KR20240071851A - 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 눈 건강 개선용 조성물 - Google Patents

잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 눈 건강 개선용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 출원은 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 눈 건강 개선용 의약외품, 식품 및 사료 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 출원은 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 망막질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

Description

잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 눈 건강 개선용 조성물 {Composition for improving eye health comprising leaf perilla extract as an active ingredient}
본 출원은 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 눈 건강 개선용 조성물에 관한 것이다.
잎들깨는 '식탁 위의 명약'이라고 불릴 정도로 영양이 풍부하면서도 향긋하고 부드러운 식감으로 널리 이용되는 식재료 중 하나이다. 잎들깨는 넓게는 깨의 잎사귀를 모두 지칭하지만, 그 가운데서도 특히 들깨의 잎사귀를 식품으로 일컫으며 흔히 깻잎이라고 불린다. 들깨는 기름을 짜내기 위하여 재배되는 작물인데, 생육하는 동안에 잎을 수확하여 식용으로 하는 것이 잎들깨다.
잎들깨는 철분 함량이 매우 높은 채소로 빈혈을 예방하고 성장기 아동의 발육을 촉진하는데 도움을 준다. 시금치보다 2배 이상의 철분을 함유하고 있어 잎들깨 30g을 먹으면 하루에 필요한 철분 양이 모두 충족된다. 또한 체내 염증 완화, 항알레르기 효과, 기침이나 콧물, 재채기 증상을 완화하는 효과가 있다. 잎들깨에 있는 항암물질 피톨(Phytol)은 암세포와 병원성 균을 제거하여 면역 기능을 강화하는 것으로 알려져 있다.
한편, 사람의 눈은 정보의 80%를 받아들이는 등 감각기관 중 가장 중요한 기능을 하며 노화에 큰 영향을 받는 기관 중 하나이다. 특히, 눈은 외부환경 및 빛과 직접적으로 접촉하기 때문에, 타 기관 대비 매우 높은 대사활동이 있으며, 빛 자체의 에너지로 인한 산화스트레스 발생이 매우 높다. 이처럼 눈의 건강이 나빠질 경우, 여러 가지 안과질환으로 이어질 가능성이 높다.
안과질환은 주로 각막 또는 망막의 기능이 손상되어 발생하는데, 망막은 외부환경에 의해 거의 영향을 받지 않고, 신체적 요인 또는 유전적 요인에 의한 망막질환이 발생되는 것으로 알려져 있다. 이러한 신체적 요인의 대표적인 예로서 노화를 들 수 있는데, 노화가 진행될 경우 망막에 존재하는 황반의 기능이 저하되어 발생되는 황반손상이 발병될 가능성이 증가되는 것으로 알려져 있다. 상기 망막질환은 각막질환과 달리 외좌수술적인 치료에 의해 치료하기가 어렵기 때문에, 대체로 약물치료법, 유전자 치료법 또는 최근 들어 활발히 개발되고 있는 줄기세포 치료법 등이 사용되고 있다. 예를 들어, 한국공개특허 제2017-0028132호에는 군소 유래 추출물을 포함하는 망막질환 예방 및 치료용 약학적 조성물이 개시되어 있다.
현대에는 스마트 기기 사용시간 증가, 미세먼지 및 노화 등으로 인해 감소된 현대인들의 안구 건강으로 인하여 최근 눈 관련 건강기능식품 및 안과질환 치료제 등을 포함하여 눈 건강에 대한 관심이 높아지고 있는 추세이다. 그러나, 눈 건강 개선에 효능을 가지는 식량작물 유래 관련 연구는 아직 활발하게 수행된 바 없다. 잎들깨은 비타민이 다량 함유되어 시력보호에 도움이 되는 식품 중 하나로 알려져 있으나, 잎들깨의 품종, 첨가량, 추출방법 등에 따른 망막 세포 보호 활성에 대한 체계적인 연구 및 개발은 마찬가지로 미흡한 실정이었다.
