolegend)로 측정되었다.　

결과: 도 3에 도시된 바와 같이, IL-18의 혈청 수준은 대조군 및 항-PDL1/TGFbR군에 비해 항-PDL1/IL-10군에서 크게 증가하였다.　또한, CXCL9의 혈청 수준도 다른 세 그룹에 비해 크게 증가하였다.

실시예 5: 종양 제어를 향상시키는 항-PDL1/IL-10의 능력은 종양 상주 세포의 증가된 활성에 의존적이었다

본 실시예는 항-PDL1/IL-10 매개 종양 제어에 대한 종양 상주(tumor-resident) 세포의 의존성에 대한 연구를 예시한다.

재료 및 방법: BALB/c 마우스들(6-8주령)에 5×10⁵개의 EMT6 세포들(ATCC CRL-2755)을 피하 이식하였다.　10일 후, 종양 부피가 50-100mm³에 도달했을 때, 마우스들을 치료 그룹들로 무작위 배정하였다.　EMT6 종양 보유 마우스(n=6)를 2주 동안 매일 비히클(1% 에탄올, PO) 또는 FTY720(2mg/kg, PO)으로 치료하였다.　PBS, 항-PDL1(아벨루맙)(10mg/kg) 또는 항-PDL1/IL-10(아벨루맙/ILIO)(12mg/kg)을 11일차부터 4주 동안 매주 2회 복강내 주사를 통해 투여하였다.　종양 부피는 연구가 끝날 때까지 캘리퍼 측정에 의해 주당 2회 측정되었다.

결과: 도 4에 도시된 바와 같이, 항-PDL1/IL-10 군에서는 항-PDL1 군에 비해 종양 부피가 더 작고 생존율이 더 높았으며, 이는 항-PDL1/IL-10이 종양 제어에 중요함을 시사한다.　2차 림프 기관으로부터의 림프구 배출을 억제하는 FTY720과의 공동 치료는, 비록 모든 마우스에서는 아니지만 일부에서 항-PDL1/IL-10의 항종양 활성을 감소시키지 않았다.

실시예 6: 항-PDL1/IL-10 치료는 내구성 있는 T 세포 기억 보호를 발생시킨다

본 실시예는 지속적인 항종양 면역 반응을 발생시키는 항-PDL1/IL-10의 능력에 대한 연구를 예시한다.

재료 및 방법: BALB/c 마우스들(6-8주령)에게 5×10⁵개의 EMT6 세포들(ATCC CRL-2755)을 오른쪽 후방 옆구리 부위에 피하 이식하였다.　7일 후, 종양 부피가 50-100mm³에 도달했을 때, 마우스들을 치료 그룹들로 무작위 배정하였다.　그런 다음, 마우스들(n=7)에게 PBS, 항-PDL1(5mg/kg), 항-PDL1/IL-10(6mg/kg) 또는 항-PDL1/TGFbR(6mg)을 3주 동안 매주 2회 복강내 주사하였다. 재투여 연구를 위해, 종양 '치료' 5주 후(67일차), 치료된 미처리 Balb/c 마우스(n=5)에게 EMT6 종양 세포들을 왼쪽 후방 옆구리 부위에 피하 이식하였다.　종양 부피는 연구가 끝날 때까지 캘리퍼 측정에 의해 주당 2회 측정되었다.

결과: 도 5 및 표 3에 나타난 바와 같이, 항-PDL1/IL-10 치료는 항-PDL1 치료 및 항-PDL1/TGFbR 치료에 비해 더 높은 생존율 및 종양 성장 억제를 나타내었다.　유사하게, 재투여 연구를 위해, 5주 동안 종양이 없었던 항-PDL1/IL10 처리된 마우스에 EMT6 세포들을 처리하였다.　미처리 마우스의 100% 종양 형성과 비교하여, 다음 달 동안 어떤 마우스도 새로운 종양이 자라지 않았는데, 이는 항-PDL1/IL10이 지속적인 종양 특이적 T 세포 반응 및 기억 보호를 유도할 수 있음을 나타낸다.

표 3: EMT6 종양 연구에서 종양 성장 억제, 치료된 마우스의 수 및 평균 전체 생존율의 요약.

실시예 7: 항-PDL1/IL-10 무테인은 종양 성장을 제어하고 T 세포 반응을 향상시킨다

본 실시예는 종양 성장을 제어하고 T 세포 반응을 향상시키는 항-PDL1/IL-10 무테인의 능력에 대한 연구를 예시한다.