이러한 배경하에서, 본 발명자들은 눈 건강을 효과적으로 개선할 수 있는 잎들깨의 품종별 활성, 함유성분 및 추출 조건 등을 예의 연구노력한 결과, 최근 개발된 늘보라 잎들깨 추출물이 망막색소상피세포의 손상을 억제하는 효과가 현저히 우수함을 확인하고, 기존 제품들에 비해 현저히 우수한 눈 건강 개선능을 갖는 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 눈 건강 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 망막질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 약학적 조성물을 망막질환이 발병되거나 또는 발병될 가능성이 있는 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 망막질환의 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 눈 건강 개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 눈 건강 개선용 사료 조성물을 제공하는 것이다.
이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 출원에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다. 또한, 본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 출원이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 출원의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 발명자들은 안전하면서도 효과적으로 망막 질환을 효과적으로 치료할 수 있는 잎들깨 유래의 제제를 개발하고자 예의 연구노력한 결과, 늘보라 잎들깨가 붉은 잎들깨(차조기) 품종 중에서도 유용 대사체가 매우 다양하고 풍부하게 함유되어 있으며, 자외선에 의해 손상된 망막상피세포에 대한 사이토카인 발현량 감소 및 세포보호능이 우수하여, 현저한 눈 건강 증진 및 망막 질환 치료효과를 나타냄을 확인하였다.
이처럼, 늘보라 잎들깨 추출물의 현저한 망막 질환 치료 활성 및 눈 건강 증진 효능은 지금까지 전혀 연구된 바 없으며, 본 발명자들에 의해 최초로 규명되었다.
본 출원의 다른 하나의 양태는 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 눈 건강 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어 "늘보라"란, 1995년 잎들깨1호와 YCPL173를 모본으로 YCPL199를 부본으로 하여 인공교배 한 후 계통육종법에 따라 우수계통(밀양32호)을 육성 선발한 들깨 품종 중 하나이다. 늘보라 품종은 제 1798호로 품종보호 등록되었다. 늘보라의 경장은 130cm로 보통이고, 주당분지수는 8개로 보통이며 마디수는 14개이고, 화방군수는 42개로 다소 많고, 화방군당삭수는 32개로 보통이며, 화방군장은 9.4cm로 보통이다. 늘보라의 꽃색은 자주색이고, 성숙기는 10월26일로 늦고, 개화기도 9월 27일로 늦은 편이다. 늘보라의 종피색은 암갈색, 종실의 광택은 없고, 종실모양은 원형, 종실크기는 보통이다. 늘보라의 잎 색깔은 자주색이고, 잎이면색은 자주색, 잎모양은 심장형이다. 늘보라는 잎들깨1호와 비교하여 꽃색, 모용의 다소, 종실의 크기, 잎색깔, 잎 이면색, 천립중 등 6개 특성에서 구별된다.
본 발명의 용어 늘보라 잎들깨란 상기 늘보라 들깨 품종의 잎을 의미하며, 늘보라 깻잎, 늘보라 잎 등과 혼용될 수 있다.
본 발명의 늘보라 잎들깨는 20일 내지 45일 재배하여 수확한 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 용어 "추출물"이란, 상기 늘보라 품종 들깨의 잎의 분쇄물을 추출 처리하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
본 발명에 있어서, 상기 늘보라 잎들깨를 추출하는 방법은 눈 건강을 개선하는 효과를 나타내는 추출물을 수득할 수 있는 한 특별히 이에 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.
본 발명에서 상기 늘보라 잎들깨를 추출하는데 사용되는 추출 용매의 종류는 눈 건강을 개선하는 효과를 나타내는 추출물을 수득할 수 있는 한 특별히 이에 제한되지 않고, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 일 예로서, 상기 추출 용매로는 물, 알코올 등을 단독으로 또는 1종 이상 혼합하여 사용할 수 있고, 다른 예로서, 상기 추출 용매로는 물 또는 탄소수 1 내지 4의 알코올을 단독으로 또는 1종 이상 혼합하여 사용할 수 있으며, 또 다른 예로서, 상기 추출 용매는 물을 사용할 수 있다.