재료 및 방법: BALB/c 마우스들(6-8주령)에게 5×10⁵개의 CT26 세포들(ATCC CRL-2638)을 피하 이식하였다.　7일 후, 종양 부피가 50-100mm³에 도달했을 때, 마우스들을 치료 그룹들로 무작위 배정하였다.　이어서, 마우스들에게 1mg/kg 항-PDL1/IL-10 또는 항-PDL1/IL-10 무테인(R107A, R104Q/R107A)을 3주 동안 매주 2회 복강내 주사하였다.　마우스 CXCL9의 혈청 수준은 ELISA 키트(Biolegend)로 측정되었다.

결과: 도 6에 도시된 바와 같이, 항-PDL1/IL-10 무테인, 항-PDL1/IL-10_R107A 및 항-PDL1/IL-10_QA는 항-PDL1/IL-10 WT와 유사한 종양 성장 곡선을 나타내었다.　또한, CXCL9의 혈청 수준도 대조군에 비해 크게 증가했는데, 이는, 대조군에 비해, IL-10 WT 또는 IL-10 무테인을 사용하는 항-PDL1/IL-10 군에서 T 세포 반응이 강화되었음을 나타낸다.

실시예 8: 항-PDL1/IL10 처리된 종양 보유 마우스로부터 단리된 종양 침윤 림프구(TIL)는 더 나은 기억 반응을 나타낸다

본 실시예는 항-PDL1/IL10 처리된 종양 보유 마우스로부터 단리된 PEX가 더 나은 기억 반응을 나타냄을 예시한다.

재료 및 방법: C57BL/6 마우스들에 0일차에 8×10⁵개의 YUMM1.7-GP33 종양 세포들을 피하 접종한 후, 이식 후 9일차에 2×10⁶개의 초기 활성화 Tcf7 ^GFP P14 T 세포들을 정맥내 입양 전달하였다.　P14 TCR 발현 T 세포들은 림프구성 맥락수막염 바이러스(LCMV)의 gp33 에피토프에 특이적이다.　종양 보유 마우스들에게 10일차 및 14일차에 PBS 또는 125㎍ 항-PDL1/IL-10(아벨루맙/ILIO)을 추가로 복강내 투여하였다. 15일차에 종양을 수확한 후, 전구세포가 소진된 CD8+ TIL을 TCF7-GFP⁺PD-1⁺TIM3^-마커에 기초하여 추가로 분류한 후, 미처리 수용자 마우스들에 전달하였다.　다음날, TIL이 전달된 마우스들에 LCMV-Arm(2×10⁵ CFU)을 추가로 재투여하였다.　마지막으로, 비장을 수집하고, 감염 후 8일차에 전달된 세포들을 분석하였다.

결과:　도 7은 재투여에 의해 항-PDL1/IL-10으로 처리된 TIL이, PBS 처리군과 비교하여, (A) PD1 및 (B) TIM3의 공동-억제 수용자들의 발현 수준의 감소, 및 (C) PD-1+TIM3⁺LAG3⁺ 세포 집단의 감소를 보여주어, 더 나은 면역 성능을 나타낸다.

실시예 9: 항-PDL1/IL-10 치료는 전구세포 소진 T 세포(PEX)-의존성 지속적 종양 보호를 향상시킨다

본 실시예는 항-PDL1/IL-10에 의해 강화된 지속적 종양 보호가 PEX-의존성임을 예시한다.

재료 및 방법: C57BL/6 마우스들에 0일차에 8×10⁵개의 YUMM1.7-GP33 종양 세포들을 피하 접종한 후, 이식 후 6일차에 초기 활성화된 4×10⁶개 Tcf7 ^DTR-GFP P14 T 세포들을 정맥내 입양 전달하였다. 종양 보유 마우스들에게 8일차부터 종양이 검출되지 않을 때까지 3일마다 125㎍의 항-PDL1/IL-10(아벨루맙/ILIO)을 추가로 복강내 투여하였다.　3주 후, 종양이 없는 마우스들에 PBS 또는 1.5㎍ 디프테리아 독소(DT)를 3회 복강내 주사하여 1주 이내에 TCF1+ 디프테리아 독소수용체(DTR) 발현 세포들을 제거하였다.　마지막으로, 모든 종양이 없는 마우스들에 2×10⁵개의 B16-GP33 흑색종 세포들을 피하 접종하고, 종양 성장을 격일로 모니터링하였다.　연령이 일치하는 미처리 마우스들에게도 종양 진행에 대한 양성 대조군으로서 B16-GP33 세포들을 접종하였다.