본 발명의 일 예에서, 상기 추출 용매는 주정(ethanol)일 수 있다. 일 예에서, 상기 주정은 20%(v/v) 내지 100%(v/v) 주정 수용액일 수 있으며, 보다 구체적으로 40%(v/v) 내지 80%(v/v), 30%(v/v) 내지 70%(v/v), 45%(v/v) 내지 65%(v/v), 35%(v/v) 내지 60%(v/v), 40%(v/v) 내지 60%(v/v), 또는 40%(v/v) 내지 55%(v/v) 주정 수용액일 수 있으며, 보다 바람직하게는 40%(v/v) 내지 50%(v/v) 주정 수용액일 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 구체적인 일 실시예에서, 추출용매의 농도를 달리한 늘보라 잎들깨 추출물의 망막 세포 보호능을 측정한 결과, 특히 주정 농도 50%(v/v)에서 세포 생존율이 현격히 증가함을 확인하였다.
본 발명의 조성물은 총 조성물의 중량 대비 늘보라 잎들깨 추출물을 0.0001 내지 80 중량%로 포함할 수 있으며, 구체적으로 0.01 중량% 내지 50 중량%로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 용어 '눈건강'은 눈 및 이를 구성하는 외막, 중막, 내막, 수정체, 유리체 및 시신경 등에 염증, 손상, 질환 등이 없는 상태를 의미하는 것으로 해석될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 따라서, 본 발명에서 '눈건강의 개선'은 외부 자극으로부터 시력이 저하되는 것을 보호하거나, 외부 자극으로부터 망막 세포의 손상 또는 파괴가 억제되고 그 회복이 증진되는 것을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 일 예에서, 본 발명에서 '눈건강의 개선'은 자외선 노출 환경에서 망막 세포의 사이토카인 발현을 증가시켜 망막을 보호하는 것 및 산화 스트레스 노출 환경에서 망막 세포의 사이토카인 발현을 증가시켜 망막을 보호하는 것을 포함할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 본 발명에서 '눈건강의 개선'은 망막색소변성 등을 포함하는 망막 질환의 발병 또는 진행이 지연되거나, 상기 망막 질환의 발병에 따른 증세가 호전되는 것을 제한없이 포함할 수 있다. 따라서, 본 출원의 눈 건강 개선용 식품 조성물은 늘보라 깻잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 망막 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물을 포함한다.
본 발명의 용어 “망막 질환"은 망막 또는 황반의 손상, 또는 이들의 변성으로 인하여 시력의 감소 및 손상이 발생하는 질환을 총칭하여 의미한다.
본 발명에 있어서, 상기 망막질환은 늘보라 깻잎의 추출물에 의하여 예방 또는 치료될 수 있는 한 특별히 이에 제한되지 않으나, 자외선 노출에 의해 유발된 것 또는 산화 스트레스에 의해 유발된 것일 수 있다. 보다 구체적 일 예로서, 상기 망막 질환의 구체적인 예로는 망막동맥폐쇄, 망막정맥폐쇄, 망막정맥주위염, 고혈압망막병증, 당뇨망막병증, 미숙아망막병증, 감각신경망막염증, 망막색소상피염증, 망막색소변성, 혈관무늬병증, 드루젠, 열공망막박리, 비열공망막박리, 황반변성, 황반이상증, 당뇨망막병증, 망막동정맥폐쇄, 고혈압성 망막병증, 망막대동맥류, 안허혈증후근, 방사선망막병증, 미숙아망막병증, 급성망막괴사, 망막염, 망막맥락막염, 망막박리, 망막종양, 외상에 의한 망막 손상 또는 자외선에 의한 망막 손상을 들 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 용어 "식품"이란, 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료, 비타민 복합제, 건강 기능 식품 및 건강 식품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.
본 발명의 식품 조성물은, 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 높은 눈 건강 개선 효과를 기대할 수 있으므로, 건강 증진 목적으로 매우 유용하게 사용될 수 있다.
상기 건강 기능(성) 식품(functional food)이란, 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)과 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미한다. 여기서 '기능(성)'이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 식품은 당 업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 당 업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 상기 식품의 제형 또한 식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 식품용 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나므로, 본 발명의 식품은 눈 건강 개선 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.
상기 건강 식품(health food)은 일반식품에 비해 적극적인 건강유지나 증진 효과를 가지는 식품을 의미하고, 건강보조식품(health supplement food)은 건강보조 목적의 식품을 의미한다. 경우에 따라, 건강 기능 식품, 건강식품, 건강보조식품의 용어는 혼용된다.