결과: 도 8에 도시된 바와 같이, 연령이 일치하는 미처리 마우스들에 종양 진행에 대한 양성 대조군(Naive)으로서 B16-GP33 흑색종 세포들을 접종하였다.　(A) 종양 성장 및 (B) 종양 없는 생존을 4주 동안 모니터링하였다.　전구세포 소진 T 세포들(PEX)을 제거하지 않은 종양 없는 마우스들의 대조군(Ctrl)은 종양 없는 상태를 유지하는 반면, B16-GP33 종양 병변은 DT 치료군에서 재투여 후 14~16일에 관찰될 수 있고, 이는 항-PDL1/IL10에 의해 유발된 지속적 보호는 PEX-의존성임을 나타낸다.

본 발명의 전술한 개시 내용은 명료함과 이해를 목적으로 실시예와 설명을 통해 어느 정도 상세하게 설명되었지만, 본 명세서에 기술된 실시예들, 설명들 및 구체예들을 포함하는 개시 내용은 예시 목적을 위한 것으로, 예시적인 것으로 의도되었으며, 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.　본 명세서에 기술된 실시예들, 설명들 및 구체예들에 대한 다양한 수정 또는 변경이 이루어질 수 있고, 그러한 수정 및 변경은 발명의 설명 및 첨부된 청구범위의 기술사상 및 범위 내에 포함된다는 것이 당 분야의 기술자에게 명백할 것이다.　또한, 당 분야의 기술자는 본 명세서에 기술된 것과 균등한 다수의 방법들 및 공정을 인식할 것이다.　이러한 균등물들은 모두 본 발명의 범위 내에 속하고, 첨부된 청구범위에 의해 커버되는 것으로 이해되어야 한다.　본 발명의 추가적인 구체예들은 다음의 청구범위에 기재되어 있다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims

필요로 하는 대상에서 T 세포 기억반응을 촉진하기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용.
필요로 하는 대상에서 T 세포 기억반응을 촉진하기 위한 의약의 제조를 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용.
필요로 하는 대상에서 T 세포 기억반응을 촉진하는데 사용되기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용.
필요로 하는 대상에서 암을 치료하기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용.
필요로 하는 대상에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조를 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용.
필요로 하는 대상에서 암을 치료하는데 사용하기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물.
필요료 하는 대상에서 암 재발을 예방하기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용.　
필요로 하는 대상에서 암 재발을 예방하기 위한 의약의 제조를 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용.
필요로 하는 대상에서 암 재발을 예방하는데 사용하기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물.
필요로 하는 대상에서 만성 바이러스 감염 질환을 치료하기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용.
필요로 하는 대상에서 만성 바이러스 감염 질환을 치료하기 위한 의약의 제조를 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물의 이용.
필요로 하는 대상에서 만성 바이러스 감염 질환을 치료하는데 사용하기 위한, 치료 유효량의 PD-L1 항체-IL-10 융합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물.
제3항, 제6항, 제9항 또는 제12항에 있어서,
상기 조성물은 적어도 하나의 추가 치료제와 함께 사용되기 위한 것인 조성물.　　
제13항에 있어서,
상기 적어도 하나의 추가 치료제는 바이러스 백신인 조성물.
제13항에 있어서,
상기 적어도 하나의 추가 치료제는 억제성 면역관문 분자를 표적으로 하는 항체인 조성물.　
제13항에 있어서,
상기 적어도 하나의 추가 치료제는 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 조성물:
영상화제;　세포독성제;　혈관신생 억제제;　키나제 억제제;　공동자극 분자 차단제;　접착 분자 차단제;　항-사이토카인 항체 또는 이의 기능적 단편;　메토트렉세이트;　사이클로스포린;　라파마이신;　FK506;　검출가능한 라벨 또는 리포터;　TNF 길항제;　항류마티스제;　근육 이완제;　마약;　비스테로이드 항염증제(NSAID);　진통제;　마취제;　진정제;　국소 마취제;　신경근 차단제;　항균제;　항건선제;　코르티코스테로이드;　동화작용 스테로이드;　에리스로포이에틴;　예방접종;　면역글로불린;　면역억제제;　성장 호르몬;　호르몬 대체제;　방사성 의약;　항우울제;　항정신병제;　자극제;　천식제;　베타 작용제;　흡입 스테로이드;　에피네프린 또는 이의 유사체;　사이토카인;　사이토카인 길항제;　면역조절제;　HBV 진입 억제제;　바이러스 RNA 억제제;　유전자 편집제;　HBsAg 분비 억제제;　중합효소 억제제;　인터페론;　바이러스 진입 억제제;　바이러스 성숙 억제제;　뉴클레오시드 역전사효소 억제제;　캡시드 조립 억제제/조절제;　cccDNA 억제제;　FXR 작용제;　마이크로RNA;　및 TLR 작용제.
제3항, 제6항, 제9항 또는 제12항에 있어서,
상기 조성물은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 방식으로 투여되기 위한 것인 조성물:
비경구, 피하, 근육내, 정맥내, 관절내, 기관지내, 복강내, 피막내, 연골내, 강내, 복강내, 소뇌내, 뇌실내, 대장내, 경추내, 위내, 간내, 심근내, 골내, 골반내, 심낭내, 복강내, 흉막내, 정강내, 폐내, 직장내, 신장내, 망막내, 척수내, 윤활막내, 흉부내, 자궁내, 방광내, 볼루스, 질, 직장, 협측, 설하, 비강내 및 경피.　
제3항, 제6항, 제9항 또는 제12항에 있어서,
상기 조성물은 하루에 한 번 초과, 하루에 적어도 한 번, 일주일에 적어도 한 번, 또는 한 달에 적어도 한 번 사용하기 위한 것인 조성물.
제1항, 제2항, 제4항, 제5항, 제7항, 제8항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항의 이용에 있어서, 또는 제3항, 제6항, 제9항 및 제12항 중 어느 한 항의 조성물에 있어서,
상기 PD-L1 항체는 면역글로불린 분자, Fv, 이황화물 연결된 Fv, 단클론 항체, scFv, 키메라 항체, 단일 도메인 항체, CDR 이식 항체, 디아바디, 인간 항체, 인간화 항체, 다중특이적 항체, Fab, 이중특이적 항체, Fab' 단편, 이중특이적 항체, F(ab')2 단편, 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편들을 포함하는 2가 단편;　VH 도메인 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편;　항체의 단일 팔의 VL 도메인 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편, dAb 단편, 분리된 상보성 결정영역(CDR), 또는 단일 사슬 항체인, 이용 또는 조성물.　
제1항, 제2항, 제4항, 제5항, 제7항, 제8항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항의 이용에 있어서, 또는 제3항, 제6항, 제9항 및 제12항 중 어느 한 항의 조성물에 있어서,
상기 PD-L1 항체는 링커를 통해 IL10에 융합된 중쇄(HC)를 포함하고;　임의로, 상기 링커는 서열번호: 74, 75, 76, 77, 78 및 79로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 이용 또는 조성물.
제1항, 제2항, 제4항, 제5항, 제7항, 제8항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항의 이용에 있어서, 또는 제3항, 제6항, 제9항 및 제12항 중 어느 한 항의 조성물에 있어서,
(a) 상기 IL-10은 서열번호: 73, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179 또는 180의 아미노산 서열을 포함하고;　
(b) 상기 IL-10은 사이토카인 활성을 보유하는 IL-10의 자연 발생 변이체 또는 조작된 변이체이며;　
(c) 상기 IL-10은 사이토카인 활성을 보유하는 IL-10의 합성 변형 버전이며;　그리고/또는
(d) 상기 IL-10은 1개, 2개 또는 4개의 IL-10 폴리펩타이드를 포함하는, 이용 또는 조성물.
제1항, 제2항, 제4항, 제5항, 제7항, 제8항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항의 이용에 있어서, 또는 제3항, 제6항, 제9항 및 제12항 중 어느 한 항의 조성물에 있어서,
상기 IL-10은, 야생형 IL-10의 아미노산들에 비해, 위치 104, 위치 107 및 이들의 조합에서의 아미노산들에 대한 치환을 포함하는, 이용 또는 조성물.
제22항에 있어서,
상기 야생형 IL-10은 서열번호: 73, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179 또는 180과 적어도 80% 이상, 바람직하게는 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 이용 또는 조성물.
제23항에 있어서,
상기 치환은 다음을 포함하는, 이용 또는 조성물:
(a) R104Q;　
(b) R107A, R107E, R107Q 및 R107D 중 어느 하나;　또는
(c) 이들의 조합.
제24항에 있어서,
상기 치환은 R104Q/R107A, R104Q/R107E, R104Q/R107Q 또는 R104Q/R107D를 포함하는, 이용 또는 조성물.
제1항, 제2항, 제4항, 제5항, 제7항, 제8항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항의 이용에 있어서, 또는 제3항, 제6항, 제9항 및 제12항 중 어느 한 항의 조성물에 있어서,
상기 PD-L1 항체는 (i) 제1 경쇄 상보성 결정영역(CDR-L1), 제2 경쇄 상보성 결정영역(CDR-L2) 및 제3 경쇄 상보성 결정영역(CDR-L3), 및 (ii) 제1 중쇄 상보성 결정영역(CDR-H1), 제2 중쇄 상보성 결정영역(CDR-H2) 및 제3 중쇄 상보성 결정영역(CDR-H3)을 포함하고, 여기서:
(a) CDR-H1은 서열번호: 92 및 123으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고;
(b) CDR-H2는 서열번호: 109, 114 및 124로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고;
(c) CDR-H3은 서열번호: 94 및 110으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고;
(d) CDR-L1은 서열번호: 53으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고;
(e) CDR-L2는 서열번호: 54로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고;
(f) CDR-L3은 서열번호: 55, 112 및 116으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 이용 또는 조성물.
제26항에 있어서,
(a) CDR-H1은 서열번호: 92의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 109의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 110의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 110의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 54의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 112의 아미노산 서열을 포함하고;
(b) CDR-H1은 서열번호: 92의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 114의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 94의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 54의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 116의 아미노산 서열을 포함하고;　또는
(c) CDR-H1은 서열번호: 123의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 124의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 95의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 54의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는, 이용 또는 조성물.
제26항에 있어서,
상기 항체는 서열번호: 111, 115 및 125로부터 선택된 서열과 적어도 90%의 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 아미노산 서열;　및/또는 서열번호: 56, 113 및 117로부터 선택된 서열과 적어도 90%의 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) 아미노산 서열을 포함하고; 여기서,　임의로:
(a) 상기 항체는 서열번호: 111과 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 113과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;
(b) 상기 항체는 서열번호: 115와 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 117과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;　또는
(c) 상기 항체는 서열번호: 125와 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 56과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하는, 이용 또는 조성물.
제26항에 있어서,
상기 항체는 서열번호: 157, 158 및 160으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄(HC) 아미노산 서열 및/또는 서열번호: 135, 137 및 141로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄(LC) 아미노산 서열을 포함하고;　임의로, 상기 항체는 다음을 포함하는, 이용 또는 조성물:
(a) 서열번호: 157의 HC 아미노산 서열, 및 서열번호: 135의 LC 아미노산 서열;
(b) 서열번호: 158의 HC 아미노산 서열, 및 서열번호: 137의 LC 아미노산 서열;
(c) 서열번호: 160의 HC 아미노산 서열, 및 서열번호: 141의 LC 아미노산 서열.
제26항에 있어서,
상기 항체는, 링커를 통해 IL-10 폴리펩타이드에 융합된 중쇄(HC), 여기서 HC-IL-10 융합 아미노산 서열은 서열번호: 134, 136, 및 140으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 가짐;　및 서열번호: 135, 137, 및 141로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄(LC)를 포함하고;　임의로, 상기 항체는 다음을 포함하는, 이용 또는 조성물:
(a) 서열번호: 134의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 135의 LC 아미노산 서열;
(b) 서열번호: 136의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 137의 LC 아미노산 서열;　또는
(d) 서열번호: 140의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 141의 LC 아미노산 서열.
제1항, 제2항, 제4항, 제5항, 제7항, 제8항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항의 이용에 있어서, 또는 제3항, 제6항, 제9항 및 제12항 중 어느 한 항의 조성물에 있어서,
상기 PD-L1 항체는 링커를 통해 IL10에 융합된 중쇄(HC)를 포함하고, 상기 항체는 (i) 제1 경쇄 상보성 결정영역(CDR-L1), 제2 경쇄 상보성 결정영역(CDR-L2), 및 제3 경쇄 상보성 결정영역(CDR-L3), 및 (ii) 제1 중쇄 상보성 결정영역(CDR-H1), 제2 중쇄 상보성 결정영역(CDR-H2), 및 제3 중쇄 상보성 결정영역(CDR-H3)을 포함하며, 여기서:
(a) CDR-H1은 서열번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 2의 아미노산 서열을 포함하며, CDR-H3은 서열번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고;
(b) CDR-H1은 서열번호: 9의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 10의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 11의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 13의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 14의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고;
(c) CDR-H1은 서열번호: 17의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 18의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 19의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 21의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 22의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 23의 아미노산 서열을 포함하고;
(d) CDR-H1은 서열번호: 25의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 26의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 27의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 29의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 30의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 31의 아미노산 서열을 포함하고;