구체적으로, 상기 건강 기능 식품은 본 발명의 화합물을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품 소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용이 없는 장점이 있다.
상기 식품 조성물은 생리학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있는데, 담체의 종류는 특별히 제한되지 않으며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다.
또한, 상기 식품 조성물은 식품 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예들 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu), 크륨(Cr) 등의 미네랄; 및 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다.
또한, 상기 식품 조성물은 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 데히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨류엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 포함할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용될 수 있다.
본 출원의 하나의 양태는 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 망막질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
이 때, 늘보라 잎들깨, 추출물, 망막질환 등의 정의 및 특성은 상술한 바와 동일하다.
상기 본 발명의 약학 조성물은 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있고, 상기 담체는 비자연적 담체(non-naturally occuring carrier)를 포함할 수 있다.
본 발명의 용어 "예방"이란, 본 발명의 늘보라 잎들깨 추출물을 포함하는 약학 조성물의 투여에 의해 눈 건강의 저하를 억제시키거나 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어 "치료"란, 상기 약학 조성물의 투여에 의해 망막질환의 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어 "약학적으로 허용가능한"이란, 상기 조성물에 노출되는 세포나 인간에게 독성이 없는 특성을 나타내는 것을 의미한다.
구체적으로, 상기 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
본 발명에서, 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 출원의 다른 하나의 양태는 상기 약학적 조성물을 망막질환이 발병되거나 또는 발병될 가능성이 있는 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 망막질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
이 때, 늘보라 잎들깨, 추출물, 망막질환, 예방 및 치료의 정의 및 특성은 상술한 바와 동일하다.
본 발명에서 상기 망막 질환의 의심 개체는 망막 질환이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함하지 않은 모든 동물을 의미하며, 본 발명의 약학적 조성물을 망막 질환이 의심되는 개체에 투여함으로써, 개체를 효율적으로 치료할 수 있다.
본 발명에서 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 망막 질환이 의심되는 개체에게 본 발명의 약학적 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다. 구체적으로, 복강투여, 안구투여 또는 경구투여의 방식으로 투여될 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 용어 "개체"란, 망막질환이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 쥐, 생쥐, 가축 등의 모든 동물을 의미한다. 구체적인 예로, 인간을 포함한 포유동물일 수 있다.
본 발명의 망막질환의 예방 또는 치료 방법은 구체적으로, 인간을 제외한 개체에 흑미벼의 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 망막질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 약학적으로 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명의 용어, "약학적으로 유효한 양"이란, 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 성별, 연령, 체중, 건강상태, 질병의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로, 및 배출 비율, 치료 기간, 배합 또는 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
구체적으로 본 발명의 망막질환의 예방 또는 치료 방법은 상기 약학적 조성물을 고형분을 기준으로 1일 0.0001 내지 100 mg/체중 kg으로, 더욱 구체적으로 0.001 내지 100 mg/체중 kg으로 투여할 수 있다. 투여는 상기 권장 투여량을 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.
본 발명의 망막질환의 예방 또는 치료 방법에서, 상기 약학적 조성물을 투여하는 투여 경로 및 투여 방식은 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 해당 부위에 상기 조성물을 포함하는 조성물이 도달할 수 있는 한 임의의 투여 경로 및 투여 방식에 따를 수 있다. 구체적으로, 상기 조성물은 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있으며, 그 투여 경로의 비제한적인 예로는, 구강, 직장, 국소, 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 경피, 비측내 또는 흡입 등을 통하여 투여되는 것을 들 수 있다.
본 출원의 다른 하나의 양태는 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 눈 건강 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.
이 때, 늘보라 잎들깨, 추출물 등의 정의 및 특성은 상술한 바와 동일하다.
본 발명에서의 용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치, 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미한다. 예를 들어, 약사법에 따른 의약외품은 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람/동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함된다.
상기 의약외품 조성물은 본 발명에 따른 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
상기 의약외품 조성물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 개인위생용품, 소독 청결제 또는 연고제를 포함한다. 상기 개인위생용품에는 특별히 이에 제한되지 않으나, 구체적으로 치약, 가글, 세정 겔 또는 틀니 등의 보철제에 대한 보관제가 포함될 수 있다.
또한, 상기 의약외품 조성물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 구체적으로 점안제, 연고제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 크림제, 산제, 현탁제, 겔제 또는 젤의 형태로 제조되어 사용될 수 있다
본 출원의 또 다른 하나의 양태는 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 눈 건강 개선용 사료 조성물을 제공한다.
이 때, 상기 늘보라 잎들깨, 추출물, 및 눈 건강 개선의 정의 및 특성은 상술한 바와 동일하다.
본 출원의 다른 하나의 구체적인 양태는 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 망막 질환 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다.
본 발명에서 제공하는 늘보라 잎들깨 추출물을 포함하는 조성물은 천연물 유래 제제로서 부작용이 없으면서도 망막 세포에 대한 보호효과가 탁월한 바, 망막 질환의 예방 또는 치료 조성물로 약학적으로 이용 가능할 뿐 아니라, 눈 건강 개선을 위한 의약외품, 식품 및 사료로서도 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 Obitrap을 이용한 잎들깨 품종별 유용대사체 탐색 결과를 나타낸 도이다.
도 2 및 도 3는 늘보라 잎들깨 추출물을 처리한 망막 세포의 자외선 노출에 따른 사이토카인 발현 정도를 측정한 결과를 나타낸 도이다. 도 2는 IL-6의 발현 정도를, 도 3은 TNF-α의 발현 정도를 나타낸다.
도 4는 늘보라 잎들깨 추출물의 함량을 달리하여 처리한 망막 세포의 자외선 노출에 따른 사이토카인(IL-6)발현 정도를 나타낸 도이다.
도 5은 추출용매의 농도를 달리하여, 자외선 노출에 따른 늘보라 잎들깨 추출물의 망막 세포보호 활성 평가 결과를 나타낸 도이다. 도 6은 늘보라 잎들깨 추출물을 함량을 달리하여 처리한 망막 세포의 산화 스트레스에 따른 사이토카인(IL-6) 발현 정도를 측정한 결과를 나타낸 도이다.
도 7 및 도 8은 늘보라 추출물의 망막상피세포의 산화스트레스에 대한 세포보호능을 나타낸 도이다. 구체적으로, 도 7은 H2O2과 늘보라 추출물을 세포에 동시에 처리하였을 때, 도 8는 H2O2 를 세포에 처리한 3시간 경과 후에 늘보라 추출물을 처리하였을 때 세포보호능을 평가한 데이터이다.
이하, 실시예를 통하여 본 출원을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 출원을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 출원의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 잎들깨 품종별 유용대사체 분석
잎들깨 19-20년산 종자들을 이용하여 품종별 유용대사체를 분석하고자 하였다. 다양한 품종의 잎들깨종자 파종 후 30일 재배(생장산) 후 분말화한 뒤 에탄올 추출하여 분석 샘플로 활용하였다. 샘플 분석 대상 품종은 붉은 잎들깨 중 다유, 늘보라 및 일반 잎들깨 중 엽실들깨, 대엽들깨로 선정하였다.
구체적으로, 시료 분말 20mg/20%(v/v) 및 주정 200uL를 첨가하였다. 시료와 용액을 볼텍싱(vortexing)하여, 50℃항온 수조(water bath)에서 30분간 추출하였다. 추출된 시료는 15분간 13000rpm에서 원심분리하고, 원심분리 후 상층액을 새로운 튜브에 옮겼다. 추출물 찌꺼기를 완전히 제거하기 위해 다시 한번 5분간 13000rpm에서 원심분리하여 상층액을 새로운 튜브로 옮겼다. 원심분리된 시료는 상등액을 추출하여 0.25um syringe filter로 필터링하였다. 그 후, 상기 분리된 시료를 고분해능질량분석기(Obitrap-QTOF-MSMS) 및 FT-IR 스펙트럼 분석하여 그 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1에서 볼 수 있듯, 잎들깨 품종별 유용대사체 탐색 결과, 일반 잎들깨에 비해 붉은 잎들깨가 많은 대사물질이 나타났으며, 특히 늘보라 품종은 10가지의 물질이 다양한 대사물질을 함유함이 확인되었다.
반면, 붉은 잎들깨인 다유 품종의 경우 8 가지의 대사물질을 함유하는 것으로 확인되었고, 일반 잎들깨인 엽실들깨와 대엽들깨에서는 4-5가지의 대사물질만이 탐색되었다.