(e) CDR-H1은 서열번호: 33의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 34의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 35의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 37의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 38의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 39의 아미노산 서열을 포함하고;
(f) CDR-H1은 서열번호: 41의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 42의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 43의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 45의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 46의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 47의 아미노산 서열을 포함하고;
(g) CDR-H1은 서열번호: 92의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 109의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 110의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 54의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 112의 아미노산 서열을 포함하고;
(h) CDR-H1은 서열번호: 92의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 114의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 94의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 54의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 116의 아미노산 서열을 포함하고;　또는
(i) CDR-H1은 서열번호: 123의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H2는 서열번호: 124의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-H3은 서열번호: 94의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L1은 서열번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L2는 서열번호: 54의 아미노산 서열을 포함하고, CDR-L3은 서열번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는, 이용 또는 조성물.
제31항에 있어서,
상기 항체는 서열번호: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 111, 115, 125로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 아미노산 서열;　및/또는 서열번호: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 113 및 117로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) 아미노산 서열을 포함하고;　여기서, 임의로:
(a) 상기 항체는 서열번호: 4와 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 8과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;
(b) 상기 항체는 서열번호: 12와 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 16과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;
(c) 상기 항체는 서열번호: 20과 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 24와 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;
(d) 상기 항체는 서열번호: 28과 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 32와 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;
(e) 상기 항체는 서열번호: 36과 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 40과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;
(f) 상기 항체는 서열번호: 44와 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 48과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;
(g) 상기 항체는 서열번호: 111과 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 113과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;
(h) 상기 항체는 서열번호: 115와 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 117과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하고;　또는
(i) 상기 항체는 서열번호: 125와 적어도 90% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열;　및 서열번호: 56과 적어도 90% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함하는, 이용 또는 조성물.
제31항에 있어서,
상기 항체는 서열번호: 80, 81, 82, 134, 136 및 140으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 135, 137, 141, 143, 145 및 147로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄(LC) 아미노산 서열을 포함하고; 임의로 다음을 포함하는, 이용 또는 조성물:
(a) 서열번호: 80의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 143의 LC 아미노산 서열;
(b) 서열번호: 81의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 145의 LC 아미노산 서열;
(c) 서열번호: 82의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 147의 LC 아미노산 서열;
(d) 서열번호: 134의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 135의 LC 아미노산 서열;
(e) 서열번호: 136의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 137의 LC 아미노산 서열;　또는
(f) 서열번호: 140의 HC-IL-10 융합 아미노산 서열, 및 서열번호: 141의 LC 아미노산 서열.
제1항, 제2항, 제4항, 제5항, 제7항, 제8항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항의 이용에 있어서, 또는 제3항, 제6항, 제9항 및 제12항 중 어느 한 항의 조성물에 있어서,
(a) 상기 단백질은 MC/9 세포 증식을 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 100%, 적어도 150%, 적어도 200%, 또는 그 이상으로 증가시키고;
(b) 상기 단백질은 활성화된 CD8 T 세포들로부터 IFNγ 및 그랜자임 B 생산을 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 100% 또는 그 이상으로 증가시키고;　그리고/또는
(c) 상기 항체는 28일차에 측정된 동계 마우스 종양 모델에서 종양 부피를 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 75%, 또는 그 이상으로 감소시키며, 여기서 상기 마우스 종양 모델은 CT26 결장암 및 EMT6 유방암으로부터 선택되는, 이용 또는 조성물.