실시예 2: UV 노출에 따른 붉은 잎들깨 품종별 망막 상피세포의 사이토카인 발현 분석
본 출원인들을 상기 실시예 1의 결과를 바탕으로, 잎들깨 품종별 망막 상피세포 보호능에 차이가 발휘되는지 분석하고자 자외선(UV) 처리에 따른 망막세포의 사이토카인 발현 정도를 측정하였다.
분석 대상 잎들깨 품종으로는 남천들깨, 새보라, 늘보라, 동글1호, 동글2호, 소임, 상엽, 소미랑, 새봄을 이용하였으며, 상기 실시예 1의 방법과 동일하게 재배 및 추출하여 품종별 추출물을 제조하였다. 망막 상피세포는 ARPE-19 세포를 이용하였으며, 10% FBS, 100 units/mL penicillin/streptomycin 이 함유된 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2로 조절된 incubator 에서 배양하였다. 시약 및 상기 잎들깨 품종별 추출물을 각 농도로 처리하고, 18시간 후 자외선 처리를 수행하였다. UV 광량은 130 mJ/cm로 설정하여 망막상피세포에 처리하였다. ELISA kit를 활용하여 IL-6 및 TNF-a 등 대표적 사이토카인 발현 변화를 분석하였다(도 2 및 도 3).
상기 도 2 및 도 3에서 볼 수 있듯, 품종별로 자외선 노출에 대한 망막 상피세포에서의 사이토카인 발현 변화를 살펴본 결과, 붉은 잎들깨 품종 중 늘보라 품종에서 IL-6 및 TNF-a 모두에 있어서 사이토카인 발현 감소량이 월등히 높으며, 양성대조군(퀘세틴)과 유사한 정도의 현저한 감소능을 확인하였다.
이러한 결과로부터, 본원 발명의 늘보라 잎들깨 품종 추출물이 망막 상피세포 보호 활성이 가장 뛰어남을 확인하였다. 상기 결과를 바탕으로, 본 출원인들은 붉은 잎들깨 품종 중에서도 늘보라 품종을 망막 세포 보호에 대해 우수한 활성을 가지는 소재로 선정하였다.
실시예 3: 늘보라 잎들깨의 발효주정 추출물의 농도별 및 함량별, UV 노출에 따른 망막 상피세포 보호능 평가
상기 실시예 2의 결과를 바탕으로, 자외선 노출에 대한 망막 상피세포에서의 사이토카인 발현 감소가 가장 현저한 늘보라 품종의, 함량에 따른 사이토카인 발현 변화를 분석하고자 하였다. 사이토카인 발현 분석은 상기 품종별 분석과 동일한 방식으로, 시료의 양을 10 μg/mL, 20 μg/mL, 30 μg/mL, 40 μg/mL로 달리하여 수행하여 그 결과를 도 4에 나타내었다.
상기 도 4에서 볼 수 있듯, 늘보라 추출물의 경우 20 μg/mL 이상에서 현저한 IL-6 발현 감소능을 가짐을 확인하였다.
다음으로, 본 출원인들은 늘보라 잎들깨의 눈 건강 보호 활성이 극대화되는 추출 조건을 규명하고자, 발효 주정 농도를 달리한 추출물의 UV 노출에 따른 망막 상피세포 보호능을 측정하였다. 늘보라 잎들깨를 이용하여 0%(열수 추출), 20%, 50%, 70%, 및 100% 발효주정 추출물을 제조하였다.
구체적으로, 시료 분말 2g에 및 농도를 달리한 주정 30 mL를 첨가하였다. 각 추출물은 24시간 교반 추출 후 원심분리하여 상등액을 감압농축 후, 이를 DMSO에 재용해하여 실험에 이용하였다. 한편, 각 망막상피세포는 96 well plate 에 1.5Х104 cells/well로 24시간 배양하였다. 상기 실시예 2와 동일하게 시약 및 추출물을 각 농도로 처리하고, 18시간 후 자외선에 처리하였다. UV 광량은 130 mJ/cm로 설정하여 망막상피세포에 처리하였다. 배양이 끝난 후 각 well 에 MTT 용액을 넣고 4시간 반응한 뒤 dimethyl sulfoxide (DMSO)에 재용해하였다. 세포 생존율을 측정한 결과를 도 5에 나타냈으며, 세포 생존율은 대조군과 비교하여 백분율(%)로 표시하였다.
상기 도 5에서 볼 수 있듯, 자외선에 노출된 망막 상피세포는 약 60%의 세포생존율이 나타나며, 본원발명의 늘보라 잎들깨 추출물을 처리한 경우 세포생존율이 증가함을 확인할 수 있다. 구체적으로, 늘보라 잎들깨 50% 및 70% 발효 주정 추출물의 경우 약 80% 이상으로 세포생존율이 증가하였으며, 특히 늘보라 잎들깨 50% 발효 주정 추출물의 경우 자외선에 의한 피해가 없는 대조군에 가까운 정도로 세포생존율이 현저하게 향상되어 UV로부터 손상된 망막 세포 보호 활성에 대한 임계적 효과를 확인하였다.
실시예 4: 늘보라 잎들깨의 발효주정 추출물의 산화스트레스에 대한 보호능 평가
다음으로, 늘보라 잎들깨 발효주정 추출물의 산화스트레스에 대한 눈 보호 효능을 확인하였다.
늘보라 잎들깨 발효주정 추출물은 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하여 준비하였다. 망막 상피세포는 ARPE-19 세포를 이용하였으며, 10% FBS, 100 units/mL penicillin/streptomycin 이 함유된 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2로 조절된 incubator 에서 배양하였다.
먼저, H2O2 를 300 uM 농도로 처리 후 ELISA kit 활용하여 대표적 사이토카인인 IL-6의 발현 변화, 및 망막상피세포 보호능을 평가하고자 하였다. 늘보라 추출물 처리에 따른 사이토카인 발현 변화(도 6), 및 H2O2 와 늘보라 추출물을 동시 처리한 경우와 H2O2 처리 후 3시간 경과한 이후에 늘보라 추출물을 처리한 경우의 세포생존율(도 7 및 도 8)을 확인하였다.
상기 도 6에서 볼 수 있듯, 본 발명의 늘보라 추출물을 처리한 경우 IL-6의 발현량이 농도의존적으로 현저히 감소함을 확인할 수 있다.
또한, 상기 도 7 및 도 8에서 볼 수 있듯, H2O2 처리 직후의 세포에 늘보라 추출물을 처리한 경우와 3시간 경과 후 늘보라 추출물을 처리한 경우 모두 대조군에 비해 세포 생존율이 눈에 띄게 증가하였다. 특히 H2O2를 세포에 처리 후 산화 스트레스로부터의 회복 시간을 두고 3시간 경과 후 늘보라 추출물을 처리하였을 때에는, 양성대조군으로 사용한 쿼세틴과 유사한 망막상피세포 보호 효능을 나타내었다.
이상의 설명으로부터, 본 출원이 속하는 기술분야의 당업자는 본 출원이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 출원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 출원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (11)

  1. 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 눈 건강 개선용 식품 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 추출물은 늘보라 잎들깨를 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출하여 수득한 것인, 식품 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 추출 용매는 40%(v/v) 내지 60%(v/v) 주정 수용액인, 식품 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 총 조성물의 중량 대비 늘보라 잎들깨 추출물을 0.0001 내지 50 중량%로 포함하는 것인, 식품 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 눈 건강 개선은 자외선 노출 환경 또는 산화 스트레스 노출 환경에서 망막 세포의 사이토카인 발현을 증가시켜 망막을 보호하는 것인, 식품 조성물.
  6. 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 망막질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 제5항에 있어서,
    상기 망막질환은 망막색소상피세포 손상에 의해 유발되는 질환인 것인, 식품 조성물.
  8. 제6항 및 제7항 중 어느 하나의 항의 조성물을 망막질환이 발병되거나 또는 발병될 가능성이 있는 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 망막질환의 예방 또는 치료 방법.
  9. 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 눈 건강 개선용 의약외품 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 의약외품 조성물은 점안제, 연고제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 크림제, 산제, 현탁제, 겔제 또는 젤의 형태인, 의약외품 조성물.
  11. 늘보라 잎들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 눈 건강 개선용 사료 조성물.
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